B Onclarity HPV Assay

Transcript

1 B Onclarity HPV Assay (06) Ελληνικά ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΟΝΤΑΙ Η ανάλυση BD Onclarity HPV Assay (ανάλυση HPV BD Onclarity) είναι μια ενισχυμένη εξέταση DNA για την ποιοτική ανίχνευση τύπων ιού ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) υψηλού κινδύνου. Η ανάλυση εντοπίζει όλους τους τύπους HPV υψηλού κινδύνου (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 και 68) και παρέχει την ικανότητα προσδιορισμού των γονοτύπων έξι τύπων υψηλού κινδύνου (HPV 16, 18, 31, 45, 51 και 52). Ενδοτραχηλικά δείγματα που εξετάζονται με την BD Onclarity HPV Assay περιλαμβάνουν τα BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (Κιτ συλλογής τραχηλικής ψήκτρας HPV), BD SurePath Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης BD SurePath) και PreservCyt Solution (Διάλυμα PreservCyt) (με κλάσμα που αφαιρείται πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση Pap BD SurePath ή ThinPrep). Η BD Onclarity HPV Assay εκτελείται με το σύστημα BD Viper LT. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ Ο ιός των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) είναι ο πιο διαδεδομένος μεταδιδόμενος σεξουαλικά ιός στον κόσμο, με 50% των σεξουαλικά ενεργών ανθρώπων να παρουσιάζουν HPV των γεννητικών οργάνων σε κάποια φάση της ζωής τους. Οι άνθρωποι συχνά δεν γνωρίζουν ότι έχουν μολυνθεί και δεν λαμβάνουν προφυλάξεις για την αποφυγή της μετάδοσης του ιού σε άλλους. Υπάρχουν περισσότεροι από 40 τύποι HPV που είναι δυνατό να μολύνουν το γεννητικό σύστημα. 1 Σε πολλές περιπτώσεις, οι λοιμώξεις HPV είναι παροδικές και το σώμα θα καθαρίσει τον ιό μόνο του. Ωστόσο, σε μερικές περιπτώσεις, ο ιός είναι μόνιμος και θα προκαλέσει τη μετάλλαξη φυσιολογικών κυττάρων σε παράτυπα με αποτέλεσμα την καρκινογένεση. Αυτοί οι ογκογενείς τύποι του HPV ταξινομούνται ως τύποι υψηλού κινδύνου και περιλαμβάνουν τους HPV 16 και 18. Άλλοι τύποι θεωρούνται χαμηλού κινδύνου, καθώς δεν φαίνεται να προκαλούν καρκίνο. Σύμφωνα με τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας (WHO), ο HPV είναι η δεύτερη μεγαλύτερη αιτία θνησιμότητας από γυναικείο καρκίνο, με απολογισμό περίπου ζωές ετησίως. Στην Ευρώπη μόνο, ο απολογισμός της ασθένειας είναι περίπου ζωές ετησίως. 2 Εκτιμάται ότι περίπου 70% των τραχηλικών καρκίνων προκαλούνται από τους τύπους HPV 16 και Σήμερα, οι εξετάσεις Pap μπορούν να ενημερώσουν τον κλινικό ιατρό αν υπάρχουν αλλαγές στα τραχηλικά κύτταρα. Αν αυτά τα κύτταρα είναι παράτυπα, μια εξέταση HPV είναι δυνατό να πραγματοποιηθεί για τον προσδιορισμό του αν αυτές οι τραχηλικές αλλαγές οφείλονται σε στέλεχος HPV που μπορεί να οδηγήσει σε καρκίνο του τραχήλου. Δεν είναι δυνατό όλες οι μοριακές αναλύσεις να διακρίνουν τους διάφορους τύπους HPV. Η BD Onclarity HPV Assay, όταν εξετάζεται με το σύστημα BD Viper LT, είναι μια ενισχυμένη ανάλυση DNA για την ποιοτική ανίχνευση τύπων ιού ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) υψηλού κινδύνου. Η ανάλυση εντοπίζει τύπους HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 και 68 και δίνει τη δυνατότητα ταυτόχρονης ανίχνευσης των τύπων υψηλού κινδύνου 16 18, 31, 45, 51, 52 και άλλων γονοτύπων υψηλού κινδύνου που αναφέρονται από την ομάδα των γονοτύπων (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3: 35/39/68). Ενδοτραχηλικά δείγματα που ενδέχεται να εξετάζονται με την BD Onclarity HPV Assay περιλαμβάνουν τα BD SurePath Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης BD SurePath) (με κλάσμα που αφαιρείται πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση Pap BD SurePath), PreservCyt Solution (Διάλυμα PreservCyt) (με κλάσμα που αφαιρείται πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση Pap PreservCyt) και το BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (Κιτ συλλογής τραχηλικής ψήκτρας HPV). ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η ανάλυση του ιού ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) BD Onclarity είναι σχεδιασμένη για χρήση με το BD SurePath Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης BD SurePath) (με κλάσμα που αφαιρείται πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση Pap BD SurePath), PreservCyt Solution (Διάλυμα PreservCyt) (με κλάσμα που αφαιρείται πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση Pap PreservCyt) και το BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (Κιτ συλλογής τραχηλικής ψήκτρας HPV), εφαρμόσιμα αντιδραστήρια, το σύστημα BD Viper LT και την τεχνολογία BD FOX Extraction. Τα δείγματα υπόκεινται σε βήμα προθέρμανσης στον BD Pre-warm heater για ομογενοποίηση της θεμέλιας ουσίας, λύση κυττάρων και απελευθέρωση DNA που έχει δυνατότητα εκχύλισης και ενίσχυσης. Αφού κρυώσουν, τα δείγματα φορτώνονται στο σύστημα BD Viper LT, το οποίο στη συνέχεια εκτελεί όλα τα βήματα που συμμετέχουν στην εκχύλιση και την ενίσχυση του DNA στόχου, χωρίς περαιτέρω παρέμβαση του χρήστη. Το δείγμα μεταφέρεται σε σωληνάριο εκχύλισης που περιέχει σωματίδια οξειδίου του σιδήρου σε διαλυτή μεμβράνη. Στη συνέχεια, προστίθεται οξύ για να χαμηλώσει το PH και να επιφέρει θετικό φορτίο στο οξείδιο του σιδήρου, το οποίο εν συνεχεία προσδένεται στο αρνητικά φορτισμένο DNA. Τα σωματίδια και το δεσμευμένο DNA ωθούνται στη συνέχεια στα πλευρικά τοιχώματα του σωληναρίου εκχύλισης με μαγνήτες και το κατεργασμένο δείγμα απωθείται στα απόβλητα. Τα σωματίδια εκπλένονται και ένα ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης υψηλού ph προστίθεται για την έκλουση του κεκαθαρμένου DNA. Τέλος, ένα ρυθμιστικό διάλυμα εξουδετέρωσης χρησιμοποιείται για να ρυθμίσει το ph του εκλουσμένου διαλύματος κατά το βέλτιστο για την ενίσχυση του DNA. Η BD Onclarity HPV Assay βασίζεται στην ταυτόχρονη ενίσχυση και ανίχνευση του DNA στόχου χρησιμοποιώντας εκκινητές ενίσχυσης και μια αλληλουχία ανίχνευσης με σήμανση φθορισμού με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) σε πραγματικό χρόνο. Τα αντιδραστήρια στεγνώνονται σε τρία σωληνάρια (G1, G2 και G3) που είναι σε θέση να ανιχνεύσουν τους 14 γονοτύπους του HPV και ένα εσωτερικό πρότυπο ελέγχου που προέρχεται από δείγμα και αποτελείται από τμήμα DNA από το ανθρώπινο γονίδιο β-σφαιρίνης. Κάθε μεμονωμένο σωληνάριο περιέχει τους εκκινητές ενίσχυσης, την αλληλουχία ανίχνευσης με σήμανση φθορισμού, πολυμεράση DNA, νουκλεοτίδια και άλλα απαραίτητα για την ενίσχυση αντιδραστήρια για τις αντίστοιχες αναλύσεις. Το σύστημα BD Viper LT διανέμει με πιπέτα ένα μέρος του κεκαθαρμένου διαλύματος DNA από κάθε σωληνάριο εκχύλισης στα τρία σωληνάρια BD Onclarity HPV PCR (G1, G2 και G3), τα οποία στη συνέχεια 1

2 σφραγίζονται για την πρόληψη επιμόλυνσης. Η παρουσία ή η απουσία DNA HPV προσδιορίζεται από τον κύκλο PCR στον οποίο το σήμα περνάει ένα προκαθορισμένο κατώφλι. Επιπροσθέτως, η ανάλυση θα εκχυλίσει, θα ενισχύσει και θα ανιχνεύσει ένα τμήμα του ανθρώπινου γονιδίου β-σφαιρίνης ως εσωτερικό πρότυπο ελέγχου για την αξιολόγηση της επεξεργασίας, της εκχύλισης και της ενίσχυσης του δείγματος. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ: Κάθε BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack (Συσκευασία αντιδραστηρίων BD Onclarity HPV Assay) περιέχει: Σωληνάρια BD Onclarity HPV G1 PCR, 2 x 96: Κάθε σωληνάριο PCR G1 περιέχει περίπου 32,5 pmol ολιγονουκλεοτιδίων, 20 pmol αλληλουχίας ανίχνευσης με σήμανση φθορισμού, 80 nmol dntp και 0,52 μονάδες πολυμεράσης DNA με στοιχεία σταθεροποιητών και ρυθμιστικών διαλυμάτων. Σωληνάρια BD Onclarity HPV G2 PCR, 2 x 96: Κάθε σωληνάριο PCR G2 περιέχει περίπου 42,5 pmol ολιγονουκλεοτιδίων, 30 pmol αλληλουχίας ανίχνευσης με σήμανση φθορισμού, 80 nmol dntp και 0,52 μονάδες πολυμεράσης DNA με στοιχεία σταθεροποιητών και ρυθμιστικών διαλυμάτων. Σωληνάρια BD Onclarity HPV G3 PCR, 2 x 96: Κάθε σωληνάριο PCR G3 περιέχει περίπου 42,5 pmol ολιγονουκλεοτιδίων, 25 pmol αλληλουχίας ανίχνευσης με σήμανση φθορισμού, 80 nmol dntp και 0,52 μονάδες πολυμεράσης DNA με στοιχεία σταθεροποιητών και ρυθμιστικών διαλυμάτων. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Κάθε φάκελος περιέχει μια σακούλα αποξηραντικού υλικού. Σετ προτύπων ελέγχου για την BD Onclarity HPV Assay: 24 σωληνάρια θετικών προτύπων ελέγχου BD Onclarity HPV Positive Control που περιέχουν περίπου αντίγραφα πλασμιδίου HPV 16 γραμμικής μορφής, αντίγραφα πλασμιδίου HPV 18 γραμμικής μορφής, αντίγραφα πλασμιδίου HPV 56 γραμμικής μορφής και αντίγραφα πλασμιδίου που περιέχουν αλληλουχία ανθρώπινου γονιδίου β-σφαιρίνης σε νουκλεϊκό οξύ φορέα και 24 σωληνάρια αρνητικών προτύπων ελέγχου BD Onclarity HPV Negative Control που περιέχουν μόνο νουκλεϊκό οξύ φορέα. Οι συγκεντρώσεις του νουκλεϊκού οξέος φορέα DNA και των πλασμιδίων καθορίζονται φασματοφωτομετρικά. Τα σωληνάρια αραίωσης δειγμάτων κυτταρολογίας υγρής φάσης (LBC) HPV BD Onclarity 400 σωληνάρια που κάθε ένα περιέχει περίπου 1,7 ml ρυθμιστικού διαλύματος με αλάτι, απορρυπαντικό και συντηρητικό. BD FOX PCR Extraction Tubes (Σωληνάρια εκχύλισης): 48 ταινίες 8 σωληναρίων, έκαστο εκ των οποίων περιέχει περίπου 10 mg οξειδίου του σιδήρου σε διαλυτή μεμβράνη. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (Δοχείο αντιδραστηρίου εκχύλισης με εργαλείο παρακέντησης): Κάθε δοχείο αντιδραστηρίου εκχύλισης 5 κοιλοτήτων περιέχει περίπου 16,5 ml οξέος πρόσδεσης, 72,5 ml ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης, 25,4 ml ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης, 19,4 ml ρυθμιστικού διαλύματος εξουδετέρωσης με συντηρητικό και 15,5 ml διαλύματος εξουδετέρωσης αποβλήτων. ΟΡΓΑΝΟ, ΕΞΟΠΛΙΣΜΌΣ ΚΑΙ ΠΡΟΜΉΘΕΙΕΣ Παρεχόμενα υλικά: BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, όργανο BD Viper LT, BD Viper LT Instrument Plates, BD Viper LT Pipette Tips, BD Viper LT Solid Waste Liners, BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit, BD Viper LT System PCR Accessory Kit, BD Viper Pre-warm Heater, BD Viper LT Specimen Rack, BD Viper Neutralization Pouches, σωληνάρια δειγμάτων και πώματα για χρήση στο BD Viper System (Λειτουργία εκχύλισης), BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται, για χρήση με το BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (Κιτ συλλογής τραχηλικής ψήκτρας BD Onclarity HPV) ή για τη χειροκίνητη μεταφορά κλασμάτων LBC: Γάντια από νιτρίλιο, πιπέτες μεταφοράς, στεγανά από αερολύματα ρύγχη πολυπροπυλενίου με ικανότητα διανομής 0,5 ± 0,05 ml, περιδινητής τύπου Vortex, 0,5% (v/v) υποχλωριώδες νάτριο, 1% (v/v) υποχλωριώδες νάτριο, 3% (w/v) υπεροξείδιο του υδρογόνου, ισοπροπυλική αλκοόλη, ύδωρ βαθμού μοριακής βιολογίας χωρίς νουκλεάση. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται, για την αυτόματη μεταφορά κλασμάτων LBC με χρήση του συστήματος πολλαπλής επεξεργασίας BD Totalys MultiProcessor: BD Totalys MultiProcessor (Συσκευή πολλαπλής επεξεργασίας BD Totalys), BD Syringing Pipettes (Πιπέτες σύριγγας BD), αναμείκτης περιδίνησης (vortex), γάντια. Απαιτήσεις φύλαξης και χειρισμού: Το αραιωτικό BD Onclarity HPV LBC και το αραιωτικό τραχηλικής ψήκτρας BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent πρέπει να αποθηκεύονται στους 2 25 C. Όλα τα άλλα αντιδραστήρια μπορούν να φυλάσσονται στους 2 33 C. Οι μη ανοιγμένες συσκευασίες αντιδραστηρίων είναι σταθερές μέχρι την ημερομηνία λήξης. Αφού ανοιχθεί ο φάκελος, τα σωληνάρια PCR είναι σταθερά για 4 εβδομάδες εφόσον είναι σωστά σφραγισμένα ή μέχρι την ημερομηνία λήξης ανάλογα με ποιο από τα δύο θα προηγηθεί. Μην καταψύχετε. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΉΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΆΞΕΙΣ 1. Για in vitro διαγνωστική χρήση. 2. Στα κλινικά δείγματα ενδέχεται να υπάρχουν παθογόνοι μικροοργανισμοί, συμπεριλαμβανομένων των ιών της ηπατίτιδας και του ιού της επίκτητης ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV). Για το χειρισμό όλων των υλικών που είναι επιμολυσμένα με αίμα και άλλα σωματικά υγρά, θα πρέπει να ακολουθούνται οι «Τυπικές προφυλάξεις» 4-7 και οι κατευθυντήριες οδηγίες των ιδρυμάτων. Για περισσότερες ειδικές προειδοποιήσεις, συστάσεις προσοχής και σημειώσεις ειδικά για το LT BD Viper, συμβουλευτείτε το εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος LT BD Viper. Δείγμα: 3. Για δείγματα κυτταρολογίας υγρής φάσης, χρησιμοποιείτε μόνο τα σωληνάρια αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC. 4. Για δείγματα τραχηλικής ψήκτρας, χρησιμοποιείτε μόνο το κιτ συλλογής τραχηλικής ψήκτρας BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit. 2

3 5. Η βέλτιστη απόδοση του προσδιορισμού της BD Onclarity HPV Assay απαιτεί τη συλλογή, το χειρισμό και τη μεταφορά των δειγμάτων με σωστό τρόπο. 6. Για να αποφύγετε τυχόν περιττή αιμορραγία, μην περιστρέφετε υπερβολικά την τραχηλική ψήκτρα κατά τη διάρκεια της συλλογής του δείγματος. 7. Κάθε δείγμα προς το εργαστήριο θα πρέπει να συνοδεύεται από τη σωστή σήμανση. 8. Κατά τη θραύση του στελέχους της τραχηλικής ψήκτρας, προσέχετε ώστε να αποφύγετε τυχόν πιτσίλισμα, έκχυση ή πρόκληση αερολυμάτων. Αποφεύγετε τη μικροβιακή μόλυνση της κεφαλής της τραχηλικής ψήκτρας. 9. Προσέχετε ώστε να αποφύγετε τυχόν επιμόλυνση κατά τα βήματα χειρισμού του δείγματος. Βεβαιωθείτε ότι οι περιέκτες των δειγμάτων δεν έρχονται σε επαφή μεταξύ τους και απορρίψτε τα χρησιμοποιημένα υλικά χωρίς αυτά να περνούν πάνω από ανοικτούς περιέκτες. Εάν τα γάντια έρχονται σε επαφή με δείγματα, αλλάζετέ τα ώστε να αποφύγετε την επιμόλυνση. 10. Ελλιπής ή υπερβολική διανομή δειγμάτων LBC στο σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC ενδέχεται να επηρεάσει την απόδοση της ανάλυσης. Η υπερπλήρωση των σωληναρίων ενδέχεται επίσης να προκαλέσει υπερχείλιση υγρών στην επιφάνεια του BD Viper LT, καθώς και επιμόλυνση. 11. Τα τραχηλικά δείγματα πρέπει να συλλέγονται και να εξετάζονται πριν από την ημερομηνία λήξης του σωληναρίου αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC ή το σωληνάριο αραιωτικού τραχηλικής ψήκτρας BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent. 12. Για τη χειροκίνητη μεταφορά, χρησιμοποιείτε μόνο στεγανά από αερολύματα ρύγχη πιπέτας πολυπροπυλενίου για τη μεταφορά των δειγμάτων στα σωληνάρια αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC Diluent tubes. 13. Για την αυτόματη μεταφορά, πρέπει να χρησιμοποιείται μόνο η συσκευή πολλαπλής επεξεργασίας BD Totalys MultiProcessor για τη μεταφορά των δειγμάτων BD SurePath LBC στα σωληνάρια αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC Diluent tubes. Ανάλυση/Αντιδραστήριο: 14. Τα θετικά και αρνητικά πρότυπα ελέγχου HPV BD Onclarity πρέπει να προθερμαίνονται εντός 24 ωρών από την υδάτωση. 15. Χρησιμοποιείτε μόνο σωληνάρια δειγμάτων και προτύπων ελέγχου με διατρήσιμα πώματα στο σύστημα BD Viper LT. Μην αφαιρείτε τα διατρήσιμα πώματα πριν τη θέση σε λειτουργία του οργάνου. Βεβαιωθείτε ότι αντικαθιστάτε οποιαδήποτε διατρημένα διατρήσιμα πώματα με νέα διατρήσιμα πώματα πριν από τη θέση σε λειτουργία του οργάνου. 16. Μην εναλλάσσετε και μην αναμειγνύεται τα αντιδραστήρια από κιτ με διαφορετικούς αριθμούς παρτίδας. 17. Μην εξετάζετε το σωληνάριο BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent εάν έχει παραληφθεί από το εργαστήριο χωρίς την ψήκτρα. Ενδέχεται να προκύψει ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα εξέτασης. 18. Χρησιμοποιείτε μόνο τα ρύγχη πιπέτας BD Viper LT όπως παρέχονται από την BD με το σύστημα BD Viper LT. 19. Δοχείο αντιδραστηρίου εκχύλισης PCR BD Viper με εργαλείο παρακέντησης. Κίνδυνος H302 Επιβλαβές σε περίπτωση κατάποσης. H314 Προκαλεί σοβαρά δερματικά εγκαύματα και οφθαλμικές βλάβες. H318 Προκαλεί σοβαρή οφθαλμική βλάβη. P260 Μην αναπνέετε σκόνη/αναθυμιάσεις/αέρια/σταγονίδια/ατμούς/εκνεφώματα. P280 Να φοράτε προστατευτικά γάντια/ προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/πρόσωπο. P303+P361+P353 ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ (ή με τα μαλλιά): Βγάλτε αμέσως όλα τα μολυσμένα ρούχα. Ξεπλύντε την επιδερμίδα με νερό/στο ντους. P304+P340 ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΙΣΠΝΟΗΣ: Μεταφέρατε τον παθόντα στον καθαρό αέρα και αφήστε τον να ξεκουραστεί σε στάση που διευκολύνει την αναπνοή. P405 Φυλάσσεται κλειδωμένο. P501 Διάθεση του περιεχομένου/περιέκτη σύμφωνα με τους τοπικούς/ περιφερειακούς/εθνικούς/διεθνείς κανονισμούς. 20. Χρησιμοποιείτε μόνο τα BD Viper LT Clear Plate Sealers (διάφανα στεγανωτικά τρυβλίου) στα σωληνάρια PCR με το σύστημα BD Viper LT. 21. Οι φάκελοι αντιδραστηρίων που περιέχουν μη χρησιμοποιημένα σωληνάρια PCR ΠΡΕΠΕΙ να επανασφραγίζονται προσεκτικά μετά από το άνοιγμα. Βεβαιωθείτε ότι οι φάκελοι αντιδραστηρίων περιέχουν αποξηραντικό υλικό πριν τους επανασφραγίσετε. 22. Τα σωληνάρια PCR ΠΡΕΠΕΙ να σφραγίζονται σωστά με τα BD Viper LT Clear Plate Sealers πριν από την αφαίρεση του τρυβλίου από το σύστημα BD Viper LT. Το σφράγισμα διασφαλίζει κλειστή αντίδραση για ενίσχυση και ανίχνευση, στοιχείο απαραίτητο προκειμένου να αποφευχθεί μόλυνση από προϊόντα ενίσχυσης στο όργανο και την επιφάνεια εργασίας. Μην αφαιρείτε ποτέ το υλικό σφράγισης από τα σωληνάρια PCR. 23. Για την πρόληψη μόλυνσης από προϊόντα ενίσχυσης στο χώρο εργασίας, χρησιμοποιείτε τις σακούλες απόρριψης που παρέχονται με το κιτ παρελκόμενων PCR του BD Viper LT System PCR Accessory Kit (Κιτ παρελκόμενων) κατά την απόρριψη σωληναρίων PCR που έχουν εξεταστεί. Πριν από την απόρριψη βεβαιωθείτε ότι οι σακούλες είναι καλά κλεισμένες. 24. Παρόλο που δεν απαιτούνται αποκλειστικοί χώροι εργασίας διότι ο σχεδιασμός του BD Viper LT μειώνει την πιθανότητα μόλυνσης από αντίγραφα (amplicon) στο περιβάλλον εξέτασης, απαιτείται, ωστόσο, η λήψη άλλων προφυλάξεων για τον έλεγχο της μόλυνσης, ιδιαίτερα για την αποφυγή της μόλυνσης των δειγμάτων κατά τη διάρκεια του χειρισμού. 25. ΑΛΛΑΞΤΕ ΓΑΝΤΙΑ αν έρχονται σε επαφή με δείγματα ή εμφανίζουν υγρή όψη, ώστε να αποφεύγετε την επιμόλυνση άλλων δειγμάτων. Πριν αποσυρθείτε από τον χώρο εργασίας και κατά την είσοδό σας σε αυτόν αλλάζετε γάντια. 26. Σε περίπτωση επιμόλυνσης, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος BD Viper LT για οδηγίες σχετικά με τον καθαρισμό. 27. Σε περίπτωση κάποιου ασυνήθιστου περιστατικού όπως έκχυση μέσα στο όργανο BD Viper LT ή μόλυνση DNA που δεν μπορεί να αφαιρεθεί με καθαρισμό, επικοινωνήστε με το Τμήμα Τεχνικής Εξυπηρέτησης και Υποστήριξης της BD. 3

4 ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Ενδοτραχηλικά δείγματα που ενδέχεται να εξετάζονται με την BD Onclarity HPV Assay περιλαμβάνουν το BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, το BD SurePath Preservative Fluid (με κλάσμα που αφαιρείται πριν ή μετά από την επεξεργασία με την εξέταση Pap BD SurePath) και το PreservCyt Solution (με κλάσμα που αφαιρείται πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση Pap ThinPrep). Για αποστολές στις Η.Π.Α. και διεθνώς, τα δείγματα θα πρέπει να επισημαίνονται σύμφωνα με τους ισχύοντες πολιτειακούς, ομοσπονδιακούς και διεθνείς κανονισμούς που καλύπτουν τη μεταφορά κλινικών δειγμάτων και αιτιολογικών παραγόντων/ μολυσματικών ουσιών. Κατά τη μεταφορά θα πρέπει να τηρούνται οι συνθήκες χρόνου και θερμοκρασίας για φύλαξη. ΣΥΛΛΟΓΉ ΔΕΊΓΜΑΤΟΣ ΤΡΑΧΗΛΙΚΗΣ ΨΗΚΤΡΑΣ 1. Εισαγάγετε την τραχηλική ψήκτρα BD Onclarity HPV Cervical Brush στον ενδοτράχηλο, μέχρι να είναι εκτεθειμένες μόνο οι κατώτερες τρίχες στο στόμιο. Περιστρέψτε αργά από ¼ έως ½ της στροφής προς μία κατεύθυνση. Για να αποφύγετε τυχόν περιττή αιμορραγία, μην περιστρέφετε υπερβολικά την ψήκτρα. 2. Αφαιρέστε το πώμα από το σωληνάριο BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent και τοποθετήστε αμέσως την ψήκτρα στον πυθμένα του σωληναρίου. 3. Σπάστε προσεκτικά το στέλεχος στην εγκοπή. Αποφύγετε το πιτσίλισμα του περιεχομένου. 4. Πωματίστε πάλι ερμητικά το σωληνάριο. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ ΤΡΑΧΗΛΙΚΗΣ ΨΗΚΤΡΑΣ Τα δείγματα τραχηλικής ψήκτρας σε σωληνάρια αραιωτικού τραχηλικής ψήκτρας BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tubes πρέπει να αποθηκεύονται και να μεταφέρονται στο εργαστήριο ή/και στην τοποθεσία της εξέτασης εντός 30 ημερών από τη συλλογή αν διατηρούνται στους 2 30 C ή εντός 180 ημερών από τη συλλογή αν διατηρούνται κατεψυγμένα στους -20 C. Η φύλαξη και η μεταφορά των δειγμάτων δεν πρέπει να υπερβαίνει την ημερομηνία λήξης του σωληναρίου αραιωτικού τραχηλικής ψήκτρας. ΣΥΛΛΟΓΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ LBC Τα δείγματα BD SurePath ή PreservCyt πρέπει να συλλέγονται με ενδοτραχηλικό εργαλείο τύπου σκούπας ή με συνδυασμό ψήκτρας/σπάτουλας, όπως περιγράφεται στο ένθετο προϊόντος BD SurePath ή PreservCyt. Μόλις συλλεχθούν, τα δείγματα BD SurePath ή PreservCyt μπορούν να αποθηκευτούν και να μεταφερθούν στα αρχικά τους φιαλίδια για έως και 30 ημέρες στους 2 30 C, για έως και 180 ημέρες στους 2 8 C ή για έως 180 ημέρες εάν διατηρούνται κατεψυγμένα στους -20 C πριν μεταφερθούν στα σωληνάρια αραιωτικού δειγμάτων BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent tubes. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ LBC Μεταφορά δειγμάτων LBC σε σωληνάρια αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC Πριν ή κατά την αφαίρεση κλάσματος για επεξεργασία είτε για την εξέταση BD SurePath είτε για την εξέταση ThinPrep. Ένα κλάσμα 0,5 ml είτε του δείγματος BD SurePath είτε του PreservCyt μεταφέρεται από το αρχικό φιαλίδιο στο σωληνάριο αραιωτικού δειγμάτων BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent tube πριν ή μετά από την επεξεργασία είτε για την εξέταση BD SurePath είτε για την εξέταση ThinPrep Pap. Να φοράτε γάντια κατά το χειρισμό του σωληναρίου αραιωτικού δείγματος BD Onclarity HPV LBC και το φιαλίδιο δείγματος BD SurePath ή PreservCyt. Εάν τα γάντια έρθουν σε επαφή με το δείγμα, αλλάξτε τα αμέσως ώστε να αποτρέψετε τυχόν επιμόλυνση άλλων δειγμάτων. Χειροκίνητη μεταφορά δειγμάτων BD SurePath πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση BD SurePath ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ανατρέξτε στο ένθετο του προϊόντος της συσκευής επεξεργασίας BD PrepStain Slide Processor (αντικειμενοφόρος πλάκα) ή του προϊόντος BD Totalys SlidePrep για οδηγίες σχετικά με την αφαίρεση ενός κλάσματος από το φιαλίδιο δείγματος BD SurePath πριν τη διεξαγωγή της εξέτασης Pap υγρής φάσης BD SurePath. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για την επεξεργασία, να χειρίζεστε ένα δείγμα κάθε φορά. 1. Σημάνετε ένα σωληνάριο αραιωτικού HPV LBC BD Onclarity με πληροφορίες ταυτοποίησης του ασθενούς. 2. Αφαιρέστε το πώμα από το σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC. 3. Για να διασφαλίσετε ότι το μίγμα θα είναι ομοιογενές, υποβάλετε το φιαλίδιο δείγματος BD SurePath σε περιδίνηση για δευτερόλεπτα. 4. Μεταφέρετε γρήγορα 0,5 ml από το φιαλίδιο δείγματος χρησιμοποιώντας ένα ρύγχος στεγανό στα αερολύματα στο σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC μέσα σε ένα λεπτό από την περιδίνηση. 5. Απορρίψτε το ρύγχος πιπέτας. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για κάθε δείγμα πρέπει να χρησιμοποιείται ξεχωριστό ρύγχος πιπέτας. 6. Σφίξτε καλά το πώμα στο σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC. 7. Αναστρέψτε το σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC 3 4 φορές για να διασφαλίσετε ότι το δείγμα και το αραιωτικό έχουν αναμιχθεί καλά. Αυτόματη μεταφορά δειγμάτων BD SurePath με χρήση της συσκευής πολλαπλής επεξεργασίας BD Totalys MultiProcessor, πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση BD SurePath 1. Ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο χρήσης της συσκευής πολλαπλής επεξεργασίας BD Totalys MultiProcessor για οδηγίες σχετικά με την αφαίρεση κλάσματος από το φιαλίδιο συλλογής BD SurePath Collection Vial. 2. Ανατρέξτε στο ένθετο προϊόντος του σωληναρίου αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC Diluent tube για οδηγίες σχετικά με την τοποθέτηση του σωληναρίου αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC Diluent tube στη συσκευή πολλαπλής επεξεργασίας για αυτόματη μεταφορά κλασμάτων. 4

5 Χειροκίνητη μεταφορά δειγμάτων PreservCyt πριν ή μετά από την επεξεργασία για την εξέταση ThinPrep Pap ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ανατρέξτε στο παράρτημα του εγχειριδίου χρήσης του συστήματος ThinPrep 2000/3000 για οδηγίες σχετικά με την αφαίρεση ενός κλάσματος από το φιαλίδιο δείγματος PreservCyt πριν από τη διεξαγωγή της εξέτασης ThinPrep. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για την επεξεργασία, να χειρίζεστε ένα δείγμα κάθε φορά. 1. Σημάνετε ένα σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC με πληροφορίες ταυτοποίησης του ασθενούς. 2. Αφαιρέστε το πώμα από το σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC. 3. Για να διασφαλίσετε ότι το μίγμα θα είναι ομοιογενές, υποβάλετε το φιαλίδιο δείγματος PreservCyt σε περιδίνηση με υψηλή ταχύτητα για 8 12 δευτερόλεπτα. 4. Μεταφέρετε αμέσως 0,5 ml από το φιαλίδιο δείγματος χρησιμοποιώντας ένα ρύγχος στεγανό στα αερολύματα στο σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC. 5. Απορρίψτε το ρύγχος πιπέτας. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για κάθε δείγμα πρέπει να χρησιμοποιείται ξεχωριστό ρύγχος πιπέτας. 6. Σφίξτε καλά το πώμα στο σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC. 7. Αναστρέψτε το σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC 3 4 φορές για να διασφαλίσετε ότι το δείγμα και το αραιωτικό έχουν αναμιχθεί καλά. Φύλαξη και μεταφορά δειγμάτων που μεταφέρθηκαν στα σωληνάρια αραιωτικού BD HPV LBC. Μετά από τη μεταφορά σε σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC Diluent tube, το αραιωμένο δείγμα μπορεί να αποθηκευτεί στους 2 30 C για έως και 15 ημέρες ή για έως και 90 ημέρες όταν αποθηκευτεί στους -20 C. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΓΙΑ ΟΛΑ ΤΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ: ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Εάν τα δείγματα έχουν καταψυχθεί, βεβαιωθείτε ότι έχουν αποψυχθεί πλήρως σε θερμοκρασία δωματίου και ότι έχουν αναμιχθεί μέσω αναστροφής πριν συνεχίσετε. 1. Χρησιμοποιώντας την Tube Layout Report (Αναφορά διάταξης σωληναρίου), τοποθετήστε τα δείγματα στο BD Viper LT Specimen Rack (Στατώ δειγμάτων) και κλειδώστε τα. 2. Τα δείγματα είναι έτοιμα να προθερμανθούν. 3. Αλλάξτε γάντια πριν προχωρήσετε για να αποφύγετε τη μόλυνση. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΠΟΙΟΤΙΚΟΥ ΕΛΕΓΧΟΥ 1. Αφαιρέστε το πώμα ενός αρνητικού προτύπου ελέγχου BD Onclarity HPV Negative Control και ενός σωληναρίου BD Onclarity HPV LBC Diluent. 2. Εκχύστε ολόκληρο το περιεχόμενο του σωληναρίου BD Onclarity HPV LBC Diluent στο αρνητικό πρότυπο ελέγχου BD Onclarity HPV Negative Control. 3. Τοποθετήστε ξανά το πώμα στο επανυδατωμένο αρνητικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity. Τοποθετήστε ξανά το πώμα και απορρίψτε το άδειο σωληνάριο BD Onclarity HPV LBC Diluent. 4. Αφαιρέστε το πώμα ενός θετικού προτύπου ελέγχου BD Onclarity HPV Positive Control και ενός σωληναρίου BD Onclarity HPV LBC Diluent. 5. Εκχύστε ολόκληρο το περιεχόμενο του σωληναρίου BD Onclarity HPV LBC Diluent στο θετικό πρότυπο ελέγχου BD Onclarity HPV Positive Control. 6. Τοποθετήστε ξανά το πώμα στο επανυδατωμένο BD Onclarity HPV Positive Control. Τοποθετήστε ξανά το πώμα και απορρίψτε το άδειο σωληνάριο BD Onclarity HPV LBC Diluent. 7. Χρησιμοποιώντας την Tube Layout Report (Αναφορά διάταξης σωληναρίου), τοποθετήστε τον επανυδατωμένο αρνητικό πρότυπο ελέγχου BD Onclarity HPV Negative Control στην κατάλληλη θέση στο BD Viper LT Specimen Rack. 8. Χρησιμοποιώντας την αναφορά διάταξης σωληναρίου, τοποθετήστε το επανυδατωμένο θετικό πρότυπο ελέγχου BD Onclarity HPV Positive Control στην κατάλληλη θέση στο BD Onclarity LT Specimen Rack. 9. Τα πρότυπα ελέγχου είναι έτοιμα να προθερμανθούν μαζί με τα δείγματα. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα πρότυπα ελέγχου πρέπει να προθερμαίνονται εντός 24 ωρών από την ενυδάτωση. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΠΡΟΘΕΡΜΑΝΣΗΣ ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η διαδικασία προθέρμανσης πρέπει να εφαρμοστεί σε όλα τα δείγματα για να διασφαλίσει ότι η θεμελιώδης ουσία των δειγμάτων είναι ομογενοποιημένη πριν φορτωθούν στο σύστημα BD Viper LT. Η αποτυχία προθέρμανσης των δειγμάτων ενδέχεται να έχει αντίξοη επίδραση στην απόδοση της BD Onclarity HPV Assay ή/και του συστήματος BD Viper LT. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα κατεψυγμένα ή παγωμένα δείγματα πρέπει να αποψύχονται πλήρως σε θερμοκρασία δωματίου πριν από την προθέρμανση. 1. Εισαγάγετε το BD Viper LT Specimen Rack στον BD Pre-warm Heater και επιλέξτε το πρωτόκολλο προθέρμανσης της BD Onclarity HPV Assay στο όργανο BD Viper LT. 2. Ο BD Pre-warm Heater θα προθερμάνει αυτόματα τα δείγματα και τα πρότυπα ελέγχου σύμφωνα με το πρωτόκολλο προθέρμανσης της BD Onclarity HPV Assay. 3. Αφού ολοκληρωθεί το πρωτόκολλο προθέρμανσης της BD Onclarity HPV Assay, αφαιρέστε το στατώ από τον θερμαντήρα και φορτώστε στο όργανο BD Viper LT. 4. Ανατρέξτε στη διαδικασία της εξέτασης για δείγματα εξέτασης και προτύπων ελέγχου. 5

6 5. Μετά από την προθέρμανση, τα δείγματα είναι δυνατό να αποθηκευτούν για έως και 7 ημέρες στους 2 30 C ή για έως και 180 ημέρες στους -20 C χωρίς πρόσθετη προθέρμανση πριν από την εξέταση στο σύστημα BD Viper LT. 6. Μετά από την προθέρμανση, τα πρότυπα ελέγχου είναι δυνατό να αποθηκευτούν για έως και 24 ώρες στους 2 30 C χωρίς πρόσθετη προθέρμανση πριν από την εξέταση στο σύστημα BD Viper LT. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος BD Viper LT για ειδικές οδηγίες σχετικά με το χειρισμό και συντήρηση των εξαρτημάτων του συστήματος. Οι ιδανικές περιβαλλοντικές συνθήκες για την ανάλυση HPV ορίζονται στους C με σχετική υγρασία 20 85%. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ Ο ποιοτικός έλεγχος πρέπει να εκτελείται σύμφωνα με τους ισχύοντες τοπικούς, πολιτειακούς ή/και ομοσπονδιακούς κανονισμούς ή σύμφωνα με τις απαιτήσεις πιστοποίησης και τις πρότυπες διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου του εργαστηρίου σας. Συνιστάται ο χρήστης να ανατρέχει στις σχετικές κατευθυντήριες οδηγίες του CLSI και στους κανονισμούς του CLIA για τις κατάλληλες πρακτικές ποιοτικού ελέγχου. Το σετ προτύπων ελέγχου για την BD Onclarity HPV Assay διατίθεται χωριστά. Σε κάθε εκτέλεση ανάλυσης και για κάθε νέο αριθμό παρτίδας κιτ αντιδραστηρίων πρέπει να περιλαμβάνεται ένα θετικό και ένα αρνητικό πρότυπο ελέγχου. Τα πρότυπα ελέγχου πρέπει να τοποθετούνται σύμφωνα με το εγχειρίδιο χρήσης του οργάνου BD Viper LT. Το θετικό πρότυπο ελέγχου HPV παρακολουθεί μόνο σημαντική ανεπάρκεια του αντιδραστηρίου. Το αρνητικό πρότυπο ελέγχου HPV παρακολουθεί τη μόλυνση του αντιδραστηρίου ή/και του περιβάλλοντος. Τα πρόσθετα πρότυπα ελέγχου ενδέχεται να εξετάζονται σύμφωνα με τις οδηγίες ή τις απαιτήσεις των τοπικών, κρατικών ή και ομοσπονδιακών κανονισμών ή οργανισμών πιστοποίησης. Γενικές πληροφορίες ποιοτικού ελέγχου για το σύστημα BD Viper LT: Η τοποθεσία των σωληναρίων PCR εμφανίζεται σε χρωματικά κωδικοποιημένη οθόνη διάταξης τρυβλίων στην οθόνη LCD. Το σύμβολο συν (+) εντός του σωληναρίου υποδεικνύει το θετικό δείγμα ποιοτικού ελέγχου. Το σύμβολο πλην (-) εντός του σωληναρίου υποδεικνύει το αρνητικό δείγμα ποιοτικού ελέγχου. Ένα ζεύγος ποιοτικού ελέγχου πρέπει να καταχωριστεί για κάθε αριθμό παρτίδας αντιδραστηρίου. Αν τα ζεύγη ποιοτικού ελέγχου δεν έχουν καταχωριστεί σωστά, ένα πλαίσιο μηνύματος εμφανίζεται που αποτρέπει την αποθήκευση του στατώ και τη συνέχεια της εκτέλεσης μέχρι την ολοκλήρωση. Πρόσθετα (προαιρετικά) σωληνάρια ποιοτικού ελέγχου είναι δυνατό να καταχωριστούν. Αυτά τα σωληνάρια εξετάζονται ως τυπικά δείγματα και δεν επηρεάζουν την κατάσταση επιτυχίας/αποτυχίας της εκτέλεσης. Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος BD Viper LT. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Πρέπει να ενυδατώνετε τα BD Onclarity HPV Controls (Πρότυπα ελέγχου) χειροκίνητα πριν από τη φόρτωσή τους στο BD Viper LT Specimen Rack. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων ποιοτικού ελέγχου: Τα θετικά και αρνητικά πρότυπα ελέγχου BD Onclarity HPV Positive Control και BD Onclarity HPV Negative Control πρέπει να εξετάζονται ως θετικά και αρνητικά, αντίστοιχα, προκειμένου να ληφθούν τα αποτελέσματα του ασθενούς. Εάν οι μάρτυρες δεν έχουν την αναμενόμενη απόδοση, η ανάλυση θεωρείται άκυρη και το όργανο δεν αναφέρει τα αποτελέσματα του ασθενούς. Εάν κάποιο από τα πρότυπα ελέγχου δεν παρέχει τα αναμενόμενα αποτελέσματα, επαναλάβετε ολόκληρη την ανάλυση χρησιμοποιώντας νέο σετ προτύπων ελέγχου, νέα σωληνάρια εκχύλισης, νέο δοχείο εκχύλισης αντιδραστηρίου και νέα σωληνάρια PCR. Εάν το πρόβλημα δεν επιλυθεί, επικοινωνήστε με το Τμήμα Τεχνικής Εξυπηρέτησης και Υποστήριξης της BD για περισσότερες πληροφορίες. Πίνακας 1: Ερμηνεία των αποτελεσμάτων ποιοτικού ελέγχου Τύπος προτύπου ελέγχου Σύμβολο Tube Result Report (Αναφορά αποτελεσμάτων σωληναρίου) Τάση QC (ποιοτικού ελέγχου) Θετικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity OK Επιτυχία QC Θετικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity Θετικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity Θετικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity Αποτυχία QC Αποτυχία QC Αποτυχία QC Αρνητικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity OK Επιτυχία QC Αρνητικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity Αρνητικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity Αρνητικό πρότυπο ελέγχου HPV BD Onclarity Αποτυχία QC Αποτυχία QC Αποτυχία QC Ανατρέξτε στην ερμηνεία των αποτελεσμάτων εξέτασης για περιγραφή των συμβόλων Tube Result Report (Αναφορά αποτελεσμάτων σωληναρίου). 6

7 ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Η BD Onclarity HPV Assay χρησιμοποιεί αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο για να ανιχνεύσει την παρουσία του ιού ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) σε κλινικά δείγματα. Το σύνολο των υπολογισμών εκτελείται αυτόματα από το λογισμικό του BD Viper LT. Η παρουσία ή η απουσία κλινικά κατάλληλου DNA HPV προσδιορίζεται από τον κύκλο PCR (Ct) στον οποίο το σήμα περνάει ένα προκαθορισμένο κατώφλι. H ανάλυση θα εκχυλίσει, θα ενισχύσει και θα ανιχνεύσει ένα τμήμα του ανθρώπινου γονιδίου β-σφαιρίνης ως εσωτερικό πρότυπο ελέγχου για την αξιολόγηση της επεξεργασίας, της εκχύλισης και της ενίσχυσης για να ανιχνεύσει την παρουσία αναστολέων PCR. Αν το σήμα για τον συγκεκριμένο HPV είναι μεγαλύτερο από το κατώφλι του κύκλου, το εσωτερικό πρότυπο ελέγχου χρησιμοποιείται από τον αλγόριθμο για την ερμηνεία του αποτελέσματος. Αν το σήμα για τον συγκεκριμένο HPV είναι μικρότερο από ή ίσο με το κατώφλι του κύκλου, το εσωτερικό πρότυπο ελέγχου αγνοείται από τον αλγόριθμο για την ερμηνεία του αποτελέσματος. Για δείγματα HPV, ένα αποτέλεσμα «HR» (ο συνδυασμός όλων των γονοτύπων) εμφανίζεται στην αναφορά αποτελέσματος σωληναρίου. Ένα θετικό σύμβολο σε αυτή τη στήλη υποδεικνύει έναν ή περισσότερους γονοτύπους που η ανάλυση HPV είναι σε θέση να ανιχνεύσει έχει θετικό αποτέλεσμα. Συγκεκριμένοι γονότυποι και συνδυασμένοι γονότυποι εμφανίζονται στις στήλες. Αν τα αποτελέσματα ενός γονοτύπου έχουν αγοραστεί, αυτά τα αποτελέσματα αναφέρονται όπως εξηγείται παρακάτω. Αν τα αποτελέσματα οποιουδήποτε γονοτύπου δεν έχουν διαμορφωθεί για αυτόματη αγορά, αυτά τα αποτελέσματα καλύπτονται από ένα εικονίδιο «κλειδί». Το όργανο μπορεί να διαμορφωθεί για την αγορά / αναφορά συγκεκριμένων γονοτύπων όταν η εκτέλεση ολοκληρωθεί. Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος BD Viper LT για οδηγίες σχετικά με την έγκριση αυτόματης αναφοράς γονοτύπων. Εάν τα αποτελέσματα του προτύπου ελέγχου δεν είναι τα αναμενόμενα, τα αποτελέσματα των ασθενών δεν αναφέρονται. Δείτε την ενότητα ποιοτικού ελέγχου για τις αναμενόμενες τιμές ελέγχου. Τα αναφερόμενα αποτελέσματα ορίζονται ως ακολούθως. Πίνακας 2: Ερμηνεία αποτελεσμάτων εξέτασης HPV γονοτύπου HPV υψηλού κινδύνου για την ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Αποτέλεσμα HPV υψηλού κινδύνου Αξιολόγηση Αποτέλεσμα HR Θετική για τύπους υψηλού κινδύνου HPV HR HPV Θετικό HR Αρνητική για τύπους υψηλού κινδύνου HPV HR HPV Αρνητικό Αν υπάρχει DNA HPV, δεν είναι ανιχνεύσιμο Αν υπάρχει DNA HPV, δεν είναι ανιχνεύσιμο Αν υπάρχει DNA HPV, δεν είναι ανιχνεύσιμο Αν υπάρχει DNA HPV, δεν είναι ανιχνεύσιμο Αποτυχία εσωτερικού προτύπου ελέγχου Αποτυχία μεταφοράς εκχύλισης Αποτυχία στάθμης υγρών Σφάλμα 7

8 Πίνακας 3: Ερμηνεία αποτελεσμάτων εξέτασης συγκεκριμένου γονοτύπου HPV για την ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Αποτέλεσμα γονοτύπου HPV Αξιολόγηση Αποτέλεσμα 16 Θετική για τύπο 16 HPV Θετικό για τύπο 16 HPV 16 Αρνητική για τύπο 16 HPV Αρνητικό για τύπο 16 HPV 18 Θετική για τύπο 18 HPV Θετικό για τύπο 18 HPV 18 Αρνητική για τύπο 18 HPV Αρνητικό για τύπο 18 HPV 45 Θετική για τύπο 45 HPV Θετικό για τύπο 45 HPV 45 Αρνητική για τύπο 45 HPV Αρνητικό για τύπο 45 HPV P1 Θετική για τύπο 33 ή/και 58 HPV Θετικό για τύπο 33 ή/και 58 HPV P1 Αρνητική για τύπο 33 ή/και 58 HPV Αρνητικό για τύπο 33 ή/και 58 HPV 31 Θετική για τύπο 31 HPV Θετικό για τύπο 31 HPV 31 Αρνητική για τύπο 31 HPV Αρνητικό για τύπο 31 HPV P2 Θετική για τύπο 56, 59 ή/και 66 HPV Θετικό για τύπο 56, 59 ή/και 66 HPV P2 Αρνητική για τύπο 56, 59 ή/και 66 HPV Αρνητικό για τύπο 56, 59 ή/και 66 HPV 51 Θετική για τύπο 51 HPV Θετικό για τύπο 51 HPV 51 Αρνητική για τύπο 51 HPV Αρνητικό για τύπο 51 HPV 52 Θετική για τύπο 52 HPV Θετικό για τύπο 52 HPV 52 Αρνητική για τύπο 52 HPV Αρνητικό για τύπο 52 HPV P3 Θετική για τύπο 35, 39 ή/και 68 HPV Θετικό για τύπο 35, 39 ή/και 68 HPV P3 Αρνητική για τύπο 35, 39 ή/και 68 HPV Αρνητικό για τύπο 35, 39 ή/και 68 HPV Αποτέλεσμα γονοτύπου HPV είναι διαθέσιμη για αγορά Αποτέλεσμα γονοτύπου HPV δεν είναι διαθέσιμη για αγορά 8 Αποτέλεσμα γονοτύπου κλειδώνεται Αρνητικό αποτέλεσμα HPV, αποτυχία εσωτερικού προτύπου ελέγχου, αποτυχία στάθμης υγρών ή αποτυχία μεταφοράς εκχύλισης Παρακολούθηση για την παρουσία μόλυνσης DNA Θα πρέπει να εκτελείται, σε μηνιαία τουλάχιστον βάση, η παρακάτω διαδικασία της εξέτασης με σκοπό την παρακολούθηση του χώρου εργασίας και των επιφανειών του εξοπλισμού για την παρουσία μόλυνσης DNA. Η περιβαλλοντική παρακολούθηση είναι απαραίτητη για την ανίχνευση μόλυνσης πριν αυτή εξελιχθεί σε πρόβλημα. 1. Για κάθε περιοχή προς εξέταση, χρησιμοποιήστε έναν καθαρό στυλεό συλλογής από το κιτ συλλογής και ΕΝ ΞΗΡΩ ΜΕΤΑΦΟΡΑΣ ενδοτραχηλικού δείγματος για ανάλυση ενισχυμένου DNA για Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) του συστήματος BD ProbeTec. 2. Ρίξτε λίγο ύδωρ βαθμού μοριακής βιολογίας χωρίς νουκλεάση σε έναν μικρό καθαρό περιέκτη. 3. Εμβαπτίστε το στυλεό στο ύδωρ βαθμού μοριακής βιολογίας χωρίς νουκλεάση και σκουπίστε τον πρώτο χώρο με μια μεγάλη σαρωτική κίνηση. 4. Αφαιρέστε το πώμα από το σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC και εισαγάγετε το στυλεό στο αραιωτικό. Αναμείξτε περιστρέφοντας το στυλεό μέσα στο αραιωτικό BD Onclarity HPV Diluent για 5 10 δευτερόλεπτα. 5. Εκπιέστε το στυλεό κατά μήκος του εσωτερικού τμήματος του σωληναρίου ώστε να απελευθερωθεί το υγρό και να κατευθυνθεί στο κάτω μέρος του σωληναρίου. 6. Αφαιρέστε το στυλεό προσεκτικά από το σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC για να αποφύγετε το πιτσίλισμα. Απορρίψτε το στυλεό. 7. Επανατοποθετήστε το πώμα σφικτά στο σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC με το μαύρο διατρήσιμο πώμα. 8. Επαναλάβετε για κάθε επιθυμητή επιφάνεια. 9. Αφού συλλέξετε και πιέσετε όλους τους στυλεούς, επεξεργαστείτε τους σύμφωνα με τη διαδικασία προθέρμανσης και στη συνέχεια ακολουθήστε τη διαδικασία της εξέτασης.

9 Συμβουλευτείτε το εγχειρίδιο χρήσης του συστήματος BD Viper LT για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις περιβαλλοντικές διαδικασίες παρακολούθησης και καθαρισμού. Εάν ένα συμβάν επιμόλυνσης δεν επιλυθεί, επικοινωνήστε με το Τμήμα Τεχνικής Εξυπηρέτησης και Υποστήριξης της BD για περισσότερες πληροφορίες. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ 1. Για τη βέλτιστη απόδοση της εξέτασης απαιτείται η κατάλληλη συλλογή και χειρισμός των δειγμάτων. Ανατρέξτε στις ενότητες συλλογής και μεταφοράς δειγμάτων που περιλαμβάνονται σε αυτό το ένθετο. 2. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα εξέτασης δεν αποκλείει την πιθανότητα λοίμωξης, καθώς τα αποτελέσματα εξετάσεων μπορεί να επηρεαστούν από ακατάλληλη συλλογή δείγματος, τεχνικό σφάλμα, ανάμειξη δειγμάτων ή τον αριθμό οργανισμών στο δείγμα, που μπορεί να είναι μικρότερος από τον αριθμό ευαισθησίας της εξέτασης. 3. Η ανάλυση BD Onclarity HPV Assay παρέχει ποιοτικά αποτελέσματα. 4. Η χρήση της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay περιορίζεται σε ειδικά εκπαιδευμένο προσωπικό στη διαδικασία της ανάλυσης και του συστήματος BD Viper LT. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ Τα δείγματα τραχηλικής ψήκτρας BD Onclarity HPV Cervical Brush, τα δείγματα BD SurePath ή/και τα δείγματα PreservCyt, συλλέχθηκαν από 836 γυναίκες συμβατές με το πρωτόκολλο, οι οποίες είχαν παραπεμφθεί για παρακολούθηση λόγω παράτυπης εξέτασης Pap ή λοίμωξης HPV ή γυναίκες που μετέβαιναν σε κλινική για επίσκεψη ρουτίνας σε δύο γεωγραφικά διαφορετικές κλινικές τοποθεσίες της Ευρώπης. Δύο δείγματα συλλέχθηκαν από κάθε άτομο που συμμετείχε με την εξής σειρά: ένα δείγμα BD SurePath (Τοποθεσία Α) ή δείγμα PreservCyt (Τοποθεσία Β) και ένα δείγμα τραχηλικής ψήκτρας BD Onclarity HPV (που μεταφέρθηκε σε σωληνάριο BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent). Για κάθε φιαλίδιο κυτταρολογίας που συλλέγεται, 0,5 ml μοιράστηκαν σε σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC. Κυτταρολογία, αποτελέσματα HPV DNA (digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test) και αποτελέσματα Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (RLA) ήταν διαθέσιμα για τα περισσότερα από τα δείγματα. Τα ιστολογικά αποτελέσματα ήταν διαθέσιμα για τα περισσότερα από τα άτομα που μετέβησαν κλινική υψηλού κινδύνου. Κάθε τοποθεσία δήλωσε υπολείμματα δειγμάτων (BD SurePath ή PreservCyt) με σχετικά αποτελέσματα κυτταρολογίας, αποτελέσματα DNA HPV (digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test), αποτελέσματα Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (RLA), και όπου ισχύει, ιστολογικά αποτελέσματα. Για κάθε δηλωμένο δείγμα, 0,5 ml μοιράστηκαν σε σωληνάριο αραιωτικού BD Onclarity HPV LBC. Δηλώθηκαν 510 συμβατά ανασκοπικά δείγματα με ιστολογικά αποτελέσματα διαθέσιμα για 234 γυναίκες. Όλα τα δείγματα εξετάστηκαν στο σύστημα BD Viper LT σύμφωνα με το ένθετο συσκευασίας και το εγχειρίδιο χρήσης της ανάλυσης. Για κάθε τύπο μέσων, η κλινική ευαισθησία και ειδικότητα για την ανίχνευση ασθένειας, η οποία ορίζεται ως (1) τραχηλική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (CIN2, Cervical Intraepithelial Neoplasia) ή σημαντικότερο ιστολογικό αποτέλεσμα ή (2) τραχηλική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (CIN3, Cervical Intraepithelial Neoplasia) ή σημαντικότερο ιστολογικό αποτέλεσμα, υπολογίστηκε. Η τελική ανάλυση δεδομένων περιλαμβάνει αποτελέσματα ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay από 472 δείγματα BD SurePath, 361 δείγματα PreservCyt και σύνολο 515 δειγμάτων τραχηλικής ψήκτρας HPV BD Onclarity: 247 δείγματα τραχηλικής ψήκτρας HPV BD Onclarity (σε αραιωτικό BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) για τοποθεσία A και 268 δείγματα τραχηλικής ψήκτρας HPV BD Onclarity (σε αραιωτικό τραχηλικής ψήκτρας BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) για τοποθεσία B. Οι εκτιμήσεις της απόδοσης για την ανίχνευση τραχηλικής νόσου υψηλού βαθμού για την ανάλυση BD Onclarity HPV Assay και την ανάλυση hc2 παρουσιάζονται στους Πίνακες 4 και 5 για τα μέσα BD SurePath, τους Πίνακες 8 και 9 για τα μέσα PreservCyt, καθώς και τους πίνακες 12 και 13 για τα δείγματα τραχηλικής ψήκτρας HPV BD Onclarity. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay συγκρίθηκαν επίσης με τα αποτελέσματα DNA HPV από την εξέταση digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test και Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (σύνθετη συσκευή σύγκρισης). Ένα θετικό αποτέλεσμα από αμφότερες τις αναλύσεις (υψηλού κινδύνου) hc2 και RLA ορίζεται ως θετικό σύνθετης συσκευής σύγκρισης (υψηλού κινδύνου), ένα αρνητικό αποτέλεσμα από αμφότερες τις αναλύσεις hc2 και RLA (υψηλού κινδύνου) ορίζεται ως αρνητικό σύνθετης συσκευής σύγκρισης, ενώ όταν δύο αναλύσεις διαφωνούν (ή τα αποτελέσματα δεν ήταν διαθέσιμα για αμφότερες τις εξετάσεις), το αποτέλεσμα της σύνθετης συσκευής σύγκρισης ορίζεται ως ανεπίλυτο. Θετικό, αρνητικό και συνολικά ποσοστά συμφωνίας υπολογίστηκαν για κάθε τύπο μέσων ως προς τη σύνθετη συσκευή σύγκρισης. Η τελική ανάλυση δεδομένων περιλαμβάνει αποτελέσματα ανάλυσης HPV BD Onclarity και αποτελέσματα σύνθετης συσκευής σύγκρισης (ανεξάρτητα από την ιστολογική κατάσταση) από 670 δείγματα BD SurePath και 674 δείγματα PreservCyt. (Πίνακες 6 και 10) Ο απόλυτος κίνδυνος ασθένειας (CIN2+ και CIN3+) στον πληθυσμό της μελέτης για κάθε τύπο μέσων υπολογίστηκε για κάθε γονότυπο ή ομάδα γονοτύπων στην BD Onclarity HPV Assay. Οι απόλυτοι κίνδυνοι υπολογίζονται όταν ο γονότυπος (ή η ομάδα γονοτύπων) υπάρχει μόνος ή/και με την παρουσία άλλων γονοτύπων. Ένας πίνακας με τους απόλυτους κινδύνους εμφανίζεται για κάθε τύπο μέσων. Έκαστο εκ των μέσων συλλέχθηκε σε μία τοποθεσία. Ως εκ τούτου, διαφορές στα ποσοστά θετικότητας γονοτύπων και HPV λόγω της ποικιλομορφίας του πληθυσμού ενδέχεται να αναμένονται. (Πίνακες 7 και 11) 9

10 Κλινική απόδοση δειγμάτων BD SurePath Πίνακας 4: Απόδοση της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με BD SurePath Media (μέσα) σε σύγκριση με τα ιστολογικά αποτελέσματα (CIN2+) Ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Εκτίμηση Εμπιστοσύνης 95% Εκτίμηση Εξέταση DNA HPV hc2 Εμπιστοσύνης 95% Ευαισθησία 97,9% (190/194) (94,8%, 99,2%) 98,4% (190/193) (95,5%, 99,5%) Ειδικότητα 22,7% (63/278) (18,1%, 27,9%) 17,0% (47/277) (13,0%, 21,8%) Πίνακας 5: Απόδοση της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με BD SurePath Media σε σύγκριση με τα ιστολογικά αποτελέσματα (CIN3+) Ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Εκτίμηση Εμπιστοσύνης 95% Εκτίμηση Εξέταση DNA HPV hc2 Εμπιστοσύνης 95% Ευαισθησία 97,7% (126/129) (93,4%, 99,2%) 98,4% (126/128) (94,5%, 99,6%) Ειδικότητα 18,7% (64/343) (14,9%, 23,1%) 14,0% (48/342) (10,8%, 18,1%) Πίνακας 6: Απόδοση της ανάλυσης HPV BD Onclarity με BD SurePath Media σε σύγκριση με τη σύνθετη συσκευή σύγκρισης BD Onclarity HPV Assay Αποτέλεσμα σύνθετης συσκευής σύγκρισης Θετικό Αρνητικό Δεν επιλύθηκε* Σύνολο Θετική Αρνητική Σύνολο Θετικό ποσοστό συμφωνίας ( Εμπιστοσύνης 95%) 98,5% (97,1%, 99,2%) Αρνητικό ποσοστό συμφωνίας ( Εμπιστοσύνης 95%) 89,3% (78,5%, 95,0%) Συνολικό ποσοστό συμφωνίας ( Εμπιστοσύνης 95%) 97,7% (96,1%, 98,6%) * Τα αποτελέσματα hc2 και RLA δεν συμφωνούν ή τα αποτελέσματα δεν ήταν διαθέσιμα για αμφότερες τις εξετάσεις. Πίνακας 7: Απόλυτος κίνδυνος CIN2+ και CIN3+ για γονότυπους ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με BD SurePath Media Γονότυπος ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay HPV16 HPV18 HPV45 HPV33/58 HPV31 HPV56/59/66 HPV51 HPV52 HPV35/39/68 Λοίμωξη λόγω ενός ή περισσότερων γονοτύπων Απόλυτος κίνδυνος CIN2+ 63,9% (99/155) 50,0% (24/48) 46,7% (21/45) 49,4% (42/85) 64,2% (52/81) 25,5% (25/98) 41,7% (15/36) 35,1% (20/57) 36,0% (27/75) Εμπιστοσύνης 95% (56,1%, 71,0%) (36,4%, 63,6%) (32,9%, 60,9%) (39,0%, 59,8%) (53,3%, 73,8%) (17,9%, 35,0%) (27,1%, 57,8%) (24,0%, 48,1%) (26,1%, 47,3%) Λοίμωξη λόγω ενός μόνο γονοτύπου ή ομάδας γονοτύπων Απόλυτος κίνδυνος CIN2+ 64,9% (48/74) 50,0% (7/14) 23,5% (4/17) 47,1% (16/34) 72,7% (16/22) 0,0% (0/29) 25,0% (2/8) 33,3% (4/12) 33,3% (7/21) Εμπιστοσύνης 95% (53,5%, 74,8%) (26,8%, 73,2%) (9,6%, 47,3%) (31,5%, 63,3%) (51,8%, 86,8%) (0,0%, 11,7%) (7,1%, 59,1%) (13,8%, 60,9%) (17,2%, 54,6%) Λοίμωξη λόγω ενός ή περισσότερων γονοτύπων Απόλυτος κίνδυνος CIN3+ 43,9% (68/155) 43,8% (21/48) 31,1% (14/45) 31,8% (27/85) 40,7% (33/81) 13,3% (13/98) 25,0% (9/36) 19,3% (11/57) 17,3% (13/75) Εμπιστοσύνης 95% (36,3%, 51,7%) (30,7%, 57,7%) (19,5%, 45,7%) (22,8%, 42,3%) (30,7%, 51,6%) (7,9%, 21,4%) (13,8%, 41,1%) (11,1%, 31,3%) (10,4%, 27,4%) Λοίμωξη λόγω ενός μόνο γονοτύπου ή ομάδας γονοτύπων Απόλυτος κίνδυνος CIN3+ 47,3% (35/74) 42,9% (6/14) 17,6% (3/17) 23,5% (8/34) 50,0% (11/22) 0,0% (0/29) 12,5% (1/8) 16,7% (2/12) 19,0% (4/21) Εμπιστοσύνης 95% (36,3%, 58,5%) (21,4%, 67,4%) (6,2%, 41,0%) (12,4%, 40,0%) (30,7%, 69,3%) (0,0%, 11,7%) (2,2%, 47,1%) (4,7%, 44,8%) (7,7%, 40,0%) 10

11 Κλινική απόδοση δειγμάτων PreservCyt Πίνακας 8: Απόδοση της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με μέσα PreservCyt σε σύγκριση με τα ιστολογικά αποτελέσματα (CIN2+) Ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Εκτίμηση Εμπιστοσύνης 95% Εκτίμηση Εξέταση DNA HPV hc2 Εμπιστοσύνης 95% Ευαισθησία 94,7% (160/169) (90,2%, 97,2%) 97,0% (160/165) (93,1%, 98,7%) Ειδικότητα 50,5% (97/192) (43,5%, 57,5%) 40,8% (75/184) (33,9%, 48,0%) Πίνακας 9: Απόδοση της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με μέσα PreservCyt σε σύγκριση με τα ιστολογικά αποτελέσματα (CIN3+) Ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Εκτίμηση Εμπιστοσύνης 95% Εκτίμηση Εξέταση DNA HPV hc2 Εμπιστοσύνης 95% Ευαισθησία 94,4% (85/90) (87,6%, 97,6%) 97,7% (85/87) (92,0%, 99,4%) Ειδικότητα 37,3% (101/271) (31,7%, 43,2%) 29,8% (78/262) (24,6%, 35,6%) Πίνακας 10: Απόδοση της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με μέσα PreservCyt σε σύγκριση με τη σύνθεση συσκευή σύγκρισης Ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Αποτέλεσμα σύνθετης συσκευής σύγκρισης Θετικό Αρνητικό Δεν επιλύθηκε* Σύνολο Θετική Αρνητική Σύνολο Θετικό ποσοστό συμφωνίας ( Εμπιστοσύνης 95%) 96,1% (93,0%, 97,9%) Αρνητικό ποσοστό συμφωνίας ( Εμπιστοσύνης 95%) 98,7% (96,9%, 99,4%) Συνολικό ποσοστό συμφωνίας ( Εμπιστοσύνης 95%) 97,6% (96,1%, 98,5%) * Τα αποτελέσματα hc2 και RLA δεν συμφωνούν ή τα αποτελέσματα δεν ήταν διαθέσιμα για αμφότερες τις εξετάσεις. 11

12 Πίνακας 11: Απόλυτος κίνδυνος CIN2+ και CIN3+ για γονοτύπους ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με PreservCyt Media Γονότυπος ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay HPV 16 HPV 18 HPV 45 HPV 33/58 HPV 31 HPV 56/59/66 HPV 51 HPV 52 HPV 35/39/68 Λοίμωξη λόγω ενός ή περισσότερων γονοτύπων Απόλυτος κίνδυνος CIN2+ 77,1% (84/109) 50,0% (12/24) 50,0% (6/12) 70,0% (28/40) 67,7% (42/62) 34,0% (18/53) 48,0% (12/25) 73,9% (17/23) 38,5% (10/26) Εμπιστοσύνης 95% (68,3%, 84,0%) (31,4%, 68,6%) (25,4%, 74,6%) (54,6%, 81,9%) (55,4%, 78,0%) (22,7%, 47,4%) (30,0%, 66,5%) (53,5%, 87,5%) (22,4%, 57,5%) Λοίμωξη λόγω ενός μόνο γονοτύπου ή ομάδας γονοτύπων Απόλυτος κίνδυνος CIN2+ 81,4% (57/70) 45,5% (5/11) 25,0% (1/4) 75,0% (15/20) 71,0% (22/31) 11,1% (2/18) 27,3% (3/11) 85,7% (6/7) 40,0% (2/5) Εμπιστοσύνης 95% (70,8%, 88,8%) (21,3%, 72,0%) (4,6%, 69,9%) (53,1%, 88,8%) (53,4%, 83,9%) (3,1%, 32,8%) (9,7%, 56,6%) (48,7%, 97,4%) (11,8%, 76,9%) Λοίμωξη λόγω ενός ή περισσότερων γονοτύπων Απόλυτος κίνδυνος CIN3+ 44,0% (48/109) 29,2% (7/24) 16,7% (2/12) 35,0% (14/40) 30,6% (19/62) 9,4% (5/53) 16,0% (4/25) 26,1% (6/23) 15,4% (4/26) Εμπιστοσύνης 95% (35,1%, 53,4%) (14,9%, 49,2%) (4,7%, 44,8%) (22,1%, 50,5%) (20,6%, 43,0%) (4,1%, 20,3%) (6,4%, 34,7%) (12,5%, 46,5%) (6,1%, 33,5%) Λοίμωξη λόγω ενός μόνο γονοτύπου ή ομάδας γονοτύπων Απόλυτος κίνδυνος CIN3+ 50,0% (35/70) 18,2% (2/11) 0,0% (0/4) 50,0% (10/20) 41,9% (13/31) 0,0% (0/18) 18,2% (2/11) 42,9% (3/7) 20,0% (1/5) Εμπιστοσύνης 95% (38,6%, 61,4%) (5,1%, 47,7%) (0,0%, 49,0%) (29,9%, 70,1%) (26,4%, 59,2%) (0,0%, 17,6%) (5,1%, 47,7%) (15,8%, 75,0%) (3,6%, 62,4%) Κλινική απόδοση δειγμάτων τραχηλικής ψήκτρας HPV BD Onclarity Πίνακας 12: Απόδοση της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με την τραχηλική ψήκτρα HPV BD Onclarity σε σύγκριση με τα ιστολογικά αποτελέσματα (CIN2+) Κέντρο Ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Εξέταση DNA HPV hc2 Εκτίμηση Εμπιστοσύνης 95% Εκτίμηση Εμπιστοσύνης 95% A B Ευαισθησία 97,2% (104/107) (92,1%, 99,0%) 99,1% (106/107) (94,9%, 99,8%) Ειδικότητα 17,9% (25/140) (12,4%, 25,0%) 21,4% (30/140) (15,4%, 28,9%) Ευαισθησία 100,0% (121/121) (96,9%, 100,0%) 97,5% (116/119) (92,8%, 99,1%) Ειδικότητα 37,4% (55/147) (30,0%, 45,5%) 43,0% (61/142) (35,1%, 51,2%) Πίνακας 13: Απόδοση της ανάλυσης BD Onclarity HPV Assay με την τραχηλική ψήκτρα HPV BD Onclarity σε σύγκριση με τα ιστολογικά αποτελέσματα (CIN3+) Κέντρο A B Ανάλυση BD Onclarity HPV Assay Εξέταση DNA HPV hc2 Εκτίμηση Εμπιστοσύνης 95% Εκτίμηση Εμπιστοσύνης 95% Ευαισθησία 97,3% (72/74) (90,7%, 99,3%) 98,6% (73/74) (92,7%, 99,8%) Ειδικότητα 15,0% (26/173) (10,5%, 21,1%) 17,3% (30/173) (12,4%, 23,7%) Ευαισθησία 100,0% (60/60) (94,0%, 100,0%) 98,3% (57/58) (90,9%, 99,7%) Ειδικότητα 26,4% (55/208) (20,9%, 32,8%) 31,0% (63/203) (25,1%, 37,7%) Αναλυτικές μελέτες Αναλυτική Ευαισθησία στην κλινική τιμή κατωφλίου: Το όριο ανίχνευσης (LOD) στην κλινική τιμή αναφοράς HPV προσδιορίστηκε για την ανάλυση BD Onclarity HPV Assay με χρήση θετικών γραμμών κυττάρων HPV: SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) και MS751 (HPV 45) και κλωνοποιημένα πλασμίδια DNA που περιέχουν τις αλληλουχίες για τους παρακάτω γονοτύπους HPV: HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66 και 68 σε BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution και BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent που περιέχουν γραμμή κυττάρων αρνητική για HPV (C33A). Οι γραμμές κυττάρων εξετάστηκαν μεμονωμένα ενώ τα πλασμίδια HPV εξετάστηκαν συλλογικά σε τρεις ομάδες: 1) HPV 31, 33, 51, 52 και 59, 2) HPV 56, 58, 68 και 3) HPV 35 και 66. Ένα ελάχιστο σαράντα πέντε επαναλαμβανόμενων μετρήσεων για κάθε ένα από τα έξι στοχευμένα επίπεδα για τις γραμμές κυττάρων HPV και είκοσι επαναλαμβανόμενες μετρήσεις για κάθε ένα από τα έξι στοχευμένα επίπεδα για τα πλασμίδια HPV εξετάστηκαν σε τρεις παρτίδες αντιδραστηρίων κατ ελάχιστο και τρία συστήματα BD Viper LT κατ ελάχιστο. Το όριο ανίχνευσης, LOD, είναι το επίπεδο HPV DNA στο μη διαλυτό διάλυμα που έχει θετικά αποτελέσματα πάνω από την κλινική τιμή κατωφλίου τουλάχιστον στο 95% του χρόνου. Η μέγιστη τιμή LOD για κάθε έναν από τους γονοτύπους HPV και τα μέσα περιγράφεται στον Πίνακα