Ανίσνεςζη ςπεπέκθπαζηρ mrna ηυν ογκογονιδίυν Ε6/Ε7 ηος ιού HPV με Κςηηαπομεηπία Ροήρ

Transcript

1 Ανίσνεςζη ςπεπέκθπαζηρ mrna ηυν ογκογονιδίυν Ε6/Ε7 ηος ιού HPV με Κςηηαπομεηπία Ροήρ Υπιζηίνα Κοηηαπίδη Βηνιόγνο, Δξγαζηήξην Γηαγλωζηηθήο Κπηηαξνινγίαο Ιαηξηθήο Σρνιήο Παλεπηζηεκίνπ Αζελώλ

2 Κςηηαπομεηπία ποήρ και HPV Τπεπέκθπαζη ηυν ογκογονιδίυν Ε6 και Ε7 Κςηηαπική αθαναηοποίηζη Κακοήθη μεηαζσημαηιζμό απενεργοποίηση της κστταρικής p53 L1 απενεργοποίση της κστταρικής prb E6 7904/ E7 Άθικηα κύηηαπα Ενδοκςηηάπιο mrna L E E2 E1 E5

3 Κςηηαπομεηπία ποήρ και HPV HPV OncoTect ΤΜ (Invirion Diagnostics) Δλζωκάηωζε ηνπ ηνύ ζην γελωκηθό DNA Αλίρλεπζε ηεο ππεξέθθξαζεο ηνπ mrna ηωλ γνληδίωλ Δ6 θαη Δ7 ηωλ νγθνγόλωλ ηύπωλ HPV

4 Ανάλςζη δεδομένυν Κπηηαξόκεηξν ξνήο nm argon laser Μνλάδα ειεθηξνληθνύ ππνινγηζηή γηα ηελ επεμεξγαζία ηωλ ζεκάηωλ

5 Ανάλςζη δεδομένυν Η κέηξεζε κε ηνλ αληρλεπηή SSC δίλεη πιεξνθνξίεο γηα ηελ θπηηαξνπιαζκαηηθή θνθθίωζε Πηγή θυηόρ Φυηοδίοδορ Πηγή θυηόρ Πεγή θωηόο (αθηίλα LASER Argon-ion) Φυηοδίοδορ Υδξαπιηθό ζύζηεκα πνπ αλαγθάδεη ηα θύηηαξα λα ξένπλ ην έλα κεηά ην άιιν κπξνζηά ζηελ αθηίλα LASER Η κέηξεζε κε ηνλ αληρλεπηή FSC είλαη αληίζηνηρε ηνπ κεγέζνπο ηνπ θπηηάξνπ Αληρλεπηέο ηνπ θωηόο θαη ηνπ θζνξηζκνύ θαη ρξεζηκνπνηείηαη γηα λα μερωξίζεη δηαθνξεηηθά είδε θπηηάξωλ

6 Έλεγσορ επάπκειαρ ηος δείγμαηορ Ελάσιζηορ απιθμόρ κςηηάπυν εξυηπασήλος (Bethesda 2001) 5000 Κπιηήπια επάπκειαρ (Grundhoefer and Patterson) Κύηηαπα Εξυηπασήλος >1% Κύηηαπα Ενδοηπασήλος >1% Φλεγμονώδη Κύηηαπα <20% Φλεγμονώδη Κύηηαπα 8,6% Κύηηαπα Ενδοηπασήλος 21,15% Κύηηαπα Εξυηπασήλος 70,23% Region Count R R R3 673

7 Έλεγσορ επάπκειαρ ηος δείγμαηορ Ελάσιζηορ απιθμόρ κςηηάπυν εξυηπασήλος (Bethesda 2001) 5000 Κπιηήπια επάπκειαρ (Grundhoefer and Patterson) Κύηηαπα Εξυηπασήλος >1% Κύηηαπα Ενδοηπασήλος >1% Φλεγμονώδη Κύηηαπα <20% Φλεγμονώδη Κύηηαπα 0,51% Κύηηαπα Ενδοηπασήλος 0,81% Κύηηαπα Εξυηπασήλος 84,2% Region Count R R2 60 R3 36

8 OncoTect ΣΜ test (Invirion Diagnostics) Κύηηαξα ελαηωξήκαηνο θηαιηδίνπ πγξήο θάζεο ThinPrep (1 ml-max 10 6 θύηηαξα) Μνληκνπνηνύληαη θαη θαζίζηαληαη δηαπεξαηά (PermiFlow, Invirion Diagnostics) (90 min) In situ πβξηδνπνίεζε FAM ζεκαζκέλνπ κίγκαηνο HPV ηρλεζεηώλ ζε άζηθηα θύηηαξα ηνπ εμωηξαρήινπ (30 min)

9 Αποηέλεζμα OncoTect Απνηηικό Θεηικό αποςζία ανίσνεςζηρ ςπεπέκθπαζηρ mrna Ε6 και Ε7 ανίσνεςζη ςπεπέκθπαζηρ mrna Ε6 και Ε7 αποςζία ενζυμάηυζηρ ηος ιού ιόρ ενζυμαηυμένορ ποζοζηό θθοπιζόνηυν κςηηάπυν<1,5% ποζοζηό θθοπιζόνηυν κςηηάπυν>1,5%

10 Δείγμα «ενηόρ θςζιολογικών οπίυν» - ποζοζηό θθοπιζόνηυν κςηηάπυν 0,5% απνηηικό για ςπεπέκθπαζη mrna E6 και Ε7 θλεγμονώδη κύηηαπα κύηηαπα ενδοηπασήλος κύηηαπα εξυηπασήλος Δείγμα «LgSIL/CINI» - ποζοζηό θθοπιζόνηυν κςηηάπυν 23% θεηικό για ςπεπέκθπαζη mrna E6 και Ε7 θλεγμονώδη κύηηαπα κύηηαπα ενδοηπασήλος κύηηαπα εξυηπασήλος

11 Αποηελέζμαηα ύγκπιζη Ιζηολογικήρ-OncoTect HPV mrna Θεηικόηηηαρ Negative HPV CIN I CIN II CIN III Ca ύνολο Oncotect Oncotect ύνολο % 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% Negative HPV CIN I CIN II CIN III Ca Oncotect + Oncotect - Ειδικόηηηα CINII+ 85,99% Εςαιζθηζία CINII+ 64,71%

12 ςμπεπάζμαηα Θεηηθόηεηα ζηα CIN I + πξαγκαηηθόο πιεζπζκόο κε ελεξγό ινίκωμεπεξηνξίδεηαη ην screening / 6 κήλεο ζην ζεηηθό πιεζπζκό Θεηηθόηεηα ζηα CIN IΙ + ηα πεξηζηαηηθά πνπ ζα ππνηξνπηάζνπλ κεηά από ζεξαπεία αλ παξακείλεη ε έθθξαζε ηνπ mrna ηωλ Δ6/Δ7

13 ςμπεπάζμαηα Με ηο OncoTect test μεηπάηαι η ενεπγόηηηα ηυν ογκοππυηεφνών πος είναι και ηο ππαγμαηικό μέηπο εκηίμηζηρ ηηρ ανάπηςξηρ καπκινογόνυν αλλαγών σεηικά ζύνηομη ηεσνική Δεν μποπεί Μποπεί να διακπίνει να ανισνεύζει ηον ηύπο mrna ηος ιού όλυν ηυν ζηελεσών ςτηλού κινδύνος Απαιηείηαι μόλιρ 1 ml εναιυπήμαηορ κςηηάπυν ζε ThinPrep

14 Εργαζηήριο Διαγνωζηικής Κσηηαρολογίας, Π.Γ.Ν. «ΑΤΤΙΚΟΝ» Διεσθσνηής: Π. Καρακίηζος, Αν. Καθηγηηής Μονάδα αναλσηικής και ποζοηικής κσηηαρολογίας Προζωπικό: Η. Γεσξγνπιάθεο, Λέθηνξαο Α. Καηέξεο, Φπζηθόο. Σζνύθνο, Φπζηθόο Χ. Κνηηαξίδε, Βηνιόγνο Α. παζεο, Βηνιόγνο Εθαρμογές ηαηηθή Κύηηαξνκεηξία Κπηηαξνκεηξία Ρνήο Μονάδα λειηοσργικής κσηηαρολογίας Προζωπικό: Ε. Χξηζηώλε, Μνξηαθή Βηνιόγνο Α. Μαξνύγγα, Βηνρεκηθόο Εθαρμογές FISH, CISH Άλνζνθπηηαξνρεκεία Μονάδα ηετνηηής νοημοζύνης Προζωπικό: Α. Πνπιηάθεο Κ. Κνπηξνύκπαο Σ. Μεγαινπνύινπ Μονάδα μοριακής κσηηαρολογίας Προζωπικό: Α. Χξαληώηε, Βηνρεκηθόο Χ. Κνηηαξίδε, Βηνιόγνο Ε. Χξηζηώλε, Μνξηαθή βηνιόγνο Α. πάζεο, Βηνιόγνο Μ. Αιεπάθε, Βηνιόγνο Λ. Αγά, Βηνιόγνο Μονάδα διαγνωστικής κυτταρολογίας Ιαηρικό προζωπικό Ε.Κ.Π.Α.: Η. Γεσξγνπιάθεο, Λέθηνξαο Ιαηρικό προζωπικό Ε.Σ.Υ.: Μ. ηακαηάθε, Γηεπζύληξηα, Κπηηαξνιόγνο Α. Άλνηλνο, Δπηκειεηήο Α, Κπηηαξνιόγνο Ν. Μάξγαξε, Δπηθνπξηθή ηαηξόο, Κπηηαξνιόγνο Χ. Μεξηζηνύδεο, Δπη. ηαηξόο, Κπηηαξνιόγνο Τετνολόγοι :. Καδίθα, Α. Λέθθα, Α. ηακνπιαθάηνπ, Κ. Κσλζηαληνπνύινπ Γραμμαηεία: Π. Σζηάξα, Δ. Αζαλαζηάδε Εθαρμογές Απνθσιηδσηηθή θπηηαξνινγία, Παξαθεληίζεηο ιεπηήο βειόλεο Κπηηαξνρεκηθέο ρξώζεηο Εθαρμογές: PCR, RT-PCR, qpcr DNA Microarrays Μονάδα ηηλε-κσηηαρολογίας Προζωπικό::. Σζνύθνο, Φπζηθόο Α. Καηέξεο, Φπζηθόο Ν. ηεξγίνπ, Ζιεθηξνιόγνο κεραληθόο Εθαρμογές: πκβνπιεηηθή δηάγλσζε εμ απνζηάζεσο Σειε-δηάζθεςεο Σειε-εθπαίδεπζεο