TBG. For use on IMMULITE 2000 systems

TBG For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 TBG English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of thyroxine-binding globulin (TBG) in serum, as an aid in the diagnosis and treatment of thyroid diseases. Catalog Number: L2KTB2 (200 tests) Test Code: TBG Color: Dark Blue Summary and Explanation Thyroxine-binding globulin (TBG) is an acidic glycoprotein consisting of a single polypeptide chain with a molecular mass of 54,000 daltons. 10,11,12 It is one of three principal carrier proteins for both thyroxine (T4) and 3,5,3-triiodothyronine (T3); the other thyroid hormone carrier proteins are thyroxine-binding prealbumin (TBPA) and albumin. TBG, though present in significantly lesser amounts than TBPA and albumin, has a higher affinity for the thyroid hormones and is therefore the chief carrier protein. 1,2 In healthy subjects, under 0.05 percent of total circulating T4 is present as unbound (free) hormone. The bound fraction is distributed among the carrier proteins as follows: TBG, 70 75%; TBPA, 15 20%; and albumin, 5 10%. 2 Both bound and unbound T4 are present in an equilibrium that tends to reassert itself in the face of altered levels of the carrier proteins by inducing a corresponding alteration in the total level of T4 in circulation, while leaving the free T4 level relatively unchanged. 2 Hence the free T4 concentration may be expected to correlate more closely than the total T4 concentration with clinical thyroid status, 3 for an abnormal total T4 result may signify either an abnormality in thyroid function or simply a variation (physiological or pathological) in the carrier proteins. 1 Thus, for example, the TBG elevations typical of pregnancy, 4 oral contraceptives and estrogen therapy will cause the total T4 level to increase, often beyond the limits of normal, without inducing a corresponding elevation in the free T4 level. 5,6 Again, alterations in the TBG level sometimes mask the effects of abnormal thyroid function by elevating the total T4 level of a hypothyroid patient or lowering that of a hyperthyroid patient 4 into the euthyroid reference range. Here, too, the free T4 concentration will typically reflect the patient's actual thyroid status more reliably than the total T4 concentration. Historically, estimation of free T4, often via the free thyroxine index (FT4I), has been the most frequently used test for thyroid dysfunction. 7 Calculation of the FT4I typically involves multiplying a total T4 result by a T3-uptake (or T4-uptake) result. The T3 uptake test yields a relative measure of the unsaturated binding sites on TBG, rather than a direct, quantitative estimate of the concentration of this carrier protein. The TBG saturation index (TBG- SI) has been used, under various names, e.g. thyroid hormone binding ratio (THBR), as a substitute for the FT4I. 13 The TBG-SI is essentially just the ratio of total T4 to TBG, multiplied by some factor (depending on the units) so as to achieve a standard reporting scale. When total T4 and TBG are both expressed in molar units as nmol/l and the factor is taken as 100, the TBG-SI represents the fractional occupation of TBG binding sites by T4, expressed as a percent. 13 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 TBG is a solid-phase, competitive chemiluminescent enzyme immunoassay. Incubation Cycles: 1 30 minutes. Time to first result: 35 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has 2 IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07)

taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 TBG has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 20 µl serum. Storage: 2 days at 2 8 C, or 1 month at 20 C. 8 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. TBG Bead Pack (L2TB12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-tbg. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KTB2: 1 pack. TBG Reagent Wedge (L2TBA2) With barcode. 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to human TBG in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KTB2: 1 wedge. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. TBG Adjustors (LTBL, LTBH) Two vials (Low and High), 4 ml each, of human TBG in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KTB2: 1 set. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately TBG Sample Diluent (L2TBZ) For the on-board dilution of high samples. 25 ml of concentrated (ready-to-use) TBG-free buffer. Storage: 30 days (after opening) at 2 8 C or 6 months (aliquotted) at 20 C. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2TBZ: 3 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LTBCM: TBG Contol Module (bi-level control containing human TBG) Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07) 3

Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 1 week. Quality Control Samples: Use controls or serum pools with at least two levels (low and high) of TBG. Calculation of TBG Saturation Index The TBG Saturation Index (TBG-SI) represents the fractional occupation of TBG binding sites by T4, expressed as a percent. 13 This is a natural measure since TBG has a single binding site for thyroid hormones, with a higher affinity for T4 than for T3; and T4 circulates at a much higher concentration than T3. The TBG-SI is defined as 100 times the molar ratio of total T4 to TBG: TBG-SI = Total T4 (nmol/l) TBG (nmol/l) 100 The definition makes the TBG SI independent of the units used to report total T4 and TBG results, since it requires putting both results into the same concentration units (e.g. nmol/l) before computing their ratio. For example, given total T4 and TBG concentrations expressed in mass units of µg/dl and µg/ml, respectively, multiply the T4 result by 12.87 to convert from µg/dl to nmol/l, multiply the TBG result by 18.5 to convert µg/ml to nmol/l, then multiply by 100 as in the formula above. Alternatively, multiply the T4/TBG ratio in the mass units indicated by (12.87 / 18.5) x 100 = 69.5: TBG-SI = Total T4 (µg/dl) TBG (µg/ml) 69.5 Expected Values Based on its relationship to IMMULITE TBG (see Method Comparison), the assay can be expected to have essentially the same reference ranges. A reference range study was performed with the IMMULITE TBG kit on 75 serum samples. These were obtained from adult men and nonpregnant women in good health; all samples had normal total T4 and free T4 index (FT4I) levels. The TBG results showed an absolute range of 13 to 39 µg/ml, a central 95% range of 14 to 31 µg/ml, and a median of 19 µg/ml. This is in good agreement with the literature, which indicates a reference range of 15 to 34 µg/ml for TBG as determined by RIA. 8 TBG Saturation Index (TBG SI) values were calculated for these 75 samples, using results obtained with the IMMULITE TBG and IMMULITE Total T4 kits. The TBG SI values ranged from 17 to 39% (central 95%), with a median of 27%. This is likewise in agreement with the literature, which indicates a reference range of 2 to 5 for the T4/TBG ratio calculated as T4 (in µg/dl) times 10 divided by TBG (in µg/ml); 8 this corresponds to a range of 14 to 35% for the TBG SI. Twenty-four samples obtained from women in various stages of pregnancy, when assayed by the IMMULITE TBG kit, yielded TBG levels ranging from 27 to 66 µg/ml, with a median of 43 µg/ml). The literature suggests 47 to 59 µg/ml as the range of TBG values expected for pregnant women in the third trimester. 8 Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations Many physiological, pharmacological, pathological, and genetic factors affect the interpretation of TBG results. (Refer to the Summary and Explanation of the Test section.) Increased TBG levels may occur with estrogen therapy (including oral contraceptives), pregnancy, some cases of hepatitis, and as an inherited condition. Decreased TBG levels may be due to the presence of androgens or anabolic steroids; nephrotic syndrome; severe liver disease; increased protein catabolism with fever, wasting diseases, surgery, stress, and as an inherited condition. 9,10 4 IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07)

The TBG saturation index (TBG-SI), like other total T4/TBG ratios, does not necessarily convey the same information as a free thyroxine index (FT4I). 14 This assay has not been validated for use with neonates and children. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in µg/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: µg/ml 18.5 nmol/l Reportable Range: 3.5 to 80 µg/ml (65 to 1,480 nmol/l). Standardized in terms of WHO 1st IS 88/638. Analytical Sensitivity: 1.6 µg/ml (29.6 nmol/l). Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three TBG solutions (142, 285 and 503 µg/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for TBG. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 384 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 15 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of TBG, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 TBG procedure. (Heparin) = 0.97 (Serum) 0.18 µg/ml r = 0.994 (EDTA) = 1.00 (Serum) 0.79 µg/ml r = 0.994 (SST) = 0.998 (Plain Tubes) 1.0 µg/ml r = 0.997 Means: 26.8 µg/ml (Serum) 25.9 µg/ml (Heparin) 26.1 µg/ml (EDTA) 25.8 µg/ml (SST) Method Comparison: The assay was compared to IMMULITE TBG on 99 samples. (Concentration range: approximately 3 to 55 µg/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.03 (IML) + 0.29 µg/ml r = 0.981 Means: 26.7 µg/ml (IMMULITE 2000) 25.6 µg/ml (IMMULITE) References 1) Gershengorn MC, Glinoer D, Robbins J. Transport and metabolism of thyroid hormones. In: De Visscher M, editor. The thyroid gland. New York: Raven Press, 1980: 81-121. 2) Refetoff S. Thyroid hormone transport. In: DeGroot LJ, et al., editors. Endocrinology, vol. 1. San Francisco: Grune & Stratton, 1979: 347-56. 3) Carayon P, Castanas E, Guibout M, Codaccioni J-L. Assessment and clinical significance of free thyroid hormone radioimmunoassays. In: Ekins R, et al., editors. IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07) 5

Free Thyroid Hormones Proceedings of the International Symposium held in Venice, Dec 1978. Princeton: Excerpta Medica, 1979: 181-93. 4) Caplan RH, Pagliara AS, Wickus G. Laboratory diagnosis of hyperthyroidism: a reappraisal. Postgraduate Medicine 1979;66:75-90. 5) Wenzel, KW. Pharmacological interference with in vitro tests of thyroid function. Metabolism 1981;717-32. 6) Robbins J, Rall JE. The iodine-containing hormones. In: Gray CH, James VHT, editors. Hormones in blood, 3rd edition. San Francisco: Academic Press, 1979: 576-688. 7) Witherspoon LR, El Shami AS, Shuler SE, Neely H, Sonnemaker R, Gilbert SS, Alyea K. Chemically blocked analog assays for free thyronines. I. The effect of chemical blockers on T4 analog and T4 binding by albumin and by thyroxine-binding globulin. Clin Chem 1988;34:9-23. 8) Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 2nd ed. Philadelphia: Saunders, 1994: 2208. 9) Davidsohn I, Henry JB, editors. Todd Sanford clinical diagnosis by laboratory methods. 14th ed. Philadelphia: Saunders, 1969: 632. 10) Bartalena L. Studies on thyroxine-binding globulin. J Endocrinol Invest 1993;16:353-71. 11) Bristow AF, Gaines-Das RE, et al. The international standard for thyroxine binding globulin. Clin Endocrinol 1993;38:361-6. 12) Gershengorn MC, et al. Characterization of human thyroxine-binding globulin; evidence for a single polypeptide chain. J Biol Chem 1977;252:8713-8. 13) Glinoer D, et al. Regulation of maternal thyroid during pregnancy. J Clin Endocrinol Metab 1990;71:276-87. 14) Wilke TJ. Free thyroid hormone index, thyroid hormone / thyroxinbinding globulin ratio, triiodothyronine uptake, and thyroxin-binding globulin compared for diagnostic value regarding thyroid function. Clin Chem 1983;29:74-79. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (µg/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 3.72 0.603 16.2% 0.79 21.2% 2 6.98 0.820 11.7% 1.01 14.5% 3 7.70 0.678 8.8% 0.91 11.8% 4 15.7 1.66 10.6% 1.75 11.1% 5 27.1 2.42 8.9% 2.74 10.1% 6 34.3 2.17 6.3% 2.57 7.5% 7 71.9 4.39 6.1% 7.71 10.7% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Specificity Compound 1 Amount Added 2 % Cross reactivity 3 Thyroglobulin 300 ng/ml ND Transferrin 4 mg/ml ND SHBG 80 nmol/l ND AFP 58 μg/ml ND HSA 5 mg/dl ND ND: Not detectable. 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % Διασταυρ.Αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 % reaktywności Krzyżowej, 4 ND: Nieoznaczlne. Method Comparison (IML 2000) = 1.03 (IML) + 0.29 µg/ml r = 0.981 6 IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07)

English. TBG Česky. TBG. Ελληνικά. TBG. Polski. TBG. Linearity (µg/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 8 in 8 5 26.8 4 in 8 12.3 13.4 92% 2 in 8 5.8 6.7 87% 1 in 8 3.6 3.4 106% 2 8 in 8 33.5 4 in 8 17.1 16.8 102% 2 in 8 8.5 8.4 101% 1 in 8 4.2 4.2 100% 3 8 in 8 38.0 4 in 8 17.5 19 92% 2 in 8 9.1 9.5 96% 1 in 8 4.7 4.8 98% 4 8 in 8 44.7 4 in 8 21.1 22.4 94% 2 in 8 9.8 11.2 88% 1 in 8 4.7 5.6 84% 5 8 in 8 48.3 4 in 8 25.2 24.2 104% 2 in 8 12.6 12.1 104% 1 in 8 6.4 6.0 107% 6 8 in 8 54.5 4 in 8 25.9 27.3 95% 2 in 8 12.9 13.6 95% 1 in 8 6.5 6.8 96% Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Recovery (µg/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 13 A 18 20 90% B 25 27 93% C 38 38 100% 2 15 A 21 21 100% B 26 29 90% C 39 39 100% 3 26 A 33 32 103% B 36 39 92% C 48 50 96% 4 33 A 34 39 87% B 42 46 91% C 56 57 98% 5 36 A 42 41 102% B 49 49 100% C 59 59 100% 6 37 A 44 42 105% B 52 49 106% C 65 60 108% Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Česky IMMULITE 2000 TBG Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace globulinu vázajícího tyroxin (TBG) v séru, jakožto pomůcky při diagnostice a léčbě onemocnění štítné žlázy. Katalogové číslo: L2KTB2 (200 stanovení) Kód metody: TBG Barva: Tmavě modrá IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07) 7

Shrnutí a vysvětlení Globulin vázající tyroxin (TBG) je kyselý glykoprotein o jednom polypeptidickém řetězci s molekulovou hmotností 54 000 daltonů. 10,11,12 Je jedním ze tří základních vazebných proteinů pro tyroxin (T4) a 3,5,3-trijodtyronin (T3). Další vazebné proteiny jsou prealbumin vázající tyroxin (TBPA) a albumin. TBG, i když se vyskytuje v daleko menších množstvích než TBPA a albumin, má vyšší afinitu k tyroidním hormonům a proto je hlavním vazebným proteinem. 1,2 U zdravých jedinců se méně než 0,05% celkového cirkulujícího T4 vyskytuje jako nevázaný (volný) hormon. Vázaný T4 je mezi jednotlivými vazebnými proteiny rozdělen následovně: TBG: 70 75%, TBPA: 15-20% a albumin: 5 10%. 2 Navázaný i nenavázaný T4 se nachází v rovnováze, která má sklon se sama udržovat navzdory měnící se hladině vazebných proteinů a to tak, že dojde k vyvolání odpovídající změny celkového množství T4 v cirkulaci, zatímco množství volného T4 zůstane v podstatě nezměněno. 2 Proto se dá předpokládat, že koncentrace volného T4 bude klinickému stavu štítné žlázy odpovídat víc, než koncentrace celkového T4, 3 protože abnormální množství celkového T4 může značit buď abnormální funkci štítné žlázy nebo prostě odchylku (fyziologickou nebo patologickou) ve vazebných proteinech. 1 Proto například zvýšení TBG typické pro těhotenství, 4 orální antikoncepci a léčbu estragonem způsobí nárůst celkového T4, často až za hranice normálu, bez toho, aby došlo ke zvýšení množství volného T4. 5,6 Opět, změny hladiny TBG někdy překrývají účinek abnormální funkce štítné žlázy buď zvýšením množství celkového T4 u hypotyroidního pacienta nebo snížením množství celkového T4 u hypertyroidního pacienta 4 do eutyroidního referenčního rozmezí. Rovněž v tomto případě koncentrace volného T4 typicky odráží aktuální stav štítné žlázy pacienta spolehlivěji, než koncentrace celkového T4. Stanovení volného T4, často prostřednictvím indexu volného tyroxinu (FT4I), je už tradičně nejvíce používaným testem k určení dysfunkce štítné žlázy. 7 Výpočet FT4I obsahuje násobení hodnoty pro celkový T4 hodnotou T3-uptake (nebo T4-uptake). Test vazebné kapacity T3 uptake poskytuje relativní míru nenasycených vazebných míst na TBG spíše než přímý kvantitativní údaj o koncentraci tohoto vazebního proteinu. Index nasycení TBG (TBG-SI) se pod různými názvy (např. vazebný poměr tyroidního hormonu THBR) používal jako náhrada za index FT4I. 13 Index TBG-SI je v podstatě jenom poměrem celkového T4 a TBG, vynásobeným určitým násobitelem (v závislosti na použitých jednotkách) tak, aby výsledkem byla standardní škála výstupů. Když se celkové T4 i TBG udávají v molárních jednotkách jako nmol/l a násobitelem je 100, index TBGpředstavuje zlomkem vyjádřené obsazení vazebných míst TBG hormonem T4, udávaný v procentech. 13 Princip stanoveni Stanovení TBG na analyzátorech IMMULITE 2000 je konkurenční chemiluminiscenční enzymová imunochemická reakce v pevné fázi. Inkubační cykly: 1 30 minut. Čas do prvního výsledku: 35 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení TBG na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o 8 IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07)

testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 20 µl séra. Skladování: 2 dny při teplotě 2 8 C nebo 1 měsíc při 20 C. 8 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. TBG zásobník s kuličkami (L2TB12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti TBG. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KTB2: 1 balení. TBG reagencie (L2TBA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s lidským TBG v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KTB2: 1 nádobka. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. TBG kalibrátory (LTBL, LTBH) Dvě ampulky po 4,0 ml s vysokou a nízkou koncentrací lidského TBG v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KTB2: 1 sada. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť TBG diluent vzorků (L2TBZ) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků analyzátorem. 25 ml koncentrovaného (připraveného k použití) pufru bez TBG. Skladování: 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při teplotě 20 C. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2TBZ: 3 štítky L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků (16 100 mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků LTBCM: TBG kontrolní modul (Dvojúrovňový kontrolní modul s obsahem lidského TBG) Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07) 9

stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 1 týden. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) TBG. Výpočet indexu nasycení TBG Index nasycení TBG (TBG Saturation Index TBG-SI) je zlomkem vyjádřené obsazení vazebných míst TBG hormonem T4, udává se v procentech. 13 Toto měřítko je přirozené, protože TBG má samostatné vazebné místo pro tyroidní hormony s vyšší afinitou k T4 než T3 a T4 cirkuluje v daleko vyšších koncentracích než T3. Index TBG-SI je definován jako 100- násobek molárního poměru celkového T4 a TBG: TBG-SI = Celkový T4 (nmol/l) TBG (nmol/l) 100 Tento způsob definice TBG SI je nezávislý na jednotkách použitých při udávání množství celkového T4 a TBG, protože oba výsledky je před výpočtem třeba převést na stejné jednotky koncentrace. (např. nmol/l). Když například máme koncentrace celkového T4 a TBG vyjádřené v hmotnostních jednotkách µg/dl a µg/ml v uvedeném pořadí, výsledek pro T4 vynásobíme 12,87 a převedeme ho tak z µg/dl na nmol/l. Při výsledku TBG v µg/ml ho vynásobíme 18,5 a tím převedeme µg/ml na nmol/l, pak vynásobíme 100 jako ve výše uvedeném vzorci. Případně můžeme poměr T4/TBG v hmotnostních jednotkách z našeho příkladu vynásobit (12,87 / 18,5) x 100 = 69,5: TBG-SI = Celkový T4 (µg/dl) TBG (µg/ml) 69,5 Očekávané hodnoty Na základě příbuznosti s testem TBG na analyzátoru IMMULITE (viz Srovnání metody) se dají u tohoto stanovení očekávat prakticky stejná referenční rozmezí. Testem TBG na analyzátoru IMMULITE bylo prozkoumáno referenční rozmezí na 75 vzorcích séra. Vzorky pocházely od dospělých mužů a netěhotných žen dobrého zdraví. Všechny vzorky měly normální hodnoty celkového T4 a index volného T4 (FT4I). Hodnoty TBG poskytly absolutní rozmezí 13 až 39 µg/ml, dále rozmezí středních 95% 14 až 31 µg/ml a medián 19 µg/ml. To představuje dobrou shodu s údaji v literatuře, které udávají referenční rozmezí pro TBG 15 až 34 µg/ml, dle RIA. 8 Hodnoty indexu nasycení TBG (TBG-SI) byly spočítány pro výsledky 75 vzorků, které byly získány pomocí testů Celkový T4 a TBG na analyzátoru IMMULITE. Hodnoty TBG SI se pohybovaly od 17 do 39% (středních 95%) a medián byl 27%. To je také v souladu s uváděnými údaji, které mluví o referenčním rozmezí 2 až 5 pro poměr T4/TBG vypočtený jako T4 (v µg/dl) krát 10, děleno TBG (v µg/ml). 8 To odpovídá rozpětí 14 až 35% pro index TBG SI. Analýza vzorků od dvaceti čtyř žen v různém stupni těhotenství pomocí metody TBG na analyzátoru IMMULITE přinesla hodnoty TBG od 27 do 66 µg/ml s mediánem 43 µg/ml). V literatuře se uvádí rozmezí hodnot TBG pro těhotné ženy ve třetím trimestru 47 až 59 µg/ml. 8 Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Interpretaci hodnot celkového TBG ovlivňují mnohé fyziologické, farmakologické, patologické a genetické faktory. (Viz část Shrnutí a vysvětlení.) Zvýšená hladina TBG se může objevit při léčbě estrogenem (včetně orální antikoncepce), během těhotenství, u některých případů hepatitidy a jako dědičná dispozice. Sníženou hladinu TBG může způsobit přítomnost androgenních nebo anabolických steroidů, nefrotický syndrom, těžké onemocnění jater, zvýšený katabolizmus proteinů s horečkou, chřadnutí, operace, stres a dědičná dispozice. 9,10 10 IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07)

Index nasycení TBG (TBG-SI) jako i ostatní poměry celkového T4 a TBG nemusí nutně vypovídat o stejném faktu, jako index volného tyroxinu (FT4I). 14 Toto stanovení nebylo schváleno pro použití se vzorky od novorozenců a dětí. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v µg/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor: µg/ml 18,5 nmol/l Rozsah měření: 3,5 až 80 µg/ml (65 až 1 480 nmol/l). Standardizováno dle WHO 1st IS 88/638. Analytická citlivost: 1,6 µg/ml (29,6 nmol/l). Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Precision.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearita.) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků TBG (142, 285 a 503 µg/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Zpětná výtěžnost.) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči TBG. (Viz tabulka "Specificita".) Bilirubin: Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 384 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K určení vlivu alternativního typu vzorku jsme metodou TBG na analyzátorech IMMULITE 2000 stanovili vzorky od 15 dobrovolníků odebrané do obyčejných, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Do úměrných objemů odpovídajících vzorků byly přidány roztoky s různou koncentrací celkového TBG, abychom získali hodnoty z celého kalibračního rozsahu stanovení. Vzorky byly následně stanoveny uvedenou metodou (Heparin) = 0,97 (Sérum) 0,18 µg/ml r = 0,994 (EDTA) = 1,00 (Sérum) 0,79 µg/ml r = 0,994 (SST) = 0,998 (obyčejné zkumavky) 1,0 µg/ml r = 0,997 Střední hodnoty: 26,8 µg/ml (Sérum) 25,9 µg/ml (Heparin) 26,1 µg/ml (EDTA) 25,8 µg/ml (SST) Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno s testem TBG na analyzátoru IMMULITE na 99 vzorcích (Koncentrační rozsah: přibližně 3 až 55 µg/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,03 (IML) + 0,29 µg/ml r = 0,981 Střední hodnoty: 26,7 µg/ml (IMMULITE 2000) 25,6 µg/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07) 11

Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 TBG Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της δεσμευτικής σφαιρίνης της θυροξίνης (TBG) στον ορό, ως βοήθημα στην διάγνωση και θεραπεία των παθήσεων του θυρεοειδούς. Αριθμός καταλόγου: L2KTB2 (200 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: TBG Χρώμα: Σκούρο μπλε Περίληψη και επεξήγηση Η δεσμευτική σφαιρίνη της θυροξίνης (ΤBG) είναι μια όξινη γλυκοπρωτεΐνη, που αποτελείται από μια μοναδική αλυσίδα πολυπεπτιδίων με μοριακή μάζα 54 000 daltons. 10,11,12 Είναι μια από τις τρεις κύριες πρωτεΐνες-φορείς τόσο της θυροξίνης (Τ4) όσο και της 3,5,3- τριιωδοθυρονίνης (T3). Οι υπόλοιπες πρωτεΐνες-φορείς θυρεοειδικών ορμονών είναι η προλευκωματίνη που δεσμεύει την θυροξίνη (TBPA) και η λευκωματίνη. Αν και η ΤΒG είναι παρούσα σε αισθητά μικρότερες ποσότητες από ότι η ΤΒΡΑ και η λευκωματίνη, διαθέτει υψηλότερη συγγένεια με τις θυρεοειδικές ορμόνες και συνεπώς είναι η κύρια πρωτεΐνη φορέας. 1,2 Σε υγιή άτομα, στην μη δεσμευμένη (ελεύθερη) ορμόνη η ολική κυκλοφορούσα Τ4 είναι παρούσα σε ποσοστό χαμηλότερο από 0,05 τοις εκατό. Το δεσμευμένο κλάσμα κατανέμεται μεταξύ των πρωτεϊνών-φορέων ως εξής: TBG 70 75%, TBPA 15 20% και λευκωματίνη 5 10%. 2 Η δεσμευμένη και η μη δεσμευμένη T4 είναι παρούσες σε μια ισορροπία που τείνει να αυτορυθμίζεται με βάση τις μεταβολές στα επίπεδα των πρωτεϊνώνφορέων, προκαλώντας μια αντίστοιχη μεταβολή στο ολικό επίπεδο της T4 στην κυκλοφορία, ενώ ταυτόχρονα διατηρεί μάλλον αμετάβλητα τα επίπεδα της ελεύθερης T4. 2 Έτσι, η συγκέντρωση της ελεύθερης T4 ενδέχεται να συνδέεται περισσότερο με την κλινική κατάσταση του θυρεοειδούς από ότι η συγκέντρωση της ολικής T4, 3 καθώς ένα μη φυσιολογικό αποτέλεσμα της ολικής T4 είναι δυνατό να υποδηλώνει είτε μια ανωμαλία στη λειτουργία του θυρεοειδούς είτε απλά μια διακύμανση (φυσιολογική ή παθολογική) στις πρωτεΐνες-φορείς. 1 Συνεπώς, για παράδειγμα η αύξηση της TBG που χαρακτηρίζει την εγκυμοσύνη, 4 τη λήψη αντισυλληπτικών από το στόμα και τη θεραπεία με οιστρογόνα, προκαλεί αύξηση των επιπέδων ολικής T4, συχνά επάνω από τα όρια του φυσιολογικού, χωρίς να προκαλεί ταυτόχρονη αύξηση των επιπέδων της ελεύθερης Τ4. 5,6 Κι εδώ, οι αλλαγές στα επίπεδα της TBG είναι δυνατό να καλύπτουν ορισμένες φορές τα αποτελέσματα μιας μη φυσιολογικής λειτουργίας του θυρεοειδούς, αυξάνοντας τα επίπεδα της ολικής Τ4 σε υποθυρεοειδικούς ασθενείς ή μειώνοντας τα επίπεδα σε υπερθυρεοειδικούς ασθενείς 4 στο εύρος αναφοράς των τιμών ευθυρεοειδισμού. Κι εδώ, κατά κανόνα η συγκέντρωση της ελεύθερης T4 αντανακλά την πραγματική κατάσταση του θυρεοειδούς ενός ασθενούς πιο αξιόπιστα από ότι η συγκέντρωση της ολικής T4. Ο υπολογισμός της ελεύθερης T4, συχνά με βάση το δείκτη ελεύθερης θυροξίνης (FT4I), υπήρξε ανέκαθεν η συνηθέστερη μέθοδος εξέτασης σε περίπτωση δυσλειτουργιών του θυρεοειδούς. 7 Ο υπολογισμός του FT4I περιλαμβάνει συνήθως τον πολλαπλασιασμό του αποτελέσματος της ολικής T4 με τα αποτελέσματα μιας γρήγορης εκτίμησης της T3 (ή της T4). Η γρήγορη εξέταση της Τ3 παράγει ένα σχετικό μέτρο των μη κορεσμένων σημείων δέσμευσης στην TBG και όχι μια άμεση, ποσοτική εκτίμηση των συγκεντρώσεων αυτής της πρωτεΐνης-φορέα. Ο δείκτης κορεσμού TBG (TBG-SI) έχει χρησιμοποιηθεί με διάφορα ονόματα, π.χ. αναλογία δέσμευσης θυρεοειδούς ορμόνης (THBR), ως υποκατάστατο του FT4I. 13 Ο TBG-SI είναι απλά η αναλογία της ολικής T4 προς την TBG, πολλαπλασιασμένη με έναν συγκεκριμένο παράγοντα (ανάλογα με τις μονάδες μέτρησης), ώστε να δημιουργηθεί μια γενικής χρήσης κλίμακα αναφοράς. Όταν τόσο η ολική T4 όσο και η TBG εκφράζονται σε nmol/l και ο παράγοντας πολλαπλασιασμού είναι το 100, ο TBG-SI 12 IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07)

αντιπροσωπεύει την κλασματική κατάληψη των σημείων σύνδεσης της TBG από την T4 επί τοις εκατό. 13 Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 TBG είναι μια στερεής φάσης ανταγωνιστική, χημειοφωταυγής, ενζυμική ανοσοανάλυση. Κύκλοι επώασης: 1 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 35 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Τα αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 TBG δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 20 µl ορού. Φύλαξη: 2 μέρες στους 2 8 C ή 1 μήνες στους 20 C. 8 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ένα ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων TBG (L2TB12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με μονοκλωνικό αντι-tbg ποντικού. Σταθερά στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KTB2: 1 συσκευασία. Δοχείο αντιδραστηρίου TBG (L2TBA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένης με ανθρώπινη TBG σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KTB2: 1 δοχείο. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07) 13

Ρυθμιστές TBG (LTBL, LTBH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό), έκαστο 4 ml, ανθρώπινης TBG σε ρυθμιστικό με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KTB2: 1 σετ. Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά Αραιωτικό δείγματος TBG (L2TBZ) Για την επί-του-αναλυτή αραίωση των υψηλών δειγμάτων. 25 ml συμπυκνωμένου (έτοιμου προς χρήση) ρυθμιστικού δίχως TBG. Φύλαξη: 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. L2TBZ: 3 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος (16 x 100 mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος LTBCM: Μονάδα ελέγχου TBG (έλεγχος δύο επιπέδων με ανθρώπινη TBG) Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. Διαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000. Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 1 εβδομάδα. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου ή δείγματα ορού τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) ΤBG. Υπολογισμός του δείκτη κορεσμού TBG Ο δείκτης κορεσμού TBG (TBG-SI) αντιπροσωπεύει την κλασματική κατάληψη των σημείων δέσμευσης της TBG από την T4, επί τοις εκατό. 13 Πρόκειται για ένα φυσικό μέτρο, εφόσον η TBG διαθέτει ένα μόνο σημείο δέσμευσης για τις θυρεοειδικές ορμόνες, με υψηλότερη συγγένεια με την T4 από ότι με την T3. Επίσης, η T4 κυκλοφορεί σε πολύ μεγαλύτερες συγκεντρώσεις από ότι η T3. Ο TBG-SI ορίζεται ως 100 φορές η αναλογία σε nmol/l της ολικής T4 προς την TBG: TBG-SI = Ολική T4 (nmol/l) TBG (nmol/l) 100 Ο ορισμός καθιστά τον TBG SI ανεξάρτητο από τις μονάδες που χρησιμοποιούνται για την αναφορά των αποτελεσμάτων της ολικής T4 και της TBG, εφόσον απαιτεί την έκφραση αμφότερων των αποτελεσμάτων στην ίδια μονάδα συγκεντρώσεων (π.χ. nmol/l) πριν τον υπολογισμό της αναλογίας. Για παράδειγμα, εάν οι συγκεντρώσεις ολικής T4 και TBG εκφράζονται σε μονάδας μάζας µg/dl και µg/ml, πολλαπλασιάστε αντίστοιχα το αποτέλεσμα της T4 με το 12,87 για τη μετατροπή από µg/dl σε nmol/l και το αποτέλεσμα της TBG με το 18,5 για τη μετατροπή από µg/ml σε nmol/l, και τέλος πολλαπλασιάστε με το 100, όπως φαίνεται στον παραπάνω τύπο. Εναλλακτικά, μετατρέψτε την αναλογία T4/TBG στις αντίστοιχες μονάδες (12,87 / 18,5) x 100 = 69,5: TBG-SI = Ολική T4 (µg/dl) TBG (µg/ml) 69,5 Αναμενόμενες τιμές Με βάση τη σχέση της με την IMMULITE TBG (βλ. Σύγκριση Μεθόδων), η εξέταση 14 IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07)

αναμένεται να έχει ουσιαστικά τις ίδιες τιμές αναφοράς. Μια μελέτη πάνω στα εύρη αναφοράς διενεργήθηκε με κιτ IMMULITE TBG σε 75 δείγματα ορού. Αυτά ελήφθησαν από ενήλικες άνδρες και μη εγκυμονούσες γυναίκες με καλή υγεία. Όλα τα δείγματα είχαν φυσιολογικά επιπέδα δείκτη ολικής Τ4 και ελεύθερης Τ4 (FT4I). Τα αποτελέσματα της TBG εμφάνισαν ένα απόλυτο εύρος 13 έως 39 µg/ml, ένα κεντρικό εύρος 95% 14 έως 31 µg/ml, και μια διάμεση τιμή 19 µg/ml. Οι τιμές αυτές είναι σύμφωνες με τη βιβλιογραφία, η οποία δίνει εύρος αναφοράς 15 έως 34 µg/ml για την TBG σύμφωνα με το RIA. 8 Οι τιμές του δείκτη κορεσμού TBG (TBG SI) υπολογίστηκαν για αυτά τα 75 δείγματα με χρήση των αποτελεσμάτων που ελήφθησαν από τα κιτ IMMULITE TBG και IMMULITE Ολική T4. Οι τιμές TBG SI κυμαίνονταν από 17 έως 39% (κεντρικό 95%), με διάμεση τιμή 27%. Κι αυτές οι τιμές είναι σύμφωνες με τη βιβλιογραφία, η οποία δίνει εύρος αναφοράς 2 έως 5 για την αναλογία T4/TBG, που υπολογίζεται ως T4 (σε µg/dl) επί 10 διά της TBG (σε µg/ml). 8 Αυτό αντιστοιχεί σε ένα εύρος 14 έως 35% για το δείκτη TBG SI. Είκοσι τέσσερα δείγματα γυναικών που βρίσκονταν σε διάφορα στάδια της κύησης αναλύθηκαν με το κιτ IMMULITE TBG και έδωσαν επίπεδα TBG που κυμαίνονταν μεταξύ 27 και 66 µg/ml, με ενδιάμεση τιμή 43 µg/ml). Στη βιβλιογραφία προτείνεται εύρος TBG 47 έως 59 µg/ml για εγκυμονούσες στο τρίτο τρίμηνο. 8 Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Πολλοί φυσιολογικοί, φαρμακολογικοί, παθολογικοί και γενετικοί παράγοντες μπορεί να επηρεάσουν την ερμηνεία των αποτελεσμάτων της TBG. (Ανατρέξτε στην περίληψη και επεξήγηση του τμήματος εξέτασης.) Αυξημένα επίπεδα TBG παρατηρούνται σε θεραπείες με οιστρογόνα (συμπεριλαμβανομένων των αντισυλληπτικών από το στόμα), στην εγκυμοσύνη, σε ορισμένες περιπτώσεις ηπατίτιδας και ως κληρονομική διαταραχή. Τα μειωμένα επίπεδα TBG μπορεί να οφείλονται στην παρουσία ανδρογόνων ή αναβολικών στεροειδών, νεφρωσικού συνδρόμου, σοβαρής ηπατικής νόσου, αυξημένου καταβολισμού πρωτεϊνών με πυρετό, διάφορες παθήσεις, επεμβάσεις, άγχος και ως κληρονομική νόσος. 9,10 Ο δείκτης κορεσμού TBG (TBG-SI), όπως και άλλες αναλογίες T4/TBG, δεν κομίζει απαραίτητως τις ίδιες πληροφορίες με το δείκτη ελεύθερης θυροξίνης (FT4I). 14 Η εξέταση δεν έχει επαληθευθεί σε δείγματα νεογνών και παιδιών. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με in vitro ανοσοαναλύσεις. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε µg/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Παράγοντας μετατροπής: µg/ml 18,5 nmol/l IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07) 15

Εύρος μέτρησης: 3,5 έως 80 µg/ml (65 έως 1 480 nmol/l). Τυποποίηση υπό WHO 1st IS 88/638. Αναλυτική ευαισθησία: 1,6 µg/ml (29,6 nmol/l). Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision.) Γραμμικότητα: Τα δείγματα αναλύθηκαν σε διαφορετικά διαλύματα. (βλ. Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα). Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα TBG (142, 285 και 503 µg/ml) και αναλύθηκαν. (βλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή εξειδίκευση στην ΤΒG. (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν έχει επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 384 mg/dl δεν έχει επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως 3 000 mg/dl δεν έχει επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικός τύπος δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 15 εθελοντές σε απλούς ηπαρινισμένους EDTA και Becton Dickinson SST δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες. Ίσες ποσότητες των αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν με διάφορες συγκεντρώσεις TBG, ώστε να ληφθούν τιμές καθόλο το εύρος καμπύλης της ανάλυσης, και μετά εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία του IMMULITE 2000 TBG. (Ηπαρίνη) = 0,97 (Ορός) 0,18 µg/ml r = 0,994 (EDTA) = 1,00 (Ορός) 0,79 µg/ml r = 0,994 (SST) = 0,998 (Απλά σωληνάρια) 1,0 µg/ml r = 0,997 Μέσοι όροι: 26,8 µg/ml (Ορός) 25,9 µg/ml (Ηπαρίνη) 26,1 µg/ml (EDTA) 25,8 µg/ml (SST) Σύγκριση της μεθόδου: Η μέθοδος συγκρίθηκε με τη μέθοδο της IMMULITE TBG σε 99 δείγματα. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 3 έως 55 µg/ml. Δες γράφ.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,03 (IML) + 0,29 µg/ml r = 0,981 Μέσοι όροι: 26,7 µg/ml (IMMULITE 2000) 25,6 µg/ml (IMMULITE) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. www.siemens.com/diagnostics Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 TBG Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do ilościowego oznaczenia w surowicy poziomu globuliny wiążącej tyroksynę (TBG), przydatny w diagnozowaniu i leczeniu chorób tarczycy. Numer katalogowy: L2KTB2 (200 testów) Kod testu: TBG Kolor: ciemnoniebieski Wprowadzenie Globulina wiążąca tyroksynę (TBG) jest kwaśną glikoproteiną zbudowaną z pojedynczego łańcucha polipeptydowego o masie cząsteczkowej 54 000 Da. 10,11,12 Jest jednym z trzech głównych nośników białkowych tyroksyny (T4) i 3,5,3- trójjodotyroniny (T3) obok prealbuminy wiążącej tyroksynę (TBPA) oraz albuminy, które są również nośnikami białkowymi hormonów tarczycy. Chociaż TBG 16 IMMULITE 2000 TBG (PIEL2KTB-2 {18}, 2010-07-07)