Πληροφορίες AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Tests P/N: Παραγγελίας Specimen Preparation Kit ART: US: 83315

COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test NG ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚH ΧΡΗΣΗ. Πληροφορίες AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Tests P/N: 20759414 122 Παραγγελίας Specimen Preparation Kit ART: 07 5941 4 US: 83315 AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP 96 Tests P/N: 20759902 122 Amplification Kit ART: 07 5990 2 US: 83319 COBAS AMPLICOR NG DK 100 Tests P/N: 20757535 122 Neisseria gonorrhoeae ART: 07 5753 5 Detection Kit US: 83278 COBAS AMPLICOR DK 100 Tests P/N: 20757470 122 Detection Reagents Kit ART: 07 5747 0 US: 83276 COBAS AMPLICOR WB 500 Tests P/N: 20759899 123 Wash Buffer Kit ART: 07 5989 9 US: 83314 Το κιτ που ακολουθεί μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση των Chlamydia trachomatis σε ενισχυμένα δείγματα με τη χρήση του AMPLICOR CT/NG Κιτ Ενίσχυσης. Η ανίχνευση των Chlamydia trachomatis είναι επιλογή χειριστή. COBAS AMPLICOR CT DK 100 Tests P/N: 20757497 122 Chlamydia trachomatis ART: 07 5749 7 Detection Kit US: 83277 Το κιτ που ακολουθεί μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου που έχει ενισχυθεί με τη χρήση του AMPLICOR CT/NG Κιτ Ενίσχυσης. Η ανίχνευση του εσωτερικού προτύπου ελέγχου είναι επιλογή χειριστή κατά την εξέταση των δειγμάτων ούρων ή δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχθεί σε μέσα μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων. Η ανίχνευση του Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου είναι υποχρεωτική κατά την εξέταση δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Συλλογής και Μεταφοράς Δειγμάτων από Στυλεό. COBAS AMPLICOR IC DK 100 Tests P/N: 20757608 122 Internal Control Detection Kit ART: 07 5760 8 US: 83281 Το ακόλουθο κιτ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη συλλογή και τη μεταφορά των ενδοτραχηλικών και των ουρηθρικών δειγμάτων από στυλεό. AMPLICOR STD STD SWAB 50 Tests P/N: 20753920 122 Swab Specimen Collection ART: 07 5392 0 and Transport Kit US: 83075 P/N: 03789560 190 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 1/38

Προβλεπόμενη Χρήση Το COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae (NG) Test είναι μια ποιοτική in vitro εξέταση για την ανίχνευση του N. gonorrhoeae DNA σε κλινικά δείγματα στον COBAS AMPLICOR Αναλυτή. Η εξέταση χρησιμοποιεί την τεχνική ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος Αλυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης (PCR) και τον υβριδισμό νουκλεϊκού οξέος για την ανίχνευση της Neisseria gonorrhoeae στα ουρογεννητικά δείγματα. Σύνοψη και Επεξήγηση της Εξέτασης Τα Neisseria gonorrhoeae (γονόκοκκος) είναι ο λοιμώδης παράγοντας της γονόρροιας. Τα N. gonorrhoeae είναι αρνητικοί κατά gram διπλόκοκκοι, θετικοί στην οξειδάση κυτοχρώματος, μη κινητικοί και δεν σχηματίζουν σπόρια 1-3. Τα N. gonorrhoeae σχετίζονται γενετικά στενά με τα N. meningitidis (μηνιγγιτιδόκοκκοι), τον αιτιολογικό παράγοντα ενός τύπου βακτηριακής μηνιγγίτιδας και σχετίζονται ελαφρώς λιγότερο με τα N. lactamica, ένα ευκαιριακό ανθρώπινο παθογόνο. Τα N. gonorrhoeae καθώς και η N. meningitidis μολύνουν μόνο τους ανθρώπους. Υπάρχουν αρκετά πρόσθετα είδη Neisseria που μπορούν να θεωρηθούν φυσιολογική χλωρίδα στους ανθρώπους συμπεριλαμβανομένων των N. cinerea, N. elongata, N. flavescens, N. mucosa, N. sicca και N. subflava 1,2. Οι λοιμώξεις Neisseria gonorrhoeae αποτελούν την τρίτη πιο κοινή αιτία σεξουαλικά μεταδιδόμενων νοσημάτων με 62,2 εκατομμύρια περιστατικά γονόρροιας παγκοσμίως 4. Στους άνδρες, η νόσος αυτή γενικά καταλήγει σε πρόσθια ουρηθρίτιδα που συνοδεύεται από πυώδες έκκριμα. Στις γυναίκες η νόσος εμφανίζεται συχνότερα στον τράχηλο της μήτρας, αλλά μπορεί να μολυνθούν τόσο ο κόλπος όσο και η μήτρα 2,5. Η πιθανή διάγνωση της γονόρροιας βασίζεται στην: παρατήρηση των αρνητικών κατά gram ενδοκυτταρικών διπλόκοκκων σε επιχρίσματα gram χρώσης των ουρηθρικών απεκκρίσεων από τους άνδρες και των ενδοτραχηλικών εκκρίσεων από τις γυναίκες, στην ανάπτυξη των N. gonorrhoeae από την ουρήθρα (άνδρες) ή ενδοτραχηλικά σε επιλεγμένα μέσα καλλιέργειας που συνοδεύεται από την εκδήλωση τυπικής αποικιακής μορφολογίας, δραστηριότητας της θετικής οξειδάσης και τυπικής αρνητικής κατά gram διπλοκοκκικής μορφολογίας, και/ή στην ανίχνευση των N. gonorrhoeae με εργαστηριακές εξετάσεις χωρίς καλλιέργεια. Για την οριστική διάγνωση της γονόρροιας απαιτείται απομόνωση των Neisseria gonorrhoeae από τις τοποθεσίες έκθεσης με καλλιέργεια (48-72 ωρών καλλιέργεια σε επιλεγμένο μέσο), εκδήλωση της τυπικής αποικιακής μορφολογίας, εξέταση θετικής οξειδάσης, τυπικά αρνητική κατά gram μορφολογία και επιβεβαίωση των απομονωμένων στελεχών καλλιέργειας των N. gonorrhoeae με συγκεκριμένες μεθόδους ταυτοποίησης (παραγωγή οξέος από υδατάνθρακες, γρήγορες εξετάσεις ενζύμου, ορολογικές αναλύσεις, εξετάσεις για ειδικό νουκλεϊκό οξύ) 1-3,5-7. Η καλλιέργεια απαιτείται για τον προσδιορισμό της αντιμικροβιακής ευπάθειας. Βασικές αρχές της Διαδικασίας Το COBAS AMPLICOR NG Test βασίζεται σε τέσσερις κύριες διαδικασίες: προετοιμασία δείγματος, ενίσχυση PCR 8,9 του DNA-στόχου με τη χρήση NG-ειδικών συμπληρωματικών βιοτινιλυωμένων εκκινητών, υβριδισμό των ενισχυμένων προϊόντων σε ολιγονουκλεοτιδικούς ιχνηθέτες ειδικούς για το στόχο (-ους) και ανίχνευση των δεσμευμένων στον ιχνηθέτη ενισχυμένων προϊόντων με χρωματομετρικό προσδιορισμό. 2/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

Neisseria gonorrhoeae Προετοιμασία Δείγματος Ενίσχυση PCR Η ανάπτυξη της ανάλυσης PCR περιλαμβάνει την ταυτοποίηση της ειδικής περιοχής του DNA στόχου προς ενίσχυση και τη σύνθεση δύο μικρών βιοτινιλυωμένων ολιγονουκλεοτιδικών εκκινητών που είναι συμπληρωματικοί στις πλευρές των περιοχών της αλληλουχίας στόχου. Οι βιοτινιλυωμένοι αυτοί εκκινητές δεσμεύονται στη συμπληρωματική πλευρική περιοχή και η DNA πολυμεράση επεκτείνει την αλληλουχία με κατεύθυνση από το 5' άκρο προς το 3' άκρο χρησιμοποιώντας πλεόνασμα τριφωσφορικών δεοξυνουκλεοζιτών (dntps) στο μίγμα αντίδρασης δημιουργώντας έτσι μια βιοτινιλυωμένη συμπληρωματική αλληλουχία DNA που αποκαλείται κλώνος (amplicon). Ένας ολιγονουκλεοτιδικός ιχνηθέτης ειδικός για τον κλώνο (amplicon) δεσμεύεται σε μια σταθερή βάση (μικροσωματίδια) και χρησιμοποιείται για τον υβριδισμό (δέσμευση) του κλώνου (amplicon). Το σύστημα ανίχνευσης της ανάλυσης χρησιμοποιεί ένα συζεύκτη avidin-υπεροξειδάσης ραφανίδας (HRP) που δεσμεύει το βιοτινιλυωμένο κλώνο (amplicon) που είναι δεσμευμένος στα μικροσωματίδια. Για το σχηματισμό χρώματος χρησιμοποιείται υπόστρωμα υπεροξειδίου του υδρογόνου και χρωμοφόρος τετραμεθυλοβενζιδίνη (TMB). Το COBAS AMPLICOR NG Test είναι μια πολλαπλή ανάλυση που επιτρέπει την ταυτόχρονη ενίσχυση του DNA-στόχου της N. gonorrhoeae, του DNAστόχου των C. trachomatis και του DNA του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου. Το αντιδραστήριο Κυρίου Μίγματος περιέχει ζεύγη βιοτινιλυομένων εκκινητών ειδικών για C. trachomatis, N. gonorrhoeae και CT/NG IC. Η ανίχνευση του ενισχυμένου DNA των C. trachomatis μπορεί να εκτελεστεί στην επιλογή χειριστή. Η ανίχνευση του CT/NG IC πρέπει να εκτελεστεί κατά την εξέταση δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Συλλογής και Μεταφοράς Δειγμάτων από Στυλεό. Η ανίχνευση του CT/NG IC μπορεί να εκτελεστεί στην επιλογή χειριστή κατά την εξέταση των δειγμάτων ούρων ή δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί σε μέσα μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων. Τα ουρογεννητικά επιθηλιακά κύτταρα, τα λευκοκύτταρα και τα σχετικά με τα N. gonorrhoeae κύτταρα συλλέγονται σε στυλεούς ή δημιουργούν ίζημα από τα ούρα. Τα δείγματα υποβάλλονται σε επεξεργασία με ένα καθαριστικό διάλυμα για τη λύση των κυττάρων και την απελευθέρωση του γονοκοκκικού DNA. Στη συνέχεια προστίθεται ένα δεύτερο καθαριστικό διάλυμα για την προετοιμασία του δείγματος για ενίσχυση. Επιλογή Στόχου Τα Neisseria gonorrhoeae περιέχουν μια υψηλής συντηρητικότητας αλληλουχία DNA (M Ngo PII) η οποία, βασιζόμενη στην ομολογία αλληλουχίας, κωδικοποιεί προφανώς μια DNA μεθυλοτρανσφεράση της κυτοσίνης που αναστέλλει τη διάσπαση του χρωμοσωμικού DNA από τη HaeIII περιοριστική ενδονουκλεάση. ΗM Ngo PII αλληλουχία γονιδίου (περίπου 1044 ζεύγη βάσεων) υπάρχει στα διαφορετικά στελέχη της N. gonorrhoeae και δεν υπάρχει στα περισσότερα, μηγονοκοκκικά είδη Neisseria 10. Το COBAS AMPLICOR NG Test χρησιμοποιεί τους βιοτινιλυωμένους εκκινητές SS01 και SS02 για να καθορίσει μια αλληλουχία περίπου 201 νουκλεοτιδίων εντός του M Ngo PII γονιδίου N. gonorrhoeae. Ενίσχυση Στόχου Τα επεξεργασμένα δείγματα προστίθενται στο μίγμα ενίσχυσης σε σωληνάρια ενίσχυσης A-tubes στα οποία πραγματοποιείται ενίσχυση PCR. Ο θερμοκυκλοποιητής του COBAS AMPLICOR Αναλυτή θερμαίνει το μίγμα αντίδρασης για την αποδιάταξη του δίκλωνου DNA και την έκθεση των αλληλουχιών-στόχου ειδικών για τον εκκινητή στο γονίδιο Neisseria gonorrhoeae M Ngo PII. Καθώς το μίγμα ψύχεται, οι βιοτινιλυωμένοι εκκινητές SS01 και SS02 υβριδίζονται στη συμπληρωματική αλληλουχία του DNA των N. gonorrhoeae. Η θερμοσταθερή DNA πολυμεράση Thermus aquaticus (Taq pol), με την παρουσία πλεονάσματος τριφωσφορικών δεοξυνουκλεοζιτών (dntps), στους οποίους περιλαμβάνονται η τριφωσφορική δεοξυαδενοσίνη, η δεοξυγουανοσίνη, η 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 3/38

δεοξυκυτιδίνη και η δεοξυουριδίνη (αντί της δεοξυθυμιδίνης), επεκτείνει τους υβριδισμένους εκκινητές κατά μήκος του προτύπου-στόχου για τη δημιουργία ενός μορίου δίκλωνου DNA 201 ζευγών βάσεων, που ονομάζεται κλώνος (amplicon). Ο COBAS AMPLICOR Αναλυτής επαναλαμβάνει αυτόματα τη διαδικασία αυτή για έναν καθορισμένο αριθμό κύκλων, καθένας από τους οποίους έχει ως αποτέλεσμα το διπλασιασμό των κλώνων (amplicon) DNA. Το AMPLICOR CT/NG Κύριο Μίγμα περιλαμβάνει επίσης ένα δεύτερο σετ βιοτινιλυωμένων εκκινητών που συν-ενισχύονται με το DNA στόχο των Chlamydia trachomatis (CT) στο δείγμα και το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου με τη χρήση μιας ανάλογης διαδικασίας με εκείνη που περιγράφτηκε για τα Neisseria gonorrhoeae. Ενίσχυση Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Στις διαδικασίες ενίσχυσης βάσει ενζύμων, όπως στην PCR, η αποτελεσματικότητα μπορεί να μειωθεί από αναστολείς που ενδέχεται να είναι παρόντες στο κλινικό δείγμα. Το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου επιτρέπει τον εντοπισμό επεξεργασμένων δειγμάτων που περιέχουν ουσίες που ενδέχεται να αλληλεπιδράσουν με την ενίσχυση PCR. Το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου είναι ένα μη μολυσματικό ανασυνδυασμένο DNA πλασμίδιο με περιοχές δέσμευσης εκκινητή όμοιες με αυτές της αλληλουχίας-στόχου C. trachomatis, μια τυχαία εσωτερική αλληλουχία παρόμοιου μεγέθους και σύνθεσης βάσης με τις αλληλουχίες-στόχους NG και CT και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη διαφορετική από τον κλώνο (amplicon)-στόχο. Τα χαρακτηριστικά αυτά επιλέχθηκαν για να διασφαλίζουν ισοδύναμη ενίσχυση του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου και του DNA-στόχου του CT/NG. Το CT/NG Αντιδραστήριο Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου περιλαμβάνεται στο AMPLICOR CT/NG Κιτ Ενίσχυσης και εισάγεται σε κάθε αντίδραση ενίσχυσης για να ενισχυθεί μαζί με το DNA-στόχο από το κλινικό δείγμα. Το προαιρετικό COBAS AMPLICOR Κιτ Ανίχνευσης Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου περιέχει ένα ειδικό για IC ολιγονουκλεοτιδικό ιχνηθέτη δέσμευσης που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ταυτοποίηση ενός θετικού IC σήματος στο μίγμα αντίδρασης. Το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου έχει σχεδιαστεί για την ταυτοποίηση των δειγμάτων που περιέχουν αναστολείς που θα μπορούσαν να αλληλεπιδράσουν με την ενίσχυση και την ανίχνευση 20 ή και περισσοτέρων αντιγράφων του νουκλεϊκού οξέος στόχου της N. gonorrhoeae όπως προσδιορίζεται από την ανάλυση Poisson. Η ανίχνευση του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου μπορεί να εκτελεστεί στην επιλογή χειριστή κατά την εξέταση των δειγμάτων ούρων ή δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί σε μέσα μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων. Η ανίχνευση του CT/NG IC είναι υποχρεωτική κατά την εξέταση δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Συλλογής και Μεταφοράς Δειγμάτων από Στυλεό. Επιλεκτική Ενίσχυση Η επιλεκτική ενίσχυση του DNA-στόχου από το κλινικό δείγμα επιτυγχάνεται στο COBAS AMPLICOR NG Test με χρήση του ενζύμου AmpErase (ουρακίλη-n-γλυκοζυλάση) και της τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης (dutp). Το ένζυμο AmpErase αναγνωρίζει και καταλύει τη διάσπαση των κλώνων DNA που περιέχουν δεοξυουριδίνη 11, αλλά όχι των κλώνων DNA που περιέχουν δεοξυθυμιδίνη. Η δεοξυουριδίνη δεν υπάρχει στο φυσικό DNA, αλλά υπάρχει πάντοτε στον κλώνο (amplicon) λόγω της χρήσης τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης, αντί της τριφωσφορικής δεοξυθυμιδίνης, ως ενός από τα dntps του αντιδραστηρίου Κύριου Μίγματος. Για το λόγο αυτό, μόνο ο κλώνος (amplicon) περιέχει δεοξυουριδίνη. Η δεοξυουριδίνη καθιστά τον μολυσματικό κλώνο (amplicon) ευαίσθητο στη διάσπαση από το ένζυμο AmpErase πριν από την ενίσχυση του DNA-στόχου. To ένζυμο AmpErase που περιλαμβάνεται στο αντιδραστήριο Κύριου Μίγματος, καταλύει τη σχάση του DNA που περιέχει δεοξυουριδίνη στα ιζήματα της δεοξυουριδίνης ανοίγοντας την αλυσίδα της δεοξυριβόζης στη θέση C1. Όταν θερμανθεί στο πρώτο βήμα θερμοκυκλοποίησης 4/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

Neisseria gonorrhoeae Αντίδραση Υβριδισμού στο αλκαλικό ph του Κύριου Μίγματος (Master Mix), η αλυσίδα DNA του κλώνου (amplicon) διασπάται στη θέση της δεοξυουριδίνης, καθιστώντας το DNA μη ενισχύσιμο. Το ένζυμο AmpErase είναι αδρανές σε θερμοκρασίες πάνω από τους 55 C, δηλαδή σε όλα τα βήματα της θερμοκυκλοποίησης και για το λόγο αυτό δεν καταστρέφει τον κλώνο (amplicon)-στόχο. Μετά την ενίσχυση, όλα τα υπολειμματικά ένζυμα αποδιατάσσονται με την προσθήκη του Διαλύματος Αποδιάταξης, προλαμβάνοντας έτσι την αποικοδόμηση οποιουδήποτε κλώνου (amplicon)-στόχου. Το ένζυμο AmpErase στο COBAS AMPLICOR NG Test έχει αποδειχτεί ότι αδρανοποιεί τουλάχιστον 10 3 αντίγραφα κλώνου (amplicon) που περιέχει δεοξυουριδίνη σε κάθε PCR. Μετά την ενίσχυση PCR, ο COBAS AMPLICOR Αναλυτής προσθέτει αυτόματα Διάλυμα Αποδιάταξης στο μίγμα αντίδρασης σε κάθε Α-tube για την χημική αποδιάταξη του κλώνου (amplicon) του NG και του κλώνου (amplicon) του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου για το σχηματισμό μονόκλωνου DNA. Τα κλάσματα δείγματος του αποδιαταγμένου κλώνου (amplicon) από κάθε A-tube μεταφέρονται από τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή σε μεμονωμένα σωληνάρια ανίχνευσης (D-cups). Ένα εναιώρημα μαγνητικών σωματιδίων με επικάλυψη ολιγονουκλεοτιδικού ιχνηθέτη ειδικού για N. gonorrhoeae (ή για Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου στην επιλογή χειριστή) προστίθεται στα μεμονωμένα D-cup. Ο επισημασμένος με βιοτίνη NG και ο κλώνος (amplicon) του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου υβριδίζονται στους ολιγονουκλεοτιδικούς ειδικούς για το στόχο ιχνηθέτες που είναι δεσμευμένοι στα μαγνητικά σωματίδια. Ο υβριδισμός του κλώνου (amplicon) στον ειδικό για το στόχο ιχνηθέτη ενισχύει τη συνολική ειδικότητα της εξέτασης. Αντίδραση Ανίχνευσης Μετά την αντίδραση υβριδισμού, ο COBAS AMPLICOR Αναλυτής πραγματοποιεί πλύση των μαγνητικών σωματιδίων σε κάθε D-cup για να απομακρυνθούν μη δεσμευμένα υλικά και στη συνέχεια προσθέτει συζεύκτη avidin-υπεροξειδάσης ραφανίδας. Ο συζεύκτης avidin-υπεροξειδάσης ραφανίδας δεσμεύεται στον επισημασμένο με βιοτίνη κλώνο (amplicon) που υβριδίζεται στον ειδικό για το στόχο ολιγονουκλεοτιδικό ιχνηθέτη που είναι δεσμευμένος στα μαγνητικά σωματίδια. Ο COBAS AMPLICOR Αναλυτής απομακρύνει το μη δεσμευμένο συζεύκτη πραγματοποιώντας πλύση των μαγνητικών σωματιδίων και στη συνέχεια σε κάθε D-cup προσθέτει διάλυμα υποστρώματος που περιέχει υπεροξείδιο του υδρογόνου και 3,3',5,5'-τετραμεθυλοβενζιδίνη (TMB). Με την παρουσία του υπεροξειδίου του υδρογόνου, η δεσμευμένη στο σωματίδιο υπεροξειδάση ραφανίδας καταλύει την οξείδωση της TMB για το σχηματισμό ενός έγχρωμου συμπλόκου, η απορρόφηση του οποίου μετράται σε μήκος κύματος των 660 nm από τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή. Αντιδραστήρια AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Εξετ. P/N: 20759414 122 Specimen Preparation Kit ART: 07 5941 4 AMPLICOR CT/NG US: 83315 Κιτ Προετοιμασίας Δειγμάτων CT/NG URINE WASH 1 x 50 ml (CT/NG Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης Ούρων) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 300 mm NaCl < 0,1% Καθαριστικό 0,09% Αζίδιο του νατρίου CT/NG LYS (CT/NG Αντιδραστήριο Λύσης) Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 1% Σταθεροποιητής Διαλύματος 0,09% Αζίδιο του νατρίου 1 x 25 ml 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 5/38

CT/NG DIL (CT/NG Αραιωτικό Δείγματος) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 6 mm Χλωριούχο μαγνήσιο < 25% Καθαριστικό 0,05% Αζίδιο του νατρίου 2 x 50 ml AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP 96 Εξετ. P/N: 20759902 122 Amplification Kit ART: 07 5990 2 AMPLICOR CT/NG Κιτ Ενίσχυσης US: 83319 CT/NG MMX 3 x 1,8 ml (CT/NG Κύριο Μίγμα) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl EDTA 100 mm KCl Γλυκερόλη < 0,01% AmpliTaq (Taq DNA Πολυμεράση, μικροβιακό) < 0,005% datp, dctp και dgtp < 0,016% dutp < 0,01% Ένζυμο AmpErase (ουρακίλη-n-γλυκοζυλάση) (μικροβιακό) < 0,0004% εκκινητές SS01, SS02, CP24 και CP27, βιοτινιλυωμένοι 0,05% Αζίδιο του νατρίου CT/NG IC 3 x 0,1 ml (CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου) Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 0,001% μη μολυσματικό ανασυνδυασμένο DNA πλασμίδιο (μικροβιακό) που περιέχει αλληλουχίες δέσμευσης CT εκκινητή και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη < 0,005% Poly ra RNA (συνθετικό) EDTA Χρωστική ύλη αμαράνθης 0,05% Αζίδιο του νατρίου NG (+) C 1 x 0,8 ml [N. gonorrhoeae Ορός Ελέγχου (+) Υψηλής Συγκέντρωσης] Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 0,001% μη μολυσματικό ανασυνδυασμένο DNA πλασμίδιο (συνθετικό) που περιέχει αλληλουχίες N. gonorrhoeae < 0,005% μη ειδικός φορέας DNA (θηλαστικό) < 0,5% Καθαριστικό EDTA 0,05% Αζίδιο του νατρίου CT (+) C 1 x 0,8 ml [N. gonorrhoeae Ορός Ελέγχου ( ) Χαμηλής Συγκέντρωσης] Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 0,001% μη μολυσματικό ανασυνδυασμένο DNA πλασμίδιο (συνθετικό) που περιέχει αλληλουχίες C. trachomatis < 0,005% μη ειδικός φορέας DNA (θηλαστικό) < 0,5% Καθαριστικό EDTA 0,05% Αζίδιο του νατρίου 6/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

Neisseria gonorrhoeae COBAS AMPLICOR NG DK 100 Εξετ. P/N: 20757535 122 Neisseria gonorrhoeae ART: 07 5753 5 Detection Kit US: 83278 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Κιτ Ανίχνευσης NG PS1 1 x 100 Εξετάσεις (NG Αιώρημα Ιχνηθέτη 1) Ρυθμιστικό διάλυμα MES < 0,3% Αιώρημα Dynabeads (παραμαγνητικά σωματίδια) επικαλυμμένο με ειδικό για N. gonorrhoeae ολιγονουκλεοτιδικό ιχνηθέτη δέσμευσης SS06T5 0,09% Αζίδιο του νατρίου NG4 (NG Αιώρημα Ιχνηθέτη 2) Ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου 37% Θειοκυανικό νάτριο < 0,2% Σταθεροποιητής Διαλύματος + Xn 37% (w/w) Θειοκυανικό νάτριο 1 x 100 Εξετάσεις Επιβλαβές COBAS AMPLICOR 100 Εξετ. P/N: 20757470 122 DK Detection Reagents Kit ART: 07 5747 0 COBAS AMPLICOR US: 83276 Κιτ Αντιδραστηρίων Ανίχνευσης DN4 (Διάλυμα Αποδιάταξης) 1,6% Υδροξείδιο του νατρίου EDTA Μπλε θυμόλη + Xi 1,6% (w/w) Υδροξείδιο του νατρίου 1 x 100 Εξετάσεις Ερεθιστικό CN4 1 x 100 Εξετάσεις (Συζεύκτης Avidin - Υπεροξειδάσης Ραφανίδας) Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 0,001% Συζεύκτης Avidin-υπεροξειδάσης ραφανίδας Λευκωματίνη βόειου ορού (θηλαστικού) Emulsit 25 (Dai-ichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.) 0,1% Φαινόλη 1% Συντηρητικό ProClin 150 SB3 (Υπόστρωμα A) Διάλυμα κιτρικού άλατος 0,01% Υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,1% Συντηρητικό ProClin 150 5 x 75 Εξετάσεις 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 7/38

SB (Υπόστρωμα B) 0,1% 3,3',5,5'-Τετραμεθυλοβενζιδίνη (TMB) 40% Διμεθυλοφορμαμίδιο (DMF) T 40% (w/w) Διμεθυλοφορμαμίδιο (DMF) 5 x 5 ml Τοξικό R: 61-20/21-36 Μπορεί να βλάψει το έμβρυο κατά τη διάρκεια της κύησης. Επιβλαβές όταν εισπνέεται και σε επαφή με το δέρμα. Ερεθίζει τα μάτια. S: 53-45 Αποφεύγετε την έκθεση - εφοδιαστείτε με τις ειδικές οδηγίες πριν από τη χρήση. Σε περίπτωση ατυχήματος ή αν αισθανθείτε αδιαθεσία ζητήστε αμέσως ιατρική συμβουλή (δείξτε την ετικέτα αν είναι δυνατό). COBAS AMPLICOR WB 500 Εξετ. P/N: 20759899 123 Wash Buffer ART: 07 5989 9 COBAS AMPLICOR US: 83314 Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης WB (10Χ-Πυκνό Διάλυμα Πλύσης) < 2% Φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα < 9% Χλωριούχο νάτριο EDTA < 2% Καθαριστικό 0,5% Συντηρητικό ProClin 300 Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις 2 x 250 Εξετάσεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Η χρήση του όρου αντίγραφο σε αυτό το εγχειρίδιο μεθόδου αναφέρεται σε 1 αντίγραφο νουκλεϊκού οξέος στόχου N. gonorrhoeae. Ένα (1) αντίγραφο ισοδυναμεί με τη μικρότερη ποσότητα του νουκλεϊκού οξέος στόχου N. gonorrhoeae που θα δημιουργούσε ένα θετικό αποτέλεσμα εξέτασης PCR. Η εξέταση αυτή προορίζεται για χρήση μόνο με ενδοτραχηλικά, ουρηθρικά δείγματα και δείγματα ούρων. Αυτή η εξέταση δεν προορίζεται για χρήση με φαρυγγικά, δείγματα ορθού ή άλλου τύπου διαφορετικά από αυτά που υποδεικνύονται. Τα δείγματα παραμένουν σταθερά για τα χρονικά σημεία που υποδεικνύονται στην ενότητα Συλλογή, Μεταφορά και Αποθήκευση Δειγμάτων του ένθετου αυτού του προϊόντος. Ωστόσο, η εξέταση όλων των δειγμάτων στο συντομότερο χρόνο μετά τη συλλογή θα βοηθήσει στην διασφάλιση των ακριβέστερων αποτελεσμάτων εξέτασης. Πολλές επιδράσεις μεταβλητών των χρόνων αποθήκευσης και των μεταβολών που σχετίζονται με τη μεταφορά των δειγμάτων δεν έχουν εκτιμηθεί. Μην αναρροφάτε με πιπέτα από το στόμα. Μην τρώτε, πίνετε ή καπνίζετε στους χώρους εργασίας των εργαστηρίων. Φοράτε προστατευτικά γάντια μιας χρήσης, ποδιές εργαστηρίου και προστατευτικά γυαλιά όταν χειρίζεστε δείγματα και κιτ αντιδραστηρίων. Πλένετε καλά τα χέρια σας μετά το χειρισμό δειγμάτων και κιτ αντιδραστηρίων. 8/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

Neisseria gonorrhoeae Σημείωση Αποφεύγετε τη μόλυνση των αντιδραστηρίων από μικρόβια όταν αφαιρείτε τα κλάσματα δειγμάτων από τις φιάλες αντιδραστηρίων. Συνιστάται η χρήση αποστειρωμένων πιπετών και ακροφυσίων πιπετών μιας χρήσης. Μη συγκεντρώνετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες ή από διαφορετικές φιάλες της ίδιας παρτίδας. Η απόρριψη των αχρησιμοποίητων αντιδραστηρίων και των απορριμμάτων θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς. Μη χρησιμοποιείτε ένα κιτ μετά την ημερομηνία λήξης του. Διατίθενται Δελτία Δεδομένων Ασφάλειας Υλικών (MSDS) κατόπιν ζήτησης από τα τοπικά γραφεία της Roche. Η ροή των εργασιών στο εργαστήριο πρέπει να εκτελείται σε μονόδρομη κατεύθυνση, αρχίζοντας από την Περιοχή Προετοιμασίας Πριν από την Ενίσχυση και προχωρώντας προς την Περιοχή Προετοιμασίας Μετά την Ενίσχυση (Ενίσχυση/Ανίχνευση). Οι δραστηριότητες πριν από την ενίσχυση πρέπει να αρχίζουν με την προετοιμασία του αντιδραστηρίου και να συνεχίζονται με την προετοιμασία του δείγματος. Τα υλικά και ο εξοπλισμός πρέπει να προορίζονται αποκλειστικά για κάθε ενέργεια που προηγείται της ενίσχυσης και όχι για άλλες ενέργειες, ούτε να μεταφέρονται μεταξύ των περιοχών. Πρέπει να φοράτε γάντια σε κάθε περιοχή και να τα αλλάζετε πριν από την έξοδό σας από τη συγκεκριμένη περιοχή. Ο εξοπλισμός και τα υλικά που χρησιμοποιούνται για την προετοιμασία του αντιδραστηρίου δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται για ενέργειες προετοιμασίας δειγμάτων ή για το χειρισμό με πιπέτα ή την επεξεργασία ενισχυμένου DNA ή άλλων πηγών DNA-στόχου. Τα υλικά και ο εξοπλισμός που χρησιμοποιούνται μετά την ενίσχυση πρέπει να παραμένουν πάντοτε στον ειδικό χώρο που προορίζεται για την Προετοιμασία Μετά την Ενίσχυση. Τα δείγματα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικά και ο χειρισμός τους να γίνεται με ασφαλείς εργαστηριακές διαδικασίες, όπως αυτές που περιγράφονται στην τεκμηρίωση Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 12 και στο έγγραφο CLSI M29-A3 13. Καθαρίζετε καλά και απολυμαίνετε όλες τις επιφάνειες εργασίας με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απιονισμένο ή απεσταγμένο νερό. Τα οικιακά υγρά λευκαντικά του εμπορίου περιέχουν κατά κανόνα υποχλωριώδες νάτριο σε συγκέντρωση 5,25%. Η αραίωση οικιακού λευκαντικού σε αναλογία 1:10 παράγει διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 0,5%. Το COBAS AMPLICOR NG Test ενδέχεται να αλληλεπιδράσει με τα N. subflava και N. cinerea. Οι οργανισμοί αυτοί μπορεί να αποτελούν κοινά συστατικά της φυσιολογικής χλωρίδας του φάρυγγα. Αποφύγετε την επιμόλυνση των αντιδραστηρίων επεξεργασίας δείγματος, των αντιδραστηρίων ενίσχυσης και των δειγμάτων ασθενή με αναπνευστικά αερολύματα. Τα δείγματα που λαμβάνονται από το εργαστήριο με το στυλεό ακόμη μέσα στο AMPLICOR STM είναι μη αποδεκτά για εξέταση. Τα δείγματα αυτά πρέπει να απορρίπτονται και να συλλέγεται ένα νέο δείγμα. Τα δείγματα που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Συλλογής και Μεταφοράς Δειγμάτων από Στυλεό ενδέχεται να αναστείλουν την PCR. Κατά την εξέταση των δειγμάτων αυτών πρέπει να εκτελείται ανίχνευση του CT/NG IC. Για τα δείγματα που μεταφέρονται με μέσα μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων, οι στυλεοί θα πρέπει να αφήνονται στο σωληνάριο μεταφοράς, έτσι ώστε να υπάρχουν οπτικές αποδείξεις εμβολιασμού του δείγματος. Το COBAS AMPLICOR NG Test αξιολογήθηκε με χρήση δειγμάτων που μεταφέρθηκαν με το στυλεό στο σωληνάριο του μέσου μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων (CTM). Τα δείγματα CTM που μεταφέρθηκαν χωρίς στυλεούς δεν έχουν αξιολογηθεί και δεν συνιστάται η χρήση τους για αυτή την εξέταση. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 9/38

Η αποθήκευση των δειγμάτων ούρων σε θερμοκρασία δωματίου για περισσότερο από 24 ώρες μπορεί να οδηγήσει σε αποικοδόμηση του δείγματος. Τα δείγματα ούρων που αποθηκεύονται για περισσότερο από 24 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται για εξέταση. Τα CT/NG URINE WASH, CT/NG LYS, CT/NG DIL, CT/NG MMX, CT/NG IC, NG (+) C, CT (+) C, NG PS1 και IC PS1 περιέχουν αζίδιο του νατρίου. Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με το μόλυβδο και το χαλκό των σωληνώσεων και να δημιουργήσει υψηλής εκρηκτικότητας αζίδια μετάλλου. Όταν απορρίπτετε διαλύματα που περιέχουν αζίδιο του νατρίου στους νεροχύτες των εργαστηρίων, ρίχνετε άφθονη ποσότητα νερού για να αποφύγετε το σχηματισμό αζιδίου. Φοράτε προστατευτικά γυαλιά, ποδιές εργαστηρίου και γάντια μιας χρήσης όταν χειρίζεστε τα DN4, CN4, SB3, SB και Υπόστρωμα Εργασίας (μίγμα αντιδραστηρίου SB3 και SB). Αποφύγετε την επαφή των υλικών αυτών με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση τυχαίας επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού. Εάν δεν υπάρξει άμεση αντιμετώπιση, μπορεί να προκληθούν εγκαύματα. Εάν πέσουν σταγόνες από τα αντιδραστήρια, αραιώστε με νερό πριν τις σκουπίσετε. Αποφύγετε την επαφή του δέρματος ή των βλεννογόνων με το SB ή το Υπόστρωμα Εργασίας. Σε περίπτωση τυχαίας επαφής με το δέρμα, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού. Το SB και το Υπόστρωμα Εργασίας περιέχουν διμεθυλοφορμαμίδιο, το οποίο έχει χαρακτηριστεί ως τοξικό σε υψηλές δόσεις από το στόμα και μπορεί να προκαλέσει βλάβη στο έμβρυο. Θα πρέπει να αποφεύγεται η επαφή με το δέρμα, η εισπνοή αναθυμιάσεων και η κατάποση. Σε περίπτωση τυχαίας επαφής με το δέρμα, πλύνετε καλά με σαπούνι και νερό και ζητήστε αμέσως ιατρική βοήθεια. Για την προετοιμασία των δειγμάτων και των ορών ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια με βιδωτό πώμα, έτσι ώστε να αποφεύγεται το πιτσίλισμα και η ενδεχόμενη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων. Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα. Αποθήκευση και Απαιτήσεις Χειρισμού Μην καταψύχετε τα αντιδραστήρια. Αποθηκεύστε το CT/NG LYS στους 2-25 C. Αποθηκεύστε τα CT/NG URINE WASH και CT/NG DIL στους 2-8 C. Αν σχηματιστεί κατακρήμνισμα σε οποιοδήποτε από αυτά τα αντιδραστήρια κατά την αποθήκευση, θερμάνετε σε θερμοκρασία περιβάλλοντος και ανακατέψτε καλά πριν από την χρήση. Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Αποθηκεύστε τα CT/NG MMX και CT/NG IC στους 2-8 C. Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Το Κύριο Μίγμα Εργασίας (που έχει προετοιμαστεί με την προσθήκη CT/NG IC στο CT/NG MMX) πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C και παραμένει σταθερό για 4 εβδομάδες. Αποθηκεύστε τα NG (+) C και CT (+) C στους 2-8 C. Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Αποθηκεύστε τα NG PS1 και NG4 στους 2-8 C. Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μόλις το NG PS1 και το NG4 αναμιχθούν, το Αντιδραστήριο Εργασίας παραμένει σταθερό για 30 ημέρες στους 2-8 C. Το Αντιδραστήριο Εργασίας μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως και για 6 κύκλους οργάνου (12 ώρες ανά κύκλο) και πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C μεταξύ των κύκλων οργάνου. Αποθηκεύστε το DN4 στους 2-25 C. Το DN4 παραμένει σταθερό μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μετά το άνοιγμα, το DN4 παραμένει σταθερό για 30 ημέρες στους 2-8 C ή μέχρι την ημερομηνία λήξης, ανάλογα με την περίπτωση. Το DN4 μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως και για 6 κύκλους οργάνου (12 ώρες ανά κύκλο) και πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C μεταξύ των κύκλων οργάνου. 10/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

Neisseria gonorrhoeae Αποθηκεύστε το CN4 στους 2-8 C. Το CN4 παραμένει σταθερό μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μόλις ανοιχτεί, το αντιδραστήριο CN4 παραμένει σταθερό για 30 ημέρες στους 2-8 C ή μέχρι την ημερομηνία λήξης, ανάλογα με την περίπτωση. Το CN4 μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως και για 6 κύκλους οργάνου (12 ώρες ανά κύκλο) και πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C μεταξύ των κύκλων οργάνου. Αποθηκεύστε τα SB3 και SB στους 2-8 C. Εάν δεν ανοιχτούν, τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Το Υπόστρωμα Εργασίας πρέπει να προετοιμάζεται κάθε μέρα αναμιγνύοντας το SB3 με το SB. Το Υπόστρωμα Εργασίας παραμένει σταθερό στον COBAS AMPLICOR Αναλυτή για 16 ώρες. Μην εκθέτετε τα SB3, SB ή το Υπόστρωμα Εργασίας σε μέταλλα, οξειδωτικά ή σε άμεση ηλιακή ακτινοβολία. Αποθηκεύστε το WB στους 2-30 C. Το WB παραμένει σταθερό μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Εξετάστε το WB και αν χρειάζεται, θερμάνετε στους 30-37 C για την επαναδιάλυση ενδεχόμενων κατακρημνίσεων. Το Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης Εργασίας (1X), που προετοιμάζεται με την αραίωση του WB 1:10 με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-25 C στο COBAS AMPLICOR Δοχείο Ρυθμιστικού Διαλύματος Πλύσης και παραμένει σταθερό για 2 εβδομάδες από την ημερομηνία προετοιμασίας. Αποθηκεύστε τα μερικώς χρησιμοποιημένα αντιδραστήρια ανίχνευσης στους 2-8 C μεταξύ των αναλύσεων του οργάνου. Ελέγξτε την ημερομηνία λήξης των ανοιχτών αντιδραστηρίων ή των Αντιδραστηρίων Εργασίας πριν τη φόρτωση στον COBAS AMPLICOR Αναλυτή. Παρεχόμενα Υλικά AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP P/N: 20759414 122 Specimen Preparation Kit ART: 07 5941 4 AMPLICOR CT/NG US: 83315 Κιτ Προετοιμασίας Δειγμάτων CT/NG URINE WASH (CT/NG Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης Ούρων) CT/NG LYS (CT/NG Αντιδραστήριο Λύσης) CT/NG DIL (CT/NG Αραιωτικό Δείγματος) AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP P/N: 20759902 122 Amplification Kit ART: 07 5990 2 AMPLICOR CT/NG US: 83319 Κιτ Ενίσχυσης CT/NG MMX (CT/NG Κύριο Μίγμα) CT/NG IC (CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου) NG (+) C [Ορός Ελέγχου (+) Υψηλής Συγκέντρωσης N. gonorrhoeae] CT (+) C [Ορός Ελέγχου (+) Υψηλής Συγκέντρωσης C. trachomatis] 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 11/38

COBAS AMPLICOR NG DK P/N: 20757535 122 Neisseria gonorrhoeae ART: 07 5753 5 Detection Kit US: 83278 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Κιτ Ανίχνευσης NG PS1 (NG Αιώρημα Ιχνηθέτη 1) NG4 (NG Αιώρημα Ιχνηθέτη 2) COBAS AMPLICOR DK P/N: 20757470 122 Detection Reagents Kit ART: 07 5747 0 COBAS AMPLICOR US: 83276 Κιτ Αντιδραστηρίων Ανίχνευσης DN4 (Διάλυμα Αποδιάταξης) CN4 (Συζεύκτης Avidin - Υπεροξειδάσης Ραφανίδας) SB3 (Υπόστρωμα A) SB (Υπόστρωμα B) COBAS AMPLICOR WB P/N: 20759899 123 Wash Buffer ART: 07 5989 9 COBAS AMPLICOR US: 83314 Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης WB (10Χ-Πυκνό Διάλυμα Πλύσης) Απαιτούμενα Μη Παρεχόμενα Υλικά Συλλογή Δειγμάτων Στυλεοί συλλογής ενδοτραχηλικών και ουρηθρικών δειγμάτων: Χρησιμοποιείτε μόνο στυλεούς συλλογής με ακροφύσια με dacron, rayon ή αλγινικό ασβέστιο με πλαστικές ή μη αλουμινένιες συρμάτινες λαβές Χρησιμοποιείτε μόνο Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας 2SP ή SPG, Μέσο Μεταφοράς Χλαμυδίων Bartels ChlamTrans (Trinity Biotech Plc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4 MicroTest ή Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc.) Σωληνάρια πολυπροπυλενίου συλλογής ούρων χωρίς συντηρητικό Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας Γυναικών M4RT MicroTest (x100) (Remel, Inc.) Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας Αντρών M4RT MicroTest (x100) (Remel, Inc.) Περιοχή Προετοιμασίας Αντιδραστηρίων Πριν από την Ενίσχυση COBAS AMPLICOR A-ring τοποθετημένος με 12 A-tubes COBAS AMPLICOR A-ring συγκρατητής Πιπέτα Eppendorf Multipette με Δοχείο 1,25 ml Combitip (αποστειρωμένη, σε μεμονωμένη συσκευασία) Συσκευές πιπέτας (χωρητικότητα 100 μl)* με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης Γάντια μιας χρήσης, χωρίς πούδρα 12/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

Neisseria gonorrhoeae Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων και Ορών Ελέγχου Πριν από την Ενίσχυση Σωληνάρια πολυπροπυλενίου 2,0 ml με βιδωτό πώμα, αποστειρωμένα, χωρίς σιλικόνη, κωνικά (Sarstedt 72.693.005, ή αντίστοιχα)** Υποδοχείς σωληναρίων (Sarstedt 93.1428 ή αντίστοιχα) Αποστειρωμένες πιπέτες μεταφοράς, βαθμονομημένες Συσκευές πιπέτας (χωρητικότητα, 50 µl, 100 µl, 200 µl, 250 µl, 500 µl και 1000 µl)* με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης Μικροφυγόκεντρος (μέγ. RCF 16.000 x g, ελάχ. RCF 12.500 x g), Eppendorf 5415C, HERMLE Z230M, ή αντίστοιχο Εκτεταμένα ακροφύσια φραγής αερολυμάτων (Matrix 7055 ή αντίστοιχα) για χρήση με δείγματα που μεταφέρονται σε Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας 2SP ή SPG, Μέσο Μεταφοράς Χλαμυδίων Bartels ChlamTrans (Trinity Biotech Plc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4 MicroTest ή Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc.) 37 C ± 2 C θερμαντική μονάδα Αναδευτήρας τύπου Vortex Απορροφητικό χαρτί Γάντια μιας χρήσης, χωρίς πούδρα Περιοχή Ενίσχυσης - Ανίχνευσης, Μετά την ενίσχυση COBAS AMPLICOR Αναλυτής και εκτυπωτής Εγχειρίδιο Χρήστη για τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή Προαιρετικά: Λογισμικό AMPLILINK Προαιρετικά: Σταθμός Δεδομένων για το AMPLILINK Λογισμικό, με εκτυπωτή Προαιρετικά: Εγχειρίδιο Χειριστή του AMPLILINK Λογισμικού, έκδοση σειράς 2.4, για χρήση με τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή (για χρήση με το AMPLILINK Λογισμικό, έκδοση 2.41) ή το Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK Λογισμικού, Έκδοση Σειράς 3.2, για χρήση με το COBAS AmpliPrep Όργανο, τον COBAS TaqMan Αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή και τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή (για χρήση με το AMPLILINK Λογισμικό, έκδοση Σειράς 3.2) Εγχειρίδιο Μεθόδου για το COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test Υποδοχείς των D-cups Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό Ορολογικές πιπέτες 5 ml Βαθμονομημένος κύλινδρος (τουλάχιστον 1 Λίτρο) Αναδευτήρας τύπου Vortex Γάντια μιας χρήσης, χωρίς πούδρα * Οι πιπέτες πρέπει να διαθέτουν ακρίβεια 3% του δηλούμενου όγκου. Τα ακροφύσια με φραγή αερολυμάτων ή θετική μετατόπιση πρέπει να χρησιμοποιούνται όπου προδιαγράφεται, για να αποφεύγεται η διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων και των κλώνων (amplicon). ** Για την προετοιμασία των δειγμάτων και των ορών ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια με βιδωτό πώμα, έτσι ώστε να αποφεύγεται το πιτσίλισμα και η ενδεχόμενη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 13/38

Συλλογή, Μεταφορά και Αποθήκευση Δειγμάτων Σημείωση Συλλογή Δειγμάτων Σημείωση Σημείωση Όλα τα δείγματα πρέπει να θεωρούνται μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται ανάλογα. Τα μόνα αποδεκτά δείγματα είναι: 1. Δείγματα ούρων (Ανδρών και Γυναικών) που έχουν μεταφερθεί σε καθαρά δοχεία πολυπροπυλενίου χωρίς συντηρητικά. Μη χρησιμοποιείτε δείγματα που έχουν συλλεχθεί σε δοχεία που περιέχουν συντηρητικά. 2. Εδοτραχηλικά και ουρηθρικά δείγματα από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Συλλογής Μεταφοράς Δειγμάτων από Στυλεό. Η ανίχνευση του CT/NG IC πρέπει να εκτελεστεί κατά την εξέταση δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Συλλογής και Μεταφοράς Δειγμάτων από Στυλεό. 3. Ενδοτραχηλικά και ουρηθρικά δείγματα από στυλεό πρέπει να συλλέγονται και να μεταφέρονται σε: Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας 2SP ή SPG, Μέσο Μεταφοράς Χλαμυδίων Bartels ChlamTrans (Trinity Biotech Plc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4 MicroTest ή Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc.). Οι παρτίδες μέσων πρέπει να πληρούν τις προδιαγραφές για χρήση σε κάθε εργαστήριο (βλέπε ενότητα Ποιοτικός Έλεγχος για λεπτομέρειες). Για αξιόπιστα αποτελέσματα εξέτασης, ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες για σωστή συλλογή δειγμάτων. Αυτή η εξέταση δεν προορίζεται για χρήση με φαρυγγικά, δείγματα ορθού ή άλλου τύπου διαφορετικά από αυτά που υποδεικνύονται. Για τη διασφάλιση της μεταφοράς δειγμάτων υψηλής ποιότητας στο εργαστήριο για εξέταση, τα ουρογεννητικά και τα δείγματα ούρων από στυλεό πρέπει να μεταφέρονται στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατόν. Μην επιτρέπετε την μεταφορά δειγμάτων χωρίς ελεγχόμενες συνθήκες θερμοκρασίας. Δείγματα Ούρων Ο ασθενής δεν πρέπει να έχει ουρήσει κατά τις 2 προηγούμενες ώρες. 1. Συλλέξτε 10 έως 50 ml των πρώτων ούρων της ούρησης σε ένα καθαρό δοχείο πολυπροπυλενίου χωρίς συντηρητικά. 2. Ασφαλίστε το δοχείο του δείγματος και τοποθετήστε την αντίστοιχη ετικέτα. Το δείγμα μπορεί να μεταφερθεί στην τοποθεσία εξέτασης σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). Δείγματα από Στυλεό που Συλλέχθηκαν στο AMPLICOR Μέσο Μεταφοράς Δείγματος (STM) 1. Αφαιρέστε τη βλέννα από την έξω επιφάνεια του τραχήλου με έναν από τους μεγάλους παρεχόμενους στυλεούς και απορρίψτε. 2. Εισάγετε τον άλλο μεγάλο στυλεό μέσα στον τράχηλο μέχρι να μην είναι πλέον ορατό το ακροφύσιο του στυλεού. 3. Περιστρέψτε το στυλεό για 3-5 δευτερόλεπτα και απομακρύνετε, αποφεύγοντας την επαφή με τα τοιχώματα του κόλπου. 4. Τοποθετήστε το στυλεό στο σωληνάριο του AMPLICOR STM, στροβιλίστε ή αναμίξτε το στυλεό έντονα στο υγρό για 15 δευτερόλεπτα. Ενδέχεται να προκύψει αναστολή της PCR, αν ο στυλεός παραμείνει σε επαφή με το STM για περισσότερο από 15 δευτερόλεπτα. 14/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

Neisseria gonorrhoeae Μεταφορά Δείγματος 5. Στραγγίστε το υγρό από το στυλεό πιέζοντας το στυλεό στο τοίχωμα του σωληναρίου. Οποιοδήποτε πλεόνασμα βλέννας στο δείγμα πρέπει να αφαιρεθεί σε αυτή τη φάση συλλέγοντάς το επάνω στο στυλεό. Στραγγίστε το υπολειμματικό υγρό από τη βλέννα πιέζοντας το στυλεό στο τοίχωμα του σωληναρίου. Αφαιρέστε το στυλεό και τυχόν πλεόνασμα βλέννας που έχει συλλεχθεί και απορρίψτε το στυλεό. Πωματίστε το σωληνάριο. 6. Ασφαλίστε το δοχείο του δείγματος και τοποθετήστε την αντίστοιχη ετικέτα. Ακολουθήστε τη διαδικασία μεταφοράς του εργαστηρίου. Αποθηκεύστε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι τη μεταφορά τους στο εργαστήριο. Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί σε Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας (CTM) 1. Τα ενδοτραχηλικά και τα ανδρικά ουρηθρικά δείγματα λήψης από στυλεό μπορούν να συλλεχθούν και να μεταφερθούν σε Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας 2SP ή SPG 1 έως 3 ml, Μέσο Μεταφοράς Χλαμυδίων Bartels ChlamTrans (Trinity Biotech Plc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4 MicroTest ή Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc.). Μετά την απομάκρυνση της τραχηλικής βλέννας, χρησιμοποιείτε τις συνιστώμενες μεθόδους για τη λήψη δειγμάτων από στυλεό 15. 2. Χρησιμοποιείτε μόνο στυλεούς συλλογής με ακροφύσια από dacron, rayon ή αλγινικό ασβέστιο με πλαστικές ή μη αλουμινένιες συρμάτινες λαβές. Μη χρησιμοποιείτε στυλεούς συλλογής με ξύλινες ή αλουμινένιες λαβές. 3. Αφήστε τους στυλεούς στο μέσο μεταφοράς καλλιέργειας. Ασφαλίστε το δοχείο του δείγματος και τοποθετήστε την αντίστοιχη ετικέτα. Ακολουθήστε τη διαδικασία συλλογής και μεταφοράς του εργαστηρίου. Καταψύξτε τα δείγματα από στυλεούς, αν η μεταφορά τους στο εργαστήριο καθυστερεί για περισσότερο από μια ώρα από τη συλλογή. Δείγματα Ούρων 1. Τα δείγματα ούρων μπορούν να μεταφερθούν στην τοποθεσία εξέτασης σε θερμοκρασία 18-30 C. Τα δείγματα ούρων παραμένουν σταθερά για 24 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Τα δείγματα ούρων, η επεξεργασία των οποίων δεν θα εκτελεστεί εντός 24 ωρών από τη συλλογή, πρέπει να αποθηκευτούν στους 2-8 C και να υποστούν επεξεργασία εντός 7 ημερών από τη συλλογή. Τα δείγματα ούρων που δεν μπορούν να υποβληθούν σε επεξεργασία μέσα σε 7 ημέρες από τη συλλογή μπορούν να αποθηκευτούν στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία και να εξεταστούν μέσα σε 30 ημέρες από την ημερομηνία συλλογής. 2. Τα δείγματα ούρων που απαιτούν μεταφορά σε εξεταστικά κέντρα εκτός της τοποθεσίας πρέπει να μεταφέρονται εντός της ημέρας με εγγυημένη άφιξη εντός 24 ωρών. Η μεταφορά μπορεί να γίνει σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). Αν τα δείγματα ούρων μεταφερθούν σε θερμοκρασία δωματίου, θα πρέπει να αποθηκευτούν στους 2-8 C μέχρι την ώρα της μεταφοράς, για να διασφαλιστεί ότι η περίοδος αποθήκευσης σε θερμοκρασία δωματίου δεν υπερβαίνει τις 24 ώρες. Τα δείγματα πρέπει να μεταφέρονται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 14. Δείγματα από Στυλεό που Συλλέχθηκαν στο AMPLICOR Μέσο Μεταφοράς Δείγματος (STM) 1. Μεταφέρετε τα δείγματα στην τοποθεσία εξέτασης σε θερμοκρασία δωματίου. Τα δείγματα από στυλεό παραμένουν σταθερά για 10 ημέρες στους 18-25 C. Κατά τη λήψη στην τοποθεσία εξέτασης, τα δείγματα από στυλεό πρέπει να αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου και η επεξεργασία τους πρέπει να εκτελείται μέσα σε 10 ημέρες από τη συλλογή. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 15/38

2. Τα δείγματα από στυλεό που απαιτούν μεταφορά σε εξεταστικά κέντρα εκτός της τοποθεσίας πρέπει να αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την ώρα της μεταφοράς. Πρέπει να μεταφέρονται σε θερμοκρασία 18-25 C και να φθάνουν στην τοποθεσία εξέτασης έτσι ώστε η επεξεργασία τους να μπορεί να εκτελεστεί μέσα σε 10 ημέρες από τη συλλογή. Τα δείγματα πρέπει να μεταφέρονται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 14. Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί σε Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας (CTM) 1. Καταψύξτε τα δείγματα από στυλεό αν η μεταφορά τους στο εργαστήριο ή αν η επεξεργασία τους καθυστερεί για περισσότερο από μια ώρα από τη συλλογή. Τα δείγματα από στυλεό που απαιτούν μεταφορά σε εργαστήρια εκτός της τοποθεσίας εξέτασης θα πρέπει να μεταφέρονται το συντομότερο δυνατό μετά τη συλλογή σύμφωνα με τις εργαστηριακές διαδικασίες για τη μεταφορά των Χλαμυδιακών δειγμάτων καλλιέργειας. 2. Αποθηκεύστε τα δείγματα από στυλεό που δεν εξετάστηκαν κατά τη λήψη τους στο εργαστήριο εξέτασης στους 2-8 C και επεξεργαστείτε τα εντός 7 ημερών. Τα δείγματα από στυλεό, που δεν μπορούν να υποστούν επεξεργασία μέσα σε 7 ημέρες από τη συλλογή, πρέπει να αποθηκευτούν στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία και να εξεταστούν εντός 30 ημερών από την ημερομηνία συλλογής. Αποθήκευση Δειγμάτων Σημείωση Η ψύξη ρουτίνας ή η παρατεταμένη αποθήκευση των δειγμάτων μπορεί να επηρεάσει την απόδοσή τους. Δείγματα Ούρων 1. Τα δείγματα ούρων, η επεξεργασία των οποίων δεν θα εκτελεστεί εντός 24 ωρών από τη συλλογή, πρέπει να αποθηκευτούν στους 2-8 C και να υποστούν επεξεργασία εντός 7 ημερών από τη συλλογή. Τα δείγματα ούρων, η επεξεργασία των οποίων δεν θα εκτελεστεί εντός 7 ημερών από τη συλλογή, μπορούν να αποθηκευτούν στους -20 C η σε χαμηλότερη θερμοκρασία έως και για 30 ημέρες. Δείγματα από Στυλεό που Συλλέχθηκαν στο AMPLICOR Μέσο Μεταφοράς Δείγματος (STM) 1. Τα δείγματα από στυλεό παραμένουν σταθερά για 10 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου. Τα δείγματα από στυλεό θα πρέπει να αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου και να υπόκεινται σε επεξεργασία μέσα σε 10 ημέρες από τη συλλογή. 2. Τα δείγματα από στυλεό πρέπει να αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι τη μεταφορά. Πρέπει να μεταφέρονται σε θερμοκρασία δωματίου και να φθάνουν στην τοποθεσία εξέτασης έτσι ώστε η επεξεργασία τους να μπορεί να εκτελεστεί μέσα σε 10 ημέρες από τη συλλογή. Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί σε Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας (CTM) 1. Αποθηκεύστε τα δείγματα από στυλεό που δεν εξετάστηκαν κατά τη λήψη τους στο εργαστήριο εξέτασης στους 2-8 C και επεξεργαστείτε τα εντός 7 ημερών. Τα δείγματα από στυλεό που δεν μπορούν να υποστούν επεξεργασία μέσα σε 7 ημέρες από τη συλλογή μπορούν να αποθηκευτούν στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία και να εξεταστούν μέσα σε 30 ημέρες από τη συλλογή. 16/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

Neisseria gonorrhoeae Οδηγίες Χρήσης Σημείωση Σημείωση Σημείωση Σημείωση Σημείωση Αριθμός Αναλύσεων Σημείωση Ροή Εργασιών Για λεπτομερείς οδηγίες λειτουργίας, την εκτύπωση αποτελεσμάτων και την ερμηνεία ενδείξεων και σχολίων, ανατρέξτε (1) στο Εγχειρίδιο Χειριστή για τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή και (2), εάν χρησιμοποιείτε το AMPLILINK Λογισμικό, έκδοση 2.41, ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χειριστή του AMPLILINK Λογισμικού, έκδοση Σειράς 2.4, για χρήση με τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή ή, εάν χρησιμοποιείτε το AMPLILINK Λογισμικό, έκδοση Σειράς 3.2, ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK Λογισμικού, Έκδοση Σειράς 3.2, για χρήση με το COBAS AmpliPrep Όργανο, τον COBAS TaqMan Αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή και τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή. Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από τη χρήση. Όπου προδιαγράφεται, χρησιμοποιείτε συσκευές πιπέτας με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης. Απαιτείται ιδιαίτερη προσοχή για τη διασφάλιση της επιλεκτικής ενίσχυσης. Τα δείγματα ούρων και τα δείγματα από στυλεό πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από τη χρήση. Όπου προδιαγράφεται, χρησιμοποιείτε συσκευές πιπέτας με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης. Απαιτείται ιδιαίτερη προσοχή για τη διασφάλιση της επιλεκτικής ενίσχυσης. Η αναστολή της PCR μπορεί να μειωθεί με την αποθήκευση επεξεργασμένων δειγμάτων κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 2-8 C πριν την προσθήκη του δείγματος στο Κύριο Μίγμα Εργασίας 21. Για την προετοιμασία των δειγμάτων και των ορών ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια με βιδωτό πώμα, έτσι ώστε να αποφεύγεται το πιτσίλισμα και η ενδεχόμενη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων. Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα. Κάθε κιτ περιέχει αντιδραστήρια για οκτώ αναλύσεις 12 δειγμάτων, οι οποίες μπορούν να εκτελεστούν ξεχωριστά ή ταυτόχρονα. Ένα τουλάχιστον αντίγραφο του COBAS AMPLICOR N. gonorrhoeae (+) Ορού Ελέγχου και ένα αντίγραφο του COBAS AMPLICOR C. trachomatis (+) Ορού Ελέγχου πρέπει να περιλαμβάνεται σε κάθε ανάλυση εξέτασης (βλέπε ενότητα Ποιοτικός Έλεγχος ). Ο CT (+) Ορός Ελέγχου χρησιμοποιείται ως NG ( ) Ορός Ελέγχου για το COBAS AMPLICOR NG Test. Τα Αντιδραστήρια Προετοιμασίας Δειγμάτων συσκευάζονται για την εκτέλεση 100 εξετάσεων. Ο NG (+) Ορός Ελέγχου και ο CT (+) Ορός Ελέγχου διατίθενται σε μεμονωμένες φιάλες που περιέχουν υλικό που επαρκεί για την προετοιμασία 8 σετ επεξεργασμένων ορών ελέγχου. Το CT/NG Κύριο Μίγμα και το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου διατίθενται σε αυτές τις τρεις φιάλες η καθεμία από τις οποίες περιέχει υλικό που επαρκεί για την εκτέλεση έως και 32 εξετάσεων συμπεριλαμβανομένων των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Για την αποτελεσματικότερη χρήση των αντιδραστηρίων, τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να υφίστανται επεξεργασία σε παρτίδες πολλαπλάσιες του 12. Το COBAS AMPLICOR NG Test μπορεί να ολοκληρωθεί σε μία ή και σε δύο ημέρες. Εάν η εξέταση πρόκειται να ολοκληρωθεί σε μία μόνο ημέρα εργασίας, ακολουθήστε με τη σειρά τις οδηγίες στις ενότητες Προετοιμασία Αντιδραστηρίων, Προετοιμασία Δειγμάτων, Προετοιμασία Ορών Ελέγχου, Ενίσχυση και Ανίχνευση. Η εξέταση μπορεί να ολοκληρωθεί σε 2 ημέρες εκτελώντας Προετοιμασία Δειγμάτων την πρώτη ημέρα και στη συνέχεια εκτελώντας Προετοιμασία Αντιδραστηρίων, 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 17/38

Προετοιμασία Αντιδραστ. Σημείωση Προετοιμασία Δειγμάτων Προετοιμασία Ορών Ελέγχου, Ενίσχυση και Ανίχνευση στη δεύτερη ημέρα. Εναλλακτικά, εκτελέστε Προετοιμασία Αντιδραστηρίων, Προετοιμασία Δειγμάτων και Προετοιμασία Ορών Ελέγχου και προσθέστε τα προετοιμασμένα δείγματα και ορούς ελέγχου στο Κύριο Μίγμα την πρώτη ημέρα και στη συνέχεια εκτελέστε Ενίσχυση και Ανίχνευση τη δεύτερη ημέρα. Εκτελείται στην: Περιοχή Προετοιμασίας Αντιδραστηρίων Πριν από την Ενίσχυση 1. Καθορίστε το σωστό αριθμό των A-rings που απαιτούνται για την εξέταση των δειγμάτων και των ορών ελέγχου του ασθενή. Τοποθετήστε το(α) A-ring στον(ους) αντίστοιχο(ους) συγκρατητή(ές). Ακόμη και αν δεν εκτελεστεί ανίχνευση του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου, το CT/NG IC πρέπει να προστεθεί στο Κύριο Μίγμα. 2. Προετοιμάστε το Κύριο Μίγμα Εργασίας προσθέτοντας 100 µl CT/NG IC σε ένα φιαλίδιο CT/NG MMX. Δεν απαιτείται η μέτρηση του όγκου του Κύριου Μίγματος. Προσθέστε 100 µl CT/NG IC σε όλο το φιαλίδιο CT/NG MMX. Πωματίστε και πάλι το σωληνάριο και ανακατέψτε καλά αναστρέφοντας το σωληνάριο 10-15 φορές. Μην στροβιλίζετε το Κύριο Μίγμα Εργασίας. Η ροζ χρωστική στο CT/NG IC χρησιμοποιείται για οπτική επιβεβαίωση ότι το CT/NG IC έχει προστεθεί στο CT/NG MMX. Απορρίψτε το υπολειπόμενο CT/NG IC. Ανακατέψτε καλά αναστρέφοντας 10-15 φορές. Το Κύριο Μίγμα Εργασίας πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C και να χρησιμοποιείται μέσα σε 4 εβδομάδες από την προετοιμασία. 3. Προσθέστε 50 μl του Κύριου Μίγματος Εργασίας σε κάθε A-tube χρησιμοποιώντας μια επαναληπτική συσκευή πιπέτας ή μια συσκευή πιπέτας με ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης. Μην πωματίζετε το/τα Α-tube στη φάση αυτή. 4. Τοποθετήστε το A-ring(s) που περιέχει Κύριο Μίγμα Εργασίας σε ένα πλαστικό επανασφραγιζόμενο σάκο και σφραγίστε τον καλά. Μεταφέρετε το/τα A-ring στην Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων Πριν από την Ενίσχυση. Αποθηκεύστε τα A-ring(s) που περιέχουν Κύριο Μίγμα Εργασίας στους 2-8 C στην Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων Πριν από την Ενίσχυση μέχρι να ολοκληρωθεί η διαδικασία προετοιμασίας δειγμάτων και ορών ελέγχου. Το Κύριο Μίγμα Εργασίας είναι σταθερό για 48 ώρες στους 2-8 C σε Α-tubes σφραγισμένα στον πλαστικό σάκο. Εκτελείται στην: Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων Πριν από την Ενίσχυση Δείγματα Ούρων 1. Επικολλήστε ετικέτα σε ένα σωληνάριο 2,0 ml με βιδωτό πώμα για κάθε δείγμα ασθενή. Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα. 2. Προσθέστε 500 µl CT/NG URINE WASH σε καθένα από τα σωληνάρια με την αντίστοιχη ετικέτα. 3. Στροβιλίστε το δείγμα ούρων καλά (3-10 δευτερόλεπτα). Αν χρησιμοποιείτε κατεψυγμένα δείγματα, αποψύξτε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου πριν να τα στροβιλίσετε (όγκοι μεγαλύτεροι από 2 ml πρέπει να αποψύχονται κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 2-8 C), και συνεχίστε την επεξεργασία ακόμη και αν υπάρχει κατακρήμνισμα. Αφαιρέστε προσεκτικά τα πώματα των δοχείων με τα δείγματα ούρων. Κατά το χειρισμό των δειγμάτων φροντίστε ώστε να μη μολυνθούν τα γάντια με ούρα στο πώμα. Σε περίπτωση μόλυνσης, αντικαταστήστε τα γάντια με ένα καθαρό ζεύγος πριν μεταβείτε στο επόμενο δείγμα. 4. Προσθέστε 500 µl του κάθε καλά αναμεμιγμένου δείγματος ούρων ασθενή στο σωληνάριο με την κατάλληλη ετικέτα που περιέχει CT/NG URINE WASH. Χρησιμοποιήστε νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα. Επαναπωματίστε τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας. 18/38 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0