Ε Ν Θ Ε Τ Ο Π Ρ Ο Ϊ Ο Ν Τ Ο Σ

Transcript

1 Immucor Transplant Diagnostics, Inc. 550 West Avenue, Stamford, Connecticut 090 Η.Π.Α. Τηλ.: +1 (0) ή (888) (Μόνο για τις Η.Π.Α. και τον Καναδά), Φαξ: +1 (0) Εγχειρίδια προϊόντος και μεταφράσεις στη διεύθυνση: Ε Ν Θ Ε Τ Ο Π Ρ Ο Ϊ Ο Ν Τ Ο Σ LIFECODES LifeScreen Deluxe (LMX) είναι ένας προσδιορισμός διαλογής της Luminex για την ποιοτική ανίχνευση αντισωμάτων αντιδραστικών ομάδων IgG σε μόρια ανθρώπινης προέλευσης HLA τάξης Ι και τάξης II. Για διαγνωστική χρήση In Vitro. Ορισμός συμβόλων..... Προοριζόμενη χρήση... Περίληψη και εξήγηση.... Αρχές της διαδικασίας. Αντιδραστήρια.. A. Ταυτοποίηση... B. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις C. Οδηγίες αποθήκευσης... D. Καθαρισμός ή επεξεργασία που απαιτείται για τη χρήση... E. Ενδείξεις αστάθειας Απαιτήσεις εργαλείου.. ΠΙΝΑΚΑΣ ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΩΝ 1 Συλλογή δειγμάτων και προετοιμασία.. Διαδικασία A. Παρεχόμενα υλικά. B. Απαιτούμενα αλλά όχι παρεχόμενα υλικά.... Οδηγίες χρήσης.. Έλεγχος ποιότητας.. Αποτελέσματα. Περιορισμοί της διαδικασίας Αντιμετώπιση προβλημάτων Ειδικά χαρακτηριστικά απόδοσης Βιβλιογραφία 5 5 ΟΡΙΣΜΟΣ ΣΥΜΒΟΛΩΝ (Ετικέτες προϊόντων και συμπληρωματικά έγγραφα) Αριθμός Παρτίδας Αραίωση πριν από η χρήση Όνομα ασθενούς DIL NAME Αριθμός καταλόγου Φωτοευαίσθητο (Κρατήστε μακριά από το φως) Αριθμός ταυτοποίησης Ημερομηνία λήξης Επαρκές για Ν δοκιμές Εύρος θερμοκρασιών (αποθήκευση) Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης ID# Ημερομηνία DATE Τεχνικός TECH Σφαιρίδιο BEAD Εθνικότητα ETHN Δωρητής DONOR Διάμεση Ένταση Φθορισμού Θετικό σφαιρίδιο ελέγχου (Ανοσοσφαιρίνη G) Ημερομηνία αιμορραγίας ατηρούμενες σειρές MFI Βαθμολογία (δείτε την ενότητα Αποτελέσματα) SCORE Ερμηνεία INTRP Συντελεστής ρύθμισης υπόβαθρου Αρνητικό σφαιρίδιο ελέγχου IgG Τάξη IΤάξη I CLI Τάξη II CLII Δείγμα SAMPLE BDT Observed Ranges Αριθμός σφαιριδίων με αντίγονο Έλεγχοι Controls Κατασκευαστ ής Βιολογικοί κίνδυνοι Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Προσοχή! Βλ. Συνοδευτικά έγγραφα BAF CON Αριθμός παρτίδας μείγματος σφαιριδίων Bead Mix Lot # Προειδοποίηση Σελίδα 1 από LC100IVDEL.1 (07/1)

2 ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το LIFECODES LifeScreen Deluxe είναι ένας ποιοτικός ανοσοπροσδιορισμός περιεκτικότητας με βάση τα σφαιρίδια που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων IgG έναντι των μορίων HLA τάξης I και τάξης IΙ. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΞΗΓΗΣΗ Τα αντίγονα ανθρώπινων λευκοκυττάρων (HLA) είναι ένα σύστημα γλυκοπρωτεϊνών που έχουν λειτουργικό ρόλο στην παρουσίαση των πεπτιδίων στο ανοσοποιητικό σύστημα. 1, Ωστόσο, ως ιδιαίτερα πολυμορφικό σύστημα, τα μόρια HLA μπορούν να αποτελέσουν στόχους των αποκρίσεων των αντισωμάτων σε άτομα κατά τη διάρκεια εγκυμοσύνης, μετάγγισης προϊόντων αίματος ή απόρριψης μεταμόσχευσης οργάνων. Γενικά, η αλλοανοσοποίηση οδηγεί στην παραγωγή αντισωμάτων HLA στο % περίπου των ατόμων που έχουν εκτεθεί. Η παρουσία ή η απουσία αυτών των συγκεκριμένων αντισωμάτων HLA-παίζει ρόλο στον προσδιορισμό της επιβίωσης των αλλομοσχευμάτων των μεταμοσχεύσεων. 4 Τα σφαιρίδια LIFECODES LifeScreen Deluxe έχουν σχεδιαστεί για την ανίχνευση των αντισωμάτων IgG σε αντιγόνα HLA τάξης I και τάξης II. Το LifeScreen αποτελείται από μοναδικά σφαιρίδια Luminex συζευγμένα με γλυκοπρωτεΐνες HLA τάξης Ι και τάξης ΙΙ κεκαθαρμένης συγγένειας. ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Ένα κλάσμα των σφαιριδίων επιτρέπεται να επωασθεί μαζί με ένα μικρό όγκο δείγματος δοκιμαστικού ορού. Τα ευαισθητοποιημένα σφαιρίδια στη συνέχεια θα εκπλυθούν για να απομακρυνθεί το μη συνδεδεμένο αντίσωμα. Στη συνέχεια, προστίθεται ένα αντι-ανθρώπινο αντίσωμα IgG συζευγμένο με φυκοερυθρίνη. Έπειτα, από μία ακόμη επώαση, το δοκιμαστικό δείγμα αραιώνεται και αναλύεται στο εργαλείο Luminex. Η ένταση του σήματος από κάθε σφαιρίδιο συγκρίνεται με την ένταση του σήματος ενός σφαιριδίου αρνητικού μάρτυρα που περιλαμβάνεται στο παρασκεύασμα σφαιριδίων για να προσδιορίσει εάν το σφαιρίδιο είναι θετικό ή αρνητικό για το συνδεδεμένο αλλοαντίσωμα. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ A. Ταυτοποίηση 815: Το LMX LIFECODES LifeScreen Deluxe αποτελείται από πέντε (5) συστατικά στοιχεία. Τα παρακάτω παρέχονται σε επαρκείς ποσότητες για 9 δοκιμές. 1. LMXB Σφαιρίδια LifeScreen Deluxe (480 µl): Ένα μείγμα σφαιριδίων συζευγμένων με γλυκοπρωτεΐνες HLA τάξης Ι ή γλυκοπρωτεΐνες HLA τάξης ΙΙ μαζί με τέσσερα σφαιρίδια μάρτυρες. Το ρυθμιστικό διάλυμα αποθήκευσης περιέχει NaCl, Tween-0, ProClin00, και λευκωματίνη βόειου ορού. ΦΩΤΟΕΥΑΙΣΘΗΤΟ. Κρατήστε το προϊόν μακριά από την έκθεση στο φως για ώρες ή λιγότερο. Έτοιμο για χρήση. Να φυλάσσεται στους C έως 8 C σε σκοτεινό μέρος.. LMCJS Συμπύκνωμα συζεύγματος (550 µl): 10x απόθεμα αντι-ανθρώπινη IgG αίγας συζευγμένη με φυκοερυθρίνη σε ρυθμιστικό διάλυμα αποθήκευσης με βάση το φώσφορο που περιέχει NaCl, Tween-0, αζίδιο νατρίου και λευκωματίνη βόειου ορού. DIL ΠΡΕΠΕΙ ΝΑ ΑΡΑΙΩΘΕΙ σε αναλογία 1:10 σε ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης πριν από τη χρήση. ΦΩΤΟΕΥΑΙΣΘΗΤΟ. Κρατήστε το προϊόν μακριά από την έκθεση στο φως για ώρες ή λιγότερο. Να φυλάσσεται στους C έως 8 C σε σκοτεινό μέρος.. LMWB Ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης (150 ml): Ένα ρυθμιστικό διάλυμα με βάση το φώσφορο που περιέχει NaCl, Tween- 0, αζίδιο νατρίου και λευκωματίνη βόειου ορού. Έτοιμο για χρήση. Να φυλάσσεται στους C έως 8 C και να αποκτά θερμοκρασία δωματίου (0 C έως 4 C) πριν από τη χρήση. Τα παρακάτω παρέχονται σε επαρκή ποσότητα για έξι () δοκιμαστικές λειτουργίες: 4. LMPC Ορός θετικού ελέγχου (80 µl): Αυτός ο ορός ή το μίγμα ορών λαμβάνεται από άτομο(α) που αποδεικνύεται να είναι αλλοανοσοποιητικά στα αντιγόνα HLA. Περιέχει αζίδιο του νατρίου. Έτοιμο για χρήση. Να φυλάσσεται στους C έως 8 C. 5. LMPC Ορός αρνητικού ελέγχου (80 µl): Αυτός ο ορός ή το μίγμα ορών λαμβάνεται από άτομο(α) που αποδεικνύεται ότι δεν έχουν καθόλου αντισώματα στα αντιγόνα HLA. Περιέχει αζίδιο του νατρίου. Έτοιμο για χρήση. Να φυλάσσεται στους C έως 8 C. B. Προειδοποιήσεις ή προφυλάξεις 1. Για διαγνωστική χρήση In Vitro. Το υλικό ανθρώπινης προέλευσης που χρησιμοποιήθηκε για την παραγωγή αυτού του κιτ δοκιμάστηκε και βρέθηκε αρνητικό για αντισώματα στους ιούς HIV, HCV, και HBsAg με μεθόδους εγκεκριμένες από την υπηρεσία FDA. Ωστόσο, καμία δοκιμαστική μέθοδος δεν μπορεί να προσφέρει πλήρη διασφάλιση ως προς την απουσία μολυσματικών παραγόντων. Επομένως, όταν εργάζεστε με αυτά τα υλικά, να εφαρμόζετε τις Γενικές προφυλάξεις.. Η αντικατάσταση συστατικών στοιχείων με στοιχεία που δεν παρέχονται στο παρόν σύστημα μπορεί να οδηγήσει σε λανθασμένα αποτελέσματα. 4. Μερικά αντιδραστήρια περιέχουν 0.1% αζίδιο νατρίου ως συντηρητικό, το οποίο μπορεί να αντιδράσει με τις σωληνώσεις μόλυβδου και χαλκού και να σχηματίσει εκρηκτικά μεταλλικά αζίδια. Να χρησιμοποιείτε άφθονες ποσότητες νερού όταν απορρίπτετε υλικά στο νεροχύτη. 5. Η βακτηριακή μόλυνση των δειγμάτων ή η παρουσία ανοσοσυμπλεγμάτων ή άλλου συνόλου ανοσογλοβουλίνης μπορεί να προκαλέσει αυξημένη μη συγκεκριμένη σύνδεση και λανθασμένα αποτελέσματα.. Το παρόν προϊόν ανιχνεύει αντισώματα IgG που μπορεί να είναι ή όχι λεμφοκυτταροτοξικά. 7. Το παρόν προϊόν δεν αναμένεται να ανιχνεύει αντισώματα ανοσογλοβουλίνης τάξης IgA ή IgM. 8. Αυτά τα προϊόντα έχουν σχεδιαστεί για να χρησιμοποιηθούν με το εργαλείο Luminex σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. 9. Απαλλαγείτε από όλα τα υλικά μετά τη χρήση σύμφωνα με τους εγχώριους κανονισμούς. 10. Βλέπε Φύλλα δεδομένων ασφαλείας υλικού για επιπλέον πληροφορίες. Σελίδα από LC100IVDEL.1 (07/1)

3 C. Οδηγίες αποθήκευσης 1. Ανατρέξτε στις ετικέτες των προϊόντων για ενδείξεις αποθήκευσης.. Τα σφαιρίδια και το συμπυκνωμένο σύζευγμα LifeScreen Deluxe είναι ΦΩΤΟΕΥΑΙΣΘΗΤΑ. Κρατήστε το προϊόν μακριά από την έκθεση στο φως για ώρες ή λιγότερο. D. Καθαρισμός ή επεξεργασία που απαιτείται για τη χρήση 1. LMCJS Συμπυκνωμένο σύζευγμα: DIL ΠΡΕΠΕΙ ΝΑ ΑΡΑΙΩΘΕΙ σε αναλογία 1:9 σε ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης πριν από τη χρήση. Ετοιμάστε το αραιωμένο σύζευγμα προσθέτοντας 5 μl από LMCJS σε 45 μl ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης για κάθε δοκιμαστική πηγή. Περιτυλίξτε και/ή αποθηκεύστε σε σκοτεινό μέρος σε θερμοκρασία δωματίου (0 C έως 4 C) έως ότου χρησιμοποιήσετε το προϊόν. Επιστρέψτε την ποσότητα LMCJS που δεν έχει χρησιμοποιηθεί προς αποθήκευση στους C έως 8 C σε σκοτεινό μέρος για μελλοντική χρήση.. LMWB Ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης: Να βρίσκεται σε θερμοκρασία δωματίου (0 C έως 4 C) πριν από τη χρήση. E. Ενδείξεις αστάθειας 1. Μην χρησιμοποιείτε συστατικά στοιχεία ή μάρτυρες που παρουσιάζουν θολότητα ή έχει παρέλθει η ημερομηνία λήξης τους.. Πετάξτε όλους τους θετικούς ή αρνητικούς μάρτυρες που δεν χρησιμοποιήθηκαν, καθώς και το σύζευγμα μετά τη χρήση. ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ ΕΡΓΑΛΕΙΟΥ Εργαλείο Luminex (Lifecodes Αριθμός προϊόντος 88800/8880) ΣΥΛΛΟΓΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ Το αίμα πρέπει να συλλέγεται χωρίς αντιπηκτικό με ασηπτική τεχνική και να ελέγχεται όσο είναι ακόμη φρέσκο ώστε να ελαχιστοποιήσει την πιθανότητα εμφάνισης ψευδώς θετικών ή ψευδώς αρνητικών αντιδράσεων λόγω ακατάλληλης αποθήκευσης ή μόλυνσης του δείγματος. Ο ορός πρέπει να αποθηκευτεί στους C έως 8 C όχι για περισσότερο από 48 ώρες. Εάν ο ορός αποθηκευτεί πέραν των 48 ωρών, θα παγώσει στους ή κάτω από τους -0 C ή -80 C έως και έτη. Μεμονωμένα εργαστήρια πρέπει να δημιουργήσουν και να επικυρώσουν τις μεθόδους αποθήκευσης ωρών για περισσότερα από έτη. Ο ορός πρέπει να διαχωρίζεται από τα ερυθροκύτταρα όταν αποθηκεύεται ή μεταφέρεται. Αποφύγετε την επανειλημμένη ψύξη και απόψυξη των δειγμάτων ορού. Μη χρησιμοποιείτε μικροβιολογικά μολυσμένους, αιμολυμένους, λιπαιμικούς ή απενεργοποιημένους με θερμότητα ορούς καθώς αυτά τα δείγματα ενδέχεται να δώσουν αντιφατικά αποτελέσματα. Πριν τον προσδιορισμό, όλα τα δείγματα πρέπει να αναμειχθούν για λίγο με δονητικό αναδευτήρα (0 δευτερόλεπτα) και να φυγοκεντρηθούν (4-5 λεπτά στα rcf) για να ιζηματοποιηθεί κάθε σωματίδιο που ενδέχεται να υπάρχει. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ A. Παρεχόμενα υλικά (Βλ. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ στη σελίδα για πιο συγκεκριμένες πληροφορίες) Σφαιρίδια HLA Ορός αρνητικού μάρτυρα Συμπύκνωμα συζεύγματος Φύλλο καταγραφής Ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης Φύλλο μορφής πλάκας Ορός θετικού μάρτυρα B. Υλικά, αντιδραστήρια και απαιτούμενος αλλά μη παρεχόμενος εξοπλισμός (αυτά που αναφέρονται ή ισοδύναμα) Προσαρμοζόμενες πιπέτες 5 µl 50 µl με κατάλληλες απολήξεις Πολυκάναλη πιπέτα 50 µl με κατάλληλες απολήξεις και δοχείο ρυθμιστικού διαλύματος Περιστροφική συσκευή ή δονητικός αναδευτήρας με προσαρμογέα πλάκας Μικροπορώδεις πλάκες πολλαπλού φιλτραρίσματος (Αρ. Κατ. # MSBVN 110, LIfecodes #888) Σωληνάρια μικροφυγόκεντρου 1,5,0 ml Αυτοκόλλητα πλαστικά καλύμματα (Lifecodes #8881) Δοκιμαστικοί σωλήνες για δείγματα ασθενών και μαρτύρων Πολλαπλός συλλέκτης κενού (Millipore Αρ. Κατ. #MAVM 090R ή Qiagen Αρ. Κατ.#19504, Lifecodes Αρ. Κατ.# 88815) Χρονόμετρο Υγρό ελύτρου Luminex (1x ή 0x Lifecodes 8005, 805) Πένα επισήμανσης Σφαιρίδια βαθμονόμησης Luminex (CAL 1, CAL, CON 1, CON ; Lifecodes 800, 8007, 8008, 8009) Απεσταγμένο νερό Μικροφυγόκεντρος ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ: ΠΡΕΠΕΙ να δοθεί προσοχή ώστε να αποφευχθεί η μόλυνση του ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης και του αντιδραστήριου (αντιανθρώπινο) συμπυκνώματος συμπλέγματος. Η ακούσια μόλυνση αυτών των αντιδραστηρίων με ανθρώπινο ορό θα έχει ως αποτέλεσμα την εξουδετέρωση της αντι-ανθρώπινης IgG και την επακόλουθη αποτυχία της δοκιμής. Πρέπει να δοθεί προσοχή ώστε να ελέγχεται η ισχύς του κενού. Η ισχυρή πίεση κενού μπορεί να κάνει τα σφαιρίδια να κολλήσουν στη μεμβράνη με αποτέλεσμα να αποτύχει Σελίδα από LC100IVDEL.1 (07/1)

4 η μέτρηση των σφαιριδίων. Πρέπει να δοθεί προσοχή κατά το πιπετάρισμα στην πλάκα του φίλτρου. Προσέχετε να μην ακουμπήσετε τη μεμβράνη με την απόληξη της πιπέτας. Η επαφή της μεμβράνης με την απόληξη της πιπέτας μπορεί να προκαλέσει διάτρηση της μεμβράνης και επακόλουθη αποτυχία του προσδιορισμού. Πρέπει να δοθεί προσοχή ώστε να διασφαλιστεί, κατά τα βήματα της επώασης, ότι τα σφαιρίδια δε θα κάνουν το υγρό να χυθεί και δεν θα κολλήσουν στις πλευρές των φρεατίων. Όταν ο προσδιορισμός εκτελείται για πρώτη φορά, αναλύστε μερικούς θετικούς και/ή αρνητικούς μάρτυρες για να καθορίσετε τη βέλτιστη ταχύτητα της περιστροφικής πλατφόρμας ή του δονητικού αναδευτήρα. Η ταχύτητα των 00 περιστροφών ανά λεπτό περίπου έχει αποδειχτεί αποτελεσματική σε μερικά εργαλεία. Η παρουσία σημαντικών επιπέδων μη συνδεδεμένου αντισώματος, λόγω είτε υπερβολικού ορού είτε ανεπαρκούς έκπλυσης, μπορεί να μειώσει την ικανότητα του προσδιορισμού να ανιχνεύει IgG που έχει συνδεθεί με ευαισθητοποιημένα σφαιρίδια και να προκαλέσει λανθασμένα αποτελέσματα. Ένα δείγμα θετικών και αρνητικών ορών ελέγχου πρέπει να περιλαμβάνεται σε κάθε δοκιμή για να βοηθήσει να διαπιστώνονται τα τεχνικά σφάλματα ή οι αποτυχίες των αντιδραστηρίων. Μην αναμιγνύετε συστατικά στοιχείων που προέρχονται από διαφορετικές παρτίδες. Διαδικασία δοκιμής: 1. Αφήνοντας τα άλλα συστατικά στους C έως 8 C σε σκοτεινό μέρος έως ότου τα χρειαστείτε, αφήστε το Ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης να αποκτήσει θερμοκρασία δωματίου (0 C έως 4 C) πριν από τη χρήση. Κατά τη διάρκεια αυτού του χρονικού διαστήματος, χρησιμοποιήστε το Φύλλο μορφής πλάκας για να εκχωρήσετε μια θέση στην πλάκα για καθέναν από τους ορούς και τους μάρτυρες που πρόκειται να αναλυθούν. Οι οροί ελέγχου που παρέχονται με το κιτ χρησιμοποιούνται στην απεικόνιση ενός ευρέως αντιδραστικού θετικού αλλοορού και ενός αρνητικού ορού.. Καλύψτε τα μη εκχωρημένα φρεάτια της Πλάκας φίλτρου με αυτοκόλλητο πλαστικό κάλυμμα. Έπειτα, προϋγράνετε τα φρεάτια που πρόκειται να χρησιμοποιηθούν με μl απεσταγμένου νερού. Μετά από -5 λεπτά, αφαιρέστε το νερό με απαλή αναρρόφηση χρησιμοποιώντας πολλαπλό κενό. (Βλ. Τις συστάσεις του κατασκευαστή για την κατάλληλη χρήση του προϊόντος.). Ετοιμάστε σύντομα τα Σφαιρίδια HLA (0 δευτερόλεπτα) με φυγοκέντρηση του φιαλιδίου στα x g για να αφαιρέσετε τυχόν σφαιρίδια ή υγρό από το καπάκι ή τα τοιχώματα του φιαλιδίου. Αναμίξτε επιμελώς με δονητικό αναδευτήρα (~1 λεπτό) για να τοποθετηθούν (αιωρηθούν) ομοιόμορφα τα σφαιρίδια. 4. Προσθέστε 40 μl Ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης σε κάθε φρεάτιο δοκιμής της Πλάκας φίλτρου, έπειτα, προσθέστε 1.5 μl ορού του ασθενή ή ορού ελέγχου και αναμίξτε. 5. Προσθέστε 5 μl Σφαιριδίων HLA σε κάθε ένα από τα εκχωρημένα φρεάτια. Αναμίξτε ξανά τα Σφαιρίδια HLA στο φιαλίδιο κάθε λεπτά για να διατηρούνται σε κατάσταση αιώρησης κατά την διανομή τους. ΠΡΟΣΟΧΗ: Είναι σημαντικό να διατηρείτε τα σφαιρίδια σε κατάσταση επαναιώρησης για να διασφαλίζετε ότι μοιράζονται αρκετά σφαιρίδια στα φρεάτια και να διασφαλίζετε χαμηλούς χρόνους καταμέτρησης. Αν δεν αναμειγνύονται κατά διαστήματα τα σφαιρίδια σε δονητικό αναδευτήρα, τα σφαιρίδια θα εγκατασταθούν κοντά στον πυθμένα του σωληναρίου. Αυτό θα έχει ως αποτέλεσμα την τοποθέτηση διαφορετικών ποσοτήτων σφαιριδίων στα φρεάτια, γεγονός το οποίο ενδέχεται να έχει αρνητική επίδραση στους χρόνους εκτέλεσης και στην ανάλυση των αποτελεσμάτων.. Καλύψτε την πλάκα με αυτοκόλλητο πλαστικό κάλυμμα και έπειτα, περικαλύψτε την ή συσκευάστε την σε κουτί για να προστατεύεται από το φως. Επωάστε για 0 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (0-4 C) σε σκοτεινό μέρος σε περιστρεφόμενη πλατφόρμα (00 περιστροφές ανά λεπτό). Επιστρέψτε την ποσότητα των ορών ελέγχου και σφαιριδίων που δεν έχει χρησιμοποιηθεί προς αποθήκευση στους C έως 8 C σε σκοτεινό μέρος για μελλοντική χρήση. 7. Αραιώστε το σύζευγμα με ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης και φυλάξτε το σε σκοτεινό μέρος (5 μl συζεύγματος σε 45 μl ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης ανά δείγμα). Για να αντισταθμίσετε τις απώλειες του πιπεταρίσματος, μπορείτε να ετοιμάσετε ένα (1) πρόσθετο μέρος αραιωμένου συζεύγματος. Περικαλύψτε και/ή αποθηκεύστε σε σκοτεινό μέρος σε θερμοκρασία δωματίου έως ότου χρησιμοποιήσετε το προϊόν. Επιστρέψτε την ποσότητα Συμπυκνωμένου συζεύγματος που δεν έχει χρησιμοποιηθεί προς αποθήκευση στους C έως 8 C σε σκοτεινό μέρος για μελλοντική χρήση. 8. Μετά από επώαση 0 λεπτών αφαιρέστε το αυτοκόλλητο πλαστικό κάλυμμα και προσθέστε 100 μl Ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης σε κάθε φρεάτιο. Αναμίξτε χτυπώντας απαλά την πλάκα πλευρικά και αναρροφήστε απαλά την πλάκα. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η χρήση υπερβολικής ισχύος κενού θα κάνει τα σφαιρίδια να προσκολληθούν στη μεμβράνη και ενδέχεται να προκαλέσουν αστοχία του δείγματος. Εφαρμόστε την ελάχιστη πίεση κενού που απαιτείται για την αναρρόφηση των δειγμάτων. 9. Προσθέστε 50 μl Ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης σε κάθε φρεάτιο, αντλήστε, και επαναλάβετε άλλες δύο φορές για τρεις συνολικά εκπλύσεις. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η ανεπαρκής πλύση μπορεί να μειώσει την ικανότητα του συζεύγματος να ανιχνεύει IgG που έχει συνδεθεί με ευαισθητοποιημένα σφαιρίδια και να προκαλέσει λανθασμένα αρνητικά αποτελέσματα. 10. Προσθέστε 50 μl αραιωμένου συζεύγματος σε κάθε φρεάτιο. Περικαλύψτε την πλάκα ή συσκευάστε σε κουτί για να το προστατεύσετε από το φως. Τοποθετήστε σε περιστρεφόμενη πλατφόρμα (ρυθμίστε στις 00 περιστροφές ανά λεπτό) ή αναμίξτε απαλά με δονητικό αναδευτήρα κάθε 5-10 λεπτά. Επωάστε για 0 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (0 C έως 4 C). 11. Χρησιμοποιώντας μία καθαρή απόληξη πιπέτας, προσθέστε 150 μl Ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης σε κάθε φρεάτιο και αναμίξτε για να αιωρηθούν εκ νέου τα σφαιρίδια. 1. Συλλέξτε δεδομένα με το εργαλείο Luminex ακολουθώντας τις συστάσεις του κατασκευαστή. Καθυστερήσεις μεγαλύτερες από ώρες μπορεί να αυξήσουν την πιθανότητα εμφάνισης ψευδώς θετικών ή ψευδώς αρνητικών αντιδράσεων. Επιστρέψτε την ποσότητα Ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης που δεν έχει χρησιμοποιηθεί προς αποθήκευση στους C έως 8 C για μελλοντική χρήση. Σελίδα 4 από LC100IVDEL.1 (07/1)

5 ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ Ο έλεγχος ποιότητας του προσδιορισμού LMX υπάρχει μέσα στη δοκιμασία του συστήματος και περιλαμβάνει τέσσερα σφαιρίδια μάρτυρα (ένα σφαιρίδιο θετικού μάρτυρα και τρία σφαιρίδια αρνητικού μάρτυρα). Τα σφαιρίδια αρνητικού μάρτυρα (CON) μετρούν το δεύτερο επίπεδο στον προσδιορισμό και χρησιμοποιούνται για την ομαλοποίηση του σήματος των σφαιριδίων HLA. Αυτά τα σφαιρίδια θα πρέπει να παρουσιάζουν χαμηλές τιμές MFI. Ανατρέξτε στο ειδικό για την παρτίδα φύλλο καταγραφής για τις παρατηρούμενες σειρές για τα σφαιρίδια αρνητικού μάρτυρα. Δεδομένα εκτός σειράς θα πρέπει να εξετάζονται προσεκτικά. Το σφαιρίδιο θετικού μάρτυρα (Ιχνηθέτης 77) είναι επιστρωμένο με ανθρώπινη IgG και πρέπει να εμφανίσει τιμές MFI > με το σφαιρίδιο θετικού μάρτυρα ή το σφαιρίδιο αρνητικού μάρτυρα. Αν οι τιμές που λαμβάνετε είναι χαμηλότερες από < MFI, ο προσδιορισμός ενδέχεται να έχει εκπλυθεί ανεπαρκώς ή το σύζευγμα να είναι ακατάλληλο. Τα δείγματα των ασθενών ενδεχομένως να παρουσιάσουν μεγάλο εύρος αντιδραστικότητας με το σφαιρίδιο θετικού μάρτυρα (Ιχνηθέτης 77), αλλά θα πρέπει να παράγουν σήμα >.500 MFI. Σε περίπτωση απουσίας ορών, ο Ιχνηθέτης 77 θα δώσει ισχυρό σήμα ενώ τα υπόλοιπα σφαιρίδια θα δώσουν κατά μέσόν όρο 50 MFI ή λιγότερο. Αν ένα δοκιμαστικό δείγμα παράγει παρόμοιο μοτίβο τιμών, τότε το δείγμα ενδέχεται να έχει παραληφθεί από αμέλεια. Θα πρέπει να γίνει επανάληψη αυτών των δειγμάτων. Οι οροί θετικού και αρνητικού μάρτυρα παρέχονται με κάθε κιτ για να χρησιμοποιηθούν ως εξωτερικοί μάρτυρες προσδιορισμού και πρέπει να περιλαμβάνονται σε κάθε δοκιμαστική λειτουργία. Το αναφερόμενο αποτέλεσμα του ορού θετικού μάρτυρα πρέπει να είναι θετικό για τους Ιχνηθέτες I-01 και II-01. Το αναφερόμενο αποτέλεσμα του ορού αρνητικού μάρτυρα πρέπει να είναι αρνητικό για όλα τα σφαιρίδια. Η δοκιμασία πρέπει να εκτελεστεί όπως συνιστάται στο ένθετο της συσκευασίας καθώς επίσης όπως εκτελείται με κάθε άλλη διαδικασία ποιοτικού ελέγχου που συμφωνεί με τις τοπικές απαιτήσεις και τις απαιτήσεις της πολιτείας, της ομοσπονδίας ή / και των υπηρεσιών διαπίστευσης. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Για να προσδιορίσετε εάν μία δοκιμή δείγματος είναι θετική για συγκεκριμένα αντισώματα HLA τάξης I ή τάξης II, κάθε ξεχωριστό σφαιρίδιο HLA πρώτα αξιολογείται για να προσδιορίσετε εάν είναι θετική ή αρνητική για αντισώματα IgG. Για να προσδιορίσετε εάν ένα ξεχωριστό σφαιρίδιο HLA είναι θετικό, πρώτα χωρίστε το ξεχωριστό σφαιρίδιο MFI από το MFI για κάθε Σφαιρίδιο αρνητικού ελέγχου (CON1, CON, CON). Από αυτά τα πηλίκα, αφαιρέστε το Συντελεστή ρύθμισης υποβάθρου (BAF) για τον κατάλληλο συνδυασμό σφαιρίδιου/con. Ο BAF είναι προκαθορισμένο ποσοστό MFI για κάθε συνδυασμό σφαιριδίου/con για να αναπληρώσετε το ιστορικό παράσιτων λόγω της παραλλαγής παράσιτων. Δείτε τη συγκεκριμένη παρτίδα στο φύλλο καταγραφής που παρέχεται με το κιτ για τις τιμές του BAF. Παράδειγμα: Μεμονωμένο σφαιρίδιο MFI - (BAF) = Προσαρμοσμένο ποσοστό 1 Αρνητικό σφαιρίδιο ελέγχου 1 (CON1) MFI Μεμονωμένο σφαιρίδιο MFI - (BAF) = Προσαρμοσμένο ποσοστό Αρνητικό σφαιρίδιο ελέγχου (CON) MFI Μεμονωμένο σφαιρίδιο MFI - (BAF) = Προσαρμοσμένο ποσοστό Αρνητικό σφαιρίδιο ελέγχου (CON) MFI Για το PROBE I-01 και PROBE II-01, μία θετική τιμή για καθέναν από τους υπολογισμούς υποδεικνύει θετική αντίδραση σφαιριδίου. Για όλα τα σφαιρίδια που υπολείπονται, μία θετική τιμή για καθέναν από τους δύο υπολογισμούς υποδεικνύει αντίδραση θετικού σφαιριδίου. Μία αρνητική τιμή και για τους τρεις υπολογισμούς υποδεικνύει αρνητική αντίδραση σφαιριδίου. Αξιολογώντας δοκιμές δειγμάτων- Ένα δείγμα θεωρείται θετικό για συγκεκριμένα αντισώματα HLA τάξης I εάν τουλάχιστον ένα από τα επτά (7) σφαιρίδια HLA τάξης Ι είναι θετικό. Ένα δείγμα θεωρείται θετικό για HLA-συγκεκριμένα αντισώματα τάξης ΙΙ εάν τουλάχιστον ένα από τα πέντε (5) HLA σφαιρίδια τάξης ΙΙ είναι θετικό. Ένα δείγμα θεωρείται αρνητικό για HLA-συγκεκριμένα αντισώματα IgG εάν όλα τα σφαιρίδια HLA βρίσκονται να είναι αρνητικά. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Τα αποτελέσματα αυτής της δοκιμής δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται ως μοναδική βάση για τη λήψη κλινικών αποφάσεων. Μπορεί να προκύψουν λανθασμένα αποτελέσματα λόγω βακτηριακής μόλυνσης των υλικών ελέγχου, ακατάλληλων χρόνων επώασης, ακατάλληλης έκπλυσης σφαιριδίων, έκθεσης του συζεύγματος στο φως ή παράλειψης αντιδραστηρίων ή βημάτων της δοκιμής. Η παρουσία ανοσοσυμπλεγμάτων ή άλλου συνόλου ανοσογλοβουλίνης στον ορό ασθενή μπορεί να προκαλέσει αυξημένη μη ειδική σύνδεση και λανθασμένα αποτελέσματα στον παρόν προσδιορισμό. Το παρόν προϊόν ανιχνεύει αντισώματα IgG που μπορεί να είναι ή όχι λεμφοκυτταροτοξικά. Τα αντισώματα που ανιχνεύονται είναι εκείνα που αντιδρούν μέσα στον πληθυσμό των διαθέσιμων αντιγόνων που είναι καταχωρημένα στο Φύλλο καταγραφής. Η δυνατότητα ανίχνευσης ενός αντισώματος (IgG) βασίζεται στη συγγένεια και τον τίτλο του αντισώματος, καθώς και τη σχετική συχνότητα του επίτοπου στόχου που υπάρχει στο σφαιρίδιο. Τα αντισώματα (IgG) με χαμηλή συγγένεια και/ή χαμηλό τίτλο τα οποία είναι συγκεκριμένα για επίτοπα χαμηλής συχνότητας ενδεχομένως να μην ανιχνεύονται με το Ένθετο LIFECODES LifeScreen Deluxe. Σελίδα 5 από LC100IVDEL.1 (07/1)

6 Το LifeScreen Deluxe αποτελείται από μοναδικά σφαιρίδια Luminex συζευγμένα με γλυκοπρωτεΐνες HLA Τάξης Ι και τάξης ΙΙ κεκαθαρμένης συγγένειας. Για το PROBE I-01, οι γλυκοπρωτεΐνες HLA τάξης Ι καθαρής σχέσης λαμβάνονται από αιμοπετάλια 100 Καυκάσιων, 100 Αφροαμερικανών, και 100 αιμοδοτών Ισπανικής καταγωγής. Οι γλυκοπρωτεΐνες HLA Τάξης Ι κεκαθαρμένης συγγένειας που προέρχονται από Β λεμφοκύτταρα μετασχηματισμένα με EBV και προσκολλημένα στο PROBE I-0 έως το I-07 είναι καταχωρημένες στο φύλλο καταγραφής συγκεκριμένης παρτίδας. Για το PROBE II-01, οι γλυκοπρωτεΐνες HLA Τάξης ΙΙ καθαρής σχέσης που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή του παρόντος προϊόντος προέρχονται από Β λεμφοκύτταρα μετασχηματισμένα με EBV τα οποία αντιπροσωπεύουν τα ακόλουθα αντίγονα HLA Τάξης II: DR1, DR4, DR7, DR8, DR9, DR10, DR11, DR1, DR1, DR14, DR15, DR1, DR17, DR18, DR10, DR51, DR5, και DR5. Οι γλυκοπρωτεΐνες HLA Τάξης Ι κεκαθαρμένης συγγένειας που προέρχονται από Β λεμφοκύτταρα μετασχηματισμένα με EBV και προσκολλημένα στο PROBE II-0 έως το I-05 είναι καταχωρημένες στο φύλλο καταγραφής συγκεκριμένης παρτίδας. Ο καθορισμός της αντιδραστικότητας των αντισωμάτων για ένα δείγμα βασίζεται στην παρουσία τουλάχιστον ενός θετικού σφαιριδίου. Η αντιδραστικότητα κάθε μεμονωμένου σφαιριδίου βασίζεται στην επίτευξη του ελάχιστου αριθμού θετικών Προσαρμοζόμενοι Λόγοι. Μερικά δείγματα ίσως παράγουν Προσαρμοζόμενους Λόγους που βρίσκονται ακριβώς ή κοντά στις αποκομμένες τιμές και την εκχωρούμενη θετική αντιδραστικότητα που βασίζεται σε έναν θετικό Προσαρμοζόμενο Λόγο. Συνεπώς, ο καθορισμός της αντιδραστικότητας του αντισώματος για ένα ελεγμένο δείγμα ένθετου LIFECODES LifeScreen Deluxe πρέπει να λαμβάνει υπόψη τα συγκεκριμένα αποτελέσματα, τον αριθμό των θετικών Προσαρμοζόμενων Λόγων που απαιτούνται για καθένα από τους Προσαρμοζόμενους Λόγους για κάθε σφαιρίδιο ακριβώς ή κοντά στην αποκομμένη τιμή. Λόγω της σύνθετης φύσης της εξακρίβωσης HLA, η ερμηνεία των δεδομένων πρέπει να εκτελείται από εξειδικευμένο προσωπικό. Η γνώση του ιστορικού του ασθενούς καθώς και η κατανόηση των ομάδων με διασταυρωμένες αντιδράσεις μπορεί να αποδειχθούν χρήσιμες στην εκχώρηση αντιδραστικότητας αντισωμάτων σε συγκεκριμένο ορό. ΑΠΟΚΑΤΑΣΤΑΣΗ ΒΛΑΒΩΝ ΠΡΟΒΛΗΜΑ ΠΙΘΑΝΗ ΑΙΤΙΑ ΑΝΤΙΜΕΤΩΠΙΣΗ Το μίγμα ιχνηλατών δεν έχει εναιωρηθεί καλά Χρησιμοποιήστε το δονητικό αναδευτήρα για να αιωρηθεί ξανά πλήρως Αποτυχίες εργαλείου εκτός βαθμονόμησης Βλ. εγχειρίδιο εργαλείου Χαμηλός αριθμός σφαιριδίων Αποτυχίες εργαλείου η ροή του δείγματος είναι Βλ. εγχειρίδιο εργαλείου φραγμένη Φωτολεύκανση σφαιριδίων Χρησιμοποιήστε νέο κιτ Πίεση κενού υπερβολικά ισχυρή/σφαιρίδια Μειώστε την ισχύ του κενού προσκολλημένα στη μεμβράνη Ανεπαρκής έκπλυση Επαναλάβετε και παρακολουθήστε τις Υπέρβαση εισόδου μάρτυρα Ανεπαρκής ποιότητα δείγματος εκπλύσεις Αναδιατυπώστε Φωτολεύκανση συζεύγματος Χρησιμοποιήστε νέο κιτ Αποτυχία εισόδου θετικού μάρτυρα Ανεπαρκής έκπλυση Επαναλάβετε και παρακολουθήστε τις εκπλύσεις ΕΙΔΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ Όταν τα κιτ LIFECODES LifeScreen Deluxe χρησιμοποιούνται σύμφωνα με τη διαδικασία που περιγράφεται, τα αποτελέσματα αποκαλύπτουν την παρουσία ή απουσία των αντισωμάτων HLA IgG. Στην ανίχνευση των συγκεκριμένων αντισωμάτων HLA τάξης Ι, τα κιτ LifeScreen Deluxe παρουσίασαν 100% συν-θετικότητα (97,-100%), 91% συν-αρνητικότητα (87,-94,1%), και 95% συμφωνία για 417 δείγματα ορών που αξιολογήθηκαν όταν συγκρίθηκαν με αποτελέσματα που λήφθηκαν με χρήση μεθόδων LifeScreen (95% όρια πίστης). Στην ανίχνευση των συγκεκριμένων αντισωμάτων HLA τάξης ΙΙ, τα κιτ LifeScreen Deluxe παρουσίασαν 100% συν-θετικότητα (97,8-100%), 9% συν-αρνητικότητα (89,5-95,8%), και 9% συμφωνία για 44 δείγματα ορών που αξιολογήθηκαν όταν συγκρίθηκαν με αποτελέσματα που λήφθηκαν με χρήση μεθόδων LifeScreen (95% όρια πίστης). Σε εργαστηριακή δοκιμή, αξιολογήθηκαν τα ακόλουθα αντιδραστήρια και δεν υπήρξε παρεμβολή με το LIFECODES LifeScreen Deluxe: Remicade (Centocor), Rituxin (Genentech), Zenapax (Roche), Campath (Genzyme), και Gammaguard (Baxter). Αντίθετα, το Thymoglobulin (Genzyme) φάνηκε να προκαλεί ψευδή θετικά αποτελέσματα. Τα δείγματα που περιέχουν Thymoglobulin ενδέχεται να δώσουν λανθασμένα αποτελέσματα. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ Klein, J, Sato, A. The HLA System. N. Engl. J. Med. 000; 4:70 and 4:78. Parham, P. The Immune System. Garland Publishing, N.Y. and London. 000; 55. Rodey, GE. HLA Beyond Tears ( nd Edition). DeNovo, Inc. Durango, CO. 000; 1. McKenna, RM; Takemoto, SK; Terasaki, PI. Anti-HLA Antibodies after Solid Organ Transplantation. Transplantation 000; 9:19 ΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΤΗΣ ΚΑΙ ΕΞΟΥΣΙΟΔΟΤΗΜΕΝΟΣ ΑΝΤΙΠΡΟΣΩΠΟΣ Κατασκευαστής: Για Immucor Transplant Diagnostics, Inc., 550 West Avenue, Stamford, Connecticut 090 Η.Π.Α.: Τηλέφωνο: , (Μόνο για τις Η.Π.Α. και τον Καναδά); Φαξ: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος: Immucor Medizinische Diagnostik GmbH, Adam-Opel-Strasse A Rodermark, Γερμανία Τηλέφωνο: (+49) , Φαξ: (+49) Τεχνικό σέρβις στην Ευρώπη: +/ Εκδόθηκε: Rev. 1, Σελίδα από LC100IVDEL.1 (07/1)