Free Beta HCG. For use on IMMULITE 2000 systems

Free Beta HCG For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 Free Beta HCG English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of free β-hcg subunit in serum. Catalog Numbers: L2KFB2 (200 tests), L2KFB6 (600 tests) Test Code: FBC Color: Violet Summary and Explanation Human chorionic gonadotropin (HCG) is a glycoprotein hormone normally found in blood and urine only during pregnancy. It is secreted by placental tissue, beginning with the primitive trophoblast, almost from the time of implantation, and serves to support the corpus luteum during the early weeks of pregnancy. HCG or HCG-like material is also produced by a variety of trophoblastic and nontrophoblastic neoplasia. 1,3,4,10 Intact HCG is a 39,500 dalton molecule composed of two nonidentical subunits, α and β, that are bound to each other in a noncovalent manner. These subunits can also occur in a free, or unbound, form. 6,8 Only intact HCG has biological activity. The HCG α subunit is structurally identical to the α subunit of the homologous pituitary glycoprotein hormones, luteinizing hormone, follicle stimulating hormone and thyroid stimulating hormone. The β subunit is specific for each of these hormones, and confers upon them their differing biological activities. The β subunits of HCG and luteinizing hormone, however, are structurally quite similar, accounting for the essentially identical biological activities of these two hormones. 6 Measurements of free β-hcg levels have been found to aid in the diagnosis and monitoring of trophoblastic diseases (moles, choriocarcinoma) and certain testicular tumors, where the ratios of the free β subunit to intact HCG can be quite high. Occasionally, tumors are found to secrete only free β-hcg subunit, and virtually no intact HCG can be detected. 5,7,9 Application in diagnosis and monitoring of tumor recurrence requires high sensitivity in the assay's low end, and careful interpretation is required (see Limitation section). IMMULITE 2000 Free Beta HCG is not applicable for this clinical utility. Measurements of free β-hcg levels may also have value in the early monitoring of the outcome of in vitro fertilization procedures. 2 Maternal serum free β-hcg assessment is reported to have significant utility in firstand second-trimester prenatal screening for Down syndrome and other chromosomal anomalies. A first-trimester combination of maternal age, serum PAPP-A and fetal nuchal translucency (NT) measurements might substantially increase the efficiency of prenatal screening compared to second-trimester screening; using this approach, various investigators have reported detection rates for Down syndrome of 85 to 90 percent at a 5 percent false-positive rate. 12,13 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Free Beta HCG is a solid-phase, two-site sequential chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-free β-hcg antibody. The liquid phase consists of two reagents: 1) protein buffer matrix and 2) alkaline phosphate (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal goat anti-free β- HCG antibody in buffer. In the first cycle, the patient sample and the buffer are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, free β-hcg in the sample binds to monoclonal murine anti-free β-hcg antibody on the bead. Unbound sample is then removed by centrifugal washes. In the second cycle, the enzyme conjugated polyclonal goat anti-free β- HCG antibody is added to the original reaction tube for another 30-minute incubation. The enzyme conjugated polyclonal goat anti-free β-hcg antibody binds to immobilized free β-hcg to form the antibody sandwich complex. The unbound enzyme conjugate is removed by 2 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24)

centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Time to First Result: 65 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Free Beta HCG has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 5 µl serum. Storage: 7 days at 2 8 C or longer at 20 C. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Dilution of High Samples: Samples expected to have free β-hcg levels above the assay's reportable range should be diluted with HCG Sample Diluent (L2CGZ) before assay. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Free Beta HCG Bead Pack (L2FB12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-free β-hcg antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KFB2: 1 pack. L2KFB6: 3 packs. Free Beta HCG Reagent Wedge (L2FBA2) With barcode. 11.5 ml of protein buffer matrix. 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal goat anti-free β-hcg antibody in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KFB2: 1 wedge. L2KFB6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Free Beta HCG Adjustors (LFBL, LFBH) Two vials (Low and High) of lyophilized free β-hcg in a human serum-based matrix, with preservative. Reconstitute each vial with 3.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 30 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KFB2: 1 set. L2KFB6: 2 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24) 3

Kit Components Supplied Separately HCG Sample Diluent (L2CGZ) For the on-board dilution of high samples. 50 ml of concentrated (ready-to-use) HCG-free human serum. Storage: 30 days (after opening) at 2 8 C or 6 months (aliquotted) at 20 C. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 x 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2CGZ: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LFBCM: Tri-level, human serum based control module containing free β-hcg Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of free beta HCG. Expected Values The reference range for healthy males, nonpregnant females and postmenopausal females is expected to be less than the assay s lower reportable limit of 2 ng/ml. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitation Notice that the lower reportable limit of the assay is 2 ng/ml and it is generally recognized that a free beta HCG assay should have a lower detection limit of < 0.1 ng/ml for an application in monitoring and detection of trophoblastic and testicular tumors. Thus, the assay is not applicable for this clinical utility. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml, where 1 ng/ml of free β-hcg is equivalent to 1 miu/ml of free β-hcg in terms of the World Health Organization's First International Reference Preparation of Chorionic Gonadotrophin Beta Subunit Human, number 75/551 (1st IRP 75/551). Unless otherwise noted, all results were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clotpromoting additives. Reportable Range: 2 to 200 ng/ml Analytical Sensitivity: 1 ng/ml High-dose Hook Effect: None up to at least 133,735 ng/ml Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table.) 4 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24)

Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three free β-hcg solutions (50, 500 and 1,500 ng/ml) were assayed. (See "Recovery" table.) Specificity: The antibody is highly specific for the free β subunit of HCG. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 600 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 22 volunteers into serum, lithium-heparin, EDTA and Becton Dickinson SST plastic vacutainer tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of Free β-hcg, to obtain values throughout the reportable range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 Free β-hcg procedure. (Li Heparin) = 0.88 (Serum) + 3.05 ng/ml r = 0.985, n = 22 (EDTA) = 0.89 (Serum) + 2.02 ng/ml r = 0.983, n = 22 (SST) = 0.99 (Serum) + 0.95 ng/ml r = 0.982, n = 22 Means: 91.1 ng/ml (Serum) 83.3 ng/ml (Li Heparin) 82.8 ng/ml (EDTA) 91.1 ng/ml (SST) Method Comparison: The assay was compared to a commercially available Free Beta HCG assay (Kryptor) on 395 samples. (Concentration range: approximately 5.7 to 197 ng/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.10 (Kryptor) 0.25 ng/ml r = 0.985 Means: 45.8 ng/ml (IMMULITE 2000) 41.7 ng/ml (Kryptor) References 1) Clayton L, Tyrey L, Weed JC Jr, Hammond CB. Endocrine aspects of trophoblastic neoplasia. J Reprod Med 1981;26:192-9. 2) Cole LA, Restrepo-Candelo H, Lavy G, Decherney A. HCG free β-subunit an early marker of outcome of in vitro fertilization clinical pregnancies. J Clin Endocrinol Metab 1987;64:1328-30. 3) Kohorn EI. Hydatidiform mole and gestational trophoblastic disease in southern Connecticut. Obstet Gynecol 1982;59:78-84. Erratum: the first diagram belongs with the caption to Figure 3, and vice versa. 4) Kosasa TS. Measurement of human chorionic gonadotropin. J Reprod Med 1981;26:201-6. 5) Light PA, Forster JP, Felton T, Eckert H, Tovery KC. Molecular heterogeneity in chorionic gonadotropin in some testicular cancer patients. Lancet 1983;1:1284. 6) Norman RJ, Buck RH, De Medeiros SF. Measurement of human chorionic gonadotropin (hcg): indications and techniques for the clinical laboratory. Ann Clin Biochem 1990;27:183-94. 7) Ozturk M, Berkowitz R, Goldstein D, Bellet D, Wands JR. Differential production of human chorionic gonadotropin and free subunits in gestational trophoblastic disease. Am J Obstet Gynecol 1988;158:193-8. 8) Pierce JG, Parsons TF. Glycoprotein hormones: structure and function [review]. Ann Rev Biochem 1981;50:465-95. 9) Saller B, Clara R, Spottl G, Siddle K, Mann K. Testicular cancer secretes intact human choriogonadotropin (hcg) and its free β-subunit: evidence that hcg (+hcg-β) assays are the most reliable in diagnosis and follow-up. Clin Chem 1990;36:234-9. 10) Vaitukaitis JL. Human chorionic gonadotropin a hormone secreted for many reasons. N Eng J Med 1979;301:324-6. 11) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. 12) Bindra R, et al. One-stop clinic for assessment of risk for trisomy 21 at 11-14 weeks: a prospective study of 15,030 pregnancies. Ultrasound Obstet Gynecol 2002;3:219-25. 13) Wald NJ, Hackshaw AK. Advances in antenatal screening for Down syndrome. Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 2000;14(4):563-80. Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24) 5

Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 2.31 0.14 6.1% 0.26 11.3% 2 15.3 0.56 3.7% 1.38 9.0% 3 24.5 0.72 2.9% 1.59 6.5% 4 34.3 1.13 3.3% 2.57 7.5% 5 59.0 1.49 2.5% 4.28 7.3% 6 106 3.7 3.5% 9.51 9.0% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 8 in 8 5 48.1 4 in 8 23.6 24.1 98% 2 in 8 12.2 12.0 102% 1 in 8 5.90 6.01 98% 2 8 in 8 69.7 4 in 8 35.7 34.9 102% 2 in 8 17.7 17.4 102% 1 in 8 8.50 8.71 98% 3 8 in 8 79.8 4 in 8 40.5 39.9 102% 2 in 8 20.3 20.0 102% 1 in 8 9.90 10.0 99% 4 8 in 8 92.2 4 in 8 46.7 46.1 101% 2 in 8 23.6 23.1 102% 1 in 8 11.5 11.5 100% 5 8 in 8 117 4 in 8 56.2 58.4 96% 2 in 8 27.4 29.2 94% 1 in 8 14.0 14.6 96% 6 8 in 8 201 4 in 8 94.8 101 94% 2 in 8 44.3 50.3 88% 1 in 8 22.6 25.1 90% Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 2.87 A 5.06 5.23 97% B 30.8 27.7 111% C 87.3 77.7 112% 2 7.71 A 10.1 9.82 103% B 35.9 32.3 111% C 93.3 82.3 113% 3 13.7 A 16.0 15.5 103% B 42.5 38.0 112% C 105 94.6 111% 4 20.6 A 21.5 22.1 97% B 46.8 44.6 105% C 105 94.6 111% 5 33.6 A 34.2 34.4 99% B 60.7 56.9 107% C 117 107 109% 6 40.5 A 40.3 41.0 98% B 65.5 63.5 103% C 120 113 106% Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Specificity Compound 1 ng/ml Added 2 Apparent ng/ml 3 % Crossreactivity 4 HCG α subunit 3,500 0.52 ND Intact HCG 10,200 0.24 ND FSH 100,000 ND ND LH 100,000 0.17 ND TSH 150,000 ND ND ND: not detectable. 5 6 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24)

Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 Zjevná koncentrace, 4 % Zkřížená reaktivita, 5 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 Εμφανής συγκέντρωση, 4 % Διασταυρ.Αντίδραση, 5 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 Zmierzona, 4 % reaktywności Krzyżowej, 5 ND: Nieoznaczlne. Method Comparison IMMULITE 2000 Free Beta HCG 200 150 100 50 0 0 50 100 150 200 Kryptor, ng/ml (IML 2000) = 1.10 (Kryptor) 0.25 ng/ml r = 0.985 English. Free Beta HCG. Česky. Volný Beta HCG. Ελληνικά. Ελεύθερη βήτα HCG. Polski. Wolna Beta HCG. Česky IMMULITE 2000 Volný Beta HCG Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace volné beta podjednotky HCG v séru. Katalogová čísla: L2KFB2 (200 stanovení), L2KFB6 (600 stanovení) Kód metody: FBC Barva: Fialová Shrnutí a vysvětlení Lidský choriogonadotropin (HCG) je glykoproteinový hormon, který se v krvi a moči vyskytuje pouze během těhotenství. Je tvořen v tkáni placenty počínaje jednoduchým trofoblastem téměř od okamžiku implantace. V prvních týdnech těhotenství podporuje žluté tělísko. HCG nebo látka podobná HCG se rovněž tvoří v různých trofoblastických a netrofoblastických novotvarech. 1,3,4,10 Intaktní HCG má molekulovou hmotnost 39 500 daltonů a je tvořen dvěma nestejnými podjednotkami, alfa a beta, které jsou navzájem vázané nekovalentním způsobem. Tyto podjednotky se rovněž můžou vyskytovat ve volné, nenavázané formě. 6,8 Biologickou aktivitou se vyznačuje pouze intaktní HCG. Alfa podjednotka HCG je strukturálně totožná s alfa podjednotkou homologických glykoproteinových hormonů hypofýzy, luteinizačního hormonu, folikulostimulačního hormonu a tyreotropinu. Beta podjednotka všech těchto hormonů je specifická a určuje jejich různou biologickou aktivitu. Beta podjednotky HCG a luteinizačního hormonu jsou ale strukturálně dosti podobné a proto mají tyto dva hormony v podstatě stejnou biologickou aktivitu. 6 Stanovení volné beta podjednotky HCG pomáhá při určení diagnózy a monitorování trofoblastických onemocnění (mateřská znaménka, choriokarcinomy) a některých nádorů varlete, kdy může být poměr volné beta podjednotky k celému HCG celkem vysoký. V některých případech nádory vylučují pouze volnou beta podjednotku HCG a téměř žádný celý HCG se nedá zjistit. 5,7,9 A test na volnou beta podjednotku HCG na analyzátorech IMMULITE 2000 není uplatitelný u tohoto klinického použití. Měření hodnot koncentrace volné beta podjednotky HCG může být také vhodné při kontrole výsledků oplodnění in vitro. 2 Stanovení volné beta podjednotky HCG v séru matky má velký význam v prenatálním screeningu na Downův syndrom a ostatní chromozomální abnormality v prvním a druhém trimestru těhotenství. Kombinace určení stáří těhotenství, stanovení PAPP-A v séru a vyšetření fetálního šíjového projasnění (NT) v prvním trimestru může značně zvýšit účinnost prenatálního screeningu ve srovnání se screeningem v druhém trimestru. Někteří badatelé udávají míru odhalení Downova syndromu 85 až 90 procent při 5% falešně pozitivním výsledku. 12,13 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24) 7

Princip Stanovení Stanovení Volného Beta HCG na analyzátorech IMMULITE 2000 je oboustranná sekvenční chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena monoklonální myší protilátkou proti volné beta podjednotce HCG. Tekutá fáze se sestává ze dvou činidel: 1) proteinová pufrová matrice a 2) alkalický fosfát (ze střeva telete) konjugovaných polyklonální kozí protilátkou proti volné beta podjednotce HCG v pufru. V prvním cyklu, vzorky a pufr jsou inkubovány společně s potaženými kuličkami po dobu 30 minut. Během této doby se volná beta podjednotka HCG ve vzorku váže k monoklonální myší protilátce proti volné beta podjednotce HCG na kuličce. Nevázaný vzorek je poté odstraněn odstředivým promýváním. Ve druhém cyklu, enzymem konjugovaná polyklonální kozí protilátka proti volné beta podjednotce HCG je přidána do původní reakční zkumavky po dobu dalších 30 minut. Enzymen konjugovaná polyklonální kozí protilátka proti beta podjednotce HCG se váže k imobilizované volné beta podjednotce HCG a vytváří protilátkový sandvičový komplex. Nenavázaný enzymový konjugát je odstraněn odstředivým promýváním. Nakonec, chemiluminescentní substrát je přidán do reakční zkumavky a signál je stanoven úměrně k vázanému enzymu. Inkubační cykly: 2 30 minut. Čas do prvního výsledku: 65 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Volného Beta HCG na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku: 5 µl séra. Skladování: 7 dní při teplotě 2 8 C nebo déle při teplotě 20 C. Zabraňte opakovanému zmrazování a rozmrazování. Ředění koncentrovaných vzorků: Vzorky, u kterých se předpokládá koncentrace volných beta podjednotek HCG nad kalibračním pracovním rozsahem stanovení je třeba před stanovením zředit HCG diluentem vzorků (L2CGZ). Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. 8 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24)

Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. Volný Beta HCG zásobník s kuličkami (L2FB12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti volné beta podjednotce HCG. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KFB2: 1 balení. L2KFB6: 3 balení Volný Beta HCG reagencie (L2FBA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml bílkovinové pufrované matrice. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální kozí protilátkou proti volné beta podjednotce HCG v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KFB2: 1 nádobka. L2KFB6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Volný Beta HCG kalibrátory (LFBL, LFBH) Dvě ampulky s vysokou a nízkou koncentrací lyofilizované volné beta podjednotky HCG v matrici na bázi lidského séra, s konzervačním prostředkem. Každou ampulku rekonstituujte přidáním 3,0 ml destilované nebo deionizované vody. Míchejte jemným kroužením nebo překlápěním až do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Stabilní 30 dní po rekonstituci při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při teplotě 20 C. L2KFB2: 1 sada. L2KFB6: 2 sady. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť HCG diluent vzorků (L2CGZ) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků. 50 ml koncentrovaného (připraveného k použití), lidského séra bez HCG. Skladování: 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při teplotě 20 C. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2CGZ: 5 štítků L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků (16 100 mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků LFBCM: Trojůrovňový kontrolní modul na bázi lidského séra s obsahem volné beta podjednotky HCG Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) volné beta podjednotky HCG. Očekávané hodnoty Referenční rozmezí pro zdravé muže, netěhotné a ženy po menopauze bývá menší než uvedené spodní limity stanovení 2 ng/ml. Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Povšimněte si že, spodní pracovmí limit stanovení je 2 ng/ml a je všeobecně IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24) 9

uznávané, že stanovení na volnou beta podjednotku HCG by mělo mít spodní limity detekce u aplikací pro monitoring a detekci trofoblastických a testikulárních tumorů menší než 0,1 ng/ml. A tedy toto stanovení není uplatnitelné pro klinické použití. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml, přičemž 1 ng/ml volné beta podjednotky HCG odpovídá 1 miu/ml volné beta podjednotky HCG ve smyslu First International Reference Preparation of Chorionic Gonadotrophin Beta Subunit Human, číslo 75/551 (1st IRP 75/551) Světové zdravotnické organizace. Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér a přísad podporujících srážlivost. Pracovní rozsah: 2 až 200 ng/ml Analytická citlivost: 1 ng/ml High-dose Hook Effect: Nejméně do 133 735 ng/ml žádný. Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka "Přesnost".) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Viz tabulka "Linearita".) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků volné beta podjednotky HCG (50, 500 a 1 500 ng/ml) v poměru 1:19. (Viz tabulka "Zpětná výtěžnost".) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči volné beta podjednotce HCG. (Viz tabulka "Specificita".) Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 600 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K zhodnocení vlivu alternativního typu vzorku byly odebrány vzorky krve 22 dobrovolníků do obyčejných, lithium-heparinových, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Do úměrných objemů odpovídajících vzorků byla v různých koncentracích přidána volná beta podjednotka HCG, čímž byl pokryt celý kalibrační rozsah, a vzorky byly následně stanoveny pomocí testu na volnou beta podjednotku HCG na analyzátorech IMMULITE 2000. (Li Heparin) = 0,88 (Sérum) + 3,05 ng/ml r = 0,985, n = 22 (EDTA) = 0,89 (Sérum) + 2,02 ng/ml r = 0,983, n = 22 (SST) = 0,99 (Sérum) + 0,95 ng/ml r = 0,982, n = 22 Střední hodnoty: 91,1 ng/ml (Sérum) 83,3 ng/ml (Li Heparin) 82,8 ng/ml (EDTA) 91,1 ng/ml (SST) Srovnání metody: Snanovení bylo porovnáno s komerčně dostupným stanovením na volnou beta podjednotku HCG (Kryptor) u 395 vzorků. (Koncentrační rozsah: přibližně 5,7 až 197 ng/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,10 (Kryptor) 0,25 ng/ml r = 0,985 10 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24)

Střední hodnoty: 45,8 ng/ml (IMMULITE 2000) 41,7 ng/ml (Kryptor) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Ελεύθερη βήτα HCG Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της ελεύθερης υπομονάδας β-hcg στον ορό. Αριθμοί καταλόγου: L2KFB2 (200 εξετάσεις), L2KFB6 (600 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: FBC Χρώμα: Βιολετί Περίληψη και επεξήγηση Η ανθρώπινη χοριακή γοναδοτροπίνη (HCG) είναι μια ορμόνη γλυκοπρωτεΐνης, η οποία εντοπίζεται κατά κανόνα στο αίμα και τα ούρα μόνον κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης. Εκκρίνεται από τον ιστό του πλακούντα, ξεκινώντας από την πρώιμη τροφοβλάστη σχεδόν κατά τη στιγμή της σύλληψης και χρησιμεύει στην υποστήριξη του ωχρού σωματίου κατά τις πρώτες εβδομάδες της κύησης. Υλικά HCG ή παρόμοια παράγονται επίσης σε διάφορες τροφοβλαστικές και μη νεοπλασίες. 1,3,4,10 Η ακέραιη HCG έχει μοριακή μάζα 39 500 dalton και το μόριό της αποτελείται από δύο μη ταυτόσημες υπομονάδες α και β, οι οποίες συνδέονται μεταξύ τους μη ισοσθενώς. Αυτές οι υπομονάδες εμφανίζονται επίσης σε ελεύθερη ή μη δεσμευμένη μορφή. 6,8 Μόνον η ακέραιη HCG έχει βιολογική δραστηριότητα. Η υπομονάδα HCG α είναι δομικά όμοια με την υπομονάδα α των ομόλογων ορμονών γλυκοπρωτεΐνης και της ωχρινοτρόπου ορμόνης της υπόφυσης, της ορμόνης διέγερσης ωοθυλακίου και της ορμόνης διέγερσης του θυρεοειδούς. Η υπομονάδα β είναι ειδική σε κάθε μία από αυτές τις ορμόνες και τους προσδίδει τις διακριτές βιολογικές δραστηριότητές τους. Ωστόσο, οι υπομονάδες β της HCG και της ωχρινοτρόπου ορμόνης διαθέτουν παρόμοια δομή, και ευθύνονται για τις ουσιαστικά ταυτόσημες βιολογικές δραστηριότητες αυτών των δύο ορμονών. 6 Ανακαλύφθηκε ότι οι μετρήσεις των επιπέδων της β-hcg συμβάλλουν στη διάγνωση και παρακολούθηση τροφοβλαστικών νόσων (σπίλοι, χοριοκαρκίνωμα) και ορισμένων όγκων των όρχεων, όπου οι αναλογίες της υπομονάδας β προς την ακέραιη HCG μπορεί να είναι αρκετά υψηλές. Ανακαλύφθηκε ότι σε ορισμένες περιπτώσεις, οι όγκοι είναι δυνατό να εκκρίνουν μόνον ελεύθερη υπομονάδα β- HCG, χωρίς να εντοπίζεται ακέραιη HCG. 5,7,9 Η εφαρμογή στη διάγνωση και παρακολούθηση υποτροπιαζόντων όγκων απαιτεί υψηλή ευαισθησία στο χαμηλό άκρο της ανάλυσης και προσεκτική ερμηνεία (βλ. τμήμα Περιορισμός). Η IMMULITE 2000 Ελεύθερη β-hcg δεν μπορεί να εφαρμοστεί για αυτή την κλινική χρήση. Επιπλέον, οι μετρήσεις των επιπέδων ελεύθερης β-hcg είναι δυνατό να συνεισφέρουν στην πρώιμη παρακολούθηση του αποτελέσματος διαδικασιών in vitro γονιμοποίησης. 2 Η εξέταση της ελεύθερης β-hcg στον ορό της μητέρας αναφέρεται ως ιδιαίτερα χρήσιμη στην προγεννητική εξέταση πρώτου και δεύτερου τριμήνου για σύνδρομο Down και άλλες χρωμοσωμικές ανωμαλίες. Ο συνδυασμός της ηλικίας της μητέρας, ορού PAPP-A και των μετρήσεων αυχενικής ημιδιαφάνειας (NT) του εμβρύου κατά το πρώτο τρίμηνο μπορούν να αυξήσουν σημαντικά τις επιδόσεις της προγεννητικής εξέτασης σε σύγκριση με αυτή του δευτέρου τριμήνου. Με χρήση αυτής της προσέγγισης, διάφοροι ερευνητές έχουν αναφέρει τιμές εντοπισμού του συνδρόμου Down ύψους 85 έως 90 τοις εκατό με τιμές λάθους 5 τοις εκατό. 12,13 Αρχή της διαδικασίας Το IMMULITE 2000 Ελεύθερη βήτα HCG είναι μια ξηρής φάσης, δύο σημείων, IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24) 11

αλληλοδιάδοχη, χημειοφωταυγής, ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεή φάση (σφαιρίδιο) επικαλύπτεται από μονοκλωνικό αντίσωμα αντιελεύθερης β-hcg ποντικού. Η υγρή φάση συνίσταται από δύο αντιδραστήρια: 1) υπόστρωμα πρωτεϊνικού ρυθμιστικού διαλύματος και 2) αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε πολυκλωνικό αντί-ελεύθερης β-hcg αντίσωμα κατσίκας στο ρυθμιστικό διάλυμα. Στον πρώτο κύκλο, το δείγμα του ασθενούς και το ρυθμιστικό διάλυμα επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο στρώμα για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, η ελεύθερη β-hcg στο δείγμα προσδένεται στο μονοκλωνικό αντιγόνο αντι-ελεύθερης β-hcg πάνω στο σφαιρίδιο. Το μη συνδεδεμένο δείγμα στη συνέχεια απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Στον δεύτερο κύκλο, το συζευγμένο με το ένζυμο αντίσωμα αντι-ελεύθερης β-hcg προστίθεται στον αρχικό σωλήνα της αντίδρασης για μια άλλη επώαση των 30 λεπτών. Το συνδεδεμένο ένζυμο σε πολυκλωνικό αντί-ελεύθερης β-hcg αντίσωμα κατσίκας προσδένεται στην ακινητοποιημένη β-hcg για το σχηματισμό του σάντουιτς συμπλέγματος αντισωμάτων. Το μη συνδεδεμένο ένζυμο απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στον σωλήνα της αντίδρασης και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το δεσμευμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 2 x 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Το IMMULITE 2000 Ελεύθερη βήτα HCG δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Απαιτούμενος όγκος: 5 µl ορού. Φύλαξη: 7 ημέρες στους 2 8 C ή περισσότερο στους 20 C. Αποφύγετε την επανειλημμένη κατάψυξη/απόψυξη. Αραίωση υψηλών δειγμάτων: Τα δείγματα που αναμένεται να παρουσιάσουν τιμές ελεύθερης β-hcg άνω του εύρους αναφοράς της ανάλυσης θα πρέπει, πριν την ανάλυση, να αραιώνονται με το αραιωτικό δειγμάτων HCG (L2CGZ). Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). 12 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24)

Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων ελεύθερης βήτα HCG (L2FB12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι της ελεύθερης β-hcg. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KFB2: 1 συσκευασία. L2KFB6: 3 συσκευασίες. Δοχείο αντιδραστηρίου ελεύθερης βήτα HCG (L2FBA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml μήτρας πρωτεΐνης με ρυθμιστικό. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένης με πολυκλωνικό αντίσωμα κατσίκας κατά της ελεύθερης β- HCG σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KFB2: 1 δοχείο. L2KFB6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές ελεύθερης βήτα HCG (LFBL, LFBH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) λυοφιλοποιημένης ελεύθερης β-hcg σε μήτρα ανθρώπινου ορού με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου με 3,0 ml απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Αναμείξτε με απαλές κινήσεις ή με αναστροφή έως ότου το λυοφιλοποιημένο υλικό διαλυθεί πλήρως. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά την ανασύσταση ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KFB2: 1 σετ. L2KFB6: 2 σετ. Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά Αραιωτικό δείγματος HCG (L2CGZ) Για την αραίωση με το κατάλληλο σύστημα των δειγμάτων των ασθενών. 50 ml συμπυκνωμένου (έτοιμου προς χρήση) ανθρώπινου ορού δίχως HCG. Φύλαξη: 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. L2CGZ: 5 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος (16 x 100 mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος LFBCM: Τριών επιπέδων μονάδα ελέγχου από ανθρώπινο ορό με ελεύθερη β-hcg. Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. Διαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000. Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου ή απλά δείγματα τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) ελεύθερης β-hcg. Αναμενόμενες τιμές Το εύρος αναφοράς για τους υγιείς άρρενες, της μη κυοφορούσες γυναίκες και για τις γυναίκες που βρίσκονται μετά την εμμηνόπαυση αναμένεται να είναι IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24) 13

μικρότερο από το χαμηλότερο αναφερόμενο όριο των 2 ng/ml της ανάλυσης. Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να έχει τις δικές του τιμές αναφοράς. Περιορισμός Σημειώστε ότι το χαμηλότερο αναφερόμενο όριο της ανάλυσης είναι 2 ng/ml και αναγνωρίζεται γενικά ότι μια ανάλυση ελεύθερης β-hcg θα πρέπει να έχει ένα χαμηλότερο όριο ανίχνευσης < 0,1 ng/ml για μια εφαρμογή στον έλεγχο και την ανίχνευση των τροφοβλαστικών όγκων και των όγκων των όρχεων. Συνεπώς, η ανάλυση δεν μπορεί να εφαρμοστεί για αυτή την κλινική χρήση. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, μπορεί να εμφανιστούν πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml, όπου 1 ng/ml ελεύθερης β-hcg είναι ισότιμο με 1 miu/ml ελεύθερης β-hcg σύμφωνα με το έγγραφο First International Reference Preparation of Chorionic Gonadotrophin Beta Subunit Human, αριθμός 75/551 (1st IRP 75/551) της Παγκόσμιας Οργάνωσης Υγείας. Εκτός αν σημειώνεται διαφορετικά, όλα τα αποτελέσματα προέρχονται από δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους. Εύρος αναφοράς: 2 έως 200 ng/ml Αναλυτική ευαισθησία: 1 ng/ml High-dose επίδραση φαινομένου Hook: Δεν παρατηρείται έως τουλάχιστον τα 133 735 ng/ml Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ) Γραμμικότητα: Τα δείγματα αναλύθηκαν σε διάφορα διαλύματα. (Βλ. Πίνακα "Linearity" Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα ελεύθερης β-hcg (50, 500 και 1 500 ng/ml) και αναλύθηκαν. (Βλ. πίνακα "Recovery".) Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή εξειδίκευση στην ελεύθερη υπομονάδα β HCG. (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης (συνδεδεμένης και έμμεσης) σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 600 mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως 3 000 mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δειγμάτων, συλλέχθηκε αίμα από 22 εθελοντές σε πλαστικούς, απλού ορού, ηπαρινισμένους με λίθιο, EDTA και Becton Dickinson SST δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες. Ίσες ποσότητες των αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν με διάφορες συγκεντρώσεις ελεύθερης β-hcg, ώστε να ληφθούν τιμές καθ' όλο το εύρος αναφοράς της ανάλυσης, και στη συνέχεια 14 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24)

εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία της IMMULITE 2000 Ελεύθερη β-hcg. (Li Ηπαρίνη) = 0,88 (Ορός) + 3,05 ng/ml r = 0,985, n = 22 (EDTA) = 0,89 (Ορός) + 2,02 ng/ml r = 0,983, n = 22 (SST) = 0,99 (Ορός) + 0,95 ng/ml r = 0,982, n = 22 Μέσοι Όροι: 91,1 ng/ml (Ορός) 83,3 ng/ml (Li Ηπαρίνη) 82,8 ng/ml (EDTA) 91,1 ng/ml (SST) Σύγκριση της Μεθόδου: Η ανάλυση συγκρίθηκε με μια διαθέσιμη στο εμπόριο ανάλυση για την ελεύθερη β- HCG (Kryptor) σε 395 δείγματα. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 5,7 έως 197 ng/ml Βλέπε γράφημα). Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,10 (Kryptor) 0,25 ng/ml r = 0,985 Μέσοι Όροι: 45,8 ng/ml (IMMULITE 2000) 41,7 ng/ml (Kryptor) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. www.siemens.com/diagnostics Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Wolna Beta HCG Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia poziomu wolnej podjednostki β-hcg w surowicy. Numery katalogowe: L2KFB2 (200 testów) L2KFB6 (600 testów) Kod testu: FBC Kolor: Fioletowy Wprowadzenie Ludzka gonadotropina kosmówkowa (HCG) jest hormonem glikoproteinowym fizjologicznie występującym we krwi i moczu wyłącznie w okresie ciąży. Jest wydzielana przez tkankę łożyska, początkowo przez trofoblast nieomal od momentu inplantacji, a jej rola polega na podtrzymywaniu ciałka żółtego we wczesnych tygodniach ciąży. HCG i substancje podobne do HCG są produkowane również przez różne nowotwory pochodzenia trofoblastycznego i wywodzące się z innych tkanek. 1,3,4,10 Całkowita cząsteczka HCG ma masę 39 500 daltonów i jest zbudowana z dwóch różnych podjednostek: α i β, związanych ze sobą niekowalencyjnie. Podjednostki te mogą występować także w formie wolnej (niezwiązanej). 6,8 Wyłącznie całkowita cząsteczka HCG ma właściwości biologiczne. Podjednostka αhcg jest strukturalnie identyczna z podjednostką α homologicznych hormonów glikoproteinowych przysadki mózgowej, LH, FSH i TSH. Podjednostka β jest charakterystyczna dla poszczególnych hormonów i nadaje im ich własności biologiczne. Niemniej jednak podjednostki β-hcg i LH są bardzo podobne, co decyduje o zasadniczo identycznej aktywności biologicznej tych hormonów. 6 Oznaczenie poziomu wolnej podjednostki β-hcg znalazło zastosowanie w diagnozowaniu i monitorowaniu chorób trofoblastu (zaśniad groniasty, nabłoniak kosmówkowy złośliwy) i pewnych jąder, gdzie stosunek wolnej podjednostki β- HCG do całkowitej HCG może być wysoki Zdarza się, że nowotwory wydzielają wyłącznie wolną podjednostkę β-hcg, nie można wtedy oznaczyć całkowitej HCG. 5,7,9 IMMULITE 2000 Wolny Beta HCG nie może być stosowany w tych przypadkach klinicznych. Oznaczenia wolnej β-hcg mają także znaczenie we wczesnym monitorowaniu rezultatu zapłodnienia in vitro. 2 Zgodnie z piśmiennictwem ocena poziomu wolnej podjednostki β-hcg w krwi matki jest wysoce przydatna dla prenatalnych badań przesiewowych w kierunku zespołu Downa i innych chromosomalnych nienormalności. W pierwszym trymestrze ciąży poziomu wolnej β-hcg łącznie z IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24) 15

danymi o wieku matki, poziomie PAPP-A i wynikami pomiaru przezierności karkowej (NT) stanowią parametry dla prenatalnego badania przesiewowego o znacznie większej skuteczności niż badania w drugim trymestrze. Według różnych autorów wykrywalność zespołu Downa tą metodą wynosi od 85 do 90% przy 5% wyników fałszywie dodatnich. 12,13 Zasada testu IMMULITE 2000 Wolna Beta HCG jest immunoenzymatycznym, chemiluminescencyjnym, dwupunktowym, sekwencyjnym testem kanapkowym (imunometrycznym) fazy stałej. Faza stała (kulka) jest opłaszczona mysimi monoklonalnymi przeciwciałami przeciw wolnej podjednostce ß-HCG. Faza ciekła składa się z dwóch odczynników 1) buforu białkowego z macierzy i 2) alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cielęcia) sprzężonej z poliklonalnymi kozimi przeciwciałami przeciw wolnym podjednostkom ß-HCG. W pierwszym cyklu próbka od pacjenta i bufor są inkubowane razem z opłaszczoną kulką przez 30 minut. W tym czasie, wolne β-hcg w próbce wiążą się z mysimi monoklonalnymi przeciwciałami przeciw wolneym podjednostkom β-hcg na kulce Niezwiązana próbka jest usuwana przez przemywanie i wirowanie. W drugim cyklu, poliklonalne kozie przeciwciała przeciw wolnym podjednostkom β-hcg, skoniugowane z enzymem, są dodanane do oryginalnej probówki reakcyjnej na kolejne 30 minut inkubacji. Sprzężone z enzymem poliklonalne kozie przeciwciała przeciw wolnym podjednostkom β-hcg wiążą się do immobilizowanych β-hcg, tworząc kompleks kanapkowy. Niezwiązany koniugat jest usuwany przez przemywanie i wirowanie. Na końcu, do probówki reakcyjnej jest dodawany chemiluminescencyjny substrat. Generowany sygnał jest proporcjonalny do aktywności związanego enzymu Czas inkubacji: 2 x 30 minut. Czas do uzyskania pierwszych wyników: 65 minut Preparatyka próbek Zalecane jest ultrawirowanie próbek lipemicznych. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 Wolna β-hcg nie został określony. Wymagana Objętość Próbki: 5 µl surowicy. Przechowywanie Materiału: 7 dni w 2 8 C lub dłużej w 20 C (unikać rozmrażania i ponownego zamrażania próbek). Rozcieńczanie Próbek Wysokich: Próbki, w których oczekiwany poziom wolnej podjednostki β-hcg jest wyższy niż górna wartość zakresu odniesienia liniowości testu, powinny być przed oznaczeniem rozcieńczone ręcznie rozcieńczalnikiem HCG (L2CGZ). Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty- HCV. 16 IMMULITE 2000 Free Beta HCG (PIEL2KFB-3 {20}, 2009-09-24)