NOVA Gel TM SS-A/SS-B S Για In Vitro διαγνωστική χρήση

NOVA Gel TM SS-A/SS-B S 708450 Για In Vitro διαγνωστική χρήση Σκοπός χρήσης Το NOVA Gel TM SS-A/SS-B είναι ένα σύστημα δοκιμασίας διπλής διάχυσης για τη διαλογή και τον ημι-ποσοτικό προσδιορισμό των αυτοαντισωμάτων στο SS-A/SS-B, ένα εκχυλίσιμο πυρηνικό αντιγόνο (ENA), στον ανθρώπινο ορό. Η παρουσία των αντισωμάτων SS-A/SS-B μπορεί να χρησιμοποιηθεί από κοινού με άλλες ορολογικές εξετάσεις και κλινικά ευρήματα για να βοηθήσουν στη διάγνωση Συστηματικού Ερυθηματώδους Λύκου (SLE) και άλλες ασθένειες του συνδετικού ιστού, όπως είναι το σύνδρομο Sjogren. Περίληψη και επεξήγηση της δοκιμασίας Ο όρος «Anti-nuclear antibodies» (ΑΝΑ) (αντιπυρηνικά αντισώματα) περιγράφει μια ποικιλία αυτοαντισωμάτων που αντιδρούν με συστατικά κυτταρικών πυρήνων που περιλαμβανομένων των DNA, RNA και διάφορες πρωτεΐνες και ριβοπυρηνοπρωτεΐνες. 1 Αυτά τα αντισώματα απαντώνται με υψηλή συχνότητα σε ασθένειες του συνδετικού ιστού ή ρευματικές ασθένειες, ειδικά το SLE. Κατ ουσία όλοι οι ασθενείς με SLE είναι θετικοί στο ΑΝΑ. Αυτή η διαγνωστική ευαισθησία έχει οδηγήσει στην ενσωμάτωση των εξετάσεων για ΑΝΑ από την υπο-επιτροπή Αρθρίτιδας και Ρευματισμών το 1982 για τα επαναληπτικά κριτήρια του συστηματικού ερυθηματώδoυς λύκου(sle). 2 Ενώ οι εξετάσεις ΑΝΑ είναι ένας εξαιρετικός ομαδικός έλεγχος για το SLE (ένα αρνητικό αποτέλεσμα στην ουσία εξαιρεί το ενεργό SLE 3 ) δεν είναι με κανένα τρόπο ειδική δοκιμασία. Η πρακτική στην διάγνωση και τον χειρισμό των ασθενειών του συνδετικού ιστού είναι να συνδυάζεται ο ομαδικός έλεγχος για ΑΝΑ με περισσότερες ειδικές εξετάσεις όπως το dsdna και\ή το ΕΝΑ. Οι εξετάσεις για το ΕΝΑ είναι ιδιαίτερα σημαντικές, εφόσον παρέχουν και διαγνωστικές και προγνωστικές πληροφορίες. Αυτοαντισώματα σε SS-A βρέθηκαν σε 40-50% των ασθενών με Σύνδρομο Sjogren s και στο 25% των ασθενών, ΑΝΑ θετικών SLE. 4,5 Αντισώματα σε SS-B βρέθηκαν στο 23% των ασθενών με Σύνδρομο Sjogren s και στο 5-10% των ασθενών με SLE. 4,5 Αντισώματα SS-A/SS-B έχουν βρεθεί σε κάποιους ασθενείς που έχουν κλινικά συμπτώματα SLE, συμπεριλαμβανομένων και των εμφανών δερματικών χαρακτηριστικών αλλά που συχνά αποτυγχάνουν να επιδείξουν ένα θετικό ΑΝΑ, ειδικά όταν τομές τρωκτικών χρησιμοποιούνται σαν υπόστρωμα. 6,7 Αντισώματα σε SS-A και SS-B συνδέονται στενά με βρεφικό SLE και ανακοπή καρδιάς σε νεογέννητα. 5,8 Αρκετές μελέτες καταλήγουν στην χρήση των SS-B αντισωμάτων σαν ορολογικό σημάδι για σύμπλεγμα SS-sicca, αφού τα SS-B αντισώματα εντοπίζονται σχεδόν στο 60% τέτοιων ασθενών. 9,10 Αρχή μεθόδου Η δοκιμασία διπλής διάχυσης που περιγράφεται από τον Ouchterlony 11, επιτρέπει σε ένα διάλυμα αντιγόνου να διαχυθεί παθητικά μέσα από ένα υπόστρωμα ζελέ κατευθείαν προς το δείγμα του ασθενή και\ή στον πρότυπο ορό που περιέχει αντισώματα. Ειδικά μορφοποιημένες πλάκες με υπόστρωμα από ζελέ χρησιμεύουν ως θέσεις από τις οποίες το διάλυμα του αντιγόνου και το διάλυμα του αντισώματος διαχέονται το ένα στο άλλο. Στο σημείο της ισότητας αντιγόνουαντισώματος, μια ορατή γραμμή ιζηματίνης σχηματίζεται μέσα στο ζελέ. Η ανοσολογική κατάσταση ενός ασθενή μπορεί τότε να καθοριστεί με την παρατήρηση του τύπου των συνορευόντων γραμμών ιζηματίνης που σχηματίστηκαν μέσα στο ζελέ από ένα δείγμα πρότυπου ορού γνωστής εξειδίκευσης και ενός άγνωστου ορού ασθενή. 1

Η τεχνική της διπλής διαχύσεως μπορεί να χρησιμοποιηθεί με προετοιμασία κεκαθαρμένου SS- A/SS-B, ένα γνωστό δείγμα πρότυπου ορού αυτοαντισώματος SS-B ή SS-A και έναν ορό ασθενή, για τον οποίο υπάρχουν υποψίες ότι περιέχει αυτοαντισώματα SS-B και/ή SS-A, για να δείξει την ανοσολογική σχέση η μη. Η επιβεβαίωση της δράσης του αυτοαντισώματος SS-B και/ή SS-A στον ορό του ασθενή, πιστοποιείται εάν η γραμμή ιζηματίνης συγχωνεύεται χαρακτηριστικά με τη γραμμή που σχηματίστηκε από το δείγμα του γνωστού πρότυπου ορού. Σωστές διαδικασίες διπλής διάχυσης σε διάφορες συγκεντρώσεις αντιγόνου-αντισώματος με σκοπό να αποφευχθεί υπερβολή αντιγόνου ή αντισώματος. Λανθασμένος ή παραπλανητικός σχηματισμός γραμμής ιζηματίνης μπορεί να προκληθεί από την υπερβολή του αντιγόνου ή αντισώματος. Για να αποφευχθεί αυτό, θα πρέπει να αναλύονται αραιώσεις του ορού του ασθενή σε δοκιμασία με την ίδια προετοιμασία του αντιγόνου. Οι μικροπλάκες NOVA Gel S σχεδιάστηκαν για την εύκολη ικανοποίηση αυτής της απαίτησης. Τα μεγάλα εξαγωνικά πηγαδάκια έχουν τέτοιο μέγεθος ώστε να περιέχουν 1:1 ή καθαρή συγκέντρωση του ορού του ασθενή ή των διαλυμάτων ελέγχου. Τα μικρά τετράγωνα πηγαδάκια, λόγω της σχεδίασής τους, δημιουργούν αυτόματα ένα διάλυμα περίπου 1:4 του καθαρού δείγματος του ασθενή. Αντιδραστήρια 1. Πλάκες ανάλυσης με ζελέ NOVA Gel S με 7 πηγαδάκια η καθεμιά, που περιέχουν σταθεροποιητές και 0,09% αζωτούχο νάτριο. 2. 0,4mL αντιγόνο SS-A/SS-B (από γαστροκνημία θύμωνος αδένος) λυοφιλοποιημένο σε ρυθμιστικό διάλυμα, το οποίο περιέχει σταθεροποιητές και 0,09% αζωτούχο νάτριο. 3. 0,7mL SS-A ανθρώπινος πρότυπος ορός, που περιέχει αυτοαντισώματα SS-A/SS-B σε ρυθμιστικό διάλυμα, το οποίο περιέχει 0,09% αζωτούχο νάτριο. 4. 0,7mL SS-B ανθρώπινος πρότυπος ορός, που περιέχει αυτοαντισώματα SS-A/SS-B σε ρυθμιστικό διάλυμα, το οποίο περιέχει 0,09% αζωτούχο νάτριο. Προσοχή 1. Όλα τα ανθρώπινα υλικά που χρησιμοποιήθηκαν στην προετοιμασία των πρότυπων ορών για αυτό το προϊόν έχουν εξεταστεί και βρέθηκαν αρνητικά για αντισώματα HIV, HBsAg και HCV από εγκεκριμένες μεθόδους FDA. Ωστόσο, καμιά δοκιμασμένη μέθοδος δεν μπορεί να προσφέρει απόλυτη ασφάλεια ότι οι HIV, HBsAg, HCV ή άλλοι μολυσματικοί παράγοντες είναι απόντες. Για αυτό το λόγο, τα διαλύματα ελέγχου SS-A και SS-B θα πρέπει να μεταχειρίζονται με τον ίδιο τρόπο όπως ένα πιθανώς μολυσματικό προϊόν. 12 2. Το αζίδιο του νατρίου χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου είναι δηλητήριο και μπορεί να είναι τοξικό σε περίπτωση κατάποσης. Το αζίδιο νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μολύβδινες ή χάλκινες σωληνώσεις με αποτέλεσμα την πρόκληση δυνητικά εκρηκτικών μεταλλικών ενώσεων αζιδίων. Αν για την απόρριψη του αντιδραστηρίου χρησιμοποιούνται λεκάνες απόπλυσης, η συγκέντρωση των αζιδίων μπορεί να αποφευχθεί ξεπλένοντας με άφθονο νερό. 3. Να χρησιμοποιείτε τον κατάλληλο προστατευτικό εξοπλισμό όταν δουλεύετε με τα αντιδραστήρια. 4. Αντιδραστήρια που έχουν χυθεί πρέπει να καθαρίζονται αμέσως. Τηρείτε όλους τους ομοσπονδιακούς, εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς για την απόρριψη αποβλήτων. 2

Ειδικά μέτρα 1. Αυτό το προϊόν είναι για διαγνωστική χρήση In Vitro. 2. Η αντικατάσταση συστατικών με διαφορετικά από τα παρεχόμενα σε αυτό το σύστημα μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή αποτελέσματα. 3. Συνιστάται η χρήση αποστειρωμένου αποσταγμένου ή απιονισμένου νερού για ανασύσταση του αντιγόνου. 4. Η απόδοση της ανάλυσης επηρεάζεται από μια ποικιλία παραγόντων. Αυτοί περιλαμβάνουν την αρχική θερμοκρασία των αντιδραστηρίων, την παρεμπόδιση να επιπλέουν τα αντιδραστήρια ή τα δείγματα των ασθενών στις πλάκες και την ποιότητα του νερού που χρησιμοποιείται για να ενυδατώσει το αντιγόνο. Η προσοχή στη συνάφεια είναι σημαντική για την ακρίβεια και επαναληψιμότητα των αποτελεσμάτων. 5. Συνιστάται η ακριβής τήρηση του πρωτοκόλλου. Αποθήκευση Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια στους 2-8 C. Μην τα καταψύχετε. Είναι σταθερά για χρήση μέχρι τη λήξη τους εάν αποθηκεύονται σύμφωνα με τις οδηγίες. Μόλις ενυδατωθεί το αντιγόνο είναι σταθερό για 2 εβδομάδες στους 2-8 o C. Εάν επιθυμείτε, μπορείτε να ετοιμάσετε 100μL αντιγόνου και να το φυλάξετε σε < -70 o C. Το αντιγόνο που είναι αποθηκευμένο με αυτό τον τρόπο είναι σταθερό για ένα χρόνο τουλάχιστον. Δείγματα Η διαδικασία μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο με δείγματα ορού. Η προσθήκη αζιδίου ή άλλων συντηρητικών στα δείγματα της δοκιμασίας μπορεί να επηρεάσει αρνητικά τα αποτελέσματα. Μικροβιακή μόλυνση, θέρμανση η δείγματα περιέχοντα ορατά ξένα στοιχεία δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται. Θα πρέπει να αποφεύγονται αιμολυτικά ή λιπαιμικά δείγματα ορού. Μετά τη συλλογή του δείγματος, ο ορός θα πρέπει να διαχωρίζεται άμεσα από το ολικό αίμα. Το NCCLS Document Η18-Α2 συνιστά τις ακόλουθες συνθήκες φύλαξης για τα δείγματα: 1) Φυλάξτε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου όχι περισσότερο από 8 ώρες. 2) Εάν η διαδικασία δεν ολοκληρωθεί μέσα σε 8 ώρες, καταψύξτε το δείγμα στους 2-8 C. 3) Εάν η διαδικασία δεν ολοκληρωθεί μέσα σε 48 ώρες ή απαιτείται η αποστολή του δείγματος, καταψύξτε στους 20 C ή χαμηλότερα. Τα κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να αναμιχθούν καλά μετά την απόψυξη και πριν από την εξέταση. Διαδικασία Υλικά που παρέχονται 8 προστρωμένες πλάκες ανάλυσης NOVA Gel "S" 2 0,4mL SS-A/SS-B αντιγόνο, λυοφιλοποιημένο 1 0,7mL SS-A διάλυμα ελέγχου 1 0,7mL SS-B διάλυμα ελέγχου Πρόσθετος εξοπλισμός που απαιτείται και δεν συμπεριλαμβάνεται Μικροπιπέτες για μεταφορά όγκου 15-100μL Ρύγχη μικροπιπετών 0,85% Χλωριούχο Νάτριο Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό (κατά προτίμηση αποστειρωμένο) Πηγή φωτός ή κουτί παρατήρησης με ζελέ 3

Μέθοδος 1. Ενυδάτωση του αντιγόνου SS-A/SS-B Ανοίξτε προσεκτικά μια φιάλη αντιγόνου και προσθέστε 0,4mL αποσταγμένου ή απιονισμένου νερού στο αντιγόνο. Συνιστάται αυστηρά αποστειρωμένο αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό για την καλύτερη εκτέλεση του προϊόντος. Αφήστε το ενυδατωμένο αντιγόνο να μείνει για 5 λεπτά, μετά στροβιλίστε για να ανακατευτεί πλήρως πριν από τη χρήση. 2. Γέμισμα της πλάκας ζελέ Γεμίστε τις πλάκες με αντιγόνο και διαλύματα ελέγχου (περίπου 80μL ανά μεγάλο πηγαδάκι), όπως φαίνεται παρακάτω. Κάθε δείγμα ασθενούς πρέπει να γεμίσει τόσο σε μεγάλο εξαγωνικό πηγαδάκι (περίπου 80μL) όσο και σε μικρό τετράγωνο πηγαδάκι (περίπου 20μL) όπως φαίνεται. Δεν είναι κρίσιμες οι ακριβείς ποσότητες διανομής, ωστόσο ΜΗΝ ΥΠΕΡΧΕΙΛΙΖΕΤΕ ΤΑ ΠΗΓΑΔΑΚΙΑ. Τα πηγαδάκια διαλύματος ελέγχου μπορούν να διανεμηθούν απευθείας από τα πλαστικά μπουκαλάκια ή τις μικροπιπέτες. Εάν χρησιμοποιήσετε πιεζόμενα μπουκάλια, τοποθετείστε την μύτη μέσα στο πηγαδάκι και σιγάσιγά πιέστε μέχρις ότου το επίπεδο του υγρού πλησιάσει την κορυφή του πηγαδιού. Σκεπάστε την πλάκα αμέσως μετά το γέμισμα. Σημείωση: Η μικρότερη ποσότητα του τετράγωνου πηγαδιού μειώνει την τοπική συγκέντρωση του αντισώματος του ασθενούς ΧΩΡΙΣ ΝΑ ΑΠΑΙΤΕΙΤΑΙ ΒΗΜΑ ΔΙΑΛΥΣΗΣ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ. Η πραγματική αραίωση του μικρού πηγαδιού είναι περίπου 1:4. Αυτό μειώνει την πιθανότητα ψευδούς αρνητικού αποτελέσματος λόγω υπερβολικού αντισώματος. 3. Επώαση Αφήστε την καλυμμένη πλάκα για επώαση σε θερμοκρασία δωματίου πάνω σε μια σταθερή, επίπεδη επιφάνεια για 24 ώρες. Εξετάστε την πλάκα και παρατηρήστε αν δημιουργούνται γραμμές ιζηματίνης ανάμεσα στο δείγμα του ασθενή και στο αντιγόνο. Εξετάστε την σχέση αυτής της γραμμής με τη γραμμή ιζηματίνης οποιουδήποτε διαλύματος ελέγχου. Εξετάστε την πλάκα ξανά στις 48 ώρες για να ελέγξετε αν έχουν δημιουργηθεί άλλες νέες γραμμές πριν την τελική ερμηνεία των αποτελεσμάτων. Ποιοτικός έλεγχος Τα διαλύματα ελέγχου SS-A και SS-B θα πρέπει να εφαρμόζονται σε κάθε πλάκα για να εξασφαλιστεί ότι όλα τα αντιδραστήρια και οι διαδικασίες έχουν γίνει σωστά. Πρόσθετα κατάλληλα διαλύματα ελέγχου μπορούν να προετοιμαστούν διαιρώντας σε υποπολλαπλάσια δείγμα ανθρώπινου ορού πολλαπλών δοτών και αποθηκεύοντας σε θερμοκρασία < -70 o C. Για να είναι τα αποτελέσματα των εξετάσεων έγκυρα, πρέπει να φαίνεται μια γραμμή ιζηματίνης ανάμεσα στα διαλύματα ελέγχου SS-A και SS-B και των πηγαδιών αντιγόνου SS-A/SS-B. 4

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Για καλύτερη παρατήρηση των γραμμών ιζηματίνης, συνιστάται η παρακάτω διαδικασία: 1. Βγάλτε το καπάκι τη πλάκας. 2. Κρατήστε την πλάκα σε τέτοια θέση που να ελαχιστοποιεί τον αντικατοπτρισμό της επιφάνειας του ζελέ. 3. Φωτίστε την πλάκα από το πλάι (π.χ. παράλληλα στην επιφάνεια του ζελέ). Σημείωση: Βεβαιωθείτε ότι η πηγή φωτός προστατεύεται από άμεση προβολή. 4. Οι γραμμές ιζηματίνης φαίνονται καλύτερα όταν κάνουν αντίθεση με ένα μαύρο φόντο και τις βλέπετε υπό γωνία. 5. Ένας μεγεθυντικός φακός μπορεί να βοηθήσει στην παρακολούθηση των ελαφρά ορατών γραμμών ή στον εντοπισμό των μη-αναγνωρίσιμων δειγμάτων. Αρνητική Αντίδραση. Ένα δείγμα θεωρείται αρνητικό εάν δεν σχηματίζεται ορατή γραμμή ιζηματίνης ανάμεσα στα πηγαδάκια του ασθενή και στο πηγαδάκι του αντιγόνου μετά από 48 ώρες. Ερμηνεία εξειδικεύσεων. Στην διπλή διάχυση, η εξειδίκευση καθορίζεται σημειώνοντας τη σχέση των γραμμών ιζηματίνης του δείγματος με τις γνωστές γραμμές του διαλύματος ελέγχου. Τα παρακάτω ενδεχόμενα μπορεί να συμβούν με το τεστ του NOVA Gel TM SS-A/SS-B: Εικ. 1: Μη αναγνωρίσιμο Εικ. 2: Αναγνωρίσιμο SS-B Εικ. 3: Αναγνωρίσιμο SS-B και SS-A Η γραμμή ιζηματίνης ασθενούς 1 διασταυρώνεται ή δείχνει μη-ταυτότητα τόσο με το διάλυμα ελέγχου SS-B όσο και με το SS-A. Αυτό υποδεικνύει ότι ο ασθενής αντιδρά με ένα αντιγόνο ENA διαφορετικό από SS-B ή SS-A. Η γραμμή ιζηματίνης ασθενούς 1 συγχωνεύεται ή δείχνει ταυτότητα με τη γραμμή ελέγχου SS-B. Σε αυτήν την περίπτωση, ο ασθενής έχει αυτοαντισώματα σε SS-B. Ο ασθενής 1 έχει δύο γραμμές ιζηματίνης. Η μία από τις γραμμές δείχνει ταυτότητα με το διάλυμα ελέγχου SS-B και η άλλη με το διάλυμα ελέγχου SS-A. Αυτός ο ασθενής έχει αυτοαντισώματα τόσο σε SS-B όσο και σε SS-A. Όρια της διαδικασίας 1. Πολλαπλές γραμμές ιζηματίνης μπορεί να δυσχεραίνουν την ερμηνεία των αποτελεσμάτων. Σε αυτές τις περιπτώσεις προτείνεται η επανάληψη της δοκιμασίας του δείγματος σε αραίωση 1:2 ή 1:4 σε αλατούχο διάλυμα, τοποθετώντας κάθε αραίωση τόσο σε εξαγωνικό πηγαδάκι όσο και σε μικρότερο τετράγωνο πηγαδάκι. Αυτό δημιουργεί μια αραίωση 1:8 ή 1:16 αντίστοιχα στο μικτότερο τετράγωνο πηγαδάκι. Η αραίωση του διαλύματος μπορεί να καταργήσει τις ασθενέστερες γραμμές ή να διαχωρίσει τις γραμμές έτσι ώστε να είναι ευκολότερη η ερμηνεία. 5

2. Παρόλο που δεν είναι πιθανό με αυτή τη δοκιμασία, λόγω της μοναδικής γεωμετρίας πηγαδιών, υπάρχει μια πιθανότητα να δημιουργηθούν προζώνες. Οι προζώνες δημιουργούνται όταν υπάρχει μια περίσσια ποσότητα από αυτοαντισώματα ασθενή σχετικά με το αντιγόνο προκαλώντας έτσι το σχηματισμό γραμμής ιζηματίνης στο πηγαδάκι του αντιγόνου. Σε αυτές τις περιπτώσεις συνιστάται η επανεξέταση των πιθανών θετικών δειγμάτων σε αραίωση 1:2 ή 1:4 σε αλατούχο διάλυμα, για να αποτραπεί μια ψευδής αρνητική ερμηνεία του τεστ. 3. Εάν χρησιμοποιηθεί μη-αποστειρωμένο ή μολυσμένο νερό για να ενυδατωθεί το αντιγόνο, τότε το αντιγόνο μπορεί να υποστεί άμεσο ή βαθμιαίο υποβιβασμό. Σε αυτή την περίπτωση μπορεί ως αποτέλεσμα να είναι μια πολύ λεπτή γραμμή ιζηματίνης ή και απουσία γραμμής. 4. Το διάλυμα ελέγχου SS-B δεν είναι μονοειδικό και μπορεί να περιέχει ορισμένα SS-A. 5. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης πρέπει να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τα κλινικά ευρήματα και άλλες οροδιαγνωστικές δοκιμασίες. 6. Τα χαρακτηριστικά απόδοσης αυτής της ανάλυσης δεν έχουν τεκμηριωθεί για μήτρες διαφορετικές από ορό. Αναμενόμενες τιμές Το τεστ διπλής διαχύσεως NOVA Gel TM SS-A/SS-B χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει ποικίλους ασθενείς με ασθένεια των συνδετικών ιστών, καθώς επίσης και 200 τυχαίους αιμοδότες. Τα αποτελέσματα φαίνονται παρακάτω: Ομάδα ασθενών Αριθμός Αριθμός Θετικών με το τεστ NOVA Gel ENA Θετικά SS-B Θετικά SS-A SLE 105 14 14 Φαρμακογενής λύκος 24 0 0 Ρευματοειδής αρθρίτιδα 40 0 0 Σκληροδερμία 24 1 2 Δερματομυοσίτιδα 14 0 0 Σύνδρομο Sjogren 14 3 8 Φυσιολογικά 200 0 0 6

Βιβλιογραφία 1. Tan E. Autoantibodies to nuclear antigens (ANA): Their immunobiology and medicine. Advances in Immunology 33:167-239, 1982. 2. Tan E, et. al. The 1982 Revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus. Arthritis and Rheumatism 25:1271-1277, 1982. 3. Casalo SP, Friou GJ, Myers LL. Significance of antibody to DNA in systemic lupus erythematosus. Arthritis and Rheumatism 7:379-390, 1964. 4. Alexander, EL et al. Ro(SS-A) and La(SS-B) antibodies in the clinical spectrum of Sjogren's Syndrome, J Rheumatol 9:239-246, 1982. 5. Kephart DC et al. Neonatal Lupus Erythematosus: New Serologic Findings, J Invest Derm 77:331-333, 1981. 6. Provost TT et al. Antibodies to cytoplasmic antigens in lupus erythematosus-serologic disease. Arth and Rheum 20:1457-1463, 1977. 7. Maddison PJ, Provost TT, Reichlin M. Serological findings in patients with "ANA negative" systemic lupus erythematosus. Medicine 60:87-93, 1981. 8. Franco HL et al. Autoantibodies directed against sicca syndrome antigens in the neonatal lupus syndrome. J. Am Acad Dermatol 4:67-72, 1981. 9. Alspaugh MA, Tan EM. Serum antibody in rheumatoid arthritis reactive with a cell associated antigen, Arth and Rheum 19:711-719, 1976. 10. Scopelitis E, Biundo JJ and Alspaugh MA. Anti-SS-A antibody and other anti-nuclear antibodies in systemic lupus erythematosus, Arth and Rheum 23:287-293, 1980. 11. Ouchterlony O: Diffusion-in-gel methods for immunological analysis. Prog Allergy 5:1, 1958. 12. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. Κατασκευαστής: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 United States of America Aντιπροσωπευτικός: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Germany Tel.: +49-6894-581020 Fax.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com Technical Service 888-545-9495 628450GRC November 2009 Revision 12 7