ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ HYDRAGEL MINI PROTEIN

Transcript

1 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ HYDRAGEL MINI PROTEIN ΣΚΟΠΟΣ ΧΡΗΣΗΣ Το Hydragel-mini Protein(e) και το Hydragel Protein(e) kit προορίζονται για τον διαχωρισμό των ανθρώπινων πρωτεϊνών σε 5 κύρια μέρη με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης με αλκαλικό ρυθμιστικό διάλυμα. Οι διαχωρισμένες πρωτεΐνες σταθεροποιούνται σε υδατικό διάλυμα οξέως/αλκοόλης και βάφονται με διάλυμα amidoblack. Η περίσσεια χρωστικής αφαιρείται με όξινο διάλυμα. Οι κεχρωσμένοι ηλεκτροφορητικοί διαχωρισμοί μπορούν να αξιολογηθούν οπτικά για ανωμαλίες στο σχήμα τους ή με πυκνόμετρο για πιο ακριβή προσδιορισμό της ποσότητας κάθε ζώνης ξεχωριστά. Κάθε πήκτωμα αγαρόζης είναι προκαθορισμένο να τρέξει: -5 δείγματα στο Hydrogel-mini protein(e) kit -10 δείγματα Hydrogel protein(e) kit Για διαγνώσεις in vitro ΑΡΧΗ ΜΕΘΟΔΟΥ Η ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών είναι μία καθιερωμένη τεχνική που χρησιμοποιείται συχνά για διαλογή ορού και κάποιων άλλων υγρών για πρωτεϊνικές ανωμαλίες. Βασίζεται στις αρχές της ηλεκτροφόρησης ζωνών σε ένα κατάλληλο πήκτωμα. Η αγαρόζη αναπτύσσεται σε ένα ευέλικτο και αποτελεσματικό πήκτωμα. Σε εφαρμογές διάγνωσης, οι πρωτεΐνες του ορού αφού διαχωρίζονται σε 5 βασικά μέρη, αρχικά βάσει του φορτίου τους σε δεδομένο ph: αλβουμίνη, α1-σφαιρίνη, α2-σφαιρίνη, β-σφαιρίνη, γ-σφαιρίνη. Κάθε ζώνη περιέχει μία ή περισσότερες πρωτεΐνες ορού. ΕΙΔΟΣ PN 4090 PN 4000 PN 4200* Πηκτώματα αγαρόζης (έτοιμα για χρήση) Ρυθμιστικό δ/μα Trisβαρβιτάλης (πρότυπο δ/μα) Χρώση Amidoblack(πρότυπο δ/μα) Αποχρωματιστικό δ/μα (πρότυπο δ/μα) Πρότυπα δείγματα εφαρμογής Χάρτινες λωρίδες φιλτραρίσματος 10 πηκτώματα 10 πηκτώματα 100 πηκτώματα 3 φιαλίδια, 75 ml το καθένα *MAXI-KIT HYDRAGEL PROTEIN(E) 3 φιαλίδια, 75 ml το καθένα 3 φιαλίδια, 75 ml το καθένα 1 φιαλίδιο, 100ml 1 φιαλίδιο, 100ml 3 φιαλίδια, 100ml 1 φιαλίδιο, 100ml 1 φιαλίδιο, 100ml 5 φιαλίδια, 100ml 1 πακέτο με 10 τεμάχια 1 πακέτο με 10 τεμάχια 10 πακέτα με 10 τεμάχια 2 πακέτα με 10 τεμάχια το καθένα 2 πακέτα με 10 τεμάχια το καθένα 20 πακέτα με 10 τεμάχια το καθένα 1.ΠΗΚΤΩΜΑΤΑ ΑΓΑΡΟΖΗΣ

2 Τα πηκτώματα αγαρόζης είναι έτοιμα για χρήση. Κάθε πήκτωμα (ph: 8,8±0,1) περιέχει: αγαρόζη 8 g/i, tris 8,86 g/i, βαρβητάλη 3,70 g/i, αζίδιο του νατρίου 1,.00 g/i, πρόσθετα, όχι επικίνδυνα στις δοθείσες συγκεντρώσεις, απαραίτητα για βέλτιστη απόδοση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Τα πηκτώματα αγαρόζης περιέχουν βαρβιτάλη και αζίδιο του νατρίου. Να μην γίνεται κατάποση! Αν γίνει συμβουλευτείτε γιατρό αμέσως. Όταν απορρίπτεται, να αποφεύγεται η επαφή με τα οξέα, μόλυβδο ή χαλκό, καθώς αυτά είναι γνωστό ότι προκαλούν έκρηξη ή τοξικές ενώσεις Πήκτωμα για ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών. Αποθήκευση, Σταθερότητα και Σημάδια αλλοίωσης Αποθηκεύετε τα πηκτώματα οριζόντια στην αυθεντική προστατευτική συσκευασία σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 ο C) ή στη συντήρηση (2-8 ο C). Τα πηκτώματα παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στη συσκευασία του kit και στις ετικέτες των συσκευασιών του πηκτώματος. (Το βέλος μπροστά από το κουτί του kit θα πρέπει να δείχνει προς τα πάνω). Αποφύγετε την αποθήκευση κοντά σε παράθυρο ή πηγή θερμότητας. Αποφύγετε σημαντικές αλλαγές στην θέρμανση κατά την αποθήκευση. ΝΑ ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΟΝΤΑΙ. Απορρίπτετε όταν: (i) κρύσταλλοι ή ίζημα δημιουργηθούν στην επιφάνεια του πηκτώματος ή η υφή του πηκτώματος γίνει πιο μαλακή (όλα αυτά είναι αποτέλεσμα ψύξης του πηκτώματος), (ii) όταν παρατηρηθούν βακτήρια ή ανάπτυξη μούχλας, (iii) υπάρχει μη φυσιολογική ποσότητα υγρού στο κουτί του πηκτώματος (ως αποτέλεσμα έκκρισης ρυθμιστικού διαλύματος λόγω των μη σωστών συνθηκών αποθήκευσης) 2. ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ΔΙΑΛΥΜΑ TRIS ΒΑΡΒΙΤΑΛΗΣ Κάθε φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος διαλύεται σε όγκο ενός λίτρου απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Μετά τη διάλυση του ρυθμιστικού διαλύματος με ph 9,2 ± 0,3 περιέχει: tris: 7,20g/I, βαρβιτάλη: 1,84 g/i, νατριούχος βαρβιτάλη: 10,30 g/i, αζίδιο του νατρίου 0,10 g/i. ΠΡΟΣΟΧΗ..!!Το ρυθμιστικό διάλυμα περιέχει βαρβιτάλη και αζίδιο του νατρίου. Να μη γίνεται κατάποση. Σε περίπτωση κατάποσης συμβουλευτείτε γιατρό άμεσα! Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να οδηγήσει στη δημιουργία εκρηκτικών ή τοξικών χημικών ενώσεων όταν έρχεται σε επαφή με οξέα, μόλυβδο ή χαλκό. Πάντα να ξεπλένετε με άφθονο νερό όταν απορρίπτεται. Ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης

3 Αποθηκεύστε το ρυθμιστικό διάλυμα σε θερμοκρασία δωματίου ή στη συντήρηση. Είναι σταθερό για αρκετά χρόνια, τουλάχιστον μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στη συσκευασία του kit ή στην ετικέτα του φιαλιδίου του ρυθμιστικού διαλύματος. 3. ΧΡΩΣΗ AMIDOBLACK Τα φιαλίδια με το πρότυπο κεχρωσμένο διάλυμα να διαλύονται σε όγκο 300ml με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Μετά τη διάλυση το κεχρωσμένο διάλυμα εργασία περιέχει amidoblack 4g/l, οξικό οξύ 10%. ΠΡΟΣΟΧΗ: Προκαλεί εγκαύματα! Μην εισπνέετε τις αναθυμιάσεις. Σε περίπτωση επαφής με τα μάτια ξεπλύνετε άμεσα και ζητήστε ιατρική συμβουλή. Για διαχωρισμό πρωτεϊνών με κεχρωσμένο πήκτωμα ηλεκτροφόρησης. Αποθηκεύστε και το πρότυπο διάλυμα και το κεχρωσμένο διάλυμα εργασίας σε θερμοκρασία δωματίου ή στη συντήρηση σε σφραγισμένα δοχεία για να αποφύγετε την εξάτμισή τους. Το πρότυπο κεχρωσμένο διάλυμα παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στη συσκευασία του kit ή στις ετικέτες των φιαλιδίων με το αποχρωματιστικό διάλυμα. Το διάλυμα εργασίας για τη χρώση είναι σταθερό για 1 χρόνο. 4. ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΤΙΚΟ ΔΙΑΛΥΜΑ Το φιαλίδιο με το πρότυπο αποχρωματιστικό διάλυμα να διαλύεται σε όγκο 10 λίτρων με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Είναι βολικότερο να προετοιμάσετε διάλυμα 1/100 από μόνο ένα μικρό κλάσμα από το πρότυπο διάλυμα. Π.χ. διαλύστε 10ml πρότυπου διαλύματος σε όγκο 1 λίτρου. Μετά τη διάλυση το αποχρωματιστικό διάλυμα εργασίας περιέχει: Κιτρικό οξύ, 5 g/i. Για αποχρωματισμό, δηλαδή την αφαίρεση της πλεονάζουσας χρωστικής του πηκτώματος. Αποθηκεύστε το πρότυπο διάλυμα εργασίας σε θερμοκρασία δωματίου ή στη συντήρηση. Είναι σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στη συσκευασία του kit ή στην ετικέτα του φιαλιδίου του διαλύματος αποχρωματισμού. Το διάλυμα εργασίαςαποχρωματισμού είναι σταθερό για ένα μήνα σε θερμοκρασία δωματίου και σε σφραγισμένο φιαλίδιο. Μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου. Να απορρίπτετε το διάλυμα εργασίαςαποχρωματισμού αν αλλάξει όψη, πχ αν γίνει θολό από μικροβιακή επιμόλυνση. 5. ΠΡΟΤΥΠΟ ΔΕΙΓΜΑ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ Προκατασκευασμένες, μίας χρήσης απορροφητικές λωρίδες για την εφαρμογή του δείγματος στο πήκτωμα.

4 6. ΧΑΡΤΙΝΕΣ ΛΩΡΙΔΕΣ ΑΠΟΡΡΟΦΗΣΗΣ Προκατασκευασμένες, μίας χρήσης απορροφητικές λωρίδες για απορρόφηση της επιπλέον υγρασίας πάνω από την επιφάνεια του πηκτώματος του πρότυπου δείγματος μετά την εφαρμογή. ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΑΛΛΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ 1. ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΟΣ ΟΡΟΣ Παρασκευάστε διάλυμα 0,15 Μ (9 g/i) NaCl με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Για την διάλυση των δειγμάτων ορού Αποθηκεύστε τον φυσιολογικό ορό σε θερμοκρασία δωματίου ή στη συντήρηση. Απορρίψτε μετά από 3 μήνες ή αν αλλάξει εμφάνιση, π.χ. αν γίνεται θολό λόγω μικροβιακής επιμόλυνσης. Για μεγαλύτερες περιόδους αποθήκευσης, προσθέστε αζίδιο του νατρίου, 1g/I. 2. ΔΙΑΛΥΜΑ ΣΤΑΘΕΡΟΠΟΙΗΣΗΣ Τουλάχιστον 15 πριν τη χρήση, προετοιμάστε ένα διάλυμα που θα περιέχει: (%ν/ν) 60% αιθανόλη, 10%ο ξικό οξύ και 30% απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Να γίνει καλή ανάδευση. Για να σταθεροποιήσει τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών στην ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης. Αποθηκεύστε το διάλυμα σταθεροποίησης σε θερμοκρασία δωματίου καλά σφραγισμένο για να εξατμιστεί. Απορρίψτε μετά από 3 μήνες. 300 ml σταθεροποιητικού διαλύματος χρησιμοποιούνται για 4 πηκτώματα. ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ, ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 1.Τροφοδοτικό: GD 61 D SEBIA, PN 1300, GD251 D SEBIA, PN 1301, MG 300 SEBIA, PN 1302 or MG 500 SEBIA, PN Θάλαμος ηλεκτροφόρησης: K20 SEBIA, PN Δεξαμενές και υποστηρικτές πηκτώματος για την επεξεργασία των πλακών ηλεκτροφόρησης: HYDRAGEL Accessory Kit SEBIA, PN Πιπέτες: 5μΙ και 200μΙ 5. Επωαστήρας-Στεγνωτήριο για στέγνωμα των πλακών πηκτώματος αγαρόζης: IS 80 SEBIA, PN Πυκνόμετρο ικανό για σάρωση 82x51 mm και 82x102 mm πλακών πηκτώματος σε 570 nm ή με κίτρινο φίλτρο, π.χ. HYRYS SEBIA, PREFERENCE SEBIA, DVSE SEBIA. Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης του κατασκευαστή για τις διαδικασίες χειρισμού και βαθμονόμησης. ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΓΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗ

5 Συλλογή δειγμάτων και αποθήκευση Φρέσκα δείγματα ορού προτιμώνται για ανάλυση. Ο ορός πρέπει να συλλέγεται βάσει των προδιαγεγραμμένων διαδικασιών που χρησιμοποιούνται στις εξετάσεις των κλινικών εργαστηρίων. Αν χρειαστεί, αποθηκεύστε τον ορό από 2 έως 8 ο C μέχρι μία εβδομάδα. Να κρατάτε τα δείγματα κατεψυγμένα για μεγαλύτερες περιόδους. Τα κατεψυγμένα δείγματα είναι σταθερά για τουλάχιστον ένα μήνα. Τα αποψυγμένα δείγματα μπορούν να προκαλέσουν ελαφριά σημάδια εφαρμογής λόγω πρωτεϊνικής ή λιποπρωτεϊνικής μετουσίωσης. Η αποθήκευση σε θερμοκρασία από 2 έως 8 ο C και η κατάψυξη προκαλούν να προκαλέσουν ανοδική στροφή των βήτα-λιποπρωτεϊνών από βήτα-ζώνες σε άλφα-2 ή άλφα-1 ζώνες. Όσο παλαιότερος είναι ο ορός, τόσο μεγαλύτερη είναι η στροφή. δείγματος Διαλύστε τα δείγματα ορού 5 φορές (1 vol./4vol) με φυσιολογικό ορό. Δείγματα που πρέπει να αποφεύγονται Μη χρησιμοποιείτε αιμολυμένο δείγμα ορού. Η αιμόλυση αυξάνει τις αλφα-2 και βήτα ζώνες. Αποφύγετε τα δείγματα πλάσματος. Το ινωδογόνο δίνει μία στενή ζώνη στο σημείο εφαρμογής το οποίο θα μπορούσε να έχει ληφθεί για μία μονοκλωνική ανοσοσφαιρίνη και θα αντισταθμίσει το ποσοστό των αντίστοιχων ζωνών. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ I.Μετακίνηση 1. Ξεπακετάρετε το πήκτωμα. Το πήκτωμα μπορεί να τοποθετηθεί εύκολα στην κορυφή του κλειστού κουτιού του πηκτώματος για περαιτέρω επεξεργασία. 2. Αφαιρέστε γρήγορα την περίσσεια της χρωστικής πάνω από την επιφάνεια του πηκτώματος βάζοντας μαλακά μία χάρτινη λωρίδα φιλτραρίσματος στην επιφάνεια του πηκτώματος έτσι ώστε το κέντρο του να είναι στην ίδια ευθεία με τα τυπωμένα βέλη στις άκρες του πλαστικού υποστηρικτικού μέσου του πηκτώματος. 3. Τοποθετήστε το πρότυπο δείγμα εφαρμογής στην επιφάνεια του πηκτώματος ευθυγραμμίζοντας τις δύο εξωτερικές σχισμές των δειγμάτων με τα βέλη στο υποστηρικτικό μέσο του πηκτώματος. Αποφύγετε την παγίδευση φυσαλίδων αέρα κάτω από το δείγμα. 4. Βάλτε 5μΙ διαλυμένο ορό σε κάθε σχισμή δείγματος. 5. Αφήστε τα δείγματα να διαχυθούν μέσα στο πήκτωμα για 5 λεπτά. 6. Αφαιρέστε γρήγορα την περίσσεια της χρωστικής. 7. Αφαιρέστε το πρότυπο δείγμα εφαρμογής. 8. Βάλτε το πήκτωμα μέσα στον κατάλληλο θάλαμο ηλεκτροφόρησης, τα δείγματα στην καθοδική πλευρά. Όταν χρησιμοποιείτε τον θάλαμο SEBIA K20, τοποθετήστε το HYDRAGEL στη γέφυρα με την πλευρά του πηκτώματος προς τα κάτω, το πήκτωμα βυθίζεται περίπου 1 εκ. μέσα στο ρυθμιστικό διάλυμα από κάθε πλευρά. Κοιτάξτε το ένθετο της συσκευασίας του θαλάμου Κ20 για περισσότερες πληροφορίες. 9. Συνδέστε την πρίζα του θαλάμου στο τροφοδοτικό. 10. Μετά την μετακίνηση, βγάλτε από την πρίζα τον θάλαμο και αφαιρέστε την πλάκα του πηκτώματος. ΣΥΝΘΗΚΕΣ ΜΕΤΑΚΙΝΗΣΗΣ Όγκος ρυθμιστικού διαλύματος ανά θάλαμο HYDRAGEL-MINI PROTEIN (E) HYDRAGEL PROTEIN (E) 150ml 150ml

6 Συνολικός όγκος ρυθμιστικού διαλύματος 300ml 300ml Χρόνος μετακίνησης 30 λεπτά 30 λεπτά Σταθερής τάσης Αρχικό ρεύμα(ανά πήκτωμα) ή Σταθερού Ρεύματος Αρχικό Ρεύμα 70 V 11±3mA 12 ma 65 ± 5V 70 V 22±3mA 25 ma 65 ± 5V ΙΙ.ΣΤΑΘΕΡΟΠΟΙΗΣΗ 1.Τοποθετείστε το πήκτωμα μέσα στο υποστηρικτικό μέσο (παρέχεται με το SEBIA HYDRAGEL Accessory Kit) για περαιτέρω επεξεργασία. 2. Γεμίστε μία δεξαμενή (παρέχεται με το SEBIA HYDRAGEL Accessory Kit) με 300ml σταθεροποιητικού διαλύματος. 3. Εμβαπτίστε το πήκτωμα κάθετα στο διάλυμα σταθεροποίησης για 15 λεπτά. 4. Αφαιρέστε το πήκτωμα και στεγνώστε το με θερμό αέρα 80 ο C σε επωαστήρα-στεγνωτήριο IS 80. ΙΙΙ.ΧΡΩΣΗ-ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΣ 1. Εμβαπτίστε το στεγνό και κρύο πήκτωμα στο διάλυμα χρώσης για 5 λεπτά. 2. Αποχρωματίστε σε τρία συνεχόμενα λουτρά αποχρωματιστικού διαλύματος μέχρι να μείνει άχρωμο και καθαρό. 3. Αφαιρέστε το επιπλέον υγρό από την επιφάνεια του πηκτώματος με ένα χαρτομάντιλο και στεγνώστε το πήκτωμα με θερμό αέρα 80 ο C. Αν χρειαστεί, καθαρίστε την πίσω πλευρά(το πλαστικό μέσο υποστήριξης) του στεγνού φιλμ με ένα υγρό χαρτομάντιλο. IV. ΣΑΡΩΣΗ Σαρώστε χρησιμοποιώντας ένα πυκνόμετρο με ένα κίτρινο φίλτρο ή στα 570nm. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Έλεγχος Ποιότητας Καλό είναι να συμπεριλαμβάνεται και ένας ορός ελέγχου (Electrophoresis Control, SEBIA PN 4780) σε κάθε τρέξιμο δειγμάτων. Τιμές Η σάρωση πυκνόμετρου (στα 570 nm) των κεχρωσμένων ηλεκτροφορημάτων δίνει σχετικές συγκεντρώσεις (ποσοστά) των μεμονωμένων ζωνών πρωτεΐνης. Οι φυσιολογικές τιμές (μέση τιμή ± 2 SD) για μεμονωμένες μεγάλες ζώνες ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών σε πηκτώματα HYDRAGEL PROTEIN(E) έχουν καθιερωθεί από ένα υγιή πληθυσμό 150 ενηλίκων ατόμων (άνδρες και γυναίκες). ΠΡΟΤΙΜΗΣΗ - DVS HYRYS - DVSE Αλβουμίνη 55,7-65,0% 58,0-69,5%

7 Άλφα-1 σφαιρίνες 1,1-3,2% 1,0-2,8% Άλφα-2 σφαιρίνες 8,2-13,0% 7,4-12,4% Βήτα σφαιρίνες 10,3-14,9% 9,1-14,1% Γάμμα σφαιρίνες 10,5-18,1% 8,4-17,3% Συνιστάται το κάθε εργαστήριο να καθιερώνει τις δικές του φυσιολογικές τιμές. Αντιμετώπιση Προβλημάτων Καλέστε την τεχνική υπηρεσία του παρόχου όταν η εξέταση αποτύχει να εκτελεστεί εφόσον οι οδηγίες για την προετοιμασία και αποθήκευση των υλικών, και της διαδικασίας έχουν ακολουθηθεί προσεκτικά. ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΕΚΤΕΛΕΣΗΣ Αναπαραγωγιμότητα κατά τη διάρκεια τρεξίματος Δύο(2) διαφορετικά δείγματα ορού το καθένα από τα οποία έχει τρέξει σε 9 τροχιές σε κάθε πήκτωμα HYDRAGEL PROTEIN(E) από 3 διαφορετικές παρτίδες. Δηλαδή, SD ΚΑΙ CV(n=9) έχουν υπολογιστεί για κάθε δείγμα ορού, κάθε ζώνη και κάθε παρτίδα. Ο παρακάτω πίνακας δείχνει το εύρος των τιμών από τρεις παρτίδες που εξετάστηκαν για το δείγμα Νο 1. Τα αποτελέσματα για τον ορό Νο 2 είναι κατ ουσία τα ίδια και δεν αναγράφονται. ΖΩΝΗ ΜΕΣΟ SD CV (%) Αλβουμίνη 54,7-55,2 0,48-0,92 0,9-1,7 Άλφα-1 3,9-4,0 0,05-0,16 1,3-4,0 Άλφα-2 13,9-14,1 0,27-0,35 1,9-2,5 Βήτα 16,6-17,3 0,42-0,49 2,5-3,0 Γάμμα 10,1-10,4 0,23-0,33 2,2-3,2 Αναπαραγωγιμότητα ανάμεσα στα τρεξίματα Τρέξαμε είκοσι (20) διαφορετικά δείγματα ορού σε 10 διαφορετικές μέρες χρησιμοποιώντας 3 παρτίδες πηκτωμάτων HYDRAGEL PROTEIN(E). Οι τιμές των CV, SD και CV(n=10), έχουν υπολογιστεί για κάθε δείγμα ορού και κάθε ζώνη. Τα αποτελέσματα ήταν τα ίδια για όλους τους ορούς. Ο παρακάτω πίνακας δείχνει το εύρος των SD και CV εκπροσωπώντας όλα τα δείγματα και ένα μέσο CV υπολογισμένο από την ολική CV s για όλα τα δείγματα (n=20). ΖΩΝΗ SD CV (%) MEAN CV (%) Αλβουμίνη 0,5-1,8 1,7-3,6 2,4 Άλφα-1 0,2-0,7 4,8-16,9 9,5 Άλφα-2 0,2-1,4 1,3-7,2 3,2 Βήτα 0,3-1,3 3,2-15,1 5,3 Γάμμα 0,2-2,2 1,5-9,7 4,4 Ακρίβεια Τρέξαμε (40) διαφορετικά δείγματα (παθολογικός και φυσιολογικός ορός) σε πηκτώματα HYDRAGEL PROTEIN(E) και ένα άλλο εμπορικά διαθέσιμο σύστημα πηκτώματος αγαρόζης. Οι

8 παράμετροι συσχέτισης μεταξύ των δύο συστημάτων πηκτώματος (y-hydragel) για μεμονωμένες ζώνες ήταν: ΖΩΝΗ Συντελεστής Συσχέτισης Άξονας-y Κλίση Αλβουμίνη 0,964-3,722 0,994 Άλφα-1 0,931 0,923 0,885 Άλφα-2 0,949 3,602 0,936 Βήτα 0,962 0,328 0,970 Γάμμα 0,995 0,216 1,093 Ευαισθησία Ένα παθολογικό δείγμα ορού με μία μονοκλωνική πρωτεΐνη στα 16,9 g/i αραιώθηκε σταδιακά και οι αραιώσεις ηλεκτροφορήθηκαν σε πηκτώματα HYDRAGEL PROTEIN(E) και σε ένα άλλο εμπορικά διαθέσιμο σύστημα πηκτώματος. Μετά από οπτικό έλεγχο των μεμονωμένων ζωνών, η μεγαλύτερη αραίωση με μία ευδιάκριτη μονοκλωνική ζώνη ήταν η ίδια και για τα δύο συστήματα πηκτωμάτων σε αραίωση 1/64. Έτσι, η μικρότερη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση μονοκλωνικής πρωτεΐνης ήταν 0,26g/I.