ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΟΥ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΟΥ ΤΩΝ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΩΝ Τ- ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΓΟΝΙΔΙΟΥ Foxp3 ΣΤΟΝ ΚΑΡΚΙΝΟ ΤΟΥ ΠΝΕΥΜΟΝΑ

Transcript

1 Μονάδα Ανοσολογίας Καρκίνου, Εργαστήριο Ανοσολογίας-Ιστοσυμβατότητας Πνευμονολογική Κλινική, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Λάρισας Τμήμα Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΟΥ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΟΥ ΤΩΝ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΩΝ Τ- ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΓΟΝΙΔΙΟΥ Foxp3 ΣΤΟΝ ΚΑΡΚΙΝΟ ΤΟΥ ΠΝΕΥΜΟΝΑ Καρανίκας Β, Σπελέτας Μ, Ζαμανάκου Μ, Καλαλά Φ, Λουλές Γ, Κερενίδη Θ, Γουργουλιάννης Κ, Γερμενής ΑΕ Journal of Translational Medicine, Accepted Ζαμανάκου Μαρία, BSc, MSc

2 Τ- ρυθμιστικά κύτταρα Tregs FoxP3 LAG-3 CD25: α αλυσίδα του υποδοχέα της IL-2R FoxP3: μεταγραφικός καταστολέας των γονιδίων των κυτταροκινών LAG-3 (CD223): ομόλογη του CD4 συνδεόμενη με τα HLA μόρια πρωτεΐνη

3 Foxp3 (Transcription factor forkhead box protein 3) Μεταγραφικός παράγοντας χαρακτηριστικός των φυσικών Τ ρυθμιστικών κυττάρων (ntregs) Ενεργοποιημένα CD4 + CD25 - και CD8 + CD25 - T κύτταρα μπορούν να αποκτήσουν ρυθμιστικό φαινότυπο εκφράζοντας Foxp3 Έκφραση του FOXP3 σχετίζεται με τη μείωση της δραστικότητας των Τ κυττάρων: T κύτταρα από διαγονιδιακά ποντίκια που υπερ-εκφράζουν Foxp3 δεν ανταποκρίνονται σε διέγερση μέσω του TCR T κύτταρα από ποντίκια που φέρουν μετάλλαξη στο Foxp3 (scurfy mice) βρίσκονται σε κατάσταση ενεργοποίησης και υπερ-δραστηριοποιούνται μετά απόδιέγερσημέσωτουtcr

4 FOXP3 Μεταγραφική ενεργοποίηση επιφανειακών μορίων όπως CD25, GITR, CTLA-4 και CD103 GITR CTLA-4 Μεταγραφική καταστολή των γονιδίων των κυτταροκινών (IL-2, ΙL-4 και IFN-γ)

5 ΥΠΟΒΑΘΡΟ Έκφραση του Foxp3 σε πληθυσμούς της CD4 + T κυτταρικής σειράς, και πολύ λίγα έως καθόλου αντίγραφα, σε άλλους λεμφοκυτταρικούς πληθυσμούς ή/και ιστούς (B κύτταρα, CD8+ T κύτταρα, εγκέφαλο, καρδιά, νεφρά και πνεύμονα) Έκφραση του Foxp3 στα Tregs λαμβάνει χώρα έπειτα από απομεθυλίωση του γονιδίου και αποτελεί μηχανισμό ανοσιακής διαφυγής ΥΠΟΘΕΣΗ Απομεθυλίωση του υποκινητή του Foxp3 γονιδίου στα καρκινικά κύτταρα μπορεί να οδηγεί στην έκφραση Foxp3 πρωτεΐνης και στην έκφραση αντίστοιχων παραγόντων, με αποτέλεσμα την κατασταλτική δράση ΣΤΟΧΟΣ Ηδιερεύνησητηςέκφρασης μεταγράφων ή και πρωτεΐνης του Foxp3 σε καρκινικές γραμμές διαφορετικής προέλευσης, καθώς και σε καρκινικό και παρακείμενο μη προσβεβλημένο ιστό ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα

6 ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ 25 καρκινικές σειρές διαφορετικής προέλευσης Καρκινικό και παρακείμενο μη προσβεβλημένο ιστό 24 ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα

7 ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ Foxp3 mrna Συμβατική PCR (b-actin) Real Time PCR (β2m) Πρωτεΐνη Ανοσοϊστοχημεία (clone 236A/E7, Bioscience) Κυτταρομετρία ροής (clone PCH101, Bioscience)

8 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Έκφραση Foxp3 mrna

9 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Έκφραση Foxp3 πρωτεΐνης Ανοσοϊστοχημεία Μελάνωμα T λεμφοβλαστική λευχαιμία Αδενοκαρκίνωμα πνεύμονα Αδενοκαρκίνωμα μαστού Αδενοκαρκίνωμα παχέως εντέρου EBVμετασχηματισμένα B κύτταρα

10 ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Έκφραση Foxp3 πρωτεΐνης Κυτταρομετρία ροής

11 Έκφραση του Foxp3 σε καρκινικό ιστό

12 ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Χρησιμοποιώντας 4 διαφορετικές μεθόδους διαπιστώσαμε έκφραση του Foxp3 σε καρκινικά κύτταρα ποικίλης προέλευσης ΗέκφρασητουFoxp3 δεν περιορίζεται στα ρυθμιστικά κύτταρα και σε καρκινικά κύτταρα παγκρέατος όπου είχε μέχρι πρόσφατα παρατηρηθεί Παραμένει προς μελέτη εάν η έκφραση αυτή προσδίδει στα καρκινικά κύτταρα και τη ρυθμιστική λειτουργία των Tregs οδηγώντας σε ανοσιακή διαφυγή του καρκίνου Τα ευρήματα αυτά έχουν ύψιστη σημασία καθώς τα Τregs εμπλέκονται στη διαδικασία της καρκινογένεσης και στην ανάπτυξη αντικαρκινικών προσεγγίσεων που στοχεύουν την έκφραση ή/και τη λειτουργία του Foxp3

13 Cancer Immunology Unit, Department of Immunology and Histocombatibility Karanikas V, Speletas M, Zamanakou M, Kalala F, Loules G, Germenis ΑΕ Collaborators - Respiratory Medicine Department, UTH: Prof Gourgoulianis K, Kerenidi N - Genetic and Cellular Unit, Ludwig Institute for Cancer Research, Belgium: Prof Coulie - Cancer Trials Laboratory, Austin Research Institute, Melbourne, Australia: Prof. Loveland Funding: This work was supported by a) a Marie Curie Incoming International Fellowship within the 6th European Community Framework Programme (MIF1-CT ) GRANT, b) a E.U-European Social Fund (70%), the Greek Ministry of Development-GSRT (30%) & Antisel (10%)(EPAN05 NON-EU-445) grant and c) a Glaxo Smith Kline Hellas Research Fellowship (Program No3116) grant