Allergen-Specific IgG 4. For use on IMMULITE 2000 systems

Allergen-Specific IgG 4 For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of allergen-specific IgG 4 in human serum and plasma (EDTA or heparinized), as an aid in the clinical diagnosis of IgG 4 -mediated allergic disorders. Catalog Numbers: L2KG42 (200 tests), L2KG46 (600 tests) Test Code: SP4 Color: Light Blue Summary and Explanation Among the IgG subclasses, IgG 4 antibodies have been targeted for investigation in allergic diseases due to their unique monovalency characteristics and potential for acting as allergenblocking antibodies during hyposensitization therapy. 14,15 In-vitro measurements of specific IgG 4 antibodies are often utilized to correlate the level of patient response and exposure to the triggering allergen (antigen). Certain allergy-mediated dermatological, respiratory, and gastrointestinal disorders have been studied using allergen-specific IgG 4 /IgG as indicators for exposure and immunological sensitization. 1-4 Similarly, patients undergoing immunotherapy often demonstrate a pronounced increase in IgG 4, particularly during the second year of treatment. 5 While the degree of immunological response may be dependent on the therapy dosage schedule, the association to clinical efficacy is still unclear. 6,7,16 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 is a solid-phase, enzyme-labeled chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with antiligand. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG 4 antibody. Individual ligand-labeled allergens and panels in liquid phase are not supplied in the kit but are required for the run. In the first cycle, the on-board diluted patient sample (1-in-100) and the ligandlabeled specific allergen are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, specific IgG 4 in the sample binds to the ligand-labeled allergen, which in turn binds to the antiligand on the bead. Unbound sample is then removed by centrifugal washes. In the second cycle, the enzyme conjugated monoclonal murine antihuman IgG 4 antibody is added to the original reaction tube for additional 30 minutes incubation. The enzyme conjugated monoclonal murine antihuman IgG antibody binds to immobilized IgG 4. The unbound enzyme conjugate is removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Time to first result: 65 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the 2 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23)

section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 5 µl serum or plasma (EDTA or heparinized). After automatic sample predilution, 50 µl is used for the immunoassay. Storage: 3 days at 2 8 C, or 6 months at 20 C. 9,10 Automatic Predilution Factor: 100 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Allergen-Specific IgG 4 Bead Pack (L2G412) With barcode. 200 beads, coated with an anti-ligand. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KG42: 1 pack, L2KG46: 3 packs. Allergen-Specific IgG 4 Reagent Wedge (L2G4A2) With barcode. 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG 4 antibody in buffer. Prior to opening, stable at 2 8 C until expiration date. After opening, stable at 2 8 C for 60 days. L2KG42: 1 wedge, L2KG46: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Allergen-Specific IgG 4 Adjustors (L2G4J3, L2G4J4) Two vials (Low and High), 2.0 ml each, of human IgG 4 in a human serum/buffer matrix. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KG42: 1 set, L2KG46: 2 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Allergen-Specific IgG 4 Adjustor Antibody (L2G4S1) 2.75 ml of liquid, ready-to-use ligandlabeled monoclonal murine anti-human IgG 4. Prior to opening, stable at 2 8 C until expiration date. After opening, stable at 2 8 C for 60 days. This reagent is placed in the Allergen Holder Wedge when running the Specific IgG 4 Adjustors. L2KG42: 1 tube, L2KG46: 2 tubes. Allergen-Specific IgG 4 Kit Controls (L2G4C1, L2G4C2) Two vials, 2.0 ml each of human IgG 4 in a human serum/buffer matrix. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KG42: 1 set, L2KG46: 2 sets. Refer to the control insert for concentration levels. Before use, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Allergen-Specific IgG 4 Control Antibody (L2G4S2) 2.75 ml of liquid, ready-to-use ligandlabeled monoclonal murine anti-human IgG 4 antibody. Prior to opening, stable at 2 8 C until expiration date. After opening, stable at 2 8 C for 60 days. This reagent is placed in the Allergen Holder Wedge when running the IMMULITE 2000 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23) 3

Allergen-Specific IgG 4 Controls. L2KG42: 1 tube, L2KG46: 2 tubes. Allergen-Specific IgG 4 Sample Diluent SP4 (L2G4Z2) For the on-board dilution of patient samples. 55 ml concentrated (ready-touse) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KG42: 1 55 ml, L2KG46: 3 55 ml. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2KG42: 3 labels, L2KG46: 9 labels. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2AW1-3: Allergen Holder Wedges (barcoded) L2AW1: serially coded 1-33 L2AW2: serially coded 34-66 L2AW3: serially coded 67-99 L2ATC: Allergen Tube Caps L2ATS: Allergen Tube Septa L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 x 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Specific Allergens and Mixed Allergen Panels Individual allergens are packaged and sold in 40 and 20 test modules containing 2.75 ml and 1.75 ml, respectively. Mixed allergen panels are packaged and sold in 40 test modules only containing 2.75 ml each. Each allergen tube contains specific allergens or a mix of allergens in a proteinbased buffer matrix, with preservative. Do not freeze. Store refrigerated: stable at 2 8 C until the expiration date marked on the label. Do not use if signs of microbial contamination such as a cloudy appearance have been observed. Individual allergens and mixed allergen panels are intended for use with both the IMMULITE 2000 and IMMULITE 2500 platforms. For a full list and catalog numbers, please refer to the 3gAllergy Assay Menu Specific Allergens. Also Required Distilled or deionized water; test tubes. Assay Procedure Immediately prior to running the Allergen- Specific IgG 4 Low Adjustor, complete the following steps: 1 Weekly Waste Tube Cleaning diagnostic, as described in the Operator s Manual. 2 Daily Probe Cleaning diagnostic, as described in the Operator s Manual. 3 Prime system five times as described in the Operator s Manual. 4 Manually clean the outside of the water probe tip with 70% isopropyl alcohol. Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Allergen Loading 1 Select an open position on the Reagent Carousel through the software. 2 Replace caps on Allergen Tubes with septa. Do not invert the Allergen Tube once the septum is installed. 3 Place Allergen Tubes containing IMMULITE 2000 specific allergens, specific allergen panels, Specific IgG 4 Adjustor Antibody, and/or Specific IgG 4 Control Antibody in the Allergen Holder Wedge, with the barcodes facing the open side of the wedge. 4 Close the wedge and scan the allergen barcodes with the hand-held imaging scanner. 4 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23)

5 Once scanning is complete, load the Allergen Holder Wedge into the reagent carousel. 6 Repeat this procedure to load subsequent Allergen Holder Wedges. The Allergen Holder Wedge must be scanned prior to installation into the instrument to ensure correct instrument operation. Removing or replacing any vials within the allergen wedge will require rescanning of the wedge with the barcode scanner to update the allergen information. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: The controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor the assay performance. Refer to the control insert for concentration levels. Expected Values A total of 160 samples from presumed healthy individuals were tested with 14 specific allergens using the IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 assay. The tabulated results are presented in a graph. (See Expected Values graph.) Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations A definitive clinical diagnosis should not be made solely on the basis of an in-vitro allergen-specific IgG 4 result. Diagnosis should be made by the physician only after all clinical and laboratory findings have been evaluated. 11 Heterophilic antibodies in human serum/plasma can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in µg/l. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 200 50,000 µg/l (WHO 67/97). Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on the results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 522 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 22 volunteers into plastic plain serum, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. All samples were assayed by the IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 procedure, with the following results: (Heparin Plastic) = 1.00 (Serum Plastic) 153 µg/l r = 0.999 (EDTA Plastic) = 0.93 (Serum Plastic) + 12.7 µg/l r = 0.996 (SST Plastic) = 0.99 (Serum Plastic) + 5.91 µg/l r = 0.998 Means: 9,045 µg/l (Serum Plastic) 8,905 µg/l (Heparin Plastic) 8,400 µg/l (EDTA Plastic) 8,955 µg/l (SST Plastic) IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23) 5

Method Comparison: Samples collected from two individuals who had undergone insect venom immunotherapy with I1 (honey bee) and I3 (yellow jacket), respectively, were assayed using the IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 and ImmunoCAP 100 methods. (See Method Comparison graph.) References 1) Tomee J, Dubois A, Koeter G, Beaumont F, van der Werf T, Kauffman H. Specific IgG 4 responses during chronic and transient antigen exposure in aspergillosis. Am J Resp and Crit Care Med. 1996;153(6):1952. 2) Yokota, Yamaguchi, Takeshita, Morimoto. The significance of specific IgG 4 antibodies to methyltetrahydrophthalic anhydride in occupationally exposed subjects. Clin Exp Allergy. 1998;28(6):694. 3) Zar S, Mincher L, Benson M, Kumar D. Food-specific IgG 4 antibody-guided exclusion diet improves symptoms and rectal compliance in irritable bowl syndrome. Scan J of Gastr. 2005;40(7):800. 4) Awazuhara H, Kawai H, Maruchi N. Major allergens in soybean and clinical significance of IgG 4 -immunoblotting with sera from soybeansensitive patients. Clin Exp Allergy. 1997;27(3):325. 5) Adkinson F, Yunginger J, Busse W, Bochner B, Holgate S, Simons E. Middleton s Allergy, Principles and Practice, Volume 2. 6th ed. Philadelphia, Mosby 2003:1458-1462. 6) Bodtger U, Ejrnaes A, Hummelshoj L, Jacobi H, Poulsen L, Svenson M. Is immunotherapy-induced birch-pollenspecific IgG 4 a marker for decreased allergenspecific sensitivity? Int Arch Allergy and Imm. 2005;136(4):340. 7) Gehlhar, Schlaak, Becker, Bufe. Monitoring allergen immunotherapy of pollen allergic patients: the ratio of allergenspecific IgG 4 to IgG 1 correlates with clinical outcome. Clin & Exp Allergy 1999;29(4):497.8) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. 9) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995:358. 10) Hokoma Y, Nakamura RM. Immunology and immunopathology basic concepts. Little, Brown and Company, 1982:35-45. 11) Bloch K, Salvaggio J. Use and interpretation of diagnostic immunologic laboratory tests. JAMA 1982;246:2734-58. 12) El Shami AS, Alaba O. Liquid-phase in vitro allergen-specific IgE assay with in situ immobilization. Adv Biosci 1989;74:191-201. 13) Alaba O, El Shami AS. Evaluation of non-specific IgE binding: comparison of two in vitro allergens assays. Adv Biosci 1989;74:203-14. 14) Van der Zee JS, Aalberse RC. The role of IgG in immediate-type hypersensitivity. Eur Respir J Suppl. 1991;13:91-96. 15) Schuurman J, Van Ree R, Perdok G, Van Doorn R, Tan K, Aalberse R. Normal human immunoglobulin G4 is bispecific: it has two different antigen-combining sites. Immunology. 1999;97(4):693-698. 16) Toit G, Levin M, Motala C, Perkin M, Stephens A, Turcanu V, Lack G. Peanut allergy and peanutspecific IgG4 characteristics among Xhosa children in Cape Town. J Allergy and Clin Imm. 2007;119(1);S196. Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (µg/l) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 443 29.4 6.6% 45.4 10.2% 2 505 46.1 9.1% 75.0 14.9% 3 1,010 65.4 6.5% 87.5 8.7% 4 1,081 53.4 4.9% 97.0 9.0% 5 1,273 45.9 3.6% 74.9 5.9% 6 3,612 174 4.8% 247 6.8% 7 3,808 155 4.1% 260 6.8% 8 4,441 225 5.1% 344 7.7% 9 5,774 255 4.4% 424 7.3% 10 13,614 600 4.4% 843 6.2% 11 22,798 1,524 6.7% 2,142 9.4% 12 30,783 1,713 5.6% 2,620 8.5% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. 6 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23)

Method Comparison Specific IgG4 Concentration, µg/l 40000 30000 20000 10000 200 Occasion Sample-Allergen Method 1 2 Sample 1-I1 IMMULITE 2000 1 2 Sample 2-I3 1 2 1 2 Sample 1-I1 Sample 2-I3 ImmunoCAP 100 Česky. Allergen-Specific IgG 4 : Alergenspecifické IgG 4. Ελληνικά. Allergen-Specific IgG 4 : Ειδικό Αλλεργιογόνο IgG 4. Polski. Allergen-Specific IgG 4 : Alergenowo- specyficzne IgG 4 Expected Values sigg4 concentration, µg/l 5.0 4.7 4.0 3.0 2.3 M3 M6 I1 I3 D1 D2 F1 F4 F2 Specific Allergen Česky F76 F77 F78 G6 T3 50000 10000 1000 IMMULITE 2000 Alergenspecifické IgG 4 Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke kvantitativnímu stanovení koncentrace alergen-specifického IgG 4 v liském séru a plazmě (EDTA nebo heparinizované), jako pomůcka při klinickém hodnocení alergií zprostředkovaných IgG 4. Katalogové číslo: L2KG42 (200 testů), L2KG46 (600 testů) Kód metody: SP4 Barva: Světle modrá 200 Shrnutí a vysvětlení V rámci podskupin IgG se protilátky IgG 4 používají pro diagnostiku alergií vzhledem ke své unikátní monovalentní charakteristice a schopnosti působit jako protilátky blokující alergeny během hyposenzibilizační terapie. 14,15 Měření specifických protilátek IgG 4 in-vitro se často používá k porovnání stupně odezvy pacienta a expozice spouštěcím alergenem (antigen). Některá alergenem zprostředkovaná dermatologická, respirační a gastrointestinální onemocnění byla zkoumána prostřednictvím alergen specifických IgG 4 /IgG, které sloužily jako indikátor expozice a imunitní senzibilizace. 1-4 Podobně pacienti podstupující imunoterapii často vykazovali zřetelný nárůst IgG 4, zvláště během druhého roku léčby. 5 Zatímco stupeň imunitní odezvy může záviset na terapeutické dávce, souvislost s klinickou účinností nebyla ještě prokázána. 6,7,16 Princip Stanovení IMMULITE 2000 Allergen-Specifický IgG 4 je chemiluminiscenční imunochemické enzymem značené stanovení v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena antiligandem. Kapalná fáze se skládá z alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgG 4. Jednotlivé ligandem značené alergeny a panely v kapalné fázi se v soupravě nedodávají, ale jsou pro stanovení nutné. V prvním kroku se automaticky naředěný pacientský vzorek (1:100) inkubuje společně s ligandem značeným specifickým alergenem a potaženou kuličkou po dobu 30 minut. V této fázi se specifický IgG 4 ve vzorku naváže na ligandem značený alergen, který se opět naváže na antiligand na kuličce. Nenavázaný vzorek se odstraní centrifugačním mytím. V druhém kroku se do reakční zkumavky přidá s enzymem konjugovaná monoklonální myší protilátka proti lidskému IgG 4 a probíhá další inkubace 30 minut. Enzymem značená monoklonální myší protilátka proti lidskému IgG 4 se naváže na imobilizovaný IgG 4. Nenavázaný enzymový konjugát se odstraní centrifugačním mytím. Nakonec se do reakční zkumavky s kuličkou přidá IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23) 7

substrát a je generován signál přímo úměrný navázanému enzymu. Inkubační cykly: 2 30 minut. Čas do prvního výsledku: 65 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Alergen-Specifický IgG 4 na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku: 5 μl séra nebo plazmy. (EDTA nebo heparinizované). Po automatickém předředění vzorku se pro imunochemické stanovení odebere 50 µl. Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců při teplotě 20 C. 9,10 Faktor automatického ředění: 100 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. Alergen-Specifický IgG 4 zásobník s kuličkami (L2G412) S čárovým kódem. 200 kuliček potažených antiligandem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KG42: 1 balení, L2KG46: 3 balení. Alergen-Specifický IgG 4 Reagencie (L2G4A2) S čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgG 4 v pufru. Před otevřením stabilní do expirace při teplotě 2 8 C. Po otevření stabilní 60 dní při teplotě 2 8 C. L2KG42: 1 nádobka, L2KG46: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Alergen-Specifický IgG 4 Kalibrátory (L2G4J3, L2G4J4) Dvě ampulky s vysokou a nízkou koncentrací, obsahující 2,0 ml lidského IgG 4 v lidské sérum/pufrové matrici. Stabilní 30 dní při teplotě 2 8 po otevření nebo 6 měsíců (rozdělené na alikvotní části) při teplotě 20 C. L2KG42: 1 sada, L2KG46: 2 sady. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby 8 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23)

zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Alergen-Specifický IgG 4 protilátka proti kalibrátoru (L2G4S1) 2,75 ml kapalné, připravené k použití, ligandem značené monoklonální myší protilátky proti lidskému IgG 4. Před otevřením stabilní do expirace při teplotě 2 8 C. Po otevření stabilní 60 dní při teplotě 2 8 C. Tato reagencie je umístěna v nosiči na alergeny při adjustaci pomocí kalibrátorů stanovení Specifický IgG 4. L2KG42: 1 zkumavka, L2KG46: 2 zkumavky. Alergen-Specifický IgG 4 kontroly (L2G4C1, L2G4C2) Dvě ampulky, po 2 ml lidského IgG 4 v humánní sérum/pufrové matrici. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců (rozdělené na alikvotní části) při 20 C. L2KG42: 1 sada, L2KG46: 2 sady. Koncentrace kontrol naleznete v letáčku dodávaném s kontrolami. Před použitím nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Alergen-Specifický IgG 4 protilátka proti kontrole (L2G4S2) 2,75 ml kapalné, připravené k použití, ligandem značené monoklonální myší protilátky proti lidskému IgG 4. Před otevřením stabilní do expirace při teplotě 2 8 C. Po otevření stabilní 60 dní při teplotě 2 8 C. Tato reagencie je umístěna v nosiči na alergeny při adjustaci pomocí kalibrátorů stanovení kontrol IMMULITE 2000 Alergen-Specifické IgG 4. L2KG42: 1 zkumavka, L2KG46: 2 zkumavky. Alergen-Specifický IgG 4 diluent vzorků SP4 (L2G4Z2) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků analyzátorem. 55 ml koncentrované (připravené k použití) nehumánní protein/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KG42: 1 55 ml, L2KG46: 3 55 ml. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2KG42: 3 štítky, L2KG46: 9 štítků. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2AW1-3: Nosič alergenů (s čárovým kódem) L2AW1: kódy 1 33 L2AW2: kódy 34 66 L2AW3: kódy 67 99 L2ATC: Uzávěry zkumavek na alergeny L2ATS: Septa zkumavek na alergeny L2ZT: 250 Testovacích zkumavek na diluent vzorků (16 100 mm) L2ZC: 250 Uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků Specifické alergeny a panely smíšených alergenů Jednotlivé alergeny se dodávají v baleních po 40 a 20 testech, která obsahují 2,75 ml resp. 1,75 ml. Smíšené alergenové panely se dodávají pouze v balení po 40 testech, které obsahuje 2,75 ml. Každá alergenová ampule obsahuje specifický alergen nebo směs alergenů v pufrové matrici na bázi bílkoviny, s konzervačním prostředkem. Nezmrazujte. Skladujte chlazené: stabilní při teplotě 2 8 C do expirace vyznačené na štítku. Nepoužívejte, pokud jsou zjevné známky mikrobiální infekce, jako je zakalení. Jednotlivé alergeny a smíšené panely alergenů jsou určeny pro použití jak v analyzátoru IMMULITE 2000 tak v analyzátoru IMMULITE 2500. Kompletní výčet alergenů s katalogovými čísly najdete v seznamu Přehled 3gAllergy Specifické alergeny. Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky. IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23) 9

Postup stanovení Bezprostředně před stanovením nízkého adjustoru metody IgG 4 proveďte následující kroky: 1 Týdenní údržbu (program Waste Tube Cleaning v Diagnostice), jak je popsána v Návodu k obsluze. 2 Čištění dávkovacích jehel (program Daily Probe Cleaning v Diagnostice), jak je popsáno v Návodu k obsluze. 3 Propláchnutí systému (Prime) pětkrát, jak je popsáno v Návodu k obsluze. 4 Ruční očištění povrchu špičky promývací jehly 70% roztokem isopropylalkoholu. K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Vkládání alergenů do analyzátoru 1 Pomocí softwaru si vyberte volnou pozici na karuselu na reagencie. 2 Na zkumavky na alergeny místo uzávěru dejte septum. Po umístění septa už zkumavky na alergeny nepřeklápějte. 3 Do zásobníku s alergeny vložte zkumavky na alergeny obsahující IMMULITE 2000 specifické alergeny, panely specifických alergenů, Specifické IgG 4 protilátky proti kalibrátoru a/nebo Specifické IgG 4 protilátky proti kontrole. Čárové kódy natočte směrem k otevřené straně zásobníku. 4 Zásobník zavřete a ručním zobrazovacím skenerem načtěte čárové kódy alergenů. 5 Po dokončení skenování založte zásobník s alergeny do karuselu na reagencie. 6 Postup opakujte při zakládání dalších zásobníků s alergeny. Zásobník s alergeny musí být načten před založením do analyzátoru, aby byla zajištěna jeho správná činnost. Po odebrání některé ampulky ze zásobníku s alergeny nebo jejím přemístění je nutné zásobník opět načíst a tím zaktualizovat informace o alergenech. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Kontroly dodávané se soupravou by měly být použity jako kontrolní materiál k monitorování funkčnosti stanovení. Hodnoty koncentrací kontrol najdete v příbalovém letáku kontrol. Očekávané hodnoty Celkem 160 vzorků zdravých pacientů bylo testováno se 14 specifickými alergeny použitím stanovení IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4. Tabulkové výsledky jsou uvedeny v grafech (viz graf Očekávané hodnoty ) Považujte tyto hodnoty pouze za informatvní. Každá laboratoř by si měla stanovit své vlastní referenční rozmezí. Omezení Pouze na základě výsledku in vitro alergen specifického IgG 4 testu by se neměla určovat konečná klinická diagnóza. Lékař by měl diagnózu určit až po vyhodnocení všech klinických a laboratorních nálezů. 11 Heterofilní protilátky v lidském séru/ plazmy můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. 10 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23)

Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v µg/l. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření: 200 50 000 µg/l (WHO 67/97). Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 522 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: Ke zhodnocení vlivu použití alternativního typu vzorku byla odebrána krev 22 dobrovolníkům do obyčejných plastových, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Všechny vzorky byly stanoveny pomocí testu IMMULITE 2000 Alergen-specifický IgG 4 s následujícími výsledky: (Heparin plast) = 1,00 (Sérum plast) 153 µg/l r = 0,999 (EDTA plast) = 0,93 (Sérum plast) + 12,7 µg/l r = 0,996 (SST plast) = 0,99 (Sérum plast) + 5,91 µg/l r = 0,998 Střední hodnoty: 9 045 µg/l (Sérum plast) 8 905 µg/l (Heparin plast) 8 400 µg/l (EDTA plast) 8 955 µg/l (SST plast) Srovnání metody: Vzorky odebrané od dvou pacientů, kteří podstoupili imunoterapii s I1 (včela medonosná) a I3 (sršeň), byly stanoveny použitím metody IMMULITE 2000 Alergen-specifický IgG 4 a ImmunoCAP 100 stanovení. (viz. graf Srovnání metod ) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Ειδικό Αλλεργιογόνο IgG 4 Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό του ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4 στον ανθρώπινο ορό και πλάσμα (EDTA ή ηπαρινισμένο), ως βοήθημα για την κλινική διάγνωση των IgG 4 προκαλούμενων αλλεργικών δυσλειτουργιών. Αριθμός Καταλόγου: L2KG42 (200 εξετάσεις), L2KG46 (600 εξετάσεις) Κωδικός ανάλυσης: SP4 Χρώμα: Ανοικτό μπλε Περίληψη και Επεξήγηση Ανάμεσα στις υφομοταξίες IgG, τα αντισώματα IgG 4 antibodies έχουν γίνει επίκεντρο των ερευνών για τις αλλεργικές ασθένειες λόγω των μοναδικών μονοσθενών χαρακτηριστικών τους και της δυνατότητάς τους να ενεργούν σαν αντισώματα φραγμού αλλεργιογόνων κατά τη διάρκεια της θεραπείας απευαισθητοποίησης. 14,15 In-vitro μετρήσεις των ειδικών αντισωμάτων IgG 4 χρησιμεύει συχνά για τη συσχέτιση των επιπέδων της απόκρισης του ασθενούς και της έκθεσης στο υπεύθυνο αλλεργιογόνο (αντιγόνο). Συγκεκριμένες αλλεργικά προκαλούμενες δερματολογικές, αναπνευστικές και γαστρεντερικές δυσλειτουργίες έχουν μελετηθεί χρησιμοποιώντας τα ειδικά αλλεργιογόνα IgG 4 /IgG σαν δείκτες για την έκθεση και την ανοσολογική ευαισθητοποίηση. 1-4 Ομοίως, ασθενείς που υφίστανται ανοσοθεραπεία συχνά παρουσιάζουν μία έντονη αύξηση της IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23) 11

IgG 4, ιδιαίτερα κατά το δεύτερο έτος της θεραπείας. 5 Καθώς ο βαθμός της ανοσολογικής απόκρισης μπορεί να εξαρτάται από τον προγραμματισμό χορήγησης της θεραπείας, η σύνδεση με την κλινική αποτελεσματικότητα είναι ακόμη ασαφής. 6,7,16 Αρχή της Διαδικασίας Η IMMULITE 2000 ειδικό αλλεργιογόνο IgG 4 είναι μια ξηρής φάσης, ενζυμικά σημασμένη χημειοφωταυγής ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με αντίligand. Η υγρή φάση αποτελείται από αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε μονοκλωνικό αντίανθρώπινο IgG 4 αντίσωμα ποντικού. Τα μεμονωμένα σημασμένα με ligand αλλεργιογόνα και ομάδες δεν παρέχονται με τη συσκευασία αλλά απαιτούνται για την εκτέλεση της εξέτασης. Στον πρώτο κύκλο, το αραιωμένο επί του αναλυτή (1 προς 100) δείγμα ασθενούς και το σημασμένο με ligand ειδικό αλλεργιογόνο επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, η ειδική IgG 4 του δείγματος προσδένεται στο σημασμένο με ligand αλλεργιογόνο, το οποίο με τη σειρά του προσδένεται στο αντι-ligand πάνω στο σφαιρίδιο. Το μη προσδεδεμένο δείγμα στη συνέχεια απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Στο δεύτερο κύκλο, το συνδεδεμένο ένζυμο σε μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντί-ανθρώπινης IgG 4 προστίθεται στον αρχικό σωλήνα αντίδρασης για επιπλέον επώαση 30 λεπτών. Το συνδεδεμένο ένζυμο σε μονοκλωνικό αντί-ανθρώπινο IgG αντίσωμα ποντικού προσδένεται στην ακινητοποιημένη IgG 4. Το μη προσδεδεμένο ένζυμο απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο σωλήνα αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 2 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά. Συλλογή Δείγματος Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 ειδικό αλλεργιογόνο IgG 4 δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος Όγκος: 5 µl ορού ή πλάσματος. (EDTA ή Ηπαρινισμένο). Μετά την αυτόματη προαραίωση δείγματος, 50 µl χρησιμοποιούνται για την ανοσοεξέταση. Αποθήκευση: 3 μέρες στους 2 8 C, ή 6 μήνες στους 20 C. 9,10 Συντελεστής Αυτόματης Προαραίωσης: 100 Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για διαγνωστική in vitro χρήση. Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για 12 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23)

αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά. Αζιδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl,σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρησιμοποιείτε δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4 (L2G412) Με γραμμικό κώδικα. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με αντί-ligand. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KG42: 1 συσκευασία, L2KG46: 3 συσκευασίες. Δοχείο Αντιδραστηρίων ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4 (L2G4A2) Με γραμμικό κώδικα. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε μονοκλωνικό αντίσωμα αντί-ανθρώπινης IgG 4 ποντικού, σε ρυθμιστικό διάλυμα. Πριν το άνοιγμα, σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. Μετά το άνοιγμα, σταθερό στους 2 8 C για 60 ημέρες. L2KG42: 1 δοχείο, L2KG46: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το γραμμικό κώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4 (L2G4J3, L2G4J4) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό), 2,0 ml έκαστο, ανθρώπινης IgG 4 σε μήτρα ανθρώπινου ορού/ρυθμιστικού διαλύματος. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KG42: 1 σετ, L2KG46: 2 σετ. Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με τη συσκευασία) σε δοκιμαστικούς σωλήνες έτσι ώστε οι γραμμικοί κώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης του αναλυτή. Αντίσωμα ελέγχου ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4 (L2G4S1) 2,75 ml υγρού, έτοιμου για χρήση σημασμένου με ligand μονοκλωνικού αντίανθρώπινου αντισώματος IgG 4 ποντικού. Πριν το άνοιγμα, σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. Μετά το άνοιγμα, σταθερό στους 2 8 C για 60 ημέρες. Αυτό το αντιδραστήριο τοποθετείται στο δοχείο στήριξης αλλεργιογόνων κατά την εκτέλεση ρύθμισης της ειδικής IgG 4 Adjustors. L2KG42: 1 σωληνάριο, L2KG46: 2 σωληνάρια. Συσκευασία ορών ελέγχου ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4 (L2G4C1, L2G4C2) Δύο φιαλίδια, 2,0 ml το καθένα με ανθρώπινη IgG 4 σε μήτρα ανθρώπινου ορού/ρυθμιστικού διαλύματος. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KG42: 1 σετ, L2KG46: 2 σετ. Ανατρέξτε στο εσώκλειστο των ορών ελέγχου για τα επίπεδα συγκεντρώσεων. Πριν τη χρήση, κολλήστε τις ανάλογες ετικέτες (παρέχονται μαζί με τη συσκευασία) στα δοκιμαστικά σωληνάρια έτσι ώστε οι γραμμικοί κώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης του αναλυτή. Αντίσωμα ελέγχου ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4 (L2G4S2) 2,75 ml υγρού, έτοιμου για χρήση σημασμένου με ligand μονοκλωνικού αντίανθρώπινου αντισώματος IgG 4 ποντικού. Πριν το άνοιγμα, σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. Μετά το άνοιγμα, σταθερό στους 2 8 C για 60 ημέρες. Αυτό το αντιδραστήριο τοποθετείται στο δοχείο στήριξης IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23) 13

αλλεργιογόνων κατά τη μέτρηση των ορών ελέγχου IMMULITE 2000 ειδικό αλλεργιογόνο IgG 4. L2KG42: 1 σωληνάριο, L2KG46: 2 σωληνάρια. Αραιωτικό δείγματος ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4 SP4 (L2G4Z2) Για την αραίωση των δειγμάτων των ασθενών. 55 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση) μη ανθρώπινης μήτρας πρωτεΐνης/ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KG42: 1 55 ml, L2KG46: 3 55 ml. Ετικέτες με γραμμικό κώδικα παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μία κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι γραμμικοί κώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης του αναλυτή. L2KG42: 3 ετικέτες, L2KG46: 9 ετικέτες. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά LSUBX: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα LPWS2: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες εξέτασης μιας χρήσης L2AW1-3: Δοχεία στήριξης αλλεργιογόνων (με γραμμικό κώδικα) L2AW1: με σειριακό κώδικα 1 33 L2AW2: με σειριακό κώδικα 34 66 L2AW3: με σειριακό κώδικα 67 99 L2ATC: Καπάκια σωλήνων αλλεργιογόνων L2ATS: Διαφράγματα σωλήνων αλλεργιογόνων L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος (16 100 mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης του δείγματος Συγκεκριμένα αλλεργιογόνα και ομάδες μεικτών αλλεργιογόνων Τα ειδικά αλλεργιογόνα είναι συσκευασμένα και πωλούνται σε μονάδες των 40 και 20 εξετάσεων που περιέχουν 2,75 ml και 1,75 ml, αντίστοιχα. Οι ομάδες μειγμάτων αλλεργιογόνων είναι συσκευασμένες και πωλούνται μόνο σε μονάδες των 40 εξετάσεων που περιέχουν 2,75 ml η καθεμία. Κάθε σωληνάριο αλλεργιογόνου περιέχει ειδικά αλλεργιογόνα ή μείγμα αλλεργιογόνων σε υπόστρωμα ρυθμιστικού διαλύματος πρωτεϊνικής βάσης, με συντηρητικό. Μην τα καταψύχετε. Αποθηκεύστε τα στο ψυγείο: σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης που σημειώνεται στην ετικέτα. Μην τα χρησιμοποιήσετε εάν παρατηρηθούν σημάδια μικροβιακής μόλυνσης, όπως η θολερότητα. Τα ειδικά αλλεργιογόνα και οι ομάδες μειγμάτων αλλεργιογόνων είναι κατάλληλα για χρήση στα συστήματα IMMULITE 2000 και IMMULITE 2500. Για την πλήρη λίστα και τους αριθμούς καταλόγου, παρακαλούμε δείτε τον Κατάλογο Εξετάσεων 3gAllergy Ειδικά Αλλεργιογόνα. Χρειάζονται επίσης: Δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δείγματα ελέγχου ποιότητας. Διαδικασία της Ανάλυσης Αμέσως πριν τη μέτρηση του χαμηλού ρυθμιστή ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4, ολοκληρώστε τα ακόλουθα βήματα: 1 Εβδομαδιαίος διαγνωστικός Καθαρισμός Σωλήνα Αποβλήτων, όπως περιγράφεται στο Εγχειρίδιο Λειτουργίας. 2 Ημερήσιος διαγνωστικός Καθαρισμός Ληπτών, όπως περιγράφεται στο Εγχειρίδιο Λειτουργίας. 3 Έκπλυση του συστήματος πέντε φορές, όπως περιγράφεται στο Εγχειρίδιο Λειτουργίας. 4 Καθαρίστε με το χέρι το εξωτερικό του ρύγχους λήπτη νερού με 70% ισοπροπυλική αλκοόλη. Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000. Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. 14 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23)

Φόρτωση αλλεργιογόνων 1 Επιλέξτε μια ανοικτή θέση στο δίσκο αντιδραστηρίων μέσω του λογισμικού. 2 Αντικαταστήστε τα καπάκια στους σωλήνες αλλεργιογόνων με διαφράγματα. Μην αναστρέφετε το σωλήνα αλλεργιογόνου μετά την τοποθέτηση του διαφράγματος. 3 Τοποθετήστε τους σωλήνες αλλεργιογόνων που περιέχουν τα ειδικά αλλεργιογόνα IMMULITE 2000, συγκεκριμένες ομάδες αλλεργιογόνων, αντισώματα ρυθμιστή ειδικής IgG 4 και/ή αντισώματα ελέγχου ειδικής IgG 4 στο δοχείο στήριξης αλλεργιογόνων, με τους γραμμικούς κώδικες στραμμένους προς την ανοικτή πλευρά του δοχείου. 4 Κλείστε το δοχείο και πραγματοποιήστε σάρωση των γραμμικών κωδικών αλλεργιογόνων με τον σαρωτή απεικόνισης χειρός. 5 Μετά την ολοκλήρωση της σάρωσης, φορτώστε το δοχείο στήριξης των αλλεργιογόνων στο δίσκο αντιδραστηρίων. 6 Επαναλάβετε τη διαδικασία για να φορτώσετε και τα υπόλοιπα δοχεία στήριξης αλλεργιογόνων. Το δοχείο στήριξης των αλλεργιογόνων πρέπει να περάσει από σάρωση πριν την εγκατάστασή του στον αναλυτή ώστε να εξασφαλιστεί η σωστή λειτουργία του αναλυτή. Η αφαίρεση ή αντικατάσταση φιαλιδίων από το δοχείο αλλεργιογόνων απαιτεί νέα σάρωση του δοχείου με το σαρωτή γραμμικού κώδικα ώστε να ενημερωθούν οι σχετικές πληροφορίες με τα αλλεργιογόνα. Χρονικό διάστημα επαναρύθμισης της καμπύλης: 2 εβδομάδες. Δείγματα Ελέγχου Ποιότητας: Οι οροί ελέγχου που παρέχονται με τη συσκευασία θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως υλικό ποιοτικού ελέγχου για την παρακολούθηση της επίδοσης της ανάλυσης. Ανατρέξτε στο εσώκλειστο των ορών ελέγχου για τα επίπεδα συγκεντρώσεων. Αναμενόμενες τιμές Εξετάστηκαν συνολικά 160 δείγματα φαινομενικά υγιών ατόμων για 14 ειδικά αλλεργιογόνα με χρήση της μεθόδου IMMULITE 2000 ειδικό αλλεργιογόνο IgG 4. Τα αποτελέσματα μεταφέρθηκαν σε πίνακα και παρουσιάζονται στο γράφημα. (Βλ. γράφημα Expected Values.) Θεωρείστε αυτά τα όρια σαν οδηγούς μόνο. Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθορίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Η οριστική κλινική διάγνωση δεν πρέπει να βασίζεται αποκλειστικά στο in vitro αποτέλεσμα του ειδικού αλλεργιογόνου IgG 4. Ο ιατρός θα πρέπει να καταλήξει σε διάγνωση μόνον αφού αξιολογήσει όλα τα κλινικά και εργαστηριακά ευρήματα. 11 Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό/πλάσματος μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, μπορεί να εμφανιστούν πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Δείτε παρακάτω τους πίνακες και τα γραφικά που αναπαριστούν την απόδοση της εξέτασης. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε µg/l. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Εύρος μέτρησης: 200 50 000 µg/l (WHO 67/97). IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23) 15

Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ) Χολερυθρίνη: Η παρουσία συνδεδεμένης και έμμεσης χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 522 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3 000 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 22 εθελοντές σε απλούς πλαστικούς ορού, ηπαρινισμένους, EDTA και Becton Dickinson SST σωλήνες κενού. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν με τη μέθοδο IMMULITE 2000 ειδικό αλλεργιογόνο IgG 4, με τα ακόλουθα αποτελέσματα: (Ηπαρίνης πλαστικός) = 1,00 (Ορού πλαστικός) 153 µg/l r = 0,999 (EDTA πλαστικός) = 0,93 (Ορού πλαστικός) + 12,7 µg/l r = 0,996 (SST πλαστικός) = 0,99 (Ορού πλαστικός) + 5,91 µg/l r = 0,998 Μέσοι όροι: 9 045 µg/l (Ορού πλαστικός) 8 905 µg/l (Ηπαρίνης πλαστικός) 8 400 µg/l (EDTA πλαστικός) 8 955 µg/l (SST πλαστικός) Σύγκριση της Μεθόδου: Δείγματα που συλλέχθηκαν από δύο άτομα, τα οποία υποβλήθηκαν σε ανοσοθεραπεία με I1 (μέλισσα) και I3 (κίτρινη μέλισσα), αντίστοιχα, αναλύθηκαν με χρήση των μεθόδων IMMULITE 2000 ειδικό αλλεργιογόνο IgG 4 και ImmunoCAP 100. (Βλ. γράφημα "Method Comparison"). Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. www.siemens.com/diagnostics Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Alergenowospecyficzne IgG 4 Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do ilościowego oznaczenia alergenowo specyficznej IgG 4 w ludzkiej surowicy lub osoczu (EDTA lub heparynowym), pomocny w diagnostyce chorób alergicznych przebiegających z udziałem IgG. Numery katalogowe: L2KG42 (200 testów), L2KG46 (600 testów) Kod Testu: SP4 Kolor: Jasno niebieski Wprowadzenie Wśród podklas IgG, przeciwciała IgG 4 pozostają obiektem badań w przebiegu chorób alergicznych ze względu na niepowtarzalną monowalentność i możliwość działania w charakterze przeciwciał blokujących antygen w trakcie terapii odczulającej. 14,15 In-vitro pomiary specyficznych przeciwciał IgG 4 są często wykorzystywane dla określenia korelacji pomiędzy poziomem odpowiedzi leczonego i ekspozycją na krytyczny alergen (antygen). Pewne zaburzenia, oparte na reakcji alergicznej: skórne, oddechowe lub przewodu pokarmowego, są badane przy zastosowaniu oznaczeń alergenowo specyficznych IgG 4 /IgG jako wskaźnika ekspozycji na alergen i odpornościowej reakcji uczuleniowej. 1-4 Podobnie, osoby poddane immunoterapii często wykazują niezwykły wzrost IgG 4, zwłaszcza w trakcie drugiego roku leczenia. 5 O ile jednak nasilenie odpowiedzi odpornościowej może być zależne od schematu dawkowania w leczeniu, o tyle związek ze skutecznością leczenia nie został dotychczas ustalony. 6,7,16 16 IMMULITE 2000 Allergen-Specific IgG 4 (PIEL2KG4-4 {9}, 2009-03-23)