BD Mueller Hinton Chocolate Agar

Transcript

1 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA Αναθ.: Sep 2011 ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το χρησιμοποιείται για την απομόνωση και καλλιέργεια απαιτητικών βακτηριδίων από κλινικά δείγματα. Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για εξετάσεις ευαισθησίας του Neisseria gonorrhoeae. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Οι Bauer, Kirby και άλλοι ανέπτυξαν μια προτυποποιημένη διαδικασία κατά την οποία το άγαρ Mueller Hinton, ένα υλικό που επινοήθηκε αρχικά για την απομόνωση γονόκοκκων, επιλέχθηκε ως το υλικό εξέτασης γιατί τα κλινικά μικροβιολογικά εργαστήρια χρησιμοποιούσαν στις αρχές της δεκαετίας του 1960 μεγάλη ποικιλία διαδικασιών για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας βακτηριδίων σε αντιβιοτικούς και χημειοθεραπευτικούς παράγοντες. 1-4 Μια επακόλουθη διεθνής μελέτη συνεργασίας επιβεβαίωσε την αξία του Άγαρ Mueller Hinton για το σκοπό αυτό λόγω της σχετικά καλής επαναληψιμότητας του υλικού, της απλότητας στη σύνθεσή του και του πλήθους των πειραματικών δεδομένων που είχαν συσσωρευτεί χρησιμοποιώντας αυτό το υλικό. 5 Σύμφωνα με το CLSI, το συνιστώμενο υλικό της εξέτασης ευαισθησίας με διάχυση σε δίσκο του Streptococcus pneumoniae είναι Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood. Το συνιστώμενο υλικό για Haemophilus influenzae είναι το άγαρ υλικού εξέτασης Haemophilus (Haemophilus Test Medium ή HTM). Τα ερμηνευτικά κριτήρια παρέχονται στο έγγραφο CLSI Document M100 (M2), το οποίο περιλαμβάνεται στο έγγραφο CLSI Document M2, Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests, 7th ed.; Approved Standard (Πρότυπα απόδοσης για Εξετάσεις ευαισθησίας αντιμικροβιακών δίσκων, 7 η έκδοση, εγκεκριμένο πρότυπο). 6 Το συνιστώμενο υλικό για Neisseria gonorrhoeae είναι το Άγαρ GC με ορισμένο συμπλήρωμα ανάπτυξης. Σύμφωνα με άλλα στοιχεία, το Άγαρ Mueller Hinton με αιμίνη και Iso-VitaleX μπορεί να χρησιμοποιηθεί για εξετάσεις ευαισθησίας ρουτίνας του N. gonorrhoeae έναντι της πενικιλλίνης και της σπεκτινομυκίνης. 7 Το Άγαρ Mueller Hinton έχει συσταθεί ως μη εκλεκτικό υλικό για την απομόνωση Neisseria και Haemophilus, εφόσον συμπληρώνεται με θερμασμένο αίμα ή αιμοσφαιρίνη και παράγοντες ανάπτυξης (π.χ., BD IsoVitaleX). 8 Τα θρεπτικά στοιχεία στο παρέχονται από το εκχύλισμα βοείου κρέατος και πεπτόνης καζεΐνης. Το άμυλο απορροφά τις τοξικές ενώσεις, όπως λιπαρά οξέα που απορρέουν από τους βαμβακοφόρους στυλεούς. Η αιμοσφαιρίνη παρέχει τον παράγοντα X. Το BD IsoVitaleX παρέχει βιταμίνες και παράγοντες ανάπτυξης, συμπεριλαμβανομένου του παράγοντα V (=NAD) που είναι απαραίτητος για την ανάπτυξη του Haemophilus influenzae. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Σύνθεση* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού Εκχύλισμα βοείου κρέατος 2,0 g Όξινο υδρόλυμα καζεΐνης 17,5 Άμυλο 1,5 Αιμοσφαιρίνη 10,0 IsoVitaleX 10,0 ml Άγαρ 17.0 g ph 7,3 +/- 0,2 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. PA

2 Ο Εμπλουτισμός BD IsoVitalex περιέχει τους παρακάτω παράγοντες ανάπτυξης (σύνθεση * ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού): Βιταμίνη B 12 0,01 g L-γλουταμίνη 10,0 Αδενίνη 1,0 Υδροχλωρική γουανίνη 0,03 π-αμινοβενζοϊκό οξύ 0,013 Νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο (NAD) 0,25 Πυροφωσφορική θειαμίνη 0,1 Νιτρικός σίδηρος 0,02 Υδροχλωρική θειαμίνη 0,003 Υδροχλωρική κυστεΐνη 25,9 L-κυστίνη 1,1 Γλυκόζη 100,0 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τα τρυβλία εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Τυχόν υπερβολική συρρίκνωση αυτού του υλικού καλλιέργειας λόγω αποξήρανσης ενδέχεται να οδηγήσει σε ψευδή αποτελέσματα ευαισθησίας. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες 5 ή 10 τρυβλίων επί μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε τα τρυβλία στους 35 ± 2 C, σε αερόβιο περιβάλλον, συμπληρωμένο με διοξείδιο του άνθρακα. Διαβάστε τα τρυβλία μετά από 18 έως 24 και μετά από 42 έως 48 ώρες επώασης. Στελέχη Αποτελέσματα ανάπτυξης Haemophilus influenzae ATCC Καλή έως εξαιρετική ανάπτυξη Neisseria gonorrhoeae ATCC Αρκετά καλή έως εξαιρετική ανάπτυξη Neisseria meningitidis ATCC Καλή έως εξαιρετική ανάπτυξη Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Μη ενοφθαλμισμένο Καλή έως εξαιρετική ανάπτυξη Σοκολατί καφέ, αδιαφανές, ενδέχεται να είναι ελαφρώς ανομοιογενές Για τον ενοφθαλμισμό και την επώαση των εξετάσεων ευαισθησίας, δείτε την ενότητα Διαδικασία της Εξέτασης. Στέλεχος εξέτασης Δίσκος Εξέτασης Μέγεθος Ευαισθησίας ζώνης* (mm) Πενικιλλίνη P Neisseria gonorrhoeae ATCC Σπεκτινομυκίνη SPT * Τα μεγέθη των ζωνών βασίζονται σε αποτελέσματα από 3 τουλάχιστον διαφορετικές παρτίδες BD Mueller Hinton Chocolate Agar PA

3 ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά (τρυβλία Stacker των 90 mm). Μικροβιολογικά ελεγμένο. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Το μπορεί κυρίως να χρησιμοποιηθεί για όλους τους τύπους δειγμάτων από λοιμώξεις για τις οποίες υπάρχει υποψία ότι περιέχουν απαιτητικούς οργανισμούς, ιδιαίτερα, αλλά όχι μόνο, για δείγματα από στείρες κυρίως περιοχές του σώματος (π.χ., εγκεφαλονωτιαίο υγρό, αποστήματα) και ως υλικό ανακαλλιέργειας από καλλιέργειες αίματος. Η κύρια χρήση του είναι για τη μη εκλεκτική απομόνωση Neisseria, Haemophilus, και άλλων βακτηριδίων που μπορεί να μην αναπτύσσονται στα υλικά άγαρ αίματος που χρησιμοποιούνται συνήθως, όπως το Άγαρ Columbia με 5% Αίμα Προβάτου. (δείτε επίσης ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ). Η χρήση αυτού του υλικού για εξετάσεις ευαισθησίας ρουτίνας του Neissseria gonorrhoeae με πενικιλλίνη G και σπεκτινομυκίνη απαιτεί τη χρήση καθαρών καλλιεργειών. Μην ενοφθαλμίζετε με το δείγμα για άμεση εξέταση ευαισθησίας! Συλλογή και μεταφορά των δειγμάτων Οι Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus, και άλλοι απαιτητικοί οργανισμοί είναι ευαίσθητοι στις δυσμενείς περιβαλλοντικές συνθήκες. Συνεπώς, για όλα τα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται κατάλληλα υλικά μεταφοράς. Τα δείγματα πρέπει να αποστέλλονται στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατόν και δεν πρέπει να είναι παλαιότερα από 24 ώρες, ακόμη κι αν χρησιμοποιούνται υλικά μεταφοράς. Η βέλτιστη θερμοκρασία μεταφοράς είναι 20 έως 25 C. Μην συντηρείτε τα δείγματα στο ψυγείο! 9,10 Διαδικασία της εξέτασης Για απομόνωση απαιτητικών οργανισμών, επιστρώστε το δείγμα αμέσως μόλις πραγματοποιηθεί η παραλαβή του στο εργαστήριο. Το τρυβλίο επίστρωσης χρησιμοποιείται κυρίως για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών από δείγματα που περιέχουν ανάμεικτη χλωρίδα. Εναλλακτικά, εάν καλλιεργείται υλικό απευθείας από επίχρισμα, κυλήστε το στυλεό σε μια μικρή περιοχή της επιφάνειας στο άκρο και μετά επιστρώστε από αυτή την ενοφθαλμισμένη περιοχή. Εάν το δείγμα έχει συλλεχθεί από σημείο του σώματος που περιέχει φυσική χλωρίδα, θα πρέπει να ενοφθαλμιστεί επίσης σε κατάλληλο εκλεκτικό υλικό, ανάλογα με τον παθογόνο παράγοντα που πρόκειται να απομονωθεί. Για Neisseria gonorrhoeae, θα πρέπει να συμπεριληφθεί ένα τρυβλίο BD Martin-Lewis Agar, modified ή BD GC-Lect Agar, και για Haemophilus, ένα τρυβλίο BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin. Επωάστε τα τρυβλία στους 35 ± 2 C, σε αερόβιο περιβάλλον, συμπληρωμένο με διοξείδιο του άνθρακα. Διαβάστε τα τρυβλία μετά από 18 έως 24 και μετά από 42 έως 48 ώρες επώασης. Για εξετάσεις ευαισθησίας ρουτίνας του N. gonorrhoeae, ο απομονωμένος οργανισμός, που πρέπει να είναι καθαρή καλλιέργεια, εναιωρείται σε BD Trypticase Soy Broth με θολερότητα ισοδύναμη με το πρότυπο McFarland 0,5. Εντός 15 λεπτών από τη ρύθμιση της θολερότητας του ενοφθαλμίσματος, εμβαπτίστε έναν στείρο στυλεό στο κατάλληλα αραιωμένο ενοφθάλμισμα και περιστρέψτε τον σταθερά αρκετές φορές πιέζοντας επάνω στο άνω εσωτερικό τοίχωμα του σωληναρίου, έτσι ώστε να εκπιέσετε την περίσσεια υγρού. Ενοφθαλμίστε ολόκληρη την επιφάνεια άγαρ του τρυβλίου τρεις φορές, περιστρέφοντας το τρυβλίο 60 μεταξύ επιστρώσεων ώστε να προκύψει ομοιογενής ενοφθαλμισμός. Εφαρμόστε τους δίσκους με τη βοήθεια διανεμητή αντιμικροβιακού δίσκου, χρησιμοποιώντας άσηπτες προφυλάξεις. Εναποθέστε τους δίσκους έτσι ώστε τα κέντρα να απέχουν μεταξύ τους τουλάχιστον 24 mm. Προτιμάται η εναπόθεση δίσκων πενικιλλίνης με τρόπο ώστε να μην απέχουν λιγότερο από 10 mm από την άκρη του τρυβλίου Petri. Αφού τοποθετηθούν οι δίσκοι στο άγαρ, πιέστε τους με μια στείρα βελόνα ή λαβίδα έτσι ώστε να έρθουν σε πλήρη επαφή με PA

4 την επιφάνεια του υλικού. Το βήμα αυτό δεν είναι απαραίτητο εάν οι δίσκοι εναποτίθενται χρησιμοποιώντας το διανεμητή αυτοσυμπίεσης BD Sensi-Disc 6 ή 8 θέσεων. Εντός 15 λεπτών μετά την εφαρμογή των δίσκων αναστρέψτε τα τρυβλία και επωάστε τα σε αερόβιο περιβάλλον εμπλουτισμένο με 5% διοξείδιο του άνθρακα στους 35 έως 37 C για 20 έως 24 ώρες. Αποτελέσματα Η τυπική μορφολογία των αποικιών με είναι η ακόλουθη: Haemophilus influenzae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Streptococcus pneumoniae Μικρές, υγρές, περλέ με χαρακτηριστική δυσάρεστη οσμή Μικρές, γκριζωπές-άσπρες έως άχρωμες, βλεννώδεις αποικίες Μεσαίου έως μεγάλους μεγέθους, κυανο-γκρίζες, βλεννώδεις αποικίες Μικρές, επίπεδες ή μεγαλύτερες βλεννώδεις πρασινωπές αποικίες, οι μέτριες περιβάλλουσες αποικίες μπορεί να είναι πρασινωπές Εξετάσεις ευαισθησίας: Οι ζώνες πρέπει να διαβάζονται από το άνω τμήμα του τρυβλίου. Η ευαισθησία στην πενικιλλίνη θα πρέπει να επιβεβαιώνεται με μια εξέταση β-λακταμάσης, π.χ. εξέταση BD Cefinase. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το είναι ένα εμπλουτισμένο, μη εκλεκτικό υλικό στο οποίο αναπτύσσονται απαιτητικά και μη απαιτητικά βακτηρίδια, συμπεριλαμβανομένης της φυσικής χλωρίδας. Συνεπώς, συνιστάται να ενοφθαλμίζετε τα δείγματα και σε κατάλληλα εκλεκτικά υλικά. Ο όρος "απαιτητικά βακτηρίδια" σχετίζεται με βακτήρια που δεν αναπτύσσονται ή δεν αναπτύσσονται καλά σε πρωτογενή υλικά απομόνωσης που χρησιμοποιούνται συνήθως και περιέχουν αίμα προβάτου, π.χ. Haemophilus, παθογόνοι οργανισμοί Neisseria, και αρκετοί άλλοι οργανισμοί. Για λεπτομερείς περιγραφές σχετικά με τον τύπο δειγμάτων που πρέπει να ενοφθαλμίζονται σε αυτό το υλικό και τον τύπο οργανισμών για την απομόνωση των οποίων χρησιμοποιείται αυτό το υλικό, συμβουλευτείτε τις αναφορές. 10,11 Το υλικό αυτό δεν έχει εξεταστεί για την υποστήριξη της ανάπτυξης στρεπτόκοκκων με διαφορετικές θρεπτικές απαιτήσεις. Ο αριθμός και οι τύποι βακτηριακών ειδών που εμφανίζονται ως λοιμώδεις παράγοντες είναι πολύ μεγάλος. Επομένως, πριν χρησιμοποιηθεί αυτό το υλικό ως υλικό ρουτίνας για μικροοργανισμούς που απομονώνονται σπάνια ή έχουν περιγραφεί πρόσφατα, πρέπει πρώτα να εξετάζεται η καταλληλότητά του από το χρήστη με την καλλιέργεια καθαρών καλλιεργειών του εν λόγω οργανισμού. Τα μεγέθη των ζωνών εξέτασης ευαισθησίας που βρέθηκαν με αυτό το υλικό δεν συμφωνούν απολύτως με αυτά που αναφέρονται στο πρότυπο CLSI Standard M2 6 τα οποία έχουν καταγραφεί από Σοκολατούχο Άγαρ GC με ορισμένο συμπλήρωμα ανάπτυξης. ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45: Ryan, K.J., F.D. Schoenknecht, and W.M.M. Kirby Disc sensitivity testing. Hospital Practice 5: Mueller, J.H., and J. Hinton A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningococcus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 48: Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp An improved single-disk method for testing the antibiotic susceptibility of rapidly-growing pathogens. Am. J. Clin. Pathol. 53: Ericsson, H.M., and J.C. Sherris Antibiotic sensitivity testing. Report of an international collaborative study. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B, Suppl Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS). Approved standard: M2. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at PA

5 7. Berger, U Neisseriaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (F. Burkhardt, ed.). Thieme Verlag, Stuttgart, Germany. 8. Nash, P., and M.M. Krenz. Culture media. In: Manual of clinical microbiology, (Balows, A., et al., eds.). 5 th edition. American Society for Microbiology, Washington, D.C., USA. 9. Miller, J.M., and H.T. Holmes Specimen collection, transport, and storage. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Forbes, B.A., and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In: P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 120 τρυβλία ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA