COBAS TaqMan CT Test, v2.0

Transcript

1 COBAS TaqMan CT Test, v20 ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ COBAS TaqMan CT Test, v20 CTM CT v20 48 Tests P/N: AMPLICOR CT/NG Specimen Preparation Kit CT/NG PREP 100 Tests P/N: ART: US: ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η αγορά του παρόντος προϊόντος επιτρέπει στον αγοραστή τη χρήση του για ενίσχυση και ανίχνευση αλληλουχιών νουκλεϊκών οξέων με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) και σχετικές διαδικασίες για in vitro διάγνωση σε δείγματα ανθρώπινης προέλευσης Διά του παρόντος δεν παρέχεται κανένα δικαίωμα ευρεσιτεχνίας γενικού τύπου ή άλλη άδεια οποιουδήποτε τύπου εκτός από το παρόν ειδικό δικαίωμα χρήσης από την αγορά του προϊόντος ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το COBAS TaqMan CT Test, v20 είναι μια in vitro εξέταση ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος για την ποιοτική ανίχνευση του DNA Chlamydia trachomatis σε γυναικεία ενδοτραχηλικά δείγματα από στυλεό ή σε ανδρικά και γυναικεία δείγματα ούρων Η επεξεργασία των δειγμάτων πραγματοποιείται με το AMPLICOR CT/NG Κιτ Προετοιμασίας Δειγμάτων, για τη χειροκίνητη προετοιμασία των δειγμάτων και με τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή, για αυτόματη ενίσχυση και ανίχνευση ΣΥΝΟΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Τα χλαμύδια είναι αρνητικά κατά gram, μη κινητικά βακτήρια που υπάρχουν ως υποχρεωτικά ενδοκυτταρικά παράσιτα στα ευκαρυωτικά κύτταρα λόγω της ανικανότητάς τους να συνθέσουν ATP Το γένος Chlamydia αποτελείται από τέσσερα αναφερόμενα είδη: C trachomatis, C psittaci, C pecorum και C pneumoniae (TWAR) Το C psittaci είναι κυρίως ζωικό παθογόνο και ο παθογόνος ρόλος του C pecorum δεν είναι σαφής 1 Οι λοιμώξεις Chlamydia trachomatis σήμερα θεωρούνται η δεύτερη κυριότερη αιτία των σεξουαλικά μεταδιδόμενων νοσημάτων (ΣΜΝ) παγκοσμίως με περίπου 89,1 εκατομμύρια περιστατικά ετησίως 2 Στις Ηνωμένες Πολιτείες, παρουσιάζονται περίπου 2,8 εκατομμύρια περιστατικά ετησίως 3 Είναι γνωστό ότι το Chlamydia trachomatis προκαλεί φλεγμονή τραχήλου μήτρας, πυελική φλεγμονώδη νόσο, επιπεφυκίτιδα και πνευμονία των νεογνών, ουρηθρίτιδα, επιδιδυμίτιδα και πρωκτίτιδα 1,4 Τα Chlamydia trachomatis είναι επίσης η πιο συχνή αιτία μη-γονοκοκκικής ουρηθρίτιδας στους άνδρες (περίπου 25-55% των περιστατικών) Στις γυναίκες, οι επιπτώσεις των χλαμυδιακών λοιμώξεων είναι σοβαρές αν δεν υπάρξει άμεση αντιμετώπιση Καθώς περίπου οι μισές από αυτές τις λοιμώξεις είναι ασυμπτωματικές, πολλές περιπτώσεις δεν ανιχνεύονται και δεν αντιμετωπίζονται, οδηγώντας σε πρόσθετα προβλήματα, ειδικά στις εγκύους Τα μωρά που γεννιούνται από μητέρες που έχουν μολυνθεί από χλαμύδια διατρέχουν υψηλό κίνδυνο ανάπτυξης επιπεφυκίτιδας με έγκλειστα και πνευμονίας Η εξέταση με καλλιέργεια αποτελεί το παραδοσιακό πρότυπο αναφοράς για την ταυτοποίηση του C trachomatis Ωστόσο, οι δυσκολίες προτυποποίησης, η υψηλή τεχνική πολυπλοκότητα και η ανάγκη διατήρησης της βιωσιμότητας των οργανισμών κατά τη μεταφορά και τη φύλαξη πριν από την καλλιέργεια, οδήγησαν στην ανάπτυξη εξετάσεων χωρίς καλλιέργεια για το C trachomatis 5 Αυτές οι μέθοδοι, οι οποίες δεν απαιτούν βιώσιμους οργανισμούς, περιλαμβάνουν εξετάσεις ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος (NAAT), εξετάσεις ιχνηθέτη νουκλεϊκού οξέος, ενζυμικές ανοσοαναλύσεις (εξετάσεις EIA), άμεσες εξετάσεις με φθορίζουσα χρωστική αντισώματος (DFA) και σύνδεση συμπληρώματος 1,5 Στις κλινικές αξιολογήσεις, οι μέθοδοι NAAT αποδείχθηκαν πιο ευαίσθητες από την καλλιέργεια και άλλες μεθόδους χωρίς καλλιέργεια και αποτελούν την προτιμώμενη μέθοδο των κλινικών εργαστηρίων για τη διάγνωση των λοιμώξεων C trachomatis 5 ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το COBAS TaqMan CT Test, v20 βασίζεται σε δύο κύριες διαδικασίες: (1) χειροκίνητη προετοιμασία δείγματος για τη λήψη CT DNA, (2) ταυτόχρονη ενίσχυση PCR 6 του DNA στόχου με τη χρήση ειδικών για το CT συμπληρωματικών εκκινητών και ανίχνευση διπλά επισημασμένων με φθορίζουσα χρωστική διασπώμενων ολιγονουκλεοτιδικών ιχνηθετών ανίχνευσης που επιτρέπουν την ανίχνευση του ενισχυμένου προϊόντος (κλώνος (amplicon)) του CT στόχου και του DNA του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου, το οποίο ενισχύεται και ανιχνεύεται παράλληλα με το δείγμα Η ενότητα «Πληροφορίες Αναθεώρησης Εγγράφου» βρίσκεται στο τέλος του παρόντος εγγράφου 1

2 Το αντιδραστήριο Κύριου Μίγματος περιέχει ζεύγη εκκινητών και ιχνηθετών ειδικών για το DNA κρυπτικού πλασμιδίου του CT, το χρωμοσωμικό DNA του γονιδίου πρωτεΐνης ompa του CT και για το DNA του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Το Κύριο Μίγμα αναπτύχθηκε για να διασφαλίζει την ανίχνευση και των 15 ορολογικών ποικιλιών του CT Η ανίχνευση του ενισχυμένου DNΑ εκτελείται με ειδικούς για το στόχο και για το Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου διπλά επισημασμένους ολιγονουκλεοτιδικούς ιχνηθέτες που επιτρέπουν την ανεξάρτητη ταυτοποίηση του κλώνου (amplicon) CT και του κλώνου (amplicon) του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Προετοιμασία Δείγματος Τα ουρογεννητικά επιθηλιακά κύτταρα που έχουν συλλεχθεί με στυλεό ή έχουν κατακρημνιστεί στα ούρα αντιμετωπίζονται με ένα καθαριστικό διάλυμα για την απελευθέρωση του χλαμυδιακού DNA που περιέχεται στα χλαμυδιακά δικτυοσώματα Ένα δεύτερο καθαριστικό διάλυμα προστίθεται στη συνέχεια στο λυμένο δείγμα για ενίσχυση Ενίσχυση PCR Επιλογή Στόχου Εκτός από το χρωμοσωμικό DNA, το C trachomatis περιέχει κρυπτικό πλασμίδιο περίπου 7500 ζευγών βάσεων που είναι κοινό σε όλες τις ορολογικές ποικιλίες του C trachomatis 7,8 Το COBAS TaqMan CT Test, v20 χρησιμοποιεί τους εκκινητές CP102 και CP103 για τον προσδιορισμό μιας αλληλουχίας περίπου 206 νουκλεοτιδίων μέσα στο κρυπτικό πλασμίδιο DNA του C trachomatis Επίσης, το COBAS TaqMan CT Test, v20 χρησιμοποιεί τους εκκινητές CTMP101 και CTMP102 για τον προσδιορισμό μιας αλληλουχίας περίπου 182 νουκλεοτιδίων μέσα στο χρωμοσωμικό DNA του C trachomatis Ενίσχυση Στόχου Τα επεξεργασμένα δείγματα προστίθενται στο μίγμα ενίσχυσης σε Κ-tubes ή K-trays, στα οποία πραγματοποιείται ενίσχυση PCR Το μίγμα αντίδρασης θερμαίνεται για την αποδιάταξη του απομονωμένου DNA και την έκθεση των αλληλουχιών-στόχου του εκκινητή Καθώς το μίγμα ψύχεται, οι νοηματικοί και αντινοηματικοί εκκινητές υβριδίζονται ειδικά σε έναν από τους κλώνους DNA, το Z05 επεκτείνει τον εκκινητή και συντίθεται ένας δεύτερος κλώνος DNA Έτσι ολοκληρώνεται ο πρώτος κύκλος της PCR, με τη δημιουργία ενός δίκλωνου αντίγραφου DNA των περιοχών στόχου του CT DNA και του DNA του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Το μίγμα αντίδρασης θερμαίνεται και πάλι για το διαχωρισμό του προκύπτοντος δίκλωνου DNA και την έκθεση των αλληλουχιών στόχου εκκινητή Καθώς το μίγμα ψύχεται, οι εκκινητές υβριδίζονται στο DNA στόχο Η Z05 DNA πολυμεράση, με την παρουσία Mn 2+ και πλεονάσματος dntps, επεκτείνει τους υβριδισμένους εκκινητές κατά μήκος των αλληλουχιών στόχων για να δημιουργηθεί ένα μόριο δίκλωνου DNA που ονομάζεται κλώνος (amplicon) Ο COBAS TaqMan 48 Αναλυτής επαναλαμβάνει αυτόματα τη διαδικασία αυτή για έναν καθορισμένο αριθμό κύκλων, καθένας από τους οποίους προορίζεται για το διπλασιασμό του DNA κλώνου (amplicon) Ο απαιτούμενος αριθμός κύκλων προγραμματίζεται εκ των προτέρων στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή Η ενίσχυση πραγματοποιείται μόνο στην περιοχή του CT κρυπτικού πλασμιδίου και/ή στις χρωμοσωμικές περιοχές της πρωτεΐνης ompa, μεταξύ των εκκινητών Δεν ενισχύεται ολόκληρο το κρυπτικό πλασμίδιο ή το χρωμόσωμα του CT Ενίσχυση Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Στις διαδικασίες ενίσχυσης βάσει ενζύμων, όπως στην PCR, η αποτελεσματικότητα μπορεί να μειωθεί από αναστολείς που ενδέχεται να υπάρχουν στο δείγμα Το CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου επιτρέπει την ταυτοποίηση επεξεργασμένων δειγμάτων που περιέχουν ουσίες που ενδέχεται να αλληλεπιδράσουν με την ενίσχυση PCR Το CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου είναι ένα μη μολυσματικό, ανασυνδυασμένο πλασμίδιο DNA με περιοχές δέσμευσης εκκινητή όμοιες με αυτές της αλληλουχίας στόχου C trachomatis, μια τυχαία εσωτερική αλληλουχία παρόμοιου μεγέθους και σύνθεσης βάσεων με την αλληλουχία στόχο C trachomatis και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη που διαφοροποιεί το CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου από τον κλώνο (amplicon) στόχο Τα χαρακτηριστικά αυτά επιλέχθηκαν για τη διασφάλιση ισοδύναμης ενίσχυσης του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου και του DNA στόχου του C trachomatis Το Αντιδραστήριο CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου περιλαμβάνεται στο COBAS TaqMan CT Test, v20 και εισάγεται σε κάθε αντίδραση ενίσχυσης, για την πραγματοποίηση ενίσχυσης μαζί με το DNA στόχο από το δείγμα Το CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου έχει σχεδιαστεί για τη διασφάλιση ότι τα δείγματα δεν περιέχουν αναστολείς που θα αλληλεπιδράσουν με την ενίσχυση και την ανίχνευση των 20 ή και περισσοτέρων αντιγράφων του νουκλεϊκού οξέος-στόχου του C trachomatis όπως προσδιορίζεται από την ανάλυση Poisson Επιλεκτική Ενίσχυση Η επιλεκτική ενίσχυση του νουκλεϊκού οξέος στόχου από το δείγμα επιτυγχάνεται με το COBAS TaqMan CT Test, v20 με τη χρήση του ενζύμου AmpErase (ουρακίλη Ν γλυκοζυλάση) και της τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης (dutp) Το ένζυμο AmpErase αναγνωρίζει και καταλύει τη διάσπαση των κλώνων DNA που περιέχουν δεοξυουριδίνη 9, αλλά όχι του DNA που περιέχει δεοξυθυμιδίνη Η δεοξυουριδίνη δεν υπάρχει στο φυσικό DNA, αλλά υπάρχει πάντοτε στον κλώνο (amplicon) λόγω της χρήσης τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης ως ενός από τα dntps του αντιδραστηρίου Κύριου Μίγματος Για το λόγο αυτό, μόνο ο κλώνος (amplicon) 2

3 περιέχει δεοξυουριδίνη Η δεοξυουριδίνη καθιστά το μολυσματικό κλώνο (amplicon) ευαίσθητο στη διάσπαση από το ένζυμο AmpErase πριν από την ενίσχυση του DNA στόχου Οποιοδήποτε μη ειδικό προϊόν που σχηματίζεται μετά την αρχική ενεργοποίηση του Κύριου Μίγματος από μαγγάνιο καταστρέφεται από το ένζυμο AmpErase To ένζυμο AmpErase, που περιλαμβάνεται στο αντιδραστήριο Κύριου Μίγματος, καταλύει τη σχάση του DNA που περιέχει δεοξυουριδίνη στα ιζήματα της δεοξυουριδίνης ανοίγοντας την αλυσίδα της δεοξυριβόζης στη θέση C1 Όταν θερμαίνεται στο πρώτο βήμα θερμοκυκλοποίησης, η αλυσίδα DNA του κλώνου (amplicon) διασπάται στη θέση της δεοξυουριδίνης, καθιστώντας το DNA μη ενισχύσιμο Το ένζυμο AmpErase είναι αδρανές σε θερμοκρασίες πάνω από 55 C, δηλαδή, σε όλα τα βήματα της θερμοκυκλοποίησης, και για το λόγο αυτόν δεν καταστρέφει τον κλώνο (amplicon)-στόχο που σχηματίζεται κατά τη διάρκεια της ενίσχυσης Ανίχνευση Προϊόντων PCR σε ένα COBAS TaqMan Test Το COBAS TaqMan CT Test, v20 χρησιμοποιεί τεχνολογία PCR πραγματικού χρόνου 10,11 Η χρήση ιχνηθετών με διπλή φθορίζουσα επισήμανση επιτρέπει την ανίχνευση της συσσώρευσης προϊόντων PCR σε πραγματικό χρόνο παρακολουθώντας την ένταση εκπομπής των φθοριζουσών χρωστικών του αναφορέα που απελευθερώνονται κατά τη διαδικασία της ενίσχυσης Οι ιχνηθέτες περιλαμβάνουν ειδικούς για το κρυπτικό πλασμίδιο CT, την πρωτεΐνη ompa CT και το CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου ολιγονουκλεοτιδικούς ιχνηθέτες με χρωστική αναφορέα (reporter) και παρεμποδιστή (quencher) Στο COBAS TaqMan CT Test, v20, οι ιχνηθέτες του κρυπτικού πλασμιδίου και της πρωτεΐνης ompa του CT χρησιμοποιούν την ίδια φθορίζουσα χρωστική αναφορέα (reporter) και ο ιχνηθέτης CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου επισημαίνεται με φθορίζουσα χρωστική αναφορέα (reporter), διαφορετική από εκείνη των ιχνηθετών του κρυπτικού πλασμιδίου και της πρωτεΐνης ompa του CT Όταν οι διπλά επισημασμένοι με φθορίζουσα χρωστική ιχνηθέτες είναι ανέπαφοι, ο φθορισμός αναφορέα καταστέλλεται από την εγγύτητα της χρωστικής παρεμποδιστή, λόγω των φαινομένων μεταφοράς ενέργειας τύπου Förster Στη διάρκεια της PCR, οι ιχνηθέτες υβριδίζονται στην αντίστοιχη αλληλουχία στόχο και διασπώνται από την 5' ως 3' δραστηριότητα νουκλεάσης της θερμοσταθερής Z05 DNA πολυμεράσης Μόλις απελευθερωθούν και αποχωριστούν οι χρωστικές αναφορέα (reporter) και παρεμποδιστή (quencher), δεν πραγματοποιείται πλέον παρεμπόδιση και η φθορίζουσα δραστηριότητα των χρωστικών αναφορέα (reporter) αυξάνεται Η μέτρηση της ενίσχυσης του DNA στόχου του κρυπτικού πλασμιδίου και/ή της πρωτεΐνης ompa του CT πραγματοποιείται ανεξάρτητα και σε διαφορετικό μήκος κύματος από ότι το DNA του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Η διαδικασία αυτή επαναλαμβάνεται για έναν καθορισμένο αριθμό κύκλων, καθένας από τους οποίους έχει ως αποτέλεσμα την αύξηση της έντασης εκπομπής των μεμονωμένων χρωστικών αναφορέα (reporter), επιτρέποντας την ξεχωριστή ταυτοποίηση του CT DNA και του DNA του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ AMPLICOR CT/NG Specimen Preparation Kit AMPLICOR CT/NG Κιτ Προετοιμασίας Δειγμάτων (P/N: , ART: , US: 83315) CT/NG URINE WASH (CT/NG Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης Ούρων) Ρυθμιστικό διάλυμα Τris-HCI 300 mm Χλωριούχο νάτριο < 0,1% καθαριστικό 0,09% Αζίδιο του νατρίου CT/NG LYS (CT/NG Αντιδραστήριο Λύσης) Ρυθμιστικό διάλυμα Τris-HCI < 1% σταθεροποιητής διαλύματος 0,09% Αζίδιο του νατρίου CT/NG DIL (CT/NG Αραιωτικό Δείγματος) Ρυθμιστικό διάλυμα Τris-HCI 6 mm Χλωριούχο μαγνήσιο < 25% καθαριστικό 0,05% Αζίδιο του νατρίου CT/NG PREP 100 Εξετάσεις 1 x 50 ml 1 x 25 ml 2 x 50 ml 3

4 COBAS TaqMan CT Test, v20 CTM CT v20 48 Εξετάσεις (P/N: ) Αντιδραστήρια Ελέγχου CT IC 3 x 0,1 ml (CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου) Ρυθμιστικό διάλυμα Τris-HCI 8 αντίγραφα/µl μη μολυσματικού πλασμιδίου DNA (μικροβιακό) που περιέχει αλληλουχίες δέσμευσης εκκινητή C trachomatis και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη ισοδύναμη με περίπου 20 IC αντίγραφα/εξέταση < 0,005% Poly ra RNA (συνθετικό) EDTA Χρωστική ύλη αμαράνθης 0,05% Αζίδιο του νατρίου CT (+) C, v20 1 x 0,75 ml [Ορός Ελέγχου C trachomatis (+), v20] Ρυθμιστικό διάλυμα Τris-HCI 8,6 αντίγραφα/µl μη μολυσματικού πλασμιδίου DNA (συνθετικό) που περιέχει αλληλουχίες C trachomatis ισοδύναμες με περίπου 20 αντίγραφα/εξέταση < 0,005% Poly ra RNA (συνθετικό) EDTA 0,05% Αζίδιο του νατρίου CT ( ) C, v20 1 x 0,75 ml [Ορός Ελέγχου C trachomatis ( ), v20] Ρυθμιστικό διάλυμα Τris-HCI < 0,005% Poly ra RNA (συνθετικό) EDTA 0,05% Αζίδιο του νατρίου Αντιδραστήρια Ενίσχυσης και Ανίχνευσης CT MMX, v20 (COBAS TaqMan CT Κύριο Μίγμα, v20) 3 x 0,75 ml Ρυθμιστικό διάλυμα Tricine Υδροξείδιο του καλίου Οξικό κάλιο Γλυκερόλη < 0,001% datp, dctp, dgtp, dutp < 0,001% Νοηματικοί και αντινοηματικοί εκκινητές για κρυπτικό πλασμίδιο CT και πρωτεΐνη ompa CT < 0,001% Ειδικοί για το κρυπτικό πλασμίδιο CT, την πρωτεΐνη ompa CT και το CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου ολιγονουκλεοτιδικοί ιχνηθέτες με φθορίζουσα επισήμανση < 0,001% Απταμέρη < 0,05% Z05 DNA Πολυμεράσης (μικροβιακό) < 0,1% Ένζυμο AmpErase (ουρακίλη-n-γλυκοζυλάση) (μικροβιακό) 0,09% Αζίδιο του νατρίου CT Mn 2+ (COBAS TaqMan CT Διάλυμα Μαγγανίου) 3 x 0,2 ml < 1,0% Οξικό μαγγάνιο Παγόμορφο οξικό οξύ 0,09% Αζίδιο του νατρίου ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ A ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ B Η χρήση του όρου «αντίγραφο» στο παρόν ένθετο συσκευασίας αναφέρεται σε 1 αντίγραφο νουκλεϊκού οξέος στόχου C trachomatis Ένα (1) αντίγραφο ισοδυναμεί με τη μικρότερη ποσότητα νουκλεϊκού οξέος στόχου C trachomatis που θα δημιουργήσει ένα θετικό αποτέλεσμα εξέτασης PCR Γ Η παρούσα εξέταση προορίζεται για χρήση μόνο με ενδοτραχηλικά δείγματα και δείγματα ούρων Η παρούσα εξέταση δεν προορίζεται για χρήση με φαρυγγικά, δείγματα ορθού ή άλλου τύπου δείγματα Δ Μην εκτελείτε αναρρόφηση με πιπέτα από το στόμα 4

5 E Μην τρώτε, πίνετε ή καπνίζετε στους χώρους εργασίας των εργαστηρίων Φοράτε προστατευτικά γάντια μιας χρήσης, ποδιές εργαστηρίου και προστατευτικά γυαλιά όταν χειρίζεστε δείγματα και κιτ αντιδραστηρίων Πλένετε καλά τα χέρια σας μετά το χειρισμό δειγμάτων και κιτ αντιδραστηρίων ΣΤ Αποφεύγετε τη μόλυνση των αντιδραστηρίων από μικρόβια όταν αφαιρείτε τα κλάσματα δειγμάτων από τις φιάλες αντιδραστηρίων Ζ Συνιστάται η χρήση αποστειρωμένων πιπετών και ακροφυσίων πιπετών μιας χρήσης Η Μη συγκεντρώνετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες ή από διαφορετικές φιάλες της ίδιας παρτίδας Θ Μη συνδυάζετε αντιδραστήρια από διαφορετικά κιτ Ι Η απόρριψη των αχρησιμοποίητων αντιδραστηρίων, των απορριμμάτων και των δειγμάτων θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς ΙΑ Μη χρησιμοποιείτε κιτ μετά την ημερομηνία λήξης τους ΙΒ Διατίθενται Δελτία Δεδομένων Ασφάλειας Υλικών (MSDS) κατόπιν ζήτησης από τα τοπικά γραφεία της Roche ΙΓ Η ροή των εργασιών στο εργαστήριο πρέπει να εκτελείται σε μονόδρομη κατεύθυνση, αρχίζοντας από την Περιοχή Προετοιμασίας Πριν από την Ενίσχυση και προχωρώντας προς την Περιοχή Προετοιμασίας Μετά την Ενίσχυση (Ενίσχυση/Ανίχνευση) Τα υλικά και ο εξοπλισμός πρέπει να προορίζονται αποκλειστικά για κάθε ενέργεια που προηγείται της ενίσχυσης και όχι για άλλες ενέργειες, ούτε να μεταφέρονται μεταξύ των περιοχών Πρέπει να φοράτε γάντια σε κάθε περιοχή και να τα αλλάζετε πριν από την έξοδό σας από τη συγκεκριμένη περιοχή Ο εξοπλισμός και τα υλικά που χρησιμοποιούνται για την προετοιμασία του αντιδραστηρίου δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται για ενέργειες προετοιμασίας δειγμάτων ή για το χειρισμό με πιπέτα ή την επεξεργασία ενισχυμένου DNA ή άλλων πηγών DNA στόχου Τα υλικά και ο εξοπλισμός που χρησιμοποιούνται μετά την ενίσχυση πρέπει να παραμένουν πάντοτε στον ειδικό χώρο που προορίζεται για την επεξεργασία μετά την ενίσχυση ΙΔ Τα δείγματα και οι οροί ελέγχου θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να εκτελείται σύμφωνα με τις ασφαλείς εργαστηριακές πρακτικές, όπως αυτές περιγράφονται στην τεκμηρίωση Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 12 και στο Έγγραφο CLSI M29-A3 13 Καθαρίζετε καλά και απολυμαίνετε όλες τις επιφάνειες εργασίας με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απιονισμένο ή απoσταγμένο νερό ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα οικιακά υγρά λευκαντικά του εμπορίου περιέχουν κατά κανόνα υποχλωριώδες νάτριο σε συγκέντρωση 5,25% Η αραίωση οικιακού λευκαντικού σε αναλογία 1:10 παράγει διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 0,5% ΙΕ Για τα δείγματα που μεταφέρονται σε μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc), οι στυλεοί θα πρέπει να παραμένουν στο σωληνάριο μεταφοράς, έτσι ώστε να υπάρχουν οπτικές αποδείξεις εμβολιασμού του δείγματος Το COBAS TaqMan CT Test, v20 αξιολογήθηκε με χρήση δειγμάτων που μεταφέρθηκαν με το στυλεό στο σωληνάριο μεταφοράς του μέσου Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) Τα δείγματα που μεταφέρθηκαν σε μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) χωρίς στυλεούς δεν έχουν αξιολογηθεί και δεν συνιστάται η χρήση τους για αυτή την εξέταση ΙΣΤ Η αποθήκευση των δειγμάτων ούρων σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για περισσότερο από 24 ώρες μπορεί να οδηγήσει σε αποδόμηση του δείγματος Τα δείγματα ούρων που αποθηκεύονται για περισσότερο από 24 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται για εξέταση ΙΖ Τα CT/NG URINE WASH, CT/NG LYS, CT/NG DIL, CT MMX, v20; CT Mn 2+, CT IC, CT (+) C, v20 και CT ( ) C, v20 περιέχουν αζίδιο του νατρίου Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με το μόλυβδο και το χαλκό των σωληνώσεων και να δημιουργήσει υψηλής εκρηκτικότητας αζίδια μετάλλου Όταν απορρίπτετε διαλύματα που περιέχουν αζίδιο του νατρίου στους νεροχύτες των εργαστηρίων, ρίχνετε άφθονη ποσότητα νερού για να αποφύγετε τη συσσώρευση αζιδίου ΙΗ Για την προετοιμασία των δειγμάτων και των ορών ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια με βιδωτό πώμα, έτσι ώστε να αποφεύγεται το πιτσίλισμα και η ενδεχόμενη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα ΙΘ Φοράτε προστατευτικά γυαλιά, ποδιές εργαστηρίου και γάντια μίας χρήσης όταν χειρίζεστε αντιδραστήρια Αποφεύγετε την επαφή των υλικών αυτών με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους Σε περίπτωση τυχαίας επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού Εάν δεν υπάρξει άμεση αντιμετώπιση, μπορεί να προκληθούν εγκαύματα Εάν πέσουν σταγόνες από τα αντιδραστήρια, αραιώστε με νερό πριν τις σκουπίσετε 5

6 ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ ΧΕΙΡΙΣΜΟΥ Μην καταψύχετε τα αντιδραστήρια ή τους ορούς ελέγχου A Αποθηκεύστε το CT/NG LYS στους 2-25 C Αποθηκεύστε τα CT/NG URINE WASH και CT/NG DIL στους 2-8 C Αν σχηματιστεί κατακρήμνισμα σε οποιοδήποτε από αυτά τα αντιδραστήρια κατά την αποθήκευση, θερμάνετε σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) και ανακατέψτε καλά πριν από τη χρήση Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης B Αποθηκεύστε τα CT MMX, v20; CT Mn 2+, CT (+) C, v20; CT ( ) C, v20 και CT IC σε θερμοκρασία 2-8 C Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης Γ Αποθηκεύστε τους μερικώς χρησιμοποιημένους ορούς ελέγχου στους 2-8 C μεταξύ των αναλύσεων του οργάνου Ελέγξτε την ημερομηνία λήξης των ανοιχτών ορών ελέγχου πριν από τη χρήση Τα CT (+) C, v20 και CT ( ) C, v20 μπορούν να χρησιμοποιηθούν έως και τρεις φορές για την προετοιμασία των Ορών Ελέγχου Εργασίας CT (+), v20 και CT ( ), v20 Δ Τα CT MMX, v20; CT Mn 2+ και CT IC παρέχονται ως φιαλίδια μιας χρήσης για σετ 16 αντιδράσεων Τυχόν μη χρησιμοποιημένο υλικό σε αυτά τα φιαλίδια πρέπει να απορρίπτεται E Το Κύριο Μίγμα Εργασίας (προετοιμασμένο με την προσθήκη CT Mn 2+ και CT IC σε CT MMX, v20) πρέπει να αποθηκεύεται στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για διάστημα 2 ωρών το μέγιστο ή στους 2-8 C για διάστημα 16 ωρών το μέγιστο Τα προετοιμασμένα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να προστεθούν εντός 2 ωρών από την προετοιμασία του Κύριου Μίγματος Εργασίας σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) ή εντός 16 ωρών από την προετοιμασία του Κύριου Μίγματος Εργασίας εφόσον αυτό διατηρείται σε θερμοκρασία 2-8 C ΣΤ Τα επεξεργασμένα δείγματα παραμένουν σταθερά έως και 2 ώρες στους C και έως 7 ημέρες στους 2-8 C Ζ Η ενίσχυση πρέπει να ξεκινήσει εντός 90 λεπτών από το χρόνο προσθήκης των επεξεργασμένων δειγμάτων και ορών ελέγχου στο Κύριο Μίγμα Εργασίας ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ Αντιδραστήρια Προετοιμασίας Δείγματος A AMPLICOR CT/NG Specimen Preparation Kit AMPLICOR CT/NG Κιτ Προετοιμασίας Δειγμάτων (P/N: , ART: , US: 83315) CT/NG LYS (CT/NG Αντιδραστήριο Λύσης) CT/NG URINE WASH (CT/NG Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης Ούρων) CT/NG DIL (CT/NG Αραιωτικό Δείγματος) Αντιδραστήρια Ενίσχυσης και Ανίχνευσης B COBAS TaqMan CT Test, v20 (P/N: ) CT IC (CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου) CT (+) C, v20 [Ορός Ελέγχου C trachomatis (+), v20] CT ( ) C, v20 [Ορός Ελέγχου C trachomatis ( ), v20] CT MMX, v20 (COBAS TaqMan CT Κύριο Μίγμα, v20) CT Mn 2+ (COBAS TaqMan CT Διάλυμα Μαγγανίου) CT/NG PREP CTM CT v20 6

7 ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ Όργανα και Λογισμικό COBAS TaqMan 48 Αναλυτής AMPLILINK Λογισμικό, Έκδοση Σειράς 33 ή 34 Μονάδα Ελέγχου για το AMPLILINK Λογισμικό Εγχειρίδια Οργάνου και Λογισμικού: Εγχειρίδιο Οργάνου του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή για χρήση με το AMPLILINK Λογισμικό, Έκδοση Σειράς 33 και 34 Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK Λογισμικού, Έκδοση Σειράς 33, για χρήση με το COBAS AmpliPrep Όργανο, τον COBAS TaqMan Αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή, τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή και το cobas p 630 όργανο ή Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK Λογισμικού, Έκδοση Σειράς 34 Αρχείο Ορισμού Εξέτασης (TDF) Για το όνομα και την τρέχουσα έκδοση του TDF, ανατρέξτε στην Καρτέλα Στοιχείων Προϊόντος που παρέχεται μαζί με το κιτ Πωματιστής K-tube K-carrier COBAS TaqMan 48 Αναλυτή K-tray carrier COBAS TaqMan 48 Αναλυτή Συλλογή και Μεταφορά Δειγμάτων Το M4RT MicroTest BL KIT Ref κατασκευάζεται και διανέμεται από την εταιρία Remel, Inc Το παρόν προϊόν διατίθεται επίσης μέσω του συστήματος παραγγελιών της Roche (P/N: ) Σωληνάρια πολυπροπυλενίου συλλογής ούρων χωρίς συντηρητικό Υλικά μίας χρήσης K-tubes K-trays COBAS TaqMan 48 Αναλυτή ΑΛΛΑ ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ Πιπέτα Eppendorf Repeater με δοχείο 1,25 ml Eppendorf Combitip (αποστειρωμένη, σε μεμονωμένη συσκευασία) Αναδευτήρας τύπου Vortex Βοήθημα Πιπέτας: Drummond (P/N: ) ή αντίστοιχο Σωληνάρια πολυπροπυλενίου 2,0 ml με βιδωτό πώμα, αποστειρωμένα, χωρίς σιλικόνη, κωνικά (Sarstedt ή αντίστοιχα)** Υποδοχείς σωληναρίων (Sarstedt ή αντίστοιχοι) Συσκευές πιπέτας (χωρητικότητας, 50 µl, 100 µl, 200 µl, 250 µl, 500 µl και 1000 µl)* με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης Μικροφυγόκεντρος (μέγ RCF x g, ελάχ RCF x g), Eppendorf 5415C, HERMLE Z230M ή αντίστοιχη Εκτεταμένα ακροφύσια φραγής αερολυμάτων (Matrix 7055 ή αντίστοιχα) για χρήση με δείγματα που μεταφέρονται σε Μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc), (M4RT MicroTest BL KIT) Μονάδα θερμότητας 37 C ± 2 C Απορροφητικό χαρτί Γάντια μίας χρήσης, χωρίς πούδρα * Οι πιπέτες πρέπει να διαθέτουν ακρίβεια 3% του δηλούμενου όγκου Τα ελεύθερα από DNase (ή νουκλεάση) ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης, πρέπει να χρησιμοποιούνται όπου προδιαγράφεται, για να αποφεύγεται η διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων και των κλώνων (amplicon) ** Για την προετοιμασία των δειγμάτων και των ορών ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια με βιδωτό πώμα, έτσι ώστε να αποφεύγεται το πιτσίλισμα και η ενδεχόμενη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων και των ορών ελέγχου Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα 7

8 ΣΥΛΛΟΓΗ, ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όλα τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να θεωρούνται μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται ανάλογα Τα μόνα αποδεκτά δείγματα είναι: 1 Δείγματα ούρων (ανδρών και γυναικών) που έχουν μεταφερθεί σε καθαρά δοχεία πολυπροπυλενίου Μη χρησιμοποιείτε δείγματα ούρων που έχουν συλλεχθεί σε δοχεία που περιέχουν συντηρητικά 2 Ενδοτραχηλικά δείγματα από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί σε Μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) Για αξιόπιστα αποτελέσματα εξέτασης, ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες για σωστή συλλογή δειγμάτων Αυτή η εξέταση δεν προορίζεται για χρήση με φαρυγγικά, δείγματα ορθού ή άλλου τύπου από αυτά που υποδεικνύονται Για τη διασφάλιση της μεταφοράς δειγμάτων υψηλής ποιότητας στο εργαστήριο για εξέταση, τα ενδοτραχηλικά δείγματα και τα δείγματα ούρων από στυλεό πρέπει να μεταφέρονται στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατόν Μην επιτρέπετε την μεταφορά δειγμάτων χωρίς ελεγχόμενες συνθήκες θερμοκρασίας A Συλλογή Δειγμάτων Δείγματα Ούρων (Ανδρών και Γυναικών) ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ο ασθενής δεν πρέπει να έχει ουρήσει κατά τις 2 προηγούμενες ώρες 1 Συλλέξτε 10 έως 50 ml των πρώτων ούρων της ούρησης σε ένα καθαρό δοχείο πολυπροπυλενίου χωρίς συντηρητικά 2 Ασφαλίστε το δοχείο του δείγματος και τοποθετήστε την αντίστοιχη ετικέτα Ακολουθήστε τη διαδικασία συλλογής και μεταφοράς του εργαστηρίου Το δείγμα μπορεί να μεταφερθεί στην τοποθεσία εξέτασης σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) Δείγματα από στυλεό (Γυναικών) που συλλέγονται σε Μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) 1 Ενδοτραχηλικά δείγματα από στυλεό μπορούν να συλλεχθούν και να μεταφερθούν σε Μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) των 3 ml Χρησιμοποιήστε τις συνιστώμενες μεθόδους για τη δειγματοληψία των κυλινδρικών και των πλακωδών κυττάρων μετά την απομάκρυνση της τραχηλικής βλέννας 14 2 Χρησιμοποιείτε μόνο στυλεούς συλλογής με ακροφύσια από dacron, rayon ή αλγινικό ασβέστιο με πλαστικές ή μη αλουμινένιες συρμάτινες λαβές Μη χρησιμοποιείτε στυλεούς συλλογής με ξύλινες ή αλουμινένιες λαβές 3 Αφήστε τους στυλεούς στο μέσο μεταφοράς Ασφαλίστε το δοχείο του δείγματος και τοποθετήστε την αντίστοιχη ετικέτα Ακολουθήστε τη διαδικασία συλλογής και μεταφοράς του εργαστηρίου Το δείγμα μπορεί να μεταφερθεί στην τοποθεσία εξέτασης σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) B Μεταφορά Δειγμάτων Δείγματα Ούρων (Ανδρών και Γυναικών) 1 Τα δείγματα ούρων μπορούν να μεταφερθούν στην τοποθεσία εξέτασης σε θερμοκρασία C Τα δείγματα ούρων παραμένουν σταθερά για 24 ώρες σε θερμοκρασία C 2 Τα δείγματα ούρων που απαιτούν μεταφορά σε κέντρα εκτός της τοποθεσίας εξέτασης πρέπει να μεταφέρονται κατά τη διάρκεια της νύχτας με άφιξη εντός 24 ωρών Η μεταφορά μπορεί να γίνει στους C Αν τα δείγματα ούρων πρόκειται να μεταφερθούν στους C, πρέπει να αποθηκευτούν στους 2-8 C μέχρι τη μεταφορά για να διασφαλιστεί ότι η περίοδος αποθήκευσης στους C δεν θα υπερβεί τις 24 ώρες Τα δείγματα πρέπει να μεταφέρονται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 15 Δείγματα από στυλεό (Γυναικών) που συλλέγονται σε Μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) 1 Τα δείγματα από στυλεό μπορούν να μεταφερθούν στην τοποθεσία εξέτασης στους C με την προϋπόθεση ότι ο συνολικός χρόνος αποθήκευσης και μεταφοράς στους C δεν υπερβαίνει τις 14 ημέρες Καταψύξτε τα δείγματα από στυλεό, αν η μεταφορά τους στο εργαστήριο καθυστερεί για περισσότερες από 14 ημέρες από το χρόνο συλλογής Αν χρησιμοποιούνται για καλλιέργεια, ο χειρισμός των δειγμάτων πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις συστάσεις για καλλιέργεια (-60 C αν δεν καλλιεργηθούν εντός 24 ωρών) 8

9 2 Τα δείγματα από στυλεό που απαιτούν μεταφορά σε εργαστήρια εκτός της τοποθεσίας εξέτασης θα πρέπει να μεταφέρονται σε θερμοκρασία C μετά τη συλλογή σύμφωνα με τις εργαστηριακές διαδικασίες για τη μεταφορά δειγμάτων από στυλεό Τα δείγματα πρέπει να μεταφέρονται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 15 Γ Αποθήκευση Δειγμάτων ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η ψύξη ρουτίνας ή η παρατεταμένη αποθήκευση των δειγμάτων μπορεί να επηρεάσει την απόδοσή τους Δείγματα Ούρων (Ανδρών και Γυναικών) Τα δείγματα ούρων, η επεξεργασία των οποίων δεν θα εκτελεστεί εντός 24 ωρών από τη συλλογή, πρέπει να αποθηκευτούν στους 2-8 C και να υποστούν επεξεργασία εντός 7 ημερών από τη συλλογή Τα δείγματα ούρων, η επεξεργασία των οποίων δεν θα εκτελεστεί εντός 7 ημερών από τη συλλογή, μπορούν να αποθηκευτούν στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία έως και για 30 ημέρες Δείγματα από στυλεό (Γυναικών) που συλλέγονται σε Μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) Αποθηκεύστε τα δείγματα από στυλεό που δεν εξετάστηκαν κατά τη λήψη τους στο εργαστήριο εξέτασης στους C και επεξεργαστείτε τα εντός 14 ημερών Τα δείγματα από στυλεό που δεν μπορούν να υποστούν επεξεργασία μέσα σε 14 ημέρες από τη συλλογή πρέπει να αποθηκευτούν στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία και να εξεταστούν μέσα σε 30 ημέρες από τη συλλογή ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για λεπτομερείς οδηγίες λειτουργίας, εκτύπωση αποτελεσμάτων και ερμηνεία ενδείξεων, σχολίων και μηνυμάτων σφάλματος, ανατρέξτε στο (1) Εγχειρίδιο Οργάνου του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή για χρήση με το AMPLILINK Λογισμικό, Έκδοση Σειράς 33 και 34, (2) Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK Λογισμικού, Έκδοση Σειράς 33, για χρήση με το COBAS AmpliPrep Όργανο, τον COBAS TaqMan Αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή, τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή και το cobas p 630 όργανο, ή (3) Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK Λογισμικού, Έκδοση Σειράς 34 ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όλα τα αντιδραστήρια ενίσχυσης και ανίχνευσης πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) πριν από τη χρήση Απομακρύνετέ τα από το χώρο αποθήκευσης στους 2-8 C τουλάχιστον 30 λεπτά πριν από τη χρήση ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα δείγματα από στυλεό και τα δείγματα ούρων πρέπει να περιέλθουν σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για λεπτά πριν από τη χρήση ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όπου προδιαγράφεται, χρησιμοποιείτε συσκευές πιπέτας με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης Απαιτείται ιδιαίτερη προσοχή για την αποφυγή μόλυνσης Μέγεθος Ανάλυσης: Κάθε κιτ COBAS TaqMan CT Test, v20 περιέχει αντιδραστήρια που επαρκούν για τρεις αναλύσεις 16 εξετάσεων, οι οποίες μπορούν να εκτελεστούν ξεχωριστά ή ταυτόχρονα Σε κάθε ανάλυση εξετάσεων έως και 22 δειγμάτων σε K-carrier, πρέπει να συμπεριλαμβάνεται τουλάχιστον ένα αντίγραφο από το CT ( ) C, v20 και το CT (+) C, v20 (βλ ενότητα «Ποιοτικός Έλεγχος») Τα Αντιδραστήρια Ενίσχυσης και Ανίχνευσης είναι συσκευασμένα σε φιαλίδια μιας χρήσης για 16 εξετάσεις Για την αποτελεσματικότερη χρήση των αντιδραστηρίων, τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να υφίστανται επεξεργασία σε παρτίδες, ο αριθμός των οποίων πρέπει να είναι πολλαπλάσιος του 16 Τα Αντιδραστήρια Προετοιμασίας Δειγμάτων συσκευάζονται σε φιάλες που έκαστη καλύπτει 100 εξετάσεις Προετοιμασία Δειγμάτων και Ορών Ελέγχου A Προετοιμασία Δειγμάτων που Εκτελείται στην: Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων πριν από την Ενίσχυση Δείγματα Ούρων (Ανδρών και Γυναικών) 1 Επικολλήστε ετικέτα σε ένα σωληνάριο 2,0 ml με βιδωτό πώμα για κάθε δείγμα ασθενή 2 Προσθέστε 500 µl CT/NG URINE WASH σε καθένα από τα σωληνάρια με την αντίστοιχη ετικέτα 3 Στροβιλίστε το δείγμα ούρων καλά (3-10 δευτερόλεπτα) Αν χρησιμοποιείτε κατεψυγμένα δείγματα, αποψύξτε τα σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) πριν τα στροβιλίσετε (για όγκους δειγμάτων μεγαλύτερους από 2 ml η απόψυξη πρέπει να γίνεται κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 2-8 C) και συνεχίστε την επεξεργασία ακόμη και αν υπάρχει κατακρήμνισμα Αφαιρέστε προσεκτικά τα πώματα των δοχείων με τα δείγματα ούρων Κατά το χειρισμό των δειγμάτων φροντίστε ώστε να μη μολυνθούν τα γάντια με ούρα στο πώμα Σε περίπτωση μόλυνσης, αντικαταστήστε τα γάντια με ένα καθαρό ζεύγος πριν μεταβείτε στο επόμενο δείγμα 9

10 4 Προσθέστε 500 µl από κάθε καλά αναμεμιγμένο δείγμα ούρων ασθενή στο σωληνάριο με την ετικέτα που περιέχει CT/NG URINE WASH Χρησιμοποιήστε νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα Πωματίστε και πάλι τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας 5 Επωάστε τα σωληνάρια στους 37 C για 15 λεπτά 6 Φυγοκεντρίστε στα x g για 5 λεπτά 7 Αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό και στεγνώστε κάθε σωληνάριο σε χωριστό φύλλο απορροφητικού χαρτιού 8 Χρησιμοποιώντας ένα νέο ακροφύσιο πιπέτας φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα, προσθέστε 250 µl CT/NG LYS σε κάθε σωληνάριο Πωματίστε και πάλι τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας 9 Επωάστε τα σωληνάρια για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) 10 Χρησιμοποιώντας ένα νέο ακροφύσιο πιπέτας φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα, προσθέστε 250 µl CT/NG DIL σε κάθε σωληνάριο Πωματίστε και πάλι τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας 11 Φυγοκεντρίστε τα σωληνάρια για 10 λεπτά στα x g 12 Τα επεξεργασμένα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) έως και για 2 ώρες πριν από τη μεταφορά των κλασμάτων δείγματος στα K-tubes ή στα K-trays που περιέχουν Κύριο Μίγμα Εργασίας Αποθηκεύστε τα επεξεργασμένα δείγματα στους 2-8 C αν τα κλάσματα δείγματος δεν προστεθούν στα K-tubes ή στα K-trays εντός 2 ωρών Τα επεξεργασμένα δείγματα που αποθηκεύτηκαν σε θερμοκρασία 2-8 C πρέπει να εξεταστούν εντός 7 ημερών Δείγματα από Στυλεό ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το COBAS TaqMan CT Test, v20 αξιολογήθηκε με Μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) Η χρήση εναλλακτικών μέσων μεταφοράς πρέπει να αξιολογηθεί από το εργαστήριο 1 Ελέγξτε αν το σωληνάριο των Μέσων Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) περιέχει στυλεό Οι στυλεοί πρέπει να παραμένουν στο σωληνάριο των Μέσων Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc) για την αποφυγή εσφαλμένης χρήσης Η παρουσία του στυλεού στο σωληνάριο των Μέσων Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc), δεν διασφαλίζει την επαρκή συλλογή δείγματος 2 Επικολλήστε ετικέτα σε ένα σωληνάριο 2,0 ml με βιδωτό πώμα για κάθε δείγμα ασθενή Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα 3 Προσθέστε 100 µl CT/NG LYS στα σωληνάρια πολυπροπυλενίου 2 ml που φέρουν ετικέτες 4 Ανακατέψτε τα δείγματα στροβιλίζοντας Αν τα δείγματα αποθηκεύτηκαν κατεψυγμένα, αποψύξτε τα σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) πριν τα στροβιλίσετε Αφαιρέστε προσεκτικά τα πώματα από τα σωληνάρια δείγματος Φροντίστε να μη μολύνετε τα γάντια Σε περίπτωση μόλυνσης, αντικαταστήστε τα γάντια με ένα καθαρό ζεύγος πριν μεταβείτε στο επόμενο δείγμα 5 Χρησιμοποιώντας μια συσκευή πιπέτας με νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων, προσθέστε 100 µl καλά αναμεμιγμένου δείγματος στο κατάλληλο σωληνάριο που περιέχει CT/NG LYS Χρησιμοποιήστε νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα Πωματίστε και πάλι το σωληνάριο και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας 6 Επωάστε τα σωληνάρια σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για 10 λεπτά 7 Χρησιμοποιώντας ένα νέο ακροφύσιο πιπέτας φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα, προσθέστε 200 µl CT/NG DIL σε κάθε σωληνάριο Πωματίστε και πάλι το σωληνάριο και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας 8 Επωάστε τα σωληνάρια σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για 10 λεπτά 9 Τα επεξεργασμένα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) έως και για 2 ώρες πριν από τη μεταφορά των κλασμάτων δείγματος σε K-tubes ή K-trays που περιέχουν Κύριο Μίγμα Εργασίας Αποθηκεύστε τα επεξεργασμένα δείγματα στους 2-8 C αν τα κλάσματα δείγματος δεν προστεθούν στα K-tubes ή στα K-trays εντός 2 ωρών Τα επεξεργασμένα δείγματα που αποθηκεύτηκαν σε θερμοκρασία 2-8 C πρέπει να εξεταστούν εντός 7 ημερών 10

11 B Προετοιμασία Ορών Ελέγχου που Εκτελείται στην: Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων πριν από την Ενίσχυση ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Οι Οροί Ελέγχου Εργασίας πρέπει να προετοιμάζονται την ημέρα εκτέλεσης της εξέτασης Οι Οροί Ελέγχου Εργασίας μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την προετοιμασία πολλαπλών Επεξεργασμένων Ορών Ελέγχου κατά τη διάρκεια της ημέρας, αλλά πρέπει να απορρίπτονται στο τέλος της ημέρας ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα αντιδραστήρια CT (+) C, v20 και CT ( ) C, v20 που παρέχονται στο κιτ COBAS TaqMan CT Test, v20 προορίζονται για χρήση έως και τρεις φορές για την προετοιμασία των Ορών Ελέγχου Εργασίας CT (+), v20 και CT ( ), v20 ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Αν εξετάζονται τύποι δειγμάτων τόσο από στυλεό όσο και ούρων, είναι απαραίτητη η προετοιμασία ενός σετ ορών ελέγχου για κάθε τύπο δείγματος Καθώς προετοιμάζονται οροί ελέγχου για κάθε τύπο δείγματος, συνιστάται ο διαχωρισμός των τύπων δειγμάτων μεταξύ των K-carriers Στη συνέχεια, κάθε σετ ειδικών ορών ελέγχου θα χρησιμοποιείται για τον έλεγχο του συγκεκριμένου τύπου δειγμάτων Οροί Ελέγχου Εργασίας: Προετοιμάστε τους ακόλουθους Ορούς Ελέγχου Εργασίας CT (+), v20 και CT ( ), v20 1 Χρησιμοποιώντας μια συσκευή πιπέτας με αποστειρωμένο ακροφύσιο, προσθέστε 1 ml CT/NG DIL σε κάθε ένα από τα δύο σωληνάρια πολυπροπυλενίου των 2 ml με βιδωτό πώμα Επικολλήστε στο ένα σωληνάριο ετικέτα «CT (+), v20 Working Control» και στο άλλο ετικέτα «CT ( ), v20 Working Control» 2 Στροβιλίστε τα CT (+) C, v20 και CT ( ) C, v20 για 5 δευτερόλεπτα στη μέγιστη ταχύτητα Αφαιρέστε προσεκτικά τα πώματα από τα σωληνάρια Φροντίστε να μη μολύνετε τα γάντια Σε περίπτωση μόλυνσης, αντικαταστήστε τα γάντια με ένα καθαρό ζεύγος πριν συνεχίσετε 3 Χρησιμοποιώντας μια συσκευή πιπέτας με νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων, προσθέστε 100 µl CT (+) C, v20 στο σωληνάριο με την ετικέτα «CT (+), v20 Working Control» Πωματίστε και πάλι το σωληνάριο CT (+) C, v20 και αποθηκεύστε το στους 2-8 C 4 Χρησιμοποιώντας μια συσκευή πιπέτας με νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων, προσθέστε 100 µl CT ( ) C, v20 στο σωληνάριο με την ετικέτα «CT ( ), v20 Working Control» Πωματίστε και πάλι το σωληνάριο CT ( ) C, v20 και αποθηκεύστε το στους 2-8 C 5 Πωματίστε και πάλι τα σωληνάρια του Ορού Ελέγχου Εργασίας και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας Αποθηκεύστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) και απορρίψτε στο τέλος της ημέρας εργασίας Δείγματα Ούρων: Προετοιμάστε τους ακόλουθους Επεξεργασμένους Ορούς Ελέγχου CT (+), v20 και CT ( ), v20 1 Χρησιμοποιώντας μια συσκευή πιπέτας με αποστειρωμένο ακροφύσιο, προσθέστε 250 µl CT/NG LYS σε κάθε ένα από τα δύο σωληνάρια πολυπροπυλενίου των 2 ml με βιδωτό πώμα Επικολλήστε στο ένα σωληνάριο ετικέτα «CT (+), v20 Processed Control» και στο άλλο ετικέτα «CT ( ), v20 Processed Control» 2 Χρησιμοποιώντας συσκευή πιπέτας με νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων, προσθέστε 250 µl του Ορού Ελέγχου Εργασίας CT (+), v20 στο σωληνάριο με την ετικέτα «CT (+), v20 Processed Control» 3 Χρησιμοποιώντας συσκευή πιπέτας με νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων, προσθέστε 250 µl του Ορού Ελέγχου Εργασίας CT ( ), v20 στο σωληνάριο με την ετικέτα «CT ( ), v20 Processed Control» 4 Πωματίστε και πάλι τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας Επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για 10 λεπτά Αποθηκεύστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) και απορρίψτε στο τέλος της ημέρας εργασίας Δείγματα από Στυλεό: Προετοιμάστε τους ακόλουθους Επεξεργασμένους Ορούς Ελέγχου CT (+), v20 και CT ( ), v20 1 Χρησιμοποιώντας μια συσκευή πιπέτας με αποστειρωμένο ακροφύσιο, προσθέστε 100 µl CT/NG LYS σε κάθε ένα από τα δύο σωληνάρια πολυπροπυλενίου των 2 ml με βιδωτό πώμα Επικολλήστε στο ένα σωληνάριο ετικέτα «CT (+), v20 Processed Control» και στο άλλο ετικέτα «CT ( ), v20 Processed Control» 2 Χρησιμοποιώντας μια συσκευή πιπέτας με αποστειρωμένο ακροφύσιο, προσθέστε 100 µl από τα Μέσα Συστήματος Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest σε κάθε ένα από τα σωληνάρια που περιέχουν CT/NG LYS 3 Πωματίστε και πάλι τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας 4 Χρησιμοποιώντας συσκευή πιπέτας με νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων, προσθέστε 200 µl του Ορού Ελέγχου Εργασίας CT (+), v20 στο σωληνάριο με την ετικέτα «CT (+), v20 Processed Control» 5 Χρησιμοποιώντας συσκευή πιπέτας με νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων, προσθέστε 200 µl του Ορού Ελέγχου Εργασίας CT ( ), v20 στο σωληνάριο με την ετικέτα «CT ( ), v20 Processed Control» 11

12 6 Πωματίστε και πάλι τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας Επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για 10 λεπτά Αποθηκεύστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) και απορρίψτε στο τέλος της ημέρας εργασίας Ενίσχυση και Ανίχνευση ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα K-carriers και ο συγκρατητής K-carrier πρέπει να καθαρίζονται με ένα πανί που δεν αφήνει χνούδι εμποτισμένο με διάλυμα ισοπροπανόλης 70% A Προετοιμασία Αντιδραστηρίου ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το COBAS TaqMan CT Κύριο Μίγμα Εργασίας, v20 (CT MMX, v20), «Κύριο Μίγμα Εργασίας» (Working MMX) και το Κύριο Μίγμα Εργασίας καθώς και τα επεξεργασμένα δείγματα και οι οροί ελέγχου είναι ευαίσθητα στο φως Προστατέψτε τα αντιδραστήρια αυτά από το φως ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το COBAS TaqMan CT Κύριο Μίγμα, v20 (CT MMX, v20), το COBAS TaqMan CT Διάλυμα Μαγγανίου (CT Mn 2+ ) και το COBAS TaqMan CT Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου (CT IC) πρέπει να παραμείνουν σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για τουλάχιστον 30 λεπτά πριν από την προετοιμασία του Κύριου Μίγματος Εργασίας ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Προετοιμάστε το Κύριο Μίγμα Εργασίας μετά την ολοκλήρωση της Προετοιμασίας Δειγμάτων και Ορών Ελέγχου ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το Κύριο Μίγμα Εργασίας πρέπει να χρησιμοποιηθεί εντός 2 ωρών από την προετοιμασία αν αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) ή εντός 16 ωρών αν αποθηκευτεί στους 2-8 C ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μόλις τα επεξεργασμένα δείγματα και οι οροί ελέγχου προστεθούν στο Κύριο Μίγμα Εργασίας, η ενίσχυση πρέπει να ξεκινήσει εντός 90 λεπτών 1 Αφήστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) ένα φιαλίδιο CT MMX, v20, ένα φιαλίδιο CT IC και ένα φιαλίδιο CT Mn 2+ για τουλάχιστον 30 λεπτά 2 Τοποθετήστε ένα Κ-carrier σε ένα συγκρατητή Κ-carrier Τοποθετήστε νέα K-tubes ή ένα νέο K-tray σε ένα K-carrier, χωρίς να αγγίξετε τα τοιχώματα των K-tubes ή των βυθισμάτων του K-tray ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Εάν πρόκειται να αναλυθούν λιγότερα από 24 σωληνάρια, οι θέσεις 1, 2, 5, 20, 23 και 24 πρέπει να χρησιμοποιηθούν για να ισορροπήσει το K-carrier στο Θερμοκυκλοποιητή 3 Αν είναι δυνατόν, αφαιρέστε τα πώματα από τα K-tubes χρησιμοποιώντας τον Πωματιστή K-tube Τοποθετήστε τα πώματα στο Συγκρατητή Θέσης Αναμονής K-tube 4 Προετοιμάστε το Κύριο Μίγμα Εργασίας ως εξής: Για 16 εξετάσεις, προσθέστε 150 µl CT Mn 2+ και 50 µl CT IC σε ένα φιαλίδιο CT MMX, v20 Πωματίστε τη φιάλη και αναμίξτε καλά αναστρέφοντας 10 φορές Μη στροβιλίζετε το Κύριο Μίγμα Εργασίας Προστατέψτε το Κύριο Μίγμα Εργασίας από το φως και χρησιμοποιήστε το εντός 2 ωρών αν έχει αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) ή εντός 16 ωρών αν έχει αποθηκευτεί στους 2-8 C 5 Διοχετεύστε με πιπέτα 50 µl Κύριο Μίγμα Εργασίας σε κάθε K-tube ή βύθισμα του K-tray ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Αν τα επεξεργασμένα δείγματα είχαν αποθηκευτεί σε κατάψυξη πριν από την ενίσχυση, αποψύξτε τα σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) και αναμίξτε καλά στροβιλίζοντας Φυγοκεντρίστε τα επεξεργασμένα δείγματα ούρων για 10 λεπτά στα x g ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Κατά τη διοχέτευση του Κύριου Μίγματος Εργασίας, μη φέρνετε σε επαφή το ακροφύσιο της πιπέτας με άλλη επιφάνεια εκτός του προβλεπόμενου K-tube ή βυθίσματος του K-tray Σε περίπτωση τυχόν επαφής με επιφάνειες του K-tray carrier, το ακροφύσιο θα πρέπει να απορριφθεί, ώστε να αποφευχθεί η εισαγωγή αναστολέων PCR 6 Προσθέστε 50 μl από κάθε επεξεργασμένο δείγμα και ορό ελέγχου στο κατάλληλο K-tube ή βύθισμα του K-tray που περιέχει Κύριο Μίγμα Εργασίας, χρησιμοποιώντας μια συσκευή μικροπιπέτας με ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης Αναμίξτε ελαφρά κάθε δείγμα ή ορό ελέγχου αναρροφώντας πάνω-κάτω τρεις φορές με τη συσκευή μικροπιπέτας χωρίς να δημιουργήσετε φυσαλίδες ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Κατά τη διοχέτευση των επεξεργασμένων δειγμάτων και ορών ελέγχου, μη φέρνετε σε επαφή το ακροφύσιο της πιπέτας με άλλη επιφάνεια εκτός του προβλεπόμενου K-tube ή βυθίσματος του K-tray Σε περίπτωση τυχόν επαφής με επιφάνειες του K-tray carrier, το ακροφύσιο θα πρέπει να απορριφθεί, ώστε να αποφευχθεί η εισαγωγή αναστολέων PCR 12

13 7 Επαναλάβετε το Βήμα 6 για κάθε επεξεργασμένο δείγμα και κάθε επεξεργασμένο ορό ελέγχου, μέχρι να μεταφερθούν όλα στα K-tubes ή τα K-trays Χρησιμοποιήστε ένα νέο ακροφύσιο για κάθε δείγμα και ορό ελέγχου Ελέγξτε οπτικά για την παρουσία φυσαλίδων και αφαιρέστε τις αν υπάρχουν Καλύψτε το K-tray ή πωματίστε τα K-tubes χρησιμοποιώντας τον πωματιστή K-tube Βεβαιωθείτε οπτικά ότι έχουν προστεθεί οι κατάλληλοι όγκοι 8 Η ενίσχυση πρέπει να ξεκινήσει εντός 90 λεπτών από το χρόνο προσθήκης των επεξεργασμένων δειγμάτων και ορών ελέγχου στα K-tubes ή στα βυθίσματα του K-tray που περιέχουν το Κύριο Μίγμα Εργασίας 9 Αποθηκεύστε το υπόλοιπο του κάθε επεξεργασμένου δείγματος στους 2-8 C σε περίπτωση που απαιτηθεί επανεξέταση Οποιαδήποτε επανεξέταση πρέπει να εκτελεστεί εντός 7 ημερών από την επεξεργασία δείγματος B Φόρτωση και Χειρισμός του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή 1 Ενεργοποιήστε τον υπολογιστή του σταθμού εργασίας και συνδεθείτε στο Λειτουργικό Σύστημα Microsoft Windows χρησιμοποιώντας την κατάλληλη Ταυτότητα Χρήστη και τον κωδικό πρόσβασης 2 Ενεργοποιήστε τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή Βεβαιωθείτε ότι το όργανο ενεργοποιείται και είναι έτοιμο για χρήση Αν σε κάποιον Θερμοκυκλοποιητή υπάρχουν ακόμη K-carriers από προηγούμενες αναλύσεις, αφαιρέστε τους χρησιμοποιώντας το μεταφορέα K-carrier 3 Ανοίξτε το AMPLILINK λογισμικό στον υπολογιστή Συνδεθείτε χρησιμοποιώντας την κατάλληλη Ταυτότητα Χρήση και τον κωδικό πρόσβασης 4 Για να δημιουργήσετε εντολές K-carrier για τα δείγματα που θα αναλυθούν, κάντε κλικ στο εικονίδιο Orders Επιλέξτε την καρτέλα Sample και στη συνέχεια κάντε κλικ στο κουμπί New και εισάγετε τον αριθμό εντολής για κάθε δείγμα χρησιμοποιώντας το πληκτρολόγιο ή το σαρωτή ανάγνωσης γραμμωτού κώδικα Επιλέξτε το αρχείο Ορισμού Εξέτασης για το COBAS TaqMan CT Test, v20 Επαναλάβετε για κάθε δείγμα Κάντε κλικ στο κουμπί Save ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Εάν πρόκειται να αναλυθούν λιγότερα από 24 σωληνάρια, οι θέσεις 1, 2, 5, 20, 23 και 24 πρέπει να χρησιμοποιηθούν για να ισορροπήσει το K-carrier στο Θερμοκυκλοποιητή 5 Εισαγάγετε πληροφορίες Ποιοτικού Ελέγχου επιλέγοντας την καρτέλα Quality Control στο παράθυρο Orders Κάντε κλικ στο κουμπί New και εισαγάγετε τις πληροφορίες για το COBAS TaqMan CT Test, v20 που παρέχεται με το κιτ, χρησιμοποιώντας το πληκτρολόγιο ή το σαρωτή ανάγνωσης γραμμωτού κώδικα Εισαγάγετε τον αριθμό παρτίδας και την ημερομηνία λήξης του COBAS TaqMan CT Test, v20 Κάντε κλικ στο «OK» 6 Αντιστοιχίστε έναν αριθμό K-carrier για την ανάλυση κάνοντας κλικ στην καρτέλα K-Carrier στο παράθυρο Orders Στο παράθυρο K-Carrier, κάντε κλικ στο New Στο πεδίο δεξιά από το «K-Carrier ID», εισάγετε τον αριθμό K-carrier από το γραμμωτό κώδικα στο K-carrier χρησιμοποιώντας το πληκτρολόγιο ή το σαρωτή ανάγνωσης γραμμωτού κώδικα Σημειώστε ότι τα αποτελέσματα από μια προηγούμενη ανάλυση με την ίδια ταυτότητα K-carrier πρέπει να γίνουν αποδεκτά Μετά τη χρήση του ίδιου αριθμού γραμμωτού κώδικα K-carrier δύο φορές σε έναν αναλυτή, τα αποτελέσματα από αυτές τις παρτίδες πρέπει να γίνουν αποδεκτά, να αρχειοθετηθούν και να καταστραφούν προκειμένου να ξαναχρησιμοποιηθεί ο ίδιος αριθμός γραμμωτού κώδικα Επιλέξτε τον Ορισμό Εξέτασης για το COBAS TaqMan CT Test, v20, από τον πίνακα εξετάσεων στο κάτω μέρος του παραθύρου Για τα ονόματα και τις εκδόσεις των Αρχείων Ορισμού Εξέτασης, ανατρέξτε στην Καρτέλα Στοιχείων Προϊόντος που παρέχεται μαζί με το κιτ 7 Στο Worklist, επιλέξτε την πρώτη σειρά της στήλης Type (T) Επισημάνετε αυτό το πεδίο για πρόσβαση στο πτυσσόμενο μενού και στη συνέχεια επιλέξτε τον απαιτούμενο τύπο ορού ελέγχου Στη συνέχεια, κάντε διπλό κλικ στο πεδίο sample ID για την ίδια σειρά Θα εμφανιστεί το παράθυρο LookUp Control με όλους τους διαθέσιμους ορούς ελέγχου Μόλις επιλέξετε έναν ορό ελέγχου, θα εμφανιστούν ο αντίστοιχος αριθμός παρτίδας και η αντίστοιχη ημερομηνία λήξης στον πίνακα πληροφοριών κάτω δεξιά Επαναλάβετε αυτή τη διαδικασία για όλους τους απαιτούμενους ορούς ελέγχου 8 Για να εισάγετε δείγματα στη Λίστα Εργασιών (Worklist), κάντε διπλό κλικ στην πρώτη θέση (σειρά) για καταχώρηση δείγματος Θα εμφανιστεί το παράθυρο Lookup Sample με τις αντιστοιχισμένες εντολές δείγματος Χρησιμοποιήστε τα πλήκτρα Shift + Arrow για να επισημάνετε περισσότερους από έναν αριθμούς εντολής Βεβαιωθείτε ότι έχει αντιστοιχιστεί σε όλες τις εντολές ο Ορισμός Εξέτασης για το COBAS TaqMan CT Test, v20 9 Κάντε κλικ στο Save για να αποθηκεύσετε την αντιστοίχιση της εντολής K-carrier 13

14 Γ Ενίσχυση και Ανίχνευση 1 Επιλέξτε το εικονίδιο Systems στην καρτέλα System και κάντε κλικ στο Open για να ανοίξετε το Θερμοκυκλοποιητή Μόλις το Κάλυμμα του Θερμοκυκλοποιητή ανοίξει τελείως και εμφανιστεί το μήνυμα «Ready to Load» στο παράθυρο Systems, σηκώστε και κρατήστε ανοιχτό το καπάκι του Θερμοκυκλοποιητή Χρησιμοποιώντας το Μεταφορέα K-carrier, μεταφέρετε το φορτωμένο K-carrier που περιέχει τα κλειστά K-tubes ή το K-tray με το Κύριο Μίγμα Εργασίας και τα δείγματα και τους ορούς ελέγχου στο Θερμοκυκλοποιητή Κλείστε το καπάκι του Θερμοκυκλοποιητή 2 Κάντε κλικ στο Start στο παράθυρο Systems κάτω από το εικονίδιο TC για να κλείσετε το Κάλυμμα του Θερμοκυκλοποιητή και να ξεκινήσετε την ανάλυση 3 Η ενίσχυση και η ανίχνευση εκτελούνται αυτόματα από τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΜΕ AMPLILINK, Έκδοση Σειράς 33 και 34 Υπολογισμός Αποτελεσμάτων Ο COBAS TaqMan 48 Αναλυτής προσδιορίζει αυτόματα αν πραγματοποιείται ανίχνευση του CT DNA για το δείγμα ή για τον ορό ελέγχου Ο COBAS TaqMan 48 Αναλυτής: Καθορίζει την τιμή Κατωφλίου του Κύκλου (Ct) για το CT DNA και το DNΑ του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Καθορίζει αν το CT DNA ανιχνεύεται με βάση τις τιμές Ct για το CT DNA και το DNA του CT Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Επαλήθευση Ανάλυσης για το Λογισμικό AMPLILINK Έκδοση Σειράς 33 και 34 Ελέγξτε το παράθυρο αποτελεσμάτων του AMPLILINK λογισμικού, έκδοση σειράς 33 και 34 ή την εκτύπωση για ενδείξεις και σχόλια για να βεβαιωθείτε ότι η ανάλυση είναι έγκυρη Η ανάλυση είναι έγκυρη αν δεν εμφανίζονται ενδείξεις για τους COBAS TaqMan CT Test Ορούς Ελέγχου, v20 Για μια έγκυρη ανάλυση, λαμβάνονται τα ακόλουθα αποτελέσματα: Ορός Ελέγχου Αποτέλεσμα Ερμηνεία Αρνητικός Ορός Ελέγχου NC Negative Ορός Ελέγχου εντός Εύρους Θετικός Ορός Ελέγχου PC Positive Ορός Ελέγχου εντός Εύρους Η ανάλυση δεν είναι έγκυρη εάν εμφανίζονται ορισμένες από τις παρακάτω ενδείξεις για τους COBAS TaqMan CT Test, v20 Ορούς Ελέγχου: CT Αρνητικός Ορός Ελέγχου, v20: Ένδειξη Αποτέλεσμα Ερμηνεία NC_INVALID Invalid Ορός ελέγχου θετικός, απουσία σήματος IC ή σήμα IC εκτός εύρους CT Θετικός Ορός Ελέγχου, v20: Ένδειξη Αποτέλεσμα Ερμηνεία PC_INVALID Invalid Ορός ελέγχου αρνητικός ή εκτός εύρους, απουσία σήματος IC ή σήμα IC εκτός εύρους Εάν η ανάλυση δεν είναι έγκυρη, επαναλάβετε ολόκληρη την ανάλυση συμπεριλαμβανομένης της προετοιμασίας δείγματος και ορού ελέγχου, της ενίσχυσης και της ανίχνευσης Ερμηνεία Αποτελεσμάτων: Για μια έγκυρη ανάλυση, ελέγξτε κάθε μεμονωμένο δείγμα για ενδείξεις ή σχόλια στην εκτύπωση αποτελεσμάτων Ερμηνεύστε τα αποτελέσματα ως εξής: ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μια έγκυρη ανάλυση μπορεί να περιλαμβάνει τόσο έγκυρα όσο και άκυρα αποτελέσματα δείγματος ανάλογα με τις ενδείξεις και/ή τα σχόλια που λαμβάνονται για τα μεμονωμένα δείγματα 14