BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)

Transcript

1 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA Αναθ.: Sep 2011 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) και το BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) είναι μη εκλεκτικά υλικά για την απομόνωση και καλλιέργεια απαιτητικών μικροοργανισμών, ιδιαίτερα για τα είδη Neisseria και Haemophilus, από διάφορα κλινικά δείγματα. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Οι Carpenter και Morton περιέγραψαν ένα βελτιωμένο υλικό για την απομόνωση του γονόκοκκου σε 24 ώρες. 1 Η αποτελεσματικότητα αυτού του υλικού που είναι Άγαρ GC με συμπλήρωμα αιμοσφαιρίνης και συμπυκνωμένων ζυμομυκήτων, αποδείχθηκε σε μια μελέτη δώδεκα υλικών που χρησιμοποιήθηκαν για την απομόνωση του συγκεκριμένου οργανισμού. 2 Αργότερα, πραγματοποιήθηκαν αρκετές βελτιώσεις στο υλικό. 3-5 Τα θρεπτικά συστατικά στο BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) παρέχονται από τη βάση GC II που περιέχει καζεΐνη και επιλεγμένες πεπτόνες κρέατος ως πηγές αζώτου, φωσφορικά για τη διατήρηση του ph, και άμυλο αραβόσιτου για την εξουδετέρωση των τοξικών λιπαρών οξέων που μπορεί να υπάρχουν στον άγαρ. Η αιμοσφαιρίνη παρέχει παράγοντα X (αιμίνη). Ο Εμπλουτισμός BD IsoVitaleX είναι ένα καθορισμένο συμπλήρωμα που παρέχει παράγοντα V (νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο, NAD), που είναι απαραίτητος για την ανάπτυξη των ειδών Haemophilus, και βιταμίνες, αμινοξέα, συνένζυμα, γλυκόζη, ιόντα σιδήρου και άλλους παράγοντες που βελτιώνουν την ανάπτυξη παθογόνων Neisseria και άλλων απαιτητικών οργανισμών. Έχει προστεθεί πυριδοξάλη και ειδικοί παράγοντες ανάπτυξης προκειμένου να βελτιωθεί η ανάπτυξη Gram θετικών βακτηριδίων και η πυριδοξάλη έχει προστεθεί για την υποστήριξη της ανάπτυξης των ειδών Granulicatella και Abiotrophia (=στρεπτόκοκκοι με διαφορετικές θρεπτικές απαιτήσεις). 6-9 Το Σοκολατούχο Άγαρ (Βάση Άγαρ Αίματος No. 2 ) είναι ένα εναλλακτικό υλικό για την απομόνωση απαιτητικών οργανισμών από κλινικά δείγματα. 7 Το BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) περιέχει πεπτόνη πρωτεόζης, ηπατικό αφομοίωμα και εκχύλισμα ζυμομυκήτων ως πηγές αζώτου και βιταμινών. Το χλωριούχο νάτριο διατηρεί την οσμωτική σταθερότητα. Το θερμασμένο (αποδιατεταγμένο μέσω της θερμότητας) αίμα αλόγου παρέχει παράγοντα X (αίμη) και, επειδή δεν περιέχει NADase, τον παράγοντα V (νικοτιναμιδο-αδενινοδινουκλεοτίδιο, NAD) που απαιτείται για την ανάπτυξη του Haemophilus influenzae και παρέχει συμπληρωματικά θρεπτικά στοιχεία. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Συνθέσεις* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Παγκρεατικό αφομοίωμα της 7,5 g Πεπτόνη πρωτεόζης No. 3 15,0 g καζεΐνης Επιλεγμένη πεπτόνη κρέατος 7,5 Ηπατικό αφομοίωμα 2,5 Άμυλο αραβοσίτου 1,0 Εκχύλισμα ζυμομυκήτων 5,0 Όξινο φωσφορικό κάλιο 4,0 Χλωριούχο νάτριο 5,0 Δισόξινο φωσφορικό κάλιο 1,0 Αίμα αλόγου (θερμασμένο) 7% Χλωριούχο νάτριο 5,0 ph 7,4 +/-0,2 Άγαρ 12,0 Αιμοσφαιρίνη 10,0 Εμπλουτισμός IsoVitaleX 12,0 ml Πυριδοξάλη 0,01 g Παράγοντες ανάπτυξης 0,5 ph 7,2 +/-0,2 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. PA

2 Ο Εμπλουτισμός BD IsoVitalex περιέχει τους παρακάτω παράγοντες ανάπτυξης (σύνθεση * ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού): Βιταμίνη B 12 0,01 g L-γλουταμίνη 10,0 Αδενίνη 1,0 Υδροχλωρική γουανίνη 0,03 π-αμινοβενζοϊκό οξύ 0,013 Νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο (NAD) 0,25 Πυροφωσφορική θειαμίνη 0,1 Νιτρικός σίδηρος 0,02 Υδροχλωρική θειαμίνη 0,003 Υδροχλωρική κυστεΐνη 25,9 L-κυστίνη 1,1 Γλυκόζη 100,0 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τα τρυβλία εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες 5 ή 10 τρυβλίων επί μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε τα τρυβλία στους 35 ± 2 C, σε αερόβιο περιβάλλον, συμπληρωμένο με διοξείδιο του άνθρακα. Διαβάστε τα τρυβλία μετά από 18 έως 24 και μετά από 42 έως 48 ώρες επώασης. Στελέχη* Haemophilus influenzae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Μη ενοφθαλμισμένο BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) και Αρκετά καλή έως εξαιρετική ανάπτυξη Σοκολατί καφέ, αδιαφανές, ενδέχεται να είναι ελαφρώς ανομοιογενές * Συμπληρωματικά, το BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) μπορεί να εξεταστεί με Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 για να αποκαλυφθεί ανάπτυξη στρεπτόκοκκων με διαφορετικές θρεπτικές απαιτήσεις. 8,9 ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) ή BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), και τα δύο διατίθενται σε τρυβλία Stacker των 90 mm. Μικροβιολογικά ελεγμένο. PA

3 Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Τα υλικά αυτά μπορούν να χρησιμοποιηθούν κυρίως για όλους τους τύπους δειγμάτων από λοιμώξεις για τις οποίες υπάρχει υποψία ότι περιέχουν απαιτητικούς οργανισμούς, ιδιαίτερα, χωρίς όμως να περιορίζονται, σε δείγματα από κατεξοχήν στείρα σημεία του σώματος (π.χ., εγκεφαλονωτιαίο υγρό, αποστήματα). Η κύρια χρήση τους είναι για τη μη εκλεκτική απομόνωση Neisseria, Haemophilus, και άλλων βακτηριδίων που μπορεί να μην αναπτύσσονται στα υλικά άγαρ αίματος που χρησιμοποιούνται συνήθως, όπως το Άγαρ Columbia με 5% Αίμα Προβάτου. Επιπλέον, το BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την απομόνωση ειδών Abiotrophia και Globicatella (=στρεπτόκοκκοι με διαφορετικές θρεπτικές απαιτήσεις). 8,9 Τα υλικά χρησιμοποιούνται επίσης ως υλικά ανακαλλιέργειας από καλλιέργειες αίματος. (δείτε επίσης ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ). Συλλογή και μεταφορά των δειγμάτων Οι Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus, και άλλοι απαιτητικοί οργανισμοί είναι ευαίσθητοι στις δυσμενείς περιβαλλοντικές συνθήκες. Συνεπώς, για όλα τα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται κατάλληλα υλικά μεταφοράς. Τα δείγματα πρέπει να αποστέλλονται στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατόν και δεν πρέπει να είναι παλαιότερα από 24 ώρες, ακόμη κι αν χρησιμοποιούνται υλικά μεταφοράς. Η βέλτιστη θερμοκρασία μεταφοράς είναι 20 έως 25 C. Μην συντηρείτε τα δείγματα στο ψυγείο! 10,11 Διαδικασία της εξέτασης Επιστρώστε το δείγμα κατά το συντομότερο δυνατόν μετά την παραλαβή του από το εργαστήριο, σε BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) ή BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Το τρυβλίο επίστρωσης χρησιμοποιείται κυρίως για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών από δείγματα που περιέχουν ανάμεικτη χλωρίδα. Εναλλακτικά, εάν καλλιεργείται υλικό απευθείας από επίχρισμα, κυλήστε το στυλεό σε μια μικρή περιοχή της επιφάνειας στο άκρο και μετά επιστρώστε από αυτή την ενοφθαλμισμένη περιοχή. Εάν το δείγμα έχει συλλεχθεί από σημείο του σώματος που περιέχει φυσική χλωρίδα, θα πρέπει να ενοφθαλμιστεί επίσης σε κατάλληλο εκλεκτικό υλικό, ανάλογα με τον παθογόνο παράγοντα που πρόκειται να απομονωθεί. Για Neisseria gonorrhoeae, θα πρέπει να συμπεριληφθεί ένα τρυβλίο BD Martin-Lewis Agar, modified ή BD GC-Lect Agar, και για Haemophilus, ένα τρυβλίο BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin. Επωάστε τα τρυβλία στους 35 ± 2 C, σε αερόβιο περιβάλλον, συμπληρωμένο με διοξείδιο του άνθρακα. Διαβάστε τα τρυβλία μετά από 18 έως 24 και μετά από 42 έως 48 ώρες επώασης. Αποτελέσματα Η τυπική μορφολογία των αποικιών είναι η ακόλουθη: Οργανισμοί BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) και Haemophilus influenzae Μικρές (1mm), υγρές, περλέ αποικίες με χαρακτηριστική δυσάρεστη οσμή Neisseria gonorrhoeae Μικρές, γκριζωπές-άσπρες έως άχρωμες, βλεννώδεις αποικίες Neisseria meningitidis Μεσαίου έως μεγάλους μεγέθους, κυανο-γκρίζες, βλεννώδεις αποικίες Streptococcus pneumoniae Μικρές, επίπεδες ή μεγαλύτερες βλεννώδεις πρασινωπές αποικίες, οι μέτριες περιβάλλουσες αποικίες μπορεί να είναι πρασινωπές Granulicatella (Abiotrophia) Μικρές γκρίζες-πρασινωπές αποικίες, μεσαίου μεγέθους adiacens* περιβάλλουσες αποικίες μπορεί να είναι πρασινωπές PA

4 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) και το BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) είναι εμπλουτισμένα, μη εκλεκτικά υλικά στα οποία αναπτύσσονται απαιτητικά και μη απαιτητικά βακτηρίδια, συμπεριλαμβανομένης της φυσικής χλωρίδας. Συνεπώς, συνιστάται να ενοφθαλμίζετε τα δείγματα από σημεία του σώματος που περιέχουν φυσική χλωρίδα και σε κατάλληλα εκλεκτικά υλικά. Ο όρος "απαιτητικά βακτηρίδια" σχετίζεται με βακτήρια που δεν αναπτύσσονται ή δεν αναπτύσσονται καλά σε πρωτογενή υλικά απομόνωσης που χρησιμοποιούνται συνήθως και περιέχουν αίμα προβάτου, π.χ. Haemophilus, παθογόνοι οργανισμοί Neisseria, και αρκετοί άλλοι οργανισμοί. Για λεπτομερείς περιγραφές σχετικά με τον τύπο δειγμάτων που πρέπει να ενοφθαλμίζονται σε αυτά τα υλικά και τον τύπο οργανισμών για την απομόνωση των οποίων χρησιμοποιούνται αυτά τα υλικά, συμβουλευτείτε τις αναφορές. 8,9,11,12 Ο αριθμός και οι τύποι βακτηριακών ειδών που εμφανίζονται ως λοιμώδεις παράγοντες είναι πολύ μεγάλος. Συνεπώς, πριν χρησιμοποιηθούν τα υλικά ως υλικά ρουτίνας για μικροοργανισμούς που απομονώνονται σπάνια ή έχουν περιγραφεί πρόσφατα, πρέπει πρώτα να εξετάζεται η καταλληλότητά τους από το χρήστη με την καλλιέργεια καθαρών καλλιεργειών του εν λόγω οργανισμού. Το δεν έχει εξεταστεί ότι υποστηρίζει την ανάπτυξη ειδών Abiotrophia και άλλων στρεπτόκοκκων με διαφορετικές θρεπτικές απαιτήσεις. Για συζήτηση σχετικά με τους στρεπτόκοκκους με διαφορετικές θρεπτικές απαιτήσεις, συμβουλευτείτε τις αναφορές. 6,8,9,13 ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27: Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33: Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82: Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Ruoff, L.R Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous DIFCO Manual, 11th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14: Collins, M.D., and P.A. Lawson The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PA

5 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 120 τρυβλία Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 120 τρυβλία ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA