TPAcyk IRMA REF 10-021 INSTRUCTIONS FOR USE

TPAcyk IRMA REF 10-021 INSTRUCTIONS FOR USE IVD DD ENGLISH INTENDED USE TPAcyk IRMA is a one step in vitro diagnostic assay for the quantitative determination of cytokeratin 8 and 18 in serum. The assay is a sensitive indicator of tumor cell activity and is useful in the management of patients with carcinomas of epithelial origin. PRINCIPLE OF THE ASSAY TPAcyk IRMA is a solid phase radiometric sandwich assay based on immunochemical technique. Standards, controls and samples react simultaneously with solid phase catcher antibodies (6D7 and 3F3) and the 125 I-labeled detector antibody during incubation in assigned tubes. After washing, the radioactivity is assessed in a gamma counter. The radioactivity is directly proportional to the concentration of the analyte. ASSAY SPECIFICITY TPAcyk measures key epitopes of TPA (Tissue Polypeptide Antigen) fragments. The monoclonal 6D7 and 3F3 antibodies used in the test are specific for cytokeratin 8 and 18, with no detectable cross reactivity to other tumor associated antigens that may be present in patient samples. SPECIMENS Serum samples are recommended. Enough blood should be collected to be sufficient for 2 x 100 l serum (duplicates) at each analysis. If the analysis will be performed within 24 h, the serum should be refrigerated (2-8 C). If delayed analysis, serum should be frozen in aliquots (<-18 C). Avoid repeated thawing and freezing. Do not use serum samples that are grossly lipemic, hemolysed or contaminated. PRECAUTIONS FOR USERS A. General 1. TPAcyk IRMA is for in vitro diagnostic use only. 2. Wear protective gloves and protective goggles. 3. Do not use the kit after expiry date. 4. Do not mix reagents from different lots. 5. All patient specimens should be regarded as contagious and handled and disposed of according to appropriate regulations. 6. Avoid microbiological contamination of reagents. 7. Analysis should be performed according to GLP. 8. The accuracy of the test is related to adherence to the assay procedure and accurate volume pipetting. 9. ProClin 300 (60 ppm) used as preservative in this product might be allergenic. In case of contact flush with plenty of water and seek medical advice. 10. Material Safety Data Sheets are available on request. B. Radioactive material 1. Radioactive material must be handled according to local regulations and may be received, acquired, possessed and used only by possessors of appropriate permissions. 2. Radioactive material should be stored and handled in designated areas. Immediately decontaminate spilled material. Wash all contaminated areas with a suitable detergent. 3. Do not eat, drink or smoke within the designated work area. 4. Wear protective gloves and goggles during handling of radioactive materials, wash hands thoroughly afterwards. 5. All material used should be considered as radioactive and disposed of in designated containers. MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Gamma counter for 125 I (efficiency > 40%). Shaker for tubes (oscillation 450 rpm). Wash equipment for tubes. Tubes and bead dispenser. Routine laboratory equipment, e.g. precision pipettes and vortex. COMPONENTS IN THE TPAcyk IRMA Materials supplied for 100 determinations. TPAcyk Coated Beads: 1 bottle, 100 dry beads, coated with monoclonal anti-cytokeratin 8/18 antibodies (6D7 and 3F3). Packed with desiccating device. Ready for use. TPAcyk IRMA 125 I Tracer: 1 vial, 11 ml, 125 I-labeled antibody in protein stabilized buffer, ph 7.5. Radioactivity 1.1 Mbq/vial. Red colored. Preservative added. Ready for use. TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml): 1 vial, 15 ml, sample diluent and standard 0 ng/ml, protein stabilized buffer, ph 7.5. Preservative added. Ready for use. TPAcyk IRMA Standard (0.5, 1, 2, 5, 15, 30 ng/ml): 6 vials standard, 1 ml/vial, TPAcyk standard material in protein stabilized buffer, ph 7.5. Concentrations as stated on vials. Preservative added. Ready for use. TPAcyk Control (Low, High): 2 vials control (1 ml/vial), lyophilized controls, TPAcyk standard material in protein stabilized buffer, ph 7.5. Yellow colored. Preservative added. Wash Tablet: 2 packages, 1 tablet/package. Each tablet should be dissolved in 500 ml fresh deionized water. TPAcyk IRMA Certificate: 1 protocol. Certificate of lot content. ASSAY PROCEDURE The assay (see Flow chart) should be performed at room temperature (RT; 22 6 C). 1. Allow all reagents and samples to adjust to RT. Vortex all reagents prior to use. 2. Dilute the TPAcyk Control (Low, High) with 1.0 ml fresh deionized water. Let vials stand, mix thoroughly after 10 min. Ready to use 15 min after reconstitution. 3. Pipette 100 l standards, controls or samples per tube (duplicates). 4. Add 1 bead per tube. 5. Add 100 l TPAcyk IRMA 125 I Tracer to each tube. Cover the tubes with plastic film. NB! Steps 4 and 5 should be performed sequentially without interruption. 6. Incubate for 4 h 5 min on shaker ( 450 rpm). 7. Prepare the wash solution. Dissolve each Wash Tablet in 500 ml fresh deionized water. 8. Aspirate and wash the tubes 3 x 3 ml with wash solution. 9. Assess the radioactivity in a gamma counter. Add two empty tubes for background cpm measurement. 10. Calculate the cytokeratin 8 and 18 concentration (ng/ml) of the samples. Samples showing concentrations >30 ng/ml value should be suitably diluted with TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml) before repeated analysis. PROCESSING OF RESULTS Manual calculation or by using a computer software for handling IRMA-type data (curve fitting - Spline smoothed). For generation of valid data, ensure that included controls are within range. Manual processing of results: Correct each cpm (counts per minute) value by subtracting the background radioactivity (cpm). Estimate the mean value for each duplicate. Construct a standard curve by plotting the mean cpm value for each standard (y-axis) against the corresponding concentration (x-axis). Determine the concentrations of the samples against the standard curve. REAGENT STORAGE The kit should be stored at 2-8 C. Do not freeze! Store reagents in their original containers if not used at once. Reseal the bottle with Coated Beads, including the desiccating device, if not all beads are used at once. The wash solution is stable for 4 weeks when stored at 2-8 C. The reconstituted controls are stable for 4 weeks when stored at 2-8 C. Flow chart Pipette 100 l standards/controls/samples per tube (duplicates). Add 1 bead per tube. Add 100 l Tracer per tube. Incubate 4h on shaker at RT. Aspirate and wash. Assess the radioactivity in a gamma counter. IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 1 (12)

LIMITATIONS OF THE PROCEDURE The test should not be used as a cancer screening test. The assay values should be interpreted in conjunction with all available clinical information. Increased values can also be found e.g. in cases of pregnancy, liver disease, renal failure and general infections. If a temporary infection is suspected, it may be necessary to repeat the test two weeks later. ASSAY CHARACTERISTICS Measuring range: The measuring range is 0-30 ng/ml. The assay has no high-dose hook effect up to 500 ng/ml. Reproducibility: The intra-assay reproducibility of the standard curve has a typical CV of <5 % (in duplicates). Inter-assay imprecision is characteristically of 5-10 % CV. Sensitivity: The minimal detectable concentration in TPAcyk IRMA is 0.1 ng/ml, defined as the concentration of TPA that corresponds to the cpm being three standard deviations from the cpm of standard 0 ng/ml. Expected values: The 95 th percentile for apparently healthy individuals (Swedish blood donors) has been determined to 1.0 ng/ml. Due to differences which may exist between laboratories and locales with respect to population, laboratory technique and selection of reference groups, it is recommended that each laboratory establishes its own normal range. Recovery: Specified quantities of TPAcyk were added to human serum specimens. The recovery was 86-101 %. WARRANTY The performance data presented here were obtained using the procedure indicated. Any change or modification in the procedure, not recommended by IDL Biotech AB, may affect the results. In such event IDL Biotech AB disclaims all warranties expressed, implied or statutory, including the implied warranty of merchantability and the fitness for use. REFERENCES 1. Stigbrand, T. et al. Epitope specificity of 30 monoclonal antibodies against cytokeratin antigens: The ISOBM TD5-1 Workshop. Tumor Biol 1998; 19:132-152. 2. Silén, Å. et al. A novel IRMA and ELISA for quantifying cytokeratin 8 and 18 fragments in the sera of healthy individuals and cancer patients. Scand J Clin Lab Invest 1995; 55: 153-161. 3. Correale, M. et al. TPAcyk assay in cytosol from primary breast cancer: preliminary results. Int J Biol Markers 1994; 9: 264-265. TPAcyk IRMA is manufactured by: IDL Biotech AB P O Box 111 51, SE-161 11 Bromma, Sweden Tel: +46 8 79 96 750, Fax: +46 8 79 99 320 e-mail: idlbiotech@idl.se, www.idl.se Date of issue 2009-12-10 IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 2 (12)

TPAcyk IRMA REF 10-021 GEBRAUCHSANWEISUNG IVD DD DEUTSCH ANWENDUNGSBEREICH TPAcyk IRMA ist ein in vitro - Diagnostikum. Der Assay dient zur quantitativen Bestimmung von Cytokeratin 8 und 18 im Serum. Der Assay ist als Tumoraktivitätsmarker besonders bei der Überwachung von Patienten mit Karzinomen epithelialen Ursprungs hilfreich. TESTPRINZIP TPAcyk IRMA ist ein auf der Sandwichtechnik basierender, festphasengebundener immunradiometrischer Assay. Standards, Kontrollen und Proben reagieren während der Inkubation gleichzeitig mit festphasengebundenen Fängerantikörpern (6D7 und 3F3) und dem 125 I-markierten Detektorantikörper in gekennzeichneten Röhrchen. Nach dem Waschen wird die Radioaktivität in einem Gamma Counter gemessen. Die Radioaktivität verhält sich direkt proportional zur Analytkonzentration. TESTSPEZIFITÄT TPAcyk misst die wichtigsten Epitope der TPA (Tissue Polypeptide Antigen) Fragmente. Die im Test verwendeten monoklonalen 6D7- und 3F3-Antikörper sind spezifisch für Cytokeratin 8 und 18 mit keiner nachweisbaren Kreuzreaktivität zu anderen tumorassoziierten Antigenen, die im Patientenserum vorkommen können. PROBEN Serumproben werden empfohlen. Eine ausreichende Menge Blut sollte entnommen werden, um mindestens 2 x 100 l Serum (Doppelbestimmung) für jede Messung zu erhalten. Wenn die Messung innerhalb von 24 Stunden erfolgt, sollten die Proben gekühlt (2-8 C) gelagert werden. Für spätere Messungen sollte das Serum portioniert tiefgefroren (<-18 C) werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden. Stark lipämische, hämolytische oder kontaminierte Proben können nicht verwendet werden. VORSICHTSMASSNAHMEN A. Allgemeines 1. TPAcyk IRMA ist ausschließlich zur in vitro Diagnostik einzusetzen. 2. Schutzhandschuhe und Schutzbrille tragen. 3. Der Kit darf nach dem Verfallsdatum nicht mehr verwendet werden. 4. Reagenzien unterschiedlicher Chargen dürfen nicht gemischt werden. 5. Alle Patientenproben sollten als potentiell infektiös angesehen werden und entsprechend der geltenden Richtlinien gehandhabt und entsorgt werden. 6. Mikrobielle Kontaminationen der Reagenzien sind zu vermeiden. 7. Die Messungen sollten gemäß GLP durchgeführt werden. 8. Die Richtigkeit des Test hängt von der exakten Testdurchführung und dem akkuraten Pipettieren der Volumina ab. 9. ProClin 300 (60 ppm), das dem Produkt als Konservierungsstoff zugesetzt ist, kann Allergien auslösen. Bei Kontakt mit reichlich Wasser spülen und einen Arzt konsultieren. 10. SICHERHEITSDATENBLÄTTER sind auf Anfrage erhältlich. B. Radioaktives Material 1. Beim Umgang mit radioaktivem Material sind die örtlichen Bestimmungen zu beachten. Nur Personen mit einer entsprechenden Erlaubnis dürfen solches Material in Empfang nehmen, käuflich erwerben, besitzen und in Gebrauch nehmen. 2. Radioaktives Material darf nur in gekennzeichneten Zonen aufbewahrt und in Gebrauch genommen werden. Verschüttetes Material muss sofort dekontaminiert werden. Reinigen Sie sämtliche kontaminierten Flächen mit einem geeigneten Reinigungsmittel. 3. In dem gekennzeichneten Arbeitsbereich darf nicht gegessen, getrunken oder geraucht werden. 4. Tragen Sie beim Umgang mit radioaktivem Material Schutzhandschuhe und -brille. Waschen Sie Ihre Hände anschließend gründlich. 5. Sämtliches benutzte Material ist als radioaktiv zu betrachten und muss in gekennzeichneten Containern entsorgt werden. BENÖTIGTES MATERIAL (Nicht im Lieferumfang) Gamma Counter für I-125 (Wirkungsgrad > 40%). Shaker für Röhrchen (Oszillation 450 rpm). Waschausrüstung für Röhrchen. Röhrchen und Kugelspender. Routine-Laborausstattung, z.b. Präzisionspipetten und Vortexer. KOMPONENTEN IM TPAcyk IRMA Material ausreichend für 100 Bestimmungen. TPAcyk Coated Beads: 1 Flasche, 100 trockene Kugeln, mit monoklonalen Anti-Cytokeratinantikörpern 8/18 beschichtet (6D7 und 3F3). Mit Trockenmittel abgepackt. Gebrauchsfertig. TPAcyk IRMA 125 I Tracer: 1 Fläschchen, 11 ml, 125 I-markierte Antikörper in proteinstabilisiertem Puffer, ph 7.5. Radioaktivität 1.1 Mbq/Fläschchen. Rot eingefärbt. Enthält Konservierungsmittel. Gebrauchsfertig. TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml): 1 Fläschchen, 15 ml, Verdünnungsreagenz und Standard 0 ng/ml, proteinstabilisierter Puffer, ph 7.5. Enthält Konservierungsmittel. Gebrauchsfertig. TPAcyk IRMA Standard (0.5, 1, 2, 5, 15, 30 ng/ml): 6 Fläschchen Standard, 1 ml/fläschchen, TPAcyk Standardmaterial in proteinstabilisertem Puffer, ph 7.5. Konzentrationen wie auf den Fläschchenetiketten angegeben. Enthält Konservierungsmittel. Gebrauchsfertig. TPAcyk Control (Low, High): 2 Fläschchen (1 ml/fläschchen), lyophilisierte Kontrollen, TPAcyk Standardmaterial in proteinstabilisiertem Puffer ph 7.5. Gelb eingefärbt. Enthält Konservierungsmittel. Wash Tablet: 2 Verpackungen, 1 Tablette/Verpackung. Jede Tablette wird in 500 ml frischem entionisierten Wasser aufgelöst. TPAcyk IRMA Certificate: 1 Protokoll. Zertifikat zum Inhalt der Charge. TESTDURCHFÜHRUNG Der Assay (siehe Flussdiagramm) sollte bei Raumtemperatur durchgeführt werden. (RT; 22 6 C). 1. Alle Reagenzien und Proben auf Raumtemperatur bringen. Alle Reagenzien vor Gebrauch vortexen. 2. Die TPAcyk Control (Low, High) mit 1.0 ml frisch entionisiertem Wasser verdünnen. Die Fläschchen stehen lassen und nach 10 Minuten sorgfältig mischen. Gebrauchsfertig nach 15 Minuten Rekonstitution. 3. 100 l Standards, Kontrollen oder Proben pro Röhrchen pipettieren (zweifach). 4. Pro Röhrchen eine Kugel hinzugeben. 5. Pro Röhrchen 100 l TPAcyk IRMA 125 I Tracer hinzugeben. Röhrchen mit Plastikfolie abdecken. Hinweis! Die Schritte 4 und 5 müssen nacheinander ohne Unterbrechung durchgeführt werden. 6. 4 Std. ± 5 Min. im Schüttler ( 450 rpm) inkubieren. 7. Die Waschlösung vorbereiten. Jede Tablette in 500 ml frischem entionisierten Wasser auflösen. 8. Absaugen und die Röhrchen 3 x 3 ml mit Waschlösung auswaschen. 9. Radioaktivität in einem Gamma Counter messen. Zwei leere Röhrchen für die cpm-hintergrundmessung hinzufügen. 10. Berechnung der Cytokeratin 8 und 18 Konzentrationen (ng/ml) der Proben. Proben mit Konzentrationen >30 ng/ml müssen vor der Wiederholungsmessung mit TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml) verdünnt werden. IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 3 (12)

Flussdiagramm 100 l Standards/ Kontrollen/ Proben pro Röhrchen pipettieren (zweifach). 1 Kugel pro Röhrchen hinzufügen. 100 l Tracer pro Röhrchen hinzufügen. Bei RT 4 Stunden im Shaker inkubieren. Absaugen und waschen. Radioaktivität in einem Gamma Counter messen. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE Manuelle oder Computergestützte Berechnung mittels Programm für Daten vom IRMA-Typ (Kurvenanpassung geglättete Spline- Funktion). Um die Validität der Ergebnisse zu gewährleisten ist sicherzustellen, dass die Kontrollen innerhalb der Zielbereiche gefunden werden. Manuelle Bearbeitung der Ergebnisse: Jeden cpm-wert durch Abziehen der Hintergrundstrahlung (cpm) korrigieren. Berechnen Sie den Durchschnittswert für jedes Duplikat. Durch die Auftragung des durchschnittlichen cpm-wertes für jeden Standard auf der y- Achse und der korrespondierenden Konzentration auf der x-achse erhalten Sie die Standardkurve. Bestimmen Sie die Konzentrationen der Proben im Vergleich zur Standardkurve. LAGERUNG DER REAGENZIEN Der Kit sollte bei 2-8 C gelagert werden. Nicht einfrieren! Wenn die Reagenzien nicht auf einmal verbraucht werden, in den Originalgefäßen lagern. Flasche mit beschichteten Kugeln erneut versiegeln, einschl. Trockenmittel, wenn nicht alle Kugeln sofort verbraucht werden. Die Waschlösung bleibt bei einer Lagertemperatur von 2-8 C vier Wochen stabil. Die rekonstituierten Kontrollen bleiben bei einer Lagertemperatur von 2-8 C vier Wochen stabil. GARANTIE Die hier gezeigten Leistungsdaten wurden mit dem beschriebenen Verfahren ermittelt. Jede Veränderung oder Modifikation des Verfahrens, die nicht von IDL Biotech AB empfohlen wird, kann die Ergebnisse beeinflussen. In einem solchen Fall lehnt IDL Biotech AB alle ausgedrückten, implizierten oder gesetzlichen Garantiezusagen ab, einschließlich der implizierten Zusicherung der Richtigkeit der Angaben über die Marktfähigkeit und die Eignung zum Gebrauch. REFERENZEN 1. Stigbrand, T. et al. Epitope specificity of 30 monoclonal antibodies against cytokeratin antigens: The ISOBM TD5-1 Workshop. Tumor Biol 1998; 19:132-152. 2. Silén, Å. et al. A novel IRMA and ELISA for quantifying cytokeratin 8 and 18 fragments in the sera of healthy individuals and cancer patients. Scand J Clin Lab Invest 1995; 55: 153-161. 3. Correale, M. et al. TPAcyk assay in cytosol from primary breast cancer: preliminary results. Int J Biol Markers 1994; 9: 264-265. GRENZEN DES VERFAHRENS Der Test kann nicht zum Screening auf Krebserkrankungen eingesetzt werden. Die Ergebnisse sollten immer in Verbindung mit anderen verfügbaren klinischen Informationen bewertet werden. Erhöhte Werte finden sich auch z.b. bei Schwangerschaft, Lebererkrankungen, Nierenerkrankungen und allgemeinen Infektionen. Wenn eine temporäre Infektion vermutet wird, ist es notwendig, den Test nach zwei Wochen erneut durchzuführen. TESTCHARAKTERISTIK Messbereich: Der Messbereich ist 0-30 ng/ml. Ein High-Dose Hook Effekt kann bis zu 500 ng/ml nicht beobachtet werden. Präzision: Die Intra-Assay-Präzision der Standardkurve hat typischerweise einen CV von <5 % (in Doppelbestimmungen). Die Inter-Assay Präzision ist normalerweise 5-10 % CV. Sensitivität: Die untere Nachweisgrenze der Konzentration in TPAcyk IRMA beträgt 0.1 ng/ml. Sie wird als die Konzentration von TPA definiert, deren cpm-wert der dreifachen Abweichung vom Nullstandard entspricht. Zu erwartende Werte: Die 95 Perzentile für offensichtlich gesunde Probanden (Schwedische Blutspender) wurde mit 1.0 ng/ml ermittelt. Auf Grund von Unterschieden zwischen Laboratorien, Regionen bezüglich der Population, Labortechniken und Auswahl der Referenzkollektive wird jedem Labor empfohlen, sich seine eigenen Referenzbereiche zu ermitteln. Wiederfindung: Bestimmte Mengen an TPAcyk wurden humanen Serumproben hinzugefügt. Die Wiederfindung lag zwischen 86-101 %. TPAcyk IRMA hergestellt von: IDL Biotech AB P O Box 111 51, SE-161 11 Bromma, Sweden Tel: +46 8 79 96 750, Fax: +46 8 79 99 320 e-mail: idlbiotech@idl.se, www.idl.se Ausgabedatum 2009-12-10 IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 4 (12)

TPAcyk IRMA REF 10-021 ISTRUZIONI PER L USO IVD DD ITALIANO USO TPAcyk IRMA è un dosaggio diagnostico in vitro ad uno step per la determinazione quantitativa della citocheratina 8 e 18 nel siero. Questo dosaggio è un indicatore sensibile dell attività delle cellule tumorali, particolarmente utile nel trattamento dei pazienti affetti da carcinoma di origine epiteliale. PRINCIPIO DEL DOSAGGIO TPAcyk IRMA è un dosaggio radiometrico "sandwich" in fase solida basato su una tecnica immunochimica. Gli standard, i controlli e i campioni reagiscono simultaneamente con gli anticorpi di cattura della fase solida (6D7 e 3F3) e con l'anticorpo di rilevamento marcato con 125 I durante l'incubazione nelle provette assegnate. Dopo il lavaggio, viene determinata la radioattività in un contatore gamma. La radioattività è direttamente proporzionale alla concentrazione dell'analita. SPECIFICITA DEL DOSAGGIO TPAcyk misura gli epitopi principali sui frammenti di TPA (antigene polipeptidico tissutale). Gli anticorpi monoclonali 6D7 e 3F3 utilizzati nel test sono specifici per la citocheratina 8 e 18, senza crossreattività rilevabile verso altri antigeni associati ai tumori che possano essere presenti nei campioni dei pazienti. CAMPIONI Si consiglia l utilizzo di campioni di siero. Per ogni dosaggio in duplicato sono necessari almeno 2 x 100 l di siero. Il campione è stabile fino a 24 ore a 2-8 C e, suddiviso in aliquote a < -18 C o a temperature inferiori per periodi più lunghi. Evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento. Non utilizzare campioni di siero fortemente lipemici, emolizzati o contaminati. PRECAUZIONI PER GLI UTILIZZATORI A. Generale 1. Il kit TPAcyk IRMA è solo ad uso diagnostico in vitro. 2. Usare guanti e occhiali protettivi. 3. Non utilizzare il kit dopo la data di scadenza. 4. Non mescolare reagenti di lotti diversi. 5. Tutti i campioni devono essere considerati infettivi e conseguentemente manipolati ed eliminati secondo le normative di legge vigenti. 6. Evitare la contaminazione microbica dei reagenti. 7. Le analisi devono essere eseguite secondo i criteri di BPL. 8. L accuratezza del test è correlata ad una attenta adesione alle procedure del dosaggio ed all accuratezza dei sistemi di dispensazione, lavaggio e conteggio. 9. Usato come conservante in questo prodotto, il ProClin 300 (60 ppm) può provocare allergie. In caso di contatto lavare la parte con abbondante acqua e contattare un medico. 10. Su richiesta sono disponibili opuscoli illustrativi sulla sicurezza dei materiali. B. Materiale radioattivo 1. Il materiale radioattivo deve essere manipolato in base ai regolamenti locali e può essere ricevuto, acquistato, posseduto e utilizzato esclusivamente da chi ha ottenuto i permessi appropriati. 2. Conservare e manipolare il materiale radioattivo in zone designate. Decontaminare immediatamente l'eventuale materiale versato. Lavare tutte le aree contaminate con un detergente idoneo. 3. Non mangiare, bere o fumare all'interno dell'area di lavoro designata. 4. Indossare guanti e occhiali protettivi durante la manipolazione di materiali radioattivi e lavare le mani per bene subito dopo. 5. Considerare come radioattivi tutti i materiali utilizzati e smaltirli in contenitori specifici. MATERIALI RICHIESTI MA NON FORNITI Contatore gamma per 125 I (efficienza > 40%). Agitatore per provette (oscillazione 450 rpm). Attrezzatura di lavaggio per provette. Provette e dispenser per sferette. Attrezzatura di laboratorio, pipette di precisione e vortex. COMPONENTI DEL TEST TPAcyk IRMA Materiali forniti per 100 determinazioni. TPAcyk Coated Beads: 1 flacone, 100 sferette disidratate, coattate con anticorpi monoclonali anti-citocheratina 8/18 (6D7 e 3F3). Confezionate con essiccante. Pronte all'uso. TPAcyk IRMA 125 I Tracer: 1 flacone, 11 ml, anticorpo marcati 125 I in una soluzione/tampone proteica stabilizzata, ph 7.5. Radioattività 1.1 Mbq/flacone. Colorato in rosso. Conservanti aggiunti. Pronto all'uso. TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml): 1 flacone, 15 ml, diluente del campione e standard 0 ng/ml, in un tampone proteico stabilizzato, ph 7,5. Conservante aggiunto. Pronto all uso. TPAcyk IRMA Standard (0,5, 1, 2, 5, 15, 30 ng/ml): 6 flaconi standard, 1 ml/flacone, TPAcyk materiale standard in tampone proteico stabilizzato, ph 7.5. Concentrazioni come indicato sui flaconi. Conservante aggiunto. Pronti all uso. TPAcyk Control (Low, High): 2 flaconi di controllo (1 ml/flacone), Controlli liofilizzati, TPAcyk materiale standard in un tampone proteico stabilizzato, ph 7.5. Colore giallo. Conservante aggiunto. Wash Tablet: 2 confezioni, 1 compressa/confezione. Sciogliere ogni compressa in 500 ml di acqua fresca deionizzata. TPAcyk IRMA Certificate: 1 protocollo. Certificato del contenuto. PROCEDURA DEL DOSAGGIO Il dosaggio (vedi diagramma di flusso) deve essere eseguito a temperatura ambiente (TA; 22 6 C). 1. Portare reagenti e campioni a temperatura ambiente. Agitare su vortex reagenti e campioni prima dell uso. 2. Diluire il TPAcyk Control (Low, High) con 1.0 ml acqua deionizzata fresca. Lasciare riposare i flaconi e dopo 10 minuti mescolare accuratamente. Pronto per l uso 15 minuti dopo la ricostituzione. 3. Pipettare 100 l di standard, controlli o campioni per provetta (duplicati). 4. Aggiungere 1 sferetta per provetta. 5. Aggiungere 100 l di TPAcyk IRMA 125 I Tracer in ogni provetta. Ricoprire le provette con una pellicola in plastica. NB! Effettuare le fasi 4 e 5 in maniera sequenziale senza interruzioni. 6. Incubare per 4 h 5 min su agitatore rotante ( 450 rpm). 7. Preparare la soluzione di lavaggio. Sciogliere ogni Compressa per lavaggio in 500 ml di acqua fresca deionizzata. 8. Aspirare e lavare le provette 3 x 3 ml con la soluzione di lavaggio. 9. Valutare la radioattività in un contatore gamma. Aggiungere due provette vuote per la misurazione cpm di background 10. Calcolare la concentrazione di citocheratina 8 e 18 (ng/ml) dei campioni. Campioni con concentrazioni >30 ng/ml devono essere opportunamente diluiti con il TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml) e ridosati. RISULTATI Calcolare i dati manualmente o con un sistema computerizzato di elaborazione dei dati di tipo IRMA (curve fitting Spline smoothed). Perchè i dati ottenuti possano essere considerati validi è necessario che i valori dei controlli siano compresi nell intervallo indicato. Elaborazione manuale dei risultati: Correggere ogni valore cpm (conteggio per minuto) sottraendo la radioattività di background (cpm). Stimare il valore medio desiderato per ogni duplicato. Costruire una curva standard tracciando su un diagramma il valore cpm medio per ogni standard (asse y) rispetto alla concentrazione corrispondente (asse x). Determinare le concentrazioni dei campioni rispetto alla curva standard. IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 5 (12)

Diagramma di Flusso Pipettare 100 l di standard/controlli/campioni per provetta (duplicati). Aggiungere 1 sferetta per provetta. Aggiungere 100 l di Tracer per provetta. Incubare per 4 ore su agitatore a TA. Aspirare e lavare. Valutare la radioattività in un contatore gamma. CONSERVAZIONE DEI REAGENTI Il kit deve essere conservato a 2-8 C. Non Congelare! Conservare i reagenti avanzati nei loro contenitori originali. Risigillare il flacone con le sferette coattate, inserendo l essiccante, se non sono ancora state utilizzate tutte le sferette. La soluzione di lavaggio è stabile per 4 settimane se conservata a 2-8 C. I controlli ricostituiti sono stabili per 4 settimane se conservati a 2-8 C. LIMITI DELLA PROCEDURA Il test non deve essere utilizzato come test di screening del cancro. I valori del dosaggio devono essere interpretati unitamente alle altre informazioni cliniche. Valori aumentati possono essere anche riscontrati in gravidanza, nelle malattie epatiche, nelle patologie renali e nelle infezioni. In caso di malattia infettiva acuta, ripetere il dosaggio dopo due settimane. CARATTERISTICHE DEL DOSAGGIO Range di misura: Il range di misura è 0-30 ng/ml. il dosaggio non presenta effetto gancio fino a 500 ng/ml. Riproducibilità: La riproducibilità intra-dosaggio della curva standard ha un CV tipico <5 % (nei duplicati). L imprecisione interdosaggio ha un CV tipico 5-10 %. Sensibilità: La concentrazione minima rilevabile nel dosaggio TPAcyk IRMA è 0.1 ng/ml, definita come la concentrazione di TPA che corrisponde al cpm pari a tre deviazioni standard dal cpm di 0 ng/ml standard. Valori Attesi: Il 95 percentile per individui apparentemente sani (donatori di sangue Svedesi) è risultato essere 1.0 ng/ml. A causa delle differenze che possono esistere tra i laboratori in relazione alla popolazione, alla tecnica di laboratorio ed alla selezione dei gruppi di riferimento, si consiglia ad ogni laboratorio di stabilire il proprio intervallo di normalità. Recupero: sono state aggiunte quantità note di TPAcyk a campioni di siero umano. Il recupero è stato del 86-101 %. GARANZIA Le prestazioni del dosaggio qui presentate sono state ottenute utilizzando la procedura indicata. Qualsiasi cambiamento o modifica della procedura, non indicato da IDL Biotech AB, può modificare i risultati. In tal caso IDL Biotech AB disconosce le garanzie espresse, implicite o esplicite, inclusa la garanzia che il prodotto sia commerciabile ed idoneo all utilizzo. BIBLIOGRAFIA 1. Stigbrand, T. et al. Epitope specificity of 30 monoclonal antibodies against cytokeratin antigens: The ISOBM TD5-1 Workshop. Tumor Biol 1998; 19:132-152. 2. Silén, Å. et al. A novel IRMA and ELISA for quantifying cytokeratin 8 and 18 fragments in the sera of healthy individuals and cancer patients. Scand J Clin Lab Invest 1995; 55: 153-161. 3. Correale, M. et al. TPAcyk assay in cytosol from primary breast cancer: preliminary results. Int J Biol Markers 1994; 9: 264-265. TPAcyk IRMA è fabbricato da: IDL Biotech AB P O Box 111 51, SE-161 11 Bromma, Sweden Tel: +46 8 79 96 750, Fax: +46 8 79 99 320 e-mail: idlbiotech@idl.se, www.idl.se Data di rilascio 2009-12-10 IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 6 (12)

TPAcyk IRMA REF 10-021 MODE D'EMPLOI IVD DD FRANÇAIS INDICATIONS Le TPAcyk IRMA est un test diagnostique in vitro en un temps pour la détermination quantitative des cytokératines 8 et 18 dans le sérum. Le test est un indicateur sensible de l activité des cellules tumorales. Il est utile dans la prise en charge de patients atteints de carcinomes d'origine épithéliale. PRINCIPE DU TEST Le TPAcyk IRMA est un dosage en sandwich radiométrique en phase solide basé sur une technique immunochimique. Les étalons, les témoins et les échantillons réagissent simultanément avec des anticorps capteurs en phase solide (6D7 et 3F3) et l anticorps détecteur marqué 125 I pendant l incubation dans des tubes assignés. Après lavage, la radioactivité est évaluée dans un compteur gamma. La radioactivité est directement proportionnelle à la concentration de l analyte. SPÉCIFICITÉ DU TEST Le TPAcyk mesure les épitopes clés de fragments de TPA (Tissue Polypeptide Antigen). Les anticorps monoclonaux 6D7 et 3F3 utilisés dans le test sont spécifiques des cytokératines 8 et 18, sans réactivité croisée détectable avec d'autres antigènes associés à des tumeurs qui pourraient être présents dans les échantillons des patients. ÉCHANTILLONS Des échantillons de sérum sont recommandés. Il convient de prélever suffisamment de sang pour 2 x 100 l de sérum (doubles) à chaque analyse. Si l'analyse est réalisée dans les 24 heures, le sérum doit être réfrigéré (2-8 C). Si l'analyse est retardée, le sérum doit être congelé en aliquots (< -18 C). Il convient d'éviter les congélations et décongélations répétées, et de ne pas utiliser d'échantillons de sérum nettement lipémiques, hémolysés ou contaminés. PRÉCAUTIONS POUR LES UTILISATEURS A. Généralités 1. Le TPAcyk IRMA est réservé à l'usage diagnostique in vitro. 2. Portez des gants et des lunettes de protection. 3. N'utilisez pas la trousse après la date d'expiration. 4. Ne mélangez pas de réactifs de lots différents. 5. Tous les échantillons des patients doivent être considérés comme contagieux, et doivent être manipulés et éliminés conformément aux règlements en vigueur. 6. Évitez toute contamination microbiologique des réactifs. 7. L'analyse doit être réalisée conformément aux BPL. 8. La précision du test est liée au respect de la procédure de dosage et au pipetage d'un volume exact. 9. Le ProClin 300 (60 ppm) utilisé comme conservateur dans ce produit pourrait être allergisant. En cas de contact, rincez avec beaucoup d'eau et consultez un médecin. 10. Des fiches de données de sécurité concernant le matériel sont disponibles sur demande. B. Matériel radioactif 1. Le matériel radioactif doit être manipulé conformément aux dispositions légales et ne peut être reçu, acquis, possédé et utilisé que par les titulaires des autorisations nécessaires. 2. Le matériel radioactif doit être stocké et manipulé dans des zones réservées à cet effet. Nettoyer immédiatement tout matériel répandu. Laver toutes les zones contaminées à l aide d un détergent approprié. 3. Ne pas manger, boire ou fumer dans les espaces de travail désignés. 4. Porter des gants et des lunettes de protection lors de la manipulation de matériel radioactif ; se laver soigneusement les mains ensuite. 5. Tout matériel utilisé doit être considéré comme radioactif et jeté dans des conteneurs réservés à cet usage. MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI Compteur gamma pour iode 125 (rendement > 40%). Agitateur de tubes (oscillation 450 tpm). Matériel pour le lavage des tubes. Tubes et distributeur de billes. Matériel de laboratoire habituel, par exemple pipettes de précision et vortex. COMPOSANTS DU TPAcyk IRMA Matériel fourni pour 100 déterminations. TPAcyk Coated Beads: 1 bouteille, 100 billes sèches, enrobées d anticorps monoclonaux anticytokératine 8/18 (6D7 et 3F3). Conditionnées avec dispositif dessicateur. Prêtes à l emploi. TPAcyk IRMA 125 I Tracer: 1 flacon, 11 ml, anticorps marqués à 125 I dans un tampon stabilisé par une protéine, ph 7.5. Radioactivité 1.1 Mbq/flacon. Coloré en rouge. Conservateur ajouté. Prêt à l emploi. TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml): 1 flacon, 15 ml, diluant d'échantillon et étalon 0 ng/ml, tampon stabilisé par une protéine, ph 7.5. Conservateur ajouté. Prêt à l'emploi. TPAcyk IRMA Standard (0.5, 1, 2, 5, 15, 30 ng/ml): 6 flacons d'étalon, 1 ml/flacon, matériel étalon TPAcyk dans un tampon stabilisé par une protéine, ph 7.5. Concentrations telles que mentionnées sur les flacons. Conservateur ajouté. Prêt à l'emploi. TPAcyk Control (Low, High): 2 flacons de témoin (1 ml/flacon), témoins lyophilisés, matériel étalon TPAcyk dans un tampon stabilisé par une protéine, ph 7.5. Coloré en jaune. Conservateur ajouté. Wash Tablet: 2 emballages, 1 tablette/emballage. Chaque tablette doit être dissoute dans 500 ml d eau désionisée fraîche. TPAcyk IRMA Certificate: 1 protocole. Certificat de contenu du lot. PROCÉDURE DU TEST Le test (voir Diagramme) doit être réalisé à température ambiante (TA; 22 6 C). 1. Amenez tous les réactifs et échantillons à température ambiante. Agitez tous les réactifs avant l'emploi. 2. Diluez le TPAcyk Control (Low, High) avec 1.0 ml d'eau désionisée fraîche. Laissez reposer les flacons, mélangez convenablement après 10 min. Prêt à l'emploi 15 min après la reconstitution. 3. Pipeter 100 l des étalons, des témoins ou des échantillons par tube (en double). 4. Ajoutez 1 bille par tube. 5. Ajoutez 100 l de TPAcyk IRMA 125 I Tracer dans chaque tube. Couvrez les tubes à l aide d un film plastique. NB : les étapes 4 et 5 doivent être réalisées l une après l autre sans interruption. 6. Incubez pendant 4 h 5 min. sur un agitateur ( 450 tpm). 7. Préparez la solution de lavage. Dissolvez chaque Wash Tablet dans 500 ml d eau désionisée fraîche. 8. Aspirez et lavez les tubes 3 x 3 ml avec la solution de lavage. 9. Evaluez la radioactivité dans un compteur gamma. Ajoutez deux tubes vides pour la mesure cpm ambiante. 10. Calculez la concentration en cytokératine 8 et 18 (ng/ml) des échantillons. Les échantillons présentant des concentrations > 30 ng/ml doivent être dilués de manière appropriée à l'aide de TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml) avant de répéter l'analyse. Diagramme Pipeter 100 l des étalons/témoins/échantillons par tube (doubles). Ajouter 1 bille par tube. Ajouter 100 l de Tracer par tube. Incuber 4 h sur agitateur à TA. Aspirer et laver. Evaluer la radioactivité dans un compteur gamma. IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 7 (12)

TRAITEMENT DES RÉSULTATS Par calcul manuel ou en utilisant un logiciel informatique pour traitement de données de type IRMA (convenant pour les courbes - lissage spline). Pour la production de données valides, veillez à ce que les témoins inclus figurent dans les limites. Traitement manuel des résultats : corrigez chaque valeur cpm (coups par minute) en soustrayant la radioactivité naturelle (cpm). Estimez la valeur moyenne de chaque double. Construisez une courbe étalon en reportant la valeur cpm moyenne pour chaque étalon (axe des Y) en fonction de la concentration correspondante (axe des X). Déterminez les concentrations des échantillons par rapport à la courbe étalon. CONSERVATION DES RÉACTIFS La trousse doit être conservée entre 2-8 C. Ne pas congeler! Conservez les réactifs dans leurs emballages d'origine s'ils ne sont pas utilisés immédiatement. Rescellez la bouteille des Coated Beads, y compris le dispositif dessicateur, si les billes ne sont pas toutes utilisées immédiatement. La solution de lavage est stable pendant 4 semaines lorsqu elle est conservée entre 2-8 C. Les témoins reconstitués sont stables pendant 4 semaines lorsqu ils sont conservés entre 2-8 C. LIMITES DE LA MÉTHODE Le test ne doit pas être utilisé comme test de dépistage du cancer. Les valeurs des dosages doivent être interprétées en même temps que toutes les informations cliniques disponibles. On peut également retrouver des valeurs augmentées en cas, par exemple, de grossesse, de maladie hépatique, d'insuffisance rénale et d'infection générale. Si on soupçonne une infection temporaire, il peut s'avérer nécessaire de répéter le test 2 semaines plus tard. CARACTÉRISTIQUES DU TEST Plage de mesure : la plage de mesure va de 0 à 30 ng/ml. Le test n'a pas d'effet crochet à dose élevée jusqu'à 500 ng/ml. Reproductibilité : la reproductibilité intra-test de la courbe étalon présente un coefficient de variation (CV) typique de < 5 % (dans les doubles). L'imprécision intra-test est caractéristiquement de 5-10 % de CV. Sensibilité : la concentration minimale détectable avec le TPAcyk IRMA est de 0.1 ng/ml, définie comme étant la concentration de TPA qui correspond à la valeur cpm de trois écarts-types par rapport à la valeur cpm de l étalon 0 ng/ml. Valeurs attendues : le 95 ième percentile pour des sujets apparemment sains (donneurs de sang suédois) a été déterminé comme étant 1.0 ng/ml. En raison de différences pouvant exister entre les laboratoires et les lieux en ce qui concerne la population, la technique de laboratoire et la sélection des groupes de référence, il est recommandé à chaque laboratoire d'établir ses propres limites normales. Récupération : des quantités spécifiées de TPAcyk ont été ajoutées à des échantillons de sérum humain. La récupération a été de 86-101 %. GARANTIE Les données de performance présentées ici ont été obtenues en utilisant la méthode indiquée. Toute modification à la méthode, non recommandée par IDL Biotech AB, peut influencer les résultats. Dans ce cas, IDL Biotech AB rejette toutes garanties expresses, implicites ou statutaires, y compris la garantie implicite de bonne qualité marchande et d'adéquation à l'emploi. RÉFÉRENCES 1. Stigbrand, T. et al. Epitope specificity of 30 monoclonal antibodies against cytokeratin antigens: The ISOBM TD5-1 Workshop. Tumor Biol 1998; 19:132-152. 2. Silén, Å. et al. A novel IRMA and ELISA for quantifying cytokeratin 8 and 18 fragments in the sera of healthy individuals and cancer patients. Scand J Clin Lab Invest 1995; 55: 153-161. 3. Correale, M. et al. TPAcyk assay in cytosol from primary breast cancer: preliminary results. Int J Biol Markers 1994; 9: 264-265. TPAcyk IRMA est fabriqué par : Date de publication 2009-12-10 IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 8(12) IDL Biotech AB P O Box 111 51, SE-161 11 Bromma, Sweden Tel: +46 8 79 96 750, Fax: +46 8 79 99 320 e-mail: idlbiotech@idl.se, www.idl.se

TPAcyk IRMA REF 10-021 INSTRUCCIONES DE EMPLEO IVD DD ESPAÑOL USO PREVISTO TPAcyk IRMA es un ensayo de diagnóstico in vitro para la determinación cuantitativa de citoqueratina 8 y 18 en suero. El ensayo es un indicador sensible de la actividad de célula tumoral, útil para el tratamiento de pacientes con carcinomas de origen epitelial. PRINCIPIO DEL ENSAYO El TPAcyk IRMA es un ensayo tipo sandwich radiométrico de fase sólida basado en la técnica inmunoquímica. Los estándares, controles y muestras reaccionan simultáneamente con anticuerpos captores de fase sólida (6D7 y 3F3) y con el anticuerpo detector mercado con 125 I durante la incubación en tubos asignados. Después del lavado, se determina la radioactividad en un contador gamma. La radioactividad es directamente proporcional a la concentración del analito. ESPECIFIDAD DEL ENSAYO TPAcyk mide los determinantes antigénicos clave de fragmentos TPA (Tissue Polypeptide Antigen). Los anticuerpos monoclonales 6D7 y 3F3 utilizados en la prueba son específicos para citoqueratina 8 y 18, sin reacción cruzada detectable con antígenos relacionados con otros tumores que pueda haber en muestras de pacientes. TIPO DE MUESTRA Se recomienda usar muestras de suero. Debe recogerse sangre suficiente para 2 x 100 l de suero (duplicados) en cada análisis. Si el análisis ha de realizarse dentro de 24 horas, se debe refrigerar el suero (2-8 C). Para análisis retardados, debe congelarse el suero en alícuotas (<-18 C). Evitar la descongelación y congelación repetidas. No utilizar muestras de suero que sean muy lipémicas, hemolizadas o contaminadas. PRECAUCIONES PARA LOS USUARIOS A. Generalidades 1. TPAcyk IRMA está destinado para su uso en diagnóstico in vitro solamente. 2. Usar guantes protectores y gafas protectoras. 3. No utilizar el kit después de la fecha de caducidad. 4. No mezclar reactivos de lotes diferentes. 5. Todas las muestras de pacientes deben considerarse como contagiosas y manipularse y desecharse de acuerdo con la normativa vigente. 6. Evitar la contaminación microbiana de los reactivos. 7. El análisis debe efectuarse según BPL. 8. La precisión de la prueba está relacionada con la adherencia al procedimiento de ensayo y con el pipetado de volumen preciso. 9. ProClin 300 (60 ppm), que se utiliza como conservante en el producto, puede ser alergénico. En caso de contacto, enjuagar con agua abundante y consultar a un médico. 10. Hay disponibles hojas de datos de seguridad de material que se entregan por solicitud. B. Material radioactivo 1. El material radioactivo ha de manejarse según la normativa local y sólo puede ser recibido, adquirido, poseído y utilizado por los titulares de los permisos adecuados. 2. El material radioactivo ha de ser almacenado y manejado en las áreas designadas. Hay que descontaminar inmediatamente el material vertido. Lavar todas las áreas contaminadas con un detergente adecuado. 3. No comer, beber ni fumar dentro del área de trabajo designada. 4. Utilizar guantes y gafas protectoras durante el manejo de los materiales radioactivos; lavar después minuciosamente las manos. 5. Todo el material utilizado ha de ser considerado como radioactivo y ser eliminado en contenedores designados para ello. MATERIALES NECESARIOS PERO NO INCLUIDOS Contador gamma para 125 I (eficiencia > 40%). Agitador para tubos (oscilación 450 rpm). Equipamiento de lavado para tubos. Tubos y dispensador de cuentas. Equipo de laboratorio común; por ejemplo, pipetas de precisión y centrifuga. COMPONENTES DE TPAcyk IRMA Materiales suministrados para 100 determinaciones. TPAcyk Coated Beads: 1 botella, 100 cuentas secas, recubiertas con anticuerpos anti-citoqueratina 8/18 monoclonales (6D7 y 3F3). Empaquetadas con dispositivo desecante. Listas para uso. TPAcyk IRMA 125 I Tracer: 1 frasco, 11 ml, anticuerpo mercado con 125 I en solución tampón estabilizada con proteína, ph 7.5. Radioactividad 1.1 Mbq/frasco. Color rojo. Conservante añadido. Listo para uso. TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml): 1 frasco, 15 ml, disolvente de muestra y estándar 0 ng/ml, solución tampón estabilizada con proteína, ph 7.5. Con conservante añadido. Listo para usar. TPAcyk IRMA Standard (0.5, 1, 2, 5, 15, 30 ng/ml): 6 frascos de estándar, 1 ml/frasco, material estándar TPAcyk en solución tampón estabilizada con proteína, ph 7.5. Concentraciones según se indica en los frascos. Con conservante añadido. Listos para usar. TPAcyk Control (Low, High): 2 frascos de control (1 ml/frasco), controles liofilizados, material estándar TPAcyk en solución tampón estabilizada con proteína, ph 7.5. Color amarillo. Con conservante añadido. Wash Tablet: 2 paquetes, 1 tableta/paquete. Cada tableta ha de disolverse en 500 ml de agua dulce desionizada. TPAcyk IRMA Certificate: 1 protocolo. Certificado de contenido de lote. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO El ensayo (ver el diagrama de Flujo) debe efectuarse a temperatura ambiente (RT; 22 6 C). 1. Todos los reactivos y muestras deben ser conformes a RT. Centrifugar todos los reactivos antes de usarlos. 2. Diluir el TPAcyk Control (Low, High) con 1.0 ml de agua dulce desionizada. Dejar reposar los frascos y mezclar bien después de 10 minutos. Preparado para usar después de 15 minutos de reconstitución. 3. Pipetear 100 l estándares, controles o muestras por tubo (duplicados). 4. Añadir una cuenta por tubo. 5. Añadir 100 l TPAcyk IRMA 125 I Tracer a cada tubo. Cubrir los tubos con película de plástico. Nota: Los puntos 4 y 5 han de ejecutarse secuencialmente, sin interrupción. 6. Incubar durante 4 horas 5 minutos en un agitador ( 450 rpm). 7. Preparar la solución de lavado. Disolver cada tableta de lavado en 500 ml de agua dulce desionizada. 8. Aspirar y lavar los tubos 3 x 3 ml con la solución de lavado. 9. Medir la radioactividad en un contador gamma. Añadir dos tubos vacíos para la medición cpm de fondo. 10. Calcular la concentración de citoqueratina 8 y 18 (ng/ml) de las muestras. Las muestras que presenten un valor de concentración >30 ng/ml deben diluirse adecuadamente con TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml) antes de repetir el análisis. Diagrama de Flujo Pipetear 100 l estándares/ controles/muestras por tubo (duplicados). Añadir 1 cuenta por tubo. Añadir 100 l de Tracer por tubo. Incubar 4h en agitador en RT. Aspirar y lavar. Medir la radioactividad en un contador gamma. IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 9(12)

PROCESAMIENTO DE LOS RESULTADOS Cálculo manual o con software de ordenador para tratamiento de datos tipo IRMA (ajuste de curvas alisado). Para la regeneración de datos válidos, comprobar que los controles incluidos están dentro del rango. Procesamiento manual de resultados: Corregir cada cpm (cuentas por minuto) sustrayendo la radioactividad de fondo (cpm). Estimar el valor medio de cada duplicado. Construir una curva estándar dibujando el valor cpm medio para cada estándar (eje y) con la concentración correspondiente (eje x). Determinar las concentraciones de las muestras sobre la curva estándar. ALMACENAJE DE REACTIVOS El kit debe almacenarse a 2-8 C. No congelar! Almacenar los reactivos en sus envases originales si no se van a usar de inmediato. Si no se van a utilizar inmediatamente todas las cuentas, resellar la botella con las cuentas recubiertas, incluyendo el dispositivo desecante. La solución de lavado es estable durante cuatro semanas si se almacena a una temperatura de 2-8 C. Los controles reconstituidos son estables durante cuatro semanas si se almacenan a temperaturas de 2-8 C. LIMITACIONES DEL ENSAYO La prueba no se debe utilizar para el diagnóstico sistemático de cáncer. Los valores de ensayo deben interpretarse junto con toda la información clínica disponible. También pueden hallarse valores aumentados en, por ejemplo, casos de embarazo, enfermedad hepática, deficiencia renal e infecciones generales. Si se sospecha una infección temporal, puede ser necesario repetir la prueba dos semanas más tarde. CARACTERÍSTICAS DEL ENSAYO Rango de medición: El rango de medición es de 0-30 ng/ml. El ensayo no tiene efecto de enganche por dosis alta hasta 500 ng/ml. Reproductibilidad: La reproductibilidad entre ensayos de la curva estándar tiene un CV típico de <5 % (en duplicados). La imprecisión entre ensayos característica es de 5-10 % CV. Sensibilidad: La concentración detectable mínima en TPAcyk IRMA es de 0.1 ng/ml, definida como la concentración de TPA que corresponde a tres desviaciones estándar del cpm estándar de 0 ng/ml. Valores esperados: El percentil 95 para individuos aparentemente sanos (donantes de sangre suecos) se ha determinado en 1.0 ng/ml. Debido a las diferencias que pueden existir entre laboratorios y poblaciones locales, la técnica de laboratorio y la selección de grupos de referencia,se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango. Recuperación: Se añadieron cantidades especificadas de TPAcyk a especímenes de suero humano. La recuperación fue del 86-101 %. GARANTÍA Los datos de funcionamiento presentados aquí se obtuvieron utilizando el procedimiento indicado. Cualquier cambio o modificación del procedimiento, que no sea recomendado por IDL Biotech AB, puede influir en los resultados. En tal caso, IDL Biotech AB rechaza todas las garantías expresadas, implícitas o reglamentarias, incluso la garantía de comercialización implícita y la aptitud de empleo. REFERENCIAS 1. Stigbrand, T. et al. Epitope specificity of 30 monoclonal antibodies against cytokeratin antigens: The ISOBM TD5-1 Workshop. Tumor Biol 1998; 19:132-152. 2. Silén, Å. et al. A novel IRMA and ELISA for quantifying cytokeratin 8 and 18 fragments in the sera of healthy individuals and cancer patients. Scand J Clin Lab Invest 1995; 55: 153-161. 3. Correale, M. et al. TPAcyk assay in cytosol from primary breast cancer: preliminary results. Int J Biol Markers 1994; 9: 264-265. TPAcyk IRMA fabricado por: Fecha de publicación 2009-12-10 IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 10 (12) IDL Biotech AB P O Box 111 51, SE-161 11 Bromma, Sweden Tel: +46 8 79 96 750, Fax: +46 8 79 99 320 e-mail: idlbiotech@idl.se, www.idl.se

TPAcyk IRMA REF 10-021 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ IVD DD ΕΛΛΗΝΙΚΑ ΕΝΔΕΔΕΙΓΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Tο TPAcyk IRMA είναι μια in vitro διαγνωστική ανάλυση ενός βήματος για την ποσοτική μέτρηση της κυτοκερατίνης 8 και 18 σε ορό. Η ανάλυση αποτελεί ευαίσθητο δείκτη ένδειξης δραστηριότητας όγκου και είναι χρήσιμη για την παρακολούθηση ασθενών με καρκίνο του επιθηλίου. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ Ο προσδιορισμός TPAcyk IRMA είναι ένας ραδιομετρικός προσδιορισμός sandwich στερεάς φάσης που βασίζεται σε ανοσοχημική τεχνική. Τα πρότυπα διαλύματα, οι μάρτυρες και τα δείγματα αντιδρούν ταυτόχρονα με αντισώματα-παγίδες στερεάς φάσης (6D7 και 3F3) και το επισημασμένο με ραδιενεργό ιχνηθέτη 125 I αντίσωμα-ανιχνευτή κατά τη διάρκεια της επώασης σε σωληνάρια. Μετά την έκπλυση, η ραδιενέργεια υπολογίζεται με τη χρήση μετρητή γάμμα. Η ραδιενέργεια είναι ευθέως ανάλογη προς τη συγκέντρωση του αναλύτη. ΙΔΙΑΙΤΕΡΟΤΗΤΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ Tο TPAcyk μετρά τα βασικά επίτοπα των θραυσμάτων TPA (Tissue Polypeptide Antigen). Τα μονόκλωνα αντισώματα 6D7 και 3F3 που χρησιμοποιήθηκαν στο τεστ είναι συγκεκριμένα για την κυτοκερατίνη 8 και 18, χωρίς καμία διασταυρούμενη αντιδραστικότητα με άλλα αντιγόνα που σχετίζονται με όγκο, τα οποία μπορεί να εμφανίζονται σε δείγματα ασθενών. ΔΕΙΓΜΑΤΑ Συνιστάται η λήψη δειγμάτων ορού. Πρέπει να συλλεχθεί αρκετό αίμα ώστε να επαρκέσει για ποσότητα ορού 2 x 100 l (δείγματα εις διπλούν) για κάθε ανάλυση. Αν η ανάλυση πραγματοποιηθεί εντός 24 ωρών, ο ορός πρέπει να διατηρηθεί στη συντήρηση (2-8 C). Αν η ανάλυση πραγματοποιηθεί αργότερα, ο ορός πρέπει να καταψυχθεί σε υποπολλαπλάσιες θερμοκρασίες (<-18 C). Αποφεύγετε τους επαναλαμβανόμενους κύκλους ψύξης και απόψυξης. Μη χρησιμοποιείτε δείγματα ορού τα οποία είναι μακροσκοπικώς λιπαιμικά, αιμολυμένα ή μολυσμένα. ΜΕΤΡΑ ΠΡΟΦΥΛΑΞΗΣ ΓΙΑ ΤΟΥΣ ΧΡΗΣΤΕΣ A. Γενικά 1. Το TPAcyk IRMA προορίζεται μόνο για in vitro διαγνωστική χρήση. 2. Φοράτε προστατευτικά γάντια και προστατευτικά γυαλιά. 3. Μη χρησιμοποιείτε το κιτ μετά την ημερομηνία λήξης. 4. Μην αναμιγνύετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες. 5. Ολα τα δείγματα των ασθενών πρέπει να θεωρούνται μολυσματικά, να χρησιμοποιούνται και να απορρίπτονται σύμφωνα με τους σχετικούς κανονισμούς. 6. Αποφύγετε τη μικροβιολογική επιμόλυνση των αντιδραστηρίων. 7. Η ανάλυση πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με το GLP. 8. H ακρίβεια του τεστ εξαρτάται από την πιστή τήρηση της διαδικασίας ανάλυσης και τη σωστή ποσότητα που θα μεταφερθεί με το σιφόνι. 9. Το ProClin 300 (60 ppm) που χρησιμοποιείται ως συντηρητικό σε αυτό το προϊόν μπορεί να προκαλέσει αλλεργία. Σε περίπτωση επαφής, ξεπλύνετε με άφθονο νερό και συμβουλευτείτε ιατρό. 10. Τα Φύλλα των Στοιχείων Ασφαλείας του Υλικού είναι διαθέσιμα σε περίπτωση που ζητηθούν. B. Ραδιενεργό υλικό 1. Ο χειρισμός του ραδιενεργού υλικού πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους κρατικούς κανονισμούς, η δε λήψη, κατοχή και χρήση του πρέπει να γίνεται μόνον κατόπιν εξασφάλισης της κατάλληλης άδειας. 2. Η αποθήκευση και ο χειρισμός του ραδιενεργού υλικού πρέπει να γίνονται σε ειδικά καθορισμένους χώρους. Αν χυθεί ραδιενεργό υλικό, κάντε αμέσως απολύμανση. Πλύνετε όλες τις μολυσμένες περιοχές με κατάλληλο απορρυπαντικό. 3. Σε σημεία όπου αυτό απαγορεύεται, μην τρώτε, μην πίνετε και μην καπνίζετε. 4. Κατά τη διάρκεια του χειρισμού ραδιενεργών υλικών φοράτε προστατευτικά γάντια και γυαλιά και πλένετε καλά τα χέρια σας μόλις τελειώσετε την εργασία σας. 5. Όλα τα υλικά θα πρέπει να θεωρούνται ραδιενεργά και να απορρίπτονται στα ειδικά δοχεία. ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΟΥΝΤΑΙ ΑΛΛΑ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ Μετρητής γάμμα για ραδιενεργό ιχνηθέτη 125 I (αποτελεσματικότητα > 40%). Αναδευτήρας σωληναρίων (ταλάντωση 450 rpm). Εξοπλισμός έκπλυσης σωληναρίων. Φορέας σωληναρίων και σφαιριδίων. Εξοπλισμός εργαστηρίου, π.χ. σιφώνια ακριβείας και όργανο αναταράξεως. ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ ΓΙΑ ΤΟ TPAcyk IRMA Υλικά που παρέχονται για 100 προσδιορισμούς. TPAcyk Coated Beads: 1 φιάλη, 100 ξηρά σφαιρίδια, επιστρωμένα με μονοκλωνικά αντισώματα (6D7 και 3F3) αντικυτοκερατίνης 8/18. Η συσκευασία περιέχει αφυγραντική ουσία. Έτοιμα προς χρήση. TPAcyk IRMA 125 I Tracer: 1 φιαλίδιο, 11 ml, αντίσωμα επισημασμένο με ραδιενεργό ιχνηθέτη 125 I σε ρυθμιστικό διάλυμα σταθεροποιημένο με πρωτεΐνη, ph 7.5. Ραδιενέργεια 1.1 Mbq/φιαλίδιο. Χρωματισμός: Κόκκινο. Περιέχει συντηρητικό. Έτοιμο προς χρήση. TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml): 1 φιαλίδιο, 15 ml, διαλυτικό δείγμα και πρότυπο διάλυμα 0 ng/ml, σταθεροποιημένο ρυθμιστικό διάλυμα πρωτεΐνης, ph 7.5. Περιέχει συντηρητικά. Ετοιμο για χρήση. TPAcyk IRMA Standard (0.5, 1, 2, 5, 15, 30 ng/ml): 6 φιαλίδια πρότυπου διαλύματος, 1 ml/φιαλίδιο, υλικό πρότυπου διαλύματος TPAcyk σε σταθεροποιημένο ρυθμιστικό διάλυμα πρωτεΐνης, ph 7.5. Οι συγκεντρώσεις αναφέρονται στα φιαλίδια. Περιέχει συντηρητικά. Ετοιμο για χρήση. TPAcyk Control (Low, High): 2 φιαλίδια διαλύματος ελέγχου (1 ml/φιαλίδιο), Λυόφιλα Διαλύματα Ελέγχου, υλικό πρότυπου διαλύματος TPAcyk σε σταθεροποιημένο ρυθμιστικό διάλυμα πρωτεΐνης, ph 7.5. Κιτρινοχρωματισμένο. Περιέχει συντηρητικά. Wash Tablet: 2 συσκευασίες, 1 δισκίο/συσκευασία. Κάθε δισκίο πρέπει να διαλύεται σε 500 ml φρέσκου, απιονισμένου νερού. TPAcyk IRMA Certificate: 1 πρωτόκολλο. Πιστοποιητικό περιεχομένου παρτίδας. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ Η ανάλυση (δείτε σχεδιάγραμμα Ροής) πρέπει να πραγματοποιείται σε θερμοκρασία δωματίου (ΘΔ 22 6 C). 1. Αφήστε τα αντιδραστήρια και τα δείγματα να σταθεροποιηθούν σε ΘΔ. Αναταράξτε όλα τα αντιδραστήρια πριν τη χρήση. 2. Διαλύστε το TPAcyk Control (Low, High) σε 1.0 ml καθαρού απιονισμένου νερού. Αφήστε τα φιαλίδια να σταθεροποιηθούν, έπειτα από 10 λεπτά αναμείξτε καλά. Ετοιμο για χρήση 15 λεπτά έπειτα από την ανασύσταση. 3. Μεταφέρετε, με την πιπέτα, 100 l πρότυπου διαλύματος, μάρτυρα ή δείγματος ανά σωληνάριο (εις διπλούν). 4. Προσθέστε 1 σφαιρίδιο ανά σωληνάριο. 5. Προσθέστε 100 l TPAcyk IRMA 125 I Tracer σε κάθε σωληνάριο. Καλύψτε τα σωληνάρια με πλαστικό φιλμ. ΣΗΜΕΙΩΣΗ! Τα βήματα 4 και 5 πρέπει να εκτελεστούν διαδοχικά, χωρίς διακοπή. 6. Επωάστε για 4 ώρες 5 λεπτά σε αναδευτήρα δίσκων (~450 rpm). 7. Παρασκευάστε το διάλυμα έκπλυσης. Διαλύστε κάθε ένα από τα δισκία έκπλυσης σε 500 ml φρέσκου, απιονισμένου νερού. 8. Κάντε αναρρόφηση και εκπλύνετε τα σωληνάρια 3 x 3 ml με διάλυμα έκπλυσης. 9. Μετρήστε τη ραδιενέργεια με μετρητή γάμμα. Προσθέστε δύο άδεια σωληνάρια για μέτρηση cpm υποβάθρου. 10. Υπολογίστε τη συγκέντρωση κυτοκερατίνης 8 και 18 (ng/ml) στα δείγματα. Τα δείγματα με συγκέντρωση >30 ng/ml πρέπει να διαλύονται καταλλήλως με TPAcyk Diluent (Standard 0 ng/ml) πριν την επανάληψη της ανάλυσης. IFU TPAcyk IRMA 91 303 02 11 (12)