TrueScience RespiFinder Identification Panels

Transcript

1 TrueScience RespiFinder Identification Panels ΚΑΡΤΑ ΓΡΗΓΟΡΗΣ ΑΝΑΦΟΡΑΣ Για κατευθυντήριες οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια και το βιολογικό κίνδυνο, ανατρέξτε στο παράρτημα Safety στο πρωτόκολλο TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol (PN ). Για προειδοποιήσεις και προφυλάξεις, ανατρέξτε στο ένθετο TrueScience RespiFinder Identification Panels Product Insert (PN ). Για κάθε χημική ουσία, διαβάστε το φύλλο δεδομένων ασφαλείας (SDS) και ακολουθήστε τις διαδικασίες χειρισμού. Να φοράτε κατάλληλα προστατευτικά γυαλιά, ρουχισμό και γάντια. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις ομάδες εξετάσεων TrueScience RespiFinder Identification Panels, μεταβείτε στη διαδικτυακή τοποθεσία Για να κάνετε λήψη των εγχειριδίων χρήσης TrueScience RespiFinder Identification Panels, μεταβείτε στη διαδικτυακή τοποθεσία και, στη συνέχεια, επιλέξτε την καρτέλα Literature/Support. Αυτή η κάρτα γρήγορης αναφοράς περιλαμβάνει τις εξής ενότητες: Ομάδες εξετάσεων Περιγραφή και αρχές λειτουργίας προϊόντος Χρήση για την οποία προορίζεται Υποστήριξη Προτού ξεκινήσετε: εφάπαξ διαδικασίες Διαδικασία Ομάδες εξετάσεων Αυτή η κάρτα γρήγορης αναφοράς περιλαμβάνει τις εξής ενότητες TrueScience RespiFinder Identification Panels: Ομάδα εξετάσεων Φύλαξη TrueScience RespiFinder 15 Viral Identification Panel 50 εξετάσεις TrueScience RespiFinder 19 Pathogen Identification Panel 50 εξετάσεις Περιγραφή και αρχές λειτουργίας προϊόντος Ο προσδιορισμός TrueScience RespiFinder Identification Panels χρησιμοποιεί μια εξέταση πολλαπλού PCR για την ανίχνευση και τη διάκριση των παθογόνων που μπορούν να προκαλέσουν λοιμώξεις της αναπνευστικής οδού. Ο προσδιορισμός TrueScience RespiFinder Identification Panels περιλαμβάνει ένα συνδυαστικό βήμα αντίστροφης μεταγραφής/αντίδρασης PCR (για τη μετατροπή του ιικού RNA σε cdna και την ενίσχυση του στόχου DNA/cDNA), ένα βήμα υβριδοποίησης ιχνηθέτη, καθώς επίσης και ένα βήμα σύνδεσης/ενίσχυσης. Στον προσδιορισμό, περιλαμβάνεται ένας μάρτυρας Internal Amplification Control (IAC), με τη βοήθεια του οποίου γίνεται η διάκριση μεταξύ των πραγματικά αρνητικών δειγμάτων και των ψευδών αρνητικών δειγμάτων που προέρχονται από αποικοδόμηση νουκλεϊκών οξέων, αναστολή της αντίδρασης PCR ή σφάλματα χειρισμού. Οι στόχοι μπορούν να ανιχνευθούν μέσω ανάλυσης μεγέθους τμημάτων DNA, με χρήση τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης. Για περισσότερες πληροφορίες, ανατρέξτε στο πρωτόκολλο TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol (PN ). Ομάδα εξετάσεων Παθογόνοι μικροοργανισμοί που ανιχνεύτηκαν Αριθμός σετ ιχνηθετών στόχου Εύρος μεγέθους τμήματος που ορίζεται από τους ιχνηθέτες TrueScience RespiFinder 15 Viral Identification Panel TrueScience RespiFinder 19 Pathogen Identification Panel 14 ιοί RNA και 1 ιός DNA 15 συν μάρτυρας IAC 163 έως 498 νουκλεοτίδια 14 ιοί RNA, 1 ιός DNA και 4 βακτήρια 19 συν μάρτυρας IAC

2 Χρήση για την οποία προορίζεται Οι εξετάσεις TrueScience RespiFinder Identification Panels είναι ποιοτικές, πολυπαραμετρικές εξετάσεις που προορίζονται για την ταυτόχρονη ανίχνευση και ταυτοποίηση κοινών αναπνευστικών παθογόνων μικροοργανισμών από κεκαθαρμένα νουκλεϊκά οξέα. Το αρχικό δείγμα αντίδρασης είναι το ολικό νουκλεϊκό οξύ που έχει εκχυλιστεί και καθαριστεί από ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα, προϊόντα ρινικής αναρρόφησης, πτύελα και προϊόντα βρογχοκυψελιδικής έκπλυσης (BAL, broncho-alveolar lavages) από ασθενείς με πιθανολογούμενες λοιμώξεις της αναπνευστικής οδού. Η προετοιμασία των κλινικών δειγμάτων αποτελεί μια ξεχωριστή διαδικασία που δεν μπορεί να συμπεριληφθεί στις ομάδες εξετάσεων. Χρησιμοποιήστε τις κατάλληλες μεθόδους ή τα προϊόντα για το χειρισμό των δειγμάτων, καθώς και για την εκχύλιση και τον καθαρισμό των νουκλεϊκών οξέων. Οι ομάδες εξετάσεων TrueScience RespiFinder Identification Panels υποβοηθούν τη διάγνωση λοίμωξης της αναπνευστικής οδού, όταν χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με άλλα κλινικά και εργαστηριακά ευρήματα. Τα αρνητικά αποτελέσματα δεν υποδεικνύουν απαραίτητα την απουσία ιογενούς ή βακτηριακής λοίμωξης της αναπνευστικής οδού. Τα αρνητικά αποτελέσματα δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως μοναδικό κριτήριο για τη διάγνωση, τη θεραπεία ή άλλες αποφάσεις που αφορούν στην αγωγή. Τα θετικά αποτελέσματα δεν αποκλείουν συλλοίμωξη από άλλους παθογόνους μικροοργανισμούς. Ο παθογόνος ή οι παθογόνοι μικροοργανισμοί που ανιχνεύονται ενδέχεται να μην αποτελούν την καθοριστική αιτία της νόσου. Στην τελική διάγνωση, πρέπει να συνυπολογίζονται και άλλες εργαστηριακές εξετάσεις και αξιολογήσεις. Τα χαρακτηριστικά απόδοσης καθορίστηκαν με επικυρωμένες ομάδες εξετάσεων EQA από τη διαδικτυακή τοποθεσία Το προϊόν προορίζεται για χρήση από επαγγελματίες εργαστηρίων και με συγκεκριμένα όργανα και λογισμικό ανάλυσης δεδομένων της Life Technologies. Υποστήριξη Για τις πλέον πρόσφατες πληροφορίες σέρβις και υποστήριξης για όλες τις χώρες, μεταβείτε στη διαδικτυακή τοποθεσία και, στη συνέχεια, κάντε κλικ στη σύνδεση Support ή επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της Life Technologies της περιοχής σας. Προτού ξεκινήσετε: εφάπαξ διαδικασίες Προετοιμάστε τους χώρους εργασίας Για να αποτρέψετε τυχόν μόλυνση, συνιστάται ιδιαίτερα να εκτελείτε τις πειραματικές διαδικασίες σε ξεχωριστούς χώρους. Για λεπτομέρειες, ανατρέξτε στο πρωτόκολλο TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol (PN ). Προγραμματίστε το θερμικό κυκλοποιητή Προγραμματίστε τα εξής τρία προγράμματα στο θερμικό κυκλοποιητή: 1. Πρόγραμμα αντίστροφης μεταγραφής και αντίδρασης PCR 2. Πρόγραμμα υβριδοποίησης ιχνηθετών 3. Πρόγραμμα σύνδεσης και αντίδρασης PCR Στάδιο Χρόνος (λλ:δδ) Στάδιο Χρόνος (λλ:δδ) Στάδιο Θερμοκρασία Θερμοκρασία Θερμοκρασία Χρόνος (λλ:δδ) Αντίστροφη μεταγραφή Ενεργοποίηση πολυμεράσης hot-start Taq Αριθμός κύκλων: 30 κύκλοι 50 C 30:00 Αποδιάταξη DNA 95 C 15:00 Υβριδοποίηση ιχνηθετών 98 C 10:00 Σύνδεση ιχνηθετών 60 C 60:00 Αρχική αποδιάταξη 54 C 15:00 95 C 2:00 94 C 00:30 Αναμονή 60 C Συνέχεια Αριθμός 94 C 0:30 55 C 00:30 απευθείας κύκλων: στο 33 κύκλοι 60 C 0:30 72 C 01:00 επόμενο 72 C 1:00 βήμα Αναμονή 20 C Συνέχεια απευθείας στην τριχοειδή ηλεκτροφόρηση ή φύλαξη Αναμονή 20 C Συνέχεια απευθείας στο επόμενο βήμα ή φύλαξη Φυλάσσετε στους 4 C έως και 1 εβδομάδα ή στους 20 C για μεγαλύτερες χρονικές περιόδους. 2

3 Ρύθμιση του λογισμικού συλλογής δεδομένων Προτού χρησιμοποιήσετε τις ομάδες εξετάσεων TrueScience RespiFinder Identification Panels για πρώτη φορά, ρυθμίστε το λογισμικό 3130/3130xl Data Collection Software v3.0 ή v3.1 ή το λογισμικό 3500 Data Collection Software v1.0. Για οδηγίες, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο TrueScience RespiFinder Identification Panels Software Setup and Data Analysis User Guide (PN ). Για να κάνετε λήψη του εγχειριδίου χρήσης, μεταβείτε στη διαδικτυακή τοποθεσία και, στη συνέχεια, επιλέξτε την καρτέλα Literature/Support. Διαδικασία 1 Εκχυλίστε τα ολικά νουκλεϊκά οξέα και προσθέστε τον μάρτυρα Internal Amplification Control (IAC) στα δείγματα που έχουν υποβληθεί σε λύση α. Συλλέξτε κλινικά δείγματα. Για κατευθυντήριες οδηγίες, ανατρέξτε στο πρωτόκολλο TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol (PN ). β. (Συνιστάται) Υποβάλετε τα δείγματα σε προεπεξεργασία, εάν το αρχικό υλικό συλλογής είναι παχύρρευστο ή και περιέχει στερεά κυτταρικά συστατικά. Για λεπτομέρειες, ανατρέξτε στο πρωτόκολλο TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol (PN ). γ. Εκχυλίστε τα ολικά νουκλεϊκά οξέα (RNA και DNA) χρησιμοποιώντας μια κατάλληλη μέθοδο εκχύλισης και ακολουθώντας τις οδηγίες του παρασκευαστή. Για επικυρωμένες μεθόδους εκχύλισης, ανατρέξτε στο πρωτόκολλο TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol (PN ). Για τις περισσότερες μεθόδους εκχύλισης, συνιστάται να χρησιμοποιείτε 200 µl υλικού δείγματος και να πραγματοποιείτε έκλουση σε 100 µl ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης. δ. Μετά την επώαση του δείγματος με το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης, προσθέστε το μάρτυρα Internal Amplification Control (IAC) και, στη συνέχεια, αναμείξτε καλά. Προσθέστε 5 µl μάρτυρα IAC για κάθε 100 µl ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης. ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ! Για όλα τα πρωτόκολλα εκχύλισης, προσθέστε το μάρτυρα IAC μετά την ολοκλήρωση της επώασης του δείγματος με το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης. Εάν προσθέσετε το μάρτυρα IAC στο μείγμα δείγματος/ρυθμιστικού διαλύματος λύσης πριν από την ολοκλήρωση της επώασης, οι RNάσες και οι DNάσες του δείγματος ενδέχεται να διασπάσουν το μάρτυρα IAC, με αποτέλεσμα να προκύψουν ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης αναστέλλει τις RNάσες και τις DNάσες και εμποδίζει την αποικοδόμηση του μάρτυρα IAC. 2 Προετοιμάστε το μείγμα RT/PCR Mix και μεταφέρετέ το με πιπέτα α. Αποψύξτε τα παρακάτω είδη και διατηρήστε τα στον πάγο. Μήτρα ολικών νουκλεϊκών οξέων (RNA και DNA) Dilution Buffer 5 RT-PCR Buffer Pre-Amplification Primer Mix dntp Mix β. Προετοιμάστε αρκετό μείγμα RT/PCR Mix για τον αριθμό των δειγμάτων τα οποία υποβάλλετε σε επεξεργασία συν πρόσθετο όγκο μείγματος για τις απώλειες που συμβαίνουν κατά τη μεταφορά με πιπέτα. Όταν προετοιμάζετε το μείγμα, ακολουθήστε τις εξής κατευθυντήριες οδηγίες χειρισμού αντιδραστηρίων: Για το μείγμα RT-PCR Enzyme Mix: Βγάλτε το μείγμα από το σημείο στο οποίο φυλάσσεται, αμέσως πριν το μεταφέρετε με πιπέτα. Φυγοκεντρήστε το μείγμα επί 5 δευτερόλεπτα και, στη συνέχεια, αναμείξτε αναρροφώντας το με την πιπέτα και εκχύνοντάς το ξανά στο σωληνάριο, με ήπιες κινήσεις. Χρησιμοποιείτε ρύγχη πιπετών χαμηλής κατακράτησης κατά το χειρισμό του μείγματος. Επιστρέψτε το μείγμα στο σημείο στο οποίο φυλάσσεται, αμέσως μετά τη χρήση του. Για όλα τα υπόλοιπα αντιδραστήρια και για τη μήτρα ολικών νουκλεϊκών οξέων: Αμέσως πριν από τη χρήση, αναδεύστε τα σωληνάρια σε ανακινητήρα τύπου vortex και εκτελέστε σύντομη φυγοκέντρηση. 3

4 Συστατικό RT/PCR Mix Όγκος ανά αντίδραση Dilution Buffer 5,5 µl 5 RT-PCR Buffer 5,0 µl Pre-Amplification Primer Mix 2,5 µl dntp Mix 1,0 µl RT-PCR Enzyme Mix Συνολικός όγκος μείγματος RT/PCR Mix ανά αντίδραση 1,0 μl 15 µl 3 Προετοιμάστε το μείγμα Probe Hybridization Mix και μεταφέρετέ το με πιπέτα γ. Αναδεύστε σύντομα το μείγμα RT/PCR Mix σε ανακινητήρα τύπου vortex, διανείμετε 15 µl σε σωληνάρια PCR των 0,2 ml και, στη συνέχεια, κλείστε τα σωληνάρια. Διατηρήστε τα σωληνάρια PCR στον πάγο. α. Αποψύξτε το διάλυμα Dilution Buffer, το διάλυμα Hybridization Buffer και το μείγμα Probe Mix και, κατόπιν, κρατήστε τα στον πάγο. β. Προετοιμάστε αρκετό μείγμα Probe Hybridization Mix για τον αριθμό των δειγμάτων τα οποία υποβάλλετε σε επεξεργασία συν πρόσθετο όγκο μείγματος για τις απώλειες που συμβαίνουν κατά τη μεταφορά με πιπέτα. Σημείωση: Αμέσως πριν από τη χρήση, αναδεύστε κάθε αντιδραστήριο σε ανακινητήρα τύπου vortex και εκτελέστε σύντομη φυγοκέντρηση. Συστατικό Probe Hybridization Mix Όγκος ανά αντίδραση Dilution Buffer 3,0 µl Hybridization Buffer 1,5 µl Probe Mix 1,5 µl Συνολικός όγκος μείγματος Probe Hybridization Mix, ανά αντίδραση 6,0 µl 4 5 Προετοιμάστε και εκτελέστε την αντίστροφη μεταγραφή και την αντίδραση PCR Προετοιμασία και εκτέλεση της υβριδοποίησης ιχνηθετών γ. Μεταφέρετε με την πιπέτα 6 µl μείγματος Probe Hybridization Mix σε νέα σωληνάρια PCR των 0,2 ml, κλείστε τα σωληνάρια και, στη συνέχεια, διατηρήστε τα σωληνάρια PCR σε θερμοκρασία 4 C έως τη χρήση τους. α. Προσθέστε 10 µl μήτρας ολικών νουκλεϊκών οξέων σε κάθε σωληνάριο PCR που περιέχει 15 µl μείγματος RT/PCR Mix. Αναμείξτε καλά το περιεχόμενο αναρροφώντας το με την πιπέτα και εκχύνοντάς το ξανά στο σωληνάριο, με ήπιες κινήσεις και, στη συνέχεια, εκτελέστε σύντομη φυγοκέντρηση. Διατηρήστε τα σωληνάρια PCR στον πάγο, ωσότου προθερμανθεί ο θερμικός κυκλοποιητής. Σημείωση: Εάν οι εσωτερικές διαδικασίες του εργαστηρίου σας απαιτούν την ανάλυση ενός αρνητικού μάρτυρα, προσθέστε 0,25 µl μάρτυρα Internal Amplification Control σε 10 µl νερού ελεύθερου DNασών/RNασών και, στη συνέχεια, προσθέστε αυτό το μείγμα σε ένα σωληνάριο PCR που περιέχει 15 µl μείγματος RT/PCR Mix. β. Ξεκινήστε το πρόγραμμα αντίστροφης μεταγραφής/αντίδρασης PCR του θερμικού κυκλοποιητή. Όταν η θερμοκρασία φθάσει στους 50 C, τοποθετήστε τα σωληνάρια PCR στο θερμικό κυκλοποιητή. α. Προσθέστε 100 µl στείρου νερού (δεν παρέχεται) σε κάθε αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής/pcr και, στη συνέχεια, αναμείξτε καλά το μείγμα αντίδρασης αναρροφώντας το με την πιπέτα και εκχύνοντάς το ξανά στο σωληνάριο, με ήπιες κινήσεις. β. Προσθέστε 2 µl αραιωμένου μείγματος αντίδρασης αντίστροφης μεταγραφής/pcr σε κάθε σωληνάριο που περιέχει 6 µl μείγματος Probe Hybridization Mix και, στη συνέχεια, εκτελέστε σύντομη φυγοκέντρηση. 4

5 γ. Τοποθετήστε τα σωληνάρια PCR στο θερμικό κυκλοποιητή και, στη συνέχεια, θέστε σε λειτουργία το πρόγραμμα υβριδοποίησης ιχνηθετών. ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ! Κατά τη διάρκεια των τελευταίων 60 λεπτών της υβριδοποίησης ιχνηθετών, προετοιμάστε το μείγμα TwoStep Mix. Μετά την υβριδοποίηση των ιχνηθετών, προχωρήστε αμέσως στην εκτέλεση της σύνδεσης και της αντίδρασης PCR. Διατηρήστε τα σωληνάρια PCR στο θερμικό κυκλοποιητή σε θερμοκρασία 60 C, ωσότου να είστε έτοιμοι να προχωρήσετε με την εκτέλεση της σύνδεσης και της αντίδρασης PCR. 6 (Κατά τη διάρκεια της υβριδοποίησης ιχνηθετών) Προετοιμάστε το μείγμα TwoStep Mix Κατά τη διάρκεια των τελευταίων 60 λεπτών της εκτέλεσης υβριδοποίησης ιχνηθετών, προετοιμάστε το μείγμα TwoStep Mix: α. Αποψύξτε το διάλυμα TwoStep Buffer και, στη συνέχεια, διατηρήστε το στον πάγο. β. Προετοιμάστε αρκετό μείγμα TwoStep Mix για τον αριθμό των δειγμάτων τα οποία υποβάλλετε σε επεξεργασία συν πρόσθετο όγκο μείγματος για τις απώλειες που συμβαίνουν κατά τη μεταφορά με πιπέτα. Διατηρήστε το μείγμα στον πάγο έως τη χρήση του. Όταν προετοιμάζετε το μείγμα, ακολουθήστε τις εξής κατευθυντήριες οδηγίες χειρισμού αντιδραστηρίων: Για τα ένζυμα Ligase Enzyme και Taq Polymerase: Βγάλτε κάθε αντιδραστήριο από το σημείο στο οποίο φυλάσσεται, αμέσως πριν το μεταφέρετε με πιπέτα. Φυγοκεντρήστε κάθε αντιδραστήριο για 5 δευτερόλεπτα και, στη συνέχεια, αναμείξτε αναρροφώντας το με την πιπέτα και εκχύνοντάς το ξανά στο σωληνάριο, με ήπιες κινήσεις. Χρησιμοποιείτε ρύγχη πιπετών χαμηλής κατακράτησης κατά το χειρισμό αυτών των αντιδραστηρίων. Επιστρέψτε τα αντιδραστήρια στο σημείο στο οποίο φυλάσσονται, αμέσως μετά τη χρήση τους. Αναδεύστε το διάλυμα TwoStep Buffer σε ανακινητήρα τύπου vortex και εκτελέστε σύντομη φυγοκέντρηση προτού το μεταφέρετε με την πιπέτα. Συστατικό TwoStep Mix Όγκος ανά αντίδραση 7 (Αμέσως μετά την υβριδοποίηση ιχνηθετών) Προετοιμάστε και εκτελέστε τη σύνδεση και την αντίδραση PCR TwoStep Buffer 30,6 µl Ligase Enzyme 1,0 µl Taq Polymerase 0,4 µl Συνολικός όγκος μείγματος TwoStep Mix ανά αντίδραση 32,0 µl Αμέσως μετά την υβριδοποίηση ιχνηθετών, εκτελέστε τα εξής: α. Διακόψτε το πρόγραμμα υβριδοποίησης ιχνηθετών και ξεκινήστε αμέσως το πρόγραμμα σύνδεσης και αντίδρασης PCR. β. Όταν η θερμοκρασία του θερμικού κυκλοποιητή φθάσει στους 54 C, πατήστε το πλήκτρο Pause για να διατηρήσετε τη θερμοκρασία στους 54 C. γ. Προετοιμάστε τα μείγματα αντίδρασης υβριδοποίησης ιχνηθετών για σύνδεση και PCR: 1. Αφαιρέστε τις αντιδράσεις υβριδοποίησης ιχχνηθετών από το θερμικό κυκλοποιητή. 2. Προσθέστε 32 µl μείγματος TwoStep Mix σε κάθε αντίδραση υβριδοποίησης των 8 µl. 3. Τοποθετήστε ξανά τα σωληνάρια στο θερμικό κυκλοποιητή. Σημείωση: Εάν εκτελείτε μεγάλο αριθμό αντιδράσεων, πραγματοποιήστε το βήμα 7γ για παρτίδες αντιδράσεων. Για παράδειγμα, εάν χρησιμοποιείτε ταινία των 8 σωληναρίων, βγάλτε τις 8 αντιδράσεις, προσθέστε το μείγμα TwoStep Mix και, στη συνέχεια, επανατοποθετήστε τα σωληνάρια στο θερμικό κυκλοποιητή προτού βγάλετε τις επόμενες 8 αντιδράσεις. δ. Επανεκκινήστε αμέσως το πρόγραμμα σύνδεσης και αντίδρασης PCR, το οποίο είχατε θέσει σε παύση. 5

6 8 Πραγματοποιήστε τριχοειδή ηλεκτροφόρηση α. Συνδυάστε το πρότυπο μεγέθους, το φορμαμίδιο και το προϊόν της αντίδρασης PCR: 1. Συνδυάστε τα εξής και αναμείξτε τα σχολαστικά. Προετοιμάστε αρκετό όγκο για τον αριθμό των δειγμάτων τα οποία υποβάλλετε σε επεξεργασία συν πρόσθετο όγκο για τις απώλειες που συμβαίνουν κατά τη μεταφορά με πιπέτα. Συστατικό Size Standard Mix Όγκος ανά αντίδραση (προϊόν αντίδρασης PCR ή δείκτης αναφοράς reference marker) GeneScan 600 LIZ Size Standard (PN ) 0,5 µl Hi-Di Formamide (PN ) 10,0 µl Συνολικός όγκος μείγματος Size Standard Mix ανά αντίδραση 10,5 µl 2. Σε οπτική πλάκα 96 υποδοχών, μεταφέρετε με την πιπέτα 10,5 µl μείγματος Size Standard Mix σε κάθε μία από τις υποδοχές, για τον απαιτούμενο αριθμό υποδοχών. 3. (Συνιστάται) Μεταφέρετε με την πιπέτα 1 µl δείκτη αναφοράς Reference Marker (FAM ) σε μία από τις υποδοχές που περιέχει το μείγμα Size Standard Mix. Αναμείξτε με την πιπέτα. 4. Για κάθε προϊόν αντίδρασης PCR του δείγματος: Αραιώστε 5 µl αντίδρασης PCR του δείγματος σε 45 µl απιονισμένου νερού. Μεταφέρετε με την πιπέτα 1 µl αραιωμένου προϊόντος αντίδρασης PCR του δείγματος σε μία υποδοχή που περιέχει το μείγμα Size Standard Mix και, στη συνέχεια, αναμείξτε με την πιπέτα. Σημείωση: Σε ορισμένες περιπτώσεις (για παράδειγμα, σε υψηλό ιικό φορτίο), μπορεί να χρειαστεί να αραιώσετε περισσότερο το προϊόν της αντίδρασης προκειμένου να αποφύγετε μέγιστες συγκεντρώσεις εκτός κλίμακας ανάλυσης. Για περισσότερες πληροφορίες, ανατρέξτε στο πρωτόκολλο TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol. 5. Σφραγίστε την πλάκα με το κατάλληλο κάλυμμα. β. Αναλύστε την πλάκα δειγμάτων 1. Φυγοκεντρήστε την πλάκα σε 1000 g για 10 δευτερόλεπτα, ώστε το υγρό να συγκεντρωθεί στον πυθμένα των υποδοχών και να απομακρυνθούν οι φυσαλίδες. 2. Φορτώστε την πλάκα στο γενετικό αναλυτή, ρυθμίστε το λογισμικό συλλογής δεδομένων, όπως περιγράφεται στο εγχειρίδιο TrueScience RespiFinder Identification Panels Software Setup and Data Analysis User Guide (PN ) και, στη συνέχεια, συνδέστε την πλάκα και ξεκινήστε την ανάλυση. 9 Αναλύστε και ερμηνεύστε τα δεδομένα Πραγματοποιήστε ταυτοποίηση της κατάστασης των υποψήφιων παθογόνων μικροοργανισμών, αναλύοντας δεδομένα με τη βοήθεια των συνιστώμενων ρυθμίσεων ανάλυσης, των ομάδων εξετάσεων και των σετ καθορισμού αλληλομόρφων (binset). Για οδηγίες, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο TrueScience RespiFinder Identification Panels Software Setup and Data Analysis User Guide (PN ). Η Life Technologies συνιστά κάθε εργαστήριο να αναπτύξει τις δικές του διαδικασίες και τα κριτήρια ερμηνείας και αναφοράς. 6

7 7

8 Not for sale in U.S.A. Αποποίηση ευθυνών Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτές, καθώς και από οποιεσδήποτε άλλες ομάδες διαγνωστικών εξετάσεων, θα πρέπει να χρησιμοποιούνται και να ερμηνεύονται αποκλειστικά στα πλαίσια της συνολικής κλινικής εικόνας. Η Life Technologies δεν αποδέχεται καμία ευθύνη σχετικά με οποιαδήποτε κλινική απόφαση λαμβάνεται. Η Life Technologies δεν παρέχει αυτό το εγχειρίδιο ως μια ολοκληρωμένη περίληψη όλων των πιθανών εκβάσεων της χρήσης των ομάδων εξετάσεων TrueScience RespiFinder Identification Panels. Αυτό το εγχειρίδιο προορίζεται για χρήση αποκλειστικά ως βοήθημα απομνημόνευσης. Δεν προορίζεται για οποιαδήποτε κλινική ερμηνεία των αποτελεσμάτων του προσδιορισμού. Τα εργαστήρια πρέπει να ερμηνεύουν και να αναφέρουν τα αποτελέσματα του προσδιορισμού σύμφωνα με τις δικές τους διαδικασίες, τις οποίες έχουν αναπτύξει στην περιοχή τους. Information in this document is subject to change without notice. APPLIED BIOSYSTEMS DISCLAIMS ALL WARRANTIES WITH RESPECT TO THIS DOCUMENT, EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THOSE OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE. TO THE FULLEST EXTENT ALLOWED BY LAW, IN NO EVENT SHALL APPLIED BIOSYSTEMS BE LIABLE, WHETHER IN CONTRACT, TORT, WARRANTY, OR UNDER ANY STATUTE OR ON ANY OTHER BASIS FOR SPECIAL, INCIDENTAL, INDIRECT, PUNITIVE, MULTIPLE OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THE USE THEREOF, WHETHER OR NOT FORESEEABLE AND WHETHER OR NOT APPLIED BIOSYSTEMS IS ADVISED OF THE POSSIBILITY OF SUCH DAMAGES. Σύμβολα που χρησιμοποιούνται στις ετικέτες και τη συσκευασία: ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΤΗΣ ΑΡΙΘΜΟΣ ΕΞΕΤΑΣΕΩΝ ΣΥΜΒΟΥΛΕΥΤΕΙΤΕ ΤΙΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΦΥΛΑΣΣΕΤΕ ΣΤΗ ΘΕΡΜΟΚΡΑΣΙΑ ΠΟΥ ΑΝΑΓΡΑΦΕΤΑΙ ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ ΛΗΞΗΣ (ΒΛ. ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ ΠΟΥ ΑΝΑΓΡΑΦΕΤΑΙ) ΚΩΔΙΚΟΣ ΑΡΙΘΜΟΣ ΚΑΤΑΛΟΓΟΥ ΑΡΙΘΜΟΣ ΠΑΡΤΙΔΑΣ Life Technologies Ltd. 7 Kingsland Grange Woolston, Warrington, WA1 4SR, United Kingdom NOTICE TO PURCHASER: This product is a RespiFinder product manufactured by PathoFinder B.V. in Maastricht, The Netherlands within quality systems accredited to ISO13485:2003. These products are sold for use by the end-user only and may not be re-sold, distributed or re-packaged. LIMITED USE LABEL LICENSE: No right to resell this product or any of its components is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. For information on obtaining additional rights, please contact outlicensing@lifetech.com or Out Licensing, Life Technologies, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, California Trademarks: The trademarks mentioned herein are the property of Life Technologies Corporation or their respective owners. RespiFinder is a registered trademark of PathoFinder B.V. ΤΑ TRUESCIENCE RESPIFINDER IDENTIFICATION PANELS ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ ΓΙΑ ΕΠΑΓΓΕΛΜΑΤΙΚΕΣ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ. ΑΥΤΟ ΤΟ ΠΡΟΪΟΝ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΕΙ ΑΔΕΙΑ ΕΚΤΕΛΕΣΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗΣ PCR ΓΙΑ ΔΙΠΛΩΜΑΤΑ ΕΥΡΕΣΙΤΕΧΝΙΑΣ ΠΟΥ ΑΝΗΚΟΥΝ ΣΕ ΤΡΙΤΟΥΣ, ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΜΕΝΩΝ ΤΗΣ HOFFMANN-LA ROCHE (HOFFMANN-LA ROCHE LTD, DIAGNOSTICS, CH BASEL, SWITZERLAND) ΚΑΙ ΤΗΣ ROCHE MOLECULAR SYSTEMS, INC (ROCHE MOLECULAR SYSTEMS, INC., 1145 ATLANTIC AVENUE, ALAMEDA, CALIFORNIA 94501). Ο πελάτης είναι υπεύθυνος για την επαλήθευση των προσδιορισμών και τη συμμόρφωση με τις ρυθμιστικές απαιτήσεις που αφορούν στις διαδικασίες και τις χρήσεις των προϊόντων RespiFinder από τον ίδιο Life Technologies Corporation. All rights reserved. Part Number Rev. B 07/2011 Translated from the English PN Rev. A Headquarters 5791 Van Allen Way Carlsbad, CA USA Phone Technical Resources and Support For the latest technical resources and support information for all locations, please refer to our Web site at