QUANTA Flash Centromere Για In Vitro διαγνωστική χρήση ΜΟΝΟ ΠΡΟΣ ΕΞΑΓΩΓΗ. ΔΕΝ ΔΙΑΤΙΘΕΤΑΙ ΠΡΟΣ ΠΩΛΗΣΗ ΣΤΙΣ ΗΝΩΜΕΝΕΣ ΠΟΛΙΤΕΙΕΣ.

Transcript

1 QUANTA Flash Centromere Για In Vitro διαγνωστική χρήση ΜΟΝΟ ΠΡΟΣ ΕΞΑΓΩΓΗ. ΔΕΝ ΔΙΑΤΙΘΕΤΑΙ ΠΡΟΣ ΠΩΛΗΣΗ ΣΤΙΣ ΗΝΩΜΕΝΕΣ ΠΟΛΙΤΕΙΕΣ. Σκοπός χρήσης Το QUANTA Flash Centromere αποτελεί μια ανάλυση ανοσοπροσδιορισμού χημιφωταύγειας (CIA) για τον ημιποσοτικό εντοπισμό αυτοαντισωμάτων έναντι κεντρομεριδιακής πρωτεΐνης B στον ανθρώπινο ορό μέσω της συσκευής BIO-FLASH. Αυτή η δοκιμασία προορίζεται για χρήση σε συνδυασμό με κλινικά ευρήματα για τη διάγνωση νόσων του συνδετικού ιστού συμπεριλαμβανομένης της συστημικής σκλήρυνσης. Περίληψη και επεξήγηση της δοκιμασίας Τα αυτοαντισώματα που αντιδρούν με την κεντρομεριδιακή περιοχή των χρωμοσωμάτων αναφέρθηκαν για πρώτη φορά το Παραδοσιακά, τα αντικεντρομεριδιακά αντισώματα (CENP) εντοπίζονται μέσω έμμεσου ανοσοσφθορισμού (IIF) με τη χρήση ταχέως διαιρούμενων κυτταροσειρών ιστοκαλλιέργειας, όπως του HEp-2, ως υποστρώματος. 1 Σήμερα, με την έννοια "κεντρομεριδιακά" εννοούνται τα αντισώματα που περιλαμβάνουν διάφορα υποσυστατικά πρωτεϊνών, με τα πιο σημαντικά για διαγνωστικούς σκοπούς να είναι τα αντισώματα CENP-A, CENP-B και CENP-C. 1,2 Πολλά από τα κεντρομεριδιακά υποσυστατικά είναι αποτέλεσμα απομόνωσης ή κλωνοποίησης. Έχουν εντοπιστεί, επίσης, πολλά άλλα αντιγόνα, αλλά τα αντισώματα σε αυτά αναγνωρίζονται σπανιότερα. Οι περισσότερες αναλύσεις για τον εντοπισμό των αντισωμάτων αντι-cenp βασίζονται σε ανασυνδυασμένα CENP-B 1, τα οποία έχει αναφερθεί ότι παρουσιάζουν ευαισθησία της τάξης του 95% κατά τη σύγκρισή τους με τη μέθοδο IIF με χρήση του κυτταρικού υποστρώματος HEp Τα κεντρομεριδιακά αντισώματα αναγνωρίζονται ως ορολογικός δείκτης μιας μορφής της συστημικής σκλήρυνσης (SSc) ή του σκληροδέρματος που ονομάζεται κοινώς και "σύνδρομο CREST" (ασβέστωση, φαινόμενο Raynaud, διαταραχές κινητικότητας του οισοφάγου, σκληροδακτυλία, τηλεαγγειεκτασία). 1,2 Οι ασθενείς με αντικεντρομεριδιακά αντισώματα τείνουν περισσότερο να πάσχουν από καλοήθη μορφή της νόσου SSc με μικρότερη συστημική εμπλοκή. Τα αντισώματα έναντι των κεντρομεριδιακών πρωτεϊνών παρουσιάζονται σχεδόν αποκλειστικά σε δείγματα με αντισώματα αντι-rna Pol III ή αντι-scl Αρχές της διαδικασίας Η ανασυνδυασμένη κεντρομεριδιακή πρωτεΐνη B χρησιμοποιείται ως επικάλυψη σε παραμαγνητικούς κόμβους, οι οποίοι αποθηκεύονται στο φυσίγγιο του αντιδραστηρίου υπό συνθήκες οι οποίες συντηρούν το αντιγόνο στην αντιδραστική του κατάσταση. Όταν το φυσίγγιο της ανάλυσης είναι έτοιμο να χρησιμοποιηθεί για πρώτη φορά, προστίθεται ένα ρυθμιστικό διάλυμα στο σωληνάριο που περιέχει τους συντηρημένους κόμβους και οι κόμβοι αναμιγνύονται με το ρυθμιστικό διάλυμα. Στη συνέχεια, το φυσίγγιο του αντιδραστηρίου τοποθετείται στη συσκευή BIO-FLASH. Ένα δείγμα ορού ασθενούς προαραιώνεται από τη συσκευή με χρήση του διαλύματος πλύσης συστήματος που προστίθεται σε μια πλαστική κυψελίδα μίας χρήσης. Μικρές ποσότητες από τον αραιωμένο ορό ασθενούς, οι κόμβοι με CENP-B καθώς και το ρυθμιστικό διάλυμα της ανάλυσης τοποθετούνται μαζί σε μια δεύτερη κυψελίδα και αναμιγνύονται. Αυτή η κυψελίδα επωάζεται στους 37 C. Στη συνέχεια, οι κόμβοι υπόκεινται σε μαγνητισμό και πλύσεις αρκετές φορές. Κατόπιν, στην κυψελίδα προστίθεται αντίσωμα συζευγμένο με ισολουμινόλη και επωάζεται στους 37 C. Οι κόμβοι υπόκεινται ξανά σε μαγνητισμό και πλύσεις αρκετές φορές. Το σύζευγμα ισολουμινόλης προκαλεί μια φωταυγή αντίδραση, όταν τα αντιδραστήρια ("Ενεργοποιητές") προστίθενται στην κυψελίδα. Το φως που παράγεται από αυτήν την αντίδραση μετράται σε Σχετικές μονάδες φωτός (RLU) από το οπτικό σύστημα BIO-FLASH. Οι μονάδες RLU είναι ανάλογες με την ποσότητα του δεσμευμένου 1

2 συζεύγματος ισολουμινόλης, η οποία, με τη σειρά της, είναι ανάλογη με την ποσότητα των αντισωμάτων αντι-cenp που δεσμεύονται στην CENP-B που βρίσκεται στους κόμβους. Η ανάλυση QUANTA Flash Centromere χρησιμοποιεί μια προκαθορισμένη Κύρια καμπύλη ειδική για την παρτίδα, η οποία αποστέλλεται στη συσκευή μέσω του γραμμικού κώδικα του φυσιγγίου αντιδραστηρίου. Με βάση τα αποτελέσματα που προκύπτουν από τη χρήση δύο ορών βαθμονόμησης, δημιουργείται μια ειδική Καμπύλη εργασίας για τη συσκευή, η οποία χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό των μονάδων χημιφωταύγειας (CU) που προκύπτουν από τις μονάδες RLU που λαμβάνονται για κάθε ασθενή. Αντιδραστήρια 1. Το φυσίγγιο αντιδραστηρίου QUANTA Flash Centromere περιέχει τα παρακάτω αντιδραστήρια που επαρκούν για 50 προσδιορισμούς: α. Παραμαγνητικοί κόμβοι επικαλυμμένοι με κεντρομεριδιακή πρωτεΐνη που συντηρούνται πριν από την πρώτη χρήση. β. Ρυθμιστικό διάλυμα ανάλυσης χρώματος ροζ, που περιέχει Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα, Tween 20, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικά. γ. Ανιχνευτής IgG αντισώματα αντι-ανθρώπινης IgG σημασμένα με ισολουμινόλη, που περιέχουν ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικό. 2. Ρυθμιστικό διάλυμα επαναιώρησης, 1 φιαλίδιο χρώματος ροζ, που περιέχει ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικά. Προειδοποιήσεις 1. Το ρυθμιστικό διάλυμα ανάλυσης περιέχει μια χημική ουσία (0,02% χλωραμφαινικόλης), η οποία είναι γνωστή στην Πολιτεία της Καλιφόρνιας ότι προκαλεί καρκίνο. 2. Το αζίδιο του νατρίου χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου είναι δηλητήριο και δύναται να είναι τοξικό σε περίπτωση κατάποσης ή απορρόφησης μέσω του δέρματος ή των ματιών. Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μολύβδινες ή χάλκινες σωληνώσεις με αποτέλεσμα την πρόκληση δυνητικά εκρηκτικών μεταλλικών ενώσεων αζιδίων. Ξεπλύνετε τις λεκάνες απόπλυσης με άφθονο νερό, εφόσον τις χρησιμοποιείτε για την απόρριψη του αντιδραστηρίου, ώστε να αποφευχθεί η συγκέντρωση των αζιδίων. 3. Να χρησιμοποιείτε κατάλληλο ατομικό προστατευτικό εξοπλισμό, όταν εργάζεστε με τα αντιδραστήρια που παρέχονται. 4. Αντιδραστήρια που έχουν χυθεί πρέπει να καθαρίζονται αμέσως. Τηρείτε όλους τους ομοσπονδιακούς, εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς για την απόρριψη αποβλήτων. Προφυλάξεις 1. Αυτό το προϊόν προορίζεται για in vitro διαγνωστική χρήση. 2. Αυτή η ανάλυση προορίζεται για χρήση μόνο με τη συσκευή BIO-FLASH. 3. Συνιστάται η ακριβής τήρηση της καθορισμένης διαδικασίας επαναιώρησης. 4. Αυτό το φυσίγγιο αντιδραστηρίου πρέπει να φυλάσσεται, μετά από το άνοιγμά του, στην περιστρεφόμενη θήκη αντιδραστηρίων της συσκευής. Πρέπει να ληφθεί μέριμνα, ώστε να μη χυθούν τα αντιδραστήρια, όταν το φυσίγγιο αντιδραστηρίου τοποθετηθεί για πρώτη φορά στη συσκευή. 5. Ο ανεπαρκής καθαρισμός ή η ανεπαρκής πλύση της συσκευής μπορεί να προκαλέσει χημική μόλυνση των αντιδραστηρίων. Κατάλοιπα από κοινά εργαστηριακά χημικά, όπως η φορμαλίνη, η χλωρίνη, η αιθανόλη ή τα απορρυπαντικά ενδέχεται να προκαλέσουν παρεμβολή στην ανάλυση. Τηρείτε οπωσδήποτε τη συνιστώμενη διαδικασία καθαρισμού της συσκευής που περιγράφεται στο εγχειρίδιο χρήσης της συσκευής BIO-FLASH. 2

3 Συνθήκες αποθήκευσης 1. Αποθηκεύστε όλα τα φυσίγγια αντιδραστηρίου που δεν έχουν ανοιχθεί και το ρυθμιστικό διάλυμα επαναιώρησης στους 2-8 C. Να μην καταψύχονται. Τα αντιδραστήρια είναι σταθερά για χρήση μέχρι την ημερομηνία λήξης τους, εάν τα αποθηκεύετε και τα χειρίζεστε σύμφωνα με τις οδηγίες. 2. Τα ανοιγμένα φυσίγγια αντιδραστηρίου πρέπει να αποθηκεύονται επάνω στη συσκευή και είναι σταθερά για 56 ημέρες. Μετά από αυτό το χρονικό διάστημα πρέπει να απορρίπτονται. Το λογισμικό BIO-FLASH παρακολουθεί τις ημερομηνίες λήξης των τοποθετημένων φυσιγγίων καθώς και των παρτίδων των φυσιγγίων αντιδραστηρίου. Συλλογή δείγματος Αυτή η διαδικασία πρέπει να εκτελείται με δείγματα ορού. Δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται δείγματα που έχουν επιμολυνθεί με μικρόβια, έχουν υποστεί θερμική επεξεργασία ή περιέχουν ορατά σωματίδια. Τα δείγματα που περιείχαν έως 10 mg/dl χολερυθρίνης, 200mg/dL αιμοσφαιρίνης, 1000 mg/dl τριγλυκεριδίων, 224 mg/dl χοληστερόλης ή 500 IU/mL ρευματοειδούς παράγοντα IgM δεν παρουσίασαν καμία παρεμβολή στην ανάλυση QUANTA Flash Centromere. Μετά από τη συλλογή του δείγματος, ο ορός θα πρέπει να διαχωρίζεται άμεσα από το ολικό αίμα. Το Έγγραφο CLSI H18-A4 προτείνει τις παρακάτω συνθήκες αποθήκευσης των δειγμάτων. 1. Τα δείγματα πρέπει να φυλάσσονται σε θερμοκρασία δωματίου για χρονικό διάστημα έως 8 ωρών. 2. Αν η ανάλυση δεν ολοκληρωθεί εντός 8 ωρών, το δείγμα πρέπει να ψυχθεί σε θερμοκρασία 2-8 C. 3. Αν η ανάλυση δεν ολοκληρωθεί εντός 48 ωρών ή αν το δείγμα προορίζεται για αποστολή, το δείγμα πρέπει να καταψυχθεί σε θερμοκρασία -20 C ή χαμηλότερη. Τα κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να αναμιχθούν καλά μετά την απόψυξη και πριν από τη δοκιμασία. Διαδικασία Υλικά που παρέχονται 1 φυσίγγιο αντιδραστηρίου QUANTA Flash Centromere 1 ρυθμιστικό διάλυμα επαναιώρησης 1 πιπέτα μεταφοράς Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται Συσκευή BIO-FLASH συνδεδεμένη με υπολογιστή Δοχείο πλύσης συστήματος BIO-FLASH (Αρ. προϊόντος: ) Ενεργοποιητές BIO-FLASH (Αρ. προϊόντος: ) Κυψελίδες BIO-FLASH (Αρ. προϊόντος: ) Οροί βαθμονόμησης QUANTA Flash Centromere (Αρ. προϊόντος: ) Οροί ελέγχου QUANTA Flash Centromere (Αρ. προϊόντος: ) 3

4 Χρήση του αναλυτή χημιφωταύγειας BIO-FLASH 1. Για λεπτομερείς οδηγίες χειρισμού του αναλυτή χημιφωταύγειας BIO-FLASH και του λογισμικού BIO-FLASH, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης που παρέχεται με το σύστημα BIO- FLASH. Για περαιτέρω πληροφορίες και για αντιμετώπιση των προβλημάτων που προκύπτουν από τη χρήση αυτής της ανάλυσης, επικοινωνήστε με το τμήμα τεχνικής υποστήριξης της INOVA Diagnostics, Inc. στη διεύθυνση ή τον αριθμό τηλεφώνου που αναγράφεται στο τέλος του παρόντος Ένθετου φύλλου οδηγιών. 2. Για να εκκενώσετε το δοχείο στερεών αποβλήτων, ανοίξτε το συρτάρι αποβλήτων. Αφαιρέστε το δοχείο στερεών αποβλήτων και απορρίψτε τις χρησιμοποιημένες κυψελίδες κατάλληλα. Τοποθετήστε ξανά το δοχείο στερεών αποβλήτων στη θέση του, κλείστε το συρτάρι αποβλήτων και κάντε κλικ στην επιλογή Yes στο παράθυρο Empty Waste Drawer. 3. Για να αντικαταστήσετε τους ενεργοποιητές, κάντε κλικ στο κουμπί Bulks Inventory F9 (επάνω δεξιά). α. Στην οθόνη Inventory Bulks κάντε κλικ στο κουμπί Triggers που βρίσκεται στα αριστερά. Θα αναδυθεί ένα νέο παράθυρο με τον τίτλο Add Triggers Remove old bottles. β. Ανοίξτε και αφαιρέστε το συρτάρι αποβλήτων της συσκευής BIO-FLASH. Απορρίψτε τυχόν κυψελίδες που βρίσκονται στο συρτάρι ξηρών αποβλήτων. Κάντε κλικ στο κουμπί Yes στο παράθυρο Empty Waste Drawer. Αφαιρέστε τις φιάλες ενεργοποιητών από τις βάσεις τους και κάντε κλικ στο κουμπί Next. Ξεβιδώστε τις παλιές φιάλες ενεργοποιητών από τα πώματά τους και αντικαταστήστε τις με νέους ενεργοποιητές. Φροντίστε να ξεβιδώνετε μία φιάλη κάθε φορά και να τις αντιστοιχείτε με τα πώματα ακολουθώντας τη χρωματική κωδικοποίησή τους (τη λευκή φιάλη στο λευκό πώμα και την κόκκινη φιάλη στο κόκκινη πώμα). γ. Ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στο νέο παράθυρο Add Triggers Add Trigger 2 bottle. Μόλις γίνει αποδοχή του γραμμικού κώδικα, τοποθετήστε τον Ενεργοποιητή 2 στη λευκή βάση. Κάντε κλικ στο κουμπί Next. δ. Ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στο παράθυρο Add Triggers Add Trigger 1 bottle. Μόλις γίνει αποδοχή του γραμμικού κώδικα, τοποθετήστε τον Ενεργοποιητή 1 στην κόκκινη βάση. Κάντε κλικ στο κουμπί Finish. Τοποθετήστε το συρτάρι αποβλήτων στη θέση του και κλείστε το. 4. Για να αντικαταστήσετε το Δοχείο πλύσης συστήματος, κάντε κλικ στο κουμπί Bulks Inventory F9 (στην επάνω δεξιά γωνία). Στην οθόνη Inventory Bulks κάντε κλικ στο κουμπί Sys. Rinse. Στο νέο παράθυρο Add System Rinse Remove bottles, κάντε κλικ στο κουμπί Next. Ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στο νέο παράθυρο Add System Rinse Add bottle. Μόλις γίνει αποδοχή του γραμμικού κώδικα, κάντε κλικ στο κουμπί Finish, εφόσον χρειάζεται. 5. Για να εκκενώσετε το Δοχείο υγρών αποβλήτων, από την οθόνη Inventory Bulks κάντε κλικ στο κουμπί Fluid Waste. Εξαγάγετε και απορρίψτε τα υγρά απόβλητα. Κάντε κλικ στο κουμπί Next. Όταν αντικαταστήσετε την κενή φιάλη, κάντε κλικ στο κουμπί Finish. 4

5 Μέθοδος Προετοιμασία φυσιγγίου αντιδραστηρίου Την πρώτη φορά που θα χρησιμοποιηθεί το φυσίγγιο αντιδραστηρίου, πρέπει να τρυπηθούν οι σφραγίσεις αποθήκευσης στα σωληνάρια αντιδραστηρίου και οι κόμβοι που είναι επικαλυμμένοι με κεντρομεριδιακή πρωτεΐνη πρέπει να αναμειχθούν με ρυθμιστικό διάλυμα επαναιώρησης. Σημείωση: Μην χρησιμοποιήσετε το φυσίγγιο αντιδραστηρίου, εάν παρατηρήσετε οποιαδήποτε σημάδια φθοράς. 1. Τοποθετήστε το φυσίγγιο αντιδραστηρίου σε μια σταθερή επιφάνεια. Κρατήστε το φυσίγγιο αντιδραστηρίου σταθερά με το ένα χέρι. Με το άλλο χέρι, πιάστε σταθερά την κόκκινη γλωττίδα στο πίσω μέρος του φυσιγγίου αντιδραστηρίου και αφαιρέστε την τελείως. 2. Πιέστε τις δύο γλωττίδες στις πλευρές του καπακιού (γκρι τμήμα) και εφαρμόστε πίεση στο επάνω τμήμα του φυσιγγίου αντιδραστηρίου μέχρι να κλειδώσει στη θέση του. Οι γλωττίδες δεν πρέπει να είναι ορατές πλέον. 3. Επαναιωρήστε τα αντιδραστήρια του κιτ: α. Αφαιρέστε το πώμα του φιαλιδίου με το ρυθμιστικό διάλυμα επαναιώρησης και συγκεντρώστε το υγρό στην παρεχόμενη πιπέτα μεταφοράς. Θα χρησιμοποιηθεί όλο το περιεχόμενο του φιαλιδίου. β. Σύρετε τη θύρα του καπακιού του φυσιγγίου αντιδραστηρίου για να την ανοίξετε, πιέζοντας ελαφρά τη στενή πλευρά του φυσιγγίου αντιδραστηρίου και κρατήστε την σε αυτήν τη θέση. Μεταφέρετε προσεκτικά το πλήρες περιεχόμενο του φιαλιδίου στο σωληνάριο αντιδραστηρίου κόμβων μέσω της μοναδικής οπής που υπάρχει στο πάνω μέρος του φυσιγγίου αντιδραστηρίου. γ. Αναμίξτε τα περιεχόμενα του σωληναρίου αντιδραστηρίου κόμβων πραγματοποιώντας προσρόφηση και διανομή του υγρού για τουλάχιστον 30 φορές. Εάν η μάζα των κόμβων είναι ορατή, συνεχίστε να αναμιγνύετε το διάλυμα για 30 φορές ακόμα. Εάν τα μικροσωματίδια δεν επαναιωρηθούν, ΜΗ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΣΕΤΕ ΤΟ ΦΥΣΙΓΓΙΟ. δ. Φροντίστε να διανείμετε όλο το υγρό προτού αφαιρέσετε την πιπέτα από το σωληνάριο και την απορρίψετε. 4. Αφαιρέστε το αυτοκόλλητο από το επάνω τμήμα του φυσιγγίου αντιδραστηρίου, για να εμφανίσετε τις άλλες τρεις οπές. 5. Τοποθετήστε το φυσίγγιο αντιδραστηρίου σε μια ανοιχτή σχισμή στην περιστρεφόμενη θήκη αντιδραστηρίων της συσκευής BIO-FLASH. Μόλις τοποθετηθεί το φυσίγγιο στην περιστρεφόμενη θήκη αντιδραστηρίων, η συσκευή εκτελεί πρόσθετη περιοδική ανάμειξη των κόμβων. 5

6 Βαθμονόμηση ανάλυσης 1. Κάθε νέα παρτίδα φυσιγγίων αντιδραστηρίου πρέπει να βαθμονομείται πριν από την πρώτη χρήση. Το λογισμικό δεν θα επιτρέψει τη χρήση μιας νέας παρτίδας μέχρι να βαθμονομηθεί. 2. Για αναλυτικές οδηγίες σχετικά με τη βαθμονόμηση του φυσιγγίου αντιδραστηρίου ανατρέξτε στην ενότητα με τίτλο QUANTA Flash Centromere Οροί βαθμονόμησης στο παρόν Ένθετο φύλλο οδηγιών. 3. Μόλις επικυρωθεί η βαθμονόμηση, η παρτίδα φυσιγγίων αντιδραστηρίου στην οποία πραγματοποιήθηκε η βαθμονόμηση είναι έτοιμη προς χρήση. Προγραμματισμός και εξέταση δειγμάτων 1. Πιέστε το κουμπί Worklist που βρίσκεται στο επάνω μέρος της οθόνης και επιλέξτε την καρτέλα Racks στο κάτω μέρος. 2. Επιλέξτε τη ράβδο δειγμάτων που θέλετε να χρησιμοποιήσετε επισημαίνοντας τη ράβδο στην οθόνη ή σαρώνοντας το γραμμικό κώδικά της με τη φορητή συσκευή ανάγνωσης γραμμικού κώδικα. Σαρώστε ή πληκτρολογήστε το όνομα του δείγματος, επιλέξτε τον τύπο του δείγματος, τον τύπο του δοχείου (σωληνάριο/κύπελλο) και επιλέξτε την ανάλυση Centromere από το πλαίσιο αναλύσεων. Επαναλάβετε αυτά τα βήματα για όλα τα δείγματα. 3. Φορτώστε τα δείγματα στις επιλεγμένες θέσεις της ράβδου δειγμάτων και φορτώστε τη ράβδο στην περιστρεφόμενη θήκη δειγμάτων της συσκευής. 4. Εάν έχουν τοποθετηθεί όλα τα απαιτούμενα υλικά στη συσκευή, στο επάνω μέρος της οθόνης θα εμφανιστεί το εικονίδιο έναρξης με πράσινο χρώμα. Πιέστε το εικονίδιο έναρξης, για να ξεκινήσετε την εξέταση. Έλεγχος ποιότητας Οι Οροί ελέγχου QUANTA Flash Centromere (πωλούνται χωριστά - Αρ. προϊόντος INOVA ) περιέχουν τόσο τους Θετικούς όσο και τους Αρνητικούς Ορούς ελέγχου Centromere. Για αναλυτικές οδηγίες σχετικά με τον τρόπο εισαγωγής της τιμής μονάδας και την τυπική απόκλιση κάθε ορού ελέγχου στο λογισμικό καθώς και σχετικά με τον τρόπο χρήσης των ορών ελέγχου, ανατρέξτε στην ενότητα με τίτλο QUANTA Flash Centromere Οροί ελέγχου Συνιστάται η χρήση των ορών ελέγχου μία φορά κάθε ημέρα χρήσης της ανάλυσης. Ωστόσο, οι χρήστες πρέπει, επίσης, να λαμβάνουν υπόψη και τις απαιτήσεις των εθνικών/τοπικών κανονισμών. Υπολογισμός των αποτελεσμάτων Για κάθε νέα παρτίδα QUANTA Flash Centromere δημιουργείται στην INOVA μια Κύρια καμπύλη έξι σημείων. Αυτή η λογιστική καμπύλη τεσσάρων παραμέτρων κωδικοποιείται στο γραμμικό κώδικα κάθε φυσιγγίου αντιδραστηρίου. Μετά από τη βαθμονόμηση ενός φυσιγγίου αντιδραστηρίου, θα χρησιμοποιηθεί μια ειδική καμπύλη εργασίας για τη συσκευή, η οποία θα μετατρέψει τις μονάδες RLU σε CU. Η αντιδραστικότητα του αντισώματος στην κεντρομεριδιακή πρωτεΐνη μπορεί, στη συνέχεια, να ταξινομηθεί σύμφωνα με τον παρακάτω πίνακα. Αντιδραστικότητα Μονάδες CU Αρνητική <20 Θετική 20 Η αντιδραστικότητα σε μονάδες CU σχετίζεται άμεσα με τον τίτλο του αυτοαντισώματος στο δείγμα του ασθενούς. Οι αυξήσεις και οι μειώσεις στις συγκεντρώσεις των αντισωμάτων του ασθενούς θα αντικατοπτρίζονται από μια αντίστοιχη άνοδο ή πτώση στις μονάδες CU, η οποία είναι ανάλογη με την ποσότητα των αντισωμάτων. 6

7 Το εύρος των αναλυτικών τιμών μέτρησης (AMR) της ανάλυσης κυμαίνεται μεταξύ 3,4 CU και 708,9 CU. Εάν το αποτέλεσμα ενός δείγματος ασθενούς είναι μικρότερο από 3,4 CU, τότε το σύστημα BIO-FLASH θα το αναφέρει ως "<3,4 CU". Σε περίπτωση που το αποτέλεσμα είναι μικρότερο από 20 CU, θεωρείται αρνητικό αποτέλεσμα. Εάν το αποτέλεσμα ενός δείγματος ασθενούς είναι μεγαλύτερο από 708,9 CU, τότε το σύστημα BIO-FLASH θα το αναφέρει ως ">708,9 CU". Αυτό θεωρείται θετικό αποτέλεσμα. Το λογισμικό BIO-FLASH διαθέτει την επιλογή αυτόματης επανεξέτασης. Εάν επιλεγεί αυτή η ρύθμιση, η συσκευή θα επανεξετάσει αυτόματα τα δείγματα που φέρουν αποτέλεσμα >708,9 CU με περαιτέρω αραίωση με παράγοντα του 20 και θα υπολογίσει τις τρέχουσες μονάδες CU χρησιμοποιώντας αυτόν τον πρόσθετο παράγοντα αραίωσης. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Η ανάλυση QUANTA Flash μπορεί να ανιχνεύσει μικρές διαφορές σε πληθυσμούς ασθενών. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει το δικό του φυσιολογικό εύρος τιμών βασιζόμενο στους δικούς του ελέγχους και στον πληθυσμό ασθενών και σύμφωνα με τις δικές του καθορισμένες διαδικασίες. Συνιστάται η συμπερίληψη της παρακάτω δήλωσης στα αποτελέσματα που καταγράφονται από το εργαστήριο: "Τα παρακάτω αποτελέσματα λήφθηκαν με την ανάλυση ανοσοπροσδιορισμού χημιφωταύγειας QUANTA Flash Centromere της INOVA. Τα αποτελέσματα αυτά δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται εναλλάξ με τιμές που λήφθηκαν με μεθόδους ανάλυσης άλλων κατασκευαστών. Το ύψος των αναφερόμενων επιπέδων αντισωμάτων δεν είναι δυνατόν να συσχετίζεται πάντα με ένα τίτλο τελικού σημείου." Περιορισμοί της διαδικασίας 1. Δεν είναι όλοι οι ασθενείς με συστημική σκλήρυνση θετικοί στα αντισώματα αντι-cenp-b. 2. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης θα πρέπει να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με κλινικά ευρήματα και άλλες ορολογικές εξετάσεις. 3. Η ανεπαρκής επαναιώρηση των κόμβων που είναι επικαλυμμένοι με κεντρομεριδιακή πρωτεΐνη ενδέχεται να αποδώσει χαμηλότερες τιμές σε σύγκριση με τις τιμές που λαμβάνονται σε περίπτωση ορθής επαναιώρησης των κόμβων. 4. Τα χαρακτηριστικά απόδοσης αυτής της ανάλυσης δεν έχουν επαληθευτεί για μεσοκυττάριες ουσίες εκτός του ορού. Αναμενόμενες τιμές Για τον καθορισμό των αναμενόμενων τιμών, αναλύθηκαν οροί από 400 φαινομενικά υγιείς αιμοδότες. Ο μέσος όρος ήταν <3,4 CU και το 95% των δειγμάτων υπολογίστηκε ως <3,4 CU. Κλινική ευαισθησία και ειδικότητα Η κλινική μελέτη αξιοπιστίας περιλάμβανε 137 δείγματα από ασθενείς με συστημική σκλήρυνση (SSc), 50 από ασθενείς με ρευματοειδή αρθρίτιδα, 137 από ασθενείς με συστημικό ερυθηματώδη λύκο, 49 από ασθενείς με φλεγμονώδη εντερική νόσο, 27 από ασθενείς με νόσο του Crohn, 30 από ασθενείς με ελκώδη κολίτιδα, 19 από ασθενείς με σκλήρυνση κατά πλάκας, 31 από φορείς του ιού της ηπατίτιδας B, 24 από φορείς του ιού της ηπατίτιδας C, 8 από φορείς του ιού ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας, 9 από ασθενείς με σύφιλη και 37 από ασθενείς που πάσχουν από άλλες ασθένειες. Επίσης, στη μελέτη περιλαμβάνονταν 400 δείγματα φυσιολογικών αιμοδοτών. Τα αποτελέσματα αυτής της δοκιμασίας παρουσιάζονται παρακάτω: 7

8 Κλινική μελέτη (N=898) Διάγνωση SSc Χωρίς SSc Σύνολο Ανάλυση (αξιοπιστία 95%) Θετικά Ευαισθησία = 32 8* 40 QUANTA Flash 23,4% (16,6-31,3%) Αρνητικά Ειδικότητα = Centromere ,0% (98,1-99,6%) Σύνολο * 5 δείγματα προέρχονταν από προφανώς υγιείς δότες, ένα δείγμα από μεικτή νόσο του συνδετικού ιστού (MCTD), ένα δείγμα από ασθενή με μη πλήρες σύνδρομο CREST (CRES) και ένα δείγμα από ασθενή με συστημικό ερυθηματώδη λύκο (SLE). 7/8 των δειγμάτων βρέθηκαν, επίσης, θετικά στην ανάλυση ELISA Σύγκριση μεθόδων με επιβεβαιωτική ανάλυση Τα δείγματα που χρησιμοποιήθηκαν για τη συγκριτική ανάλυση των μεθόδων περιλάμβαναν δείγματα από τις κλινικές μελέτες αξιοπιστίας και από αναλυτική σύγκριση. Αυτά τα δείγματα υποβλήθηκαν στη δοκιμασία τόσο της ανάλυσης QUANTA Flash Centromere όσο και της επιβεβαιωτικής ανάλυσης ELISA. Σύγκριση μεθόδων (N=361) Centromere ELISA Θετικά Αρνητικά Σύνολο Ποσοστό συμφωνίας (Αξιοπιστία 95%) Θετικά 74 1 # Συμφωνία θετικών = 75 85,7% (75,8-91,8%) QUANTA Flash Αρνητικά Συμφωνία αρνητικών = 13* Centromere CIA 99,6% (98,0-100,0%) Σύνολο Συμφωνία συνόλου = ,1% (93,6-97,9%) * τρία δείγματα προέρχονταν από ασθενείς με συστημική σκλήρυνση (SSc) και 8 από ασθενείς με συστημικό ερυθηματώδη λύκο (SLE), ενώ δύο δείγματα προέρχονταν από ασθενείς με άγνωστη διάγνωση # Ασθενής με μεικτή νόσο του συνδετικού ιστού (MCTD) και σύνδρομο Raynaud Ακρίβεια και επαναληψιμότητα Η ακρίβεια της ανάλυσης QUANTA Flash Centromere αξιολογήθηκε με εξέταση 8 ασθενών σύμφωνα με το πρότυπο CLSI EP5-A2 και παρακάτω παρουσιάζονται τα δεδομένα που προέκυψαν: Εντός της εξέτασης Μεταξύ των εξετάσεων Κατά τη διάρκεια της ημέρας Σύνολο Δείγμα Αρ. Μέση τιμή TA % ΣΜ TA % ΣΜ TA % ΣΜ TA % ΣΜ Α 80 (CU) 6,2 0,2 2,6% 0,2 3,0% 0,3 5,4% 0,4 6,7% B 80 13,5 0,5 3,7% 0,3 2,1% 0,7 4,9% 0,9 6,5% C 80 22,9 0,9 3,7% 0,5 2,2% 0,9 4,0% 1,4 5,9% D 80 60,9 2,0 3,2% 1,3 2,1% 3,4 5,5% 4,1 6,7% E ,3 5,7 5,6% 0,4 0,4% 4,2 4,1% 7,1 6,9% F ,9 13,2 6,7% 0,0 0,0% 11,9 6,0% 17,7 9,0% G ,4 24,5 7,6% 0,0 0,0% 27,8 8,7% 37,1 11,5% H ,2 33,6 7,3% 0,0 0,0% 22,9 4,9% 40,7 8,8% 8

9 Οριακές τιμές ανίχνευσης. Γραμμικό και αναλυτικό εύρος τιμών Η χαμηλότερη τιμή ανίχνευσης αυτής της ανάλυσης σύμφωνα με το πρότυπο CLSI EP17-A είναι περίπου 370,2 RLU, τιμή η οποία είναι ισοδύναμη με 1,0 CU και είναι αρκετά χαμηλότερη από το εύρος των αναλυτικών τιμών μέτρησης (AMR). Η μέγιστη τιμή ανίχνευσης είναι περίπου RLU, η οποία είναι περίπου κατά 39% μεγαλύτερη από το εύρος των αναλυτικών τιμών μέτρησης (AMR). Το συνολικό εύρος των αναλυτικών τιμών μέτρησης (AMR), δηλαδή από 3,4 CU έως 708,9 CU, είναι γραμμικό. Σύμφωνα με το πρότυπο CLSI EP6-A πραγματοποιήθηκε μελέτη γραμμικότητας, της οποίας τα δεδομένα συνοψίζονται παρακάτω: Δείγμα Εύρος δοκιμασίας (CU) Κλίση (95% CI (διάστημα εμπιστοσύνης)) Σημείο τομής άξονα Y (95% CI) R² 1 1,77-17,7 0,94 (0,91 έως 0,97) 1,01 (0,69 έως 1,33) 1,00 2 6,3-63,7 0,98 (0,96 έως 1,00) 1,89 (1,15 έως 2,64) 1,00 3 9,33-93,26 0,98 (0,96 έως 1,01) 2,45 (1,16 έως 3,74) 1, ,74-127,4 0,99 (0,97 έως 1,01) 2,27 (0,89 έως 3,64) 1, ,44-244,4 113, ,9 0,99 (0,97 έως 1,01) 0,99 (0,95 έως 1,03) -0,20 (-3,18 έως 2,78) -39,07 (-67,38 έως -10,76) 1,00 0,99 9

10 QUANTA Flash Centromere Οροί βαθμονόμησης Για In Vitro διαγνωστική χρήση Σκοπός χρήσης Οι Οροί βαθμονόμησης QUANTA Flash Centromere προορίζονται για χρήση με την ανάλυση ανοσοπροσδιορισμού χημιφωταύγειας (CIA) QUANTA Flash Centromere στη συσκευή BIO-FLASH. Κάθε ορός βαθμονόμησης ορίζει ένα σημείο αναφοράς για την καμπύλη εργασίας, η οποία χρησιμοποιείται για τον καθορισμό των Μονάδων χημιφωταύγειας (CU) κατά τη μέτρηση των κεντρομεριδιακών αντισωμάτων στον ορό. Περίληψη και βασικές αρχές της διαδικασίας Η ανάλυση QUANTA Flash Centromere CIA χρησιμοποιεί μια προκαθορισμένη Κύρια καμπύλη ειδική για την παρτίδα, η οποία αποθηκεύεται στο γραμμικό κώδικα του φυσιγγίου αντιδραστηρίου. Οι Οροί βαθμονόμησης QUANTA Flash Centromere έχουν σχεδιαστεί για να παράγουν μια ειδική Καμπύλη εργασίας για τη συσκευή από τις παραμέτρους της Κύριας καμπύλης, με κριτήριο τα χαρακτηριστικά της απόδοσης και την κλινική αξιολόγηση της ανάλυσης QUANTA Flash Centromere CIA. Οι οροί βαθμονόμησης ελέγχονται σε πολλές συσκευές με πολλές παρτίδες αντιδραστηρίων πριν από την εκχώρηση τιμών. Αντιδραστήρια 1. Ορός βαθμονόμησης 1 QUANTA Flash Centromere: Δύο (2) σωληνάρια σημασμένα με γραμμικό κώδικα τα οποία περιέχουν 0,3 ml προαραιωμένου, έτοιμου για χρήση αντιδραστηρίου. Οι οροί βαθμονόμησης περιέχουν ανθρώπινα αντισώματα έναντι κεντρομεριδιακής πρωτεΐνης σε ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές και συντηρητικά. 2. Ορός βαθμονόμησης 2 QUANTA Flash Centromere: Δύο (2) σωληνάρια σημασμένα με γραμμικό κώδικα τα οποία περιέχουν 0,3 ml προαραιωμένου, έτοιμου για χρήση αντιδραστηρίου. Οι οροί βαθμονόμησης περιέχουν ανθρώπινα αντισώματα έναντι κεντρομεριδιακής πρωτεΐνης σε ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές και συντηρητικά. Προειδοποιήσεις 1. Οι οροί βαθμονόμησης περιέχουν μια χημική ουσία (0,02% χλωραμφαινικόλης), η οποία είναι γνωστή στην Πολιτεία της Καλιφόρνιας ότι προκαλεί καρκίνο. 2. Το αζίδιο του νατρίου χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου είναι δηλητήριο και δύναται να είναι τοξικό σε περίπτωση κατάποσης ή απορρόφησης μέσω του δέρματος ή των ματιών. Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μολύβδινες ή χάλκινες σωληνώσεις με αποτέλεσμα την πρόκληση δυνητικά εκρηκτικών μεταλλικών ενώσεων αζιδίων. Ξεπλύνετε τις λεκάνες απόπλυσης με άφθονο νερό, εφόσον τις χρησιμοποιείτε για την απόρριψη του αντιδραστηρίου, ώστε να αποφευχθεί η συγκέντρωση των αζιδίων. 3. Όλα τα ανθρώπινα υλικά που χρησιμοποιήθηκαν στην προετοιμασία των πρότυπων ορών για αυτό το προϊόν έχουν εξεταστεί και βρέθηκαν αρνητικά σε αντισώματα HIV, HBsAg και HCV από εγκεκριμένες μεθόδους FDA. Ωστόσο, καμία μέθοδος ελέγχου δεν μπορεί να προσφέρει πλήρη διασφάλιση για την απουσία των HIV, HBV, HCV ή άλλων μολυσματικών παραγόντων. Για αυτόν το λόγο, οι Οροί βαθμονόμησης QUANTA Flash Centromere πρέπει να τυγχάνουν της ίδιας μεταχείρισης με ένα πιθανώς μολυσματικό προϊόν Να χρησιμοποιείτε κατάλληλο ατομικό προστατευτικό εξοπλισμό, όταν εργάζεστε με τα αντιδραστήρια που παρέχονται. 5. Αντιδραστήρια που έχουν χυθεί πρέπει να καθαρίζονται αμέσως. Τηρείτε όλους τους ομοσπονδιακούς, εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς για την απόρριψη αποβλήτων. 10

11 Προφυλάξεις 1. Αυτό το προϊόν προορίζεται για in vitro διαγνωστική χρήση. 2. Οι Οροί βαθμονόμησης QUANTA Flash Centromere προορίζονται για χρήση με την ανάλυση QUANTA Flash Centromere. 3. Μην μεταφέρετε τα αντιδραστήρια των ορών βαθμονόμησης σε άλλα σωληνάρια. Οι γραμμικοί κώδικες που υπάρχουν στα σωληνάρια χρησιμοποιούνται από τη συσκευή για την αντιστοίχιση των ορών βαθμονόμησης με τον κατάλληλο τύπο ανάλυσης. 4. Μετά από το άνοιγμά του, το σωληνάριο του ορού βαθμονόμησης μπορεί να χρησιμοποιηθεί για 8 ώρες ή για 4 βαθμονομήσεις το μέγιστο και μετά από αυτό το χρονικό διάστημα το αντιδραστήριο πρέπει να απορρίπτεται. 5. Ο ανεπαρκής καθαρισμός ή η ανεπαρκής πλύση της συσκευής μπορεί να προκαλέσει χημική μόλυνση των αντιδραστηρίων. Κατάλοιπα από κοινά εργαστηριακά χημικά, όπως η φορμαλίνη, η χλωρίνη, η αιθανόλη ή τα απορρυπαντικά ενδέχεται να προκαλέσουν παρεμβολή στην ανάλυση. Τηρείτε οπωσδήποτε τη συνιστώμενη διαδικασία καθαρισμού της συσκευής που περιγράφεται στο εγχειρίδιο χρήσης της συσκευής BIO-FLASH. Συνθήκες αποθήκευσης 1. Φυλάξτε τους ορούς βαθμονόμησης που δεν έχουν ανοιχθεί σε θερμοκρασία 2-8 C. Να μην καταψύχονται. Τα αντιδραστήρια είναι σταθερά για χρήση μέχρι την ημερομηνία λήξης τους, εάν τα αποθηκεύετε και τα χειρίζεστε σύμφωνα με τις οδηγίες. 2. Οι οροί βαθμονόμησης που έχουν ανοιχθεί πρέπει να απορρίπτονται μετά από 8 ώρες. Διαδικασία 1. Κάθε νέα παρτίδα φυσιγγίων αντιδραστηρίου πρέπει να βαθμονομείται πριν από την πρώτη χρήση. Το λογισμικό δεν θα επιτρέψει τη χρήση μιας νέας παρτίδας μέχρι να βαθμονομηθεί. 2. Κάθε ορός βαθμονόμησης πρέπει να αναμειγνύεται ελαφρώς πριν από τη χρήση του, προκειμένου να διασφαλιστεί η ομοιογένειά του. Αποφεύγετε το σχηματισμό αφρού, καθώς οι φυσαλίδες ενδέχεται να παρεμποδίσουν την ανίχνευση της στάθμης υγρού της συσκευής. Αφαιρέστε το πώμα από κάθε σωληνάριο ορού βαθμονόμησης και τοποθετήστε και τα δύο σωληνάρια σε μια ράβδο δειγμάτων με τους γραμμικούς κώδικες στραμμένους προς τα κενά της ράβδου. Τοποθετήστε τη ράβδο δειγμάτων στην περιστρεφόμενη θήκη δειγμάτων της συσκευής BIO-FLASH και κλείστε τη θύρα. Η συσκευή θα πραγματοποιήσει ανάγνωση των γραμμικών κωδίκων που βρίσκονται στα σωληνάρια ορού βαθμονόμησης και θα προσδιορίσει το απαιτούμενο φυσίγγιο αντιδραστηρίου. Για λεπτομερείς οδηγίες χειρισμού του αναλυτή χημιφωταύγειας BIO-FLASH και του λογισμικού BIO-FLASH, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης που παρέχεται με το σύστημα BIO-FLASH. 3. Η συσκευή θα εξετάσει κάθε ορό βαθμονόμησης τρεις φορές. Μετά από τη εξέταση των ορών βαθμονόμησης το λογισμικό θα ζητήσει την επαλήθευση της βαθμονόμησης. Από την οθόνη Instrument Summary, κάντε κλικ στο κουμπί βέλους Choose more options Ctrl-M ( ). Επιλέξτε το στοιχείο Calibration Ctrl-F3. Στο παράθυρο "Calibration", επισημάνετε την επιθυμητή ανάλυση και κάντε κλικ στο στοιχείο Details. 4. Στο νέο παράθυρο Calibration Details επιλέξτε τη βαθμονόμηση που πραγματοποιήσατε. Η Κύρια καμπύλη εμφανίζεται ως διακεκομμένη γραμμή, ενώ η νέα Καμπύλη εργασίας εμφανίζεται ως συμπαγής γραμμή. Εάν τα αποτελέσματα της βαθμονόμησης είναι έγκυρα, θα εμφανιστεί ένα κουμπί επικύρωσης στο κάτω αριστερό τμήμα της οθόνης. Κάντε κλικ στο κουμπί Validate Calibration. 5. Μόλις επικυρωθεί η βαθμονόμηση, η παρτίδα φυσιγγίων αντιδραστηρίου στην οποία πραγματοποιήθηκε η βαθμονόμηση είναι έτοιμη προς χρήση. Μετά από τη βαθμονόμηση μιας παρτίδας φυσιγγίων αντιδραστηρίου συνιστάται η χρήση των Ορών ελέγχου QUANTA Flash Centromere (πωλούνται χωριστά - Αρ. προϊόντος ). 11

12 Ανιχνευσιμότητα Δεν υπάρχει διαθέσιμο διεθνές πρότυπο ορού αναφοράς για τα αντικεντρομεριδιακά αντισώματα, το οποίο επιτρέπει τυποποίηση των αναλύσεων των αντικεντρομεριδιακών αντισωμάτων. Αντ' αυτού έχει ελεγχθεί ο ορός αναφοράς από το Center of Disease Control and Prevention για τα αντικεντρομεριδιακά αντισώματα (IS2134 ANA #8 Centromere pattern FANA) και η τιμή συγκέντρωσης έχει καθοριστεί σε 500,8 CU. Περιορισμοί Αυτοί οι οροί βαθμονόμησης έχουν σχεδιαστεί για 4 βαθμονομήσεις. Ο συνολικός χρόνος κατά τον οποίο τα σωληνάρια ορού βαθμονόμησης μπορούν να παραμείνουν ανοιχτά πάνω στη συσκευή είναι 8 ώρες. Εάν οι οροί βαθμονόμησης παραμείνουν ανοιχτοί πάνω στη συσκευή για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα, πρέπει να απορριφθούν. Η χρήση των ίδιων σωληναρίων ορού βαθμονόμησης για περισσότερες από 4 βαθμονομήσεις ή/και για περισσότερες από 8 ώρες μπορεί να προκαλέσει λανθασμένη βαθμονόμηση της ανάλυσης, η οποία ενδέχεται, με τη σειρά της, να οδηγήσει σε λανθασμένα αποτελέσματα. 12

13 QUANTA Flash Centromere Οροί ελέγχου Για In Vitro διαγνωστική χρήση Σκοπός χρήσης Οι Οροί ελέγχου QUANTA Flash Centromere προορίζονται για τον έλεγχο ποιότητας του κιτ ανάλυσης ανοσοπροσδιορισμού χημιφωταύγειας (CIA) QUANTA Flash Centromere σε μια συσκευή BIO-FLASH. Περίληψη και βασικές αρχές της διαδικασίας Οι Οροί ελέγχου QUANTA Flash Centromere αποτελούνται από έναν Αρνητικό και έναν Θετικό ορό ελέγχου. Κάθε ορός περιέχει μια διαφορετική ποσότητα κεντρομεριδιακών αντισωμάτων. Ο Αρνητικός ορός ελέγχου έχει σχεδιαστεί για την αξιολόγηση της ακρίβειας και της ορθότητας της ανάλυσης σε πολύ χαμηλά επίπεδα αντισωμάτων. Ο Θετικός Ορός ελέγχου έχει σχεδιαστεί για την αξιολόγηση της ακρίβειας και της ορθότητας της ανάλυσης σε μεσαία έως υψηλά επίπεδα αντισωμάτων. Αντιδραστήρια 1. Αρνητικός ορός ελέγχου QUANTA Flash Centromere: Δύο (2) σωληνάρια σημασμένα με γραμμικό κώδικα τα οποία περιέχουν 0,5 ml έτοιμου για χρήση αντιδραστηρίου. Οι οροί ελέγχου περιέχουν ανθρώπινα αντισώματα έναντι κεντρομεριδιακής πρωτεΐνης σε ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές και συντηρητικά. 2. Θετικός ορός ελέγχου QUANTA Flash Centromere: Δύο (2) σωληνάρια σημασμένα με γραμμικό κώδικα τα οποία περιέχουν 0,5 ml έτοιμου για χρήση αντιδραστηρίου. Οι οροί ελέγχου περιέχουν ανθρώπινα αντισώματα έναντι κεντρομεριδιακής πρωτεΐνης σε ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές και συντηρητικά. Προειδοποιήσεις 1. Οι οροί ελέγχου περιέχουν μια χημική ουσία (0,02% χλωραμφαινικόλης), η οποία είναι γνωστή στην Πολιτεία της Καλιφόρνιας ότι προκαλεί καρκίνο. 2. Το αζίδιο του νατρίου χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου είναι δηλητήριο και δύναται να είναι τοξικό σε περίπτωση κατάποσης ή απορρόφησης μέσω του δέρματος ή των ματιών. Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μολύβδινες ή χάλκινες σωληνώσεις με αποτέλεσμα την πρόκληση δυνητικά εκρηκτικών μεταλλικών ενώσεων αζιδίων. Ξεπλύνετε τις λεκάνες απόπλυσης με άφθονο νερό, εφόσον τις χρησιμοποιείτε για την απόρριψη του αντιδραστηρίου, ώστε να αποφευχθεί η συγκέντρωση των αζιδίων. 3. Όλα τα ανθρώπινα υλικά που χρησιμοποιήθηκαν στην προετοιμασία των πρότυπων ορών για αυτό το προϊόν έχουν εξεταστεί και βρέθηκαν αρνητικά σε αντισώματα HIV, HBsAg και HCV από εγκεκριμένες μεθόδους FDA. Ωστόσο, καμία μέθοδος ελέγχου δεν μπορεί να προσφέρει πλήρη διασφάλιση για την απουσία των HIV, HBV, HCV ή άλλων μολυσματικών παραγόντων. Για αυτόν το λόγο, οι Οροί ελέγχου QUANTA Flash Centromere πρέπει να τυγχάνουν της ίδιας μεταχείρισης με ένα πιθανώς μολυσματικό προϊόν Να χρησιμοποιείτε κατάλληλο ατομικό προστατευτικό εξοπλισμό, όταν εργάζεστε με τα αντιδραστήρια που παρέχονται. 5. Αντιδραστήρια που έχουν χυθεί πρέπει να καθαρίζονται αμέσως. Τηρείτε όλους τους ομοσπονδιακούς, εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς για την απόρριψη αποβλήτων. 13

14 Προφυλάξεις 1. Αυτό το προϊόν προορίζεται για in vitro διαγνωστική χρήση. 2. Οι Οροί ελέγχου QUANTA Flash Centromere προορίζονται για χρήση με την ανάλυση QUANTA Flash Centromere. 3. Μην μεταφέρετε τα αντιδραστήρια των ορών ελέγχου σε άλλα σωληνάρια. Οι γραμμικοί κώδικες που υπάρχουν στα σωληνάρια χρησιμοποιούνται από τη συσκευή για τον προσδιορισμό του ορού ελέγχου. 4. Μετά το άνοιγμά του, κάθε σωληνάριο ορού ελέγχου μπορεί να χρησιμοποιηθεί 15 φορές το μέγιστο και μπορεί να παραμείνει πάνω στη συσκευή για μέγιστο χρονικό διάστημα 10 λεπτών ανά χρήση. 5. Ο ανεπαρκής καθαρισμός ή η ανεπαρκής πλύση της συσκευής μπορεί να προκαλέσει χημική μόλυνση των αντιδραστηρίων. Κατάλοιπα από κοινά εργαστηριακά χημικά, όπως η φορμαλίνη, η χλωρίνη, η αιθανόλη ή τα απορρυπαντικά ενδέχεται να προκαλέσουν παρεμβολή στην ανάλυση. Τηρείτε οπωσδήποτε τη συνιστώμενη διαδικασία καθαρισμού της συσκευής που περιγράφεται στο εγχειρίδιο χρήσης της συσκευής BIO-FLASH. Συνθήκες αποθήκευσης 1. Φυλάξτε τους ορούς ελέγχου που δεν έχουν ανοιχθεί σε θερμοκρασία 2-8 C. Να μην καταψύχονται. Τα αντιδραστήρια είναι σταθερά για χρήση μέχρι την ημερομηνία λήξης τους, εάν τα αποθηκεύετε και τα χειρίζεστε σύμφωνα με τις οδηγίες. 2. Μετά από το άνοιγμά τους, οι οροί ελέγχου μπορούν να χρησιμοποιηθούν 15 φορές το μέγιστο και μπορούν να παραμείνουν πάνω στη συσκευή για μέγιστο χρονικό διάστημα 10 λεπτών ανά χρήση. Ο συνολικός χρόνος κατά τον οποίο τα σωληνάρια ορού ελέγχου μπορούν να παραμείνουν ανοιχτά πάνω στη συσκευή είναι 2 ½ ώρες ή 10 λεπτά ανά χρήση. Εάν οι οροί ελέγχου παραμείνουν ανοιχτοί πάνω στη συσκευή για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα από 2 ½ ώρες, πρέπει να απορριφθούν. Η χρήση του ίδιου σωληναρίου ορού ελέγχου για περισσότερες από 15 χρήσεις ή/και για περισσότερες από 2 ½ ώρες συνολικά μπορεί να οδηγήσει σε λανθασμένα αποτελέσματα. 3. Για βέλτιστη σταθερότητα, αφαιρέστε τους ορούς ελέγχου από το σύστημα αμέσως μετά τη δειγματοληψία και αποθηκεύστε τους σε θερμοκρασία 2-8 C με κλειστό το αρχικό φιαλίδιο. Διαδικασία Για να δημιουργήσετε νέα υλικά ποιοτικού ελέγχου για την ανάλυση Centromere 1. Πριν από την πρώτη χρήση των Ορών ελέγχου QUANTA Flash Centromere στη συσκευή, καταχωρήστε στο λογισμικό το όνομα, την παρτίδα, την ημερομηνία λήξης, την τιμή (ή τη δόση) και τα στοιχεία τυπικής απόκλισης προορισμού. 2. Από την οθόνη Instrument Summary, κάντε κλικ στο κουμπί βέλους Choose more options Ctrl-M ( ). Επιλέξτε το στοιχείο QC Ctrl-F2. Κάντε κλικ στο κουμπί New QC Material. 3. Κάθε σετ Ορών ελέγχου συνοδεύεται από ένα ειδικό φύλλο δεδομένων για την παρτίδα. Καταχωρήστε το όνομα, τον αριθμό παρτίδας και την ημερομηνία λήξης από αυτό το φύλλο δεδομένων στο λογισμικό. Στη συνέχεια, κάντε κλικ στο κουμπί Add Assay. Στο νέο παράθυρο, βεβαιωθείτε ότι είναι επιλεγμένο το πλαίσιο Show All Assays. Επιλέξτε την ανάλυση Centromere από τη λίστα και κάντε κλικ στην επιλογή Add. Τέλος, καταχωρήστε την προοριζόμενη δόση και την τυπική απόκλιση προορισμού. Κάντε κλικ στο κουμπί Save. Εκτελέστε αυτήν τη διαδικασία και για τους δύο ορούς ελέγχου. 14

15 Για να δημιουργήσετε μια νέα παρτίδα για υπάρχον υλικό ποιοτικού ελέγχου 1. Πριν από την πρώτη χρήση μιας νέας παρτίδας Ορών ελέγχου QUANTA Flash Centromere, πρέπει να καταχωρήσετε στο λογισμικό την παρτίδα, την ημερομηνία λήξης, την τιμή (ή τη δόση) και τα στοιχεία τυπικής απόκλισης προορισμού. 2. Από την οθόνη Instrument Summary, κάντε κλικ στο κουμπί βέλους Choose more options Ctrl-M ( ). Επιλέξτε το στοιχείο QC Ctrl-F2. Επισημάνετε την ανάλυση CEN στη στήλη που βρίσκεται στα αριστερά. Στη συνέχεια, επισημάνετε το κατάλληλο υλικό ορού ελέγχου στα δεξιά ("CENN" για τον Αρνητικό Ορό ελέγχου ή "CENP" για τον Θετικό Ορό ελέγχου). Κάντε κλικ στο κουμπί New QC Lot. 3. Κάθε σετ Ορών ελέγχου συνοδεύεται από ένα ειδικό φύλλο δεδομένων για την παρτίδα. Καταχωρήστε τις πληροφορίες αυτού του φύλλου δεδομένων στο λογισμικό. Οι πληροφορίες αυτές πρέπει να περιλαμβάνουν τον αριθμό παρτίδας, την ημερομηνία λήξης, την προοριζόμενη δόση και τα δεδομένα τυπικής απόκλισης προορισμού. Εάν χρειάζεται, κάντε κλικ στο κουμπί Add Assay. Στο νέο παράθυρο, βεβαιωθείτε ότι είναι επιλεγμένο το πλαίσιο Show All Assays. Επιλέξτε την ανάλυση CEN από τη λίστα και κάντε κλικ στην επιλογή Add. Κάντε κλικ στο κουμπί Save. Εκτελέστε αυτήν τη διαδικασία και για τους δύο ορούς ελέγχου. Συνιστάται η χρήση των Ορών ελέγχου QUANTA Flash Centromere μία φορά την ημέρα για κάθε ημέρα που θα χρησιμοποιηθεί η ανάλυση. Ωστόσο, οι χρήστες πρέπει, επίσης, να λαμβάνουν υπόψη και τις απαιτήσεις των εθνικών/τοπικών κανονισμών. Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να αναμειγνύεται ελαφρώς πριν από τη χρήση του, προκειμένου να διασφαλιστεί η ομοιογένειά του. Αποφεύγετε το σχηματισμό αφρού, καθώς οι φυσαλίδες ενδέχεται να παρεμποδίσουν την ανίχνευση της στάθμης υγρού της συσκευής. Αφαιρέστε το πώμα από κάθε σωληνάριο ορού ελέγχου και τοποθετήστε και τα δύο σωληνάρια σε μια ράβδο δειγμάτων με τους γραμμικούς κώδικες στραμμένους προς τα κενά της ράβδου. Τοποθετήστε τη ράβδο δειγμάτων στην περιστρεφόμενη θήκη δειγμάτων της συσκευής BIO-FLASH και κλείστε τη θύρα. Η συσκευή θα πραγματοποιήσει ανάγνωση των γραμμικών κωδίκων που βρίσκονται στα σωληνάρια των ορών ελέγχου και θα προσδιορίσει το απαιτούμενο φυσίγγιο αντιδραστηρίου. Για λεπτομερείς οδηγίες χειρισμού του αναλυτή χημιφωταύγειας BIO-FLASH και του λογισμικού BIO-FLASH, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης που παρέχεται με το σύστημα BIO-FLASH. Ανιχνευσιμότητα Δεν υπάρχει διαθέσιμο διεθνές πρότυπο ορού αναφοράς για τα αντικεντρομεριδιακά αντισώματα, το οποίο επιτρέπει τυποποίηση των αναλύσεων των αντικεντρομεριδιακών αντισωμάτων. Αντ' αυτού έχει ελεγχθεί ο ορός αναφοράς από το Center of Disease Control and Prevention για τα αντικεντρομεριδιακά αντισώματα (IS2134 ANA #8 Centromere pattern FANA) και η τιμή συγκέντρωσης έχει καθοριστεί σε 500,8 CU. Περιορισμοί Αυτοί οι οροί ελέγχου έχουν σχεδιαστεί για 15 χρήσεις. Η ετικέτα κάθε σωληναρίου ορού ελέγχου διαθέτει μια σειρά 15 πλαισίων, τα οποία μπορείτε να σημειώνετε για να παρακολουθείτε τον αριθμό χρήσεων. Ο συνολικός χρόνος κατά τον οποίο τα σωληνάρια ορού ελέγχου μπορούν να παραμείνουν ανοιχτά πάνω στη συσκευή είναι 2 ½ ώρες ή 10 λεπτά ανά χρήση. Εάν οι οροί ελέγχου παραμείνουν ανοιχτοί πάνω στη συσκευή για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα, πρέπει να απορριφθούν. Η χρήση των ίδιων σωληναρίων ορού ελέγχου για περισσότερες από 15 χρήσεις ή/και για περισσότερες από 2 ½ ώρες συνολικά μπορεί να οδηγήσει σε λανθασμένα αποτελέσματα. 15

16 Παραπομπές 1. Fritzler MJ, Rattner JB, Luft LM, Edworthy SM, Casiano CA, Peebles C, et al. Historical perspectives on the discovery and elucidation of autoantibodies to centromere proteins (CENP) and the emerging importance of antibodies to CENP-F. Autoimmun Rev 2011, 10: Mahler M, Fritzler MJ: Epitope specificity and significance in systemic autoimmune diseases. Ann N Y Acad Sci 2010; 1183: Mahler M, You D, Baron M, Taillefer SS, Hudson M; Canadian Scleroderma Research Group(CSRG), Fritzler MJ. An t i -centromere antibodies in a large cohort of systemic sclerosis patients: comparison between immunofluorescence, CENP-A and CENP-B ELISA. Clin Chim Acta 2011, 412: Walker JG, Pope J, Baron M, Leclercq S, Hudson M, Taillefer S, Edworthy SM, et al. The development of systemic sclerosis classification criteria. Clin Rheumatol 2007, 26: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 2009, Fifth Edition. 16

17 Σύμβολα που χρησιμοποιούνται In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Ανατρέξτε στις οδηγίες χρήσης Περιορισμοί θερμοκρασίας Προϊόν μίας χρήσης Βιολογικοί κίνδυνοι Κωδικός παρτίδας Αριθμός καταλόγου Ανάλωση κατά προτίμηση έως Κατασκευαστής Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος Περιέχει επαρκές υλικό για < n > δοκιμασίες Θετικός ορός ελέγχου Αρνητικός ορός ελέγχου Ορός βαθμονόμησης 1 Ορός βαθμονόμησης 2 Ανακυκλώσιμη χάρτινη συσκευασία Αυτή η πλευρά πρέπει να βρίσκεται προς τα πάνω 17

18 Η ονομασία QUANTA Flash είναι εμπορικό σήμα κατατεθέν της INOVA Diagnostics Inc. Η ονομασία BIO-FLASH είναι εμπορικό σήμα κατατεθέν της Biokit S.A Κατασκευαστής: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Τεχνική υποστήριξη (Μόνο για τις Η.Π.Α. & τον Καναδά) : Τεχνική υποστήριξη (Εκτός των Η.Π.Α.) : support@inovadx.com Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ε.Ε.: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Τηλ.: Φαξ: GRC Μάιος 2012 Έκδοση αναθεώρησης 0 18