Το mir-29a ως βιοδείκτης στην υπερτροφική μυοκαρδιοπάθεια. Δ. Ντέλιος 1,2

Transcript

1 Το mir-29a ως βιοδείκτης στην υπερτροφική μυοκαρδιοπάθεια Δ. Ντέλιος 1,2

2 Υπερτροφική μυοκαρδιοπάθεια - 1:500 στο γενικό πληθυσμό Πρωτεΐνες του σαρκομεριδίου ΜΥΗ7, MYBPC3, TNNI3, TNNT2, TPM1, MYL3, MYL2 -Χαρακτηρίζεται από υπερτροφία, ίνωση και διαταραχή της αρχιτεκτονικής του μυοκαρδίου -οφείλεται σε μεταλλάξεις γονιδίων που κωδικοποιούν πρωτεΐνες του σαρκομεριδίου

3 ΜiRNA Tα mirna αποτελούν μικρά μόρια RΝΑ περίπου 20nt. Στο ανθρώπινο γονιδίωμα έχουν περιγραφεί περί τα γονίδια που κωδικοποιούν mirna. To 5' άκρο του mirna (θέσεις 1-8) είναι κριτικής σημασίας για την αλληλεπίδραση με το mrna στόχο στη 3' UTR περιοχή του, με τελικό αποτέλεσμα: μείωση της παραγόμενης πρωτεΐνης κυρίως μέσω αποσταθεροποίησης του mrna αναστολή μετάφρασης

4 Στα υπερτροφικά μυοκαρδιακά κύτταρα επισυμβαίνουν σημαντικές αλλαγές σε επίπεδο γονιδιακής έκφρασης Η νόσος χαρακτηρίζεται από κλινική ετερογένεια ανάγκη για νέους βιοδείκτες mirnas

5 mir-29a C-myc NF-kB Gli TCF/LEF 7q32.3 MIR29A Η οικογενεια των mir29 περιλαμβάνει το mir29a, mir29b-1, mir29b-2 και mir29c. πρωτεΐνες συνδετικού ιστού Cola1, Col3a1,Col4a1, Col5a1,Col5a2, Col5a3,Col7a1,Col8a1, Mmp2, Itgb1 ομοιοστασία ασβεστίου Serca2a, Ryr2, S100a1 κυτταρική αύξηση και μεταβολισμός μεταβολισμός PIK3R1, Med13 Διαδραματίζει ρυθμιστικό ρόλο σε αρκετές διεργασιες όπως κυτταρικός πολλαπλασιασμός, διαφοροποίηση, οι σηματοδοτικές οδοί (TGF-β, Wnt), η μεθυλίωση του DNA Kriegel et al. Physiol. Genomics 2012

6 mir-29a και ίνωση κίρρωση Πνευμονική ίνωση Συστηματική σκλήρυνση MRG-201 mir-29b-mimic Φάση Ι

7 mir-29a στο πλάσμα και ίνωση Έκταση της ίνωσης υπερτροφία Απόφραξη στο χώρο εξόδου Roncarati et al. JACC 2014 Fang et al J Transl Med 2015 Derda Roderburg et al. Int J Cardiol 2015

8 Ερωτήματα Κατανομή του mir-29a στα διάφορα συστατικά του αίματος Εκφράζεται mir-29a στο μυοκάρδιο Προέλευση του mir-29a στο πλάσμα

9 Υλικό και μέθοδοι 50 ασθενείς 5 δείγματα μυοκαρδίου H μέτρηση των επιπέδων του mir29a έγινε σε RNA που απομονώθηκε από πλάσμα με τη μεθοδολογία της Real time qpcr και τη χρήση ανιχνευτών υδρόλυσης (TaqMan probes). Η σχετική ποσοτικοποίηση έγινε με τη μέθοδο 2 -ΔΔCt. Ως γονίδιο αναφοράς χρησιμοποιήθηκε το εξωγενώς χορηγούμενο cel-mir-39

10 mir-29a στο αίμα

11 double density centrifugation mir-29a στο αίμα πλάσμα PBMC PMN RBC

12 mir-29a στο πλάσμα

13 mir-29a στο πλάσμα exosomes σύμπλοκο με AGO2 Συνδεδεμένο με HDL

14 mir-29a και exosomes - πρωτεινάση Κ + πρωτεινάση Κ Επώαση στους 55 ο C

15 mir-29a και exosomes g + Exosomes υπερκείμενο

16 mir-29a και HDL

17 μυοκάρδιο και mir-29a πλάσματος

18 mir-29a στο μυοκάρδιο Στο μυοκάρδιο το mir-29a αποτελεί το 4% των μορίων mirna.

19 mir-29a mir-29a mir-208b MYH7 COL1A1 COL3A ,49 1,38 0,88 4,9 5,13

20 Το μυοκάρδιο ως πηγή mir-29a

21 Το μυοκάρδιο ως πηγή mir-29a

22 RBC και mir-29a πλάσματος

23 mir-29a και RBC 25 x K+ K + K x

24 mir-29a και αιμόλυση

25 mir-29a και αιμόλυση

26 mir-29a και αιμόλυση

27 mir-29a και Vmax a,b: β-αναστολέας + δισοπυραμίδη c : προ μυεκτομής - in vitro αιμόλυση -Διαφορές στον αριθμό των ΔΕΚ -LVOTΟ αποτελεί δυναμικό φαινόμενο

28 Συμπεράσματα -Το mir-29a στο πλάσμα βρίσκεται συνδεδεμένο με πρωτεΐνες, ενώ τα exosomes περιέχουν.μικρές μόνο ποσότητες -Το μυοκάρδιο εκφράζει mir-29a -Η απόφραξη στο χώρο εξόδου οδηγεί σε αιμόλυση -Τα επίπεδα mir-29a σχετίζονται με δείκτες αιμόλυσης και όχι μυοκαρδιακής βλάβης -Αιμόλυση κατά τη συλλογή και επεξεργασία του δείγματος μπορεί να οδηγήσει σε.αναλυτικά λάθη

29 Ευχαριστώ