Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna Αναθεώρηση CE 5, Ιανουάριος 2014.

Transcript

1 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 1 από Σκοπός χρήσης Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna Αναθεώρηση CE 5, Ιανουάριος Τα κιτ Biofortuna HLA SSPGo Kits είναι κιτ ποιοτικού προσδιορισμού με βάση το DNA για τον καθορισμό των αλληλομόρφων HLA είτε σε κιτ "χαμηλής ανάλυσης" είτε σε κιτ "ενδιάμεσου /μέσου επιπέδου" ανάλυσης ενίσχυσης ειδικής ομάδας αλληλομόρφων. Ο συνήθης ορισμός της ανάλυσης μέσου επιπέδου είναι η κατάσταση στην οποία η πλειονότητα των αποτελεσμάτων ορίζεται σαφώς σε επίπεδο δύο ψηφίων, π.χ. DQB1*02, DQB1*05, κ.λπ. Η υψηλή ανάλυση ορίζεται γενικά ως η κατάσταση στην οποία η πλειονότητα των αλληλομόρφων που ταυτοποιούνται ορίζεται σε επίπεδο τεσσάρων ψηφίων, όπως DQB1*02:01, DQB1*05:01, κ.λπ. Αυτό είναι ένα διαγνωστικό προϊόν in vitro που προορίζεται για χρήση μόνο από κατάλληλα εκπαιδευμένο προσωπικό. 2. Εισαγωγή Τα μόρια HLA παίζουν ζωτικό ρόλο στην ανοσία και την αναγνώριση του μορίων που ανήκουν στον οργανισμό έναντι μορίων που δεν ανήκουν στον οργανισμό, με συνέπεια ο προσδιορισμός του γονοτύπου HLA και η αντιστοίχιση HLA να είναι υποχρεωτικοί πριν από τις περισσότερες μορφές μεταμόσχευσης. Καθώς τα αντιγόνα HLA περιορίζουν την ειδικότητα των ανοσολογικών αποκρίσεων που διαμεσολαβούνται από T-λεμφοκύτταρα, ο προσδιορισμός γονότυπου HLA είναι ένα χρήσιμο ερευνητικό εργαλείο για κάθε ανοσολογική διαταραχή ή οποιαδήποτε ανοσολογική απόκριση σε παθογόνα, εμβόλια ή φαρμακευτική θεραπεία. Ο προσδιορισμός γονοτύπου HLA μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για να υποστηρίξει τη διάγνωση νόσων στις οποίες έχει παρατηρηθεί ότι ορισμένα αλληλόμορφα HLA συσχετίζονται σημαντικά με τις νόσους αυτές. Τα περισσότερα γονίδια HLA εμφανίζουν υψηλό βαθμό πολυμορφισμών και σε γενικές γραμμές ο προσδιορισμός γονοτύπου DNA είναι απαραίτητη για τον ακριβή προσδιορισμό των αντιγόνων HLA. Ο προσδιορισμός γονότυπου με PCR, με χρήση εκκινητών με ειδική αλληλουχία (SSP) 1, είναι μια ταχεία μέθοδος προσδιορισμού γονοτύπου HLA, ειδικότερα κατάλληλη για καταστάσεις όπου απαιτείται ανάλυση μέσου επιπέδου. Όλα τα κιτ Biofortuna SSP διαθέτουν τις αντιδράσεις λυοφιλοποιημένα, συμπεριλαμβανομένης της πολυμεράσης, ώστε ο χρήστης να προσθέτει μόνο το DNA πριν από την αντίδραση PCR. Καταβάλλεται κάθε προσπάθεια τα κιτ να είναι σύμφωνα με τις νέες εκδόσεις στοίχισης HLA της διεθνούς βάσης δεδομένων IMGT. Οι ενημερώσεις των κιτ είναι διαθέσιμες από τον ιστότοπο 3. Περιγραφή εξέτασης Η μέθοδος PCR SSP βασίζεται στην αρχή ότι μόνο οι εκκινητές με 3 -άκρα πλήρως συμπληρωματικά προς την αλληλουχία-στόχο θα ενισχύονται. Οι μη συμπληρωματικοί εκκινητές δεν δίνουν προϊόντα ενίσχυσης. 2 Ένα ζεύγος εκκινητών εσωτερικού μάρτυρα που ενισχύει μια συντηρημένη περιοχή ενός γονιδίου συντήρησης (housekeeping gene), συμπεριλαμβάνεται σε κάθε μείγμα αντίδρασης PCR. Το ζεύγος εκκινητών εσωτερικού μάρτυρα είναι ένας

2 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 2 από 13 δείκτης της ακεραιότητας της αντίδρασης PCR. Ο προσδιορισμός γονοτύπου SSP, γενικά, χρησιμοποιεί πολλαπλές αντιδράσεις από την κοινή ανάλυση των οποίων υποδεικνύεται ο γονότυπος. H οπτική απεικόνιση των ενισχυμένων προϊόντων μπορεί να επιτευχθεί με χρήση συστημάτων ηλεκτροφόρησης σε πήκτωμα αγαρόζης, τα οποία διαχωρίζουν τα θραύσματα DNA με βάση το μέγεθος. 4. Περιεχόμενα του κιτ Πλάκες PCR πολυπροπυλενίου ή ταινίες που αποτελούνται από 8 έως 96 πηγάδια PCR (ανάλογα με το κιτ) και κάθε πηγάδι περιέχει προδιανεμημένους λυοφιλοποιημένους εκκινητές, πολυμεράση, dntps* και ρυθμιστικό διάλυμα. Κάθε πλάκα ή ταινία διατίθεται σφραγισμένη με φύλλο ή πώμα και είναι συσκευασμένη ξεχωριστά σε θήκη που περιέχει σακουλάκι με αποξηραντικό. Φύλλα σφράγισης ή πώματα PCR. 1x Οδηγίες χρήσης. Πιστοποιητικό ανάλυσης Οι πίνακες ερμηνείας και τα δελτία δεδομένων ασφαλείας (MSDS) μπορούν να ληφθούν από τον ιστότοπο της Biofortuna Αν δεν μπορείτε να πραγματοποιήσετε λήψη από τον ιστότοπο, επικοινωνήστε με τον τοπικό διανομέα. *Η άδεια χρήσης των CleanAmp dntps εκχωρείται από την Trilink Biotechnologies Inc για χρήση με τα προϊόντα Biofortuna SSPGo. 5. Αντιδραστήρια και εξοπλισμός που δεν παρέχονται Kατάλληλες βαθμονομημένες πιπέτες και αποστειρωμένα ρύγχη π.χ. πιπέτες P10 με ρύγχη των 10µl με φίλτρο. Κιτ/ εξοπλισμός απομόνωσης DNA. Φασματοφωτόμετρο υπεριώδους (UV). Σωληνάρια πολυπροπυλενίου. Αποστειρωμένο νερό καθαρότητας μοριακής βιολογίας Θα πρέπει να χρησιμοποιείται ένας θερμικός κυκλοποιητής με τις παρακάτω προδιαγραφές: Θερμικός κυκλοποιητής 96 πηγαδιών με θερμαινόμενο καπάκι με θερμοκρασία 104 C για λειτουργία χωρίς προσθήκη παραφινέλαιου στις αντιδράσεις.ρυθμός αύξησης θερμοκρασίας 1,0 o C/sec. Εύρος τιμών θερμοκρασίας από 4,0 C έως 99,9 C Ακρίβεια θερμοκρασίας ±0,25 C για εύρος τιμών από 35 C έως 99,9 C Βαθμονόμηση θερμοκρασίας που ανάγεται σε πρότυπο αναφοράς Προγραμματίστε τον θερμικό κυκλοποιητή χρησιμοποιώντας τις παραμέτρους κυκλοποίησης PCR που αναφέρονται παρακάτω στην Ενότητα 8. Σημείωση: για ειδικές πληροφορίες σχετικά με τον θερμικό κυκλοποιητή ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης του κατασκευαστή. Ο θερμικός κυκλοποιητής θα πρέπει να βαθμονομείται σύμφωνα με τους κανόνες διαπίστευσης της Αμερικανικής Εταιρείας Ιστοσυμβατότητας και Ανοσογενετικής (American Society of Histocompatibility and Immunogenetic, ASHI) ή της Ευρωπαϊκής Ομοσπονδίας Ανοσογενετικής (European Federation of Immunogenetics, EFI). Τα αντιδραστήρια ηλεκτροφόρησης σε πήκτωμα (αγαρόζη, 0,5x TBE, δείκτης μοριακού βάρους DNA 1000bp, βρωμιούχο αιθίδιο 10mg/ml). Εξοπλισμός ηλεκτροφόρησης σε πήκτωμα (δεξαμενές πηκτώματος, τροφοδοτικό ρεύματος, σύστημα καταγραφής πηκτώματος με συσκευή εκπομπής υπεριώδους φωτός (UV transilluminator). Λογισμικό για να βοηθήσει στο εγχειρίδιο ανάλυση των αποτελεσμάτων των δοκιμών κιτ SSPGo και την αρχειακή αποθήκευση δεδομένων μπορεί να μεταφορτωθεί από την ιστοσελίδα Biofortuna Σημείωση: οποιαδήποτε αλλαγή στις ειδικές συνθήκες, όπως οι ρυθμοί αύξησης θερμοκρασίας του θερμικού κυκλοποιητή, ενδέχεται να επηρεάσει την ερμηνεία των αποτελεσμάτων των εξετάσεων.

3 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 3 από Ασφάλεια και Προειδοποιήσεις Για διαγνωστική χρήση in vitro. Οι εξετάσεις πρέπει να εκτελούνται μόνο από κατάλληλα εκπαιδευμένο προσωπικό. Όλα τα αποτελέσματα προσδιορισμού τύπου πρέπει να επαληθεύονται από το κατάλληλο προσωπικό και εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθούν για λήψη κλινικής απόφασης, τα αποτελέσματα αυτά πρέπει να ελέγχονται με άλλη μέθοδο προσδιορισμού τύπου. Ο χειρισμός όλων των αντιδραστηρίων πρέπει να γίνεται σύμφωνα με την ορθή εργαστηριακή πρακτική. Οι περιοχές πριν και μετά την αντίδραση PCR πρέπει να είναι σαφώς διαχωρισμένες. Μην μεταφέρετε υλικά μετά την αντίδραση PCR πίσω στην περιοχή πριν την αντίδραση PCR. Προειδοποίηση βιολογικού κινδύνου: Να χειρίζεστε όλα τα προϊόντα αίματος ως δυνητικώς μολυσματικά. Προειδοποίηση βιολογικού κινδύνου: Το βρωμιούχο αιθίδιο είναι δυνητικά καρκινογόνο. Σε περίπτωση χρήσης του, να φοράτε πάντοτε γάντια, ποδιά εργαστηρίου και προστατευτικά γυαλιά. Προειδοποίηση βιολογικού κινδύνου: Να προσέχετε όταν χρησιμοποιείτε πηγές UV - να φοράτε πάντοτε γάντια, ποδιά εργαστηρίου και προστατευτικά γυαλιά. Ποτέ μην κοιτάζετε απευθείας στην πηγή υπεριώδους φωτός (UV). Δελτία δεδομένων ασφαλείας (MSDS) διατίθενται στην ιστοσελίδα 7. Αποθήκευση και σταθερότητα Τα κιτ Biofortuna SSPGo πρέπει να αποθηκεύονται σε θερμοκρασία 2-28 C. Μετά την αφαίρεση των σωληναρίων PCR από τη θήκη αλουμινίου, τα αντιδραστήρια πρέπει να επανυδατώνονται με DNA εντός 3 ωρών. Ανατρέξτε στη συσκευασία για την ημερομηνία λήξης. Μην χρησιμοποιείτε τα προϊόντα μετά την ημερομηνία που αναγράφεται. Μην χρησιμοποιείτε τα κιτ αν η συσκευασία αλουμινίου έχει σκιστεί ή διατρηθεί ή εάν δεν υπάρχει σακουλάκι με αποξηραντικό. Χρησιμοποιώντας μόνο τα φύλλα σφράγισης ή τα πώματα που παρέχονται, βεβαιωθείτε ότι τα σωληνάρια PCR είναι καλά κλεισμένα μετά την προσθήκη του DNA, καθώς η παράλειψη αυτή μπορεί να οδηγήσει σε εξάτμιση κατά την ενίσχυση PCR. Ιδιαίτερη προσοχή χρειάζεται σε άκρα και γωνίες. Σημείωση (1): Εάν είναι απαραίτητο, οι εκτός συσκευασίας, μη ενυδατωμένες πλάκες και ταινίες PCR μπορούν να διατηρηθούν έως και 3 ώρες πριν από την προσθήκη DNA σε θερμοκρασία μέχρι 21 o C και σε υγρασία το πολύ 60%. Σημείωση (2): Μόλις ενυδατωθούν με DNA, οι ταινίες και οι πλάκες PCR από πρόσφατα ανοιγμένες συσκευασίες μπορούν να αποθηκευτούν έως και 24 ώρες στους 2 8 C πριν από το βήμα της αντίδρασης PCR, αρκεί τα πηγάδια να είναι καλά σφραγισμένα για να αποτραπεί η εξάτμιση. 8. Οδηγίες χρήσης Απαιτήσεις για το δείγμα DNA Κάθε αντίδραση στην εξέταση είναι βελτιστοποιημένη για να χρησιμοποιεί ng DNA, παραμένει όμως ζωτικής σημασίας κάθε αντίδραση να επανυδατώνεται με 10µl υγρού ακριβώς. Για το λόγο αυτό, η εξέταση μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο με 10µl DNA συγκέντρωσης 5-10ng/µl.Αραιώστε το DNA έως την απαιτούμενη συγκέντρωση με αποστειρωμένο νερό καθαρότητας μοριακής βιολογίας μόνο. Προσοχή: Βεβαιωθείτε ότι το τελικό δείγμα DNA δεν περιέχει περισσότερο από 2,5 mm Tris/0,25 mm EDTA. Χρησιμοποιείτε μόνον DNA που έχει εκχυλιστεί από δείγματα τα οποία συλλέχθηκαν με κιτρικό και EDTA. Καθώς η ηπαρίνη μπορεί να αναστέλλει την αντίδραση PCR, συνιστάται το DNA να μην εκχυλίζεται από ηπαρινισμένα δείγματα αίματος. Έχει καταδειχθεί ότι η αιμοσφαιρίνη προκαλεί παρεμπόδιση στα κιτ SSPGo HLA, όταν υπάρχει σε δείγματα DNA σε συγκέντρωση μεγαλύτερη από 1 mg/dl.

4 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 4 από 13 Το DNA μπορεί να εκχυλιστεί με χρήση όλων των παραδοσιακών μεθόδων εκχύλισης. Βεβαιωθείτε ότι ο λόγος OD 260/280 του DNA του δείγματος κυμαίνεται μεταξύ 1,66 και 1,94, όπως μετράται με φασματοφωτομετρία υπεριώδους (UV). Οδηγίες πριν την αντίδραση PCR i. Βγάλτε μια πλάκα ή μια ταινία SSPGo από το σφραγισμένο σακουλάκι. ii. Σημειώστε τον αριθμό παρτίδας του προϊόντος της ανάλυσης. iii. Βεβαιωθείτε ότι όλα τα λυοφιλοποιημένα ιζήματα (αντιδραστήρια PCR) βρίσκονται στον πυθμένα των πηγαδιών των πλακών /των σωληναρίων πριν από την αφαίρεση της σφράγισης ή του πώματος. Σε αντίθετη περίπτωση, χτυπήστε μαλακά, ώστε το ίζημα να βρεθεί στον πυθμένα του σωληναρίου iv. Πρέπει να λαμβάνετε υπόψη ότι η πρώτη αντίδραση από κάθε γενετικό τόπο εξέτασης έχει πάντα ανοιχτό ροζ χρώμα σε σχέση με το υπόλοιπο κιτ (Κόκκινο χρώμα όταν ενυδατώνεται) Ορισμένες πλάκες PCR περιέχουν μια πλήρη αντίδραση χρώματος μωβ «No Template Control» (μάρτυρας χωρίς μήτρα) στο τελευταίο πηγάδι της πλάκας. Με τον αποστειρωμένο εξοπλισμό μεταφέρετε με την πιπέτα 10µl διαλύματος DNA σε κάθε αντίδραση της πλάκας ή της ταινίας. Δείτε τη σημείωση στο Κεφάλαιο 8, στην παράγραφο «Απαιτήσεις δείγματος DNA». Αν η πλάκα περιέχει μια πλήρη αντίδραση χρώματος μωβ «No Template Control» (Μάρτυρας χωρίς μήτρα), τότε μεταφέρετε με την πιπέτα 10µl αραιωτικού διαλύματος δείγματος (χωρίς DNA) σε αυτ ήν. Δείτε τη σημείωση στο Κεφάλαιο 8 για τον «No Template Control» (Μάρτυρας χωρίς μήτρα». v. Βεβαιωθείτε ότι το DNA έρχεται σε επαφή με ξηρά αντιδραστήρια σε κάθε αντίδραση πριν από τη θερμική κυκλοποίηση. vi. Σφραγίστε τις αντιδράσεις με το φύλλο σφράγισης ή τα πώματα σωληναρίων PCR. Βεβαιωθείτε ότι έχουν σφραγιστεί με τον καλύτερο δυνατό τρόπο ώστε να αποφύγετε πιθανή εξάτμιση. Ιδιαίτερη προσοχή χρειάζεται σε άκρα και γωνίες. vii. Τοποθετήστε το δίσκο ή τις ταινίες απευθείας μέσα στον θερμικό κυκλοποιητή. Βεβαιωθείτε ότι οι υποδοχείς έχουν εισαχθεί πλήρως στη θερμική βάση και ότι το καπάκι είναι εντελώς συμπιεσμένο. Σε αντίθετη περίπτωση μπορεί να αποτύχει κάποια μεμονωμένη αντίδραση PCR, λόγω εξάτμισης και συμπύκνωσης της PCR. viii. Εκτελέστε το πρόγραμμα PCR (ανατρέξτε στις παραμέτρους PCR). ΣΗΜΕΙΩΣΗ ΓΙΑ ΕΠΑΝΕΝΑΙΩΡΗΣΗ: Μόλις τα πηγάδια PCR απομακρυνθούν από τις συσκευασίες αλουμινίου, τα αντιδραστήρια θα πρέπει να επανενυδατωθούν με DNA αμέσως. Βλέπε Σημείωση (1) και Σημείωση (2) για επιπλέον πληροφορίες. ΣΗΜΕΙΩΣΗ NO TEMPLATE CONTROL (ΜΑΡΤΥΡΑΣ ΧΩΡΙΣ ΜΗΤΡΑ): Μερικά κιτ συμπεριλαμβάνουν έναν μάρτυρα χωρίς μήτρα (NTC, No Template Control) ως τελική αντίδραση στην πλάκα. Αυτή η αντίδραση περιέχει μια μωβ χρωστική για να ξεχωρίζει από τις υπόλοιπες αντιδράσεις. Ο NTC έχει σχεδιαστεί για την ανίχνευση επιμόλυνσης της αντίδρασης PCR ή επιμόλυνσης γενωμικού DNA που μπορεί να υπάρχει στο νερό που χρησιμοποιήθηκε στην επανεναιώρηση του DNA. Αν υπάρχει μόλυνση της αντίδρασης PCR θα παρατηρηθεί ενισχυμένο προϊόν ή προϊόντα διαφόρων μεγεθών. ΣΗΜΕΙΩΣΗ ΓΙΑ ΤΟ ΠΡΟΦΙΛ ΥΨΟΥΣ ΠΛΑΚΑΣ/ΤΑΙΝΙΑΣ PCR : Συνιστάται το προφίλ ύψους των πλακών και των ταινιών να είναι ισοδύναμα όταν τοποθετούνται στην ίδια συσκευή PCR. Τα διαφορετικά προφίλ ύψους μπορούν να προκαλέσουν ανεπαρκή επαφή με το θερμαινόμενο καπάκι των συσκευών PCR. Αυτό μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την ανεπαρκή ή ανεπιτυχή ενίσχυση PCR. Παράμετροι PCR Θα πρέπει να χρησιμοποιούνται οι παρακάτω παράμετροι PCR. Βεβαιωθείτε ότι η αύξηση της θερμοκρασίας είναι 1 C ανά δευτερόλεπτο και ενεργοποιήστε το θερμαινόμενο καπάκι. Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης του κατασκευαστή του θερμικού κυκλοποιητή για πλήρεις οδηγίες χρήσης. Οι θερμικοί κυκλοποιητές θα πρέπει να βαθμονομούνται σύμφωνα με τους κανόνες διαπίστευσης της Αμερικανικής Εταιρείας Ιστοσυμβατότητας και

5 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 5 από 13 Ανοσογενετικής (American Society of Hist ocompatibility and Immunogenetics, ASHI) ή της Ευρωπαϊκής Ομοσπονδίας Ανοσογενετικής (European Federation of Immunogenetics, EFI). Αποδιάταξη 94 C 5 λεπτά Αποδιάταξη 96 C 15 δευτερόλεπτα Υβριδοποίηση 66 C 50 δευτερόλεπτα 10 κύκλοι Επιμήκυνση 72 C 30 δευτερόλεπτα Αποδιάταξη 96 C 15 δευτερόλεπτα Υβριδοποίηση 64 C 50 δευτερόλεπτα 20 κύκλοι Επιμήκυνση 72 C 30 δευτερόλεπτα HOLD (Αναμονή) στους 15 C το πολύ για 72 ώρες πριν από τον διαχωρισμό των προϊόντων της αντίδρασης σε πήκτωμα. Εάν είναι απαραίτητο, η πλάκα PCR μπορεί να αποθηκευτεί στους 2-8 C έως 24 ώρες πριν από τον διαχωρισμό των προϊόντων της αντίδρασης σε πήκτωμα. Βεβαιωθείτε πάντα ότι οι πλάκες είναι καλά σφραγισμένες. Ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα Αυτές οι οδηγίες αφορούν την οριζόντια ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης: Παρασκευάστε πήκτωμα αγαρόζης 2% σε ρυθμιστικό διάλυμα TBE 0,5x. Όταν το πήκτωμα φτάσει σε θερμοκρασία περίπου 60 C προσθέστε βρωμιούχο αιθίδιο σε τελική συγκέντρωση 0,5µg/ml. Τοποθετήστε το πήκτωμα στη συσκευή ώστε να στερεοποιηθεί στο κατάλληλο σχήμα και εισάγετε τα χτένια μικροτιτλοδότησης (π.χ. 12x8 πηγάδια με διάκενο 9mm). Μόλις σταθεροποιηθεί, αφαιρέστε τα χτένια και καλύψτε το πήκτωμα με ρυθμιστικό διάλυμα TBE 0,5x. Φορτώστε όλο το προϊόν PCR, με τη σειρά, στο πήκτωμα αγαρόζης 2%, σημειώνοντας τη θέση κάθε αντιδραστηρίου. Ένας δείκτης μοριακού βάρους των 1000bp συνιστάται ως βοηθητικό μέσο για τον καθορισμό του μεγέθους. Πραγματοποιήστε ηλεκτροφόρηση στο πήκτωμα για 20 λεπτά στα 10V/cm. Ανατρέξτε στις οδηγίες του κατασκευαστή του συστήματος ηλεκτροφόρησης για λεπτομέρειες σχετικά με συγκεκριμένο εξοπλισμό. Τα πηκτώματα πρέπει να απεικονίζονται οπτικά με ένα σύστημα υπεριώδους ( UV) καταγραφής πηκτώματος με τη συσκευή εκπομπής υπεριώδους φωτός (UV transilluminator). Σημείωση : η ανεπαρκής ηλεκτροφόρηση ενδέχεται να οδηγήσει στη συγχώνευση μεγάλων προϊόντων ενίσχυσης, μεγέθους πάνω από 600bp, με τα προϊόντα ενίσχυσης του μάρτυρα. Βεβαιωθείτε ότι η ηλεκτροφόρηση είναι επαρκής για την εμφάνιση τέτοιων προϊόντων ενίσχυσης. Η υπερβολική διάρκεια ηλεκτροφόρησης ενδέχεται να οδηγήσει στην απώλεια προϊόντων ενίσχυσης μικρού μεγέθους εντός των προηγούμενων πηγαδιών σε ένα πήκτωμα. 9. Ερμηνεία Τα κιτ SSPGo είναι σχεδιασμένα ώστε τα αποτελέσματα να ορίζονται με μη αυτόματο τρόπο, χρησιμοποιώντας πίνακες ερμηνείας που είναι διαθέσιμοι στην ηλεκτρονική διεύθυνση Αν αντιμετωπίσετε προβλήματα κατά την πρόσβασή σας στον ιστότοπο, επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο. Οι πίνακες ερμηνείας ενδέχεται να περιλαμβάνουν σημειώσεις ειδικές για κάθε παρτίδα, οι οποίες ενδέχεται να σχετίζονται με την ερμηνεία. Εφαρμόστε τη φωτογραφία του πηκτώματος στον αντίστοιχο τύπο ερμηνείας αντιστοιχίζοντας το κιτ και τους αριθμούς παρτίδας. Εξετάστε την εικόνα του πηκτώματος. Κάθε αντίδραση θα πρέπει να περιέχει μια ζώνη θετικού μάρτυρα. Ανατρέξτε στους πίνακες ερμηνείας καθώς ο μάρτυρας μπορεί να έχει διαφορετικό μέγεθος για διαφορετικά προϊόντα SSPGo. Οι ζώνες εσωτερικού μάρτυρα μπορεί να εμφανίζονται πολύ ασθενέστερες όταν υπάρχουν ζώνες ειδικές για κάθε αλληλόμορφο. Αν υπάρχει μια ζώνη ειδική για κάθε αλληλόμορφο αλλά δεν

6 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 6 από 13 υπάρχει ζώνη μάρτυρα, αυτό θα πρέπει και πάλι να θεωρείται θετικό αποτέλεσμα. Αγνοήστε ζώνες μικρότερες από 70bp καθώς πρόκειται για μη ενσωματωμένους εκκινητές. Προσδιορίστε τις θετικές αντιδράσεις. Οι θετικές αντιδράσεις υποδεικνύονται από ζώνες του αναμενόμενου μεγέθους, όπως ορίζεται στους πίνακες ερμηνείας. Λάβετε υπόψη ότι μπορεί να υπάρχουν περισσότερα από ένα μεγέθη προϊόντων σε μια δεδομένη αντίδραση - αυτές είναι αντιδράσεις πολλαπλής PCR και σημειώνονται στους πίνακες ερμηνείας. Συγκρίνετε τις θετικές αντιδράσεις με τους πίνακες ερμηνείας. Το θετικό αποτέλεσμα σε μια αντίδραση δείχνει την παρουσία τουλάχιστον ενός από τα αλληλόμορφα που αναγράφονται στον αντίστοιχο πίνακα ερμηνείας. Το οποιοδήποτε δεδομένο αλληλόμορφο μπορεί να ενισχυθεί σε διάφορα σωληνάρια - εάν υπάρχει αλληλόμορφο, θα πρέπει να υπάρχει θετική αντίδραση σε όλες τις σχετικές αντιδράσεις. Ζώνη μάρτυρα Ζώνη ειδική για κάθε αλληλόμορφο Κατεύθυνση ηλεκτροφόρησης Σχήμα 1 Παραδείγματα θετικών αντιδράσεων, που υποδεικνύονται από την παρουσία ζωνών ειδικών για κάθε αλληλόμορφο και ζωνών μάρτυρα (αντιδράσεις 1-3). Οι αρνητικές αντιδράσεις υποδεικνύονται από την παρουσία ζωνών μάρτυρα αλλά την απουσία ζωνών ειδικών για κάθε αλληλόμορφο (αντιδράσεις 4-7). Μια αποτυχημένη αντίδραση υποδεικνύεται από την απουσία οποιασδήποτε ζώνης (αντίδραση 8). Βεβαιωθείτε ότι ο αριθμός παρτίδας του κιτ αντιστοιχεί σωστά με τον αριθμό παρτίδας στον πίνακα ερμηνείας. Λογισμικό για να βοηθήσει στο εγχειρίδιο ανάλυση των αποτελεσμάτων των δοκιμών κιτ SSPGo και την αρχειακή αποθήκευση δεδομένων μπορεί να μεταφορτωθεί από την ιστοσελίδα Biofortuna Διασφάλιση και Έλεγχος ποιότητας Κάθε παρτίδα προϊόντων SSPGo υπόκειται σε έλεγχο ποιότητας προτού οποιοδήποτε προϊόν φύγει από την Biofortuna. Τα δείγματα κάθε παρτίδας κιτ ελέγχονται έναντι μιας καθορισμένης ομάδας δειγμάτων ανθρώπινου DNA, προκειμένου να διασφαλιστεί η σωστή απόδοση. Κάθε αντίδραση έχει επικυρωθεί έναντι τουλάχιστον 47 καλά χαρακτηρισμένων δειγμάτων DNA κυτταρικών σειρών. Η Biofortuna συνιστά κάθε εργαστήριο να επικυρώνει το ίδιο όλα τα νέα προϊόντα προσδιορισμού τύπου πριν από τη χρήση τους σε κλινικά δείγματα. Μόνο πλήρως εκπαιδευμένο και εξειδικευμένο προσωπικό πρέπει να εκτελεί διαγνωστικό προσδιορισμό τύπου και τα αποτελέσματα πρέπει να διασταυρώνονται από κάποιο άλλο εκπαιδευμένο άτομο του προσωπικού. 11. Κλινικά δεδομένα Μια in vitro μελέτη διαγνωστικών συσκευών διενεργήθηκε σε πέντε κέντρα εξετάσεων συγκρίνοντας την απόδοση των κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo με την απόδοση της συσκευής αναφοράς One Lambdaʼ Labtype SSO. Ο προσδιορισμός τύπου των γενετικών τόπων που ολοκληρώθηκε για τη δοκιμή SSPGo παρείχε αποτελέσματα εξετάσεων για HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DQA1, HLA-DQB1, HLA-DRB1/3/4/5, HLA-DPB1, DPA1, και HLA-DQA1*05, DQB1*02, DQ8.Η κλινική απόδοση των κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo παρείχε μια συνολική συμφωνία της τάξεως του % με τη συσκευή αναφοράς (μέθοδος SSO) με διάστημα εμπιστοσύνης όχι μικρότερο από 95% για τον προσδιορισμό γονοτύπου των αλληλομόρφων HLA Τάξης I και II για DNA συγκέντρωσης 5-10ng/μl που προήλθε από ολικό αίμα. Εξαιρώντας (3) επιβεβαιωμένα ασύμφωνα αποτελέσματα προσδιορισμού γονοτύπου, επιτεύχθηκε συμφωνία 100% για δείγματα για 3 παρτίδες του κάθε κιτ εξέτασης σε ένα σύνολο κέντρων κλινικών εξετάσεων στις Η.Π.Α. και στο Ηνωμένο Βασίλειο.

7 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 7 από 13 Η αναπαραγωγιμότητα μεταξύ κέντρων για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo ελέγχθηκε τρία κέντρα με τη χρήση μιας αντιπροσωπευτικής ομάδας 8 αντιδράσεων SSPGo PCR έναντι παρεχομένων δειγμάτων DNA παρασκευασμένων στα 4ng/μl και 11ng/μl, τα οποία είναι οι δύο ακραίες τιμές του εύρους συγκεντρώσεων του κιτ. Ένα σύνολο από 958/960 μεμονωμένων αντιδράσεων που διανεμήθηκε ισότιμα σε ένα σύνολο τριών εξωτερικών κέντρων ήταν σύμφωνο με τα δείγματα DNA, με αποτέλεσμα μια συνολική συμφωνία 99,7% (0,995 LCL). Η αναπαραγωγιμότητα μεταξύ παρτίδων ελέγχθηκε σε τρεις παρτίδες ενός αντιπροσωπευτικού κιτ εξέτασης SSPGo HLA από ένα μεμονωμένο κέντρο/χειριστή με τη χρήση εύρους συγκεντρώσεων DNA από 5-10 ng/μl. Η αναπαραγωγιμότητα μεταξύ παρτίδων για την εξέταση τύπου HLA SSPGo παρουσίασε συμφωνία 100% με τη μέθοδο αναφοράς για 130/130 δείγματα DNA που εξετάστηκαν σε ένα σύνολο τριών (3) παρτίδων των αντιπροσωπευτικών εξετάσεων SSPGo HLA Type για συνολικά 390 εξετάσεις. Σύμφωνη επαλήθευση θετικού SSPGo HLA επετεύχθη για αλληλόμορφα Τάξης I και Τάξης II σε συγκριτική εξέταση με κλινικά δείγματα που είχαν εξεταστεί με LABType SSO. Η εξέταση SSPGo HLA στα εργαστήρια της εταιρείας παρείχε σύμφωνα αποτελέσματα με τα δείγματα DNA αναφοράς, εκτός από μη διαθέσιμα δείγματα, όπως ορισμένα σπάνια αλληλόμορφα HLA-DPB1 και σπάνια αλληλόμορφα HLA-Β, καθώς και ομάδες αλληλομόρφων όπως οι B*59:01, B*78 και B*83:01. Οι παρακάτω σπάνιες ομάδες αλληλομόρφων δεν επιβεβαιώθηκαν. B*59, B*78, B*83, DPB*21:01, DPB*26:01:02, DPB*27:01, DPB*28:01, DPB*29:01, DPB*31:01, DPB*34:01, DPB*35:01:01, DPB*39:01, DPB*45:1, DPB*46:01, DPB*51:01, DPB*55:01, DPB*59:01, DPB*63:01, DPB*81:01, DPB*85:01 & DPB*105:01

8 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 8 από Βιβλιογραφικές αναφορές 1) Bunce M et al Tissue Antigens Nov;46(5): ) Saiki RK et al. Nature Nov 13-19;324(6093): Οδηγός αντιμετώπισης προβλημάτων SSPGo Πρόβλημα Πιθανή αιτία Τρόπος αντιμετώπισης Καμία ενίσχυση σε καμία αντίδραση Λανθασμένη συγκέντρωση του DNA που χρησιμοποιήθηκε Μετρήστε την ποσότητα DNA μετρώντας στα OD 280 και βεβαιωθείτε ότι προστίθενται συνολικά ng DNA σε όγκο 10µl ανά αντίδραση. Υπάρχουν αναστολείς PCR στο δείγμα DNA Μην χρησιμοποιείτε ηπαρινισμένο αίμα. Αποφύγετε δείγματα DNA που περιέχουν αιμοσφαιρίνη σε συγκέντρωση υψηλότερη από 1 mg/dl. Χρησιμοποιήθηκε δείγμα DNA κακής ποιότητας Μετρήστε την ποιότητα του DNA. Ο λόγος OD 260/280 πρέπει να είναι 0,66 1,94 με βάση φασματοφωτομετρία υπεριώδους (UV). Βεβαιωθείτε ότι το DNA έχει επανεναιωρηθεί πλήρως στο διάλυμα μετά τη χρήση. Τα αντιδραστήρια δεν έχουν επανεναιωρηθεί πλήρως Ο θερμικός κυκλοποιητής δεν είναι σωστά ρυθμισμένος Βεβαιωθείτε ότι το δείγμα DNA αραιώθηκε σε νερό καθαρότητας μοριακής βιολογίας και ότι δεν περιέχει περισσότερα από 2,5 mm Tris/0,25 mm EDTA Βεβαιωθείτε ότι τα ιζήματα έχουν επανενυδατωθεί πλήρως κατά την προσθήκη του DNA. Bεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείται διάλυμα DNA 10µl ανά αντίδραση. Βεβαιωθείτε ότι το πρόγραμμα PCR έχει εισαχθεί σωστά, σύμφωνα με τις οδηγίες χρήσης. Βεβαιωθείτε ότι το θερμαινόμενο καπάκι του θερμικού κυκλοποιητή έχει ασφαλιστεί και και είναι επαρκώς σφιγμένο. Προβλήματα ηλεκτροφόρησης Ανατρέξτε στις οδηγίες χρήσης του θερμικού κυκλοποιητή για περισσότερες οδηγίες. Βεβαιωθείτε ότι υπάρχει ρεύμα στη δεξαμενή ηλεκτροφόρησης - ελέγξτε το τροφοδοτικό και καθαρίστε τα ηλεκτρόδια. Πραγματοποιήστε ηλεκτροφόρηση διατηρώντας το πήκτωμα, σε ρυθμιστικό διάλυμα TBE 0,5X. Βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείται 0,5µg/ml φρέσκου βρωμιούχου αιθιδίου. Ελέγξτε ότι υπάρχει επαρκής φωτισμός UV κατά την απεικόνιση των πηκτωμάτων.

9 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 9 από 13 Πρόβλημα Πιθανή αιτία Τρόπος αντιμετώπισης Τυχαία διασπορά του μαρτύρα ή/και προϊόντων ενίσχυσης ειδικών αλληλομόρφων. Οι πλάκες δεν έχουν σφραγιστεί σωστά Σφάλματα πηκτώματος Προβλήματα με το θερμικό κυκλοποιητή Ανατρέξτε στις οδηγίες του κατασκευαστή της δεξαμενής πηκτώματος και του τροφοδοτικού για περισσότερες λεπτομέρειες. Οι ανεπαρκώς σφραγισμένες πλάκες μπορεί να οδηγήσουν σε εξάτμιση κατά τη διάρκεια της αντίδρασης PCR. Η Biofortuna παρέχει συνιστώμενα φύλλα σφράγισης εντός του κιτ. Για επιπλέον αναλώσιμα υλικά, επικοινωνήστε με τον τοπικό διανομέα. Βεβαιωθείτε ότι υπάρχει επαρκής σφράγιση σε όλα τα πηγάδια. Ιδιαίτερη προσοχή πρέπει να δοθεί στα πηγάδια που είναι κοντά στα άκρα της πλάκας ή της ταινίας PCR. Βεβαιωθείτε ότι έχει γίνει φόρτωση, με τη σωστή σειρά, όλα τα πηγάδια του πηκτώματος και ότι προστέθηκε ο ίδιος όγκος αντιδράσεων PCR σε καθένα από αυτά. Βαθμονομήστε τις πιπέτες, όπως περιγράφεται στις οδηγίες του κατασκευαστή. Ελέγξτε ότι όλα τα πηγάδια έχουν σχηματιστεί σωστά στο πήκτωμα. Να είστε προσεκτικοί κατά την αφαίρεση των χτενιών καθώς είναι πιθανό να προκληθούν σχισμές στο κάτω μέρος των πηγαδιών. Βεβαιωθείτε ότι η αγαρόζη έχει διαλυτοποιηθεί πλήρως πριν από τη μορφοποίηση του πηκτώματος. Βεβαιωθείτε ότι το πήκτωμα δεν ηλεκτροφορείται για υπερβολικά μεγάλο χρονικό διάστημα, καθώς τα μικρότερα προϊόντα ενίσχυσης μπορούν να χαθούν από το άκρο του πηκτώματος. Βεβαιωθείτε ότι το πήκτωμα έχει ηλεκτροφορηθεί αρκετά ώστε να μπορέσουν να διαχωριστούν οι ζώνες. Χρησιμοποιήστε διάλυμα φρέσκου βρωμιούχου αιθιδίου. Αποτυχίες, ειδικά στα άκρα της πλάκας ανάλυσης μπορεί να οφείλονται σε ανεπαρκή ασφάλιση του καπακιού. Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε εξάτμιση και συμπύκνωση της αντίδρασης PCR περίπου στο μέσο του πηγαδιού PCR και μπορεί να οδηγήσει σε αποτυχία της PCR. Φροντίστε να ακολουθείτε τις οδηγίες του κατασκευαστή για τη συντήρηση και τη βαθμονόμηση του θερμικού κυκλοποιητή σας.

10 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 10 από 13 Πρόβλημα Πιθανή αιτία Τρόπος αντιμετώπισης Προβλήματα εξάτμισης Σποραδική αποτυχία λόγω προβλημάτων του DNA Ελέγξτε ότι οι παράμετροι της PCR είναι σωστοί, σύμφωνα με τις οδηγίες χρήσης. Βεβαιωθείτε ότι υπάρχει επαρκής σφράγιση σε όλα τα πηγάδια. Ιδιαίτερη προσοχή πρέπει να δοθεί στα πηγάδια που είναι κοντά στις άκρες της πλάκας ή της ταινίας PCR. Βεβαιωθείτε ότι έχει ενεργοποιηθεί το θερμαινόμενο καπάκι και ότι ασκείται επαρκής πίεση μέσω αυτού. Βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιούνται τα φύλλα σφράγισης της Biofortuna που παρέχονται. Για επιπλέον αναλώσιμα υλικά, επικοινωνήστε με τον τοπικό διανομέα. Δεν υπάρχει DNA. Βεβαιωθείτε ότι υπάρχει DNA σε όλα τα πηγάδια. Λανθασμένος όγκος: Βεβαιωθείτε ότι έχουν προστεθεί 10µl διαλύματος DNA σε κάθε αντίδραση. Προστέθηκε υπερβολικά μεγάλη ποσότητα DNA: Συγκέντρωση μεγαλύτερη των 200ng ή μικρότερη των 20ng μπορεί να προκαλέσει αποτυχία της αντίδρασης PCR. Εικόνα πηκτώματος με συγκεχυμένες ζώνες DNA (smear) DNA Ουσίες επιμόλυνσης στο DNA μπορεί να προκαλέσουν σποραδική ή εκτεταμένη αποτυχία ενίσχυσης. Ελέγξτε τη συγκέντρωση και την καθαρότητα του DNA. Η προσθήκη υπερβολικά μεγάλης ποσότητας DNA στις αντιδράσεις PCR μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα εικόνες πηκτώματος με συγκεχυμένες ζώνες DNA (smear). Η αποδόμηση ή η χαμηλή καθαρότητα μπορεί να είναι η αιτία. Επιλέξτε ένα πρόσφατο δείγμα DNA. Αδύναμη ενίσχυση Πρόβλημα συγκέντρωσης DNA Ελέγξτε ότι η συγκέντρωση του DNA δεν είναι ούτε πολύ μεγάλη ούτε πολύ μικρή. Ο στόχος πρέπει να είναι ng DNA ανά αντίδραση, σε 10µl. Προβλήματα με το θερμικό κυκλοποιητή Φροντίστε να ακολουθείτε τις οδηγίες του κατασκευαστή για τη συντήρηση και τη βαθμονόμηση του θερμικού κυκλοποιητή σας. Σφάλματα πηκτώματος Ελέγξτε ότι οι παράμετροι της PCR είναι σωστές, σύμφωνα με τις οδηγίες χρήσης. Βεβαιωθείτε ότι ο ίδιος όγκος αντιδραστηρίου προστέθηκε σε κάθε πηγάδι, μεταξύ 5µl και 10µl. Βαθμονομήστε τις πιπέτες, όπως περιγράφεται στις οδηγίες του κατασκευαστή.

11 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 11 από 13 Πρόβλημα Πιθανή αιτία Τρόπος αντιμετώπισης Χρησιμοποιήστε διάλυμα φρέσκου βρωμιούχου αιθιδίου. Μη ειδική ενίσχυση Πρόβλημα συγκέντρωσης DNA Βεβαιωθείτε ότι η συγκέντρωση του DNA δεν είναι ούτε πολύ μεγάλη ούτε πολύ μικρή. Ο στόχος πρέπει να είναι ng DNA ανά υποδοχέα, σε 10µl. Οι αντιδράσεις φορτώθηκαν με λανθασμένη σειρά Ελέγξτε την ευθυγράμμιση της αντίδρασης ΡCR και των διαδρομών του πηκτώματος. Αποφύγετε την υπερχείλιση από τα γειτονικά πηγάδια κατά την ηλεκτροφόρηση, προσέχοντας να μη φορτώσετε υπερβολικά μεγάλη ποσότητα στα πηγάδια, ούτε να αφαιρέσετε τα χτένια προτού στερεοποιηθεί πλήρως το πήκτωμα. Το πρότυπο ενίσχυσης δεν είναι ερμηνεύσιμο Ταυτοποιήθηκε νέο αλληλόμορφο Λανθασμένη ερμηνεία ενός τεχνήματος ως ειδικής ζώνης Οι αντιδράσεις φορτώθηκαν με λανθασμένη σειρά Αποτυχία μεμονωμένης αντίδρασης PCR Λείπουν προϊόντα ενίσχυσης μικρού μεγέθους Στο νέο πρότυπο ενίσχυσης μπορεί να υπάρχουν αλληλόμορφα η αλληλουχία των οποίων δεν είχε προσδιοριστεί στο παρελθόν. Αν χρησιμοποιείτε παλαιά φύλλα ερμηνείας, λάβετε την πιο πρόσφατη ενημέρωση στοίχισης από την ηλεκτρονική διεύθυνση Αν αυτό δεν συμφωνεί το νέο πρότυπο θα πρέπει να πραγματοποιήσετε έλεγχο χρησιμοποιώντας διαφορετικό κιτ της Biofortuna ή να δοκιμάσετε να ταυτοποιήσετε την αλληλουχία με προσδιορισμό τύπου με βάση την αλληλουχία. Ελέγξτε τους ειδικούς πίνακες ερμηνείας για το σωστό μέγεθος ζώνης. Ελέγξτε αν τα συγκεκριμένα προϊόντα ενίσχυσης έχουν το σωστό μέγεθος ή αν κάποιο τέχνημα (επιμόλυνση εκ μεταφοράς, διμερές εκκινητή) έχει ερμηνευτεί λανθασμένα ως προϊόν ενίσχυσης. Ελέγξτε την ευθυγράμμιση της αντίδρασης ΡCR και των διαδρομών του πηκτώματος. Ελέγξτε αν υπάρχουν όλοι οι εσωτερικοί μάρτυρες. Εκτελέστε ξανά την ερμηνεία χωρίς να παραλείψετε κάποια αντίδραση. Το μέτωπο ηλεκτροφόρησης ήταν υπερβολικά μεγάλο, τα προϊόντα ενίσχυσης μικρού μεγέθους έχουν χαθεί από το άκρο του πηκτώματος ή έχουν υπερβεί το μέτωπο του βρωμιούχο αιθιδίου ή έχουν διασπαρεί μετά από την είσοδό τους στο προηγούμενο πηγάδι του πηκτώματος. Χρησιμοποιήστε συνθήκες ηλεκτροφόρησης κατάλληλες για το δικό σας σύστημα πηκτώματος. Ταυτοποιήθηκε νέο αλληλόμορφο στο δείγμα Μερικές φορές μπορεί να ανακαλυφθούν νέα αλληλόμορφα, τα οποία δημιουργούν ένα πρότυπο ενίσχυσης που δεν αντιστοιχεί σε υπάρχον(τα) αλληλόμορφο(α). Επικοινωνήστε με τον τοπικό διανομέα.

12 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 12 από Ιστορικό αναθεώρησης Αναθεώρηση: Από την έκδοση 4 στην έκδοση 5 Ημερομηνία αναθεώρησης: 21 η Ιανουαρίου 2014 Ενότητα Ενότητα 4: Περιεχόμενα του κιτ Ενότητα 5: Αντιδραστήρια και εξοπλισμός που δεν παρέχονται Περιγραφή αναθεώρησης Προσθήκη υλικών σφράγισης πλακών εντός των κιτ Ενημερωμένες προδιαγραφές θερμικού κυκλοποιητή 96 πηγαδιών Ενημερωμένη συνθήκη αποθήκευσης του κιτ στους 2-28 o C Χειρισμός μη ενυδατωμένων πλακών και ταινιών PCR Χειρισμός ενυδατωμένων πλακών και ταινιών PCR Ενότητα 8: Οδηγίες χρήσης Αραίωση του DNA σε αποστειρωμένο νερό καθαρότητας μοριακής βιολογίας Προσθήκη στις ουσίες παρεμπόδισης και ενημέρωση των κατευθυντήριων οδηγιών καθαρότητας DNA Ενημερωμένη μέτρηση OD 260/280 Προσθήκη της τοποθέτησης του λυοφιλοποιημένου ιζήματος πριν από την προσθήκη του δείγματος Προσθήκη των συνθηκών αποθήκευσης του ενισχυμένου προϊόντος Προσθήκη σημείωσης σχετικά με τους χρόνους ηλεκτροφόρησης του πηκτώματος Ενότητα 9: Ερμηνεία Σχόλιο σχετικά με τις σημειώσεις που είναι ειδικές για κάθε παρτίδα Ο αριθμός παρτίδας κιτ θα πρέπει να αντιστοιχεί πλήρως με τον αριθμό παρτίδας στον πίνακα ερμηνείας. Ενότητα 11: Κλινικά δεδομένα Ενότητα 14: Ιστορικό αναθεώρησης Προσθήκη ολόκληρης αυτής της ενότητας Προσθήκη ολόκληρης αυτής της ενότητας

13 DOT112v8: Οδηγίες χρήσης για τα κιτ προσδιορισμού τύπου HLA SSPGo TM της Biofortuna. Αναθεώρηση CE 5 Σελίδα 13 από Επεξήγηση πίνακα συμβόλων X Αριθμός εξετάσεων P Αντιπρόσωπος στην ΕΚ Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης i M V H Τόπος παρασκευής Ιn vitro διαγνωστική εξέταση Ημερομηνία λήξης 4: s28 : Θερμοκρασία αποθήκευσης g Αριθμός παρτίδας Διανέμεται από Αριθμός Global Trade Item 16. Στοιχεία επικοινωνίας με τον κατασκευαστή Biofortuna Ltd 1 Hawkshead Road Croft Business Park Bromborough, CH62 3RJ, UK T: +44 (0) E: info@biofortuna.com W: Μεταφράσεις FranÇaise: Deutsch: Español: Italiano: České: Danske: Ελληνικά: Magyar: Norske: Polska: Português: Россию: Slovenskému: Türk: Svenska: Traductions disponibles Übersetzungen verfügbar Traducciones disponibles Traduzioni disponibili Překlady k dispozici Tilgængelige oversættelser Διαθέσιμες μεταφράσεις Fordítások Oversettelser tilgjengelig Dostępne tłumaczenia Traduções disponíveis Переводы доступны Preklady k dispozícii Çeviriler mevcut Översättningar tillgängliga