H&R Legionella One Step Legionella pneumophila Antigen Test Device Ανδριάνα Μοννά ΑΜ: 10031 Πρακτική Άσκηση : Υγείας Μέλαθρον Προβλεπόμενη χρήση To Η&R Legionella One Step Legionella pneumophila Antigen Test Device αποτελεί μια in vitro ταχεία ανοσοχρωματογραφική μέθοδο για τον ποιοτικό προσδιορισμό της Legionella pneumophilla ορότυπου 1 σε δείγματα ούρων ασθενών με συμπτώματα πνευμονίας. Στόχος της είναι να συμβάλει στην διάγνωση της μόλυνσης από Legionella pneumophila ορότυπο 1 σε συνδυασμό με την καλλιέργεια και άλλες μεθόδους. Σύνθεση Η νόσος των Λεγεωνάριων, όπως ονομάζεται, αποτελεί μια σοβαρή μορφή πνευμονίας με ποσοστό θνησιμότητας που προσεγγίζει το 10-15% σε κατά τα άλλα υγιή άτομα. Τα συμπτώματα περιλαμβάνουν συμπτώματα παρόμοια με αυτά της γρίπης, που ακολουθούνται από ένα ξερό βήχα και συχνά οδηγούν σε πνευμονία. Περίπου το 30% των μολυσμένων ατόμων μπορεί να παρουσιάσει συμπτώματα διάρροιας και εμέτου και περίπου το 50% μπορεί να παρουσιάσει διανοητική σύγχυση. Η περίοδος επώασης συνήθως κυμαίνεται από 2-10 μέρες. Η νόσος των Λεγεωνάριων μπορεί να παρουσιαστεί ως ξέσπασμα δύο ή περισσότερων περιστατικών εξαιτίας μιας περιορισμένης χρονικά έκθεσης σε μια πηγή μόλυνσης, ως μια σειρά ανεξάρτητων περιστατικών σε μια περιοχή η οποία είναι υψηλά ενδημική ή ως σποραδικά περιστατικά χωρίς καμιά προφανή χρονική ή γεωγραφική ομαδοποίηση. Έξαρση περιστατικών έχει επισυμβεί επανειλημμένως σε κτήρια όπως ξενοδοχεία και νοσοκομεία. Το H&R Legionella επιτρέπει την άμεση διάγνωση της μόλυνσης από Legionella pneumophila ορότυπου 1 μέσω της ανίχνευσης ενός συγκεκριμένου διαλυτού αντιγόνου ευρισκόμενο στα ούρα ασθενών με την νόσο των Λεγεωνάριων. Το αντιγόνο της είναι
δυνατό να ανιχνευθεί στα ούρα των ασθενών τρεις μέρες μετά την έναρξη των συμπτωμάτων. Η δοκιμασία είναι γρήγορη, δίνοντας αποτέλεσμα σε 15 λεπτά, χρησιμοποιεί δείγμα ούρων, το οποίο είναι εύκολο προς συλλογή και μεταφορά, και ανιχνεύει τα πρώιμα, καθώς και τα μετέπειτα, στάδια της ασθένειας. Αρχή μεθόδου Η H&R Legionella αποτελεί μια ανοσοχρωματογραφική μέθοδο για την ανίχνευση της Legionella pneumophila ορότυπου 1 σε ανθρώπινα ούρα. Τα αντισώματα έναντι της Legionella pneumophila ορότυπου 1, τα οποία βρίσκονται στην ζώνη τεστ, απορροφώνται σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Τα αντισώματα της ζώνης ελέγχου απορροφώνται στην ίδια μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Τα αντισώματα έναντι της Legionella pneumophila ορότυπου 1 έχουν συζευχθεί με σωματίδια ικανά να οπτικοποιήσουν την αντίδραση, τα οποία έχουν απορροφηθεί σε μια αδρανή βοηθητική μεμβράνη στην θέση strip test. Κατά την διάρκεια της δοκιμασίας επιτρέπεται στο δείγμα να αντιδράσει με το σύζευγμα το οποίο βρίσκεται στην θέση strip test. Το μίγμα στην συνέχει μετακινείται ανοδικά πάνω στην μεμβράνη μέσω της τριχοειδικής δράσης. Καθώς το δείγμα τρέχει πάνω στην μεμβράνη του τεστ, τα έγχρωμα σωματίδια μεταναστεύουν. Το αντιγόνο της Legionella pneumophila ορότυπου 1 στα ούρα αιχμαλωτίζεται από το ακινητοποιημένο αντίσωμα έναντι της Legionella pneumophila ορότυπου 1 αντιδρά και δεσμεύει το συζευγμένο αντίσωμα. Τα υπόλοιπα ακινητοποιημένα αντισώματα επίσης δεσμεύουν το σύζευγμα, σχηματίζοντας την ζώνη ελέγχου. Το θετικό αποτέλεσμα της δοκιμασίας διαβάζεται οπτικά σε 10-15 λεπτά ή λιγότερο ανάλογα με την συγκέντρωση του αντιγόνου στο δείγμα των ούρων. Το αρνητικό αποτέλεσμα της μεθόδου διαβάζεται σε 10-15 λεπτά και υποδεικνύει ότι το αντιγόνο της Legionella pneumophila ορότυπου 1 δεν ανιχνεύθηκε στο δείγμα των ούρων. Η δοκιμασία ερμηνεύεται από την παρουσία ή απουσία οπτικά ανιχνεύσιμων ζωνών χρώματος κόκκινου. Το θετικό αποτέλεσμα θα περιλαμβάνει την ανίχνευση της ζώνης ελέγχου αλλά και της ζώνης τεστ, ενώ ένα αρνητικό αποτέλεσμα θα έχει μόνο την ζώνη ελέγχου. Απουσία της ζώνης ελέγχου, ανεξάρτητα εάν εμφανίζεται η ζώνη τεστ, υποδεικνύει άκυρη εξέταση. Προφυλάξεις Για επαγγελματική in vitro διαγνωστική χρήση μόνο Να μην χρησιμοποιηθεί μετά την ημερομηνία λήξης Η συσκευή του test πρέπει να παραμένει στην σφραγισμένη συσκευασία μέχρι την χρήση Να μην χρησιμοποιηθεί η συσκευή του test εάν η συσκευασμένη είναι κατεστραμμένη ή αλλοιωμένη Να φοράτε προστατευτικά ενδύματα και γάντια μιας χρήσης. Μην τρώτε, πίνετε ή καπνίζετε στον χώρο Όλα τα δείγματα θα πρέπει να θεωρούνται δυνητικά μολυσματικά και να χειρίζονται με τον ίδιο τρόπο όπως ένα μολυσματικό δείγμα
Η συσκευή του test θα πρέπει να απορρίπτεται στο κατάλληλο δοχείο μετά την χρήση Η συσκευή του test θα πρέπει να χρησιμοποιείται μέσα σε δυο ώρες από την στιγμή που ανοίγεται η συσκευασία Μην χρησιμοποιείτε υλικά από διαφορετικές παρτίδες kit Αποθήκευση και Σταθερότητα Αποθήκευση είτε στο ψυγείο είτε σε θερμοκρασία δωματίου (2-30 ο C/36-86 o F). Η συσκευή του test και τα αντιδραστήρια παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην συσκευασία και στο εξωτερικό του kit. Μην χρησιμοποιείτε το kit μετά από την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Υλικά που περιλαμβάνονται στο kit Συσκευές test και πλαστικές πιπέτες Οδηγίες χρήσης Αντιδραστήριο Α Θετικό Control Αρνητικό Control Δοκιμαστικοί σωλήνες
Υλικά που δεν περιλαμβάνονται στο kit Δοχείο για την συλλογή δείγματος Χρονόμετρο Γάντια μιας χρήσης Συλλογή και Προετοιμασία δείγματος
Τα δείγματα ούρων θα πρέπει να συλλέγονται σε ειδικά αποστειρωμένα δοχεία. Τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 ο C/ 59-86 o F) εφόσον χρησιμοποιηθούν μέσα σε 24 ώρες από την συλλογή. Εναλλακτικά, τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν στου 2-8 ο C μέχρι 14 ημέρες ή στους -10 ο C με -20 o C για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα. Διαδικασία Διαδικασία για δείγματα ασθενών Μην απομακρύνετε την συσκευή του test από την συσκευασία μέχρι το δείγμα των ούρων να έχει θερμοκρασία περιβάλλοντος. Χρησιμοποιείστε διαφορετικό δοκιμαστικό σωλήνα για κάθε δείγμα. Προσθέστε 3 σταγόνες από το δείγμα των ούρων στον δοκιμαστικό σωλήνα. Προσθέστε 2 σταγόνες από το αντιδραστήριο Α στον δοκιμαστικό σωλήνα και αναδεύστε. Αφαιρέστε την συσκευή του test H&R Legionella από την συσκευασία πριν την χρήση και τοποθετήστε την σε επίπεδη επιφάνεια. Χρησιμοποιείστε διαφορετική συσκευή τεστ για κάθε δείγμα.
Τοποθετείστε 5 σταγόνες του μίγματος στο πηγαδάκι δείγματος. Αρχίστε την χρονομέτρηση. Διαβάστε το αποτέλεσμα στα επόμενα 15 λεπτά. Διαδικασία για τα θετικά και αρνητικά control Κρατείστε το αντιδραστήριο Control (-) κάθετα και τοποθετείστε αργά 12 σταγόνες στον δοκιμαστικό σωλήνα.
Προσθέστε 2 σταγόνες αντιδραστηρίου Α. Τοποθετείστε 5 σταγόνες του μίγματος στο πηγαδάκι δείγματος. Αρχίστε την χρονομέτρηση. Διαβάστε το αποτέλεσμα στα επόμενα 15 λεπτά. Επαναλάβετε την διαδικασία για το θετικό Control.
Ερμηνεία Αποτελεσμάτων Ένα θετικό δείγμα ή θετικό control θα δώσει δύο ζώνες κόκκινου χρώματος στο κεντρικό τμήμα της συσκευής του test, στην ζώνη του τεστ ( σημειώνεται με το γράμμα Τα) και στην ζώνη ελέγχου (σημειώνεται με το γράμμα C). Αυτό σημαίνει ότι το αντιγόνο ανιχνεύθηκε. Ένα αρνητικό δείγμα ή αρνητικό control θα δώσει μόνο μια ζώνη κόκκινου χρώματος στο κεντρικό τμήμα της συσκευής του test, στην ζώνη ελέγχου (σημειώνεται με το γράμμα C). Η ζώνη του ελέγχου σημαίνει ότι η διαδικασία ανίχνευσης πραγματοποιήθηκε επιτυχώς, αλλά δεν ανιχνεύθηκε το αντιγόνο στο δείγμα ή αρνητικό control. Άκυρη εξέταση: Αν δεν εμφανιστούν καθόλου ζώνες, ή εμφανιστεί μόνο η ζώνη του test, η εξέταση θεωρείται άκυρη. Οι άκυρες εξετάσεις θα πρέπει να επαναλαμβάνονται. Εάν το πρόβλημα παραμένει, σταματήστε την χρήση του kit και επικοινωνήστε με τον προμηθευτή σας.