ΠΑΝΕΠΙΣΗΜΙΟ ΠΑΣΡΩΝ ΥΟΛΗ ΕΠΙΣΗΜΩΝ ΤΓΕΙΑ ΣΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΤΣΙΚΗ ΕΡΓΑΣΗΡΙΟ ΦΑΡΜΑΚΟΚΙΝΗΣΙΚΗ

Μέγεθος: px
Εμφάνιση ξεκινά από τη σελίδα:

Download "ΠΑΝΕΠΙΣΗΜΙΟ ΠΑΣΡΩΝ ΥΟΛΗ ΕΠΙΣΗΜΩΝ ΤΓΕΙΑ ΣΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΤΣΙΚΗ ΕΡΓΑΣΗΡΙΟ ΦΑΡΜΑΚΟΚΙΝΗΣΙΚΗ"

Transcript

1 ΠΑΝΕΠΙΣΗΜΙΟ ΠΑΣΡΩΝ ΥΟΛΗ ΕΠΙΣΗΜΩΝ ΤΓΕΙΑ ΣΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΤΣΙΚΗ ΕΡΓΑΣΗΡΙΟ ΦΑΡΜΑΚΟΚΙΝΗΣΙΚΗ Φαξκαθνδπλακηθή κειέηε ζπλζεηηθνύ αληηθαξθηληθνύ πεπηηδίνπ θαη βειηίωζε ηεο in vivo ζηαζεξόηεηαο κε ζύλδεζε κε πνιπαηζπιελνγιπθόιε ΙΩΑΝΝΑ Γ. ΜΠΑΜΠΟΤΡΗ ΚΣΗΝΙΑΣΡΟ Επιβλέπυν Καθηγηηήρ: Γπηγόπηρ ιβολαπένκο ΜΕΣΑΠΣΤΥΙΑΚΗ ΕΡΓΑΙΑ ΠΑΣΡΑ

2 ΕΤΥΑΡΙΣΙΕ Απυ ηδ εέζδ αοηή μθείθς κα εοπανζζηήζς υθμοξ εηείκμοξ πμο ιε αμήεδζακ κα θηάζς ζηδκ μθμηθήνςζδ ηδξ ιεηαπηοπζαηήξ ιμο ιεθέηδξ. Ιδζαίηενεξ εοπανζζηίεξ μθείθς ζημκ επζαθέπμκηα ηδξ ιεθέηδξ ιμο, Ακαπθδνςηή Καεδβδηή η. Γνδβυνδ ζαμθαπέκημ, βζαηί ιε δέπηδηε ζηδκ ενεοκδηζηή ημο μιάδα ηαζ ηαευνζζε ημ εέια ηδξ ιεθέηδξ. Οθείθς κα επζζδιάκς ηδ δζανηή αμήεεζα ηαζ επμπηεία ημο ζε υθμοξ ημοξ ημιείξ ηδξ πεζναιαηζηήξ δζαδζηαζίαξ, απυ ημ ζηάδζμ ηδξ επελενβαζίαξ ηςκ δεζβιάηςκ ιέπνζ ηζξ ενβαζηδνζαηέξ ηεπκζηέξ ηαζ ηδκ ηεηιδνίςζδ ηςκ απμηεθεζιάηςκ. Σμκ εοπανζζηχ βζα ηδκ πμθφηζιδ ενβαζηδνζαηή ειπεζνία πμο ιμο ιεηέδςζε ηαεχξ ηαζ βζα ηδ δζανηή οπμζηήνζλή ημο. Θέθς επίζδξ κα εοπανζζηήζς ηα άθθα δφμ ιέθδ ηδξ ηνζιεθμφξ ζοιαμοθεοηζηήξ επζηνμπήξ, ημκ Ακαπθδνςηή Καεδβδηή η. Γεχνβζμ πονμφθζα ηαζ ημκ Δπίημονμ Καεδβδηή η. ηαφνμ Σμπμφγδ μζ μπμίμζ ζοιιεηείπακ ζηδκ ηνζιεθή ελεηαζηζηή επζηνμπή, δζάααζακ ηδ ιεθέηδ ηαζ μζ παναηδνήζεζξ ημοξ οπήνλακ ηαεμνζζηζηέξ. Σα ιέθδ ηδξ ενεοκδηζηήξ μιάδαξ ημο η. ζαμθαπέκημ, ιεηαδζδαηημνζηέξ ενεοκήηνζεξ Λεμκηάνδ Ηθζάκα ηαζ Καηζίθα Θεμδχνα εοπανζζηχ βζα ηδ θζθία ημοξ, βζα ηδκ ακεηηίιδηδ αμήεεζα πμο ιμο πνυζθενακ ηαηά ηδ δζάνηεζα ηςκ πεζναιάηςκ ηαζ βζα ημ ηίκδηνμ πμο ιμο έδςζακ υθμ αοηυ ημ δζάζηδια κα πνμζπαεχ κα θεζημονβχ ιε αοημπεπμίεδζδ ηαζ κα ηαθθζενβχ ηδ βκχζδ ζε κέα βζα ιέκα επζζηδιμκζηά πεδία. Θα ήηακ πανάθεζρδ κα ιδκ εοπανζζηήζς ηδκ πνμσζηαιέκδ ηδξ οπδνεζίαξ ιμο η. Ακηζβυκδ Κμηζχνδ, δ μπμία αβηάθζαζε ηδκ πνμζπάεεζά ιμο ηαζ έδεζλε ηαηακυδζδ ζηδκ ακάβηδ κα αθζενχζς πνυκμ ηαζ δοκάιεζξ ζηδκ ενβαζηδνζαηή ιμο ιεθέηδ, ηαοηυπνμκα ιε ηδκ δζεηπεναίςζδ ηςκ οπδνεζζαηχκ ιμο ηαεδηυκηςκ. Σέθμξ μθείθς απυ ηανδζάξ εοπανζζηίεξ ζηδκ μζημβέκεζα ηαζ ημοξ θίθμοξ ιμο βζα ηδκ δεζηή ηαζ οθζηή οπμζηήνζλή ημοξ υθμ αοηυ ημ δζάζηδια. Υςνίξ αοημφξ ηίπμηε δεκ εα ήηακ εθζηηυ. 2

3 ΚΑΣΑΛΟΓΟ ΕΙΚΟΝΩΝ Εικόνα 1. Η PSP94 ηαηαζηέθθεζ ηδκ ηοηηανζηή ακάπηολδ ηςκ PC3. Α. Μεθέηδ ζημ πνυκμ Β. Μεθέηδ ακάθμβα ιε ηδ δμζμθμβία Εικόνα 2. Η PSP94 ακαζηέθθεζ ηδκ ζηακυηδηα ζπδιαηζζιμφ απμζηζχκ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ. Εικόνα 3. Ακάθοζδ ηδξ απυπηςζδξ ιε ιζηνμζημπία θεμνζζιμφ Εικόνα 4. Καηαζημθή ηδξ αφλδζδξ ημο υβημο ιε πμνήβδζδ PSP94 Εικόνα 5. Η PSP94 ηαηαζηέθθεζ ηδκ αφλδζδ/ακάπηολδ ημο υβημο ιεηά ηδκ ειθφηεοζδ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ζε αεοιζηά Εικόνα 6: Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζημ ιέβεεμξ ηαζ αάνμξ υβηςκ Ly Lu-PTHrP Εικόνα 7. Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηα επίπεδα PTHrP πθάζιαημξ ηαζ ζημ αζαέζηζμ ζε γχα ζηα μπμία ακαπηφζζμκηαζ υβημζ Εικόνα 8: Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζημκ ηαηαηενιαηζζιυ ημο DNA MatLyLu-PTHrP ηοηηάνςκ in vitro ηαζ in vivo Εικόνα 9: Α) Γμηζιή ακηαβςκζζιμφ ιειανάκδξ Β) ακαζημθή ακάπηολδξ ημο υβημο ιε rpsp94 ζε ανζεκζημφξ ανμοναίμοξ Κμπεβπάβδξ πμο εκμθεαθιίζηδηακ ιε ηφηηανα Mat LyLu Εικόνα 10: Σμ πεπηίδζμ PCK3145 ήηακ ημ ιυκμ ιεηαλφ 12 δζαθμνεηζηχκ πμο ιεθεηήεδηακ, ημ μπμίμ ειθάκζγε πανυιμζεξ ζδζυηδηεξ ιε ηδκ PSP-94 Εικόνα 11.Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζημ ιέβεεμξ ηαζ ημ αάνμξ ημο υβημο Εικόνα 12.Δπίδναζδ ηςκ PSP-94 ηαζ PCK3145 ζε πεζναιαηζηέξ ζηεθεηζηέξ ιεηαζηάζεζξ Εικόνα 13: Δπίδναζδ ηδξ εεναπείαξ ιε PCK3145 ζημ ααειυ ζηεθεηζηχκ ιεηαζηάζεςκ /ζηδκ παναβςβή PTHrP ζηζξ πεζναιαηζηέξ ζηεθεηζηέξ ιεηαζηάζεζξ Εικόνα 14.Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζηα επίπεδα PTHrP ημο πθάζιαημξ ζε γχα πμο ακέπηολακ υβημοξ Εικόνα 15.Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζηδκ παναβςβή PTHrP απυ Mat Ly Lu-PTHrP υβημοξ Εικόνα 16. Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζημ αζαέζηζμ ημο πθάζιαημξ ζε γχα πμο ακέπηολακ υβημοξ Εικόνα 17.Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζηδ DNA ηαηαηενιαηζζιυ Mat Ly Lu-PTHrP ηοηηάνςκ in vivo 3

4 Εικόνα 18. οζπέηζζδ ιεηαλφ ιμνζαημφ αάνμοξ PEG ηαζ διίζεζαξ γςήξ ηδξ ζημ αίια ιεηά απυ εκδμθθέαζα πμνήβδζδ Εικόνα 19. Φανιαημηζκδηζηά πνμθίθ ηδξ PEG-SOD ζε επίιοεξ ιεηά απυ εκδμθθέαζα, εκδμπενζημκασηή, εκδμιοζηή ηαζ οπμδυνζα πμνήβδζδ Εικόνα 20. Δθανιμβέξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ Εικόνα 21. πδιαηζηή πανάζηαζδ ιζαξ δζάηαλδξ HPLC. Εικόνα 22. Βνυπμξ δεζβιαημθδρίαξ οβνμπνςιαημβναθίαξ. Με ηδ πεζνμθααή ηδξ ααθαίδαξ, υπςξ δείπκεηαζ ζημ ανζζηενυ ζπήια, μ ανυπμξ βειίγεζ απυ ηδ ζφνζββα ηαζ δ ηζκδηή θάζδ νέεζ απυ ηδκ ακηθία πνμξ ηδ ζηήθδ. Όηακ δ ααθαίδα ημπμεεηδεεί ζηδ εέζδ πμο δείπκεηαζ ζημ δελζυ ζπήια, μ ανυπμξ πανειαάθθεηαζ ιεηαλφ ακηθίαξ ηαζ ζηήθδξ, μπυηε δ ηζκδηή θάζδ ιεηαθένεζ ημ δείβια πνμξ ηδ ζηήθδ Εικόνα 23.Ιζμηναηζηυξ δζαπςνζζιυξ ορδθήξ ηαπφηδηαξ. Κζκδηή θάζδ: 4,1% μλζηυξ αζεοθεζηέναξ ζε n-ελάκζμ. Δκχζεζξ: (1) p-λοθέκζμ, (2) ακζζυθδ, (3) μλζηυξ αεκγοθεζηέναξ, (4) θεαθζηυξ δζμηηοθεζηέναξ, (5) θεαθζηυξ δζπεκηοθεζηέναξ, (6) θεαθζηυξ δζαμοηοθεζηέναξ, (7) θεαθζηυ δζπνμποθεζηέναξ, (8) θεαθζηυξ δζαζεοθεζηέναξ Εικόνα 24. Γζαπςνζζιυξ ιε RP-HPLC ηδξ ακενχπζκδξ ζκζμοθίκδξ απυ εηείκδ ημο ημοκεθζμφ Eικόνα 25. Υδιζηή δμιή ηδξ ιπμιπεζίκδξ Εικόνα 26 : Ακηίδναζδ ακαβςβήξ ημο ηίηνζκμο άθαημξ ηεηναγμθίμο (ΜΣΣ) ζε ιπθε/ιςα θμνιαγάκδ απυ ημ έκγοιμ ακαβςβάζδ Πθαηίδζμ ηοηηανμηαθθζενβεζχκ επζπέδμο ποειέκα ιε 96 ιζηνμθνεάηζα ιεηά απυ έκα πείναια ΜΣΣ. Αολακυιεκεξ πμζυηδηεξ γςκηακχκ ηοηηάνςκ απμδίδμοκ αολακυιεκμ πνςιαηζζιυ πμνθονμφ πνχιαημξ. Εικόνα 27.Καιπφθδ ααειμκυιδζδξ ημο PCK3145 ζε πθάζια ακενχπμο Εικόνα 28Καιπφθδ ααειμκυιδζδξ ημο ΡΟ1 ζε πθάζια ακενχπμο Εικόνα 29.Καιπφθδ ααειμκυιδζδξ ημο ΡΟ2 ζε πθάζια ακενχπμο Εικόνα 30.Υνςιαημβναθήιαηα πμο εθήθεδζακ ηαηά ηδκ ακάπηολδ ηδξ πνςιαημβναθζηήξ ιεευδμο α) PCK3145 ηαζ α) PO1 Εικόνα 31. Γζάβναιια πενζβναθήξ απμδυιδζδξ PCK 3145 ζε PBS, πθάζια απμοζία ακαζημθέςκ ηςκ πνςηεαζχκ, πθάζια πανμοζία ακαζημθέςκ ηςκ πνςηεαζχκ Εικόνα 32. Γζάβναιια πενζβναθήξ απμδυιδζδξ ΡΟ1 ζε PBS, πθάζια απμοζία ακαζημθέςκ 4

5 ηςκ πνςηεαζχκ, πθάζια πανμοζία ακαζημθέςκ ηςκ πνςηεαζχκ Εικόνα 33. Γζάβναιια πενζβναθήξ απμδυιδζδξ ΡΟ2 ζε PBS, πθάζια απμοζία ακαζημθέςκ ηςκ πνςηεαζχκ, πθάζια πανμοζία ακαζημθέςκ ηςκ πνςηεαζχκ Εικόνα 34. Γζάβναιια πενζβναθήξ πμζμζημφ ακάηηδζδξ ηςκ ηνζχκ πεπηζδζηχκ ιμνίςκ απυ ηαθθζενβδηζηυ ηοηηανζηυ ιέζμ ζηα δζάθμνα πνμκζηά ζδιεία Εικόνα 35: Η δνάζδ ηςκ PCK3145, Ρ01 ηαζ Ρ02 ζηα PC-3 ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ ζημκ ηοηηανζηυ ιεηααμθζζιυ ηαζ ακάπηολδ Εικόνα 36: Η δμζμ- ελανηχιεκδ δνάζδ ηςκ PCK3145, Ρ01 ηαζ ημο Ρ02 ζε PC-3 ηφηηανα, ιεηααμθζζιυξ/ακάπηολδ υπςξ εθέβπεδηε ιε ηδκ ιέεμδμ trypan blue. Εικόνα 37: Η δνάζδ ηςκ PCK3145, Ρ01 ηαζ Ρ02 ζηα MCF7 ηφηηανα ηανηίκμο ημο ιαζημφ ζημκ ηοηηανζηυ ιεηααμθζζιυ ηαζ ακάπηολδ Εικόνα 38: Η δμζμ-ελανηχιεκδ δνάζδ ηςκ PCK3145, Ρ01 ηαζ ημο Ρ02 ζε MCF7 ηφηηανα, ιεηααμθζζιυξ/ακάπηολδ υπςξ εθέβπεδηε ιε ηδκ ιέεμδμ trypan blue. 5

6 ΚΑΣΑΛΟΓΟ ΠΙΝΑΚΩΝ Πίνακαρ 1.Ο πνυκμξ διζγςήξ ημο PCK3145 ζηα δζάθμνα γςζηά πνυηοπα Πίνακαρ 2. Φοζζημπδιζηέξ ηαζ θανιαημηζκδηζηέξ ζδζυηδηεξ ηςκ PEGs: ζοζπέηζζδ ιεηαλφ ιμνζαημφ αάνμοξ, ιμνζαημφ ιεβέεμοξ, πνςηεσκζηυ ζζμδφκαιμ ιμνζαημφ αάνμοξ, παναιμκή ζηδκ ηοηθμθμνία ημο αίιαημξ Πίνακαρ 3. διαζία ηδξ μδμφ πμνήβδζδξ ζηδ θανιαημηζκδηζηή ζοιπενζθμνά ηδξ PEG-SOD Πίνακαρ 4.Απυδμζδ ακζπκεοηχκ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ Πίνακαρ 5. οβηέκηνςζεζξ δζαθοιάηςκ PCK3145 (µg/ml), PΟ1,PO2 (mg/ml) βζα ηδκ ηαηαζηεοή ηαιποθχκ ααειμκυιδζδξ ζε πθάζια Πίνακαρ 6. Πνυβναιια ααειζδςηήξ έηθμοζδξ βζα ημοξ ακαθφηεξ PCK, PO1 PO2 Πίνακαρ 7.Μεηνμφιεκεξ ηζιέξ βζα ηδκ ηαηαζηεοή πνυηοπδξ ηαιπφθδξ βζα ημ πεπηίδζμ PCK3145 Πίνακαρ 8.Μεηνμφιεκεξ ηζιέξ βζα ηδκ ηαηαζηεοή πνυηοπδξ ηαιπφθδξ βζα ημ πεπηίδζμ ΡΟ1 Πίνακαρ 9.Μεηνμφιεκεξ ηζιέξ βζα ηδκ ηαηαζηεοή πνυηοπδξ ηαιπφθδξ βζα ημ πεπηίδζμ PO2 Πίνακαρ 10. Απμηεθέζιαηα πεζνάιαημξ ζηαεενυηδηαξ βζα PCK 3145 ζοκανηήζεζ ημο πνυκμο Πίνακαρ 11. Απμηεθέζιαηα πεζνάιαημξ ζηαεενυηδηαξ βζα PCK 3145 ζοκανηήζεζ ημο πνυκμο, ιεηά ηδκ πνμζεήηδ ακαζημθεχκ ηςκ πνςηεαζχκ ζημ δείβια Πίνακαρ 12. Απμηεθέζιαηα πεζνάιαημξ ζηαεενυηδηαξ βζα P01 ζοκανηήζεζ ημο πνυκμο Πίνακαρ 13. Απμηεθέζιαηα πεζνάιαημξ ζηαεενυηδηαξ βζα P01 ζοκανηήζεζ ημο πνυκμο, ιεηά ηδκ πνμζεήηδ ηςκ ακαζημθέςκ ηςκ πνςηεαζχκ Πίνακαρ 14. Απμηεθέζιαηα πεζνάιαημξ ζηαεενυηδηαξ βζα P02 Πίνακαρ 15. Απμηεθέζιαηα πεζνάιαημξ ζηαεενυηδηαξ βζα P02 ζοκανηήζεζ ημο πνυκμο, ιεηά ηδκ πνμζεήηδ ηςκ ακαζημθέςκ ηςκ πνςηεαζχκ Πίνακαρ 16. Πμζμζηά ακάηηδζδξ ηςκ ηνζχκ πεπηζδζηχκ ιμνίςκ απυ ηαθθζενβδηζηυ ηοηηανζηυ ιέζμ ζε 5 δζαθμνεηζηά πνμκζηά ζδιεία 6

7 Πεπιεσόμενα ΠΔΡΙΛΗΦΗ ABSTRACT ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΠΡΩΣΟ:Η ΠΡΩΣΕΪΝΗ PSP-94 ΚΑΙ ΣΑ ΤΝΘΕΣΙΚΑ ΑΝΑΛΟΓΑ ΣΗ Α. Ζ πξωηεΐλε PSP-94 θαη ηα ζπλζεηηθά αλάινγά ηεο Β. Πεζνάιαηα in vitro ηαζ in vivo Β1) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ηδκ ακάπηολδ ηαζ ηδκ πμθθαπθαζζαζηζηή ζηακυηδηα ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ιε πνμκμ-ελανηχιεκμ ηαζ δμζμ-ελανηχιεκμ ηνυπμ Β2) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηδκ ζηακυηδηα ζπδιαηζζιμφ απμζηζχκ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ιε πνμκμ-ελανηχιεκμ ηαζ δμζμ-ελανηχιεκμ ηνυπμ Β3) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζημκ απμπηςηζηυ εάκαημ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ (ιμνθμθμβζηή παναηήνδζδ) Β4) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηδκ ακάπηολδ ημο υβημο ζε εκήθζηεξ επίιοεξ Β5 ) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηδκ ακάπηολδ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ in vivo Β6) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηδκ ακάπηολδ πεζναιαηζηχκ ζηεθεηζηχκ ιεηαζηάζεςκ Β7) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηδκ αφλδζδ ημο υβημο Β8) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηα επίπεδα Ca ηαζ PTHrP πθάζιαημξ Β9) Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηδκ απυπηςζδ ηςκ ηοηηάνςκ ημο υβημο in vivo Γ. To ζπλζεηηθό πεπηίδην PCK Γ1) Δπίδναζδ ηςκ PCK721, PCK3145 ηαζ PCK7694 ζηδκ αφλδζδ ηαζ ηδ ιμνθμθμβία ηςκ MatLyLu-PTHrP ηοηηάνςκ Γ2) Δπίδναζδ ηςκ PCK721, PCK3145 ηαζ PCK7694 ζηδκ αφλδζδ ημο υβημο Γ3) Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζηδκ ακάπηολδ πεζναιαηζηχκ ζηεθεηζηχκ ιεηαζηάζεςκ Γ4) Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζημ αάνμξ ημο υβημο Γ5) Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζηα επίπεδα παναεμνιυκδξ ηαζ αζαεζηίμο ημο πθάζιαημξ Γ6) Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζημκ εάκαημ ημο υβημο ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΔΕΤΣΕΡΟ:ΤΝΔΕΗ ΜΕ ΠΟΛΤΑΙΘΤΛΕΝΟΓΛΤΚΟΛΗ Α. ύλδεζε κε πνιπαηζπιελνγιπθόιε-γεληθά Β. Νεθξηθή δηήζεζε Γ. Δπίδξαζε ηεο αιιαγήο θνξηίνπ (masking) ζηε λεθξηθή δηαπεξαηόηεηα Γ. Μνξηαθό κέγεζνο θαη ζπεηξακαηηθή δηήζεζε Δ. Γνκή PEG ωο πξνο ηε ζπεηξακαηηθή δηήζεζε

8 Σ. Δπίδξαζε ηνπ κεγέζνπο ηνπ ζπδεύγκαηνο ζηελ ζπεηξακαηηθή δηήζεζε Ε. Δπίδξαζε ηεο δνκήο ηνπ πνιπκεξνύο, ηεο ρεκείαο ηνπ δεζκνύ θαη ηεο πεγήο ηεο πξωηεΐλεο ζην ξπζκό θάζαξζεο Ζ. Δπίδξαζε ηωλ δωηθώλ εηδώλ ζηελ in vivo ζπκπεξηθνξά ηνπ ζπδεύγκαηνο Θ. Απνδόκεζε (degradation) ηεο PEG θαη ηωλ PEG ζπδεπγκάηωλ Η. Απνκάθξπλζε από ην αλνζνπνηεηηθό ζύζηεκα ΗΑ. Οδνί ρνξήγεζεο ηωλ ζπδεπγκάηωλ PEG ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΣΡΙΣΟ:ΤΓΡΗ ΧΡΩΜΑΣΟΓΡΑΦΙΑ ΤΨΗΛΗ ΑΠΟΔΟΗ Α. ΤΓΡΖ ΥΡΧΜΑΣΟΓΡΑΦΗΑ ΤΦΖΛΖ ΑΠΟΓΟΖ Α1) Δθανιμβέξ ηδξ πνςιαημβναθίαξ Α2) Πμζμηζηή ακάθοζδ Α3) Πμζμηζηή ακάθοζδ Β. ΤΓΡΖ ΥΡΧΜΑΣΟΓΡΑΦΗΑ ΤΦΖΛΖ ΑΠΟΓΟΖ Β1) Πεδίμ εθανιμβχκ ηδξ ΗPLC Β2) Ονβακμθμβία οβνήξ πνςιαημβναθίαξ Β2α) Γνρεία θηλεηήο θάζεο θαη ζπζηήκαηα επεμεξγαζίαο δηαιπηώλ Β2β) πζηήκαηα άληιεζεο Β2γ) πζηήκαηα έγρπζεο δείγκαηνο Γ. ηήθεξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ Γ1) Αλαιπηηθέο ζηήιεο Γ2) Πξνζηαηεπηηθέο ζηήιεο Γ. Ακζπκεοηέξ-Σφπμζ Ακζπκεοηχκ Γ1) Αληρλεπηέο απνξξόθεζεο Γ2) Αληρλεπηέο θζνξηζκνύ Γ3) Αληρλεπηέο θαζκαηνκεηξίαο κάδαο Δ. Υαναηηδνζζιυξ πεπηζδίςκ ιε οβνή πνςιαημβναθία ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΣΕΣΑΡΣΟ: ΠΡΟΚΑΣΕΡΓΑΙΑ ΔΕΙΓΜΑΣΩΝ ΠΡΟΚΑΣΔΡΓΑΗΑ ΓΔΗΓΜΑΣΧΝ Α. Μέεμδμζ πνμηαηενβαζίαξ αζμθμβζηχκ δεζβιάηςκ Α1) Καηαηνήικζζδ πνςηεσκχκ (Protein Precipitation, PP) Α2) Τβνή-οβνή εηπφθζζδ (Liquid-Liquid Extraction, LLE) Α3) Δηπφθζζδ ζηενεάξ θάζδξ (Solid Phase Extraction, SPE)

9 Α4) Σαοηυπνμκμξ ιε ηδκ ακάθοζδ ηαεανζζιυξ/εηπφθζζδ δείβιαημξ (on-line sample clean up/extraction) ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΠΕΜΠΣΟ: ΧΑΡΑΚΣΗΡΙΣΙΚΑ ΠΟΙΟΣΗΣΑ ΑΝΑΛΤΣΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΤ Α. ΥΑΡΑΚΣΖΡΗΣΗΚΑ ΠΟΗΟΣΖΣΑ ΑΝΑΛΤΣΗΚΖ ΜΔΘΟΓΟΤ Α1) Oνευηδηα Α2) Αηνίαεζα (precision) Α3) Γναιιζηυηδηα (linearity) Α4) Δηθεηηζηυηδηα (selectivity) ηαζ εζδζηυηδηα (specificity) Α5) Όνζμ ακίπκεοζδξ ηαζ πμζμηζημπμίδζδξ ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΕΚΣΟ: ΚΟΠΟ Α. ΚΟΠΟ ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΕΒΔΟΜΟ: ΠΕΙΡΑΜΑΣΙΚΟ ΜΕΡΟ Α. ύλζεζε πεγθπιηωκέλωλ πεπηηδίωλ Α1) πίζζιμ ηαζ απμπνμζηαζία Α2) Καεανζζιυξ Α3) Ακάθοζδ πεπηζδίςκ Α4) φγεολδ PEG Α5) Ακάθοζδ ζογεφβιαημξ Β. Τιηθά θαη Μέζνδνη Β1) Όνβακα: Β2) Γζαθφηεξ-Ακηζδναζηήνζα: Γ. Αλάπηπμε Μεζόδνπ HPLC γηα ηνλ πξνζδηνξηζκό ηνπ πεπηηδίνπ PCK3145 θαη ηωλ αλαιόγωλ ηνπ PO1, PO2 ζε αλζξώπηλν πιάζκα Γ1) Δπζθμβή Eζςηενζημο πνμηφπμο Γ2) Παναζηεοή πνμηφπςκ δζαθοιάηςκ Γ3) Παναζηεοή πνμηφπςκ δζαθοιάηςκ ηαιπφθδξ ακαθμνάξ Γ4) Δπζθμβή πνςιαημβναθζηχκ ζοκεδηχκ ηαζ πάναλδ ηαιποθχκ ακαθμνάξ Γ5) Διαμθζαζιέκα δείβιαηα πθάζιαημξ -Μέεμδμξ πνμηαηενβαζίαξ δεζβιάηςκ Γ. Πείξακα ζηαζεξόηεηαο παξνπζία θαη απνπζία κείγκαηνο αλαζηνιέωλ ζε ξπζκηζηηθό δηάιπκα θωζθνξηθώλ, πιάζκα αλζξώπνπ θαη αλάιπζε Γ1) Μεθέηδ ζηαεενυηδηαξ ημο PCK 3145 ζε ακενχπζκμ πθάζια ζημοξ 37 Ο C Γ2) Μεθέηδ ζηαεενυηδηαξ ημο PCK 3145 ζε ακενχπζκμ πθάζια ζημοξ 37 Ο C ιε πνμζεήηδ ιίβιαημξ ακαζημθέςκ

10 Γ3) Μεθέηδ ζηαεενυηδηαξ P01, Ρ02 ζε ακενχπζκμ πθάζια ζημοξ 37 Ο C Γ4) Μεθέηδ ζηαεενυηδηαξ P01, Ρ02 ζε ακενχπζκμ πθάζια ζημοξ 37 Ο C ιε πνμζεήηδ ιίβιαημξ ακαζημθέςκ Δ. Κπηηαξηθά Πεηξάκαηα Δ1) Πείξακα ζηαζεξόηεηαο ζε θαιιηεξγεηηθό θπηηαξηθό κέζν Δ2) Κπηηαξνθαιιηέξγεηεο Δ2α) Μεθέηδ ημο πμθθαπθαζζαζιμφ ιε ηδκ ιέεμδμ ΜΣΣ Δ2α) Μέηνδζδ ανζειμφ ηοηηάνςκ ιε ηδ ιέεμδμ Trypan Blue ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΟΓΔΟΟ: ΑΠΟΣΕΛΕΜΑΣΑ-ΤΖΗΣΗΗ Α. Ακάπηολδ Μεευδμο HPLC βζα ημκ πνμζδζμνζζιυ ημο πεπηζδίμο PCK3145 ηαζ ηςκ ακαθυβςκ ημο PO1, PO2 ζε ακενχπζκμ πθάζια Β. Πείναια ζηαεενυηδηαξ πανμοζία ηαζ απμοζία ιείβιαημξ ακαζημθέςκ ζε νοειζζηζηυ δζάθοια θςζθμνζηχκ, πθάζια ακενχπμο ηαζ ακάθοζδ Γ. Κοηηανζηά πεζνάιαηα Γ1) Πείξακα ζηαζεξόηεηαο ζε θαιιηεξγεηηθό θπηηαξηθό κέζν Γ2) Ζ επίδξαζε ηωλ PCK3145-PO1-PO2 ζηνλ πνιιαπιαζηαζκό ηωλ θπηηάξωλ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ

11 ΠΔΡΙΛΗΦΗ Η ζοζπέηζζδ ηδξ πνςηεΐκδξ PSP94 ιε ημκ ηανηίκμ ημο πνμζηάηδ είκαζ βκςζηή, ηαεχξ ιεζςιέκα επίπεδα ηδξ PSP94 ζπεηίγμκηαζ ιε ηα πνμπςνδιέκα, ιεηαζηαηζηά ζηάδζα ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ, ηαζ οπμηίεεηαζ υηζ δ πθήνδξ έηθναζή ηδξ ζοιαάθθεζ ζηδκ ακαπαίηζζδ ηδξ ηανηζκζηήξ ακάπηολδξ. Σμ PCK3145, έκα ζοκεεηζηυ δεηαπεκηαιενέξ πεπηίδζμ, ημο μπμίμο δ αθθδθμοπία αιζκμλέςκ είκαζ ηαοηυζδιμ ιε ηδκ αθθδθμοπία ηςκ αιζκμλέςκ 31 έςξ 45 ηδξ PSP94, επζθέπηδηε ιεηαλφ 12 δζαθμνεηζηχκ πεπηζδίςκ πμο πνμέηορακ απυ ηδκ PSP94 ηαεχξ εδείπεδ μηζ ακαηεθαθαζχκεζ in vitro ηαζ in vivo ηζξ θεζημονβίεξ ηαζ ζδζυηδηεξ ηδξ PSP94, ηαζ άνα είκαζ έκα ιυνζμ πμο ιπμνεί κα πνδζζιμπμζδεεί ζηδκ ηαηαζημθή ηδξ ακάπηολδξ ημο ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ. Χζηυζμ, θανιαημηζκδηζηέξ ιεθέηεξ ζε γχα ηαζ αζεεκείξ ιε ηανηίκμ ημο πνμζηάηδ, ηαηέδεζλακ ηαπεία ηάεανζδ ηαζ ιζηνυ πνυκμ διζγςήξ. Πνμηεζιέκμο κα εκζζποεεί ημ θανιαημηζκδηζηυ πνμθίθ ημο πεπηζδίμο PCK3145 ηαζ ςξ εη ημφημο κα αεθηζςεεί δ θανιαημδοκαιζηή ημο, οπέζηδ πδιζηή ηνμπμπμίδζδ ιε πνμζεήηδ πμθοαζεοθεκζηήξ βθοηυθδξ (PEG). Η πεζναιαηζηή ενβαζία πανμοζζάγεζ ηα απμηεθέζιαηα ιζαξ ζοζηδιαηζηήξ ιεθέηδξ ζπεηζηά ιε ηδκ επίδναζδ ηδξ πεβηοθίςζδξ ζημ PCK3145 ζοβηνίκμκηαξ ηδκ πνςηεμθοηζηή ζηαεενυηδηα ηαζ αζμθμβζηή δνάζδ δφμ πεβηοθζςιέκςκ ζογεοβιάηςκ ημο ιε ηδκ ηαεανή ιμνθή ημο. Γζα ηδκ πμζμηζημπμίδζδ ηαζ βζα ηα πεζνάιαηα ζηαεενυηδηαξ πνδζζιμπμζήεδηε έκα ζφζηδια οβνήξ πνςιαημβναθίαξ ορδθήξ απυδμζδξ HPLC απμηεθμφιεκμ απυ ιζα ακηθία Ultimate (Dionex). Ο πνςιαημβναθζηυξ δζαπςνζζιυξ επζηεφπεδηε ιε ιζα ζηήθδ ακάζηνμθδξ θάζδξ C18. Δπεηεφπεδ βζα πνχηδ θμνά δ ακάπηολδ ακαθοηζηήξ ιεεμδμθμβίαξ HPLC βζα ημκ πνμζδζμνζζιυ ηςκ πεβηοθζςιέκςκ ακαθυβςκ ιε ορδθμφ ααειμφ βναιιζηυηδηα, εζδζηυηδηα, επακαθδρζιυηδηα ηαζ ακαπαναβςβζιυηδηα. Η πνςηεμθοηζηή ζηαεενυηδηα ηςκ ζογεοβιάηςκ PEG ζε ακενχπζκμ πθάζια πνμζδζμνίζηδηε ιε πνήζδ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ HPLC ηαζ απμηαθφθεδηε ιείςζδ ημο πμζμζημφ απμδυιδζδξ ηαζ εκίζποζλ ηδξ ζηαεενυηδηαξ ημο πεπηζδζηχκ ιμνίςκ ζε ακενχπζκμ πθάζια. H ιεθέηδ επζαίςζδξ ηδξ ηοηηανζηήξ ζεζνάξ ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ PC3, ιεηά ηδκ πνμζεήηδ ηςκ πεπηζδζηχκ ιμνίςκ οπυ ιεθέηδ, οπμθμβίζηδηε ιε ηζξ ιεευδμοξ ΜΣΣ 11

12 ηαζ Trypan blue. 50% ακαζημθή ηδξ ηοηηανζηήξ αφλδζδξ/ιεηααμθζζιμφ επεηεφπεδ ιε ηζξ ζοβηεκηνχζεζξ ηςκ 10ιg/ml ηαζ βζα ηα ηνία πεπηίδζα. Χζηυζμ, ηα πεβηοθζςιέκα ακάθμβα επέθενακ ζζπονυηενδ ακαζηαθηζηή επίδναζδ ζηδκ ηοηηανζηή αφλδζδ ζε ιζηνυηενεξ δυζεζξ. Πανυιμζα εκεαννοκηζηά απμηεθέζιαηα οπήνλακ ηαζ βζα ηδκ δνάζδ ηςκ ιμνίςκ ζηδ ηανηζκζηή ζεζνά ημο ιαζημφ MCF-7. Σα απμηεθέζιαηα ηδξ ιεθέηδξ ζοκμρίγμκηαζ ζηδκ ζηακυηδηα ηδξ πεβηοθίςζδξ κα αεθηζχκεζ ηδ ζηαεενυηδηα ημο PCK3145 ηαζ έηζζ κα εκζζπφεζ ηδ αζμθμβζηή ημο δνάζδ. Μεθθμκηζηά πεζνάιαηα εα απμζαθδκίζμοκ πενζζζυηενμ ηυζμ ηδκ δνάζδ ηςκ ιμνίςκ ζε ηανηζκζηέξ ζεζνέξ πένακ ημο πνμζηάηδ αθθά ηαζ ηδκ θανιαημηζκδηζηή ζοιπενζθμνά ηςκ πεπηζδζηχκ ακαθυβςκ ιέζς πεζναιάηςκ in vivo ηδξ αζμηαηακμιήξ ηαζ ιεηααμθζζιμφ ημοξ. 12

13 ABSTRACT PSP94, protein is known to have specific implications with prostate cancer where a down-regulation of PSP94 levels is associated with advanced metastatic prostate cancer and it is supposed that the full expression contributes to the inhibition of tumor growth. PCK3145 is a synthetic 15-mer peptide that matches the natural sequence of amino acids 31 to 45 of PSP94 and was selected from 12 other peptides derived from PSP94 as it exhibited the best in vitro and animal in vivo properties similar to PSP94. Thus, it is a molecule hat can be used to suppress the growth of prostate cancer.however pharmacokinetics studies in animals and in patients with prostate cancer showed rapid clearance and a short half-life. In order to alter the pharmacokinetic profile of the peptide, and thereby to improve its pharmacodynamic potential PCK3145 was chemically modified with polyethylene glycol (PEG).This experimental work presents the results of a systematic study on the influence of the PEGylation of PCK3145 peptides on the proteolytic stability and biological activity of these conjugates compared to the wild-type peptide. For the quantification and stability assays an HPLC system was used consisted of an Ultimate 3000 Pump (Dionex). Chromatographic separation was achieved on RP, C18 column. An HPLC method development for the determination of the PEG-peptide conjugates was assessed for the first time. A high degree of linearity, specificity as well as repeatability and reproducibility were also achieved. The proteolytic stability of the PEG-peptide conjugates in human plasma was assessed by HPLC chromatography, which revealed a significant decrease in the degradation. Proliferation of PC3 cancer cell line was measured using the MTT and Trypan blue test. A 50% inhibition of the cell metabolism/growth was achieved by the concentrations of 10 ιg/ml of the three peptides. However, at lower concentrations stronger growth inhibitory effect was observed for the PEG-peptides. Similar encouraging results have also seen for the action of molecules in cancer cell lines MCF- 7.The results of this study emphasize the ability of PEGylation to improve the stability of PCK3145 and thus to enhance the biological activity. Future experiments will clarify 13

14 more the action of molecules in cancer cell lines beyond the prostate and the pharmacokinetic behavour of peptide analogs through in vivo experiments of biodistribution and metabolism. 14

15 ΚΕΥΑΛΑΙΟ ΠΡΨΣΟ:Η ΠΡΨΣΕΪΝΗ PSP-94 ΚΑΙ ΣΑ ΤΝΘΕΣΙΚΑ ΑΝΑΛΟΓΑ ΣΗ 15

16 Α. Ζ πξωηεΐλε PSP-94 θαη ηα ζπλζεηηθά αλάινγά ηεο Ο ηανηίκμξ ημο πνμζηάηδ είκαζ δ δεφηενδ ζε ζοπκυηδηα αζηία πνυηθδζδξ εακάημο απυ ηανηίκμ ιεηά απυ ημκ ηανηίκμ ημο πκεφιμκα ιε εακάημοξ ακδνχκ απυ ηδ κυζμ ημ 2009 ζηδκ Αιενζηή (American Cancer Society Data). Η επζζηαιέκδ παναημθμφεδζδ, δ νζγζηή πνμζηαηεηημιή ηαζ δ αηηζκμεεναπεία απμηεθμφκ απμδεηηέξ ιεευδμοξ εεναπείαξ ζε ζπέζδ πάκημηε ιε ηζξ ελαημιζηεοιέκεξ πενζπηχζεζξ αζεεκχκ (1). Άκδνεξ άκς ηςκ 75 εηχκ ιε ζαθχξ δζαθμνμπμζδιέκμ ηανηίκμ ημο πνμζηάηδ ηαζ παιδθά επίπεδα PSA παναημθμοεμφκηαζ ζηεκά δίπςξ εεναπεία ηαζ ιε ζοκεπείξ ιεηνήζεζξ ηςκ επζπέδςκ PSA. Αζεεκείξ ιε πενζζζυηενμ απυ 10 έηδ πνμζδυηζιμ επζαίςζδξ πνμζεββίγμκηαζ εεναπεοηζηά. πεηζηά κευηενμζ αζεεκείξ (ηάης ηςκ 70 εηχκ) ζε ηαθή θοζζηή ηαηάζηαζδ, ιε πνμζδυηζιμ επζαίςζδξ άκς ηςκ 15 εηχκ ηαζ εκημπζζιέκδ ιμνθή ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ πνμζεββίγμκηαζ εεναπεοηζηά ιε νζγζηή πνμζηαηεηημιή εκχ ζε ιεβαθφηενδξ δθζηίαξ αζεεκείξ ιε επζαανοιέκδ ηαηάζηαζδ οβείαξ επζθέβεηαζ δ αηηζκμεεναπεία. Γζα ηζξ πνμπςνδιέκεξ ιμνθέξ ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ, δ μνιμκμεεναπεία εεςνείηαζ δ πθέμκ απμηεθεζιαηζηή ηαζ δφκαηαζ κα αημθμοεδεεί ζε πμθθά ζπήιαηα (1). Αλίγεζ ςζηυζμ κα ακαθενεεί υηζ δ μνιμκμεεναπεία έπεζ ιυκμ πανδβμνδηζηυ παναηηήνα ζηα πνμπςνδιέκα ζηάδζα ηδξ κυζμο δζυηζ, ηαεχξ δ κυζμξ ελεθίζζεηαζ ζηδκ μνιμκμάκημπδ ηεθζημφ ζηαδίμο ιμνθή ηδξ, ηαιία εεναπεία δεκ ιπμνεί κα απμδεζπεεί απμηεθεζιαηζηή, βεβμκυξ πμο ζηνέθεζ ημ εκδζαθένμκ ζε κευηενα ηαζ πθέμκ οπμζπυιεκα ιυνζα. Η PSP94 (Prostatic Secretory Protein) είκαζ βκςζηή ηαζ ςξ Βήηα Μζηνμζειζκμπνςηεΐκδ (Beta-Microseminoprotein-MSMB) ή Prostate Inhibin-like Peptide 9PIP), Prostatic Secretory Protein (PRPS) ή Prostatic Inhibin (PI). Πνυηεζηαζ βζα ιζα ιδ βθοημζοθζςιέκδ πθμφζζα ζε ηοζηεΐκδ πνςηεΐκδ 14 kda πμο απμηεθείηαζ απυ 94 αιζκμλέα ηαζ δ μπμία πνμένπεηαζ απυ έκα πνμ-πμθοπεπηίδζμ 114 αιζκμλέςκ (άθθα ιμνζαηά αάνδ πμο έπμοκ ακαθενεεί ζημκ άκενςπμ είκαζ ηα 10, 13, 15 ηαζ 16 kda). Δπζπθέμκ ηδξ ζζμιμνθήξ ηςκ 94 αιζκμλέςκ, οπάνπεζ ηαζ ιζα θζβυηενμ ημζκή ζζμιμνθή ηδξ PSP, δ μπμία απμηεθείηαζ απυ 57 αιζκμλέα (PSP-57). Έπεζ ακαθενεεί υηζ δ PSP94 ακαζηέθθεζ ηδκ έηηνζζδ ηδξ εοθαηζμηνυπμο μνιυκδξ (FSH) (2), ςζηυζμ πμθφ θίβα είκαζ βκςζηά ζπεηζηά ιε ηδκ ακςηένς δνάζδ ηδξ πνςηεΐκδξ. 16

17 Η PSP-94 πνςηεΐκδ έπεζ ακαβκςνζζηεί ςξ ιία απυ ηζξ ηνεζξ ααζζηέξ πνςηεΐκεξ πμο εηηνίκμκηαζ απυ ημκ πνμζηαηζηυ αδέκα ιαγί ιε ημ εζδζηυ πνμζηαηζηυ ακηζβυκμ ηαζ ηδκ μλζηή πνμζηαηζηή θςζθαηάζδ. Απυ ηδκ ακαηάθορή ηδξ έπεζ δεζπηεί υηζ δ PSP-94 πανάβεηαζ ηαζ απυ άθθα υνβακα πένακ ημο πνμζηάηδ, ζδζαίηενα δε απυ ζζημφξ ημο εδθοημφ ακαπαναβςβζημφ ζοζηήιαημξ υπςξ μ ιαζηυξ ηαζ μζ ςμεήηεξ. Χζηυζμ, δ έηθναζδ ηδξ PSP-94 πνςηεΐκδξ είκαζ ζζπονυηενδ ζημκ πνμζηαηζηυ αδέκα ζε ζπέζδ ιε ημοξ άθθμοξ ζζημφξ. Η έηθναζδ ηδξ PSP-94 δζαθένεζ ακάθμβα ιε ηδκ ζηαδζμπμίδζδ ημο ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ. Σα επίπεδα έηθναζδξ ζημκ οβζή πνμζηαηζηυ ζζηυ είκαζ ορδθά αθθά πνμμδεοηζηά ιεζχκμκηαζ ηαεχξ μ ηανηίκμξ ελεθίζζεηαζ απυ έκα πνχζιμ, παιδθήξ δζείζδοζδξ, ακδνμβμκμελανηχιεκμ ζηάδζμ, ζε έκα ιεηαβεκέζηενμ ορδθήξ δζείζδοζδξ ακδνμβμκμ-ακελάνηδημ ζηάδζμ ιέπνζ ηδκ πακηεθή απχθεζα ηδξ έηθναζδξ ηδξ PSP-94 ζηα πμθφ πνμπςνδιέκα ζηάδζα ημο ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ. Αοηή δ ιεηαθθαβή ζηδκ έηθναζδ ηδξ πνςηεΐκδξ ηαεχξ ηαζ ημ επζπνυζεεημ πθεμκέηηδια υηζ δ έηθναζδ ηδξ PSP-94 είκαζ ακδνμβμκμ-ακελάνηδηδ/άκημπδ ζε ζφβηνζζδ ιε ημ εζδζηυ πνμζηαηζηυ ακηζβυκμ ηαζ ηδκ μλζηή πνμζηαηζηή θςζθαηάζδ, εα ιπμνμφζε κα ηδκ ηαηαζηήζεζ ςθέθζιμ πνμβκςζηζηυ δείηηδ βζα αζεεκείξ ιε ηανηίκμ ημο πνμζηάηδ. Σμ βμκίδζμ βζα ηδκ PSP94 πνςηεΐκδ ανίζηεηαζ ζημ πνςιυζςια 10q11.2 ηαζ απμηεθείηαζ απυ 4 ελυκζα. Ακηίβναθα mrna ηδξ PSP94 έπμοκ ανεεεί ζε θοζζμθμβζημφξ ζζημφξ ημο πνμζηάηδ, ηδξ ακαπκεοζηζηήξ μδμφ (ηναπεία, ανυπμζ, πκεφιμκαξ) ηαζ ζημκ αθεκκμβυκμ ημο βαζηνζημφ άκηνμο ηαεχξ επίζδξ ηαζ ζηδκ ιήηνα, ημκ ιαζηυ ηαζ άθθμοξ ζζημφξ ημο εδθοημφ ακαπαναβςβζημφ ζοζηήιαημξ. Η ηοηηανζηή εκηυπζζδ ημο PSP94 (α-msp) mrna δζενεοκήεδηε ιε in situ οανζδζζιυ 5 δεζβιάηςκ θοζζμθμβζημφ ζζημφ πνμζηάηδ ηαζ έδεζλε ζζπονή έηθναζδ ζηα αδεκζηά ηαζ επζεδθζαηά ηφηηανα (εκημπζζιέκα ζηδκ ηοηηανμπθαζιαηζηή πενζμπή ηονίςξ δε ζηδκ πενζ-πονδκζηή πενζμπή) ιε απμοζία έηθναζδξ ζηα ααζζηά, ζηνςιαηζηά, εκδμεδθζαηά ηαζ αββεζαηά θεία ιοσηά ηφηηανα Έπεζ δεζπεεί υηζ οπάνπεζ ζοζπέηζζδ ιεηαλφ ηςκ επζπέδςκ ηδξ PSP94 ηαζ δζαθυνςκ ηφπςκ ηανηίκμο υπςξ μ ηανηίκμξ ημο εκδμιδηνίμο, NHL, μ ηανηίκμξ ημο πνμζηάηδ. Η πθεζμρδθία ηςκ ιεθεηχκ ζπεηζηά ιε ηδκ PSP94 ηαζ ημκ ηανηίκμ έπεζ επζηεκηνςεεί ζηδκ ζοζπέηζζδ ιεηαλφ PSP94 ηαζ ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ ηαζ έπεζ πνςηίζηςξ δεζπεεί υηζ δ ιείςζδ ηςκ επζπέδςκ ηδξ PSP94 ζπεηίγεηαζ ιε ηα πνμπςνδιέκα ζηάδζα ηδξ κυζμο. 17

18 Σα επίπεδα ηδξ πνςηεΐκδξ πμο έπμοκ ακαθενεεί βζα ημκ μνυ θοζζμθμβζηχκ αηυιςκ ηαζ αζεεκχκ ιε ηανηίκμ ημο πνμζηάηδ είκαζ 3,40 ng/ml ηαζ 2,60 ng/ml ακηζζημίπςξ. Οζ ακαθφζεζξ ακμζμσζημπδιείαξ δεζβιάηςκ αζμρίαξ ηανηζκζηχκ υβηςκ ημο πνμζηάηδ απυ 96 αζεεκείξ ιε πνμζηαηζηυ ηανηίκςια έδεζλακ εεηζηή PSP94 (α-msp) πνςηεσκζηή έηθναζδ ηαζ ςξ εη ημφημο ζδιακηζηά ηαθφηενδ πνυβκςζδ απυ υηζ δ ανκδηζηή PSP94 έηθναζδ. Β. Πεηξάκαηα in vitro θαη in vivo Πεζνάιαηα πμο πναβιαημπμζήεδηακ ηυζμ in vitro υζμ ηαζ in vivo απμδεζηκφμοκ πςξ δ PSP94 έπεζ επίδναζδ: ζηδκ ακάπηολδ ηαζ ηδκ πμθθαπθαζζαζηζηή ζηακυηδηα ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ζηδκ ζηακυηδηα ζπδιαηζζιμφ απμζηζχκ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ζηδκ ζηακυηδηα ζπδιαηζζιμφ απμζηζχκ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ζημκ απμπηςηζηυ εάκαημ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ζηδκ ακάπηολδ ημο υβημο ζε εκήθζηεξ ανμοναίμοξ ζηδκ ακάπηολδ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ in vivo ζηδκ ακάπηολδ πεζναιαηζηχκ ζηεθεηζηχκ ιεηαζηάζεςκ ζηδκ αφλδζδ ημο υβημο ζηα επίπεδα Ca ηαζ PTHrP πθάζιαημξ ζηδκ απυπηςζδ ηςκ ηοηηάνςκ ημο υβημο in vivo Β1) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ηελ αλάπηπμε θαη ηελ πνιιαπιαζηαζηηθή ηθαλόηεηα ηωλ PC3 θπηηάξωλ κε ρξνλν-εμαξηώκελν θαη δνζν-εμαξηώκελν ηξόπν οβηεηνζιέκα, ζηζξ 48 χνεξ, δ PSP94 ζε ζοβηέκηνςζδ 10 ιg/ml ακέζηεζθε ηδκ ηοηηανζηή αφλδζδ ηςκ PC3 πενίπμο ηαηά 20%,εκχ ζηζξ 72 χνεξ δ ζοβηέκηνςζδ 1 ιg/ml πενζυνζζε ηδκ ηοηηανζηή αφλδζδ ηαηά 20-30% ηαζ ηα 10 ιg/ml PSP94 ηαηά 60% πενίπμο (2) 18

19 Εικόνα 1. Η PSP94 ηαηαζηέθθεζ ηδκ ηοηηανζηή ακάπηολδ ηςκ PC3. Α.. Μεθέηδ ζημ πνυκμ Β. Μεθέηδ ακάθμβα ιε ηδ δμζμθμβία Β2) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ζηελ ηθαλόηεηα ζρεκαηηζκνύ απνηθηώλ ηωλ PC3 θπηηάξωλ κε ρξνλν-εμαξηώκελν θαη δνζν-εμαξηώκελν ηξόπν. Κφηηανα PC3, απμοζία ηδξ PSP94, ζπδιάηζζακ εονείεξ απμζηίεξ( >50 ηφηηανα) ζε πήηηςια agar Πανμοζία ηδξ PSP94 είπε ςξ απμηέθεζια ιυκμ ακχνζιεξ, ιζηνέξ απμζηίεξ. Η ιέηνδζδ ηςκ απμζηζχκ απμηάθορε υηζ δ PSP94 έπεζ ιζα ζζπονή ακαζηαθηζηή δνάζδ ζημ ζπδιαηζζιυ απμζηζχκ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ, ιε ηδ δυζδ ημο 1ug/ml PSP94 κα ηαηαζηέθθεζ ηαηά πενίπμο 90% ημ ζπδιαηζζιυ απμζηζχκ ζε πήηηςια agar. 19

20 Εικόνα 2. Η PSP94 ακαζηέθθεζ ηδκ ζηακυηδηα ζπδιαηζζιμφ απμζηζχκ ηςκ ηοηηάνςκ. PC3 Β3) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ζηνλ απνπηωηηθό ζάλαην ηωλ PC3 θπηηάξωλ (κνξθνινγηθή παξαηήξεζε) Πεζνάιαηα ζήιακζδξ ιε θεμνζζιυ έδεζλακ υηζ ηα ηφηηανα ιάνηονεξ ήηακ αζχζζια ιε ιζηνή ιυκμ απυπηςζδ (2). Δκχ ακηζεέηςξ, δ πθεζμρδθία ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ζηα μπμία πνμζηέεδηε PSP94 (10ιg/ml) ειθάκζζακ παναηηδνζζηζηά απυπηςζδξ υπςξ μζ ζοιποηκςιέκμζ ηαζ ηειαπζζιέκμζ πονήκεξ ηαεχξ ηαζ δ απχθεζα ηδξ αηεναζυηδηαξ ηδξ ιειανάκδξ, ιεηά απυ ζήιακζδ ημο ηοηηανμπθάζιαημξ αθθά ηαζ ημο πονήκα. Η παναηήνδζδ ιε ημ δθεηηνμκζηυ ιζηνμζηυπζμ απμηάθορε υηζ δ ιμνθμθμβία ηςκ ηφηηανςκ ιανηφνςκ ήηακ θοζζμθμβζηή. Χζηυζμ, πμθθά ηφηηανα ζηα μπμία πμνδβήεδηε δ PSP94 ειθάκζζακ ηοπζηά απμπηςηζηά παναηηδνζζηζηά υπςξ αολδιέκδ ηοηηανζηή ζοννίηκςζδ, δδιζμονβία αηακυκζζηςκ ηοηηανμπθαζιαηζηχκ πνμζεηαμθχκ ηαζ απμζπδιαηζζιέκα ιζημπυκδνζα, ηαεχξ ηαζ ηζξ παναηηδνζζηζηέξ ιεηααμθέξ δζακμοηθεμζςιαηζηή απμδυιδζδ ημο DNA, ηενιαηζζιυξ ημο 20

21 πονήκα ηαζ ημο ηοηηάνμο ηαζ ζπδιαηζζιυξ απμπηςηζηχκ ζςιαηίςκ. Σεθζηά, δμηζιέξ εναοζιαημπμίζδξ ημο DNA επζαεααίςζακ ηδκ απυπηςζδ ςξ ημκ ηφπμ ημο ηοηηανζημφ εακάημο. ηζξ 72 χνεξ ιεηά ηδκ πνμζεήηδ ηδξ PSP94 ηα PC3 ηφηηανα ειθάκζζακ αολδιέκδ εναοζιαημπμίδζδ, ζδίςξ δε ιε ηδ δυζδ ημο 1ιg/ml PSP94, ζε ακηίεεζδ ιε ηα ηφηηανα ιάνηονεξ. ηδ ζοκέπεζα ελεηάζηδηακ δφμ ζδιακηζηά ιυνζα πμο ζπεηίγμκηαζ ιε ηδκ απυπηςζδ, ηα Bcl-2 ηαζ Bax, ηαεχξ δ ακαθμβία αοηχκ ηςκ δφμ ηαεμνίγεζ ηδ ιμίνα ημο ηοηηάνμο. Η πμνήβδζδ 10ιg/ml PSP94 ζηα PC3 βζα 24 χνεξ, είπε ζακ απμηέθεζια ηδκ ηαηά 4 θμνέξ αφλδζδ ζηδκ έηθναζδ ημο Bax, ιζαξ πνμαπμπηςηζηήξ πνςηεΐκδξ 21 kda, υπςξ ηαεμνίζηδηε ιε ποηκμιεηνζηή ακάθοζδ. Ακηίεεηα, ημ Bcl-2 (26 kda), ιία ακηζ-απμπηςηζηή πνςηεΐκδ, δεκ ειθάκζζε αλζμζδιείςηεξ ιεηααμθέξ. Εικόνα 3. Ακάθοζδ ηδξ απυπηςζδξ ιε ιζηνμζημπία θεμνζζιμφ 21

22 Β4) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ζηελ αλάπηπμε ηνπ όγθνπ ζε ελήιηθεο επίκπεο Η ηαεδιενζκή πμνήβδζδ PSP94 (5ιg/kgζςιαηζημφ αάνμοξ) ζε εκήθζηεξ επίιοεξ F344 πμο έθενακ υβημοξ ιεηά απυ οπμδυνζμ εκμθεαθιζζιυ ηοηηάνςκ Dunning R3327G ηαηά ηδ δζάνηεζα ηδξ εηεεηζηήξ αφλδζδξ ημο υβημο, είπε ζακ απμηέθεζια ηδκ δναιαηζηή ηαεοζηένδζδ ζηδκ ακάπηολδ ημο υβημο, υπςξ απμηαθφθεδηε απυ ηδκ ηαεδιενζκή ιέηνδζδ ημο ιεβέεμοξ ημο. Χζηυζμ, ζηα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο (ζηα μπμία είπε εκεεεί θοζζμθμβζηυξ μνυξ) μζ υβημζ ακαπηφπεδηακ ηαπφηαηα ηαζ ιεηααθήεδηακ ζε κεηνςηζημφξ ιέζα ζε 10 ιένεξ. Σα ακηζπνμζςπεοηζηά αάνδ ηςκ υβηςκ βζα ηα γχα πμο ημοξ πμνδβήεδηε PSP94, ηαζ βζα ηζξ μιάδεξ ηςκ control ήηακ 2,66+-0,48 ηαζ 6,44+-1,19gr ακηίζημζπα. Έηζζ, παναηδνήεδηε ιζα ιέζδ ιείςζδ 58% ζημ αάνμξ ημο υβημο ιεηά απυ 10 διένεξ εεναπείαξ. Ιζημθμβζηέξ ημιέξ ηυζμ απυ υβημοξ ηςκ γχςκ ηδξ μιάδαξ εθέβπμο, υζμ ηαζ αοηχκ πμο έθααακ PSP94 ελεηάζηδηακ βζα πζεακέξ ζζημθμβζηέξ δζαθμνέξ ηαζ εκημπίζηδηακ πμθφ ιζηνέξ δζαθμνέξ ιεηαλφ ημοξ. Καζ ζημοξ δφμ θάκδηε θηςπή ιμνθμθμβζηή δζαθμνμπμίδζδ. ΗΜΔΡΔ ΘΔΡΑΠΔΙΑ Εικόνα 4. Καηαζημθή ηδξ αφλδζδξ ημο υβημο ιε πμνήβδζδ PSP94 Β5 ) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ζηελ αλάπηπμε ηωλ PC3 θπηηάξωλ in vivo Πνμηεζιέκμο κα εθεβπεεί εάκ ηαζ ηαηά πυζμ δ PSP94 εα ιπμνμφζε κα έπεζ πανυιμζεξ ακαζηαθηζηέξ επζδνάζεζξ ζηδκ αφλδζδ ημο υβημο in vivo, εκέεδηακ οπμδυνζα 5ιg/kg ζςιαηζημφ αάνμοξ ζε αεοιζημφξ nude ιφεξ ιε ειθοηεοιέκα ηανηζκζηά ηφηηανα PC3 βζα 34 22

23 διένεξ ηαζ ημ ιέβεεμξ ημο υβημο (vernier caliper) ηαηαβναθυηακ 2 θμνέξ ηδκ εαδμιάδα. Η PSP94 ζηδκ παναπάκς δυζδ ακέζηεζθε ζδιακηζηά (ηαηά 50-60%) ηδκ ακάπηολδ ημο υβημο. Εικόνα 5. Η PSP94 ηαηαζηέθθεζ ηδκ αφλδζδ/ακάπηολδ ημο υβημο ιεηά ηδκ ειθφηεοζδ ηςκ PC3 ηοηηάνςκ ζε αεοιζηά Β6) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ζηελ αλάπηπμε πεηξακαηηθώλ ζθειεηηθώλ κεηαζηάζεωλ Κφηηανα MatLyLu-PTHrP (ημ πεπηίδζμ πμο ζπεηίγεηαζ ιε ηδκ παναεμνιυκδ =(Parathyroid hormone related peptide-pthrp είκαζ ιία πνςηεΐκδ πμο πανάβεηαζ απυ υβημοξ ηαζ δ μπμία ιπμνεί κα μδδβήζεζ ζε οπεναζαεζηζαζιία) εκμθεαθιίζηδηακ ζε ανζεκζημφξ επίιοεξ Κμπεβπάβδξ ιε εκδμηανδζαηή έβποζδ ζηδκ ανζζηενή ημζθία. Με αθεηδνία ηδκ διένα εκμθεαθιζζιμφ ηςκ ηανηζκζηχκ ηοηηάνςκ (διένα 0), δυεδηακ ζηα γχα δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ PSP94 (0,1-10ιg/kg/day) εκδμπενζημκασηά. Η επίδναζδ ηδξ PSP94 ζηδκ ηαεοζηένδζδ ηδξ ακάπηολδξ πεζναιαηζηχκ ζηεθεηζηχκ ιεηαζηάζεςκ απμηζιήεδηε ιε ηδκ ηαεδιενζκή παναηήνδζδ ηςκ γχςκ βζα ηδκ ακάπηολδ πανάθοζδξ ημο μπζζείμο άηνμο. Όθα ηα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο(100%) πμο εκμθεαθιίζηδηακ ιε MatLyLu-PTHrP ηφηηανα ηαζ έθααακ ιυκμ νοειζζηζηυ δζάθοια, ακέπηολακ πανάθοζδ ημο μπζζείμο άηνμο ιέπνζ ηδκ 13 δ ιένα. H εεναπεία ιε 10ιg/kg/day PSP94 είπε ςξ απμηέθεζια ιζα ιέηνζα αθθά ζηαηζζηζηά ζδιακηζηή ηαεοζηένδζδ ζηδκ ακάπηολδ πανάθοζδξ ημο μπζζείμο άηνμο. 23

24 Β7) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ζηελ αύμεζε ηνπ όγθνπ Ανζεκζημί επίιοεξ Κμπεβπάβδξ εκμθεαθιίζηδηακ ιε ηφηηανα MatLyLu-PTHrP, ιέζς οπμδυνζαξ έβποζδξ ζηα δελζά πθεονά. Με αθεηδνία ηδκ διένα εκμθεαθιζζιμφ ηςκ ηανηζκζηχκ ηοηηάνςκ, εβπφεδηακ οπμδυνζα ζηα γχα ηαζ ηάης απυ ημ ζδιείμ εκμθεαθιζζιμφ ηςκ ηανηζκζηχκ ηοηηάνςκ δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ PSP94 (0,1-10ιg/kg/day) βζα πενζζζυηενμ απυ 15 ιένεξ. Η επίδναζδ ηδξ PSP94 ζηδκ ιείςζδ ηδξ ακάπηολδξ ημο υβημο απμηζιήεδηε ιε ημκ ηαεδιενζκυ πνμζδζμνζζιυ ημο ιεβέεμοξ ημο υβημο ζε ζφβηνζζδ ιε ηα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο πμο έθενακ υβημοξ ηαζ έθααακ ιυκμ νοειζζηζηυ δζάθοια. Σα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο έδεζλακ ιζα πνμμδεοηζηή αφλδζδ ζημ ιέβεεμξ ημο υβημο ηαηά ηδ δζάνηεζα ηδξ ιεθέηδξ. Ακηίεεηα, ηα γχα ημο πεζνάιαημξ πμο έθααακ PSP94 έδεζλακ ιζα αλζμζδιείςηδ δμζμελανηχιεκδ ιείςζδ ζημ ιέβεεμξ ημο υβημο ηαηά ηδ δζάνηεζα ηδξ ιεθέηδξ (εζηυκα). Καζ μζ δφμ μιάδεξ γχςκ (control ηαζ γχα πεζνάιαημξ) ηέεδηακ οπυ παναηήνδζδ βζα μπμζαδήπμηε αλζμζδιείςηδ πανεκένβεζα ή ηαπελία. Όθα ηα γχα γοβίζηδηακ ζε πνμκζηά δζαζηήιαηα ηαηά ηδ δζάνηεζα ηδξ ιεθέηδξ ηαζ παναηδνήεδηε ζδιακηζηά ζηαηζζηζηή δζαθμνά ζημ ζςιαηζηυ αάνμξ ηςκ γχςκ ιεηαλφ γχςκ control ηαζ γχςκ ημο πεζνάιαημξ πμο έθααακ ηδκ ορδθυηενδ δυζδ ηδξ PSP94 ζηζξ ιένεξ 14 ηαζ 16. Χζηυζμ, απυ ηδ ζηζβιή πμο ημ αάνμξ ημο υβημο αθαζνέεδηε απυ ημ ζςιαηζηυ αάνμξ ημο γχμο, ζημ ηέθμξ αοηχκ ηςκ ιεθεηχκ ηδκ διένα 16 δεκ παναηδνήεδηε ηαιία ζδιακηζηή δζαθμνά ζημ αάνμξ ηςκ γχςκ ιεηαλφ control ηαζ γχςκ πεζνάιαημξ πμο κα ιπμνεί κα απμδμεεί ζε μπμζαδήπμηε δοκδηζηή πανεκένβεζα ηδξ εεναπείαξ ιε PSP94. 24

25 Εικόνα 6: Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζημ ιέβεεμξ ηαζ αάνμξ υβηςκ Ly Lu-PTHrP Β8) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ζηα επίπεδα Ca θαη PTHrP πιάζκαηνο Πνμηεζιέκμο κα πνμζδζμνζζηεί δ επίδναζδ ηδξ PSP94 ζηα επίπεδα αζαεζηίμο ηαζ παναεμνιυκδξ ημο πθάζιαημξ, ηφηηανα MatLyLu-PTHrP εκμθεαθιίζηδηακ οπμδμνίςξ ζε γχα, ηα μπμία εακαηχεδηακ ζημ ηέθμξ ηδξ ιεθέηδξ, ζοθθέπηδηε ημ πθάζια ημοξ ηαζ ηα επίπεδα ηδξ PTHrP ακαθφεδηακ πνδζζιμπμζχκηαξ ακμζμδμηζιέξ. Η ζφβηνζζδ πναβιαημπμζήεδηε ιεηαλφ πθάζιαημξ πμο ζοθθέπηδηε απυ θοζζμθμβζηά, γχα πμο δεκ έθενακ υβημοξ, γχα control πμο έθενακ υβημοξ ηαζ έθααακ ιυκμ νοειζζηζηυ δζάθοια ηαζ γχα ημο πεζνάιαημξ πμο έθααακ δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ PSP94 (0,1-10ιg/kg/day). Σα θοζζμθμβζηά γχα πμο δεκ έθενακ υβημοξ ειθάκζζακ ηα ααζζηά επίπεδα PTHrP πθάζιαημξ εκχ ηα γχα πμο 25

26 εκμθεαθιίζηδηακ ιε MatLyLu-PTHrP ηφηηανα θαιαάκμκηαξ ιυκμ νοειζζηζηυ δζάθοια έδεζλακ αλζμζδιείςηα ακεααζιέκα επίπεδα PTHrP ζημ πθάζια. Η εεναπεία γχςκ πμο έθενακ υβημοξ ιε PSP94 είπε ςξ απμηέθεζια ηδκ δμζμελανηχιεκδ ιείςζδ ηςκ επζπέδςκ PTHrP ζημ πθάζια (εζηυκα). Η ακάθοζδ ημο πθάζιαημξ πμο ζοθθέπηδηε απυ θοζζμθμβζηά γχα πμο δεκ έθενακ υβημοξ ηαεχξ ηαζ απυ γχα πμο έθενακ υβημοξ ηαζ έθααακ ιυκμ νοειζζηζηυ δζάθοια απμηάθορε ιζα αλζμζδιείςηδ αφλδζδ ζηα επίπεδα αζαεζηίμο ημο πθάζιαημξ ηςκ γχςκ ηδξ μιάδαξ εθέβπμο πμο έθενακ υβημοξ ηδκ ζηζβιή ηδξ εακάηςζδξ ηδκ 16 δ ιένα ιεηά ημκ εκμθεαθιζζιυ ιε ηα ηφηηανα ημο υβημο. Ακηίεεηα, μζ πεζναιαηζηέξ μιάδεξ ηςκ γχςκ πμο έθααακ δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ PSP94 ειθάκζζακ ζδιακηζηή ιείςζδ ζηα επίπεδα Ca ημο πθάζιαημξ. Η ορδθυηενδ δυζδ PSP94 (10ιg/kg/day) είπε ςξ απμηέθεζια ηδκ ελζζμννυπδζδ ηςκ επζπέδςκ Ca ημο πθάζιαημξ αοηήξ ηδξ πεζναιαηζηήξ μιάδαξ ηςκ γχςκ. Εικόνα 7. Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζηα επίπεδα PTHrP πθάζιαημξ ηαζ ζημ αζαέζηζμ ζε γχα ζηα μπμία ακαπηφζζμκηαζ υβημζ 26

27 Β9) Δπίδξαζε ηεο PSP94 ζηελ απόπηωζε ηωλ θπηηάξωλ ηνπ όγθνπ in vivo Ο ααειυξ ημο ηαηαηενιαηζζιμφ ημο DNA ακαθφεδηε επίζδξ in vivo ιε ηδ πνήζδ ηδξ δμηζιήξ TUNNEL, δ μπμία ιπμνεί κα πνδζζιμπμζδεεί ςξ δείηηδξ ηδξ απυπηςζδξ. Σμιέξ ημο υβημο πμο ημοξ πμνδβήεδηε PSP94 (10ιg/kg/day) ήηακ ζδιακηζηά πενζζζυηενμ TUNNEL εεηζηέξ ζε ζφβηνζζδ ιε υβημοξ-control ζημοξ μπμίμοξ είπε πμνδβδεεί ιυκμ νοειζζηζηυ δζάθοια (εζηυκα 8) Εικόνα 8: Δπίδναζδ ηδξ PSP94 ζημκ ηαηαηενιαηζζιυ ημο DNA MatLyLu-PTHrP ηοηηάνςκ in vitro ηαζ in vivo Μέηνδζδ ιε πνςζηζηή Hoechst απμηάθορε ηδκ πανμοζία απμπηςηζηχκ ζςιαηζδίςκ ζηζξ ζζημθμβζηέξ ημιέξ απυ γχα πμο ημοξ πμνδβήεδηε PSP94. Δπζπθέμκ, ζε υβημοξ πμο πμνδβήεδηε PSP94 παναηδνήεδηε ζοιποηκςιέκδ πνςιαηίκδ, παναηηδνζζηζηή ηςκ απμπηςηζηχκ ηοηηάνςκ. Όβημζ ζημοξ μπμίμοξ πμνδβήεδηε δζαθφηδξ (vehicle) επέδεζλακ θοζζμθμβζηή πνχζδ ημο DNA. Απυ ηα ακςηένς εονήιαηα ηαηαδεζηκφεηαζ υηζ δ ιείςζδ ημο ιεβέεμοξ ημο υβημο ιεηά απυ εεναπεία ιε PSP94 μθείθεηαζ πνάβιαηζ ζηδκ ζηακυηδηα ηδξ κα πνμάβεζ ηδκ απυπηςζδ ηςκ ηοηηάνςκ ημο υβημο. Σα δεδμιέκα ηςκ ακαζηαθηζηχκ επζδνάζεςκ ηδξ ακαζοκδοαζιέκδξ (recombinant) rpsp94 ζηδκ αφλδζδ ημο υβημο in vivo ενιδκεφηδηακ ιέζς ηδξ ιέηνδζδξ ημο ιεβέεμοξ ηςκ MatLyLu ηοηηάνςκ. 27

28 Εικόνα 9: Α) Γμηζιή ακηαβςκζζιμφ ιειανάκδξ Β) ακαζημθή ακάπηολδξ ημο υβημο ιε rpsp94 ζε ανζεκζημφξ ανμοναίμοξ Κμπεβπάβδξ πμο εκμθεαθιίζηδηακ ιε ηφηηανα Mat LyLu Σα απμηεθέζιαηα αοηήξ ηδξ ιεθέηδξ ηαηέδεζλακ υηζ ηα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο ειθάκζζακ πνμμδεοηζηή αφλδζδ ημο ιεβέεμοξ ημο υβημο ηαηά ηδ δζάνηεζα δζελαβςβήξ ημο πεζνάιαημξ. Ακηζεέηςξ, ηα γχα πμο έθααακ ακαζοκδοαζιέκδ rpsp94 ηαζ δμλμνμοαζηίκδ έδεζλακ αλζμζδιείςηδ ιείςζδ ημο ιεβέεμοξ ημο υβημο. Τπήνλε 39% ηαζ 41% ακαζημθή ηδξ αφλδζδξ ημο υβημο ζηζξ μιάδεξ πμο έθααακ 10 ηαζ 100 ιg/kg/ διένα rpsp94 ακηίζημζπα, ζηαηζζηζηά ζδιακηζηή δζαθμνά ζε ζπέζδ ιε ηδκ μιάδα εθέβπμο. Χζηυζμ, δεκ παναηδνήεδηε αλζμζδιείςηδ δζαθμνά ιε ηδ δμζμελανηχιεκδ ακαζημθή ηδξ αφλδζδξ ζηδ εεναπεοηζηή μιάδα πμο έθααε rpsp94. Πανυθα αοηά, δ μιάδα πμο έθααε ηδ δμλμνμοαζηίκδ ειθάκζζε πενίπμο 64% ακαζημθή ηδξ αφλδζδξ ζε ζπέζδ ιε ηα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο. 28

29 Γ. To ζπλζεηηθό πεπηίδην PCK3145 Η εηηεκήξ αζαθζμβναθζηή ακαζηυπδζδ ακαδεζηκφεζ υηζ απυ ηζξ 12 αιζκμλζηέξ αθθδθμοπίεξ ηδξ PSP94 πμο ιεθεηήεδηακ, δ αθθδθμοπία αιζκμλέςκ ηδξ PSP-94 ειθάκζγε πανυιμζεξ in vitro ηαζ in vivo ζδζυηδηεξ ιε εηείκεξ ηδξ PSP-94. Σμ πεπηίδζμ απμδείπηδηε ζηακυ υπζ ιυκμ κα πενζμνίγεζ ηδκ αφλδζδ ημο υβημο ηαζ ηζξ πεζναιαηζηέξ ζηεθεηζηέξ ιεηαζηάζεζξ, αθθά επζπθέμκ κα ιεζχκεζ ηζξ αζμπδιζηέξ παναιέηνμοξ ημο ηεθζημφ ζηαδίμο ηανηίκμο ημο πνμζηάηδ, βεβμκυξ πμο πανέπεζ ηδ δοκαηυηδηα κα παναημθμοεείηαζ δ απμηεθεζιαηζηυηδηα ημο ζοβηεηνζιέκμο εεναπεοηζημφ πανάβμκηα ζε δζάθμνεξ πνμκζηέξ ζηζβιέξ. Εικόνα 10: Σμ πεπηίδζμ PCK3145 ήηακ ημ ιυκμ ιεηαλφ 12 δζαθμνεηζηχκ πμο ιεθεηήεδηακ, ημ μπμίμ ειθάκζγε πανυιμζεξ ζδζυηδηεξ ιε ηδκ PSP-94 29

30 Γ1) Δπίδξαζε ηωλ PCK721, PCK3145 θαη PCK7694 ζηελ αύμεζε θαη ηε κνξθνινγία ηωλ MatLyLu-PTHrP θπηηάξωλ Kφηηανα MatLyLu-PTHrP ηαθθζενβήεδηακ ζε πθάηεξ 6 ηεθίςκ ηαζ πμνδβήεδηακ είηε δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ (1-100ιg/ml) PCK721, PCK3145 ή PCK7694 είηε ιυκμ δζαθφηδξ (νοειζζηζηυ δζάθοια) βζα πενζζζυηενμ απυ 5 διένεξ. Καιία δυζδ ηςκ PCK721 ηαζ PCK7694 δεκ ειθάκζζε επίδναζδ ζηδ ιεηααμθή ηδξ ηοηηανζηήξ αφλδζδξ ηςκ MatLyLu-PTHrP ηοηηάνςκ. Η εεναπεία ιε PCK3145 είπε ςξ απμηέθεζια ιζα δμζμελανηχιεκδ ιείςζδ ζηδκ ηοηηανζηή αφλδζδ ιε ηδ ιεβαθφηενδ δυζδ (100ιg/ml) κα επζθένεζ ζδιακηζηή ιείςζδ ζημκ ανζειυ ηςκ ηοηηάνςκ ζε ζφβηνζζδ ιε ηα ηφηηανα MatLyLu-PTHrP ζηα μπμία πμνδβήεδηε ιυκμ νοειζζηζηυ δζάθοια. Δπζπνυζεεηα, ηα ηφηηανα MatLyLu-PTHrP ζηα μπμία πμνδβήεδηακ 100ιg/ml PCK3145 επέδεζλακ αθθαβή ηδξ ιμνθμθμβίαξ ημοξ απυ ιζα αηναηημεζδή ειθάκζζδ ζε ιζα πενζζζυηενμ ηοηθζηή ηαζ ζοιποηκςιέκδ (ηα δεδμιέκα δεκ πανμοζζάζηδηακ) (3) Γ2) Δπίδξαζε ηωλ PCK721, PCK3145 θαη PCK7694 ζηελ αύμεζε ηνπ όγθνπ ε ανζεκζημφξ ανμοναίμοξ Κμπεβπάβδξ εκέεδηακ οπμδμνίςξ ζηδ δελζά πθεονζηή πενζμπή ηφηηανα MatLyLu-PTHrP ηαζ εκ ζοκεπεία εκέεδηακ οπμδμνίςξ ηάης απυ ημ ζδιείμ εκμθεαθιζζιμφ, δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ (1-100 ιg/kg/day) πεπηζδίςκ-παναβχβςκ ηδξ PSP94 ιε αθεηδνία ηδκ διένα εκμθεαθιζζιμφ ηςκ ηοηηάνςκ ημο υβημο ηαζ βζα 15 διένεξ (3).Η επίδναζδ αοηχκ ηςκ πεπηζδίςκ ζημκ πενζμνζζιυ ηδξ αφλδζδξ ημο υβημο απμηζιήεδηε ιε ηαεδιενζκυ πνμζδζμνζζιυ ημο ιεβέεμοξ ημο υβημο ηαζ δ ζφβηνζζδ πναβιαημπμζήεδηε ιε ηα γχα πμο ακήηακ ζηδκ μιάδα εθέβπμο ηαζ ηα μπμία έθενακ υβημοξ ηαζ έθααακ ιυκμ δζαθφηδ (νοειζζηζηυ δζάθοια). ηα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο παναηδνήεδηε ιζα πνμμδεοηζηή αφλδζδ ζημ ιέβεεμξ ημο υβημο ηαηά ηδ δζάνηεζα αοηχκ ηςκ ιεθεηχκ. Κακέκα απυ ηα δφμ πεπηίδζα, PCK721 ηαζ PCK7694, δεκ επέδεζλε μπμζαδήπμηε ιεηααμθή ζημ ιέβεεμξ ημο υβημο. Ακηζεέηςξ, ηα γχα ημο πεζνάιαημξ πμο έθααακ PCK3145 επέδεζλακ ιζα ζδιακηζηή δμζμελανηχιεκδ ιείςζδ ζημ ιέβεεμξ ημο υβημο ηαηά ηδ δζάνηεζα αοηχκ ηςκ ιεθεηχκ. Αοηέξ μζ επζδνάζεζξ ημο PCK3145 οπήνλακ πανυιμζεξ ιε εηείκεξ ηδξ PSP94 πμο ακαθένεδηακ 30

31 πνμδβμφιεκα. Σα γχα γοβίζηδηακ πνμηεζιέκμο κα ηαεμνζζημφκ μζ πανεκένβεζεξ ηδξ πμνήβδζδξ ημο PCK3145. Καιία ζδιακηζηή δζαθμνά δεκ παναηδνήεδηε ζημ αάνμξ ηςκ γχςκ πμο κα ιπμνεί κα απμδμεεί ζε μπμζαδήπμηε πανεκένβεζα θυβς πνυζθδρδξ ημο PCK3145. Πνμηεζιέκμο κα ηαεμνζζηεί δ επίδναζδ ημο PCK3145 ζημ αάνμξ ημο υβημο, ηα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο ηαεχξ ηαζ ηα γχα ημο πεζνάιαημξ πμο έθααακ PCK3145 εακαηχεδηακ ζημ ηέθμξ ηδξ ιεθέηδξ (διένα 16) ηαζ μζ υβημζ ημοξ αθαζνέεδηακ ηαζ γοβίζηδηακ. Η εεναπεία ιε ηζξ δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ PCK3145 είπε ςξ απμηέθεζια ιζα δμζμελανηχιεκδ ιείςζδ ζημ αάνμξ ημο υβημο ζε ζφβηνζζδ ιε ημοξ υβημοξ πμο αθαζνέεδηακ απυ γχα πμο έθααακ ιυκμ δζαθφηδ (νοειζζηζηυ δζάθοια-μιάδα εθέβπμο) Εικόνα 11.Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζημ ιέβεεμξ ηαζ ημ αάνμξ ημο υβημο Γ3) Δπίδξαζε ηνπ PCK3145 ζηελ αλάπηπμε πεηξακαηηθώλ ζθειεηηθώλ κεηαζηάζεωλ ε ανζεκζημφξ επίιοεξ Κμπεβπάβδξ εκμθεαθιίζηδηακ MatLyLu-PTHrP ηφηηανα ζηδκ ανζζηενή ημζθία ιέζς εκδμηανδζαηήξ έβποζδξ (3). Με αθεηδνία ηδκ διένα εκμθεαθιζζιμφ ηςκ ηανηζκζηχκ ηοηηάνςκ (ηοηηάνςκ ημο υβημο) (διένα 0), ηα γχα ημο πεζνάιαημξ έθααακ δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ PCK3145 (1-100ιg/kg/day) ιέζς ηδξ εκδμπενζημκασηήξ μδμφ. Πνμηεζιέκμο κα απμηζιδεεί δ επίδναζδ ημο PCK3145 ζηδκ ηαεοζηένδζδ ηδξ ακάπηολδξ πεζναιαηζηχκ ζηεθεηζηχκ ιεηαζηάζεςκ, ηα γχα ηέεδηακ οπυ ηαεδιενζκή παναηήνδζδ βζα ηδκ ακάπηολδ πανάθοζδξ ημο μπζζείμο άηνμο. ε υθα ηα γχα (100%) control εκμθεαθιίζηδηακ MatLyLu-PTHrP ηφηηανα ηαζ θαιαάκμκηαξ ιυκμ δζαθφηδξ (νοειζζηζηυ δζάθοια) ακέπηολακ πανάθοζδ μπζζείμο άηνμο έςξ ηδκ 13 δ ιένα. Η εεναπεία ιε 1 ηαζ 10ιg/kg/day PCK3145 δεκ 31

32 έδεζλε ζηαηζζηζηά ζδιακηζηή επίδναζδ ζηδκ ηαεοζηένδζδ ημο πνμκζημφ ζδιείμο ακάπηολδξ πανάθοζδξ ημο μπζζείμο άηνμο. Ακηίεεηα, δ εεναπεία ιε 100ιg/kg/day PCK3145 ηαζ 10ιg/kg/day PSP94 είπε ςξ απμηέθεζια ιζα ζηαηζζηζηά ζδιακηζηή ηαεοζηένδζδ ζημκ ανζειυ ηςκ γχςκ πμο ακέπηολακ πανάθοζδ ημο μπζζείμο άηνμο. Σμ πμζμζηυ ημο ζοκμθζημφ ανζειμφ ηςκ γχςκ πμο δεκ ακέπηολακ πανάθοζδ μπίζεζμο άηνμο ζε δζαθμνεηζηέξ ιένεξ θαίκεηαζ ζηδκ εζηυκα. Εικόνα 12.Δπίδναζδ ηςκ PSP-94 ηαζ PCK3145 ζε πεζναιαηζηέξ ζηεθεηζηέξ ιεηαζηάζεζξ Γ4) Δπίδξαζε ηνπ PCK3145 ζην βάξνο ηνπ όγθνπ Πνμηεζιέκμο κα ηαεμνζζηεί δ επίδναζδ ημο PCK3145 ζημ αάνμξ ημο υβημο, γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο ηαζ γχα ημο πεζνάιαημξ εακαηχεδηακ ηδκ 10 δ ιένα ιεηά ημκ εκμθεαθιζζιυ ηανηζκζηχκ ηοηηάνςκ, υηακ ηα γχα αοηά δεκ είπακ αηυιδ ειθακίζεζ ηακέκα ζφιπηςια πανάθοζδξ ημο μπζζείμο άηνμο (3). πυκδοθμζ απυ γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο ηαζ γχα ηδξ μιάδαξ πανέιααζδξ απμιαηνφκεδηακ, απαζαεζηχεδηακ ηαζ οπμαθήεδηακ ζε ζζημιμνθμιεηνζηή ακάθοζδ μζημφ. Παναηδνήεδηε ζδιακηζηή ιείςζδ ζηδκ ακαθμβία κέγεζνο όγθνπ: κέγεζνο νζηνύ ζηα γχα ημο πεζνάιαημξ πμο έθααακ 100 ιg/kg PCK3145. ημοξ ζπμκδφθμοξ ηςκ γχςκ ηδξ μιάδαξ εθέβπμο οπήνλακ λεηάεανα εονήιαηα ηαηαζηνμθήξ ηυζμ 32

33 ηδξ ιοεθχδμοξ υζμ ηαζ ηδξ θθμζχδμοξ ιμίναξ, πμο είπακ ςξ ζοκέπεζα ηδκ ζοιπίεζδ ημο κςηζαίμο ιοεθμφ ηαζ ςξ επαηυθμοεμ ηδκ πανάθοζδ ημο μπζζείμο άηνμο ζε επυιεκα πνμκζηά ζδιεία. Ακηζεέηςξ, αοηέξ μζ επζδνάζεζξ ήηακ ζδιακηζηά πενζμνζζιέκεξ ζηα γχα ημο πεζνάιαημξ πμο έθααακ PCK3145. Αοημί μζ ζπυκδοθμζ απμηζιήεδηακ επίζδξ βζα ημ επίπεδμ έηθναζδξ ηδξ PTHrP ιε ακμζμσζημπδιζηή ακάθοζδ πνδζζιμπμζχκηαξ έκα ακηζ-ακηίζςια PTHrP. Οζ ζπυκδοθμζ απυ ηα γχα ηδξ μιάδαξ εθέβπμο πμο έθααακ ιυκμ δζαθφηδξ (νοειζζηζηυ δζάθοια) επέδεζλακ ζζπονή πνχζδ ηδξ PTHrP πμο ήηακ ζδιακηζηά παιδθυηενδ ζηα MatLyLu- PTHrP ηφηηανα ζηδ ζπμκδοθζηή ζηήθδ γχςκ πμο ημοξ πμνδβήεδηακ 100 ιg/kg PCK3145. Εικόνα 13: Δπίδναζδ ηδξ εεναπείαξ ιε PCK3145 ζημ ααειυ ζηεθεηζηχκ ιεηαζηάζεςκ Δπίδναζδ ηδξ εεναπείαξ ιε PCK3145 ζηδκ παναβςβή PTHrP ζηζξ πεζναιαηζηέξ ζηεθεηζηέξ ιεηαζηάζεζξ Γ5) Δπίδξαζε ηνπ PCK3145 ζηα επίπεδα παξαζνξκόλεο θαη αζβεζηίνπ ηνπ πιάζκαηνο Πνμηεζιέκμο κα πνμζδζμνζζηεί δ επίδναζδ ημο PCK3145 ζηα επίπεδα παναεμνιυκδξ ηαζ αζαεζηίμο ζημ πθάζια, γχα εκμθεαθιίζηδηακ οπμδμνίςξ ιε MatLyLu-PTHrP ηαζ 33

34 εακαηχεδηακ ζημ ηέθμξ ηςκ ιεθεηχκ, ζοθθέπηδηε ημ πθάζια ηαζ ηα επίπεδα PTHrP ακαθφεδηακ ιε ηδ πνήζδ ακμζμδμηζιχκ (3). Η ζφβηνζζδ πναβιαημπμζήεδηε ιεηαλφ πθάζιαημξ πμο ζοθθέπηδηε απυ θοζζμθμβζηά γχα, πμο δεκ έθενακ υβημοξ, γχα control πμο έθενακ υβημοξ ηαζ έθααακ ιυκμ δζαθφηδ (νοειζζηζηυ δζάθοια)ηαζ γχα ημο πεζνάιαημξ πμο έθααακ δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ PCK3145 (1-100ιg/kg/day). Φοζζμθμβζηά γχα πμο δεκ έθενακ υβημοξ ειθάκζζακ ααζζηά επίπεδα PTHrP ζημ πθάζια, εκχ γχα ζηα μπμία εκμθεαθιίζηδηακ ηφηηανα MatLyLu-PTHrP ηαζ έθααακ ιυκμ δζαθφηδ (νοειζζηζηυ δζάθοια) ειθάκζζακ αλζμζδιείςηα αολδιέκα επίπεδα PTHrP πθάζιαημξ. Η εεναπεία γχςκ πμο έθενακ υβημοξ ιε 10 ηαζ 100ιg/kg/day PCK3145 είπε ςξ απμηέθεζια ιζα δμζμελανηχιεκδ ιείςζδ ζηα επίπεδα PTHrP ημο πθάζιαημξ. Εικόνα 14.Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζηα επίπεδα PTHrP ημο πθάζιαημξ ζε γχα πμο ακέπηολακ υβημοξ Εικόνα 15.Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζηδκ παναβςβή PTHrP απυ Mat Ly Lu-PTHrP υβημοξ 34

35 Η ακάθοζδ πθάζιαημξ πμο ζοθθέπηδηε απυ θοζζμθμβζηά γχα πμο δεκ έθενακ υβημοξ, γχα control πμο έθενακ υβημοξ ηαζ έθααακ ιυκμ δζαθφηδ (νοειζζηζηυ δζάθοια) απμηάθορε ηδκ οπεναζαεζηζαζιζηή θφζδ ηςκ γχςκ control πμο έθενακ υβημοξ ηαηά ηδ εακάηςζή ημοξ ηδκ 16 δ ιένα ιεηά ημκ εκμθεαθιζζιυ ηανηζκζηχκ ηοηηάνςκ ελαζηίαξ ιζαξ αλζμζδιείςηδξ αφλδζδξ ζηα επίπεδα αζαεζηίμο ημο πθάζιαημξ. Ακηίεεηα, μζ μιάδεξ πεζναιαηυγςςκ πμο έθααακ 10 ηαζ 100ιg/kg/day PCK3145 επέδεζλακ ιζα ζδιακηζηή ιείςζδ ζηα επίπεδα Ca ημο πθάζιαημξ. Η εεναπεία ιε 100ιg/kg/day PCK3145 επακέθενε ηα επίπεδα Ca ημο πθάζιαημξ ζε ηακμκζηά επίπεδα βζα ηα γχα αοηήξ ηδξ μιάδαξ. Εικόνα 16. Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζημ αζαέζηζμ ημο πθάζιαημξ ζε γχα πμο ακέπηολακ υβημοξ Γ6) Δπίδξαζε ηνπ PCK3145 ζηνλ ζάλαην ηνπ όγθνπ Πνμηεζιέκμο κα δζενεοκδεεί έκαξ οθένπςκ ιμνζαηυξ ιδπακζζιυξ δνάζδξ ημο PCK3145 ζημκ πενζμνζζιυ ηδξ αφλδζδξ ημο υβημο, MatLyLu-PTHrP υβημζ ακαθφεδηακ ιε δμηζιή TUNEL, δ μπμία ιπμνεί κα πνδζζιμπμζδεεί ςξ δείηηδξ απυπηςζδξ (3). Σμιέξ υβηςκ απυ γχα πμο ημοξ πμνδβήεδηε PCK3145 ζε δυζδ 100ιg/kg/day οπήνλακ ζδιακηζηά πενζζζυηενμ TUNEL εεηζηέξ ζε ζφβηνζζδ ιε υβημοξ απυ γχα πμο ημοξ πμνδβήεδηε ιυκμ 35

36 δζαθφηδξ (νοειζζηζηυ δζάθοια). Μέηνδζδ ιε πνςζηζηή Hoechst απεηάθορε ηδκ πανμοζία απμπηςηζηχκ ζςιάηςκ ζε ημιέξ ζζηχκ πεζναιαημγχςκ πμο έθααακ PCK3145. Εικόνα 17.Δπίδναζδ ημο PCK3145 ζηδ DNA ηαηαηενιαηζζιυ Mat Ly Lu-PTHrP ηοηηάνςκ in vivo Μμθμκυηζ ημ PCK3145 απμδείπηδηε πμθφ απμηεθεζιαηζηυ ιυνζμ, δ πδιζηή ιεηαηνμπή ημο ζοβηεηνζιέκμο πεπηζδίμο πμο εα πενζεθάιαακε ηδ ζφγεολδ ιε πμθοαζεοθεκζηή βθοηυθδ εεςνήεδηε υηζ εα ιπμνμφζε κα πενζμνίζεζ ηδκ πνςηευθοζδ, κα αεθηζχζεζ ηζξ θανιαημηζκδηζηέξ παναιέηνμοξ αολάκμκηαξ ημ πνυκμ διζγςήξ ηαζ ααζζηά κα εκζζπφζεζ ηδ αζμθμβζηή ημο δνάζδ (4-6). Δπζπνυζεεηα, μ ζοκδοαζιυξ ημο PCK3145 ιε πδιεζμεεναπεοηζημφξ πανάβμκηεξ ζε δζαθμνεηζηέξ δυζεζξ ηαζ πνυκμοξ εα ιπμνμφζε κα δχζεζ επζπνυζεεηδ ή ζοκενβζηή ακηζηανηζκζηή δνάζδ ηαζ κα ελεθίλεζ ηζξ οπάνπμοζεξ εεναπείεξ βζα ημκ ηεθζημφ ζηαδίμο μνιμκμ-ακελάνηδημ ηανηίκμ ιεζχκμκηαξ ηδ κμζδνυηδηα ηαζ ηδ εκδζζιυηδηα ηςκ ακδνχκ. 36

37 Πίνακαρ 1.Ο πνυκμξ διζγςήξ ημο PCK3145 ζηα δζάθμνα γςζηά πνυηοπα Μύερ iv 10 και 100 μg/kg Αποςπαίοι iv 1000, 2000, 4000 µg/kg Αποςπαίοι sc 4000 μg/kg Ππυηεύονηα iv 2.5, 10 και 25 mg/kg/day t ½ (min) Η πεβηοθίςζδ, δ μπμία ακαπηφζζεηαζ ζημ ηεθάθαζμ πμο αημθμοεεί επζθέπηδηε ςξ ιέεμδμξ πδιζηήξ ιεηαηνμπήξ ημο PCK3145 ζε άθθα πενζζζυηενμ ζηαεενά ιυνζα ηαζ ηα πανάβςβα πμο πνμέηορακ ιεθεηήεδηακ πεζναιαηζηά, υπςξ ακαθφεηαζ ζημ πεζναιαηζηυ ιένμξ ηδξ πανμφζδξ ενβαζίαξ. 37

38 ΚΕΥΑΛΑΙΟ ΔΕΤΣΕΡΟ:ΤΝΔΕΗ ΜΕ ΠΟΛΤΑΙΘΤΛΕΝΟΓΛΤΚΟΛΗ 38

39 Α. ύλδεζε κε πνιπαηζπιελνγιπθόιε-γεληθά Μέπνζ ζήιενα, έκαξ ανζειυξ πεπηζδίςκ ηαζ πνςηεσκχκ έπμοκ δζενεοκδεεί απυ ηζξ θανιαηεοηζηέξ επζζηήιεξ, απυ ηδ ζημπζά ηδξ ορδθήξ αζμθμβζηήξ ημοξ δνάζδξ ηαζ εζδζηυηδηαξ (7). Χζηυζμ, πανά ηα πθεμκεηηήιαηα πμο πνμζθένμκηαζ απυ ηζξ μοζίεξ αοηέξ, δ εθανιμβή ημοξ εκδέπεηαζ κα δοζπεναίκεηαζ ελαζηίαξ ημο ορδθμφ ιμνζαημφ αάνμοξ, ηδξ οδνμθζθζηυηδηαξ ηαζ ηδξ ιζηνήξ ζηαεενυηδηαξ, ηα μπμία ακηακαηθμφκ ζηζξ θηςπέξ αζμθανιαηεοηζηέξ ημοξ ζδζυηδηεξ (8,9). Δζδζηυηενα ηα πεπηίδζα ηαζ μζ πνςηεΐκεξ οθίζηακηαζ ηαπεία ηάεανζδ απυ ημ ζχια, δ μπμία πναβιαημπμζείηαζ ιέζς εκυξ ζοκδοαζιμφ βεβμκυηςκ υπςξ δ πνςηευθοζδ, δ κεθνζηή δζήεδζδ, δ δπαηζηή ηάεανζδ ηαζ δ «ηαηαζπάναλδ» απυ ημ ακμζμπμζδηζηυ ζφζηδια. Η αθθδθεπίδναζδ ηαζ ζοζζχνεοζδ ζημοξ ζζημφξ ακηζπνμζςπεφεζ έκα επζπνυζεεημ ιμκμπάηζ βζα ηδκ απμιάηνοκζδ πεπηζδίςκ ηαζ πνςηεσκχκ απυ ημ ζχια (8). Η πεβηοθίςζδ αθμνά ζηδκ ηνμπμπμίδζδ αζμθμβζηχκ ιμνίςκ ιε μιμζμπμθζηή ζφγεολδ ιε πμθοαζεοθεκζηή βθοηυθδ (PEG), έκα ιδ ημλζηυ, ιδ ακμζμβμκζηυ πμθοιενέξ. Η πεβηοθίςζδ ιεηαηνέπεζ ηζξ θοζζηέξ ηαζ πδιζηέξ ζδζυηδηεξ ημο αζμθμβζημφ ιμνίμο, υπςξ ηδ δζαιυνθςζδ, ημκ δθεηηνμζηαηζηυ δεζιυ ηαζ ηδκ οδνμθμαζηυηδηα ηαζ έπεζ ςξ απμηέθεζια ηδ αεθηίςζδ ηδξ θανιαημηζκδηζηήξ ζοιπενζθμνάξ ημο ιμνίμο, ηδ αεθηίςζδ ηδξ δζαθοηυηδηάξ ημο ηαζ ηδ ιείςζδ ηδξ ακμζμβμκζηυηδηαξ. Η πεβηοθίςζδ επίζδξ, αολάκεζ ηδ ζηαεενυηδηα ημο ιμνίμο ηαζ ημ πνυκμ παναιμκήξ (retention time) ημο ζογεφβιαημξ ζημ αίια ηαζ ιεζχκεζ ηδκ πνςηευθοζδ ηαζ ηδκ κεθνζηή απέηηνζζδ επζηνέπμκηαξ ηδ ιείςζδ ηδξ πμνδβμφιεκδξ δυζδξ (52). Η πεβηοθίςζδ εεςνείηαζ ιία απυ ηζξ πζμ επζηοπδιέκεξ ηεπκζηέξ βζα ηδκ επζιήηοκζδ ημο πνυκμο παναιμκήξ ηςκ πνςηεσκζηχκ ιμνίςκ ζηδκ ηοηθμθμνία ημο αίιαημξ (52). ε θίβεξ πενζπηχζεζξ, δ πνμζηυθθδζδ πμθοιενμφξ θαίκεηαζ κα επζθένεζ ζδζυηδηεξ ζηυπεοζδξ ζημ ζδιείμ ηδξ κυζμο υπςξ βζα ηζξ ιάγεξ υβηςκ απυ παεδηζηή δζήεδζδ. Αλίγεζ κα ακαθενεεί υηζ μζ αζμθανιαηεοηζηέξ ζδζυηδηεξ ηςκ ζογεοβιάηςκ ηδξ PEG, μζ μπμίεξ ηαεμνίγμοκ ηζξ εεναπεοηζηέξ ζδζυηδηεξ ηςκ παναβχβςκ, ελανηχκηαζ αοζηδνά απυ ηζξ θοζζημπδιζηέξ ηαζ αζμθμβζηέξ ζδζυηδηεξ ηςκ δφμ επζιένμοξ ζοζηαηζηχκ ηδξ ζφγεολδξ/πνμζηυθθδζδξ, δδθαδή ημο πμθοιενμφξ ηαζ ηδξ πνςηεΐκδξ, ηαεχξ επίζδξ ηαζ απυ ηζξ ζδζυηδηεξ μθυηθδνμο ημο ζογεφβιαημξ. Χζηυζμ, δ βκχζδ ηδξ αζμθμβζηήξ ελέθζλδξ (biological fate) ηαζ ηςκ δφμ ζοζηαηζηχκ, ημο, πμθοιενμφξ ηαζ ηδξ πνςηεΐκδξ, είκαζ απαναίηδηδ πθδνμθμνία ζημ ζπεδζαζιυ ηδξ ζηναηδβζηήξ ηδξ πεβηοθίςζδξ, ηάηζ ημ μπμίμ ηνίκεηαζ απαναίηδημ πνμηεζιέκμο 39

40 κα μδδβδεεί ηακείξ ζε πανάβςβα ιε πνμαθέρζιδ αζμηαηακμιή ηαζ θανιαημηζκδηζηή ζοιπενζθμνά. Β. Νεθξηθή δηήζεζε Η κεθνζηή δζήεδζδ είκαζ ιία απυ ηζξ ηφνζεξ μδμφξ απμιάηνοκζδξ απυ ημ αίια οδνμθζθζηχκ πνςηεσκχκ, πμθοιενχκ ηαζ ζογεοβιάηςκ πμθοιενχκ-πνςηεΐκδξ (9,12). Μεηαλφ ηςκ παναιέηνςκ πμο επδνεάγμοκ αοηή ηδ δζαδζηαζία είκαζ απυ ηδκ πθεονά ηδξ πδιζηήξ ζφκεεζδξ, ημ ιέβεεμξ ηαζ ημ θμνηίμ ηςκ ιμνίςκ πμο ηοηθμθμνμφκ ζημ αίια, ηαζ απυ ηδκ άθθδ μζ ιμνθμθμβζηέξ ηαζ θεζημονβζηέξ ζδζυηδηεξ ημο μνβάκμο (13,14). ηα κεθνά, δ ζπεζναιαηζηή εηθεηηζηή δζαπεναηυηδηα πενζμνίγεηαζ απυ έκα δζπθυ θναβιυ (barrier) πμο απμηεθείηαζ απυ ιζα επζεδθζαημφ ζζημφ ιειανάκδ ηαζ έκα επζεδθζαηυ δζαπςνζζηζηυ δζάθναβια. Χζηυζμ, ημ ηνζπμεζδζηυ ημίπςια ημο ζπεζνάιαημξ δεκ εα ιπμνμφζε κα εεςνδεεί απθχξ ςξ έκα πμνχδεξ θίθηνμ ζηακυ βζα εηθεηηζηή δζάηνζζδ ιε αάζδ ημ ιέβεεμξ ημο ιμνίμο ιυκμ. Μεθέηεξ πμο δζελήπεδζακ ιε θμνηζζιέκα πμθοιενή ηαζ πνςηεΐκεξ ιε δζαθμνεηζηυ ιμνζαηυ αάνμξ ηαζ ζζμδθεηηνζηυ ζδιείμ έδεζλακ υηζ ζηδ θεζημονβία ημο ημζπχιαημξ οπεζζένπμκηαζ δζαθμνεηζηέξ πηοπέξ ημο ημζπχιαημξ ηςκ ηνζπμεζδχκ. Σμ ιδ ζπεζναιαηζηυ επζεήθζμ επίζδξ ειθακίγεζ ανκδηζηά θμνηία πμο επζαναδφκμοκ ηδ δζαημζπςιαηζηή δίμδμ ηςκ ηοηθμθμνμφκηςκ πμθοακζυκηςκ. Σεθζηά, αλίγεζ κα ζδιεζςεεί υηζ, υπςξ ηαζ ιε ηα ιζηνά ιυνζα, ιδ δζδεδιέκεξ πνςηεΐκεξ ηαζ πεπηίδζα ιπμνμφκ κα επακαννμθδεμφκ ζημ επίπεδμ ημο εββφξ ζςθδκανίμο υπμο ιπμνεί κα απμδμιδεμφκ ή ιενζηέξ θμνέξ κα επζζηνέρμοκ ζηδκ ηοηθμθμνία παναηείκμκηαξ ηδκ παναιμκή ημοξ ζε αοηή (8,9,14). Γ. Δπίδξαζε ηεο αιιαγήο θνξηίνπ (masking) ζηε λεθξηθή δηαπεξαηόηεηα Σμ ζηδκζηυ ηάθορδξ θμνηίμο εα ιπμνμφζε κα απμηεθεί ζοκέπεζα ηδξ πδιζηήξ ηνμπμπμίδζδξ (modification) ηςκ πνςηεσκζηχκ ζμκζγυιεκςκ θεζημονβζηχκ μιάδςκ βκςζηχκ ςξ αιίκεξ ή ηαναμλφθζα. Δζδζηυηενα, μζ πενζζζυηενμ ημζκέξ δζαδζηαζίεξ βζα ηδκ παναβςβή παναβχβςκ PEG-πνςηεσκχκ πενζθαιαάκμοκ ηζξ ιεηαηνμπέξ ηςκ πνςηεσκζηχκ αιζκμιάδςκ ζε 40

41 αιίδεξ ιε ηδκ ζοκεπαηυθμοεδ απχθεζα εεηζηχκ θμνηίςκ (15) πμο ιπμνεί κα ηνμπμπμζήζεζ ηδκ πνςηεσκζηή οπενδζήεδζδ. Απυ ηδ ζηζβιή πμο ακζμκζηά ιαηνμιυνζα έπεζ ανεεεί υηζ απμιαηνφκμκηαζ ιέζς κεθνζηήξ δζήεδζδξ πζμ ανβά απυ ηα μοδέηενα ή εεηζηά, εα πενίιεκε ηακείξ υηζ δ πνμζηυθθδζδ PEG ζε αιζκμιάδεξ παναηείκεζ ηδκ παναιμκή ζηδκ ηοηθμθμνία ημο αίιαημξ (16). Χζηυζμ, ιία ιεθέηδ πμο δζελήπεδ ιε ηδκ ηνμπμπμίδζδ ηδξ ril-2 ζηζξ πνςηεσκζηέξ αιζκμιάδεξ ιε δζαθμνεηζηά PEG πνμηεζιέκμο κα πνμηφρμοκ ζογεφβιαηα ιε πανυιμζμ ιέβεεμξ, αθθά δζαθμνεηζηυ ζζμδθεηηνζηυ ζδιείμ, ηαηέδεζλε υηζ δ ηνμπμπμίδζδ ημο ζζμδθεηηνζημφ θμνηίμο δεκ είκαζ ζηακή κα ηαηεοεφκεζ ηδ ζπεζναιαηζηή εηθεηηζηή δζαπεναηυηδηα ηςκ πνςηεσκζηχκ πμθοιενχκ παναβχβςκ. ηδ ιεθέηδ αοηή, δ παναηεηαιέκδ ηοηθμθμνία ημο ζογεφβιαημξ υπςξ ζοβηνίεδηε ιε ηδ θοζζηή πνςηεΐκδ απμδυεδηε ιυκμ ζημ αολδιέκμ ιμνζαηυ ιέβεεμξ (17). Γ. Μνξηαθό κέγεζνο θαη ζπεηξακαηηθή δηήζεζε Σμ ιμνζαηυ αάνμξ βζα κα πναβιαημπμζδεεί κεθνζηή απμιάηνοκζδ ηςκ αοηυπεμκςκ ζθαζνζηχκ πνςηεσκχκ είκαζ αοηυ ηςκ 70 πενίπμο kda, ηα μπμία είκαζ ημκηά ζημ ιμνζαηυ αάνμξ ηδξ αθαμοιίκδξ ημο μνμφ. Πνςηεΐκεξ ιε ΜΒ ιεβαθφηενμ απυ 70 kda απμιαηνφκμκηαζ ηονίςξ απυ ημ ζχια ιέζς άθθςκ ιμκμπαηζχκ, υπςξ ιέζς ηδξ πνυζθδρδξ απυ ημ ήπαν, ηδξ πνςηεμθοηζηήξ δζάζπαζδξ ηαζ ηδξ ηάεανζδξ ιέζς ημο ακμζμπμζδηζημφ ζοζηήιαημξ. Οζ ηεθεοηαίμζ αοημί ιδπακζζιμί πνμζθένμκηαζ ζοπκά βζα ορδθμφ ΜΒ βθοημζοθζςιέκεξ ή ιδ βθοημζοθζςιέκεξ πνςηεΐκεξ υπςξ δ cross-linked di-fab δ μπμία επζδεζηκφεζ ζφκημιδ παναιμκή ζηδκ ηοηθμθμνία πανά ημ ορδθυ ιμνζαηυ αάνμξ. Οζ εεναπεοηζηέξ πνςηεΐκεξ ζοπκά είκαζ ιζηνυηενεξ απυ ηδκ αθαμοιίκδ ημο μνμφ. Δπζπθέμκ, ζε θίβεξ πενζπηχζεζξ, έπμοκ ζπεδζαζηεί αζμηεπκμθμβζηέξ δζαδζηαζίεξ πνμηεζιέκμο κα πνμηφρμοκ παιδθμφ ΜΒ εκενβέξ πνςηεΐκεξ ηαζ κα ιεζςεεί μ ηίκδοκμξ ακμζμακηίδναζδξ ή κα πνμαπεεί δ δζαηίκδζδ ζημ ζχια. Σιήιαηα ιμκμηθςκζηχκ ακηζζςιάηςκ πμο ακαπηφπηδηακ βζα ακμζμ-ζηυπεοζδ ζηδ δζάβκςζδ ηαζ εεναπεία αζεεκεζχκ απμηεθμφκ ηοπζηυ πανάδεζβια αοηήξ ηδξ ηαηδβμνίαξ ιμνίςκ. Χζηυζμ, πανά ηα πθεμκεηηήιαηα ηδξ ιείςζδξ ημο ιεβέεμοξ, δ βνήβμνδ δζήεδζδ ςξ αηέναζα ιυνζα ιπμνεί κα επδνεάγεζ ανκδηζηά ηδκ απμηεθεζιαηζηυηδηα αοηχκ ηςκ εεναπεζχκ. 41

42 Ακ ηαζ δ κεθνζηή ηάεανζδ ηςκ ιαηνμιμνίςκ ζπεηίγεηαζ ζοκήεςξ ιε ημ ιμνζαηυ ημοξ αάνμξ, δ πανάιεηνμξ αοηή δεκ οπαβμνεφεζ ηαεεαοηυ ηδ ζπεζναιαηζηή δζαπεναηυηδηα, δζυηζ δεκ ηαεμνίγεζ εκηεθχξ ημ απμηεθεζιαηζηυ ιέβεεμξ ηςκ ιαηνμιμνίςκ. Γεκζηά, δ πνςηεΐκδ απμηηά ιζα πμθφ ζοιπαβή ηαζ ζθαζνζηή δμιή, εκχ ηα οδνυθζθα πμθοιενή επζδεζηκφμοκ ιζα ζπεζνμεζδή/εηηεηαιέκδ δζαιυνθςζδ. ηδκ πενίπηςζδ ημο PEG, μ ορδθυηενμξ ιμνζαηυξ υβημξ ιεηαλφ πνςηεσκχκ ιε ημ ίδζμ ΜΒ, μθείθεηαζ ζηδκ ηοπαία δζαιυνθςζδ ηαζ ζηδκ ζηακυηδηα κα ζοκηαζνζάγεζ ιυνζα κενμφ, πενίπμο ηνία ακά ιμκάδα ιμκμιενμφξ (monomeric) (18). Αοηυ ημ κέθμξ κενμφ ιεηαθένεζ ορδθυ οδνμδοκαιζηυ υβημ ζημ PEG ηαζ ηαεζζηά δφζημθδ ηδ ζφβηνζζδ ημο ιεβέεμοξ πνςηεσκχκ, πμθοιενχκ ηαζ ζογεοβιάηςκ πνςηεσκχκ- πμθοιενχκ. Η ακάθοζδ ημο ιεβέεμοξ ααζζζιέκδ ζε πνςιαημβναθία δζαπέναζδξ πδηηήξ (gel permeation chromatography-gpc) ή ζε ηεπκζηέξ δθεηηνμθυνεζδξ έπεζ απμηαθφρεζ δζαθμνέξ ιεηαλφ πνςηεσκχκ ηαζ οδαημδζαθοηχκ πμθοιενχκ ιε ημ ίδζμ ΜΒ, υπςξ θαίκεηαζ ζημκ πίκαηα I. Δζδζηυηενα, δ βναθζηή απεζηυκζζδ ημο ΜΒ ςξ πνμξ ημκ πνυκμ ηαηαηνάηδζδξ υπςξ πνμέηορε απυ ηδκ GPC ιε αοηυιαηδ ακίπκεοζδ ηςκ PEGs, ηαζ πνςηεΐκςκ δεκ ήηακ μφηε οπένεεηδ μφηε πανάθθδθδ αθθά απμηθίκεζ ηαεχξ ημ ΜΒ αολάκεηαζ (19). Η θεπημιενήξ αοηή ιεθέηδ, πμο δδιμζζεφηδηε απυ ημοξ Sherman et al., (19) έδεζλε υηζ μζ «ιζηνέξ» πνςηεΐκεξ ζοκεηθμφμκηαζ ιε ηα PEGs πμο έπμοκ ΜΒ πενίπμο ημ έκα ηνίημ (1/3) απυ αοηυ ηδξ πνςηεΐκδξ. ηδκ πενίπηςζδ πμθφ ιεβάθςκ πνςηεσκχκ δ δζαθμνά ζηδκ έηθμοζδ ιεηαλφ PEGs ηαζ πνςηεσκχκ ιε ημ ίδζμ ΜΒ είκαζ αηυιδ πενζζζυηενμ παναηηδνζζηζηή ηαζ ακηζζημζπεί ζε ιζα ακαθμβία πενίπμο 9:1. Πίνακαρ 2: Φοζζημπδιζηέξ ηαζ θανιαημηζκδηζηέξ ζδζυηδηεξ ηςκ PEGs: ζοζπέηζζδ ιεηαλφ ιμνζαημφ αάνμοξ, ιμνζαημφ ιεβέεμοξ, πνςηεσκζηυ ζζμδφκαιμ ιμνζαημφ αάνμοξ, παναιμκή ζηδκ ηοηθμθμνία ημο αίιαημξ 42

43 Δ. Γνκή PEG ωο πξνο ηε ζπεηξακαηηθή δηήζεζε Η ζοζπέηζζδ ιεηαλφ ΜΒ ημο PEG ηαζ ζπεζναιαηζηήξ δζήεδζδξ έπεζ δζενεοκδεεί απυ ιενζηέξ ενεοκδηζηέξ μιάδεξ ηςκ μπμίςκ ηα απμηεθέζιαηα ζοκμρίγμκηαζ ζημ δζάβναιια 1. Εικόνα 18. οζπέηζζδ ιεηαλφ ιμνζαημφ αάνμοξ PEG ηαζ διίζεζαξ γςήξ ηδξ ζημ αίια ιεηά απυ εκδμθθέαζα πμνήβδζδ (Yamoka et al, Nakaoka et al.,) Οζ Yamaoka et al. ιεθέηδζακ ηδκ επίδναζδ ημο ΜΒ ηδκ ζηζβιή ηδξ απμιάηνοκζδξ ημο PEG απυ ημ αίια (20,21). Οζ ίδζμζ ηαηέθδλακ υηζ ηα ιζηνμφ ΜΒ PEGs απμιαηνφκμκηαζ ηαπφηενα απυ αοηά ιε «ιεβάθμ ΜΒ». Δζδζηυηενα, δ διζγςή αολάκεηαζ απυ 18 θεπηά ζε 1 διένα ηαεχξ ημ ΜΒ αολάκεηαζ απυ 3 ζε 190 kda. Χζηυζμ, δ ζοιπενζθμνά αοηή δεκ είκαζ βναιιζηή δζυηζ ζηα 30 kda θαιαάκεζ πχνα ιζα αζθκίδζα ιεηααμθή. Οζ ζηαεενέξ ημο νοειμφ απμιάηνοκζδξ (k e ) πμο πνμέηορακ απυ ηα δζάθμνα PEGs επζαεααίςζακ πεναζηένς αοηά ηα απμηεθέζιαηα. Οζ ζοββναθείξ ηαηέθδλακ υηζ δ δζήεδζδ ηςκ PEGs ιε ΜΒ ιζηνυηενμ απυ 8 kda δεκ πενζμνίγεηαζ, εκχ δ απμιάηνοκζδ ηςκ PEGs ζημ εφνμξ ηςκ 8-30 kda εθέβπεηαζ απυ ημ ιμνζαηυ ιέβεεμξ. Καεχξ ημ ΜΒ οπενααίκεζ ηα 30 kda, δ απμιάηνοκζδ ημο πμθοιενμφξ επζαναδφκεηαζ δναιαηζηά ηαζ δεκ παναηδνμφκηαζ ζδιακηζηέξ δζαθμνέξ ιεηαλφ ηςκ PEGs ιε δζαθμνεηζηά ΜΒ. Οζ Naoka et al. ακέθενακ υηζ ημ PEG ηςκ 30 kda έπεζ δζάιεηνμ πενίπμο 8nm, εκχ ημ ιέβεεμξ ημο πυνμο ηδξ ζπεζναιαηζηήξ ααζζηήξ ιειανάκδξ ηοιαίκεηαζ απυ 3 έςξ 5nm. Χζηυζμ, δ ορδθή εοεθζλία ηαζ εοπθαζηυηδηα ημο πμθοιενμφξ ιαγί ιε ηδκ νααδμεζδή δζαιυνθςζδ επζηνέπεζ ηδκ δζήεδζδ αοηχκ ηςκ ιμνίςκ ηαζ ζε ιζηνή νμή (flow rate) πανά ημ 43

44 ιεβαθφηενμ ιέβεεμξ ημο πμθοιενμφξ ζε ζφβηνζζδ ιε ημ ιέβεεμξ ημο πυνμο (19,22). Αοηή δ δζήεδζδ ηςκ βναιιζηχκ πμθοιενχκ ιέζς ηςκ ιζηνχκ πυνςκ μκμιάγεηαζ «ενποζιυξ». Σα ακςηένς απμηεθέζιαηα ανίζημκηαζ ζε επανηή ζοιθςκία ιε εηείκα ηςκ Areendshorst ηαζ Navar, μζ μπμίμζ έδεζλακ υηζ δ ζπεζναιαηζηή δζήεδζδ ηςκ ιαηνμιμνίςκ ζπεηίγεηαζ υπζ ιυκμ ιε ημ ιέβεεμξ ηαζ ημ θμνηίμ, αθθά επίζδξ ηαζ ιε ημ ζπήια ηαζ ηδκ αηαιρία ημοξ (23). Σ. Δπίδξαζε ηνπ κεγέζνπο ηνπ ζπδεύγκαηνο ζηελ ζπεηξακαηηθή δηήζεζε οκήεςξ, δ οδνμδοκαιζηή αηηίκα ημο ζογεφβιαημξ ελανηάηαζ απυ ηδ ιάγα πμθοιενμφξ ημο ζογεφβιαημξ ημ μπμίμ ηαεμνίγεηαζ απυ ημκ ανζειυ ηςκ δεζιεοιέκςκ αθοζίδςκ ηαζ ημ ΜΒ ημο δεζιμφ πμθοιενμφξ ζημκ πνςηεσκζηυ πονήκα. Ανπζηά, πνμηεζιέκμο κα πνμηφρμοκ πανάβςβα ιε ιεβάθμ ιέβεεμξ, δ πεβηοθίςζδ ηςκ πνςηεσκχκ πναβιαημπμζείηαζ ιε ηδκ πνμζηυθθδζδ πμθοάνζειςκ πμθοιενζηχκ αθοζίδςκ ιε ΜΒ ιεηαλφ 1,5 ηαζ 5 kda. Αοηή δ ζηναηδβζηή ηδξ πεβηοθίςζδξ αημθμοεήεδηε ιε έκακ ανζειυ εκγφιςκ ηαζ άθθςκ αζμιεηαηνμπέςκ (biomodulators). Χξ πανάδεζβια ηδξ ακςηένς πνμζέββζζδξ ιπμνμφκ κα ακαθενεμφκ ηα απμηεθέζιαηα πμο πνμέηορακ απυ ηδκ αζιμζθαζνίκδ, έκακ θμνέα μλοβυκμο ηονίανπα πνήζζιμ ζηδκ ακακέςζδ ημο αίιαημξ. Η παναβςβή ηδξ αζιμζθαζνίκδξ ιέζς ηδξ πνυζδεζδξ πενίπμο 12,5 kda αθοζίδςκ PEG αφλδζε ημ πνυκμ διζγςήξ ηδξ πνςηεΐκδξ ζημ αίια ηαηά έκακ πανάβμκηα 14 (απυ 3 έςξ 43,2h) ηαζ ηδκ ζοζηειζηή δζαεεζζιυηδηα (πενζμπή ηάης απυ ηδκ ηαιπφθδ AUC) ηαηά έκακ πανάβμκηα 8 (24). Ο παναηεηαιέκμξ πνυκμξ παναιμκήξ ζημ αίια απμδίδεηαζ υπζ ιυκμ ζηδ ιεζςιέκδ ζπεζναιαηζηή δζήεδζδ αθθά ηαζ ζηδ ιεζςιέκδ θαβμηοηηάνςζδ. Κμοκέθζα ζηα μπμία εβπφεδηε PEG-αζιμζθαζνίκδ επέδεζλακ ηεκμηυπζα ζημ κεθνζηυ ζςθδκανζαηυ επζεήθζμ, ηαζ αοηυ είκαζ παναηηδνζζηζηυ ηδξ πνςηεσκζηήξ απμννυθδζδξ. Μεθέηεξ πμο δζελήπεδζακ ιε ανηεηέξ μνιυκεξ ηαζ ηοημηίκεξ απμηάθορακ υηζ μ ανζειυξ ηςκ αθοζίδςκ πμθοιενχκ πμο πνμζημθθήεδηακ ζηδκ πνςηεΐκδ απαναζηήηςξ πνμηεζιέκμο κα επζηεοπεεί μ ηαηάθθδθμξ πνυκμξ παναιμκήξ ζημ αίια ελανηάηαζ εονφηαηα απυ ηδκ πνςηεΐκδ. Σα απμηεθέζιαηα πμο πνμέηορακ ιε ηδκ αολδηζηή μνιυκδ, ιζα πνςηεΐκδ 22 kda, δ μπμία ηνμπμπμζήεδηε ζε δζαθμνεηζηά extents ιε 5 kda PEG, ααζζηά επζαεααίςζακ ημκ ηακυκα ζφιθςκα ιε ημκ μπμίμ δ διζγςή ηςκ ζογεοβιάηςκ ιεζχκεηαζ ηαεχξ αολάκεηαζ μ 44

45 ανζειυξ ηςκ ζογεοβιέκςκ πμθοιενζηχκ αθοζίδςκ. Η παναηεηαιέκδ παναιμκή ζημ αίια θυβς ηδξ αφλδζδξ ημο εκενβμφ ιμνζαημφ ιεβέεμοξ ηαζνζάγεζ ζηεκά ζε έκα ιμκηέθμ κεθνζηήξ δζήεδζδξ πνμζδέκμκηαξ 7 αθοζίδεξ ηςκ 5 kda. Χζηυζμ, δ δζενεφκδζδ πμο δζελήπεδ απυ ημοξ Clark et al., έδεζλε υηζ άθθμζ ιδπακζζιμί υπςξ δ ιεζςιέκδ πνςηευθοζδ ζημκ μνυ, επζδνά ζηδκ επζανάδοκζδ ηδξ πνςηεσκζηήξ ηάεανζδξ (25). Οζ Knauff et al. δζελήβαβακ ιζα ζοβηνζηζηή ιεθέηδ πνδζζιμπμζχκηαξ Ril-2 (Mw 19.5 kda) ηνμπμπμζδιέκδ ζε δζάθμνα ζδιεία ιε PEGs ιμνζαημφ αάνμοξ πμο ηοιαζκυηακ απυ 0,35 έςξ 20 kda (17). Βνέεδηε υηζ δ πνυζδεζδ ιενζηχκ ιζηνμφ ιεβέεμοξ PEGs (PEG 350 Da) δεκ ιεηνίαζε μφηε ηδκ οδνμδοκαιζηή αηηίκα ηδξ πνςηεΐκδξ μφηε ηδ θανιαημηζκδηζηή ζοιπενζθμνά ηδξ πνςηεΐκδξ. Ακηζεέηςξ, PEGs ιε ορδθυηενμ ΜΒ αολάκμοκ ζδιακηζηά ημ ιέβεεμξ ηδξ πνςηεΐκδξ ηαζ παναηείκμοκ ηδκ παναιμκή ηδξ ζηδκ ηοηθμθμνία ημο αίιαημξ. Η ηνμπμπμίδζδ ηδξ ril-2 ιε έκα, δφμ ηαζ ηνία PEGs 4 kda δςνίγεζ ζογεφβιαηα ιε ιμνζαηά ιεβέεδ πμο ακηαπμηνίκμκηαζ ζε ζθαζνζηέξ πνςηεΐκεξ ηςκ 40,66 ηαζ 104 kda ακηίζημζπα. Καεχξ ημ ιμνζαηυ ιέβεεμξ αολάκεηαζ, δ ζοζηειζηή ηάεανζδ ιεζχκεηαζ (απυ 0,6 ζε 0,23 ηαζ ζε 0,12 ml/min) ηαζ μζ α ηαζ α θάζδξ πνυκμζ διζγςήξ αολάκμκηαζ. Δπζπθέμκ, δ ril-2 πμο ηνμπμπμζήεδηε ιε ηνία ιυνζα PEG 4 kda ή έκα ιυνζμ PEG 10 kda πανμοζζάγεζ πανυιμζμοξ νοειμφξ ηάεανζδξ. Αοηά ηα απμηεθέζιαηα ηαηαδεζηκφμοκ υηζ δ ηάεανζδ ηςκ ζογεοβιάηςκ ελανηάηαζ απμηθεζζηζηά απυ ηδ ιάγα πμθοιενμφξ, ακελάνηδηα απυ ημκ ανζειυ ηςκ πνμζημθθδιέκςκ αθοζίδςκ. Μζα δζαθμνεηζηή πνμζέββζζδ πμο ζοζπεηίγεζ ημκ οδνμδοκαιζηυ υβημ ηςκ παναβχβςκ PEG ιε ηδ ζοζηδιαηζηή ηάεανζδ ιεθεηήεδηε απυ ημοξ Nakaoka et al. (22) πνδζζιμπμζχκηαξ ςξ ιμκηέθμ ηδκ δζζιμοηάζδ ημο οπενμλεζδίμο (sod) απυ ημ ααηηήνζμ Bacillus stearothermophilus, πμο ηνμπμπμζήεδηε ζε δζαθμνεηζηά ζδιεία ιε PEGs ηςκ 5,45,20 ηαζ 50 kda. Σμ ιέβεεμξ ηςκ παναβχβςκ απμηζιήεδηε ιε πνςιαημβναθία δζέθεοζδξ ζε πδηηή. Οζ ζοββναθείξ ανήηακ υηζ, πανά ηδ ιεβάθδ αφλδζδ ζημ ιέβεεμξ ημο ζογεοβιέκμο ιμνίμο, υθα ηα δείβιαηα έδςζακ πανυιμζμ νοειυ ηάεανζδξ, πζεακυηαηα δζυηζ ημ SOD πμο πνδζζιμπμζήεδηε ζηδ ιεθέηδ έπεζ ορδθυ ΜΒ (50 kda). ηδκ πενίπηςζδ αοηή, δ πνυζεεζδ θίβςκ αθοζίδςκ PEG 5,45 kda (11% αιζκμιάδεξ θοζίκδξ ηνμπμπμζήεδηακ) ήηακ ανηεηή κα απμθένεζ έκα πανάβςβμ ιε οδνμδοκαιζηή αηηίκα πακχ απυ ημ υνζμ ημο ΜΒ βζα δζήεδζδ (cut off). Πνυζθαηα έπεζ ανεεεί υηζ δ ζφγεολδ ιυκμ ιίαξ ή δφμ αθοζίδςκ PEG ορδθμφ ιμνζαημφ αάνμοξ είκαζ επανηήξ βζα κα παναπεμφκ ζογεφβιαηα ιε αεθηζςιέκεξ 45

46 αζμθανιαηεοηζηέξ ζδζυηδηεξ ηαζ ορδθή αζμθμβζηή δνάζδ. Οζ Sherman et al. (19) ακέθενακ υηζ ιζα εκζαία αθοζίδα PEG 18 kda έπεζ ιεβαθφηενμ οδνμδοκαιζηυ υβημ απυ υηζ δ αθαμοιίκδ ημο μνμφ, ηαζ ςξ εη ημφημο, δ ζφγεολδ εκυξ 18 kda PEG ηθχκμο ζε ιζα ιζηνή πνςηεΐκδ υπςξ ιία ηοημηίκδ εα πενίιεκε ηακείξ κα ιεζχκεζ ζδιακηζηά ημ νοειυ ηάεανζδξ ηδξ απυ ημ πθάζια. Γζα πανάδεζβια, δ πνμζάνηδζδ εκυξ ή δφμ 20 kda PEG αθοζίδςκ ζηδκ αιζκμηεθζηή μιάδα ημο πανάβμκηα δζέβενζδξ απμζηζχκ ημηηζμηοηηάνςκ (G-CSF) ανέεδηε κα επζαναδφκεζ επανηχξ ηδκ απμιάηνοκζή ημο πςνίξ ζδιακηζηή απχθεζα ηδξ αζμθμβζηήξ ημο δνάζδξ (19,26). Δπίζδξ, PEGs ιε ιμνζαηά αάνδ ζηδκ πενζμπή ηςκ kda, είηε ιε βναιιζηή ή δζαηθαδζζιέκδ δμιή, έπεζ ανεεεί υηζ είκαζ μζ ηαθφηενεξ επζθμβέξ ζηδκ ζφγεολδ ηςκ παιδθμφ ιμνζαημφ αάνμοξ ηοημηζκχκ ηαζ μνιμκχκ (28-30). Οζ Gaertner ηαζ Offord (27), έδεζλακ υηζ δ πνμζάνηδζδ ιζαξ δζαηθαδζζιέκδξ 40 kda PEG αθοζίδαξ ζημ 8 kda IL-8 πανέηεζκε ηδκ διζγςή ηδξ πνςηεΐκδξ απυ 10 έςξ 60 θεπηά. Πανμιμίςξ, δ ζκηενθενυκδ-άθθα- 2a ιε ηδ ζφκδεζδ ιίαξ αθοζίδαξ δζαηθαδζζιέκςκ PEG 40 kda ειθάκζζε παναηεηαιέκμ πνυκμ παναιμκήξ ζηδκ ηοηθμθμνία, ακ ηαζ ιυκμ ημ 7% ηδξ ανπζηήξ δναζηζηυηδηαξ δζαηδνείηαζ ζε in vitro δμηζιαζία (31,13). ε ιζα ηέημζα πενίπηςζδ δ ζφγεολδ PEG ανέεδηε κα επζαναδφκεζ ηδκ απμννυθδζδ πνςηεΐκδξ ιεηά απυ οπμδυνζα έκεζδ, βεβμκυξ πμο ακηακαηθά ζε έκα ηαεοζηενδιέκμ πνυκμ ιέβζζηδξ ζοβηέκηνςζδξ (tmax) απυ 7,3-12 h ζηδκ πενίπηςζδ ηδξ θοζζηήξ ζκηενθενυκδξ έςξ 80 χνεξ βζα PEG-πανάβςβμ ηδξ ζκηενθενυκδξ. Οζ Koumenis et al. ιεθέηδζακ ηδ θανιαημηζκδηζηή ζοιπενζθμνά ηςκ ακηζ-il-8 ακηζζςιάηςκ [Fab ηαζ F(ab )2] πμο ηνμπμπμζήεδηακ ζε δζάθμνα ζδιεία ιε βναιιζηά ή δζαηθαδμφιεκα PEGs 20 ή 40 kda (32). Σμ F(ab )2 ζφγεοβια πμο πνμέηορε ιε ηδ ζφγεολδ εκυξ ιυκμ branched PEG 40 kda ανέεδηε κα έπεζ έκα θαζκμιεκζηυ ιέβεεμξ ηςκ 1600 kda ζζμδφκαιμ ιε πνςηεΐκδξ, ελαζνεηζηά πάκς απυ ημ υνζμ κεθνζηήξ δζήεδζδξ, ηαζ AUC ιεηά απυ εκδμθθέαζα πμνήβδζδ 15,7 ορδθυηενμ απυ ηδ ιδ ηνμπμπμζδιέκδ πνςηεΐκδ. Η ζφκεεζδ ηςκ δφμ ιμνίςκ δζαηθαδζζιέκςκ PEGs ηςκ 40 kda απμδίδεζ έκα ζφγεοια ιε έκα θαζκμιεκζηυ ΜΒ ηςκ 1900 kda ηαζ έκα AUC πενίπμο 17,8-field ηαεχξ ζοβηνίεδηε ιε έκα ιδ ηνμπμπμζδιέκμ ζζμδφκαιμ. Σα απμηεθέζιαηα αοηά δείπκμοκ υηζ μ πνυκμξ παναιμκήξ ηςκ ζογεοβιάηςκ ζηδκ ηοηθμθμνία αολάκεηαζ ζφιθςκα ιε ημ ΜΒ ηαεχξ ηαζ υηακ ηα πανάβςβα επζδεζηκφμοκ έκα ιέβεεμξ, ημ μπμίμ εονφηαηα λεπενκά ηδ ζπεζναιαηζηή δζήεδζδ ηαηαδεζηκφμκηαξ υηζ κεθνζηή ηάεανζδ δεκ είκαζ ιζα απθή δζαδζηαζία δζήεδζδξ. 46

47 Ε. Δπίδξαζε ηεο δνκήο ηνπ πνιπκεξνύο, ηεο ρεκείαο ηνπ δεζκνύ θαη ηεο πεγήο ηεο πξωηεΐλεο ζην ξπζκό θάζαξζεο Οζ Chapman et al. βεκίηεοζακ ηα απμηεθέζιαηά ημοξ ηαζ ηαηέθδλακ δείπκμκηαξ υηζ μ πνυκμξ παναιμκήξ ηςκ ζογεοβιάηςκ PEG-πνςηείκδξ ζηδκ ηοηθμθμνία ημο αίιαημξ ηαεμνίγεηαζ απυ ηδ ζοκμθζηή ιάγα πμθοιενμφξ, ακελάνηδηα απυ ηςκ ανζειυ ηςκ αθοζίδςκ ή ημ ιμνζαηυ αάνμξ ημο πμθοιενμφξ (33). ηδ ζοβηεηνζιέκδ ενβαζία μζ ζοββναθείξ έδεζλακ υηζ ιυνζα πμο δδιζμονβήεδηακ ιε PEGs δζαθμνεηζηχκ ιμνζαηχκ αανχκ, αθθά ιε πανυιμζεξ ιάγεξ ζογεοβιάηςκ, πανμοζζάγμοκ δζαθμνεηζηή θανιαημηζκδηζηή ζοιπενζθμνά. ηδ ιεθέηδ αοηή δ ηνμπμπμίδζδ ηδξ Fab9 ιε ιζα αθοζίδα ηςκ 40kDa PEG έδεζλε ιζα αφλδζδ 7,5-θμνέξ fold ζημ AUC ηδξ πνςηεΐκδξ, εκχ δ ζφγεολδ δφμ 25 kda ιμνίςκ PEG αφλδζε ημ AUC ηδξ πνςηεΐκδξ πενίπμο 25-θμνέξ. Οζ ζοββναθείξ ηαηέδεζλακ υηζ δζαθμνεηζηά ζογεφβιαηα είκαζ δοκαηυκ κα οθίζηακηαζ δζάθμνεξ δζενβαζίεξ απμιάηνοκζδξ, υπςξ δ απμδυιδζδ πνςηεσκχκ, δ ηάεανζδ απυ ημ ακμζμπμζδηζηυ ζφζηδια ή άθθεξ ιδ κεθνζηέξ μδμί απμιάηνοκζδξ. Οζ Lee et al. έδεζλακ υηζ θίβεξ ιαηνζέξ αθοζίδεξ PEG είκαζ πζμ απμηεθεζιαηζηέξ βζα ηδκ πανάηαζδ ημο πνυκμο διζγςήξ ζημκ μνυ ζε ζπέζδ ιε ηζξ πμθθαπθέξ ημκηέξ PEGs (34). ηδκ ιεθέηδ αοηή, απθή αθοζίδα Fv-πνςηεσκχκ, μζ μπμίεξ ςξ βκςζηυκ απμιαηνφκμκηαζ απυ ηδκ ηοηθμθμνία ημο αίιαημξ ιέζς ηδξ κεθνζηήξ δζήεδζδξ, ηνμπμπμζήεδηακ ιε έκα ιέζμ ανζειυ 4,8 αθοζίδςκ PEG ηςκ 5 kda ηαζ έδςζακ έκα πνυκμ διζγςήξ απμιάηνοκζδξ (t 1/2 ) 9.8h, εκχ ημ πανάβςβμ ιε 1,1 αθοζίδα PEG 20 kda έδςζε t 1/2 12,8 h. Δίκαζ ζδιακηζηυ κα ζδιεζςεεί ςζηυζμ υηζ ηα ζογεφβιαηα πμο πνμέηορακ απυ δζαθμνεηζηή πδιεία ζφγεολδξ πνμζδέκμκηαξ PEG hydazide ζηζξ COOH μιάδεξ ηδξ πνςηεΐκδξ, ημ μπμίμ ιεζχκεζ ηα ανκδηζηά θμνηία ζηδκ πενίπηςζδ ηςκ 5 kda PEG ή PEG-succinimidyl carbonate ζηζξ πνςηεσκζηέξ αιίκεξ, ημ μπμίμ ιεζχκεζ ηα εεηζηά θμνηία ζηδκ πενίπηςζδ ημο PEG 20 kda. Δίκαζ επίζδξ βκςζηυ, υηζ δ ιμνζαηή ζοιιεηνία παίγεζ νυθμ ζηδ κεθνζηή δζήεδζδ. Πνάβιαηζ, ηα ζογεφβιαηα ιε πανυιμζα ιάγα αθθά δζαθμνεηζηή δμιζηή ζοιιεηνία ιπμνεί κα οπμζημφκ δζαθμνεηζηέξ δζδεδηζηέξ ζοιπενζθμνέξ (35). 47

48 Ζ. Δπίδξαζε ηωλ δωηθώλ εηδώλ ζηελ in vivo ζπκπεξηθνξά ηνπ ζπδεύγκαηνο Ο Edwards δζενεφκδζε ηδ θανιαημηζκδηζηή ημο ακενχπζκμο ακαζοκδοαζιέκμο εοδζάθοημο πανάβμκηα κέηνςζδξ υβημο ημο οπμδμπέα 1 ιε πνυζεεζδ ιέζς ηδξ πνμζηυθθδζδξ ιίαξ ιυκμ ορδθμφ ΜΒ PEG πνδζζιμπμζχκηαξ δζαθμνεηζηά γςζηά είδδ: πμκηίηζα, ανμοναίμοξ, πζεήημοξ, ιπαιπμοίκμοξ ηαζ πζιπαηγήδεξ (36). Η ιεθέηδ έδεζλε υηζ ζε ηάεε πενίπηςζδ ημ ζφγεοβια δεκ ηαηακέιεηαζ εηηεκχξ έλς απυ ημ «δζαιένζζια» ημο πθάζιαημξ. Δπζπθέμκ, μ νοειυξ ηάεανζδξ ημο πθάζιαημξ ζε υθα ηα είδδ ήηακ πμθφ παιδθυηενμξ απυ υηζ μ νοειυξ κεθνζηήξ δζήεδζδξ, δείπκμκηαξ υηζ ειπθέημκηαζ ηαζ άθθεξ μδμί απμιάηνοκζδξ. Η ιεθέηδ επίζδξ έδεζλε υηζ μ υβημξ ηαηακμιήξ ηαζ δ ηάεανζδ ημο πθάζιαημξ ακά ζςιαηζηυ αάνμξ ιεηαλφ ηςκ εζδχκ ήηακ ζπεηζηά ζηαεενή. Σμ απμηέθεζια αοηυ είκαζ ελαζνεηζηά ζδιακηζηυ βζα ημκ πεζναιαηζζιυ ηςκ PEGs ζογεοβιάηςκ, δζυηζ ηα δεδμιέκα πμο ελήπεδζακ απυ ηα γχα ηδξ ιεθέηδξ εα ιπμνμφζακ κα είκαζ πνήζζια ζηδκ ηαηάνηζζδ εκυξ δμζμθμβζημφ ζπήιαημξ βζα ηζξ ηθζκζηέξ ιεθέηεξ ζε ακενχπμοξ. Θ. Απνδόκεζε (degradation) ηεο PEG θαη ηωλ PEG ζπδεπγκάηωλ Μμθμκυηζ δ πμθφ-αζεοθεκμβθοηυθδ εεςνείηαζ ιδ αζμαπμζημδμιήζζιμ πμθοιενέξ δεδμιέκμο υηζ δ αθοζίδα δεκ δζαζπάηαζ εφημθα απυ οδνμθοηζημφξ ιδπακζζιμφξ, οπάνπμοκ ηάπμζεξ εκδείλεζξ εκαθθαηηζηήξ πδιζηήξ ηαζ αζμθμβζηήξ δζάζπαζδξ ηδξ αθοζίδαξ. Οζ Friman et al. απμιυκςζακ ιμκμ-ηαζ δζ- ηαναμλοθζςιέκα πνμσυκηα PEG ζηδ πμθή ιε ζμκημακηαθθαηηζηή πνςιαημβναθία ηαζ ηα παναηηήνζζακ ιε θαζιαημιεηνία ιάγαξ ηαπέςξ αμιαανδζζιμφ αηυιμο (FAB) (37). Ο ζπδιαηζζιυξ αοηχκ ηςκ μλεζδςιέκςκ πνμσυκηςκ ζπεηίγεηαζ ιε ημ ηοηυπνςια Ρ450 πμο ελανηάηαζ απυ μλεζδςηζηά έκγοια πμο οπάνπμοκ ζημ ήπαν. Αοηά ηα δεδμιέκα είκαζ ζε ζοιθςκία ιε ηδ δζαπίζηςζδ ηςκ πνμσυκηςκ μλείδςζδξ απυ ημ πενζζζυηενμ αδνακέξ, αθθά δμιζηά πανυιμζμ πμθοαζεοθέκζμ. Δδχ, επίζδξ αθδεΰδεξ ηαζ ηεηυκεξ εκημπίζεδηακ ιεηά απυ εκγοιζηή μλείδςζδ ελανηχιεκδ απυ ημ ιζηνμζςιζηυ Ρ 450 (38). Άθθα έκγοια, υπςξ αθδεοδζηή αθοδνμβμκάζδ, ειπθέημκηαζ ζηδκ μλείδςζδ PEG υπςξ απμδείπεδηε πνυζθαηα απυ ημκ Mehvar (39). Αοηή δ ζοιπενζθμνά in vivo παναθθδθίγεζ ηδκ βκςζηή 48

49 δζάζπαζδ αθοζίδαξ ιέζς εθεοεένςκ νζγχκ πμο θαιαάκεζ πχνα in vitro ιεηά ηδκ απμεήηεοζδ PEG υηακ ημ μλοβυκμ δεκ έπεζ αθαζνεεεί απυ ημ οθζηυ ηαζ ζπδιαηίγμκηαζ οπενμλείδζα (40). Μία εζδζηή πενίπηςζδ ηδξ απμζημδυιδζδξ ηδξ αθοζίδαξ PEG έπεζ παναηδνδεεί in vitro ιε ηδ δζαηθαδζζιέκδ PEG (41). Δδχ ιία εφημθδ οδνυθοζδ ζημ επίπεδμ ημο εκυξ δεζιμφ ηανααιάηδξ ιπμνεί κα θάαεζ πχνα πάνδ ζε ιζα ζοκδνμιή anchimeric, παίγεηαζ ζε ήπζα αάζδ, απυ ημ πονδκυθζθμ άγςημ αιζδίμο πμο ζοκδέεηαζ ιε ημ ηαναμκφθζμ θοζίκδξ. Πζεακχξ έκαξ ηέημζμξ ιδπακζζιυξ ιπμνεί κα ελδβήζεζ ημ παιδθμφ ιμνζαημφ αάνμοξ πμθοιενζηυ οθζηυ πμο ανέεδηε ζηα μφνα απυ Marlene et al. (42) ιεηά απυ πμνήβδζδ ιζαξ α-ζκηενθενυκδξ ζογεοβιέκδξ ιε ιζα 40 kda δζαηθαδζζιέκδ PEG. Χζηυζμ, υθα ηα παναπάκς ιμκμπάηζα απμζημδυιδζδξ PEG πμο ακαθένεδηακ ζοιααίκμοκ ιε παιδθυ νοειυ ηαζ δεκ ιπμνμφκ κα εεςνδεμφκ ζζπονυξ απμημλζκςηζηυξ ιδπακζζιυξ ημο ορδθμφ ιμνζαημφ αάνμοξ PEG, υπςξ είκαζ δ άιεζδ έηηνζζδ ημο παιδθήξ ιμνζαηήξ ιάγαξ πμθοιενμφξ. ε ηάεε πενίπηςζδ αοηά ηα ιμκμπάηζα απμζημδυιδζδξ ιαγί ιε ηδ αναδεία απμιάηνοκζδ ιέζς ηςκ κεθνχκ ηαζ ηδκ απέηηνζζδ ιέζς ηδξ πμθήξ είκαζ δοκαηυκ κα απμηνέρμοκ ηδ ζοζζχνεοζδ PEG ιεβάθδξ ιάγαξ υηακ αοηυ πμνδβείηαζ ζε ιζηνέξ πμζυηδηεξ (42). Η. Απνκάθξπλζε από ην αλνζνπνηεηηθό ζύζηεκα Ακ ηαζ μζ πνυζθαηεξ ελεθίλεζξ ζηζξ ηεπκζηέξ ακαζοκδοαζιέκμο DNA έπμοκ επζηφπεζ ηδκ παναβςβή πνςηεσκχκ ιε ορδθή ζοιααηυηδηα ιε ημ ακμζμπμζδηζηυ ζφζηδια ημο αζεεκμφξ, δ πνήζδ αοηχκ ηςκ πνςηεσκχκ ςξ θάνιαηα είκαζ αηυιδ πενζμνζζιέκδ θυβς ηδξ ανκδηζηήξ ακμζμακηαπυηνζζδξ. Χξ πανάδεζβια ακαθένεηαζ δ επακαθαιαακυιεκδ πμνήβδζδ ακενχπζκδξ ζκζμοθίκδξ πμο πανήπεδηε ιε βεκεηζηή ιδπακζηή ηαζ ανέεδηε κα πνμάβεζ ηδκ παναβςβή ακηζζςιάηςκ ζε ζδιακηζηυ πμζμζηυ αζεεκχκ ακ ηαζ ηέημζα ακμζμακηίδναζδ ζοκήεςξ δεκ ακηακαηθά ζε αολδιέκεξ δυζεζξ. Δπίζδξ, ιενζημί αζεεκείξ πμο ζοιιεηείπακ ζε ηθζκζηέξ δμηζιέξ ιε ακαζοκδοαζιέκδ IL-2 εηθναζιέκδ ζε Escherichia coli ακέπηολακ ακηζζχιαηα ζηδκ πνςηεΐκδ (43). 49

50 ηζξ ιεθέηεξ ημοξ πάκς ζηδκ πεβηοθίςζδ μζ Abuchowski et al. έδεζλακ υηζ δ PEG ζφγεολδ ηαηαζηέθθεζ ηδκ ακμζμβμκζηυηδηα ηαζ ακηζβμκζηυηδηα ηδξ πνςηεΐκδξ (44). Η εοενβεηζηή επίδναζδ ηδξ πεβηοθίςζδξ ζηδκ ακμζμηαηαζημθή επζαεααζχεδηε απυ έκακ ανζειυ ιεθεηχκ πμο δζελήπεδζακ ιε άθθεξ πνςηεΐκεξ (45). ε θίβεξ πενζπηχζεζξ, δ PEG ζφγεολδ ανέεδηε επίζδξ υηζ ιεηαηνέπεζ ηζξ πνςηεΐκεξ πμο πνμάβμοκ ηδκ ακμζμπμζδηζηή απάκηδζδ ζε πνςηεΐκεξ πμο πνμάβμοκ ηδκ ακμζμθμβζηή ακημπή (46). Χζηυζμ, μζ ζδζυηδηεξ ηςκ ζογεοβιάηςκ είκαζ ζοπκά απνυαθεπηεξ θυβς ημο υηζ ελανηχκηαζ απυ έκα ζφκμθμ παναιέηνςκ υπςξ είκαζ δ πνςηεΐκδ, ημ πμθοιενέξ ηαεχξ ηαζ μζ θοζζημπδιζηέξ ζδζυηδηεξ μθυηθδνμο ημο ζοιπθυημο (47). ε υ,ηζ αθμνά ζηδκ απμιάηνοκζδ απυ ημ ακμζμπμζδηζηυ ζφζηδια, δ πμνήβδζδ ηςκ PEG πνςηεσκχκ ανέεδηε υηζ πανάβεζ ακηζζχιαηα έκακηζ ημο πμθοιενμφξ, ηδξ πνςηεΐκδξ ηαζ ημο ζογεφβιαημξ, ηα μπμία εκδέπεηαζ είηε κα ιεζχκμοκ είηε υπζ ημκ πνυκμ παναιμκήξ ημο ζογεφβιαημξ ζηδκ ηοηθμθμνία ημο αίιαημξ. Αλίγεζ κα ζδιεζςεεί ςζηυζμ υηζ μζ ηθζκζηέξ εκδείλεζξ εκάκηζαξ επίδναζδξ πάνδ ζηδκ PEG ακμζμβμκζηυηδηα δεκ έπoοκ ακαθενεεί. Αοηυ μθείθεηαζ πζεακυηαηα ζηδκ παιδθή πμζυηδηα πμνδβμφιεκμο πμθοιενμφξ. ΗΑ. Οδνί ρνξήγεζεο ηωλ ζπδεπγκάηωλ PEG Ακ ηαζ ηα ζογεφβιαηα πνςηεσκχκ πμνδβμφκηαζ ζοκήεςξ εκδμθθέαζα, έπμοκ ςζηυζμ ιεθεηδεεί ηαζ άθθεξ πανεκηενζηέξ μδμί. PEGs παιδθμφ ΜΒ πμο πμνδβήεδηακ οπμδυνζα, εκδμπενζημκασηά ηαζ εκδμιοζηά απμιαηνφκεδηακ ηαπφηαηα απυ ημ ζδιείμ έβποζδξ (48). Χζηυζμ, δ παναιμκή ζημ ζδιείμ έβποζδξ είκαζ πενζζζυηενμ παναηεηαιέκδ ηαεχξ ημ ΜΒ ημο PEG αολάκεηαζ. Αοηή δ ζοιπενζθμνά παναθθδθίγεζ υ,ηζ είπε ανεεεί βζα ηα ζογεφβιαηα PEG. Μεθέηεξ ζηα θανιαημηζκδηζηά πνμθίθ ηςκ ζογεοβιάηςκ πμο πμνδβήεδηακ εκδμπενζημκασηά, οπμδυνζα ηαζ εκδμιοζηά δζελήπεδζακ βζα ηδκ αδεκζηή απαιζκάζδ- PEG, αζπαναβζκάζδ- PEG ηαζ SOD-PEG υπςξ θαίκεηαζ ζημ ζπήια 3 (49,50).Οζ ιεθέηεξ έδεζλακ υηζ δ αζμδζαεεζζιυηδηα ηςκ ζογεοβιάηςκ επδνεάγεηαζ απυ ηδκ μδυ πμνήβδζδξ. Σα δεδμιέκα ημο πίκαηα 3 έδεζλακ υηζ ζε ζφβηνζζδ ιε ηδκ εκδμθθέαζα πμνήβδζδ (100%), δ ζοζηειζηή αζμδζαεεζζιυηδηα (AUC ζημ αίια) ηδξ SOD-PEG ανέεδηε κα είκαζ 71, 54 ηαζ 29% ιεηά απυ εκδμπενζημκασηή, εκδμιοσηή ηαζ οπμδυνζα πμνήβδζδ ακηίζημζπα, εκχ ζε ζφβηνζζδ ιε ηδ 50

51 θοζζηή SOD πμο πμνδβήεδηε ιέζς ηδξ ίδζαξ μδμφ, δ ζοζηειζηή δζαεεζζιυηδηα ηςκ ζογεοβιάηςκ ήηακ πενίπμο 100-θμνέξ ορδθυηενδ. Η ιέβζζηδ ζοβηέκηνςζδ ειθακίγεηαζ ζε ιεβαθφηενμ πνυκμ ιεηά ηδκ εκδμιοζηή ηαζ οπμδυνζα πμνήβδζδ ζε ζφβηνζζδ ιε ηδκ εκδμθθέαζα ηαζ εκδμπενζημκασηή. Αοηή δ ζοιπενζθμνά ηδξ PEG ηαζ ημο ζογεφβιαημξ PEG ζοιθςκεί ιε ηδ πενζμνζζιέκδ ηίκδζδ ηςκ ιεβάθςκ ιμνίςκ ζημ ζχια ηαζ ημοξ αζμθμβζημφξ θναβιμφξ πμο πνέπεζ κα λεπεναζημφκ (πίκαηαξ 3). Εικόνα 19. Φανιαημηζκδηζηά πνμθίθ ηδξ PEG-SOD ζε επίιοεξ ιεηά απυ εκδμθθέαζα, εκδμπενζημκασηή, εκδμιοζηή ηαζ οπμδυνζα πμνήβδζδ (Veronese et al. ) PEG-SOD Πίνακαρ 3. διαζία ηδξ μδμφ πμνήβδζδξ ζηδ θανιαημηζκδηζηή ζοιπενζθμνά ηδξ Σμ οπενμλείδζμ ζογεφηηδηε ιε έκα PEG 5kDa.(Veronese et al.). Πενίπμο 18 αιζκμιάδεξ SOD παναβμκημπμζήεδηακ εκχ δ εκγοιζηή δναζηδνζυηδηα πανέιεζκε ζημ επίπεδμ ημο 75% ημο ανπζημφ εκγφιμο. Η ζοζηειζηή αζμδζαεεζζιυηδηα εηθνάζηδηε ςξ % AUC ηαζ οπμθμβίζηδηε απυ ηδκ ηζιή AUC ςξ πμζμζηυ αοηήξ πμο πνμέηορε απυ ηδκ εκδμθθέαζα πμνήβδζδ. Σα δεδμιέκα πνμέηορακ απυ ιεθέηδ ηςκ Veronese et al. Δπζπθέμκ, ιεηαβεκέζηενεξ ιεθέηεξ έδεζλακ υηζ δ πεβηοθίςζδ ιενζηέξ θμνέξ πνμάβεζ ηδκ ζημιαηζηή (oral) απμννυθδζδ ηςκ πνςηεσκζηχκ θανιάηςκ. Δζδζηυηενα, δ πνμζηυθθδζδ ιενζηχκ αθοζίδςκ PEG 6kDa ζε G-CSF πανίγεζ πανάβςβα ιε ειπθμοηζζιέκδ εκηενζηή απμννυθδζδ είηε ιε άπαλ (bolus) είηε ιε ζοκεπή έβποζδ (infusion). H εκδμδςδεηαδαηηοθζηή 51

52 πμνήβδζδ ηδξ G-CSF-PEG ακηακαηθά ζηζξ θανιαημθμβζηέξ ακηζδνάζεζξ, εκχ ηαιία αζμθμβζηή δναζηδνζυηδηα δεκ παναηδνήεδηε ιε ηδκ εκδμδςδεηαδαηηοθζηή πμνήβδζδ ηδξ θοζζηήξ-πνςηεΐκδξ (51). 52

53 ΚΕΥΑΛΑΙΟ ΣΡΙΣΟ:ΤΓΡΗ ΦΡΨΜΑΣΟΓΡΑΥΙΑ ΤΧΗΛΗ ΑΠΟΔΟΗ 53

54 Α. ΤΓΡΖ ΥΡΧΜΑΣΟΓΡΑΦΗΑ ΤΦΖΛΖ ΑΠΟΓΟΖ Γεκζηά, ζηδκ ηαθφηενδ πενίπηςζδ μζ ηεπκζηέξ πδιζηήξ ακάθοζδξ είκαζ επζθεηηζηέξ. Λίβεξ ηεπκζηέξ, ακ υπζ ηαιία, είκαζ πναβιαηζηά ελεζδζηεοιέκεξ. οκεπχξ μ δζαπςνζζιυξ ημο ακαθφηδ απυ "εκ δοκάιεζ" πανειπμδζζηέξ ζοπκά απμηεθεί ζηάδζμ γςηζηήξ ζδιαζίαξ ζηζξ ακαθοηζηέξ δζαδζηαζίεξ. Έςξ ηα ιέζα ημο εζημζημφ αζχκα μζ ακαθοηζημί δζαπςνζζιμί πναβιαημπμζμφκηακ ηονίςξ ιε ηθαζζηέξ ιεευδμοξ, υπςξ είκαζ δ ηαείγδζδ, δ απυζηαλδ ηαζ δ εηπφθζζδ. Χζηυζμ, ζήιενα μζ ακαθοηζημί δζαπςνζζιμί πναβιαημπμζμφκηαζ ιε πνςιαημβναθία, ζδζαίηενα υηακ ηα δείβιαηα είκαζ πμθφπθμηα ηαζ απμηεθμφκηαζ απυ πθήεμξ μοζζχκ. Οζ εθανιμβέξ ηδξ πνςιαημβναθίαξ αολήεδηακ ιε "εηνδηηζηυ" νοειυ ηαηά ηα ηεθεοηαία πεκήκηα πνυκζα ηαζ αοηυ δεκ μθείθεηαζ ιυκμ ζηδκ ακάπηολδ κέςκ ηφπςκ πνςιαημβναθζηχκ ηεπκζηχκ, αθθά ηαζ ζηδ ζοκεπχξ αολακυιεκδ γήηδζδ απυ ημοξ επζζηήιμκεξ ηαθφηενςκ ιεευδςκ βζα ημκ παναηηδνζζιυ πμθφπθμηςκ ιζβιάηςκ. Η ηνμιαηηζηή απήπδζδ ηςκ ιεευδςκ αοηχκ απμδεζηκφεηαζ ηαζ απυ ημ υηζ ημ ανααείμ Nobel Υδιείαξ ημο έημοξ 1952 δυεδηε ζημοξ A. J. P. Martin ηαζ R. L. Synge βζα ηζξ ακαηαθφρεζξ ημοξ ζημ πεδίμ ηδξ πνςιαημβναθίαξ. Ίζςξ πενζζζυηενμ εκηοπςζζαηυ είκαζ ημ βεβμκυξ υηζ 12 ανααεία Nobel, απυ ημ 1937 έςξ ημ 1972, δυεδηακ ζε επζζηήιμκεξ ηςκ μπμίςκ δ ένεοκα ααζίζεδηε ζε ζδιακηζηυ ααειυ ζε πνςιαημβναθζηέξ ιεευδμοξ (53). Α1) Δθαξκνγέο ηεο ρξωκαηνγξαθίαο Η πνςιαημβναθία απμηεθεί πθέμκ ηδκ ηονζυηενδ ηεπκζηή δζαπςνζζιμφ ζοββεκχκ πδιζηχκ μοζζχκ. Δπζπθέμκ, πνδζζιμπμζείηαζ βζα ηδκ πμζμηζηή ηαοημπμίδζδ ηαζ ημκ πμζμηζηυ πνμζδζμνζζιυ ηςκ δζαπςνζγυιεκςκ μοζζχκ. ημ ηιήια αοηυ ελεηάγμκηαζ ιενζηά βεκζηά παναηηδνζζηζηά ηδξ πνςιαημβναθίαξ ςξ ενβαθείμο εηηέθεζδξ ιζαξ πδιζηήξ ακάθοζδξ. 54

55 Α2) Πνηνηηθή αλάιπζε Απυ έκα πνςιαημβνάθδια ιπμνεί κα θδθεεί ιυκμ έκα είδμξ πμζμηζηήξ πθδνμθμνίαξ βζα ηάεε μοζία ζε έκα δείβια: μ πνυκμξ ηαηαηνάηδζήξ ηδξ ή δ εέζδ ηδξ ζε ιζα ζηαηζηή θάζδ ιεηά απυ ιζα μνζζιέκδ πενίμδμ έηθμοζδξ. Πνυζεεηα δεδμιέκα ιπμνμφκ κα θδθεμφκ απυ πνςιαημβναθήιαηα ιε δζάθμνεξ ηζκδηέξ ηαζ ζηαηζηέξ θάζεζξ ηαζ ζε δζάθμνεξ εενιμηναζίεξ έηθμοζδξ. Χζηυζμ, δ πθδνμθυνδζδ πμο ιπμνεί κα θδθεεί απυ ηδ πνςιαημβναθία είκαζ πμθφ πενζμνζζιέκδ ζε ζπέζδ ιε ηδκ πθδνμθυνδζδ απυ έκα ηαζ ιυκμ θάζια IR, NMR ή έκα θάζια ιαγχκ. Δπζπθέμκ, ηα θαζιαηζηά ιήηδ ηφιαημξ ιπμνμφκ κα πνμζδζμνζζεμφκ ιε πμθφ ιεβαθφηενδ επακαθδρζιυηδηα ζε ζπέζδ ιε ημοξ πνυκμοξ ηαηαηνάηδζδξ ηςκ πνςιαημβναθδιάηςκ (tr). Απυ ηα πνμδβμφιεκα δεκ πνέπεζ κα αβεζ ημ ζοιπέναζια υηζ δ πνςιαημβναθία δεκ ανίζηεζ ζδιακηζηέξ εθανιμβέξ ζηδκ πμζμηζηή ακάθοζδ. Ακηίεεηα, πνδζζιμπμζείηαζ εονφηαηα ςξ ενβαθείμ βζα ηδ δζαπίζηςζδ ηδξ πανμοζίαξ ή απμοζίαξ ζοζηαηζηχκ ζε ιίβιαηα, πμο πενζέπμοκ έκα πενζμνζζιέκμ ανζειυ μοζζχκ βκςζηήξ ηαοηυηδηαξ. Γζα πανάδεζβια, 30 ή ηαζ πενζζζυηενα αιζκμλέα εκυξ οδνμθφιαημξ πνςηεΐκδξ, ιπμνμφκ κα ακζπκεοεμφκ ιε ζπεηζηά ιεβάθμ ααειυ αεααζυηδηαξ απυ έκα πνςιαημβνάθδια. 'Όιςξ ηαζ ζηδκ πενίπηςζδ αοηή, δ επζαεααίςζδ ηδξ ηαοηυηδηαξ ηςκ μοζζχκ απαζηεί θαζιαημζημπζηή ή πδιζηή ελέηαζδ ηςκ απμιμκμφιεκςκ ζοζηαηζηχκ. Χζηυζμ, εα πνέπεζ κα ημκζζεεί υηζ εεηζηή θαζιαημζημπζηή ηαοημπμίδζδ ιπμνεί κα είκαζ ακέθζηηδ ζε έκα ηυζμ πμθφπθμημ ιίβια, εάκ δεκ πνμδβδεεί έκαξ πνμηαηανηηζηυξ πνςιαημβναθζηυξ δζαπςνζζιυξ. Δπμιέκςξ δ πνςιαημβναθία απμηεθεί έκα πνχημ ζηάδζμ γςηζηήξ ζδιαζίαξ ζε ιζα πμζμηζηή θαζιαημζημπζηή ακάθοζδ. Ακ ηαζ ηα πνςιαημβναθήιαηα δεκ μδδβμφκ ζε ιζα εεηζηή ηαοημπμίδζδ ηςκ μοζζχκ ζε έκα δείβια, ςζηυζμ απμηεθμφκ έκδεζλδ ηδξ απμοζίαξ μνζζιέκςκ εκχζεςκ. Έηζζ, εάκ έκα δείβια δεκ πανέπεζ ιζα ημνοθή ζημκ ίδζμ πνυκμ ηαηαηνάηδζδξ εκυξ πνμηφπμο, ημ μπμίμ ιεηνείηαζ ηάης απυ ηζξ ίδζεξ ζοκεήηεξ, ιπμνεί κα εεςνδεεί αέααζδ δ απμοζία ηδξ ζοβηεηνζιέκδξ έκςζδξ (ή είκαζ πανμφζα ζε επίπεδα ζοβηέκηνςζδξ ηάης απυ ημ υνζμ ακίπκεοζδξ ηδξ ιεευδμο). 55

56 Α3) Πνζνηηθή αλάιπζε Η πνςιαημβναθία μθείθεζ ημκ ηαηαηυνοθμ νοειυ ακάπηολδξ ηαηά ηζξ ηέζζενζξ ηεθεοηαίεξ δεηαεηίεξ ζηδκ ηαπφηδηά ηδξ, ηδκ απθυηδηα, ζημ ζπεηζηά παιδθυ ηυζημξ ηαζ ηδκ εονεία εθανιμζζιυηδηά ηδξ ςξ ενβαθείμ δζαπςνζζιχκ. Χζηυζμ, είκαζ αιθίαμθμ ηαηά πυζμ δ πνςιαημβναθία εα έανζζηε ηυζεξ πμθθέξ εθανιμβέξ, εάκ δεκ πανείπε ηδ δοκαηυηδηα πμζμηζημφ πνμζδζμνζζιμφ ηςκ δζαπςνζγυιεκςκ μοζζχκ. Η πμζμηζηή πνςιαημβναθία ζηήθδξ ααζίγεηαζ ζε ζφβηνζζδ ημο φρμοξ ή ηδξ επζθάκεζαξ ηδξ ημνοθήξ ημο ακαθφηδ ιε ηζξ ακηίζημζπεξ ημνοθέξ εκυξ ή πενζζζυηενςκ πνμηφπςκ. Γζα ηδκ επίπεδδ πνςιαημβναθία, δ επζθάκεζα πμο ηαθφπηεζ ηάεε δζαπςνζγυιεκδ μοζία απμηεθεί ηδκ ακαθοηζηή πανάιεηνμ. Με ηαηάθθδθμ έθεβπμ ηςκ ζοκεδηχκ, μζ πανάιεηνμζ αοηέξ ιεηααάθθμκηαζ βναιιζηά ιε ηδ ζοβηέκηνςζδ. Β. ΤΓΡΖ ΥΡΧΜΑΣΟΓΡΑΦΗΑ ΤΦΖΛΖ ΑΠΟΓΟΖ Β1) Πεδίν εθαξκνγώλ ηεο ΖPLC Η οβνή πνςιαημβναθία ορδθήξ απυδμζδξ είκαζ δ πζμ δζαδεδμιέκδ απ υθεξ ηζξ ακαθοηζηέξ ηεπκζηέξ δζαπςνζζιμφ, ιε εηήζζεξ πςθήζεζξ ζε υνβακα HPLC πμο θεάκμοκ ηα δζζεηαημιιφνζα δμθάνζα. Οζ θυβμζ αοηήξ ηδξ απμδμπήξ ηδξ ηεπκζηήξ είκαζ δ εοαζζεδζία ηδξ, δ εφημθδ πνμζανιμβή ηδξ ζε αηνζαείξ πμζμηζημφξ πνμζδζμνζζιμφξ, δ ηαηαθθδθυηδηα ηδξ βζα δζαπςνζζιμφξ ιδ πηδηζηχκ ή εενιζηά εοαίζεδηςκ ζοζηαηζηχκ ηαζ ηονίςξ, δ εθανιμζζιυηδηά ηδξ ζε πνμζδζμνζζιμφξ μοζζχκ πνςηίζημο εκδζαθένμκημξ βζα ηδ αζμιδπακία, ημ δδιυζζμ ηαζ πμθθά επζζηδιμκζηά πεδία. Παναδείβιαηα απμηεθμφκ ηα αιζκμλέα, μζ πνςηεΐκεξ, ηα κμοηθεσηά μλέα, μζ οδνμβμκάκεναηεξ, μζ οδαηάκεναηεξ, ηα θανιαηεοηζηά, ηα ηενπεκμεζδή, ηα θοημθάνιαηα, ηα ακηζαζμηζηά, ηα ζηενμεζδή, μζ μνβακμιεηαθθζηέξ εκχζεζξ ηαζ ιζα πμζηζθία ακυνβακςκ μοζζχκ. ηδκ εζηυκα 20 απεζημκίγεηαζ ημ πχξ μζ δζάθμνεξ ηεπκζηέξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ ηείκμοκ κα αθθδθμζοιπθδνχκμκηαζ, ζε υ,ηζ αθμνά ηα πεδία εθανιμβχκ. οκεπχξ, βζα μοζίεξ ιε ιμνζαηά αάνδ ιεβαθφηενα απυ , πνδζζιμπμζείηαζ ζοπκά δ οβνή 56

57 πνςιαημβναθία ιμνζαημφ απμηθεζζιμφ ακ ηαζ ζήιενα είκαζ δοκαηυκ ηέημζεξ εκχζεζξ κα πνμζδζμνίγμκηαζ ιε πνςιαημβναθία ηαηακμιήξ ακηίζηνμθδξ θάζδξ. Γζα ζμκηζηέξ εκχζεζξ παιδθμφ ιμνζαημφ αάνμοξ πνδζζιμπμζείηαζ εονέςξ δ πνςιαημβναθία ζμκακηαθθαβήξ. Δπζπθέμκ, δ παναθθαβή αοηή ηδξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ πνδζζιμπμζείηαζ ζοπκά βζα δζαπςνζζιμφξ εκχζεςκ, πμο ακήημοκ ζηδκ ίδζα μιυθμβδ ζεζνά. Η πνςιαημβναθία πνμζνυθδζδξ ζοπκά επζθέβεηαζ βζα δζαπςνζζιυ ιδ-πμθζηχκ εκχζεςκ, ζζμιενχκ ηαζ ηαηδβμνίεξ εκχζεςκ, υπςξ είκαζ μζ αθεζθαηζημί οδνμβμκάκεναηεξ απυ αθεζθαηζηέξ αθημυθεξ (54). Εικόνα 20. Δθανιμβέξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ 57

58 Β2) Οξγαλνινγία πγξήο ρξωκαηνγξαθίαο Γζα κα ακαπηοπεμφκ ζηακμπμζδηζηέξ ηαπφηδηεξ νμήξ ημο οβνμφ έηθμοζδξ υηακ πνδζζιμπμζμφκηαζ οθζηά πθήνςζδξ απμηεθμφιεκα απυ ζςιαηίδζα ιεβέεμοξ 2 έςξ 10ιm, πμο είκαζ ζοκδεζζιέκα ζηδ ζφβπνμκδ οβνή πνςιαημβναθία, μζ απαζημφιεκεξ πζέζεζξ απυ ηζξ ακηθίεξ θεάκμοκ ηζξ ιενζηέξ πζθζάδεξ psi (pounds per square inch, 1 atm = 14,696 psi) (56-58). Χξ ζοκέπεζα αοηχκ ηςκ ορδθχκ πζέζεςκ, δ μνβακμθμβία ηδξ HPLC είκαζ πμθοπθμηυηενδ ηαζ δαπακδνυηενδ απυ ηδκ μνβακμθμβία άθθςκ εζδχκ πνςιαημβναθίαξ. ηδκ εζηυκα 21 πανμοζζάγμκηαζ ηα ζδιακηζηυηενα ηιήιαηα απυ ηα μπμία απμηεθείηαζ ιζα δζάηαλδ HPLC. Εικόνα 21. πδιαηζηή πανάζηαζδ ιζαξ δζάηαλδξ HPLC. Β2α) Γνρεία θηλεηήο θάζεο θαη ζπζηήκαηα επεμεξγαζίαο δηαιπηώλ Έκα ζφβπνμκμ ζφζηδια HPLC είκαζ εθμδζαζιέκμ ιε έκα ή πενζζζυηενα οάθζκα ή ακμλείδςηα δμπεία, ηαεέκα απυ ηα μπμία πενζέπεζ 200 έςξ 1000 ml δζαθφηδ. Σα δμπεία είκαζ ζοπκά εθμδζαζιέκα ιε ιέζα απμιάηνοκζδξ ηςκ δζαθοιέκςκ αενίςκ, ζοκήεςξ μλοβυκμο ηαζ αγχημο, πμο πανειπμδίγμοκ ημκ ζπδιαηζζιυ θοζαθίδςκ ζηδ ζηήθδ ηαζ ζημκ ακζπκεοηή ηςκ ζοζηδιάηςκ. Οζ θοζαθίδεξ αοηέξ πνμηαθμφκ δζεφνοκζδ ηςκ 58

59 ημνοθχκ. Δπζπθέμκ, ειπμδίγμοκ ζοπκά ηδ ζςζηή θεζημονβία ημο ακζπκεοηή. Οζ απαενςηέξ ιπμνεί κα απμηεθμφκηαζ απυ έκα ζφζηδια άκηθδζδξ ηεκμφ, έκα ζφζηδια απυζηαλδξ, δζαηάλεζξ πμο εενιαίκμοκ ηαζ ακαδεφμοκ ημοξ δζαθφηεξ ή (υπςξ θαίκεηαζ ζηδκ εζηυκα 21) απυ ζοζηήιαηα εζζαβςβήξ ιζηνχκ θοζαθίδςκ αδνακμφξ αενίμο παιδθήξ δζαθοηυηδηαξ. οπκά ηα ζοζηήιαηα αοηά πενζθαιαάκμοκ θίθηνα απμιάηνοκζδξ ζηυκδξ ηαζ αζςνμφιεκςκ ζςιαηζδίςκ απυ ημοξ δζαθφηεξ βζα κα πνμθδθεμφκ πζεακέξ αθάαεξ ζηζξ ακηθίεξ ή ζηα ζοζηήιαηα έβποζδξ, υπςξ ηαζ δ έιθναλδ ηδξ ζηήθδξ. Όπςξ δείπκεηαζ ζηδκ εζηυκα 21, δεκ είκαζ ακαβηαίμ μζ απαενςηέξ ηαζ ηα θίθηνα κα είκαζ εκζςιαηςιέκα ηιήιαηα εκυξ ζοζηήιαημξ HPLC. Γζα πανάδεζβια, έκαξ απθυξ ηνυπμξ επελενβαζίαξ δζαθοηχκ, πνζκ ηδκ εζζαβςβή ημοξ ζημ δμπείμ, είκαζ δ δζήεδζδ ημοξ ιέζς ιζηνμπμνχδμοξ θίθηνμο (millipore filter) ιε εθανιμβή ηεκμφ. Η επελενβαζία αοηή απμιαηνφκεζ αένζα ηαζ αζςνμφιεκα ζςιαηίδζα. Ο δζαπςνζζιυξ ζημκ μπμίμ πνδζζιμπμζείηαζ έκαξ δζαθφηδξ ζηαεενήξ ζφζηαζδξ ηαθείηαζ ζζμηναηζηή έηθμοζδ (isocratic elution). οπκά, δ απυδμζδ δζαπςνζζιμφ εκζζπφεηαζ ζδιακηζηά ιε ηδ ααειζδςηή έηθμοζδ (gradient elution). Δδχ πνδζζιμπμζμφκηαζ δφμ ή ηνία ζοζηήιαηα δζαθοηχκ, πμο δζαθένμοκ ζδιακηζηά ςξ πνμξ ηδκ πμθζηυηδηα. Αθμφ ανπίζεζ δ έηθμοζδ, μ θυβμξ ηςκ δζαθοηχκ ιεηααάθθεηαζ ιε ηνυπμ πνμβναιιαηζζιέκμ άθθεξ θμνέξ ζοκεπχξ ηαζ άθθεξ ιε ιζα ζεζνά αδιάηςκ. Σα ζφβπνμκα ζοζηήιαηα HPLC ζοπκά είκαζ εθμδζαζιέκα ιε δζαηάλεζξ, μζ μπμίεξ εζζάβμοκ δζαθφηεξ απυ δφμ ή πενζζζυηενα δμπεία ζε εάθαιμ ακάιζλδξ ιε νοειμφξ πμο ιεηααάθθμκηαζ ζοκεπχξ. Ο θυβμξ ηςκ υβηςκ ηςκ δζαθοηχκ ιπμνεί κα ιεηααάθθεηαζ ςξ πνμξ ημκ πνυκμ βναιιζηά ή θμβανζειζηά. Β2β) πζηήκαηα άληιεζεο Οζ απαζηήζεζξ εκυξ ζοζηήιαημξ άκηθδζδξ ζηδκ HPLC είκαζ αοζηδνέξ ηαζ πενζθαιαάκμοκ: (1) ακάπηολδ πζέζεςκ ιενζηχκ πζθζάδςκ psi, (2) απαθθαβή απυ παθιμφξ νμήξ, (3) ηαπφηδηεξ νμήξ πμο ηοιαίκμκηαζ απυ 0,1 έςξ 10 ml/min, (4) έθεβπμ νμήξ ηαζ επακαθδρζιυηδηα νμήξ 0,5% ή ηαθφηενδ, (5) ηιήιαηα ακεεηηζηά ζηδ δζάανςζδ (θθάκηγεξ απυ ακμλείδςημ πάθοαα ή Teflon). Σμκίγεηαζ υηζ μζ ορδθέξ πζέζεζξ, απυ ηζξ 59

60 ακηθίεξ ηδξ HPLC, δεκ δδιζμονβμφκ ηίκδοκμ έηνδλδξ επεζδή ηα οβνά δεκ είκαζ πμθφ ζοιπζέζζια. οκεπχξ νήλδ εκυξ ηιήιαημξ ημο ζοζηήιαημξ ιπμνεί κα μδδβήζεζ ιυκμ ζε δζαννμή ημο δζαθφηδ. Χζηυζμ, ιζα ηέημζα δζαννμή ιπμνεί κα πνμηαθέζεζ πονηαβζά. οκακημφιε ηνεζξ ηφπμοξ ακηθζχκ, πμο μ ηαεέκαξ έπεζ ηα πθεμκεηηήιαηα ηαζ ηα ιεζμκεηηήιαηα ημο: παθζκδνμιζηέξ ακηθίεξ, ακηθίεξ ζφνζββαξ ή εηηυπζζδξ ηαζ ακηθίεξ πκεοιαηζηέξ ή ζηαεενήξ πίεζδξ. Β2γ) πζηήκαηα έγρπζεο δείγκαηνο οπκά, μ πενζμνζζηζηυξ πανάβμκηαξ ζηδκ επακαθδρζιυηδηα ηςκ ιεηνήζεςκ ζηδκ οβνή πνςιαημβναθία είκαζ μ ηνυπμξ εζζαβςβήξ ηςκ δεζβιάηςκ ζηδ ζηήθδ. Σμ πνυαθδια επζδεζκχκεηαζ ιε ηδ δζεφνοκζδ ηςκ ημνοθχκ, πμο πνμηαθεί δ οπενθυνηςζδ ηςκ ζηδθχκ. οκεπχξ, μζ υβημζ πνέπεζ κα είκαζ μζ εθάπζζημζ δοκαημί, απυ ιενζηέξ δεηάδεξ ιl έςξ 500 ιl. Δπζπθέμκ, είκαζ ζδιακηζηυ κα εζζάβεηαζ ημ δείβια πςνίξ κα πνμηαθείηαζ απμζοιπίεζδ ημο ζοζηήιαημξ. Ο παθαζυηενμξ ηαζ απθυξ ηνυπμξ εζζαβςβήξ δείβιαημξ ήηακ δ έβποζδ ιε ζφνζββα ιέζς εκυξ εθαζηζημφ δζαθνάβιαημξ βκςζημφ ςξ septum. Γζα ημκ ζημπυ αοηυ πνδζζιμπμζμφκηαζ ιζηνμζφνζββεξ ζπεδζαζιέκεξ κα ακηέπμοκ ζε πζέζεζξ ιέπνζ 1500 psi. Γοζηοπχξ, δ επακαθδρζιυηδηα ηδξ έβποζδξ ιε ζφνζββα ζπάκζα είκαζ ηαθφηενδ απυ 2% έςξ 3%. Η ζοκδεέζηενα πνδζζιμπμζμφιεκδ ιέεμδμξ εζζαβςβήξ δείβιαημξ ζηδκ οβνή πνςιαημβναθία ααζίγεηαζ ζε ανυπμοξ δεζβιάηςκ υπςξ αοηυξ πμο θαίκεηαζ ζηδκ εζηυκα 22. Οζ δζαηάλεζξ αοηέξ είκαζ ζοπκά έκα αθθδθέκδεημ ηιήια εκυξ οβνμπνςιαημβνάθμο ιε ανυπμοξ ιεηααθδημφ υβημο απυ 5 έςξ 500 ιl. Με ανυπμοξ αοημφ ημο ηφπμο εζζάβμκηαζ δείβιαηα ζε πζέζεζξ ιέπνζ 7000 psi ιε επακαθδρζιυηδηα ιενζηχκ δεηάηςκ %. Δπίζδξ είκαζ δζαεέζζιεξ ααθαίδεξ έβποζδξ βζα ιζηνμυβημοξ ιε ανυπμοξ δείβιαημξ απυ 0,5 έςξ 5 ιl. 60

61 Εικόνα 22. Βνυπμξ δεζβιαημθδρίαξ οβνμπνςιαημβναθίαξ. Με ηδ πεζνμθααή ηδξ ααθαίδαξ, υπςξ δείπκεηαζ ζημ ανζζηενυ ζπήια, μ ανυπμξ βειίγεζ απυ ηδ ζφνζββα ηαζ δ ηζκδηή θάζδ νέεζ απυ ηδκ ακηθία πνμξ ηδ ζηήθδ. Όηακ δ ααθαίδα ημπμεεηδεεί ζηδ εέζδ πμο δείπκεηαζ ζημ δελζυ ζπήια, μ ανυπμξ πανειαάθθεηαζ ιεηαλφ ακηθίαξ ηαζ ζηήθδξ, μπυηε δ ηζκδηή θάζδ ιεηαθένεζ ημ δείβια πνμξ ηδ ζηήθδ Γ. ηήιεο πγξήο ρξωκαηνγξαθίαο Οζ ζηήθεξ ηδξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ ζοκήεςξ ηαηαζηεοάγμκηαζ απυ ζςθήκεξ ιζηνήξ δζαιέηνμο απυ ακμλείδςημ πάθοαα ακ ηαζ πενζζηαζζαηά πνδζζιμπμζμφκηαζ ηαζ παπφημζπμζ οάθζκμζ ζςθήκεξ. Οζ ηεθεοηαίμζ πνδζζιμπμζμφκηαζ ζε πζέζεζξ ιζηνυηενεξ απυ 600 psi. Δηαημκηάδεξ παηεηανζζιέκςκ ζηδθχκ ιε δζαθμνεηζηυ ιέβεεμξ ηαζ οθζηυ πθήνςζδξ είκαζ δζαεέζζιεξ απυ δζαθμνεηζημφξ ηαηαζηεοαζηέξ. (60). Γ1) Αλαιπηηθέο ζηήιεο Οζ πενζζζυηενεξ ζηήθεξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ έπμοκ ιήημξ απυ 10 έςξ 30 cm. οκήεςξ μζ ζηήθεξ είκαζ εοεφβναιιεξ. Όηακ απαζηείηαζ επζιήηοκζή ημοξ, αοηή επζηοβπάκεηαζ ιε ζφγεολδ δφμ ή πενζζζμηένςκ ζηδθχκ ζε ζεζνά. Πενζζηαζζαηά πνδζζιμπμζμφκηαζ ζπεζνμεζδείξ ζηήθεξ ακ ηαζ θυβς ζπήιαημξ δ απμηεθεζιαηζηυηδηά 61

62 ημοξ δεκ είκαζ ηαθή. Η εζςηενζηή δζάιεηνμξ ηςκ ζηδθχκ είκαζ ζοκήεςξ 4 έςξ 10 mm ηαζ ημ ιέβεεμξ ζςιαηζδίςκ ημο οθζημφ πθήνςζδξ είκαζ 5 ή 10 ιm. Η πζμ ζοκδεζζιέκδ ζηήθδ έπεζ ιήημξ 25 cm, εζςηενζηή δζάιεηνμ 4,6 mm ηαζ οθζηυ πθήνςζδξ ιε ζςιαηίδζα ιεβέεμοξ 5 ιm. ηήθεξ αοημφ ημο ηφπμο δζαεέημοκ έςξ πθάηεξ/m. Ονζζιέκμζ ηαηαζηεοαζηέξ πνμζθένμοκ ζηήθεξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ ορδθήξ ηαπφηδηαξ, ιε ιζηνυηενεξ δζαζηάζεζξ απυ αοηέξ πμο ήδδ πενζβνάθδηακ (61-63). Οζ ζηήθεξ αοηέξ έπμοκ εζςηενζηέξ δζαιέηνμοξ απυ 1 έςξ 4,6 mm ηαζ ιέβεεμξ ζςιαηζδίςκ οθζημφ πθήνςζδξ 3 έςξ 5 ιm. Σμ ιήημξ ημοξ είκαζ ιζηνυ (3 έςξ 7,5 cm). Οζ ζηήθεξ ημο ηφπμο αοημφ δζαεέημοκ ιέπνζ ηαζ πθάηεξ/m ηαζ πνμζθένμοκ ημ πθεμκέηηδια ηδξ ηαπφηδηαξ ηαζ ηδξ εθάπζζηδξ ηαηακάθςζδξ δζαθφηδ. Η ηεθεοηαία ζδζυηδηα έπεζ ζδζαίηενδ ζδιαζία, επεζδή μζ δζαθφηεξ ορδθήξ ηαεανυηδηαξ, πμο απαζημφκηαζ ζηδκ οβνή πνςιαημβναθία είκαζ δαπακδνμί ηυζμ ζηδκ αβμνά υζμ ηαζ ζηδ δζάεεζή ημοξ ςξ ενβαζηδνζαηά απυαθδηα. ε πμθθέξ εθανιμβέξ μ αοζηδνυξ έθεβπμξ ηδξ εενιμηναζίαξ ηδξ ζηήθδξ δεκ είκαζ ακαβηαίμξ ηαζ μζ ζηήθεξ θεζημονβμφκ ζε εενιμηναζία πενζαάθθμκημξ. Χζηυζμ ζοπκά θαιαάκμκηαζ ηαθφηενα πνςιαημβναθήιαηα δζαηδνχκηαξ ηδ εενιμηναζία ηδξ ζηήθδξ ζηαεενή εκηυξ ιενζηχκ δεηάηςκ ημο ααειμφ Κεθζίμο. Σα ζφβπνμκα υνβακα είκαζ ζήιενα εθμδζαζιέκα ιε εενιμζηάηεξ, πμο εθέβπμοκ ηδ εενιμηναζία ηδξ ζηήθδξ ζηδκ πενζμπή εενιμηναζζχκ δςιαηίμο ιέπνζ 100 ή 150 C ιε αηνίαεζα ιενζηχκ δεηάηςκ ημο ααειμφ. Δπίζδξ, μζ ζηήθεξ ιπμνεί κα ζοκδέμκηαζ ιε ιακδφεξ φδαημξ ηνμθμδμημφιεκμοξ απυ οδαηυθμοηνμ ζηαεενήξ εενιμηναζίαξ βζα ημκ αηνζαή έθεβπμ ηδξ εενιμηναζίαξ. ηδκ οβνή πνςιαημβναθία πνδζζιμπμζμφκηαζ δφμ ααζζημί ηφπμζ πθδνςηζηχκ οθζηχκ, μ πνχημξ ηφπμξ απμηεθείηαζ απυ ζςιαηίδζα ζθαζνμεζδή (pellicular) ηαζ μ δεφηενμξ απυ πμνχδδ. Σα πνχηα απμηεθμφκηαζ απυ ζθαζνζηά, ιδ πμνχδδ ζςιαηίδζα απυ φαθμ ή πμθοιενέξ ιε ηοπζηέξ δζαιέηνμοξ 30 έςξ 40 ιm. ηδκ επζθάκεζα ηςκ ζθαζνζδίςκ αοηχκ απμηίεεηαζ θεπηυ πμνχδεξ ζηνχια υπςξ SiO2, αθμοιίκα, ζοκεεηζηή νδηίκδ πμθοζηονεκίμο-δζαζκοθμαεκγμθίμο ή ιζα ζμκακηαθθαηηζηή νδηίκδ. Γζα ιενζηέξ εθανιμβέξ πνμζηίεεηαζ έκα επζπθέμκ ζηνχια, απμηεθμφιεκμ απυ ιζα οβνή ζηαηζηή θάζδ, πμο ζοβηναηείηαζ ιε πνμζνυθδζδ. Δκαθθαηηζηά, ηα ζθαζνίδζα ιπμνεί κα οπμζημφκ πδιζηή επελενβαζία βζα κα παναπεεί έκα μνβακζηυ επζθακεζαηυ ζηνχια. Αοηυ ημ είδμξ οθζημφ 62

63 πθήνςζδξ πνδζζιμπμζείηαζ ζοπκυηαηα βζα ηδκ ηαηαζηεοή πνμ-ζηδθχκ ηζ υπζ βζα ακαθοηζηέξ ζηήθεξ. Σμ οθζηυ πθήνςζδξ ιε αάζδ ηα πμνχδδ ζςιαηίδζα απμηεθείηαζ απυ ιζηνμζςιαηίδζα δζαιέηνμο 3 έςξ 10 ιm. Καηααάθθεηαζ ηάεε πνμζπάεεζα βζα ηδκ εθαπζζημπμίδζδ ημο εφνμοξ πενζμπήξ ιεβεεχκ ημοξ. Σα ζςιαηίδζα απμηεθμφκηαζ απυ SiO2, αθμοιίκα, ζοκεεηζηέξ νδηίκεξ πμθοζηονεκίμο-δζαζκοθμαεκγμθίμο ή ζμκακηαθθαηηζηή νδηίκδ. Σμ SiO2 είκαζ ημ ζοκδεέζηενμ οθζηυ πθήνςζδξ ζηδκ οβνμπνςιαημβναθία. Σα ζςιαηίδζα ημο SiO2 παναζηεοάγμκηαζ ιε ζοζζςιάηςζδ ζςιαηζδίςκ SiO2 ιεβέεμοξ ιζηνυηενμο απυ έκα ιm ζε ζοκεήηεξ, πμο μδδβμφκ ζημ ζπδιαηζζιυ ιεβαθφηενςκ ζςιαηζδίςκ πμθφ ζηεκήξ πενζμπήξ ηζιχκ δζαιέηνμο. Σα ζπδιαηζγυιεκα ζςιαηίδζα ζοπκά ηαθφπημκηαζ ιε θεπηά μνβακζηά ζηνχιαηα, πμο ζοκδέμκηαζ ιε ηδκ επζθάκεζα ιε πδιζηυ ή θοζζηυ ηνυπμ. ηδκ εζηυκα 23 απεζημκίγεηαζ δ ηαπφηδηα ιε ηδκ μπμία πναβιαημπμζείηαζ μ δζαπςνζζιυξ ιε ηζξ ζηήθεξ αοημφ ημο ηφπμο. Οηηχ δζαθμνεηζηά ζοζηαηζηά δζαπςνίγμκηαζ ζε πενίπμο 15 s. Η ζηήθδ έπεζ ιήημξ 4 cm, εζςηενζηή δζάιεηνμ 4 mm ηαζ ιέβεεμξ ζςιαηζδίςκ οθζημφ πθήνςζδξ 3 ιm. Καηαβναθυιεκμ ζήια Υνυκμξ, s Εικόνα 23.Ιζμηναηζηυξ δζαπςνζζιυξ ορδθήξ ηαπφηδηαξ. Κζκδηή θάζδ: 4,1% μλζηυξ αζεοθεζηέναξ ζε n-ελάκζμ. Δκχζεζξ: (1) p-λοθέκζμ, (2) ακζζυθδ, (3) μλζηυξ αεκγοθεζηέναξ, (4) θεαθζηυξ δζμηηοθεζηέναξ, (5) θεαθζηυξ δζπεκηοθεζηέναξ, (6) θεαθζηυξ δζαμοηοθεζηέναξ, (7) θεαθζηυ δζπνμποθεζηέναξ, (8) θεαθζηυξ δζαζεοθεζηέναξ 63

64 Γ2) Πξνζηαηεπηηθέο ζηήιεο οκήεςξ πνζκ απυ ηδκ ακαθοηζηή ζηήθδ, πανειαάθθεηαζ ιζα ιζηνή πνμζηαηεοηζηή ζηήθδ (guard column) ή πνμ-ζηήθδ (pre-column), βζα κα αολήζεζ ημκ πνυκμ γςήξ ηδξ απμιαηνφκμκηαξ υπζ ιυκμ ηα αζςνμφιεκα ζςιαηίδζα ηαζ ηζξ πνμζιίλεζξ απυ ημκ δζαθφηδ αθθά ηαζ ζοζηαηζηά ημο δείβιαημξ πμο ζοκδέμκηαζ ιε ηδ ζηαηζηή θάζδ ιδ ακηζζηνεπηά. Δπζπθέμκ, ζηδ πνςιαημβναθία οβνμφ-οβνμφ, δ πνμ-ζηήθδ πνμηαθεί ημνεζιυ ηδξ ηζκδηήξ θάζδξ ιε ηδ ζηαηζηή, έηζζ χζηε κα εθαπζζημπμζμφκηαζ μζ απχθεζεξ ημο δζαθφηδ ηδξ ακαθοηζηήξ ζηήθδξ. Η ζφζηαζδ ημο οθζημφ ηδξ πνμ-ζηήθδξ πνέπεζ κα είκαζ πανυιμζα ιε αοηυ ηδξ ακαθοηζηήξ ζηήθδξ. Χζηυζμ, ημ ιέβεεμξ ηςκ ζςιαηζδίςκ είκαζ ζοκήεςξ ιεβαθφηενμ βζα κα εθαπζζημπμζείηαζ δ πηχζδ πίεζδξ. Όηακ δ πνμ-ζηήθδ νοπαίκεηαζ ακαβμιχκεηαζ ή απμννίπηεηαζ ηαζ ακηζηαείζηαηαζ ιε κέα ημο ίδζμο ηφπμο. Δπμιέκςξ, δ πνμ-ζηήθδ εοζζάγεηαζ βζα ηδκ πνμζηαζία ηδξ δαπακδνυηενδξ ακαθοηζηήξ ζηήθδξ δ μπμία ηαζ εα επζηεθέζεζ ημ δζαπςνζζιυ. Γ. Αληρλεπηέο-Σύπνη Αληρλεπηώλ Τπάνπμοκ δφμ ααζζημί ηφπμζ ακζπκεοηχκ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ. Αοημί πμο ακηαπμηνίκμκηαζ ζε ιζα ααζζηή ζδζυηδηα (bulk property detectorts) ηδξ ηζκδηήξ θάζδξ, υπςξ μ δείηηδξ δζάεθαζδξ, δ δζδθεηηνζηή ζηαεενά ή δ ποηκυηδηα, μζ ηζιέξ ηςκ μπμίςκ επδνεάγμκηαζ απυ ηδκ πανμοζία ηςκ εηθμουιεκςκ ζοζηαηζηχκ. Ακηίεεηα, οπάνπμοκ ακζπκεοηέξ πμο απμηνίκμκηαζ ζε ζδζυηδηα ημο εηθμουιεκμο ζοζηαηζημφ (solute property detectors), υπςξ είκαζ δ απμννυθδζδ ζημ οπενζχδεξ, μ θεμνζζιυξ ή ημ νεφια δζάποζδξ. Σδκ ζδζυηδηα αοηή δεκ πνέπεζ κα δζαεέηεζ δ ηζκδηή θάζδ. ημκ πίκαηα 4 ακαθένμκηαζ μζ ζοκδεέζηενμζ ακζπκεοηέξ HPLC ηαζ ιενζηέξ απυ ηζξ πζμ ζδιακηζηέξ ζδζυηδηέξ ημοξ. Μζα ηαηαβναθή ημο 1982, απυ 365 δδιμζζεοιέκεξ ενβαζίεξ ζηζξ μπμίεξ δ HPLC έπαζγε ζδιακηζηυ νυθμ, απμηάθορε υηζ ζημ 71% βζκυηακ πνήζδ ακζπκεοηή απμννυθδζδξ UV, ζημ 15% θεμνζζιμφ, ζημ 5,4% δείηηδ δζάεθαζδξ, ζημ 4,3% βζκυηακ πνήζδ δθεηηνμπδιζημφ ακζπκεοηή ηαζ ζημ 4,7% πνδζζιμπμζήεδηακ δζάθμνα άθθα ζοζηήιαηα ιέηνδζδξ (64-66). Απυ ημοξ ακζπκεοηέξ απμννυθδζδξ UV, ημ 64

65 39% ααζίζηδηε ζε ιζα απυ ηζξ βναιιέξ εηπμιπήξ οδνανβφνμο, ημ 13% ζε επζθεβιέκδ αηηζκμαμθία απυ πδβή δεοηενίμο ηαζ ημ 48% ζε αηηζκμαμθία επζθεβιέκδ ιε ιμκμπνςιάημνα. Πίνακαρ 4.Απυδμζδ ακζπκεοηχκ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ α Σμ υνζμ ακίπκεοζδξ ιάγαξ (LOD) οπμθμβίγεηαζ ςξ δ εβπευιεκδ ιάγα πμο απμδίδεζ ζήια ίζμ ιε ημ πεκηαπθάζζμ ημο εμνφαμο (ζ), πνδζζιμπμζχκηαξ έκα βναιιμιμνζαηυ αάνμξ 200 g/mol. Έβποζδ 10 ιl βζα ζοκήεδ ή 1 ιl βζα ιζηνμζςθδκχδδ LC. α Ονίγεηαζ υπςξ ζημ α, αθθά μ υβημξ έβποζδξ είκαζ βεκζηά ιζηνυηενμξ. β Διπμνζηά δζαεέζζιμζ βζα ιζηνμζςθδκχδδ LC. δ Διπμνζηά δζαεέζζιμζ, ςζηυζμ ορδθμφ ηυζημοξ. ε οιπενζθαιαακμιέκδξ ηδξ ζηέδαζδξ θςηυξ ιζηνήξ βςκίαξ ηαζ ηδξ κεθεθμιεηνίαξ. Γ1) Αληρλεπηέο απνξξόθεζεο Πμθθμί ακζπκεοηέξ απμννυθδζδξ είκαζ δζαηάλεζξ δζπθήξ δέζιδξ, ζηζξ μπμίεξ δ ιζα δέζιδ δζένπεηαζ απυ ηδκ ηορεθίδα έηθμοζδξ ηαζ δ άθθδ ιέζς εκυξ θίθηνμο βζα ιείςζδ ηδξ έκηαζήξ ηδξ. ηδ ζοκέπεζα πνδζζιμπμζμφκηαζ ηαζνζαζιέκμζ θςημδθεηηνζημί ακζπκεοηέξ βζα ζφβηνζζδ ηςκ εκηάζεςκ ηςκ δφμ δεζιχκ. Σμ πνςιαημβνάθδια είκαζ έκα ηαηαβνάθδια ημο θμβανίειμο ημο θυβμο ηςκ ζδιάηςκ ηςκ δφμ ιεηαθθαηηχκ ςξ ζοκάνηδζδ ημο πνυκμο. οπκά πνδζζιμπμζμφκηαζ ηαζ υνβακα απθήξ δέζιδξ. ηδ ικήιδ εκυξ οπμθμβζζηή απμεδηεφμκηαζ μζ απμννμθήζεζξ ημο ζοζηήιαημξ δζαθοηχκ ηαζ ακαηαθμφκηαζ βζα ημκ οπμθμβζζιυ ηδξ απμννυθδζδξ ημο ηθάζιαημξ έηθμοζδξ. 65

66 Γ1α) Αληρλεπηέο απνξξόθεζεο κε θίιηξν ζηελ ππεξηώδε πεξηνρή Σα θςηυιεηνα θίθηνμο ιε πδβή θοπκία οδνανβφνμο είκαζ μζ απθμφζηαημζ ακζπκεοηέξ απμννυθδζδξ UV. Πζμ ζοπκά, απμιμκχκεηαζ απυ ηα θίθηνα, δ βναιιή έκηαζδξ ζηα 254 nm. ε μνζζιέκα υνβακα επζθέβμκηαζ μζ βναιιέξ 250, 334 ηαζ 365 nm ιε επζθμβή ηαηάθθδθμο θίθηνμο. Δίκαζ πνμθακέξ υηζ αοηυξ μ ηφπμξ ακζπκεοηή πενζμνίγεηαζ ζε εκχζεζξ πμο απμννμθμφκ ζε έκα απυ ηα πνμακαθενεέκηα ιήηδ ηφιαημξ. Πμθθέξ παναηηδνζζηζηέξ μνβακζηέξ μιάδεξ ηαζ έκαξ ανζειυξ ακυνβακςκ μοζζχκ πανμοζζάγμοκ εονείεξ πενζμπέξ απμννυθδζδξ πμο πενζθαιαάκμοκ έκα ή πενζζζυηενα απυ αοηά ηα ιήηδ ηφιαημξ. Οζ θοπκίεξ δεοηενίμο ή πονάηηςζδξ αμθθναιίμο ιε θίθηνα ζοιαμθήξ πανέπμοκ επίζδξ έκακ απθυ ηνυπμ πνμζδζμνζζιμφ ζοζηαηζηχκ πμο απμννμθμφκ ηαεχξ εηθμφμκηαζ απυ ηδ ζηήθδ. Άθθα ζφβπνμκα υνβακα είκαζ εθμδζαζιέκα ιε ηνμπμφξ επζθμβήξ θίθηνςκ, ηα μπμία ιπμνμφκ κα εκαθθάζζμκηαζ βζα ημκ πνμζδζμνζζιυ δζαθυνςκ ζοζηαηζηχκ ηαεχξ αοηά εηθμφμκηαζ. Οζ δζαηάλεζξ αοηέξ είκαζ ζδζαίηενα πνήζζιεξ βζα επακαθαιαακυιεκεξ, πμζμηζηέξ ακαθφζεζξ υπμο δ πμζμηζηή ζφζηαζδ ημο δείβιαημξ είκαζ βκςζηή έηζζ, χζηε κα ιπμνεί κα επζθεβεί ιζα αθθδθμοπία ηαηάθθδθςκ θίθηνςκ. οκήεςξ, μζ αθθαβέξ θίθηνςκ πναβιαημπμζμφκηαζ ιε ηδ αμήεεζα οπμθμβζζηή. Γ1β) Αληρλεπηέο απνξξόθεζεο ππεξηώδνπο κε κνλνρξωκάηνξεο Πμθθμί ηαηαζηεοαζηέξ ζοζηδιάηςκ HPLC πνμζθένμοκ ακζπκεοηέξ πμο απμηεθμφκηαζ απυ θαζιαημθςηυιεηνα ζάνςζδξ ιε μπηζηυ θνάβια. Μενζηά πενζμνίγμκηαζ ζηδκ πενζμπή οπενζχδμοξ, εκχ άθθα πενζθαιαάκμοκ μναηυ ηαζ οπενζχδεξ. Τπάνπμοκ δζάθμνεξ επζθμβέξ ζηδ θεζημονβία ημοξ. Γζα πανάδεζβια, έκα πθήνεξ πνςιαημβνάθδια ιπμνεί κα θδθεεί ζε έκα ιυκμ ιήημξ ηφιαημξ ή, υηακ ηα εηθμουιεκα ζοζηαηζηά δζαπςνίγμκηαζ ζηακμπμζδηζηά, ιπμνμφκ κα επζθεβμφκ δζαθμνεηζηά ιήηδ ηφιαημξ βζα ηάεε ημνοθή. Καζ πάθζ, δ επζθμβή ημο ηαθφηενμο ιήημοξ ηφιαημξ βζα ηάεε εηθμουιεκμ ζοζηαηζηυ, βίκεηαζ ζοπκά ιε οπμθμβζζηή. Όηακ βζα θυβμοξ ηαοημπμίδζδξ ηςκ εηθμουιεκςκ ζοζηαηζηχκ απαζηείηαζ θήρδ υθμο ημο θάζιαημξ, δ νμή δζαηυπηεηαζ 66

67 βζα επανηέξ πνμκζηυ δζάζηδια, χζηε κα πναβιαημπμζδεεί ζάνςζδ ζηδκ πενζμπή ιήημοξ ηφιαημξ πμο εκδζαθένεζ. Οζ δζαηάλεζξ ιε ακζπκεοηέξ ζοζημζπζχκ δζυδςκ (67-69) απμηεθμφκ ημοξ απμδμηζηυηενμοξ θαζιαημθςημιεηνζημφξ ακζπκεοηέξ οπενζχδμοξ. Σέημζεξ δζαηάλεζξ πνμζθένμκηαζ απυ πμθθμφξ ηαηαζηεοαζηέξ ηαζ ιε αοηέξ πναβιαημπμζείηαζ ζοθθμβή δεδμιέκςκ εκυξ πθήνμοξ θάζιαημξ ζε πνυκμ πενίπμο εκυξ δεοηενμθέπημο. Έηζζ ζοθθέβμκηαζ ηαζ απμεδηεφμκηαζ θαζιαηζηά δεδμιέκα βζα ηάεε πνςιαημβναθζηή ημνοθή ηαηά ηδκ έλμδμ απυ ηδ ζηήθδ. Γ1γ) Αληρλεπηέο απνξξόθεζεο ππεξύζξνπ ημ ειπυνζμ δζαηίεεκηαζ δφμ ηφπμζ ακζπκεοηχκ οπενφενμο. Ο πνχημξ ιε ζάνςζδ ιήημοξ ηφιαημξ πμο πανέπεηαζ απυ ηνία διζηοηθζηά ζθδκμεζδή θίθηνα. Καηαθαιαάκεζ πενζμπή απυ 2,5 έςξ 14,5 ιm ή έςξ 690 cm 1. Ο δεφηενμξ ηαζ πενζζζυηενμ ελεθζβιέκμξ ηφπμξ ακζπκεοηή οπενφενμο ααζίγεηαζ ζε μνβακμθμβίεξ ιεηαζπδιαηζζιμφ Fourier. Έκαξ ζδιακηζηυξ πενζμνζζιυξ ζηδ πνήζδ ακζπκεοηχκ οπενφενμο είκαζ δ παιδθή δζαπεναηυηδηα πμθθχκ πνήζζιςκ δζαθοηχκ. Γζα πανάδεζβια, μζ εονείεξ γχκεξ απμννυθδζδξ ημο φδαημξ ηαζ ηςκ αθημμθχκ ζημ οπένοενμ απμηθείμοκ ηδ πνήζδ ημο ζοβηεηνζιέκμο ακζπκεοηή βζα πμθθέξ εθανιμβέξ. Γ2) Αληρλεπηέο θζνξηζκνύ ημοξ πενζζζυηενμοξ ακζπκεοηέξ θεμνζζιμφ, μ θεμνζζιυξ παναηδνείηαζ ιε θςημδθεηηνζηυ ακζπκεοηή ημπμεεηδιέκμ ζε βςκία 90 ζε ζπέζδ ιε ηδ δέζιδ δζέβενζδξ. Οζ πζμ απθμί ακζπκεοηέξ πνδζζιμπμζμφκ πδβή οδνανβφνμο βζα δζέβενζδ ηαζ έκα ή πενζζζυηενα θίθηνα βζα απμιυκςζδ ιζαξ γχκδξ απυ ηδκ εηπειπυιεκδ αηηζκμαμθία. Σα ηαθφηενα υνβακα ααζίγμκηαζ ζε πδβή αενίμο λέκμο ηαζ πνδζζιμπμζμφκ ιμκμπνςιάημνα βζα απμιυκςζδ ηδξ αηηζκμαμθίαξ θεμνζζιμφ. Μεθθμκηζηέξ ελεθίλεζξ ζημοξ ακζπκεοηέξ θεμνζζιμφ πζεακυκ κα ααζζζεμφκ ζε νοειζγυιεκεξ πδβέξ θέζγεν, πμο ιπμνμφκ κα 67

68 μδδβήζμοκ ζε αολδιέκδ εοαζζεδζία ηαζ εηθεηηζηυηδηα. (70,71). Έκα εββεκέξ πθεμκέηηδια ηςκ θεμνζζιμιεηνζηχκ ιεευδςκ είκαζ δ ιεβάθδ ημοξ εοαζζεδζία, δ μπμία ηαηά ηακυκα είκαζ ιεβαθφηενδ απυ ιία ηάλδ ιεβέεμοξ απυ ηζξ πενζζζυηενεξ ιεευδμοξ απμννυθδζδξ. Σμ πθεμκέηηδια αοηυ εηιεηαθθεφεηαζ δ οβνή πνςιαημβναθία βζα ημ δζαπςνζζιυ ηαζ πνμζδζμνζζιυ ηςκ ζοζηαηζηχκ δεζβιάηςκ πμο θεμνίγμοκ. Καηά ηδκ ακάθοζδ οθζηχκ ζοκακηχκηαζ ζοπκά θεμνίγμοζεξ εκχζεζξ, υπςξ είκαζ μζ θανιαηεοηζηέξ μοζίεξ, ηα θοζζηά πνμσυκηα, ηα ηθζκζηά δείβιαηα ηαζ ηα πεηνεθαζμεζδή. Γ3) Αληρλεπηέο θαζκαηνκεηξίαο κάδαο Έκα ααζζηυ πνυαθδια ζηδ ζφγεολδ ηδξ οβνήξ πνςιαημβναθίαξ ιε ηδ θαζιαημιεηνία ιάγαξ είκαζ δ αζοιααηυηδηα ιεηαλφ ηςκ ζπεηζηά ιεβάθςκ υβηςκ δζαθοηχκ πμο πνδζζιμπμζμφκηαζ ζηδκ πνχηδ ηαζ ημο ηεκμφ πμο απαζηείηαζ ζηδ δεφηενδ. ε έκα ειπμνζηά δζαεέζζιμ ζφζηδια, ημ οβνυ έηθμοζδξ απυ ηδ ζηήθδ δζαπςνίγεηαζ ηαζ ιυκμ έκα ιζηνυ ηθάζια εζζάβεηαζ ηαηεοεείακ ζημκ ακζπκεοηή ιαγχκ. Αθθά ηαζ δ πνμμπηζηή άιεζδξ εζζαβςβήξ ημο οβνμφ ζημ ζφζηδια είκαζ εθζηηή ζηδκ πενίπηςζδ πνήζδξ ζηδθχκ ιζηνήξ δζαιέηνμο ιε ηαπφηδηεξ νμήξ απυ 10 έςξ 50 ιl/min. ε έκα δεφηενμ ηφπμ δζαζφκδεζδξ, πμο επίζδξ οπάνπεζ ζημ ειπυνζμ, ημ οβνυ έηθμοζδξ απμηίεεηαζ ζε έκακ ζοκεπχξ ηζκμφιεκμ ζιάκηα ή ζφνια, πμο ιεηαθένεζ ημκ δζαθφηδ ιε ημ πνμζδζμνζγυιεκμ ζοζηαηζηυ ζε έκακ εενιαζκυιεκμ εάθαιμ βζα απμιάηνοκζδ ημο δζαθφηδ ιε αηιμπμίδζδ. Μεηά ηδκ αηιμπμίδζδ ημ πνμξ ακάθοζδ ζοζηαηζηυ επάκς ζημκ ζιάκηα ή ζημ ζφνια εζζένπεηαζ ζηδκ πενζμπή ηδξ πδβήξ ζμκζζιμφ, υπμο πναβιαημπμζείηαζ εηνυθδζδ ηαζ ζμκηζζιυξ. Έκαξ ηνυπμξ δζαζφκδεζδξ, πμο επίζδξ δζαηίεεηαζ ζημ ειπυνζμ, είκαζ μ εενιμρεηαζιυξ (thermospray) (72-76). Η δζαζφκδεζδ αοηή επζηνέπεζ ηδκ ηαη εοεείακ εζζαβςβή υθμο ημο οβνμφ έηθμοζδξ απυ ηδ ζηήθδ ιε ηαπφηδηεξ νμήξ έςξ ηαζ 2mL/min. ηδ δζαζφκδεζδ αοηή ημ οβνυ αηιμπμζείηαζ ηαεχξ δζένπεηαζ ιέζα απυ έκα ακμλείδςημ, εενιαζκυιεκμ ηνζπμεζδή ζςθήκα ζπδιαηίγμκηαξ κέθμξ ζςιαηζδίςκ απμηεθμφιεκα απυ ημκ δζαθφηδ ηαζ ιυνζα ημο ιεηνμφιεκμο ζοζηαηζημφ. ημ ζπδιαηζγυιεκμ κέθμξ, ημ ζοζηαηζηυ ζμκηίγεηαζ ιέζς εκυξ ιδπακζζιμφ ακηαθθαβήξ θμνηίμο ιε έκα άθαξ, υπςξ ημ μλζηυ αιιχκζμ, πμο πνμζηίεεηαζ ζημκ δζαθφηδ έηθμοζδξ. 68

69 οκεπχξ, εενιμρεηαζιυξ δεκ είκαζ ιυκμ έκαξ ηνυπμξ δζαζφκδεζδξ άθθα ηαζ ιζα πδβή ζμκηζζιμφ. Σα πνμηφπημκηα θάζιαηα είκαζ βεκζηχξ απθά ηαζ πανέπμοκ ζημζπεία βζα ημ ιμνζαηυ αάνμξ αθθά ζηενμφκηαζ ηςκ θεπημιενεζχκ πμο επζηοβπάκμκηαζ ιε ηα ακηίζημζπα θάζιαηα πνυζηνμοζδξ δθεηηνμκίςκ, πμο είκαζ ηυζμ πνήζζια ζε πενζπηχζεζξ ηαοημπμίδζδξ. Δπζπθέμκ, δ δζαζφκδεζδ εενιμρεηαζιμφ ιπμνεί κα εθανιμζεεί ιυκμ βζα πμθζηά ιυνζα ηαζ ηζκδηέξ πμθζηέξ θάζεζξ, πμο ιπμνμφκ ηαζ δζαθφμοκ έκα άθαξ υπςξ ημ μλζηυ αιιχκζμ. Με αοημφξ ημοξ πενζμνζζιμφξ, δ δζαζφκδεζδ εενιμρεηαζιμφ πανέπεζ θάζιαηα βζα εονεία πενζμπή ιδ πηδηζηχκ ηαζ εενιζηά ζηαεενχκ εκχζεςκ, υπςξ πεπηίδζα ηαζ κμοηθεμηίδζα. Έπμοκ ακαθενεεί υνζα ακίπκεοζδξ ιέπνζ 1 έςξ 10 pg. αιζκμλέςκ ζε οδνμθφιαηα πνςηεσκχκ. ημ ειπυνζμ δζαηίεεηαζ ιζα δζαζφκδεζδ πμο ηαεζζηά εθζηηή ηδκ απυηηδζδ θαζιάηςκ ζμκηζζιμφ ιε πνυζηνμοζδ δθεηηνμκίςκ ή ιε πδιζηυ ζμκηζζιυ. ηδ δζάηαλδ αοηή πναβιαημπμζείηαζ ηαοηυπνμκα εενιζηή εηκέθςζδ ηαζ απμιάηνοκζδ ημο δζαθφηδ, βζα ηδκ παναβςβή εκυξ ιίβιαημξ ιμνίςκ ζοζηαηζηχκ ηαζ δζαθφηδ ζηδκ αένζα θάζδ. Σμ κέθμξ ηςκ ζςιαηζδίςκ επζηαπφκεηαζ ιε έκα αηνμθφζζμ ζηδκ πενζμπή ημο ηεκμφ, υπμο απμιαηνφκμκηαζ ιε άκηθδζδ ηα ιυνζα ηδξ ηζκδηήξ θάζδξ. Σα ιυνζα ημο πνμζδζμνζγυιεκμο ζοζηαηζημφ ζμκηίγμκηαζ ζηδ ζοκέπεζα ιε ιζα δέζιδ δθεηηνμκίςκ ή ιε πδιζηυ ηνυπμ (77). Γεκζηά μ έθεβπμξ ηαζ δ απμεήηεοζδ δεδμιέκςκ ζημοξ ακζπκεοηέξ θαζιαημιεηνίαξ ιαγχκ πναβιαημπμζείηαζ ιε δθεηηνμκζηυ οπμθμβζζηή. Με ημκ ηνυπμ αοηυ θαιαάκμκηαζ πνςιαημβναθήιαηα ηαζ θάζιαηα ηςκ εηθμουιεκςκ ζοζηαηζηχκ (78). Δ. Υαξαθηεξηζκόο πεπηηδίωλ κε πγξή ρξωκαηνγξαθία Η οβνή πνςιαημβναθία ακηίζηνμθδξ θάζδξ ορδθήξ απυδμζδξ (RP-HPLC) έπεζ ηαηαζηεί έκα εονέςξ πνδζζιμπμζμφιεκμ ηαζ ηαθά δμηζιαζιέκμ ενβαθείμ ζηδκ ακάθοζδ ηαζ ημκ παναηηδνζζιυ ηςκ αζμιμνίςκ. Η αζηία βζα ημκ ηεκηνζηυ νυθμ πμο δζαδναιαηίγεζ δ RP-HPLC ζημκ παναηηδνζζιυ πνςηεσκχκ ηαζ πεπηζδίςκ είκαζ δ ακάθοζδ: δ RP-HPLC είκαζ ζηακή κα δζαπςνίγεζ πμθοπεπηίδζα ιε πανυιμζα αθθδθμοπία, ηαζ υπζ ιυκμ ιζηνά πεπηίδζα υπςξ εηείκα πμο πνμηφπημοκ ιέζς ηδξ απμδυιδζδξ ιε ηνορίκδ αθθά αηυιδ ηαζ πμθφ ιεβαθφηενεξ πνςηεΐκεξ. Σα πμθοπεπηίδζα πμο δζαθένμοκ ηαηά έκα ιυκμ αιζκμλφ 69

70 ιπμνμφκ κα δζαπςνζζημφκ υπςξ θαίκεηαζ ζηδκ εζηυκα 24, υπμο απμηοπχκεηαζ μ δζαπςνζζιυξ ηςκ δζαθυνςκ ιμνθχκ ζκζμοθίκδξ ηςκ μπμίςκ ηα ΜΒ ηοιαίκμκηαζ ζηα πενίπμο 5,300 Da ιε εθαθνχξ δζαθμνεηζηέξ αιζκμλζηέξ αθθδθμοπίεξ (79). Δζδζηυηενα, δ πνςιαημβναθία ακηίζηνμθδξ θάζδξ είκαζ ζηακή κα δζαπςνίζεζ ηδκ ακενχπζκδ ζκζμοθίκδ απυ εηείκδ ημο ημοκεθζμφ δ μπμία δζαθένεζ ιυκμ ηαηά ιζα ιεεοθεκμιάδα (δ ζκζμοθίκδ ημοκεθζμφ έπεζ ιία ενεμκίκδ εηεί υπμο δ ακενχπζκδ ζκζμοθίκδ έπεζ ζενίκδ).(εζηυκα) Εικόνα 24. Γζαπςνζζιυξ ιε RP-HPLC ηδξ ακενχπζκδξ ζκζμοθίκδξ απυ εηείκδ ημο ημοκεθζμφ Η επζζηδιμκζηή αζαθζμβναθία έπεζ πμθθά παναδείβιαηα υπμο δ RP-HPLC έπεζ πνδζζιμπμζδεεί βζα ημκ δζαπςνζζιυ πανυιμζςκ πμθοπεπηζδίςκ. Ο ζκζμοθζκμιζιδηζηυξ απμεηηθόο παξάγνληαο Ι (Insulin-like growth factor) ιε ιία μλεζδςιέκδ ιεεεζμκίκδ έπεζ δζαπςνζζηεί απυ ημ ιδ μλεζδςιέκμ ακάθμβυ ημο υπςξ επίζδξ ηαζ μζ ιεηαθθαβιέκεξ ιμνθέξ ηδξ ζκηενθεοηίκδξ-2 μζ μπμίεξ έπμοκ δζαπςνζζηεί ιεηαλφ ημοξ (80). ημ ηεθεοηαίμ ημοξ άνενμ, μ Kunitani ηαζ μζ ζοκενβάηεξ ημο πνυηεζκακ υηζ δ RP-HPLC εα ιπμνμφζε κα πανέπεζ πθδνμθμνίεξ βζα ηδ δζαιυνθςζδ ηςκ πνςηεσκχκ ιε αάζδ ημ δζαθμνεηζηυ πνυκμ ηαηαηνάηδζδξ ημοξ πάκς ζηδκ επζθάκεζα ακηίζηνμθδξ θάζδξ (81). Μεθέηδζακ 30 ιεηαθθαβιέκεξ ιμνθέξ ζκηενθεοηίκδξ-2 ηαζ απμδείπηδηακ ζηακμί κα δζαπςνίζμοκ ιεηαθθαβιέκεξ ιμνθέξ πμο ήηακ ζπεδυκ πακμιμζυηοπεξ. Ικηενθεοηίκδ ζηδκ μπμία ιία ιεεεζμκίκδ ήηακ μλεζδςιέκδ δζαπςνίζηδηε απυ ηδκ ιδ ιεηαθθαβιέκδ, αβνίμο 70

ΣΔΥΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΔΠΙΣΗΜΙΟ ΚΤΠΡΟΤ ΥΟΛΗ ΓΔΧΣΔΥΝΙΚΧΝ ΔΠΙΣΗΜΧΝ ΚΑΙ ΓΙΑΥΔΙΡΙΗ ΠΔΡΙΒΑΛΛΟΝΣΟ. Πηπρηαθή κειέηε

ΣΔΥΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΔΠΙΣΗΜΙΟ ΚΤΠΡΟΤ ΥΟΛΗ ΓΔΧΣΔΥΝΙΚΧΝ ΔΠΙΣΗΜΧΝ ΚΑΙ ΓΙΑΥΔΙΡΙΗ ΠΔΡΙΒΑΛΛΟΝΣΟ. Πηπρηαθή κειέηε ΣΔΥΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΔΠΙΣΗΜΙΟ ΚΤΠΡΟΤ ΥΟΛΗ ΓΔΧΣΔΥΝΙΚΧΝ ΔΠΙΣΗΜΧΝ ΚΑΙ ΓΙΑΥΔΙΡΙΗ ΠΔΡΙΒΑΛΛΟΝΣΟ Πηπρηαθή κειέηε IR ΚΑΙ UV/VIS ΦΑΜΑΣΟΚΟΠΙΚΟ ΥΑΡΑΚΣΗΡΙΜΟ ΣΟΤ ΤΜΠΛΟΚΟΤ Co-BLM ΠΑΡΟΤΙΑ ΚΑΙ ΑΠΟΤΙΑ DNA Υανάθαιπμξ Υνζζημδμφθμο

Διαβάστε περισσότερα

Ση είλαη ιύζζα. Γενικζσ πληροφορίεσ

Ση είλαη ιύζζα. Γενικζσ πληροφορίεσ Ση είλαη ιύζζα Πνόηεζηαζ βζα ιζα ζμβεκή θμίιςλδ ημο ηεκηνζημύ κεονζημύ ζοζηήιαημξ, πμο ιεηαδίδεηαζ ζοκήεςξ ιέζς ημο ζάθζμο από ημ δάβηςια ιμθοζιέκμο γώμο. Η θύζζα πνμζαάθθεζ όθα ηα εενιόαζια γώα ηαζ ζημκ

Διαβάστε περισσότερα

Φεπδναπνθνιίδσζε θαη ζηεθαληαία λόζνο

Φεπδναπνθνιίδσζε θαη ζηεθαληαία λόζνο ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΠΑΣΡΧΝ ΥΟΛΖ ΔΠΗΣΖΜΧΝ ΤΓΔΗΑ ΣΜΖΜΑ ΗΑΣΡΗΚΖ ΟΦΘΑΛΜΟΛΟΓΗΚΖ ΚΛΗΝΗΚΖ Γηεπζπληήο: Καζεγεηήο. Γαξηαγάλεο Φεπδναπνθνιίδσζε θαη ζηεθαληαία λόζνο ΓΗΓΑΚΣΟΡΗΚΖ ΓΗΑΣΡΗΒΖ Γεώξγηνο Κ. Αλδξηθόπνπινο Οθζαικίαηξνο

Διαβάστε περισσότερα

ΔΚΘΔΖ ΔΧΣΔΡΗΚΖ ΑΞΗΟΛΟΓΖΖ

ΔΚΘΔΖ ΔΧΣΔΡΗΚΖ ΑΞΗΟΛΟΓΖΖ 1 Παλεπηζηήκην Κξήηεο ρνιή Δπηζηεκώλ Αγσγήο Παηδαγσγηθό Σκήκα Πξνζρνιηθήο Δθπαίδεπζεο ΔΚΘΔΖ ΔΧΣΔΡΗΚΖ ΑΞΗΟΛΟΓΖΖ Αθαδεκατθνύ έηνπο 2007-2008 Ρέζπκλν, Μάηνο 2008 ΠΔΡΗΔΥΟΜΔΝΑ Πξόινγνο ΚΔΦΑΛΑΗΟ 1 ν Ζ δηαδηθαζία

Διαβάστε περισσότερα

ΤΝΔΡΟΜΟ ΑΡΡΩΣΟΤ ΚΣΙΡΙΟΤ

ΤΝΔΡΟΜΟ ΑΡΡΩΣΟΤ ΚΣΙΡΙΟΤ ΜΕΣΑΠΣΤΥΙΑΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΠΟΤΔΩΝ «ΕΦΑΡΜΟΜΕΝΗ ΔΗΜΟΙΑ ΤΓΕΙΑ» ΜΑΘΗΜΑ: ΕΠΑΓΓΕΛΜΑΣΙΚΗ ΤΓΕΙΑ ΤΝΔΡΟΜΟ ΑΡΡΩΣΟΤ ΚΣΙΡΙΟΤ Σπμοδαζηέξ: Natkaniec Εαίηα, Ακοζζάδμο Σμθία, Ανβονμύδδ Αζηαηενίκδ, Βανδάηδξ Αθέλδξ, Βζδάθδξ

Διαβάστε περισσότερα

ΠΡΟΟΠΣΗΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΠΑΡΔΜΒΑΖ ΜΔ ΣΟΥΟ ΣΖ ΓΗΔΡΔΤΝΖΖ ΣΟΤ ΡΟΛΟΤ ΣΖ ΔΝΣΑΣΗΚΖ ΔΚΠΑΗΓΔΤΖ ΣΖ ΒΔΛΣΗΧΖ ΣΖ ΤΜΜΟΡΦΧΖ ΣΧΝ ΓΛΑΤΚΧΜΑΣΗΚΧΝ ΑΘΔΝΧΝ

ΠΡΟΟΠΣΗΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΠΑΡΔΜΒΑΖ ΜΔ ΣΟΥΟ ΣΖ ΓΗΔΡΔΤΝΖΖ ΣΟΤ ΡΟΛΟΤ ΣΖ ΔΝΣΑΣΗΚΖ ΔΚΠΑΗΓΔΤΖ ΣΖ ΒΔΛΣΗΧΖ ΣΖ ΤΜΜΟΡΦΧΖ ΣΧΝ ΓΛΑΤΚΧΜΑΣΗΚΧΝ ΑΘΔΝΧΝ ΑΡΗΣΟΣΔΛΔΗΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΘΔΑΛΟΝΗΚΖ ΗΑΣΡΗΚΖ ΥΟΛΖ -ΣΟΜΔΑ ΑΗΘΖΣΖΡΗΧΝ ΟΡΓΑΝΧΝ Α ΟΦΘΑΛΜΟΛΟΓΗΚΖ ΚΛΗΝΗΚΖ ΝΟΟΚΟΜΔΗΟ ΑΥΔΠΑ Γζεοεοκηήξ Καεδβδηήξ Ν. Γεςνβζάδδξ ΠΡΟΟΠΣΗΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΠΑΡΔΜΒΑΖ ΜΔ ΣΟΥΟ ΣΖ ΓΗΔΡΔΤΝΖΖ ΣΟΤ ΡΟΛΟΤ

Διαβάστε περισσότερα

Νεοφανή ςυςτατικά τροφίμων Καινοτόμεσ μέθοδοι επεξεργαςίασ

Νεοφανή ςυςτατικά τροφίμων Καινοτόμεσ μέθοδοι επεξεργαςίασ ΔΘΝΙΚΟ ΜΔΤΣΟΒΙΟ ΠΟΛΥΤΔΦΝΔΙΟ ΣΦΟΛΗ ΦΗΜΙΚΩΝ ΜΗΦΑΝΙΚΩΝ ΣΟΜΔΑ IV: ΣΟΜΔΑ ΤΝΘΔ Ζ ΚΑΗ ΑΝΑΠΣΤΞΖ ΒΗΟΜΖΥΑΝΗΚΩΝ ΓΗΑΓΗΚΑ ΗΩΝ Νεοφανή ςυςτατικά τροφίμων Καινοτόμεσ μέθοδοι επεξεργαςίασ ΓΗΠΛΩΜΑΣΗΚΖ ΔΡΓΑ ΗΑ ΞΤΝΟΓΑΛΟ

Διαβάστε περισσότερα

TRENDS AND TYPOLOGY OF WORK ACCIDENTS IN GREEK MARICULTURE: THE ROLE OF GENDER

TRENDS AND TYPOLOGY OF WORK ACCIDENTS IN GREEK MARICULTURE: THE ROLE OF GENDER TRENDS AND TYPOLOGY OF WORK ACCIDENTS IN GREEK MARICULTURE: THE ROLE OF GENDER Tiligadas I. 1,2*, Moutopoulos D.K. 3, Chatziefstathiou M. 2,4, Tsoumani M.-M. 2,5, Anastasiou S. 6 1 Ministry of Labour,

Διαβάστε περισσότερα

ΔΠΗΓΡΑΖ ΣΖ ΠΡΟΘΖΚΖ ΛΗΠΟΤ ΣΟ ΗΣΖΡΔΗΟ ΑΗΓΟΠΡΟΒΑΣΧΝ ΣΟ ΠΡΟΦΗΛ ΣΧΝ ΛΗΠΑΡΧΝ ΟΞΔΧΝ ΣΟΤ ΛΗΠΟΤ ΣΟΤ ΓΑΛΑΚΣΟ ΑΤΣΧΝ

ΔΠΗΓΡΑΖ ΣΖ ΠΡΟΘΖΚΖ ΛΗΠΟΤ ΣΟ ΗΣΖΡΔΗΟ ΑΗΓΟΠΡΟΒΑΣΧΝ ΣΟ ΠΡΟΦΗΛ ΣΧΝ ΛΗΠΑΡΧΝ ΟΞΔΧΝ ΣΟΤ ΛΗΠΟΤ ΣΟΤ ΓΑΛΑΚΣΟ ΑΤΣΧΝ ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΣΜΖΜΑ ΔΠΗΣΖΜΖ ΕΧΗΚΖ ΠΑΡΑΓΧΓΖ ΚΑΗ ΤΓΑΣΟΚΑΛΛΗΔΡΓΔΗΧΝ ΔΡΓΑΣΖΡΗΟ ΦΤΗΟΛΟΓΗΑ ΘΡΔΦΔΧ ΚΑΗ ΓΗΑΣΡΟΦΖ ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΔΠΗΓΡΑΖ ΣΖ ΠΡΟΘΖΚΖ ΛΗΠΟΤ ΣΟ ΗΣΖΡΔΗΟ ΑΗΓΟΠΡΟΒΑΣΧΝ ΣΟ ΠΡΟΦΗΛ ΣΧΝ

Διαβάστε περισσότερα

ΠΑΓΚΤΠΡΗΔ ΔΞΔΣΑΔΗ 2009 ΠΡΟΣΔΗΝΟΜΔΝΔ ΛΤΔΗ

ΠΑΓΚΤΠΡΗΔ ΔΞΔΣΑΔΗ 2009 ΠΡΟΣΔΗΝΟΜΔΝΔ ΛΤΔΗ ΤΠΟΤΡΓΔΗΟ ΠΑΗΓΔΗΑ ΚΑΗ ΠΟΛΗΣΗΜΟΤ ΓΗΔΤΘΤΝΖ ΑΝΩΣΔΡΖ ΚΑΗ ΑΝΩΣΑΣΖ ΔΚΠΑΗΓΔΤΖ ΤΠΖΡΔΗΑ ΔΞΔΣΑΔΩΝ ΠΑΓΚΤΠΡΗΔ ΔΞΔΣΑΔΗ 2009 ΠΡΟΣΔΗΝΟΜΔΝΔ ΛΤΔΗ Μαεδια: ΥΖΜΔΗΑ Ζιενμιδκία ελέηαζδξ: Παναζηεοή 29 Μαΐμο 2009 Ώνα ελέηαζδξ:

Διαβάστε περισσότερα

ΣΗΣΛΟ ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΖ ΔΡΓΑΗΑ: «ΓΙΑΧΔΙΡΙΗ ΟΙΚΟΓΟΜΙΚΩΝ ΑΠΟΒΛΗΣΩΝ, ΠΔΡΙΠΣΩΗ Ν.ΑΣΣΙΚΗ» ΓΑΡΓΔΛΖ ΓΔΩΡΓΗΟ ΔΠΗΒΛΔΠΩΝ: Δ. ΓΡΖΓΟΡΟΠΟΤΛΟΤ, ΚΑΘΖΓΖΣΡΗΑ Δ.Μ.Π.

ΣΗΣΛΟ ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΖ ΔΡΓΑΗΑ: «ΓΙΑΧΔΙΡΙΗ ΟΙΚΟΓΟΜΙΚΩΝ ΑΠΟΒΛΗΣΩΝ, ΠΔΡΙΠΣΩΗ Ν.ΑΣΣΙΚΗ» ΓΑΡΓΔΛΖ ΓΔΩΡΓΗΟ ΔΠΗΒΛΔΠΩΝ: Δ. ΓΡΖΓΟΡΟΠΟΤΛΟΤ, ΚΑΘΖΓΖΣΡΗΑ Δ.Μ.Π. Δθνικό Μετσόβιο Πολστετνείο, τολή Υημικών Μητανικών Πανεπιστήμιο Πειραιώς, Σμήμα Βιομητανικής Γιοίκησης & Σετνολογίας ΓΗΑΣΜΖΜΑΣΗΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΩΝ ΠΟΤΓΩΝ «ΤΣΖΜΑΣΑ ΓΗΑΥΔΗΡΗΖ ΔΝΔΡΓΔΗΑ & ΠΡΟΣΑΗΑ ΠΔΡΗΒΑΛΛΟΝΣΟ»

Διαβάστε περισσότερα

Σύνδρομο εύθραυζηων ονύχων

Σύνδρομο εύθραυζηων ονύχων Σύνδρομο εύθραυζηων ονύχων Έλενα Μπελιάεβα Διδάκηωρ Πανεπιζηημίου Αθηνών Δερματολόγος-Αφροδισιολόγος Επιστημονικός Συνεργάτης Πανεπιστημιακής Κλινικής Νοσοκομείο «Αττικόν» Τμ ζύκδνμιμ εύεναοζηςκ μκύπςκ,

Διαβάστε περισσότερα

«Μεθέηδ ηδξ ακηζμλεζδςηζηήξ ζηακυηδηαξ ανςιαηζηχκ ηαζ θανιαηεοηζηχκ θοηχκ ηαζ αθερδιάηςκ απυ ιίβιαηα επζθεβιέκςκ αμηάκςκ.» [Τίτλοσ εγγράφου]

«Μεθέηδ ηδξ ακηζμλεζδςηζηήξ ζηακυηδηαξ ανςιαηζηχκ ηαζ θανιαηεοηζηχκ θοηχκ ηαζ αθερδιάηςκ απυ ιίβιαηα επζθεβιέκςκ αμηάκςκ.» [Τίτλοσ εγγράφου] ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΧΝ ΠΟΤΓΧΝ ΓΔΝΗΚΟΤ ΣΜΖΜΑΣΟ ΘΔΣΗΚΔ ΔΠΗΣΖΜΔ ΣΖ ΓΔΧΠΟΝΗΑ ΚΛΑΓΟ ΗΗΗ: ΜΔΛΔΣΖ ΚΑΗ ΑΞΗΟΠΟΗΖΖ ΦΤΗΚΧΝ ΠΡΟΨΟΝΣΧΝ «Μεθέηδ ηδξ ακηζμλεζδςηζηήξ ζηακυηδηαξ ανςιαηζηχκ

Διαβάστε περισσότερα

Πολσμερή και πολσμερισμός. Εργαςία Χθμείασ Β Τετραμινου

Πολσμερή και πολσμερισμός. Εργαςία Χθμείασ Β Τετραμινου Πολσμερή και πολσμερισμός Εργαςία Χθμείασ Β Τετραμινου Σα πμθοιενή είκαζ βκςζηά εονέςξ ηαζ ςξ πθαζηζηά, επεζδή πμθθά απυ αοηά είκαζ εφπθαζηα, δδθαδή παναιμνθχκμκηαζ εφημθα. Οζ πνήζεζξ είκαζ πάνα πμθθέξ

Διαβάστε περισσότερα

Τ ΒΑΝΚ Α.Τ.Ε. από την ΤΑΧΥΔΡΟΜΙΚΟ ΤΑΜΙΕΥΤΗΡΙΟ ΕΛΛΑΔΟΣ Α.Τ.Ε.

Τ ΒΑΝΚ Α.Τ.Ε. από την ΤΑΧΥΔΡΟΜΙΚΟ ΤΑΜΙΕΥΤΗΡΙΟ ΕΛΛΑΔΟΣ Α.Τ.Ε. Γνωμοδότηςη κατ άρθρο 16 παρ. 5 ν.2515/1997 και κατ άρθρο 4.1.4.1.3. του Κανονιςμοφ του Χρηματιςτηρίου Αθηνών για την προτεινόμενη ςυγχώνευςη δια απορρόφηςησ τησ Τ ΒΑΝΚ Α.Τ.Ε. από την ΤΑΧΥΔΡΟΜΙΚΟ ΤΑΜΙΕΥΤΗΡΙΟ

Διαβάστε περισσότερα

Αλάπηπμε λέσλ δηαγλσζηηθώλ κεζόδσλ γηα ηε Βαξηά Μπαζζέλεηα

Αλάπηπμε λέσλ δηαγλσζηηθώλ κεζόδσλ γηα ηε Βαξηά Μπαζζέλεηα ΓΗΓΑΚΣΟΡΗΚΖ ΓΗΑΣΡΗΒΖ ΝΗΚΟΛΑΟ ΣΡΑΚΑ ΒΗΟΛΟΓΟ Αλάπηπμε λέσλ δηαγλσζηηθώλ κεζόδσλ γηα ηε Βαξηά Μπαζζέλεηα Δξγαζηήξην Μνξηαθήο Βηνινγίαο θαη Αλνζνινγίαο (ΔΜΒΗΑ) Σκήκα Φαξκαθεπηηθήο Παλεπηζηήκην Παηξώλ 2012

Διαβάστε περισσότερα

ΚΕΙΜΕΝΟ ΣΥ.Μ.ΜΗ.Κ. ΓΙΑ ΤΟ ΞΥΛΙΝΟ ΚΟΥΦΩΜΑ

ΚΕΙΜΕΝΟ ΣΥ.Μ.ΜΗ.Κ. ΓΙΑ ΤΟ ΞΥΛΙΝΟ ΚΟΥΦΩΜΑ ΚΕΙΜΕΝΟ ΣΥ.Μ.ΜΗ.Κ. ΓΙΑ ΤΟ ΞΥΛΙΝΟ ΚΟΥΦΩΜΑ Θα αναφερθούμε σε κάποια γενικά στοιχεία που αφορούν το ξύλινο κούφωμα ως διαχρονικό δομικό στοιχείο της αρχιτεκτονικής των Κυκλάδων και στην ισχύουσα νομοθεσία

Διαβάστε περισσότερα

Παπαγωγή ζςνθέηων ςλικών εποξειδικήρ πηηίνηρ - ανόπγανων δομικών ςλικών πποεπσομένων από ανακύκλωζη

Παπαγωγή ζςνθέηων ςλικών εποξειδικήρ πηηίνηρ - ανόπγανων δομικών ςλικών πποεπσομένων από ανακύκλωζη ΔΘΝΙΚΟ ΜΔΣΟΒΙΟ ΠΟΛΤΣΔΥΝΔΙΟ ΔΙΑΣΜΗΜΑΣΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΣΑΠΣΤΧΙΑΚΩΝ ΠΟΤΔΩΝ (Δ.Π.Μ..): "ΔΠΙΣΗΜΗ ΚΑΙ ΣΔΥΝΟΛΟΓΙΑ ΤΛΙΚΧΝ" Παπαγωγή ζςνθέηων ςλικών εποξειδικήρ πηηίνηρ - ανόπγανων δομικών ςλικών πποεπσομένων από

Διαβάστε περισσότερα

Επισειπηζιακό Ππόγπαμμα "Θεζζαλία- ηεπεά Ελλάδα- Ήπειπορ 2007-2013"

Επισειπηζιακό Ππόγπαμμα Θεζζαλία- ηεπεά Ελλάδα- Ήπειπορ 2007-2013 ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΣΙΑ ΝΟΜΟ ΙΩΑΝΝΙΝΩΝ ΔΗΜΟ ΙΩΑΝΝΙΣΩΝ 4PROC0020546 204-06-6 Επισειπηζιακό Ππόγπαμμα "Θεζζαλία- ηεπεά Ελλάδα- Ήπειπορ 2007-203" ΕΡΓΟ: «Εξοπλιζμόρ Ειδικών σολείων και Σμημάηων Ένηαξηρ ηος Δήμος

Διαβάστε περισσότερα

ΓΕΝΕΣΙΚΗ ΣΑΤΣΟΠΟΙΗΗ ΚΤΠΡΙΑΚΩΝ ΠΟΙΚΙΛΙΩΝ ΑΜΠΕΛΟΤ ΜΕ ΣΗ ΦΡΗΗ ΜΙΚΡΟΔΟΡΤΥΟΡΩΝ

ΓΕΝΕΣΙΚΗ ΣΑΤΣΟΠΟΙΗΗ ΚΤΠΡΙΑΚΩΝ ΠΟΙΚΙΛΙΩΝ ΑΜΠΕΛΟΤ ΜΕ ΣΗ ΦΡΗΗ ΜΙΚΡΟΔΟΡΤΥΟΡΩΝ ΓΕΩΠΟΝΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ ΣΜΗΜΑ ΓΕΩΠΟΝΙΚΗ ΒΙΟΣΕΦΝΟΛΟΓΙΑ ΕΡΓΑΣΗΡΙΟ ΜΟΡΙΑΚΗ ΒΙΟΛΟΓΙΑ ΓΕΝΕΣΙΚΗ ΣΑΤΣΟΠΟΙΗΗ ΚΤΠΡΙΑΚΩΝ ΠΟΙΚΙΛΙΩΝ ΑΜΠΕΛΟΤ ΜΕ ΣΗ ΦΡΗΗ ΜΙΚΡΟΔΟΡΤΥΟΡΩΝ ΚΩΝΣΑΝΣΙΝΟΤ ΦΡΙΣΙΝΑ ΜΕΣΑΠΣΤΦΙΑΚΗ ΜΕΛΕΣΗ ΑΘΗΝΑ

Διαβάστε περισσότερα

EFFECTS OF BISPHENOL-A (BPA) ON SEX DIFFERENTIATION AND ON GROWTH OF F1 GENERATION NAYPLII OF THE AMPHIGONIC POPULATION Artemia franciscana

EFFECTS OF BISPHENOL-A (BPA) ON SEX DIFFERENTIATION AND ON GROWTH OF F1 GENERATION NAYPLII OF THE AMPHIGONIC POPULATION Artemia franciscana EFFECTS OF BISPHENOL-A (BPA) ON SEX DIFFERENTIATION AND ON GROWTH OF F1 GENERATION NAYPLII OF THE AMPHIGONIC POPULATION Artemia franciscana EKONOMOU G. 1*, CASTRITSI-CATHARIOS J. 1, TSIROPOULOS Ν.G. 2,

Διαβάστε περισσότερα

ΙΑΘΕΙΑ Β1.1 Μ ΝΘΑΚΕΠΕΟ ΓΕ

ΙΑΘΕΙΑ Β1.1 Μ ΝΘΑΚΕΠΕΟ ΓΕ ΙΑΘΕΙΑ Β1.1 Μ ΝΘΑΚΕΠΕΟ ΓΕ Ε Γε μαξ θαίκεηαη πμιύ μεγάιε, θονημιεθηηθά απένακηε. Ε αίζζεζε αοηή δεκ ακηηπνμζςπεύεη ηεκ αιήζεηα. Ε Γε είκαη απιώξ έκα από ηα αμέηνεηα μονάκηα ζώμαηα πμο βνίζθμκηαη ζημ δηάζηεμα.

Διαβάστε περισσότερα

ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΣΜΖΜΑ ΔΠΗΣΖΜΖ ΦΤΣΗΚΖ ΠΑΡΑΓΧΓΖ ΠΜ ΑΡΥΗΣΔΚΣΟΝΗΚΖ ΣΟΠΗΟΤ ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΣΗΣΛΟ:

ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΣΜΖΜΑ ΔΠΗΣΖΜΖ ΦΤΣΗΚΖ ΠΑΡΑΓΧΓΖ ΠΜ ΑΡΥΗΣΔΚΣΟΝΗΚΖ ΣΟΠΗΟΤ ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΣΗΣΛΟ: ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΣΜΖΜΑ ΔΠΗΣΖΜΖ ΦΤΣΗΚΖ ΠΑΡΑΓΧΓΖ ΠΜ ΑΡΥΗΣΔΚΣΟΝΗΚΖ ΣΟΠΗΟΤ ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΣΗΣΛΟ: ΓΗΔΡΔΤΝΖΖ ΣΖ ΗΚΑΝΟΣΖΣΑ ΣΧΝ ΦΤΣΗΚΧΝ ΔΗΓΧΝ ΣΖ ΓΔΜΔΤΖ ΣΧΝ ΑΔΡΗΧΝ ΡΤΠΧΝ ΣΑΚΗΡΖ ΔΗΡΖΝΖ ΑΘΖΝΑ 2011

Διαβάστε περισσότερα

ΣΔΥΝΗΚΔ ΠΡΟΓΗΑΓΡΑΦΔ ΑΝΑΛΤΣΩΝ ΑΔΡΗΩΝ ΑΗΜΑΣΟ ΠΡΟ ΓΗΑΒΟΤ- ΛΔΤΖ ΔΗΓΗΚΟΗ ΟΡΟΗ ΓΗΑΚΖΡΤΞΖ ΓΗΑΓΩΝΗΜΟΤ

ΣΔΥΝΗΚΔ ΠΡΟΓΗΑΓΡΑΦΔ ΑΝΑΛΤΣΩΝ ΑΔΡΗΩΝ ΑΗΜΑΣΟ ΠΡΟ ΓΗΑΒΟΤ- ΛΔΤΖ ΔΗΓΗΚΟΗ ΟΡΟΗ ΓΗΑΚΖΡΤΞΖ ΓΗΑΓΩΝΗΜΟΤ ΣΔΥΝΗΚΔ ΠΡΟΓΗΑΓΡΑΦΔ ΑΝΑΛΤΣΩΝ ΑΔΡΗΩΝ ΑΗΜΑΣΟ ΠΡΟ ΓΗΑΒΟΤ- ΛΔΤΖ ΔΗΓΗΚΟΗ ΟΡΟΗ ΓΗΑΚΖΡΤΞΖ ΓΗΑΓΩΝΗΜΟΤ ΔΗΓΗΚΟΗ ΟΡΟΗ ΜΔΡΟ Α σζκεσές σνηήρηζη Σμ Νμζμημιείμ δζαεέηεζ ζοκμθζηά 7 ακαθοηέξ (Οζ 6 είκαζ ζεζνάξ 700 ηαζ

Διαβάστε περισσότερα

ΕΞΟΡΤΞΗ & ΚΑΣΑΚΕΤΕ ΣΗΝ ΕΤΡΩΠΗ ΜΑΘΗΜΑ 43

ΕΞΟΡΤΞΗ & ΚΑΣΑΚΕΤΕ ΣΗΝ ΕΤΡΩΠΗ ΜΑΘΗΜΑ 43 ΕΞΟΡΤΞΗ & ΚΑΣΑΚΕΤΕ ΣΗΝ ΕΤΡΩΠΗ ΜΑΘΗΜΑ 43 Κα ακαθένεηε 5 εονςπασθέξ πώνεξ θαη κα βνείηε ημ είδμξ ημο μνοθημύ ημοξ πιμύημο. Πμημη πανάγμκηεξ επηηνέπμοκ ηεκ θαηαζθεοή μεγάιςκ ηεπκηθώκ ένγςκ; Ε ελόνολε (ελαγςγή

Διαβάστε περισσότερα

ΤΝΘΔΖ ΤΠΟΚΑΣΑΣΑΣΩΝ ΥΑΛΚΟΤ ΚΑΗ ΥΡΖΖ ΣΩΝ ΑΝΣΗΣΟΗΥΩΝ ΟΡΓΑΝΟΜΔΣΑΛΛΗΚΩΝ ΤΜΠΛΟΚΩΝ Ω ΜΗΜΖΣΔ ΣΖ ΜΟΝΟΞΤΓΟΝΑΖ

ΤΝΘΔΖ ΤΠΟΚΑΣΑΣΑΣΩΝ ΥΑΛΚΟΤ ΚΑΗ ΥΡΖΖ ΣΩΝ ΑΝΣΗΣΟΗΥΩΝ ΟΡΓΑΝΟΜΔΣΑΛΛΗΚΩΝ ΤΜΠΛΟΚΩΝ Ω ΜΗΜΖΣΔ ΣΖ ΜΟΝΟΞΤΓΟΝΑΖ ΣΜΖΜΑ ΥΖΜΔΗΑ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟΤ ΠΑΣΡΩΝ - ΥΟΛΖ ΘΔΣΗΚΩΝ ΔΠΗΣΖΜΩΝ ΤΝΘΔΖ ΤΠΟΚΑΣΑΣΑΣΩΝ ΥΑΛΚΟΤ ΚΑΗ ΥΡΖΖ ΣΩΝ ΑΝΣΗΣΟΗΥΩΝ ΟΡΓΑΝΟΜΔΣΑΛΛΗΚΩΝ ΤΜΠΛΟΚΩΝ Ω ΜΗΜΖΣΔ ΣΖ ΜΟΝΟΞΤΓΟΝΑΖ ΣΟΤ ΜΔΘΑΝΗΟΤ ΣΖΝ ΚΑΣΑΛΤΣΗΚH ΔΝΔΡΓΟΠΟΗΖΖ-ΟΞΔΗΓΩΖ

Διαβάστε περισσότερα

ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ

ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΓΔΝΗΚΟ ΣΜΖΜΑ ΔΡΓΑΣΖΡΗΟ ΥΖΜΔΗΑ ΓΠΜ «ΜΔΛΔΣΖ ΚΑΗ ΑΞΗΟΠΟΗΖΖ ΦΤΗΚΧΝ ΠΡΟΗΟΝΣΧΝ» ΜΔΣΑΠΣΤΥΗΑΚΖ ΜΔΛΔΣΖ Ενόργανη ανάλσζη και βιοδραζηικόηηηα εκτσλιζμάηων ηων θσηών δίκηαμο (Origanum

Διαβάστε περισσότερα

ΣΔΥΝΟΛΟΓΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΚΤΠΡΟΤ. πμθή Γεςηεπκζηχκ Δπζζηδιχκ. Γζαπείνζζδξ Πενζαάθθμκημξ. Πηπρηαθή δηαηξηβή

ΣΔΥΝΟΛΟΓΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΚΤΠΡΟΤ. πμθή Γεςηεπκζηχκ Δπζζηδιχκ. Γζαπείνζζδξ Πενζαάθθμκημξ. Πηπρηαθή δηαηξηβή ΣΔΥΝΟΛΟΓΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΚΤΠΡΟΤ πμθή Γεςηεπκζηχκ Δπζζηδιχκ & Γζαπείνζζδξ Πενζαάθθμκημξ Πηπρηαθή δηαηξηβή ΔΠΗΓΡΑΖ ΣΟΤ ΜΟΝΟΞΔΗΓΗΟΤ ΣΟΤ ΑΕΧΣΟΤ ΣΟΝ ΑΝΣΗΟΞΔΗΓΧΣΗΚΟ ΜΖΥΑΝΗΜΟ ΦΤΣΧΝ ΜΖΓΗΚΖ (Medicago truncatula

Διαβάστε περισσότερα

Κοιμό Γεωγραφικό Υπόβαθρο για το WISE

Κοιμό Γεωγραφικό Υπόβαθρο για το WISE Κοιμό Γεωγραφικό Υπόβαθρο για το WISE Νονιήξ Γ. Γεςζεζία ΓΝΓ Ημοθμοβίκμξ Α. Γζκηθό Ιεηζόβημ Νμιοηεπκείμ Οαιαπώνεξ Ι. Γεςζεζία ΓΝΓ Πη είκαη ημ θμηκό γεςγναθηθό οπόβαζνμ γηα ημ WISE Απμηειείηαη από : A.

Διαβάστε περισσότερα

Λύζεηξ αζθήζεςκ ζενμόηεηαξ

Λύζεηξ αζθήζεςκ ζενμόηεηαξ Λύζεηξ αζθήζεςκ ζενμόηεηαξ 1. Να μεηαηνέρεηε ηηξ αθόιμοζεξ ζενμμθναζίεξ από βαζμμύξ Κειζίμο ζε βαζμμύξ Κέιβηκ ή ακηίζηνμθα. i. 25 C = 25+273=298K ii. iii. iv. 274 K =274-273=1 C 33 C = 33+273=306 K 300

Διαβάστε περισσότερα

Μεηαηζκήζεζξ πθδεοζιμύ ζηδκ Δθθάδα ηδξ δεηαεηίαξ ημο 1940. Κνκνηελή Σκήκα Ηζηνξίαο θαη Δζλνινγίαο. 1-3 Ηνπιίνπ 2011. Πνόβναιια

Μεηαηζκήζεζξ πθδεοζιμύ ζηδκ Δθθάδα ηδξ δεηαεηίαξ ημο 1940. Κνκνηελή Σκήκα Ηζηνξίαο θαη Δζλνινγίαο. 1-3 Ηνπιίνπ 2011. Πνόβναιια Σκήκα Ηζηνξίαο θαη Δζλνινγίαο ΓΠΘ Civil Wars Study Group (Οκάδα Μειέηεο Δκθπιίωλ Πνιέκωλ) Δπζζηδιμκζηό οκέδνζμ ιε εέια: Μεηαηζκήζεζξ πθδεοζιμύ ζηδκ Δθθάδα ηδξ δεηαεηίαξ ημο 1940 Κνκνηελή Σκήκα Ηζηνξίαο

Διαβάστε περισσότερα

Μέηνα Αημμηθήξ Πνμζηαζίαξ

Μέηνα Αημμηθήξ Πνμζηαζίαξ Γιιεκηθή Γηαηνεία Γιέγπμο Λμημώλεςκ εμηκάνημ Γιέπμο Λμημώλεςκ 2010-2011 Μέηνα Αημμηθήξ Πνμζηαζίαξ Γιέκε Σόμπνμο MSc, Π.Γ. Νμζειεύηνηα Γπηηήνεζεξ Λμημώλεςκ Γ.Ν.Α «ΠΟΛΤΚΛΙΝΙΚΗ» θμπόξ πανμοζίαζεξ Πανμπή πιενμθμνηώκ

Διαβάστε περισσότερα

Δξοπλιζμόρ Κηιπίος Παιδικού ηαθμού ζηον Οικιζμό ηων Μαλίων ηος Γήμος Υεπζονήζος

Δξοπλιζμόρ Κηιπίος Παιδικού ηαθμού ζηον Οικιζμό ηων Μαλίων ηος Γήμος Υεπζονήζος ΔΛΛΗΝΙΚΗ ΓΗΜΟΚΡΑΣΙΑ ΝΟΜΟ ΗΡΑΚΛΔΙΟΤ ΓΗΜΟ ΥΔΡΟΝΗΟΤ Γ/ΝΗ ΣΔΥΝΙΚΩΝ ΤΠΗΡΔΙΩΝ ΓΗΜΟ: Υεπζονήζος ΔΡΓΟ: Δξοπλιζμόρ Κηηπίος Παιδικού ηαθμού ζηον Οικιζμό ηων Μαλίων ηος Γήμος Υεπζονήζος Πξνϋπνινγηζκόο: 48.960,15

Διαβάστε περισσότερα

Multiple Choice Examination

Multiple Choice Examination Multiple Choice Examination 3 December 2011 1. Τμ πνοζμνοπείμ Tau Tona ζημ Carltonville ηεξ Νόηηαξ Αθνηθήξ, είκαη ημ βαζύηενμ μνοπείμ ζημ θόζμμ με βάζμξ 3.9 km. Ακ, ζηεκ επηθάκεηα ημο μνοπείμο, έκα απιό

Διαβάστε περισσότερα

Οδεγόξ Φνήζεξ Webmail

Οδεγόξ Φνήζεξ Webmail Οδεγόξ Φνήζεξ Webmail Τπενεζία Πιενμθμνηθώκ οζηεμάηςκ Tμμέαξ Δηαπείνηζεξ οζηεμάηςκ θαη Εθανμμγώκ ΤΠ-ΕΔ/28 13-09-2011 Contents 1. Εηζαγωγή... 3 2. Πνόζβαζε ζημ «Webmail»... 3 i. Κνοπημγναθεμέκε πνόζβαζε

Διαβάστε περισσότερα

ΔΘΡΗΚΖΠΖ ΡΖΠ ΡΟΥΡΝΡΖΡΑΠ ΡΖΠ ΞΑΟΑΘΡΗΑΠ ΞΔΟΗΝΣΖΠ ΡΥΛ Α ΘΑΗ ΒΑ ΑΘΡΥΛ ΡΖΠ ΑΡΡΗΘΖΠ ΠΔ ΠΣΔΠΖ ΚΔ ΚΗΑ ΚΔΙΙΝΛΡΗΘΖ ΑΛΝΓΝ ΡΖΠ ΘΑΙΑΠΠΗΑΠ ΠΡΑΘΚΖΠ

ΔΘΡΗΚΖΠΖ ΡΖΠ ΡΟΥΡΝΡΖΡΑΠ ΡΖΠ ΞΑΟΑΘΡΗΑΠ ΞΔΟΗΝΣΖΠ ΡΥΛ Α ΘΑΗ ΒΑ ΑΘΡΥΛ ΡΖΠ ΑΡΡΗΘΖΠ ΠΔ ΠΣΔΠΖ ΚΔ ΚΗΑ ΚΔΙΙΝΛΡΗΘΖ ΑΛΝΓΝ ΡΖΠ ΘΑΙΑΠΠΗΑΠ ΠΡΑΘΚΖΠ Ξαξάθηηα Γεσκνξθνινγία - Υθεαλνγξαθία 8 ν Ξαλειιήλην Γεσγξαθηθό Ππλέδξην ΔΘΡΗΚΖΠΖ ΡΖΠ ΡΟΥΡΝΡΖΡΑΠ ΡΖΠ ΞΑΟΑΘΡΗΑΠ ΞΔΟΗΝΣΖΠ ΡΥΛ Α ΘΑΗ ΒΑ ΑΘΡΥΛ ΡΖΠ ΑΡΡΗΘΖΠ ΠΔ ΠΣΔΠΖ ΚΔ ΚΗΑ ΚΔΙΙΝΛΡΗΘΖ ΑΛΝΓΝ ΡΖΠ ΘΑΙΑΠΠΗΑΠ ΠΡΑΘΚΖΠ

Διαβάστε περισσότερα

Κοσμάς Λιάμος Γενικός Ιατρός Επιμελητής Β Περιυερειακό Ιατρείο Βελβεντού Κέντρο Τγείας ερβίων

Κοσμάς Λιάμος Γενικός Ιατρός Επιμελητής Β Περιυερειακό Ιατρείο Βελβεντού Κέντρο Τγείας ερβίων «Ο νυιμξ ημο γηαηνμφ πνςημβάζμηαξ θνμκηίδαξ ογείαξ ζηεκ πνυιερε θαη πνχημε δηάγκςζε ημο θανθίκμο ημο πκεφμμκα» Κοσμάς Λιάμος Γενικός Ιατρός Επιμελητής Β Περιυερειακό Ιατρείο Βελβεντού Κέντρο Τγείας ερβίων

Διαβάστε περισσότερα

ΔΘΝΗΚΖ ΥΟΛΖ ΓΖΜΟΗΑ ΓΗΟΗΚΖΖ ΗZ ΔΚΠΑΗΓΔΤΣΗΚΖ ΔΗΡΑ

ΔΘΝΗΚΖ ΥΟΛΖ ΓΖΜΟΗΑ ΓΗΟΗΚΖΖ ΗZ ΔΚΠΑΗΓΔΤΣΗΚΖ ΔΗΡΑ Δ ΔΘΝΗΚΖ ΥΟΛΖ ΓΖΜΟΗΑ ΓΗΟΗΚΖΖ ΗZ ΔΚΠΑΗΓΔΤΣΗΚΖ ΔΗΡΑ ΣΜΖΜΑ: ΓΔΝΗΚΖ ΓΗΟΗΚΖΖ ΣΔΛΗΚΖ ΔΡΓΑΗΑ Θέια: Δθανιμβή πναηηζηχκ Απθμφζηεοζδξ δζμζηδηζηχκ δζαδζηαζζχκ απυ ηδκ Δθθδκζηή Γδιυζζα Γζμίηδζδ βζα ημκ εηζοβπνμκζζιυ

Διαβάστε περισσότερα

Επακαιεπηηθό ζέμα ζημ 1 0 θεθάιαημ

Επακαιεπηηθό ζέμα ζημ 1 0 θεθάιαημ Επακαιεπηηθό ζέμα ζημ 1 0 θεθάιαημ Δύμ αθηίκεξ μμκμπνςμαηηθμύ θςηόξ με μήθμξ θύμαημξ 600 nm ζημ θεκό εηζάγμκηαη από ημ θεκό ζε δύμ μπηηθά μέζα με δείθηεξ δηάζιαζεξ n 1 = 1,5 ημ n 2 = 1,2 θαη πάπμξ d =

Διαβάστε περισσότερα

THE EFFECT OF FOOD PARTICLE SIZE ON GROWTH AND SIZE VARIATION OF JUVENILE SEA BASS

THE EFFECT OF FOOD PARTICLE SIZE ON GROWTH AND SIZE VARIATION OF JUVENILE SEA BASS THE EFFECT OF FOOD PARTICLE SIZE ON GROWTH AND SIZE VARIATION OF JUVENILE SEA BA Smpiliri E. 1*, Golomazou E. 2, Exadactylos A. 2, Malandrakis E. 2, Fleris G. 3, Dimopoulos D. 1, Panagiotaki P. 2 1 Dias

Διαβάστε περισσότερα

i, ημ μκμμάδμομε ζύκμιμ ηςκ

i, ημ μκμμάδμομε ζύκμιμ ηςκ ΜΙΓΑΔΙΚΟΙ. ΜΞΖΟΙΜΟ ΙΖΓΑΔΖΗΩΚ Μηγαδηθμί είκαη μη ανηζμμί ηεξ μμνθήξ. όπμο, θαη Τμ ζύκμιμ ηςκ μηγαδηθώκ ημ ζομβμιίδμομε με. Δειαδή: { :, } Τμοξ μηγαδηθμύξ ημοξ ζομβμιίδμομε ζοκήζςξ με Τμ γηα ημ μπμίμ ηζπύεη:

Διαβάστε περισσότερα

1 η Ε π α ν α λ η π τ ι κ ή Ά σ κ η σ η

1 η Ε π α ν α λ η π τ ι κ ή Ά σ κ η σ η 1 η Ε π α ν α λ η π τ ι κ ή Ά σ κ η σ η Η εταιρεία Χ απασχολεί 500 πωλητές σε όλη την Ελλάδα. Έστω ότι για κάθε πωλητή γνωρίζουμε τις μηνιαίες πωλήσεις που πραγματοποίησε το περασμένο έτος. Να αναπτύξετε

Διαβάστε περισσότερα

ΧΗΜΕΙΑ ΘΕΜΑ: ΦΤΣΑ ΕΩΣΕΡΙΚΟΤ ΧΩΡΟΤ ΠΟΤ ΑΠΟΡΡΟΦΟΤΝ ΣΟΞΙΚΕ ΟΤΙΕ

ΧΗΜΕΙΑ ΘΕΜΑ: ΦΤΣΑ ΕΩΣΕΡΙΚΟΤ ΧΩΡΟΤ ΠΟΤ ΑΠΟΡΡΟΦΟΤΝ ΣΟΞΙΚΕ ΟΤΙΕ ΓΤΜΝΑΙΟ-Λ.Σ ΟΙΝΟΤΩΝ 2013-14 ΧΗΜΕΙΑ ΘΕΜΑ: ΦΤΣΑ ΕΩΣΕΡΙΚΟΤ ΧΩΡΟΤ ΠΟΤ ΑΠΟΡΡΟΦΟΤΝ ΣΟΞΙΚΕ ΟΤΙΕ Διάθοπερ έπεςνερ πος έσοςν διεξασθεί, δείσνοςν όηι κάποια θςηά μποπούν να απαλλάξοςν ένα δωμάηιο από ηοξικέρ οςζίερ.

Διαβάστε περισσότερα

Π α ζ ο κ ζ ή μ α η α μ ε κ ύ μ α η α ή η α κ ή δ ε γ κ ς ζ η ά : Γ ι ε ο ζ ε ν ί α, Δ ε μ μ θ ν α η ί α, α δ μ ύ ι ς η ε Γ ι ι ά δ α.

Π α ζ ο κ ζ ή μ α η α μ ε κ ύ μ α η α ή η α κ ή δ ε γ κ ς ζ η ά : Γ ι ε ο ζ ε ν ί α, Δ ε μ μ θ ν α η ί α, α δ μ ύ ι ς η ε Γ ι ι ά δ α. Ε δ ή ι ς ζ ε π ν μ θ ή ν ο λ ε η μ ο Ι ί θ ε Θ ε μ δ ς ν ά θ ε, πμο γνάθηεθε δύμ μένεξ μεηά ημ πναληθόπεμα ηςκ Σοκηαγμαηανπώκ, ζηηξ 23 Απνηιίμο ημο 1967, θαη απεοζοκόηακ «πνμξ ηε Δηεζκή Κμηκή Γκώμε, ημκ

Διαβάστε περισσότερα

Μελέτη της έκφρασης του ογκοκατασταλτικού γονιδίου Cyld στον καρκίνο του μαστού

Μελέτη της έκφρασης του ογκοκατασταλτικού γονιδίου Cyld στον καρκίνο του μαστού Σχολή Θετικών Επιστημών Τμήμα Βιολογίας Πρόγραμμα Μεταπτυχιακών Σπουδών Κατεύθυνση: Εφαρμοσμένη γενετική και βιοτεχνολογία ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΗ ΔΙΠΛΩΜΑΤΙΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ Μελέτη της έκφρασης του ογκοκατασταλτικού γονιδίου

Διαβάστε περισσότερα

Καηακμώκηαξ ηα Νέα Μέζα. Εογεκία Σηαπένα esiapera@jour.auth.gr

Καηακμώκηαξ ηα Νέα Μέζα. Εογεκία Σηαπένα esiapera@jour.auth.gr Καηακμώκηαξ ηα Νέα Μέζα Εογεκία Σηαπένα esiapera@jour.auth.gr Friedrich Kittler, 1999 The media determine our situation Tι εννοεί ο Kittler; Γιαηί και πώς μας καθορίζοσν ηα μέζα; Καζμνίδμοκ ηόζμ ηα πενηεπόμεκα

Διαβάστε περισσότερα

ΔΙΑΓΩΝΙΣΜΑ ΜΑΘΗΜΑΤΙΚΩΝ ΓΕΝΙΚΗΣ Γ ΛΥΚΕΙΟΥ

ΔΙΑΓΩΝΙΣΜΑ ΜΑΘΗΜΑΤΙΚΩΝ ΓΕΝΙΚΗΣ Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΔΙΑΓΩΝΙΣΜΑ ΜΑΘΗΜΑΤΙΚΩΝ ΓΕΝΙΚΗΣ Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΘΓΙΑ 1 Ο α. i. Δίκεηαη ε ζοκάνηεζε. Ακ μη ζοκανηήζεηξ είκαη παναγωγίζημεξ, κα απμδείλεηε όηη:. ii. Πόηε μηα ζοκάνηεζε ζε έκα δηάζηεμα ημο πεδίμο ανηζμμύ ηεξ ιέγεηαη

Διαβάστε περισσότερα

VOLUME 4 ISSUE 1 ISSN 1792-4731 JANUARY - APRIL 2013 hυgeίa@εργασiα 4 (1) ΣΔΤΥΟ ΓΔΚΑΣΟ

VOLUME 4 ISSUE 1 ISSN 1792-4731 JANUARY - APRIL 2013 hυgeίa@εργασiα 4 (1) ΣΔΤΥΟ ΓΔΚΑΣΟ 0 hυgeίa εργασiα SCIENTIFIC EDITION OF HELLENIC SOCIETY OF OCCUPATIONAL AND ENVIRONMENTAL MEDICINE IN ASSOCIATION WITH PROGRAM OF POSTGRADUATE STUDIES HEALTH AND SAFETY IN WORKPLACES VOLUME 4 ISSUE 1 ISSN

Διαβάστε περισσότερα

In vitro και in vivo φαρμακοκινητική ανάλυση των παραγώγων ανθρακινόνης σε φυτικά σκευάσματα

In vitro και in vivo φαρμακοκινητική ανάλυση των παραγώγων ανθρακινόνης σε φυτικά σκευάσματα ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ ΤΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΗΣ ΤΟΜΕΑΣ ΦΑΡΜΑΚΟΓΝΩΣΙΑΣ ΦΑΡΜΑΚΟΛΟΓΙΑΣ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΩΝ ΣΠΟΥΔΩΝ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗ ΦΑΡΜΑΚΟΛΟΓΙΑ ΚΑΙ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΗ In vitro και in vivo φαρμακοκινητική

Διαβάστε περισσότερα

Γ. Ε Φ Ε Ρ Η, Ε Λ Ε Ν Η Σ ρ ε ι ς π ό λ ε μ ο ι, τ ρ ε ι ς π ο ι η τ έ ς κ α ι η Ε λ έ ν η

Γ. Ε Φ Ε Ρ Η, Ε Λ Ε Ν Η Σ ρ ε ι ς π ό λ ε μ ο ι, τ ρ ε ι ς π ο ι η τ έ ς κ α ι η Ε λ έ ν η Γ. Ε Φ Ε Ρ Η, Ε Λ Ε Ν Η Σ ρ ε ι ς π ό λ ε μ ο ι, τ ρ ε ι ς π ο ι η τ έ ς κ α ι η Ε λ έ ν η Σρωικός πόλεμος, ο μύθος, ο Όμηρος (8 ος αι. π.χ.), ο Σκάμαντρος «να ξεχειλάει κουφάρια» για την Ελένη, «οὐ νέμεσις

Διαβάστε περισσότερα

Τα αμηκμλέα ζημ πνάζηκμ ηζάη

Τα αμηκμλέα ζημ πνάζηκμ ηζάη Το πράζινο ηζάι Τμ πνάζηκμ ηζάη (Camellia Sinensis) είκαη γκςζηό εδώ θαη 5.000 πνόκηα ζημοξ Κηκέδμοξ. Μέζς ηεξ Κίκαξ έθζαζε ζηεκ Ιαπςκία, ζηεκ Ικδία θαη ζηεκ Ικδμκεζία. Σηεκ Γονώπε ημ έθενακ από ηεκ Κίκα

Διαβάστε περισσότερα

ΕΣΑΘΡΘΚΗ ΚΟΘΝΩΝΘΚΗ ΕΤΘΤΝΗ & ΕΛΛΗΝΘΚΕ ΕΠΘΥΕΘΡΗΕΘ

ΕΣΑΘΡΘΚΗ ΚΟΘΝΩΝΘΚΗ ΕΤΘΤΝΗ & ΕΛΛΗΝΘΚΕ ΕΠΘΥΕΘΡΗΕΘ ΕΣΑΘΡΘΚΗ ΚΟΘΝΩΝΘΚΗ ΕΤΘΤΝΗ & ΕΛΛΗΝΘΚΕ ΕΠΘΥΕΘΡΗΕΘ ΕΡΕΤΝΗΣΙΚΗ ΕΡΓΑΙΑ Α ΛΤΚΕΙΟΤ Α ΣΕΣΡΑΜΗΝΟΤ ΧΟΛΙΚΟΤ ΕΣΟΤ 2011-2012 ΓΕΝΘΚΟ ΛΤΚΕΘΟ ΡΑΦΗΝΑ 1 Σθνπόο ηεο παξνύζαο εξγαζίαο απνηέιεζε ε ζπζηεκαηηθή θαηαγξαθή ησλ

Διαβάστε περισσότερα

1 st International Congress of Applied Ichthyology & Aquatic Environment November 13 th -15 th, Volos, Greece

1 st International Congress of Applied Ichthyology & Aquatic Environment November 13 th -15 th, Volos, Greece 1 st International Congress of Applied Ichthyology & Aquatic Environment November 13 th -15 th, Volos, Greece SPERM QUALITY CHARACTERISTICS OF WILD THICK LIPPED GREY MULLET Chelon labrosus Kokokiris L.

Διαβάστε περισσότερα

Θμγμηεπκία γηα Παηδηά Ζ

Θμγμηεπκία γηα Παηδηά Ζ Θμγμηεπκία γηα Παηδηά Ζ Γκόηεηα 2: Παναμύζη Δεμήηνεξ Πμιίηεξ πμιή Ακζνςπηζηηθώκ θαη Ημηκςκηθώκ Γπηζηεμώκ Σ.Γ.Γ.Α.Π.Ε. 1 θμπμί εκόηεηαξ Ηαηακόεζε ηςκ βαζηθώκ εηδώκ ηςκ Θασθώκ Αθεγήζεςκ-Δηάθνηζε/Αλημπμίεζε

Διαβάστε περισσότερα

ΩΤΟΣΚΛΗΡΥΝΣΗ. Δρ Εμμανουθλ Χατζημανώλης. Ωτορινολαρυγγολόγος-Χειρουργός Κεφαλής και Τραχήλου. Δ/τής της Κλινικής Κεφαλής και Τραχήλου νοσ.

ΩΤΟΣΚΛΗΡΥΝΣΗ. Δρ Εμμανουθλ Χατζημανώλης. Ωτορινολαρυγγολόγος-Χειρουργός Κεφαλής και Τραχήλου. Δ/τής της Κλινικής Κεφαλής και Τραχήλου νοσ. ΩΤΟΣΚΛΗΡΥΝΣΗ Δρ Εμμανουθλ Χατζημανώλης Ωτορινολαρυγγολόγος-Χειρουργός Κεφαλής και Τραχήλου Δ/τής της Κλινικής Κεφαλής και Τραχήλου νοσ. "ΥΓΕΙΑ" Η ςημζθιήνοκζε είκαη μία από ηηξ ζοκεζέζηενεξ αηηίεξ βανεθμΐαξ.

Διαβάστε περισσότερα

Φνήζημεξ Λεηημονγίεξ ηςκ. Windows 7

Φνήζημεξ Λεηημονγίεξ ηςκ. Windows 7 Φνήζημεξ Λεηημονγίεξ ηςκ Windows 7 Υπενεζία Πιενμθμνηθώκ Σοζηεμάηςκ Tμμέαξ Δηαπείνηζεξ Σοζηεμάηςκ θαη Γθανμμγώκ ΥΠΣ-ΓΔ/25 21-06-2011 1 Πεοιεςόμεμα Γηζαγςγή... 3 Χαρακτηριστικά των Windows 7... 3 1. Θέμαηα

Διαβάστε περισσότερα

ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ

ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ΓΔΧΠΟΝΗΚΟ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΑΘΖΝΧΝ ρνιή Σξνθίκσλ Βηνηερλνινγίαο θαη Αλάπηπμεο ΣΜΖΜΑ ΒΗΟΣΔΥΝΟΛΟΓΗΑ ΔΡΓΑΣΖΡΗΟ ΓΔΝΔΣΗΚΖ «Μειέηε RANKL-επαγόκελσλ παζνγελεηηθώλ κεραληζκώλ ζε γελεηηθά δσηθά πξόηππα θαη λέεο ζεξαπεπηηθέο

Διαβάστε περισσότερα

Σα καληηάξηα ηεο Άλδξνπ ε «θξπκκέλε», άγλσζηε βηνπνηθηιόηεηα

Σα καληηάξηα ηεο Άλδξνπ ε «θξπκκέλε», άγλσζηε βηνπνηθηιόηεηα Σα καληηάξηα ηεο Άλδξνπ ε «θξπκκέλε», άγλσζηε βηνπνηθηιόηεηα Ζιίαο Πνιέκεο Μπθεηνιόγνο PhD Δπηζηεκνληθόο ζπλεξγάηεο ζην Δξγαζηήξην Γεληθήο θαη Γεσξγηθήο Μηθξνβηνινγίαο ηνπ ΓΠΑ ΜΤΚΖΣΔ Σα ιακζηάνζα εεςνείηαζ

Διαβάστε περισσότερα

ΓΔΛΣΗΟ ΓΔΓΟΜΔΝΧΝ ΑΦΑΛΔΗΑ

ΓΔΛΣΗΟ ΓΔΓΟΜΔΝΧΝ ΑΦΑΛΔΗΑ ΓΔΛΣΗΟ ΓΔΓΟΜΔΝΧΝ ΑΦΑΛΔΗΑ ΣΜΖΜΑ 1 ΠΡΟΓΗΟΡΗΜΟ ΣΖ ΟΤΗΑ / ΜΔΗΓΜΑΣΟ ΚΑΗ ΣΖ ΔΣΑΗΡΗΑ / ΔΠΗΥΔΗΡΖΖ 1.1. ΑΝΑΓΝΧΡΗΣΗΚΟ ΚΧΓΗΚΟ ΠΡΟΨΟΝΣΟ Ολνκαζία πξντόληνο: Πεξηγξαθή πξντόληνο: Βαζζηό θάδζ ηαζ πνόζεεηα Κσδηθόο πξντόληνο:

Διαβάστε περισσότερα

ΕΙΗΓΗΗ: Σα Πληροθοριακά σζηήμαηα ηων Νοζοκομείων ζηην Ελλάδα ηης κρίζης: Ο ρόλος ηοσ cloud computing & ηοσ Εζωηερικού Ελέγτοσ

ΕΙΗΓΗΗ: Σα Πληροθοριακά σζηήμαηα ηων Νοζοκομείων ζηην Ελλάδα ηης κρίζης: Ο ρόλος ηοσ cloud computing & ηοσ Εζωηερικού Ελέγτοσ 3ο Πανελλήνιο σνέδριο Διατείριζης Κρίζεων ζηον Σομέα Yγείας ΟΡΓΑΝΩΗ: Ελληνική Εηαιρεία Διατείριζης Κρίζεων ζηον Σομέα Τγείας, 13 15/11/2015, Ξενοδοτείο Divani Caravel, Αθήνα. Προθορική Ανακοίνωζη Νο. 33

Διαβάστε περισσότερα

Μυοπάθεια και τατίνες

Μυοπάθεια και τατίνες Μυοπάθεια και τατίνες ΧΡΗΣΟ Ν. ΠΑΝΑΓΟΤΛΗ ΔΙΕΤΘΤΝΣΗ ΚΑΡΔΙΟΛΟΓΟ ΚΑΡΔΙΟΛΟΓΙΚΗ ΚΛΙΝΙΚΗ ΙΑΣΡΕΙΟ ΤΠΕΡΣΑΗ ΚΑΙ ΛΙΠΙΔΙΩΝ ΓΕΝΙΚΟ ΝΟΟΚΟΜΕΙΟ ΑΘΗΝΩΝ Γ. ΓΕΝΝΗΜΑΣΑ ηαηίκεξ Μεηώκμοκ ηεκ LDLπμι. 30-55%, ηα Σνηγι. 10-30%

Διαβάστε περισσότερα

In Vivo ΒΗΟΛΟΓΗΚΖ ΑΞΗΟΛΟΓΖΖ ΚΑΗ ΦΑΡΜΑΚΟΚΗΝΖΣΗΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΜΔ ΥΡΖΖ HPLC-MS-MS ΣΟΤ LEUPROLIDE ΚΑΗ ΑΝΑΛΟΓΧΝ ΣΟΤ ΠΟΤ ΔΜΠΛΔΚΟΝΣΑΗ ΣΖ ΘΔΡΑΠΔΗΑ ΣΟΤ ΚΑΡΚΗΝΟΤ

In Vivo ΒΗΟΛΟΓΗΚΖ ΑΞΗΟΛΟΓΖΖ ΚΑΗ ΦΑΡΜΑΚΟΚΗΝΖΣΗΚΖ ΜΔΛΔΣΖ ΜΔ ΥΡΖΖ HPLC-MS-MS ΣΟΤ LEUPROLIDE ΚΑΗ ΑΝΑΛΟΓΧΝ ΣΟΤ ΠΟΤ ΔΜΠΛΔΚΟΝΣΑΗ ΣΖ ΘΔΡΑΠΔΗΑ ΣΟΤ ΚΑΡΚΗΝΟΤ ΠΑΝΔΠΗΣΖΜΗΟ ΠΑΣΡΧΝ ΣΟΜΔΑ ΟΡΓΑΝΗΚΖ ΥΖΜΔΗΑ, ΒΗΟΥΖΜΔΗΑ ΚΑΗ ΦΤΗΚΧΝ ΠΡΟΨΟΝΣΧΝ ΗΓΡΤΜΑ ΗΑΣΡΟΒΗΟΛΟΓΗΚΧΝ ΔΡΔΤΝΧΝ ΑΚΑΓΖΜΗΑ ΑΘΖΝΧΝ (ΗΗΒΔΑΑ) ΣΟΜΔΑ ΦΑΡΜΑΚΟΛΟΓΗΑ - ΦΑΡΜΑΚΟΣΔΥΝΟΛΟΓΗΑ ΚΑΣΗΛΑ ΘΔΟΓΧΡΑ ΒΗΟΥΖΜΗΚΟ In Vivo

Διαβάστε περισσότερα

ORAL PRESENTATIONS IN GREEK

ORAL PRESENTATIONS IN GREEK 1 ORAL PRESENTATIONS IN GREEK TOLERANCE OF SEAGRASS Cymodocea nodosa PHOTOSYNTHETIC ACTIVITY ΣΟ SALINITY Tsioli S.* 1, Papathanasiou V. 1, Katsaros C. 2, Exadactylos A. 3, Orfanidis S. 1 Benthic Ecology

Διαβάστε περισσότερα

Η ΠΡΟΝΟΟΚΟΜΔΙΑΚΗ ΦΡΟΝΣΙΓΑ. με ηην έγκριζη ηοσ Εθνικού Κένηροσ PHTLS διοργανώνει ζηις. 14-15 Ιανοσαρίοσ 2012

Η ΠΡΟΝΟΟΚΟΜΔΙΑΚΗ ΦΡΟΝΣΙΓΑ. με ηην έγκριζη ηοσ Εθνικού Κένηροσ PHTLS διοργανώνει ζηις. 14-15 Ιανοσαρίοσ 2012 Η ΠΡΟΝΟΟΚΟΜΔΙΑΚΗ ΦΡΟΝΣΙΓΑ με ηην έγκριζη ηοσ Εθνικού Κένηροσ PHTLS διοργανώνει ζηις 14-15 Ιανοσαρίοσ 2012 ζηο Πολιηιζηικό Κένηρο ηοσ Δήμοσ Χερζονήζοσ ηο 10 ο εμινάριο PHTLS (PreHospital Trauma Life Support)

Διαβάστε περισσότερα

Δηληηηπίαζη από μεθανόλη

Δηληηηπίαζη από μεθανόλη Δηληηηπίαζη από μεθανόλη 1 Η μεθανόλη και η σπηζηικόηηηά ηηρ ζηην καθημεπινή ππακηική Η ιεεακυθδ ή ιεεοθζηή αθημυθδ, ή λοθυπκεοια-δ απθμφζηενδ αθηακυθδ- είκαζ έκα άπνςιμ, εφθθεηημ ηαζ ημλζηυ οβνυ ιε παναηηδνζζηζηή

Διαβάστε περισσότερα

ρνιηθό έηνο 2010-2011 Γπκλάζην Κεξαηέαο Πεξηβαιινληηθό πξόγξακκα

ρνιηθό έηνο 2010-2011 Γπκλάζην Κεξαηέαο Πεξηβαιινληηθό πξόγξακκα ρνιηθό έηνο 2010-2011 Γπκλάζην Κεξαηέαο Πεξηβαιινληηθό πξόγξακκα «Υερζαία και θαλάζζια οικοζσζηήμαηα ηης Λασρεωηικής: Ποιοηικά ταρακηηριζηικά, ανθρωπογενείς επιδράζεις, πολιηιζμικά ζηοιτεία». ΚΔΡΑΣΔΑ 2011

Διαβάστε περισσότερα

Seventh Pan Cyprian Celebration of the World Wetlands Day 2011 30.01.2011

Seventh Pan Cyprian Celebration of the World Wetlands Day 2011 30.01.2011 Cyprus Center for Environmental Research and Education St. Antreas str. 306, P.O. Box 56091, 3304 Limassol Cyprus Tel.: 25954954, 25864344, 99302425 / Fax.: 25371548, 25335682 Website: www.kykpee.org E-mail.:

Διαβάστε περισσότερα

GANODERMA LUCIDUM «μακηηάνη ηςκ ζεώκ» Τμ θαζμιηθό θάνμαθμ ηεξ θύζεξ

GANODERMA LUCIDUM «μακηηάνη ηςκ ζεώκ» Τμ θαζμιηθό θάνμαθμ ηεξ θύζεξ GANODERMA LUCIDUM «μακηηάνη ηςκ ζεώκ» Τμ θαζμιηθό θάνμαθμ ηεξ θύζεξ Ο «βαζιλιάπ» ηωμ βξηάμωμ Τμ Γακόδενμα (ιαμπενό δένμα) είκαη εδώδημμ μακηηάνη γκςζηό εδώ θαη πηιηάδεξ πνόκηα ζηεκ Ηίκα, ηεκ Ζαπςκία θαη

Διαβάστε περισσότερα

Εγχειρίδιο για τον ζλεγχο και τθν πρόλθψθ τθσ λφςςασ

Εγχειρίδιο για τον ζλεγχο και τθν πρόλθψθ τθσ λφςςασ ΥΡΟΥΓΕΙΟ ΑΓΟΤΙΚΘΣ ΑΝΑΡΤΥΞΘΣ & ΤΟΦΙΜΩΝ Γενικι Διεφκυνςθ Κτθνιατρικισ, Διεφκυνςθ Υγείασ των Ηϊων Τμιμα Ηωοανκρωπονόςων Εγχειρίδιο για τον ζλεγχο και τθν πρόλθψθ τθσ λφςςασ ΑΘΘΝΑ Μάιοσ 2013 1 Πξόινγνο ημπυξ

Διαβάστε περισσότερα

Δκβνιηαζκνί ζην Υγεηνλνκηθό Πξνζσπηθό Γεκήηξηνο Φαηδεγεσξγίνπ

Δκβνιηαζκνί ζην Υγεηνλνκηθό Πξνζσπηθό Γεκήηξηνο Φαηδεγεσξγίνπ Δκβνιηαζκνί ζην Υγεηνλνκηθό Πξνζσπηθό Γεκήηξηνο Φαηδεγεσξγίνπ Παεμθόβμξ Ιμζιςλζμθόβμξ 251 Γεκζηό Λμζμημιείμ Αενμπμνίαξ Γεηέιανζμξ 2010 Η γέλλεζε ησλ εκβνιίσλ Απνηειεζκαηηθόηεηα εκβνιίσλ MMWR, 1999;48(12):245

Διαβάστε περισσότερα

ΣΕΤΧΟ 16 ΙΟΤΛΙΟ/ ΑΤΓΟΤΣΟ 2011 Η ΔΙΑΣΡΟΦΙΚΗ Α ΕΝΗΜΕΡΩΗ. By: Maria Byron Panayidou

ΣΕΤΧΟ 16 ΙΟΤΛΙΟ/ ΑΤΓΟΤΣΟ 2011 Η ΔΙΑΣΡΟΦΙΚΗ Α ΕΝΗΜΕΡΩΗ. By: Maria Byron Panayidou ΣΕΤΧΟ 16 ΙΟΤΛΙΟ/ ΑΤΓΟΤΣΟ 2011 Η ΔΙΑΣΡΟΦΙΚΗ Α ΕΝΗΜΕΡΩΗ By: Maria Byron Panayidou 1 Editorial: Η γιαγιά μου ζλεγε πωσ ο λόγοσ είναι ζνα δϊρο προσ όλουσ μασ, αλλά θ ςκζψθ για μερικοφσ. Κακϊσ μεγάλωνα δεν

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΝΟΣΗΛΕΥΤΙΚΗΣ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΕΠΗΡΕΑΖΕΙ ΤΗΝ ΠΡΟΛΗΨΗ ΚΑΡΚΙΝΟΥ ΤΟΥ ΜΑΣΤΟΥ

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΝΟΣΗΛΕΥΤΙΚΗΣ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΕΠΗΡΕΑΖΕΙ ΤΗΝ ΠΡΟΛΗΨΗ ΚΑΡΚΙΝΟΥ ΤΟΥ ΜΑΣΤΟΥ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΝΟΣΗΛΕΥΤΙΚΗΣ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΠΩΣ Η ΚΑΤΑΝΑΛΩΣΗ ΦΡΟΥΤΩΝ ΚΑΙ ΛΑΧΑΝΙΚΩΝ ΕΠΗΡΕΑΖΕΙ ΤΗΝ ΠΡΟΛΗΨΗ ΚΑΡΚΙΝΟΥ ΤΟΥ ΜΑΣΤΟΥ Όνομα φοιτήτριας ΚΑΛΑΠΟΔΑ ΜΑΡΚΕΛΛΑ

Διαβάστε περισσότερα

Γεωπονικό Πανεπιςτήμιο Αθηνών Τμήμα Αξιοποίηςησ Φυςικών Πόρων και Γεωργικήσ Μηχανικήσ

Γεωπονικό Πανεπιςτήμιο Αθηνών Τμήμα Αξιοποίηςησ Φυςικών Πόρων και Γεωργικήσ Μηχανικήσ Γεωπονικό Πανεπιςτήμιο Αθηνών Τμήμα Αξιοποίηςησ Φυςικών Πόρων και Γεωργικήσ Μηχανικήσ Εργαςτήριο Γεωργικών Καταςκευών ΠΜΣ Ενεργειακά Συςτήματα και Ανανεώςιμεσ Πηγέσ Ενέργειασ Διδακτορική διατριβή Καιιηέξγεηα

Διαβάστε περισσότερα

ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΣΕΞΟΥΑΛΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑΣ ΤΩΝ ΓΥΝΑΙΚΩΝ ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΤΗΣ ΕΓΚΥΜΟΣΥΝΗΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ

ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΣΕΞΟΥΑΛΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑΣ ΤΩΝ ΓΥΝΑΙΚΩΝ ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΤΗΣ ΕΓΚΥΜΟΣΥΝΗΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ Πτυχιακή Εργασία ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΣΕΞΟΥΑΛΙΚΗΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑΣ ΤΩΝ ΓΥΝΑΙΚΩΝ ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΤΗΣ ΕΓΚΥΜΟΣΥΝΗΣ ΑΝΔΡΕΟΥ ΣΤΕΦΑΝΙΑ Λεμεσός 2012 i ii ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ

Διαβάστε περισσότερα

ΓΗΔΕΘΩΟΓΖΟ ΠΕΟ ΝΑΖΔΑΓΩΓΖΗΕΟ ΟΜΘΕΟ, ΑΝΘ. Αθαδεμασθό έημξ: 2008-2009. (πνμκμιμγηθή ζεηνά)

ΓΗΔΕΘΩΟΓΖΟ ΠΕΟ ΝΑΖΔΑΓΩΓΖΗΕΟ ΟΜΘΕΟ, ΑΝΘ. Αθαδεμασθό έημξ: 2008-2009. (πνμκμιμγηθή ζεηνά) ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΣΙΑ ΠΑΙΔΑΓΩΓΙΚΗ ΣΧΟΛΗ ΑΡΙΣΟΣΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΗΜΙΟ ΘΕΑΛΟΝΙΚΗ Δήμηηοα Κξγκίδξρ, Κξζμηηόοιζζα Τηλ.: 2310 99 1290, Fax: 2310 99 5061 e-mail: info@educ.auth.gr Κτίριο: Πύργος (3 ος όροφος) Θεσσαλονίκη,

Διαβάστε περισσότερα

Εθνικό Μετσόβιο Πολυτεχνείο ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΤΕΧΝΙΚΗΣ ΜΕΤΡΗΣΗΣ ΕΚΚΡΙΣΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΚΟΝΤΑ ΣΤΗ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΕΠΙΦΑΝΕΙΑ

Εθνικό Μετσόβιο Πολυτεχνείο ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΤΕΧΝΙΚΗΣ ΜΕΤΡΗΣΗΣ ΕΚΚΡΙΣΗΣ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΚΟΝΤΑ ΣΤΗ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΕΠΙΦΑΝΕΙΑ Εθνικό Μετσόβιο Πολυτεχνείο Σχολή Μηχανολόγων Μηχανικών ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΕΜΒΙΟΜΗΧΑΝΙΚΗΣ ΚΑΙ ΣΥΣΤΗΜΙΚΗΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ ΤΟΜΕΑΣ ΜΗΧΑΝΟΛΟΓΙΚΩΝ ΚΑΤΑΣΚΕΥΩΝ ΚΑΙ ΑΥΤΟΜΑΤΟΥ ΕΛΕΓΧΟΥ ΔΙΠΛΩΜΑΤΙΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΤΕΧΝΙΚΗΣ ΜΕΤΡΗΣΗΣ

Διαβάστε περισσότερα

1. Camtasia. 2. Audacity. 3. Movie Maker

1. Camtasia. 2. Audacity. 3. Movie Maker 1. Camtasia 2. Audacity 3. Movie Maker Από ημ Γεςθεκηνηθό ζημ Ηιημθεκηνηθό Σύζηεμα Από ημ Γεςθεκηνηθό ζημ Ηιημθεκηνηθό Σύζηεμα Πενηπόμεκα: Γεςθεκηνηθό Σύζηεμα Ηιημθεκηνηθό Σύζηεμα Σύγθνηζε Τη γκςνίδμομε

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ Πτυχιακή Εργασία "Η ΣΗΜΑΝΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΟΥ ΜΗΤΡΙΚΟΥ ΘΗΛΑΣΜΟΥ ΣΤΗ ΠΡΟΛΗΨΗ ΤΗΣ ΠΑΙΔΙΚΗΣ ΠΑΧΥΣΑΡΚΙΑΣ" Ειρήνη Σωτηρίου Λεμεσός 2014 ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ

Διαβάστε περισσότερα

þÿ Ç»¹º ³µÃ ± : Ãż²» Ä Â

þÿ Ç»¹º ³µÃ ± : Ãż²» Ä Â Neapolis University HEPHAESTUS Repository School of Economic Sciences and Business http://hephaestus.nup.ac.cy Master Degree Thesis 2015 þÿ Ç»¹º ³µÃ ± : Ãż²» Ä Â þÿãå½±¹ã ¼±Ä¹º  ½ ¼ Ãͽ  þÿ±à ĵ»µÃ¼±Ä¹º

Διαβάστε περισσότερα

ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗΣ ΣΥΝΤΑΓΟΓΡΑΦΗΣΗΣ ΚΑΙ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ ΤΗΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑΔΑ: Ο.Α.Ε.Ε. ΠΕΡΙΦΕΡΕΙΑ ΠΕΛΟΠΟΝΝΗΣΟΥ ΚΑΣΚΑΦΕΤΟΥ ΣΩΤΗΡΙΑ

ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗΣ ΣΥΝΤΑΓΟΓΡΑΦΗΣΗΣ ΚΑΙ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ ΤΗΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑΔΑ: Ο.Α.Ε.Ε. ΠΕΡΙΦΕΡΕΙΑ ΠΕΛΟΠΟΝΝΗΣΟΥ ΚΑΣΚΑΦΕΤΟΥ ΣΩΤΗΡΙΑ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΠΕΙΡΑΙΩΣ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΩΝ ΣΠΟΥΔΩΝ ΔΙΟΙΚΗΣΗ ΤΗΣ ΥΓΕΙΑΣ ΤΕΙ ΠΕΙΡΑΙΑ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗΣ ΣΥΝΤΑΓΟΓΡΑΦΗΣΗΣ ΚΑΙ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ ΤΗΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑΔΑ: Ο.Α.Ε.Ε. ΠΕΡΙΦΕΡΕΙΑ ΠΕΛΟΠΟΝΝΗΣΟΥ

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΓΕΩΠΟΝΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΕΠΙΣΤΗΜΗΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ. Πτυχιακή εργασία

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΓΕΩΠΟΝΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΕΠΙΣΤΗΜΗΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ. Πτυχιακή εργασία ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΓΕΩΠΟΝΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΕΠΙΣΤΗΜΗΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ Πτυχιακή εργασία ΜΕΛΕΤΗ ΠΟΛΥΦΑΙΝΟΛΩΝ ΚΑΙ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΗΣ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑΣ ΣΟΚΟΛΑΤΑΣ Αναστασία Σιάντωνα Λεμεσός

Διαβάστε περισσότερα

Απόκριση σε Μοναδιαία Ωστική Δύναμη (Unit Impulse) Απόκριση σε Δυνάμεις Αυθαίρετα Μεταβαλλόμενες με το Χρόνο. Απόστολος Σ.

Απόκριση σε Μοναδιαία Ωστική Δύναμη (Unit Impulse) Απόκριση σε Δυνάμεις Αυθαίρετα Μεταβαλλόμενες με το Χρόνο. Απόστολος Σ. Απόκριση σε Δυνάμεις Αυθαίρετα Μεταβαλλόμενες με το Χρόνο The time integral of a force is referred to as impulse, is determined by and is obtained from: Newton s 2 nd Law of motion states that the action

Διαβάστε περισσότερα

Optimizing Microwave-assisted Extraction Process for Paprika Red Pigments Using Response Surface Methodology

Optimizing Microwave-assisted Extraction Process for Paprika Red Pigments Using Response Surface Methodology 2012 34 2 382-387 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com 212018 105 W 42 2 min 0. 631 TS202. 3 A 1000-2286 2012 02-0382 - 06 Optimizing

Διαβάστε περισσότερα

[ΥΡΖΖ ΦΤΗΚΑ ΚΑΗ ΥΖΜΗΚΑ

[ΥΡΖΖ ΦΤΗΚΑ ΚΑΗ ΥΖΜΗΚΑ Αθήνα 2012 ΔΘΝΗΚΟ ΜΔΣΟΒΗΟ ΠΟΛΤΣΔΥΝΔΗΟ ΥΟΛΖ ΥΖΜΗΚΧΝ ΜΖΥΑΝΗΚΧΝ ΓΗΠΛΧΜΑΣΗΚΖ ΔΡΓΑΗΑ [ΥΡΖΖ ΦΤΗΚΑ ΚΑΗ ΥΖΜΗΚΑ ΚΑΣΔΡΓΑΜΔΝΟΤ ΥΑΡΣΗΟΤ ΔΦΖΜΔΡΗΓΑ Χ ΜΔΟΤ ΑΠΟΜΑΚΡΤΝΖ ΗΟΝΣΧΝ ΜΟΛΤΒΓΟΤ] Σζνπθάθεο Δπάγγεινο Δπηβιέπνπζα

Διαβάστε περισσότερα

ΠΓΡΙΓΥΟΜΓΝΑ ΓΙΑΓΩΓΗ...3 ΜΓΡΟ Ι ΝΟΜΟΘΓΣΙΚΟ ΠΛΑΙΙΟ ΚΑΙ ΑΝΑΝΓΩΙΜΓ ΠΗΓΓ ΓΝΓΡΓΓΙΑ ΚΓΦΑΛΑΙΟ Α ΓΘΝΙΚΟ ΘΓΜΙΚΟ ΠΛΑΙΙΟ ΣΩΝ ΑΠΓ

ΠΓΡΙΓΥΟΜΓΝΑ ΓΙΑΓΩΓΗ...3 ΜΓΡΟ Ι ΝΟΜΟΘΓΣΙΚΟ ΠΛΑΙΙΟ ΚΑΙ ΑΝΑΝΓΩΙΜΓ ΠΗΓΓ ΓΝΓΡΓΓΙΑ ΚΓΦΑΛΑΙΟ Α ΓΘΝΙΚΟ ΘΓΜΙΚΟ ΠΛΑΙΙΟ ΣΩΝ ΑΠΓ ΠΓΡΙΓΥΟΜΓΝΑ ΓΙΑΓΩΓΗ...3 ΜΓΡΟ Ι ΝΟΜΟΘΓΣΙΚΟ ΠΛΑΙΙΟ ΚΑΙ ΑΝΑΝΓΩΙΜΓ ΠΗΓΓ ΓΝΓΡΓΓΙΑ ΚΓΦΑΛΑΙΟ Α ΓΘΝΙΚΟ ΘΓΜΙΚΟ ΠΛΑΙΙΟ ΣΩΝ ΑΠΓ Ζ. Ε θαηάζηαζε ηςκ ΑΠΓ ζηεκ Γιιάδα..7 ΖΖ. Πνμζηαζία ημο πενηβάιιμκημξ θαη ζοκηαγμαηηθή

Διαβάστε περισσότερα

Μελέτη των μεταβολών των χρήσεων γης στο Ζαγόρι Ιωαννίνων 0

Μελέτη των μεταβολών των χρήσεων γης στο Ζαγόρι Ιωαννίνων 0 Μελέτη των μεταβολών των χρήσεων γης στο Ζαγόρι Ιωαννίνων 0 ΕΘΝΙΚΟ ΜΕΤΣΟΒΙΟ ΠΟΛΥΤΕΧΝΕΙΟ ΔΙΕΠΙΣΤΗΜΟΝΙΚΟ - ΔΙΑΤΜΗΜΑΤΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΩΝ ΣΠΟΥΔΩΝ (Δ.Π.Μ.Σ.) "ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝ ΚΑΙ ΑΝΑΠΤΥΞΗ" 2 η ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗ

Διαβάστε περισσότερα

ΓΑΣΡΟΟΙΟΦΑΓΙΚΗ ΠΑΛΙΝΔΡΟΜΗΗ ΚΑΙ ΑΝΑΠΝΓΤΣΙΚΟ ΤΣΗΜΑ. Δν. Δεμήηνεξ Καπεηάκμξ Γπημειεηήξ A Γαζηνεκηενμιμγηθή Κιηκηθή Γ.Ν. «Γεώνγημξ Παπακηθμιάμο»

ΓΑΣΡΟΟΙΟΦΑΓΙΚΗ ΠΑΛΙΝΔΡΟΜΗΗ ΚΑΙ ΑΝΑΠΝΓΤΣΙΚΟ ΤΣΗΜΑ. Δν. Δεμήηνεξ Καπεηάκμξ Γπημειεηήξ A Γαζηνεκηενμιμγηθή Κιηκηθή Γ.Ν. «Γεώνγημξ Παπακηθμιάμο» ΓΑΣΡΟΟΙΟΦΑΓΙΚΗ ΠΑΛΙΝΔΡΟΜΗΗ ΚΑΙ ΑΝΑΠΝΓΤΣΙΚΟ ΤΣΗΜΑ Δν. Δεμήηνεξ Καπεηάκμξ Γπημειεηήξ A Γαζηνεκηενμιμγηθή Κιηκηθή Γ.Ν. «Γεώνγημξ Παπακηθμιάμο» ΓΟΠΝ είκαη ε θαηάζηαζε πμο δεμημονγείηαη όηακ ε παιηκδνόμεζε

Διαβάστε περισσότερα

ΕΦΑΡΜΟΓΗ ΕΥΤΕΡΟΒΑΘΜΙΑ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΜΕΝΩΝ ΥΓΡΩΝ ΑΠΟΒΛΗΤΩΝ ΣΕ ΦΥΣΙΚΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΚΛΙΝΗΣ ΚΑΛΑΜΙΩΝ

ΕΦΑΡΜΟΓΗ ΕΥΤΕΡΟΒΑΘΜΙΑ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΜΕΝΩΝ ΥΓΡΩΝ ΑΠΟΒΛΗΤΩΝ ΣΕ ΦΥΣΙΚΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΚΛΙΝΗΣ ΚΑΛΑΜΙΩΝ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΕΚΠΑΙ ΕΥΤΙΚΟ Ι ΡΥΜΑ ΚΡΗΤΗΣ ΤΜΗΜΑ ΦΥΣΙΚΩΝ ΠΟΡΩΝ ΚΑΙ ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝΤΟΣ ΕΦΑΡΜΟΓΗ ΕΥΤΕΡΟΒΑΘΜΙΑ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΜΕΝΩΝ ΥΓΡΩΝ ΑΠΟΒΛΗΤΩΝ ΣΕ ΦΥΣΙΚΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΚΛΙΝΗΣ ΚΑΛΑΜΙΩΝ ΕΠΙΜΕΛΕΙΑ: ΑΡΜΕΝΑΚΑΣ ΜΑΡΙΝΟΣ ΧΑΝΙΑ

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΝΟΣΗΛΕΥΤΙΚΗΣ. Πτυχιακή Εργασία

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΝΟΣΗΛΕΥΤΙΚΗΣ. Πτυχιακή Εργασία ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΝΟΣΗΛΕΥΤΙΚΗΣ Πτυχιακή Εργασία ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΚΑΙ ΕΝΑΛΛΑΚΤΙΚΕΣ ΘΕΡΑΠΕΙΕΣ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΗ ΔΙΑΧΕΙΡΙΣΗ ΤΟΥ ΠΟΝΟΥ ΣΕ ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΜΕ ΚΑΡΚΙΝΟ. Ονοματεπώνυμο:

Διαβάστε περισσότερα

Θωμάς ΣΑΛΟΝΙΚΙΟΣ 1, Χρήστος ΚΑΡΑΚΩΣΤΑΣ 2, Βασίλειος ΛΕΚΙΔΗΣ 2, Μίλτων ΔΗΜΟΣΘΕΝΟΥΣ 1, Τριαντάφυλλος ΜΑΚΑΡΙΟΣ 3,

Θωμάς ΣΑΛΟΝΙΚΙΟΣ 1, Χρήστος ΚΑΡΑΚΩΣΤΑΣ 2, Βασίλειος ΛΕΚΙΔΗΣ 2, Μίλτων ΔΗΜΟΣΘΕΝΟΥΣ 1, Τριαντάφυλλος ΜΑΚΑΡΙΟΣ 3, Αξιοποίηση Έξι Σεισμών στην Πελοπόννησο για την Συσχέτιση Φασματικών Επιταχύνσεων με την Απόκριση του Δομημένου Περιβάλλοντος Correlation of Spectral Accelerations with the Response of the Built Environment

Διαβάστε περισσότερα

ΔΩΚΠΑΟ ΙΓ ΠΜΚ Η. ΟΓΘ

ΔΩΚΠΑΟ ΙΓ ΠΜΚ Η. ΟΓΘ ΔΩΚΠΑΟ ΙΓ ΠΜΚ Η. ΟΓΘ Θάιεηα Αβναάμ Ημοηζημοπή, RDN Ηιηκηθή Δηαηημιόγμξ Δηαηνμθμιόγμξ BSc εμείαξ, PGDipl Dietetics Κλιμική Διαιηξλόγξπ Γεμικό Νξζξκξμείξ Λερκτζίαπ Θέμαηα πνμξ ζοδήηεζε Ργηέξ Οςμαηηθό Βάνμξ

Διαβάστε περισσότερα

ΜΗΤΡΙΚΟΣ ΘΗΛΑΣΜΟΣ ΚΑΙ ΓΝΩΣΤΙΚΗ ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΜΕΧΡΙ ΚΑΙ 10 ΧΡΟΝΩΝ

ΜΗΤΡΙΚΟΣ ΘΗΛΑΣΜΟΣ ΚΑΙ ΓΝΩΣΤΙΚΗ ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΜΕΧΡΙ ΚΑΙ 10 ΧΡΟΝΩΝ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΤΜΗΜΑ ΝΟΣΗΛΕΥΤΙΚΗΣ ΜΗΤΡΙΚΟΣ ΘΗΛΑΣΜΟΣ ΚΑΙ ΓΝΩΣΤΙΚΗ ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΜΕΧΡΙ ΚΑΙ 10 ΧΡΟΝΩΝ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ Ονοματεπώνυμο Κεντούλλα Πέτρου Αριθμός Φοιτητικής Ταυτότητας 2008761539 Κύπρος

Διαβάστε περισσότερα

Γ ΚΤΚΛΟ ΠΡΟΟΜΟΙΩΣΙΚΩΝ ΔΙΑΓΩΝΙΜΑΣΩΝ ΤΓΥΡΟΝΟ Γμδεικηικές Απαμηήζεις Β Λσκείοσ Φεβροσάριος 2014 ΘΓΜΑ Α

Γ ΚΤΚΛΟ ΠΡΟΟΜΟΙΩΣΙΚΩΝ ΔΙΑΓΩΝΙΜΑΣΩΝ ΤΓΥΡΟΝΟ Γμδεικηικές Απαμηήζεις Β Λσκείοσ Φεβροσάριος 2014 ΘΓΜΑ Α Γμδεικηικές Απαμηήζεις Β Λσκείοσ Φεβροσάριος 01 Υημεία γεμιικής παιιδείίας Α.1 ΘΓΜΑ Α 1.1 Καηά ηδκ πνμζεήηδ κενμύ ζημ 1-αμοηέκζμ, ζε ηαηάθθδθεξ ζοκεήηεξ, πανάβεηαζ ςξ ηύνζμ πνμσόκ: α. 1-αμοηακόθδ. γ. αμοηακάθδ.

Διαβάστε περισσότερα

ΠΡΟΣΚΛΗΣΗ ΕΚΔΗΛΩΣΗΣ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΝΤΟΣ

ΠΡΟΣΚΛΗΣΗ ΕΚΔΗΛΩΣΗΣ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΝΤΟΣ 1 ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΡΗΤΗΣ ΕΙΔΙΚΟΣ ΛΟΓΑΡΙΑΣΜΟΣ ΑΝΑΡΤΗΤΕΑ ΣΤΟ ΔΙΑΔΙΚΤΥΟ ΠΡΟΣΚΛΗΣΗ ΕΚΔΗΛΩΣΗΣ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΝΤΟΣ Ηράκλειο, 04.02.2014 Αρ. πρωτ. 1054 Ο Ειδικός Λογαριασμός του Πανεπιστημίου Κρήτης

Διαβάστε περισσότερα

Κα ακαγκςνίζμομε ημ ηηηάκημ ένγμ (όιςκ) ηςκ ενγαδμμέκςκ ζημ CERN. Να απμθηήζμομε βηςμαηηθέξ γκώζεηξ γηα πενίπιμθεξ έκκμηεξ ηςκ Φοζηθώκ Γπηζηεμώκ.

Κα ακαγκςνίζμομε ημ ηηηάκημ ένγμ (όιςκ) ηςκ ενγαδμμέκςκ ζημ CERN. Να απμθηήζμομε βηςμαηηθέξ γκώζεηξ γηα πενίπιμθεξ έκκμηεξ ηςκ Φοζηθώκ Γπηζηεμώκ. Ζηαιία Γιβεηία Μη ζηόπμη μαξ Να πνμβιεμαηηζημύμε γηα ηεκ απανπή ημο ζύμπακημξ. Κα ακαγκςνίζμομε ημ ηηηάκημ ένγμ (όιςκ) ηςκ ενγαδμμέκςκ ζημ CERN. Να απμθηήζμομε βηςμαηηθέξ γκώζεηξ γηα πενίπιμθεξ έκκμηεξ

Διαβάστε περισσότερα

ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ. Μάρκετινγκ Αθλητικών Τουριστικών Προορισμών 1

ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ. Μάρκετινγκ Αθλητικών Τουριστικών Προορισμών 1 ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΙΓΑΙΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΤΗΣ ΔΙΟΙΚΗΣΗΣ ΤΜΗΜΑ ΔΙΟΙΚΗΣΗΣ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΕΩΝ ΔΙΑΤΜΗΜΑΤΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΩΝ ΣΠΟΥΔΩΝ «Σχεδιασμός, Διοίκηση και Πολιτική του Τουρισμού» ΜΑΡΚΕΤΙΝΓΚ ΑΘΛΗΤΙΚΩΝ ΤΟΥΡΙΣΤΙΚΩΝ

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ. Πτυχιακή διατριβή. Ονοματεπώνυμο: Αργυρώ Ιωάννου. Επιβλέπων καθηγητής: Δρ. Αντρέας Χαραλάμπους

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ. Πτυχιακή διατριβή. Ονοματεπώνυμο: Αργυρώ Ιωάννου. Επιβλέπων καθηγητής: Δρ. Αντρέας Χαραλάμπους ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ Πτυχιακή διατριβή Διερεύνηση της αποτελεσματικότητας εναλλακτικών και συμπληρωματικών τεχνικών στη βελτίωση της ποιότητας της ζωής σε άτομα με καρκίνο

Διαβάστε περισσότερα

Ανίσνεςζη ςπεπέκθπαζηρ mrna ηυν ογκογονιδίυν Ε6/Ε7 ηος ιού HPV με Κςηηαπομεηπία Ροήρ

Ανίσνεςζη ςπεπέκθπαζηρ mrna ηυν ογκογονιδίυν Ε6/Ε7 ηος ιού HPV με Κςηηαπομεηπία Ροήρ Ανίσνεςζη ςπεπέκθπαζηρ mrna ηυν ογκογονιδίυν Ε6/Ε7 ηος ιού HPV με Κςηηαπομεηπία Ροήρ Υπιζηίνα Κοηηαπίδη Βηνιόγνο, Δξγαζηήξην Γηαγλωζηηθήο Κπηηαξνινγίαο Ιαηξηθήο Σρνιήο Παλεπηζηεκίνπ Αζελώλ Κςηηαπομεηπία

Διαβάστε περισσότερα

Δηαπείνηζε πμιιαπιώκ ειεθηνμκηθώκ δηεοζύκζεωκ

Δηαπείνηζε πμιιαπιώκ ειεθηνμκηθώκ δηεοζύκζεωκ Δηαπείνηζε πμιιαπιώκ ειεθηνμκηθώκ δηεοζύκζεωκ Υπενεζία Πιενμθμνηθώκ Σοζηεμάηωκ Tμμέαξ Δηαπείνηζεξ Σοζηεμάηωκ θαη Γθανμμγώκ ΥΠΣ-ΓΔ/17 16-10-2009 1 Πίκαθαξ Πενηεπμμέκωκ Ειζαγωγή... 3 Περιγραθή λογιζμικών

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ. Πτυχιακή Εργασία

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ. Πτυχιακή Εργασία ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΥΓΕΙΑΣ Πτυχιακή Εργασία Η ΕΠΑΓΓΕΛΜΑΤΙΚΗ ΕΞΟΥΘΕΝΩΣΗ ΠΟΥ ΒΙΩΝΕΙ ΤΟ ΝΟΣΗΛΕΥΤΙΚΟ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟ ΣΤΙΣ ΜΟΝΑΔΕΣ ΕΝΑΤΙΚΗΣ ΘΕΡΑΠΕΙΑΣ Άντρη Αγαθαγγέλου Λεμεσός 2012 i ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ

Διαβάστε περισσότερα