QUANTA Plex TM ENA Profile Για In Vitro διαγνωστική χρήση Πολυπλοκότητα κατά CLIA: υψηλή

Transcript

1 QUANTA Plex TM ENA Profile Για In Vitro διαγνωστική χρήση Πολυπλοκότητα κατά CLIA: υψηλή Σκοπός χρήσης Το QUANTA Plex TM ENA Profile 5 είναι μια ανοσολογική ανάλυση φθορισμού για την ημι-ποσοτική ανίχνευση των αυτοαντισωμάτων Sm, RNP, SS-A, SS-B και Scl-70 σε ανθρώπινο ορό. Η παρουσία αυτών των αντισωμάτων μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με κλινικά ευρήματα κι άλλες εργαστηριακές εξετάσεις, συνδράμοντας στη διάγνωση του συστηματικού ερυθηματώδη λύκου και σχετιζόμενων νόσων του συνδετικού ιστού, του συνδρόμου Sjögren και της σκληροδερμίας. Περίληψη και επεξήγηση της δοκιμασίας Αντιπυρηνικά αυτοαντισώματα (ANA) απαντώνται σε ένα ευρύ φάσμα νόσων του συνδετικού ιστού. Η δοκιμασία για ANA σε κύτταρα HEp-2 ή μια ANA ELISA χρησιμεύει ως μια ευαίσθητη ανάλυση διαλογής. 1 Παρά το γεγονός ότι η δοκιμασία ANA αποτελεί μια άριστη δοκιμασία διαλογής για συστηματικό ερυθηματώδη λύκο (ΣΕΛ), δεδομένου ότι ένα αρνητικό αποτέλεσμα αποκλείει με βεβαιότητα τον ενεργό ΣΕΛ 2, δεν αποτελεί ειδική δοκιμασία. Η δοκιμασία παρακολούθησης διενεργείται τυπικά σε ορούς οι οποίοι δίνουν θετικά αποτελέσματα ANA. Έξι από τα συχνότερα αυτοαντισώματα αντιδρούν ειδικά με εκχυλίσιμα πυρηνικά αντιγόνα (ENAs) Sm, RNP, SS- 52, SS-A 60, SS-B και Scl- 70. Αυτοαντισώματα σε αυτά τα ENA μπορούν να συνεισφέρουν σημαντικές διαγνωστικές και προγνωστικές πληροφορίες, κατά την αξιολόγηση ασθενών με υποψία μιας ποικιλίας νόσων του συνδετικού ιστού, όπως ΣΕΛ 2, σύνδρομο του Sjögren 3, σκληροδερμία 4, μικτή νόσος του συνδετικού ιστού 5 και πολυμυοσίτιδα. 6 Μια ποικιλία μεθόδων, συμπεριλαμβανομένων των ELISA, διπλής διάχυσης Ouchterlony, Western blot και θετικής συγκόλλησης, χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση αντισωμάτων σε <<Sm, RNP, SS-A 52, SS-A 60 SS-B και Scl-70. Η τεχνική ανοσοπροσδιορισμού φθορισμού (FIA) η οποία χρησιμοποιείται από το QUANTA Plex ENA Profile 5 είναι αντικειμενική, ημι-ποσοτική και μπορεί να χρησιμοποιηθεί εύκολα για την ταυτόχρονη δοκιμασία ενός μεγάλου αριθμού ασθενών για καθένα από αυτά τα 6 ENA. Ημι-ποσοτικά αποτελέσματα λαμβάνονται για κάθε αντιδραστικότητα αυτοαντισώματος. Αρχή μεθόδου Αμιγή Sm, RNP και Scl-70 από θύμο μόσχου και ανασυνδυασμένο ανθρώπινο SS-B δεσμεύονται το καθένα σε διαφορετικούς, χρωματισμένους με φθορισμό κόμβους. Επειδή έχει αναφερθεί ότι τα αυτοαντισώματα σε αντιγόνα SS- A 52 και SS-A 60 είναι διαγνωστικά σημαντικά 6, αμιγές SS-A 60 από θύμο μόσχου και ανασυνδυασμένο SS-A 52 χρησιμοποιούνται σε διαφορετικούς, χρωματισμένους κόμβους. Οι έξι διαφορετικοί επικαλυμμένοι με αντιγόνο κόμβοι, αναμιγνύονται μεταξύ τους και τοποθετούνται στα πηγαδάκια μιας μικροπλάκας υπό συνθήκες οι οποίες διατηρούν τα αντιγόνα στην αντιδραστική τους κατάσταση. Προ-αραιωμένα διαλύματα ελέγχου και αραιωμένοι οροί ασθενών προστίθενται σε ξεχωριστά μικροπηγαδάκια, επιτρέποντας σε οποιαδήποτε παρόντα αυτοαντισώματα Sm, RNP, SS-A 52, SS-A 60, SS-B και Scl-70 να δεσμευτούν στο ακινητοποιημένο αντιγόνο. Στη συνέχεια, μια αντι-ανθρώπινη IgG συζευγμένη σε ένα φθορίζοντα ανιχνευτή προστίθεται σε κάθε μικροπηγαδάκι. Μια δεύτερη επώαση επιτρέπει στο φθορίζον σύζευγμα αντι-ανθρώπινης IgG να συνδεθεί σε οποιαδήποτε αυτοαντισώματα του ασθενούς έχουν προσαρτηθεί στο αντιγόνο των κόμβων. Τα δείγματα στη συνέχεια μετρώνται στον αναλυτή ροής Luminex. Αυτός ο αναλυτής ροής μπορεί να διακρίνει το χρώμα κάθε κόμβου από τους άλλους, καθώς και να μετρήσει την ένταση φθορισμού του συζεύγματος σε κάθε κόμβο. 7 Η ένταση φθορισμού του συζεύγματος είναι ανάλογη με την ποσότητα της σεσημασμένης αντι-ανθρώπινης IgG που είναι δεσμευμένη στα αυτοαντισώματα του ασθενούς στον κόμβο. Κάθε αντιγόνο μπορεί να προσδιοριστεί ημι-ποσοτικά, συγκρίνοντας την ένταση φθορισμού του δείγματος του ασθενούς με τον φθορισμό του αντίστοιχου διαλύματος βαθμονόμησης. Ο επικαλυμμένος με αντι-igg κόμβος ελέγχου συμπεριλαμβάνεται σε κάθε μικροπηγαδάκι, διασφαλίζοντας την ανίχνευση τυχόν ψευδών αρνητικών αποτελεσμάτων λόγω λειτουργικών σφαλμάτων. Αντιδραστήρια 1. Πλάκα μικροκοιλοτήτων πολυστυρενίου, 12 (1 x 8) ταινίες μικροκοιλοτήτων με θήκη, που περιέχουν κόμβους 7 διαφορετικών χρωμάτων. Καθένας από τους χρωματισμένους κόμβους είναι επικαλυμμένος με ένα διαφορετικό καθαρό αντιγόνο (Sm, RNP, SS-A 52, SS-A 60, SS-B, Scl-70 και έναν ορό ελέγχου αντι IgG), σε αλουμινένια συσκευασία που περιέχει αφυγραντικά μέσα. 2. Αρνητικός ορός ελέγχου QUANTA Plex, 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος που περιέχει συντηρητικό και ανθρώπινο ορό χωρίς ανθρώπινα αντισώματα IgG σε αντιγόνα στο ENA Profile 5, προαραιωμένο, 1,2mL 3. ENA Profile 5 διάλυμα βαθμονόμησης, 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος που περιέχει συντηρητικό και αντισώματα ανθρώπινου ορού στα αντιγόνα Sm, RNP, SS-A 52, SS-A 60, SS-B και Scl-70, προαραιωμένο, 1,2mL 4. ENA Profile 5 θετικό, 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος που περιέχει συντηρητικό και αντισώματα ανθρώπινου ορού στα αντιγόνα Sm, RNP, SS-A 52, SS-A 60, SS-B και Scl-70, προαραιωμένο, 1,2mL 5. HRP αραιωτικό δείγματος, 1 φιαλίδιο - χρώματος ροζ, που περιέχει αλατούχο διάλυμα με ρυθμιστικό Tris, Tween 20, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικά, 50mL 6. Σύζευγμα IgG σεσημασμένο με φθορισμό (κατσίκας), αντιανθρώπινη IgG (fc ειδική), 1 φιαλίδιο χρώματος κεχριμπαρί - λυοφιλοποιημένη σκόνη, που περιέχει ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικά. Ανατρέξτε στην ενότητα των Μεθόδων για οδηγίες ανασύστασης. 7. QUANTA Plex Αραιωτικό συζεύγματος, 1 φιαλίδιο - χρώματος ροζ, που περιέχει ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικά, 7mL 1

2 Προσοχή 1. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Το HRP Αραιωτικό δείγματος και οι οροί περιέχουν ένα χημικό (0,02% chloramphenicol) το οποίο είναι γνωστό στην Πολιτεία της Καλιφόρνιας ότι προκαλεί καρκίνο. 2. Όλα τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας των μαρτύρων αυτού του προϊόντος έχουν ελεγχθεί και είναι αρνητικά για αντισώματα έναντι HIV, HBsAg, HCV όπως ορίζεται από τους κανονισμούς του FDA. Καμία μέθοδος πάντως δεν είναι σε θέση να αποκλείσει την παντελή απουσία μολυσματικών παραγόντων όπως και για HIV, HBV, HCV. Για αυτό το λόγο, το αρνητικό διάλυμα ελέγχου, το διάλυμα βαθμονόμησης ENA Profile 5 και το θετικό διάλυμα ελέγχου θα πρέπει να μεταχειρίζονται με τον ίδιο τρόπο όπως ένα πιθανώς μολυσματικό προϊόν Το αζίδιο του νατρίου χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου είναι δηλητήριο και μπορεί να είναι τοξικό σε περίπτωση κατάποσης. Το αζίδιο νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μολύβδινες ή χάλκινες σωληνώσεις με αποτέλεσμα την πρόκληση δυνητικά εκρηκτικών μεταλλικών ενώσεων αζιδίων. Αν για την απόρριψη του αντιδραστηρίου χρησιμοποιούνται λεκάνες απόπλυσης, η συγκέντρωση των αζιδίων μπορεί να αποφευχθεί ξεπλένοντας με άφθονο νερό. 4. Να χρησιμοποιείτε τον κατάλληλο προστατευτικό εξοπλισμό όταν δουλεύετε με τα αντιδραστήρια. 5. Αντιδραστήρια που έχουν χυθεί πρέπει να καθαρίζονται αμέσως. Τηρείτε όλους τους ομοσπονδιακούς, εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς για την απόρριψη αποβλήτων. Ειδικά μέτρα 1. Αυτό το προϊόν είναι για διαγνωστική χρήση In Vitro. 2. Η προσθήκη αζιδίου ή άλλων συντηρητικών στα δείγματα ορού μπορεί να επηρεάσουν τα αποτελέσματα. Όλοι οι οροί ελέγχου είναι συγκεκριμένοι για τον αριθμό παρτίδας του κιτ. 3. Η προσαρμογή αυτής της ανάλυσης για χρήση με ορισμένους αυτόματους επεξεργαστές υγρού δείγματος κατέδειξε ότι δίνει ισοδύναμα αποτελέσματα με εκείνα που λαμβάνονται με χρήση της χειροκίνητης διαδικασίας. Αποτελεί ευθύνη του κάθε εργαστηρίου να αξιολογεί ότι η αυτόματη διαδικασία δίνει αποτελέσματα δοκιμασίας εντός των αποδεκτών ορίων. 4. Η απόδοση της ανάλυσης επηρεάζεται από μια ποικιλία παραγόντων. Αυτοί συμπεριλαμβάνουν τη θερμοκρασία εκκίνησης των αντιδραστηρίων, τη θερμοκρασία του περιβάλλοντος, την ακρίβεια και επαναληψιμότητα της τεχνικής χορήγησης με πιπέττα, την επαναληψιμότητα της τεχνικής ανάμιξης, το αναλυτή ροής Luminex που χρησιμοποιείται για τη μέτρηση των αποτελεσμάτων και τη διάρκεια των χρόνων επώασης κατά την ανάλυση. Η προσοχή στη συνάφεια είναι σημαντική για την ακρίβεια και επαναληψιμότητα των αποτελεσμάτων. 5. Συνιστάται η ακριβής τήρηση του πρωτοκόλλου. 6. Ανεπαρκές κλείσιμο της συσκευασία που περιέχει ταινίες μικροκοιλοτήτων και αφυγραντικά μπορεί να προκαλέσει αποδομή του συνδεδεμένου αντιγόνου και αποτελέσματα χαμηλής ακρίβειας. 7. Είναι δυνατό να παρατηρηθεί μη αποδεκτά χαμηλός φθορισμός μετά από πολλαπλές χρήσεις από ένα μεμονωμένο φιαλίδιο φθορίζοντος συζεύγματος κατά τη διάρκεια ενός χρονικού διαστήματος. Για να αποφευχθεί αυτό, είναι σημαντικό να τηρούνται όλες οι συνιστώμενες διαδικασίες χειρισμού φθορίζοντος συζεύγματος. 8. Η χημική μόλυνση του φθορίζοντος συζεύγματος μπορεί να προέρχεται από τον ακατάλληλο καθαρισμό ή ξέπλυμα του εξοπλισμού ή των οργάνων. Κατάλοιπα από συνήθη εργαστηριακά χημικά, όπως φορμαλίνη, λευκαντικό, αιθανόλη ή απορρυπαντικό προκαλούν υποβάθμιση του φθορίζοντος συζεύγματος με την πάροδο του χρόνου. Ξεπλένετε τελείως όλον τον εξοπλισμό ή τα όργανα με αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό μετά τη χρήση χημικών καθαριστικών/απολυμαντικών. Αποθήκευση 1. Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια στους 2-8 C. Μην τα καταψύχετε. Είναι σταθερά για χρήση μέχρι τη λήξη τους εάν αποθηκεύονται σύμφωνα με τις οδηγίες. 2. Οι μη χρησιμοποιημένες σειρές επικαλυμμένων με κόμβους αντιγόνου πρέπει να ασφαλίζονται στην αλουμινένια συσκευασία τους, η οποία περιέχει απορροφητικό υγρασίας και να φυλάσσονται στους 2-8 C. Δείγματα Η διαδικασία μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο με δείγματα ορού. Μικροβιακή μόλυνση, θέρμανση η δείγματα περιέχοντα ορατά ξένα στοιχεία δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται. Θα πρέπει να αποφεύγονται αιμολυτικοί ή λιπαιμικοί οροί. Μετά τη συλλογή του δείγματος, ο ορός θα πρέπει να διαχωρίζεται άμεσα από το ολικό αίμα. Το CLSI (στο παρελθόν NCCLS) Document H18-A3 προτείνει τις παρακάτω συνθήκες συντήρησης και αποθήκευσης των δειγμάτων: 1) Φυλάξτε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου όχι περισσότερο από 8 ώρες. 2) Σε περίπτωση που η δοκιμασία δεν πραγματοποιηθεί μέσα σε 8 ώρες, καταψύξτε ξανά το δείγμα στους 2-8 C. 3). Αν η ανάλυση δεν ολοκληρωθεί εντός 48 ωρών ή αν το δείγμα προορίζεται για αποστολή, πρέπει να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία -20 C ή χαμηλότερη. Τα κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να αναμιχθούν καλά μετά την απόψυξη και πριν από την εξέταση. Διαδικασία Υλικά που παρέχονται 1 ENA Profile 5 μικροπλάκα 12 (1 x 8) πηγαδάκια, με βάση 1 1,2mL προαραιωμένο, έτοιμο για χρήση QUANTA Plex διάλυμα αρνητικού ελέγχου 1 1,2mL προαραιωμένο, έτοιμο για χρήση ENA Profile 5 διάλυμα βαθμονόμησης 1 1,2mL προαραιωμένο, έτοιμο για χρήση ENA Profile 5 θετικό 1 50mL HRP Αραιωτικό δείγματος 1 Φιαλίδιο λυοφιλοποιημένου φθορίζοντος συζεύγματος (αίγας), αντιανθρώπινη IgG 1 7mL QUANTA Plex Αραιωτικό συζεύγματος 2

3 Πρόσθετος εξοπλισμός που απαιτείται και δεν συμπεριλαμβάνεται Υγρό Ελύτρου για συσκευή ανάλυσης ροής Luminex Μικροπιπέτα για μεταφορά όγκου 5 και 500µL Ρύγχη μικροπιπετών Δοκιμαστικοί σωλήνες για αραιώσεις δειγμάτων ασθενών, όγκος 1 έως 4mL Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό Συσκευή ανάλυσης ροής Luminex Ηλεκτρονική πιπέττα 8 καναλιών για την παροχή 5, 30, 45, 50 και 60µL ή αυτόματη συσκευή πιπεττών/αραιωτής Χρήση της συσκευής ανάλυσης ροής Luminex 1. Βλ. το εγχειρίδιο χρήσης που παρέχεται με το Luminex για λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τη λειτουργία της συσκευής ανάλυσης ροής Luminex και την έκδοση Luminex Integrated System (IS) ή την έκδοση λογισμικού 2.0 ή ανώτερο πρόγραμμα λογισμικού. Τα δεδομένα για το ENA Profile 5 συλλέχθηκαν με χρήση των εκδόσεων 1.7 και του συστήματος IS. Για πρόσθετες πληροφορίες και για πληροφορίες αντιμετώπισης προβλημάτων με την ανάλυση, επικοινωνήστε με την υπηρεσία τεχνικής υποστήριξης της INOVA Diagnostics, Inc. στη διεύθυνση ή στον αριθμό τηλεφώνου που παρέχεται στην τελευταία σελίδα του ένθετου οδηγιών. Συνοπτικές οδηγίες λειτουργίας για το συσκευή ανάλυσης ροής Luminex παρέχονται παρακάτω. 2. Βαθμονομείτε το Luminex χρησιμοποιώντας τους κόμβους βαθμονόμησης και πρότυπου ορού που διατίθενται από τη Luminex Corporation τουλάχιστον μία φορά το μήνα και επαληθεύετε ότι η βαθμονόμηση ήταν επιτυχής. Επίσης, βαθμονομείτε το Luminex εάν η διαφορά θερμοκρασίας βαθμονόμησης είναι μεγαλύτερη από 3 βαθμούς, εάν οι οροί ελέγχου ανάλυσης βρίσκονται εκτός εύρους ή όπως απαιτείται. 3. Το Luminex χρειάζεται 30 λεπτά για να προθερμανθεί μετά την ενεργοποίησή του. Όταν η περίοδος προθέρμανσης ολοκληρωθεί, εκτελέστε τις συνιστώμενες από τον κατασκευαστή λειτουργίες προετοιμασίας, έκπλυσης με αλκοόλη και πλύσης. 4. Εάν χρησιμοποιείτε το σύστημα IS έκδοση 2.0 ή ανώτερη, φορτώστε το πρότυπο "ENA Profile 5" και διασφαλίστε ότι όλες οι πληροφορίες παρτίδας είναι σωστές. Εάν είναι απαραίτητο, ενημερώστε τις πληροφορίες παρτίδας. Εάν χρησιμοποιείτε το λογισμικό έκδοσης 1.7, ρυθμίστε τις παραμέτρους ως εξής. Τα χρώματα κόμβων είναι SS-A 52 = 19, SS-A 60 = 17, SS-B = 7, Sm = 8, RNP = 9, Scl-70 = 11, anti-igg = 42. Ορίστε τα συμβάντα ανά κόμβο σε 50, το μέγεθος δείγματος σε 50μL, το ρυθμό ροής σε 60μL/λεπτό (γρήγορο) και την πύλη σε περίπου 7500 έως Οι διάμεσες τιμές χρησιμοποιούνται για τη Διάμεση ένταση φθορισμού (Median Fluorescent Intensity MFI). 5. Εισαγάγετε τα ονόματα δείγματος είτε χειροκίνητα και είτε κάνοντας κλικ στο "Load Pa List". 6. Φορτώστε την πλάκα στην πλατφόρμα XY του Luminex. 7. Εκκινήστε το Luminex κάνοντας κλικ στο κουμπί "Start Plate". 8. Όταν ολοκληρώσετε τις εργασίες σας για την ημέρα, εκτελέστε τις λειτουργίες υγιεινής και μουσκέματος πριν απενεργοποιήσετε το όργανο. Μεθοδολογία: Πριν ξεκινήσετε 1. Για πληροφορίες προγραμματισμού για αυτόματο εξοπλισμό, επικοινωνήστε με τις υπηρεσίες τεχνικής υποστήριξης της INOVA Diagnostics. 2. Ενεργοποιήστε το συσκευή ανάλυσης ροής Luminex, διασφαλίστε ότι έχει προθερμανθεί και εκτελέστε όλες τις λειτουργίες ημερήσιας συντήρησης όπως περιγράφηκαν παραπάνω. Εάν είναι απαραίτητο, βαθμονομήστε το όργανο και επαληθεύστε ότι η βαθμονόμηση ήταν επιτυχής. 3. Όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα ασθενών θα πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου (20-26 o C) και να έχουν αναδευτεί καλά. 4. Εάν το φθορίζον σύζευγμα αντι-ανθρώπινης IgG δεν έχει ανασυσταθεί, προσθέστε 6mL QUANTA Plex Αραιωτικό συζεύγματος στο φιαλίδιο χρώματος κεχριμπαρί που περιέχει τη λυοφιλοποιημένη σκόνη και στροβιλίστε το δοχείο για περίπου 30 δευτερόλεπτα για να διαλύσετε το περιεχόμενο. Το ανασυσταθέν φθορίζον σύζευγμα είναι σταθερό για 3 μήνες σε θερμοκρασία 2-8 C. Μην καταψύχετε. 5. Βεβαιωθείτε ότι ο περιέκτης υγρού ελύτρου στη συσκευή Luminex είναι γεμάτος με Υγρό Ελύτρου που διατίθεται από την Luminex Corporation. 6. Προετοιμάστε μια αραίωση 1:101 κάθε δείγματος ασθενούς προσθέτοντας 5µL από κάθε ορό σε 500µL αραιωτικού δείγματος HRP, και στη συνέχεια περιδινήστε για να αναμίξετε τελείως το διάλυμα. Τα αραιωμένα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται εντός 8 ωρών από τη στιγμή της προετοιμασίας τους. ΜΗΝ ΑΡΑΙΩΝΕΤΕ τους ορούς QUANTA Plex αρνητικού ελέγχου το ENA Profile 5 χαμηλού και υψηλού θετικού ελέγχου. 7. Ο προσδιορισμός της παρουσίας ή απουσίας αντισωμάτων σε Sm, RNP, SS-A 52, SS-A 60, SS-B και Scl-70, με χρήση αυθαίρετων μονάδων, απαιτεί ένα μικροπηγαδάκι για το αρνητικό και θετικό διάλυμα ελέγχου, δύο μικροπηγαδάκια για το διάλυμα βαθμονόμησης και ένα μικροπηγαδάκι για κάθε δείγμα ασθενούς. Συνιστάται τα δείγματα να αναλύονται ένα-ένα χωριστά. Διαδικασία 1. Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να έλθουν σε θερμοκρασία δωματίου (20-26 C) πριν την έναρξη της ανάλυσης. Τοποθετήστε τον απαιτούμενο αριθμό μικροκοιλοτήτων/ταινιών στη θήκη. Επιστρέψτε αμέσως τις μη χρησιμοποιημένες ταινίες στο σάκο που περιέχει τα αφυγραντικά μέσα και σφραγίστε καλά για να ελαχιστοποιήσετε την έκθεση σε υδρατμούς και φως. 2. Προσθέστε 45µL Αραιωτικού Δείγματος HRP σε κάθε μικροπηγαδάκι που θα περιέχει δείγμα ασθενούς. Μην προσθέσετε Αραιωτικό Δείγματος HRP στα πρώτα τέσσερα μικροπηγαδάκια, διότι θα περιέχουν το αρνητικό διάλυμα ελέγχου QUANTA Plex, το διάλυμα βαθμονόμησης ENA Profile 5 (εις διπλούν) και το θετικό διάλυμα ελέγχου ENA Profile 5. Μην προσθέτετε τα αραιωμένα δείγματα ασθενών στις μικροκοιλότητες αυτή τη στιγμή. 3

4 3. Τηρήστε μία από τις παρακάτω χρονικές ακολουθίες κατά την πρόσθεση ορών ελέγχου, δειγμάτων και συζεύγματος στις μικροκοιλότητες. Επειδή τα δείγματα διαβάζονται διαδοχικά με ρυθμό περίπου 1 δείγματος ανά 19 δευτερόλεπτα (ή μία ταινία 8 κοιλοτήτων ανά περίπου 2½ λεπτά) από το Luminex, τα δείγματα ασθενών και επίσης το σύζευγμα πρέπει να προστίθενται στις μικροκοιλότητες με αυτόν το ρυθμό, ώστε να ελαχιστοποιείται η διακύμανση της ανάλυσης από εμπρός προς τα πίσω. Εάν οι οροί ελέγχου, τα δείγματα ή το σύζευγμα προστίθενται το καθένα ξεχωριστά, καθυστερήστε κάθε πρόσθεση των παραπάνω στην επόμενη μικροκοιλότητα κατά 19 δευτερόλεπτα. Εάν οι οροί ελέγχου, τα δείγματα ή το σύζευγμα προστίθενται 8 κάθε φορά σε μια ταινία, καθυστερήστε κάθε πρόσθεση οποιουδήποτε από αυτά στην επόμενη ταινία κατά 2½ λεπτά. Καθένα από αυτά τα χρονικά σχήματα χρειάζεται περίπου 30 λεπτά για την πρόσθεση των δειγμάτων και στις 12 ταινίες μιας ολόκληρης πλάκας και ελαχιστοποιεί τη διακύμανση της ανάλυσης από εμπρός προς τα πίσω. 4. Περιδινήστε και στη συνέχεια προσθέστε 50µL από καθένα από τα εξής: Το προαραιωμένο Αρνητικό Διάλυμα Ελέγχου QUANTA Plex στο πρώτο μικροπηγαδάκι, το Διάλυμα Βαθμονόμησης ENA Profile 5 στο δεύτερο και τρίτο μικροπηγαδάκι και το Θετικό Διάλυμα Ελέγχου ENA Profile 5 στο τέταρτο μικροπηγαδάκι. Κατά τη χειροκίνητη πρόσθεση δειγμάτων και ανάμιξη κόμβων, πρέπει να χρησιμοποιείται ηλεκτρονική πιπέττα. Χρησιμοποιήστε μία από τις χρονικές ακολουθίες για την πρόσθεση των ορών ελέγχου που περιγράφεται στο βήμα 3. Ανακινήστε έντονα με πιπέττα τουλάχιστον 30μL του αρνητικού ελέγχου QUANTA Plex, του διαλύματος βαθμονόμησης SLE Profile 5 και του διαλύματος θετικού ελέγχου πάνω-κάτω τέσσερις φορές για να αναμίξετε τους κόμβους και τους ορούς ελέγχου σε κάθε μικροκοιλότητα. Η περίοδος επώασης των 30 λεπτών αρχίζει μετά την πρόσθεση του αρνητικού ελέγχου QUANTA Plex στην πρώτη μικροκοιλότητα. 5. Αμέσως συνεχίστε την ανάλυση προσθέτοντας 5μL αραιωμένου ορού ασθενούς στις κατάλληλες μικροκοιλότητες (σημειώστε: αυτό δίνει 1:1010 τελική αραίωση του ορού ασθενούς). Διατηρήστε την ίδια χρονική ακολουθία που χρησιμοποιήθηκε στο βήμα 4. Αναμίξτε το αραιωμένο δείγμα ασθενούς και το αραιωτικό δείγματος HRP στην μικροκοιλότητα ανακινώντας έντονα με πιπέττα τουλάχιστον 30μL του περιεχομένου της μικροκοιλότητας πάνω-κάτω τέσσερις φορές. Συνεχίστε να χρονομετράτε την επώαση για 30 λεπτά από το χρόνο της πρόσθεσης του αρνητικού ελέγχου QUANTA Plex. Τοποθετήστε τις ταινίες μικροκοιλοτήτων σε θερμοκρασία δωματίου, σε επίπεδη επιφάνεια και μακριά από άμεσο ηλιακό φως για το υπόλοιπο της περιόδου επώασης. 6. Στο τέλος της πρώτης περιόδου επώασης, προσθέστε 50μL του φθορίζοντος συζεύγματος σε κάθε μικροκοιλότητα και ανακινήστε με πιπέττα τουλάχιστον 60μL του περιεχομένου της μικροκοιλότητας πάνω-κάτω τέσσερις φορές. Διατηρήστε την ίδια χρονική ακολουθία για την πρόσθεση του συζεύγματος που χρησιμοποιήθηκε στα βήματα 4 και 5. Το σύζευγμα πρέπει να αφαιρείται από τη φιάλη υπό τυπικές ασηπτικές συνθήκες και ακολουθώντας καλές εργαστηριακές τεχνικές. Αφαιρέστε από το φιαλίδιο την ποσότητα συζεύγματος που είναι απαραίτητη για την ανάλυση. ΠΡΟΣ ΑΠΟΦΥΓΗ ΕΝΔΕΧΟΜΕΝΗΣ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΚΗΣ Ή/ΚΑΙ ΧΗΜΙΚΗΣ ΜΟΛΥΝΣΗΣ, ΔΕΝ ΠΡΕΠΕΙ ΠΟΤΕ ΝΑ ΕΙΣΑΓΕΤΕ ΞΑΝΑ ΣΤΟ ΦΙΑΛΙΔΙΟ ΤΗΝ ΠΟΣΟΤΗΤΑ ΣΥΖΕΥΓΜΑΤΟΣ ΠΟΥ ΔΕΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΕ. Επωάστε τις ταινίες μικροκοιλοτήτων για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, σε επίπεδη επιφάνεια και μακριά από άμεσο ηλιακό φως. Ο χρόνος επώασης αρχίζει μετά από την πρώτη πρόσθεση συζεύγματος. 7. Εντός μίας ώρας από την ολοκλήρωση της επώασης του φθορίζοντος συζεύγματος διάρκειας 30 λεπτών, διαβάστε την πλάκα ENA Profile 5 στο Luminex όπως περιγράφεται στην παραπάνω ενότητα, Χρήση της συσκευής ανάλυσης ροής Luminex. Ποιοτικός έλεγχος 1. Τα διαλύματα βαθμονόμησης και θετικού ελέγχου ENA Profile 5 και το διάλυμα αρνητικού ελέγχου QUANTA Plex πρέπει να εκτελούνται με κάθε παρτίδα δειγμάτων, ώστε να διασφαλίζεται ότι όλα τα αντιδραστήρια και οι διαδικασίες έχουν λειτουργήσει σωστά. 2. Σημειώστε ότι επειδή τα διαλύματα βαθμονόμησης και θετικού ελέγχου ENA Profile 5 και το διάλυμα αρνητικού ελέγχου QUANTA Plex είναι προαραιωμένα, δεν επηρεάζουν τις διαδικαστικές μεθόδους που σχετίζονται με τις αραιώσεις των δειγμάτων. 3. Μπορεί να απαιτείται η ανάλυση πρόσθετων ορών ελέγχου, σύμφωνα με τις οδηγίες ή τις απαιτήσεις των τοπικών ή/και εθνικών διατάξεων ή των οργανισμών διαπίστευσης. Πρόσθετοι κατάλληλοι οροί ελέγχου μπορούν να ανασυσταθούν διαιρώντας σε υποπολλαπλάσια δείγμα ανθρώπινου ορού πολλαπλών δοτών και αποθηκεύοντας σε θερμοκρασία < -20 o C. 4. Για να είναι έγκυρα τα αποτελέσματα της δοκιμασίας, πρέπει να ικανοποιούνται όλα τα κριτήρια που παρατίθενται παρακάτω. Εάν κάποιο από αυτά τα κριτήρια δεν ικανοποιείται, η δοκιμασία πρέπει να θεωρηθεί άκυρη και η ανάλυση πρέπει να επαναληφθεί. Η τιμή σε Μονάδες Luminex (LU) του Διαλύματος Βαθμονόμησης για κάθε αντιγόνο αναγράφεται στην επισήμανση του κουτιού για το συγκεκριμένο κιτ. Ανατρέξτε στον τύπο στην ενότητα "Υπολογισμός των αποτελεσμάτων", για να καθορίσετε τις LU του αρνητικού ελέγχου και του θετικού ελέγχου QUANTA Plex. α. Η τιμή του αρνητικού διαλύματος ελέγχου QUANTA Plex Negative Control πρέπει να είναι <20LU σε καθένα από τα 6 αντιγόνα και μεταξύ 10 και 50 LU στον κόμβο αντι- IgG. β. Η τιμή του υψηλού θετικού διαλύματος ελέγχου ENA Profile 5 πρέπει να είναι > 100 LU και 300 LU σε καθένα από τα 6 αντιγόνα και μεταξύ 10 και 50 LU στον κόμβο αντι- IgG. γ. Ο κόμβος ελέγχου αντι-igg σκοπό έχει να διασφαλίσει την ανίχνευση τυχόν ψευδών αρνητικών αποτελεσμάτων ασθενούς λόγω λειτουργικών σφαλμάτων. Υπάρχει η πιθανότητα να μην προστέθηκε δείγμα ασθενούς ή/και σύζευγμα στο πηγαδάκι δείγματος ασθενούς, εάν ο κόμβος αντι-igg του δείγματος ασθενούς είναι κάτω των 3 LU. Σε αυτήν την περίπτωση, πρέπει να επαναληφθεί η δοκιμασία του ασθενούς, για να επιβεβαιωθεί το αρνητικό αποτέλεσμα. 5. Το διάλυμα αρνητικού ελέγχου QUANTA Plex και το διάλυμα βαθμονόμησης ENA Profile 5 και θετικού ελέγχου προορίζονται για την ανίχνευση της περίπτωσης σημαντικής αστοχίας του αντιδραστηρίου. Ο χρήστης πρέπει να ανατρέξει στο CLSI (στο παρελθόν NCCLS) Document C24-A3 για πρόσθετες οδηγίες σχετικά με τις κατάλληλες πρακτικές ελέγχου ποιότητας. 6. Εάν το επιθυμείτε, μπορεί να αναλυθεί ένα πηγαδάκι με αραιωτικό δείγματος HRP αλλά όχι ορό, για να επιβεβαιωθεί ότι ο κόμβος ελέγχου αντι-igg θα ανιχνεύσει ένα πηγαδάκι χωρίς ορό. Αυτό το ελεύθερο ορού διάλυμα ελέγχου πρέπει να είναι < 3,0 LU στον αντι-igg κόμβος ελέγχου και αρνητικό σε όλους τους άλλους κόμβους. 4

5 Υπολογισμός αποτελεσμάτων Πρώτα προσδιορίζονται οι τιμές MFI για όλους τους ορούς ελέγχου και τα δείγματα ασθενούς για κάθε αντιγόνο. Η αντιδραστικότητα σε LU ενός δεδομένου δείγματος για κάθε τύπο αντιγόνου μπορεί στη συνέχεια να υπολογιστεί μέσω του ακόλουθου τύπου. Διαιρέστε το MFI του δείγματος δια το MFI του διαλύματος βαθμονόμησης ENA Profile 5 για το συγκεκριμένο αντιγόνο και πολλαπλασιάστε το αποτέλεσμα επί τον αριθμό LU που έχει εκχωρηθεί στο διάλυμα βαθμονόμησης ENA Profile 5 γι αυτό το αντιγόνο. Η τιμή σε Μονάδες Luminex (LU) του διαλύματος βαθμονόμησης για κάθε αντιγόνο αναγράφεται στην επισήμανση του κουτιού για το συγκεκριμένο κιτ. Το ακόλουθο παράδειγμα προορίζεται για τον προσδιορισμό της αντιδραστικότητας αντι-sm. Χρησιμοποιήστε την ισοδύναμη σύνθεση για κάθε ένα από τα άλλα αντιγόνα. MFI δείγματος για Sm Τιμή δείγματος (σε LU) = x τιμή διαλύματος βαθμονόμησης Sm (σε LU) Διάλυμα βαθμονόμησης Sm MFI Το δείγμα μπορεί στη συνέχεια να ταξινομηθεί σύμφωνα με τον παρακάτω πίνακα. LU Αρνητικό <20 Ασθενές θετικό Μέτριο θετικό Ισχυρό θετικό >100 Η αντιδραστικότητα σχετίζεται με την ποσότητα αυτοαντισώματος που είναι παρούσα στον κόμβο με μη γραμμικό τρόπο. Ενώ αυξήσεις και μειώσεις στις συγκεντρώσεις αντισώματος ασθενούς αντικατοπτρίζονται σε αντίστοιχη αύξηση ή μείωση στη δραστηριότητα φθορισμού, η μεταβολή δεν είναι ανάλογη (δηλ. ένας διπλασιασμός της συγκέντρωσης αντισώματος δε διπλασιάζει την αντιδραστικότητα). Επιπρόσθετα, η ποσότητα ολικής IgG στον ορό του ασθενούς επηρεάζει το μετρούμενο MFI. Εάν απαιτείται ακριβέστερη ποσοτικοποίηση του αυτοαντισώματος του ασθενούς, το δείγμα πρέπει να αναλύεται με ποσοτική δοκιμασία. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Το FIA είναι πολύ ευαίσθητο στην τεχνική και είναι ικανό να ανιχνεύει μικρές διαφορές σε πληθυσμούς ασθενών. Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώσει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών με βάση τις δικές του τεχνικές, ορούς ελέγχου, εξοπλισμό και πληθυσμό ασθενών σύμφωνα με τις εσωτερικές καθιερωμένες διαδικασίες του εργαστηρίου. Συνιστάται τα αποτελέσματα που δίνονται από το εργαστήριο να περιλαμβάνουν τη δήλωση: Τα ακόλουθα αποτελέσματα ελήφθησαν με χρήση του INOVA QUANTA Plex TM ENA Profile 5. Τιμές που λαμβάνονται με μεθόδους ανάλυσης διαφορετικών κατασκευαστών ενδέχεται να μην μπορούν να χρησιμοποιηθούν εναλλακτικά. Το μέγεθος των αναφερόμενων επιπέδων αυτοαντισώματος IgG δεν μπορεί πάντοτε να συσχετίζεται με έναν τίτλο τελικού σημείου. Όρια της διαδικασίας 1. Η παρουσία ανοσοσυμπλόκων ή άλλων συναθροίσεων ανοσοσφαιρίνης στο δείγμα του ασθενούς μπορεί να προκαλέσει αυξημένα επίπεδα μη ειδικής δέσμευσης και να δώσει ψευδή θετικά αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης. 2. Δεν είναι όλοι οι ασθενείς με ερυθηματώδη λύκο (ΣΕΛ), σύνδρομο του Sjögren ή σκληροδερμία θετικοί για αντισώματα Sm, RNP, SS-A 52, SS-A 60, SS-B ή Scl Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης πρέπει να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τα κλινικά ευρήματα και άλλες οροδιαγνωστικές δοκιμασίες. 4. H ατελής ανάμειξη των ορών ελέγχου ή/και των αραιωμένων δειγμάτων ορού με τους διατηρημένους κόμβους στην πλάκα μπορεί να δώσει υψηλότερες τιμές %C.V. από εκείνες που απαντώνται τυπικά σε αναλύσεις ELISA. 5. Μετά από την περίοδο επώασης μισής ώρας με το φθορίζον σύζευγμα, υπάρχει μια περίπου περαιτέρω αύξηση 10% στο φθορισμό για κάθε πρόσθετη μισή ώρα χρόνου επώασης. 6. Τα χαρακτηριστικά απόδοσης αυτής της ανάλυσης δεν έχουν τεκμηριωθεί για μήτρες διαφορετικές από ορό. 7. Η μη τήρηση ακρίβειας των χρόνων πρόσθεσης του αντιδραστηρίου μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την αυξημένη διακύμανση της ανάλυσης από εμπρός προς τα πίσω. Αναμενόμενες τιμές Η δυνατότητα της δοκιμασίας QUANTA Plex TM ENA Profile 5 για ανίχνευση αντισωμάτων έναντι Sm, RNP, SS-A 52, SS- A 60, SS-B και Scl-70 εκτιμήθηκε σε σύγκριση με τις διαθέσιμες εμπορικές δοκιμασίες της INOVA Diagnostics, Inc. Τα αποτελέσματα των δοκιμασιών ELISA και των QUANTA Plex ENA Profile 5 προσδιορίστηκαν ως θετικά αν το δείγμα του ασθενούς ήταν μεγαλύτερο ή ίσο με 20 LU και αρνητικά αν ήταν μικρότερο από 20 LU. Εύρος φυσιολογικών τιμών Εκατόν εξήντα δείγματα από δότες φυσιολογικού αίματος αναλύθηκαν με τη δοκιμασία QUANTA Plex ENA Profile 5. Εκατόν πενήντα οκτώ φυσιολογικά δείγματα ήταν θετικά στο τμήμα SS-A 52 της δοκιμασίας QUANTA Plex. Το υψηλότερο δείγμα είχε τιμή 49 LU. Η μέση τιμή ήταν 3,8 μονάδες LU με τυπική απόκλιση (SD) 4,9. Η οριακή τιμή είναι 3,3 SD άνω του μέσου όρου. Εκατόν πενήντα εννέα φυσιολογικά δείγματα ήταν αρνητικά στο τμήμα SS-A 60 της δοκιμασίας QUANTA Plex. Το υψηλότερο δείγμα είχε τιμή 31 LU. Η μέση τιμή ήταν 2,5 μονάδες LU με τυπική απόκλιση (SD) 2,8. Η οριακή τιμή είναι 6,3 SD άνω του μέσου όρου. Εκατόν πενήντα εννέα φυσιολογικά δείγματα ήταν αρνητικά στο τμήμα SS-B της δοκιμασίας QUANTA Plex. Το υψηλότερο δείγμα είχε τιμή 82 LU. Η μέση τιμή ήταν 3,4 LU. Η τυπική απόκλιση (SD) ήταν 6,8. Η οριακή τιμή είναι 2,4 SD άνω του μέσου όρου. Όλα τα εκατόν εξήντα φυσιολογικά δείγματα ήταν αρνητικά στο τμήμα Sm της δοκιμασίας QUANTA Plex. Η μέση τιμή ήταν 2,6 μονάδες LU με τυπική απόκλιση (SD) 2,4. Η οριακή τιμή είναι 7,2 SD άνω του μέσου όρου. Όλα τα εκατόν εξήντα φυσιολογικά δείγματα ήταν αρνητικά στο τμήμα RNP της δοκιμασίας QUANTA Plex. Η μέση τιμή ήταν 2,3 μονάδες LU με τυπική απόκλιση (SD) 2,4. Η οριακή τιμή είναι 7,4 SD άνω του μέσου όρου. Εκατόν πενήντα επτά φυσιολογικά δείγματα ήταν αρνητικά στο τμήμα Scl-70 της δοκιμασίας QUANTA Plex. Το υψηλότερο δείγμα είχε τιμή 48 LU. Η μέση τιμή ήταν 5,5 μονάδες LU με τυπική απόκλιση (SD) 4,7. Η οριακή τιμή είναι 3,1 SD άνω του μέσου όρου. 5

6 Σύγκριση μεταξύ των αναλύσεων QUANTA Plex και ELISA Για τον προσδιορισμό της θετικής και αρνητικής συμφωνίας των αναλύσεων σε κλινικά καθορισμένα δείγματα ασθενών, δοκιμάστηκαν 288 δείγματα ασθενών είτε με ΣΕΛ, είτε με σύνδρομο Sjögren, είτε με σκληροδερμία με την τεχνική QUANTA Plex ENA Profile 5 και με 5 αντίστοιχες τεχνικές ELISA. SLE, SS και Scl n=288 INOVA ENA Profile 5 (Sm) Sm ELISA 96,2% το ίδιο πράγμα Αρνητικό 244 4* Θετικό 7** 33 *2 ήταν χαμηλά θετικά και 2 ήταν μέτρια θετικά. **6 ήταν χαμηλά θετικά και 1 ήταν μέτριο θετικό. SLE, SS και Scl n=284^ INOVA ENA Profile 5 (RNP) RNP ELISA 94,0% το ίδιο πράγμα Αρνητικό Θετικό 17* 64 ^4 δείγματα δεν ελέγχθηκαν λόγω ανεπαρκούς όγκου. *11 ήταν χαμηλά θετικά, 2 ήταν μέτρια και 4 υψηλά θετικά. SLE, SS και Scl n=288 INOVA ENA Profile 5 (SS-A 52 και SS-A 60) SS-A ELISA 97,6% το ίδιο πράγμα Αρνητικό 205 2* Θετικό 5** 76 *Και τα δύο ήταν χαμηλά θετικά. ** 1 ήταν χαμηλό θετικό, 4 ήταν μέτρια SLE, SS και Scl n=288 SS-B ELISA 97,9% το ίδιο πράγμα INOVA ENA Profile 5 (SS-B) Αρνητικό 255 1* Θετικό 5** 76 *Αυτό ήταν χαμηλό θετικό. **4 ήταν χαμηλά θετικά και 1 ήταν μέτριο. SLE, SS και Scl n=288 INOVA ENA Profile 5 (Scl-70) Scl-70 ELISA 96,2% το ίδιο πράγμα Αρνητικό 241 1* Θετικό 10** 36 *Αυτό ήταν χαμηλό θετικό. ** 7 ήταν χαμηλά θετικά, 2 ήταν μέτρια και 1 ήταν υψηλό. Θετικά, αρνητικά και συνολικό ποσοστό συμφωνίας Όλα τα παραπάνω δεδομένα καθώς και δεδομένα από ασθενείς με ρευματοειδή αρθρίτιδα χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό της σχετικής ευαισθησίας κάθε δοκιμασίας QUANTA Plex ως προς την αντίστοιχη δοκιμασία ELISA. Όλα τα δείγματα N=460 Και τα δύο Αρν Και τα ELISA αρν δύο θετ Q.Plex θετ ELISA θετ Q.Plex αρν Σχετική Σχετική ευαισθησία εξειδίκευση Ποσοστό συμφωνίας Sm % 99% 97,6% RNP* % 100% 96,1% SS-A % 99% 98,0% SS-B % 99% 98,5% Scl % 99% 97,2% *N = 456 για RNP, 4 δείγματα δεν ελέγχθηκαν σε ELISA λόγω ανεπαρκούς όγκου. Ακρίβεια και επαναληψιμότητα Διακύμανση μεταξύ των αναλύσεων και εντός της ανάλυσης. Για τον προσδιορισμό της δια-αναλυτικής διακύμανσης αναλύθηκαν αρκετά δείγματα σε 6 εξετάσεις που εκτελέστηκαν σε διαφορετικές ημέρες. Η διακύμανση σε δύο διαφορετικά δείγματα για κάθε εξειδίκευση εξέτασης αναφέρεται στον παρακάτω πίνακα. Για τον προσδιορισμό της ενδοαναλυτικής διακύμανσης, αναλύθηκαν αρκετά δείγματα 8 φορές το κάθε ένα σε μια ανάλυση. Η διακύμανση σε δύο διαφορετικά δείγματα για κάθε εξειδίκευση εξέτασης αναφέρεται στον παρακάτω πίνακα. 6

7 Διακύμανση μεταξύ των αναλύσεων Διακύμανση εντός της ανάλυσης Αντιγόν Μέση τιμή LU % C.V. Αντιγόνο Μέση τιμή LU % C.V. ο SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-A % SS-B 27 12% SS-B 28 11% SS-B % SS-B 275 1% Sm 29 8% Sm 28 8% Sm % Sm 216 6% RNP 39 4% RNP 40 8% RNP 144 9% RNP 156 4% Scl % Scl % Scl % Scl % Βιβλιογραφία 1. von Muhlen CA and Tan E: Autoantibodies in the Diagnosis of Systemic Rheumatic Diseases. Seminars in Arthritis and Rheumatism 24: , Tan EM, et al.: The 1982 Revised Criteria for the Classification of Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis and Rheumatism 25: , Jonsson R, Haga HJ and Gordon TP: Current concepts on diagnosis, autoantibodies and therapy in Sjögren's syndrome. Scand J Rheumatol 29: , Walker JG and Fritzler MJ: Update on autoantibodies in systemic sclerosis. Curr Opin Rheumatol 19: , Amigues JM, Cantagrel A, Abbal M and Mazieres B: Comparative study of 4 diagnosis criteria sets for mixed connective tissue disease in patients with anti-rnp antibodies. Autoimmunity Group of the Hospitals of Toulouse. J Rheumatol 23: , Frank MB, V McCubbin, E Trieu, Y Wu, DA Isenberg, IN Targoff. The association of anti-ro52 autoantibodies with myositis and scleroderma autoantibodies. J Autoimmun 12: , Martins TB, Burlingame R, von Muhlen CA, et al. Evaluation of multiplexed fluorescent microsphere immunoassay for detection of autoantibodies to nuclear antigens. Clin Diagn Lab Immunol 11: , Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health, Fifth Edition, Κατασκευαστής: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Aντιπροσωπευτικός: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: Technical Service GRC November 2009 Revision 9 7