VRESelect 63751 Ένα επιλεκτικό και διαφορικό μέσο χρωμογόνου για την ποιοτική ανίχνευση της γαστρεντερικής αποικίας του ανθεκτικού στη βανκομυκίνη εντερόκοκκου Enterococcus faecium (VREfm) και του ανθεκτικού στη βανκομυκίνη εντερόκοκκου Enterococcus faecalis (VREfs). 2015/02 1. ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το VRESelect είναι ένα επιλεκτικό και διαφορικό μέσο χρωμογόνου για την ποιοτική ανίχνευση της γαστρεντερικής αποικίας του ανθεκτικού στη βανκομυκίνη εντερόκοκκου Enterococcus faecium (VREfm) και του ανθεκτικού στη βανκομυκίνη εντερόκοκκου Enterococcus faecalis (VREfs), το οποίο μπορεί να βοηθήσει στην πρόληψη και τον έλεγχο του VRE σε χώρους υγειονομικής περίθαλψης. Αυτή η εξέταση πραγματοποιείται βάσει πρωκτικού επιχρίσματος ή δείγματος κοπράνων από ασθενείς ή εργαζομένους σε υπηρεσίες υγειονομικής περίθαλψης για την ανίχνευση αποικιών VRE. 2. ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το VRESelect αποτελεί ένα επιλεκτικό μέσο για την ανίχνευση και την άμεση αναγνώριση των VRE. Ο επιλεκτικός χαρακτήρας αυτού του μέσου οφείλεται στην παρουσία ενός αντιμυκητιασικού/αντιβιοτικού μίγματος το οποίο αναστέλλει την ανάπτυξη της πλειοψηφίας των ενζύμων και των Gram-αρνητικών και Gram-θετικών βακτηρίων, με την εξαίρεση των Ανθεκτικών στη Βανκομυκίνη Εντερόκοκκων (VRE). Η ανίχνευση βασίζεται στο διαχωρισμό των χρωμογόνων υποστρωμάτων μέσω συγκεκριμένων ενζυματικών δράσεων του εντερόκοκκου Enterococcus faecium ο οποίος δημιουργεί ροζ αποικίες, και του εντερόκοκκου Enterococcus faecalis ο οποίος δημιουργεί μπλε αποικίες. Μετά από 24 έως 28 ώρες επώασης, οι ροζ αποικίες μπορούν να καταγραφούν ως VREfm. Οι μπλε αποικίες θα πρέπει να επιβεβαιώνονται μέσω μιας άμεσης δοκιμής καταλάσης. Οι αρνητικές σε καταλάση αποικίες μπορούν να καταγραφούν ως VREfs. Οι δοκιμές ευαισθησίας στη βανκομυκίνη μπορούν να εκτελεστούν άμεσα από το μέσο VRESelect. Οι εντερόκοκκοι Enterococcus gallinarum και Enterococcus casseliflavus, οι οποίοι είναι εγγενώς ανθεκτικοί στη βανκομυκίνη, όταν δεν αναστέλλονται, δεν μεταβολίζουν τα χρωμογόνα υποστρώματα και εμφανίζονται ως άχρωμες ή λευκές αποικίες. Οι ευαίσθητοι στη βανκομυκίνη εντερόκοκκοι αναστέλλονται. 3. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Το VRESelect αρ. καταλόγου 63751 περιέχει 20 πλάκες ανά συσκευασία. Σύνθεση μέσου κατά προσέγγιση (g/l): Πεπτόνη: 61,0 g Μίγμα αλάτων 16,0 g Άγαρ 15,0 g Αντιδραστήρια αντίθεσης 3,0 g Χρωμογόνα υποστρώματα 0,3 g Αντιμικροβιακά και αντιμυκητιασικά 0,1 g 4. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Μόνο για in vitro διαγνωστική χρήση. Ακολουθήστε την ασηπτική τεχνική και τηρήστε τις απαιτούμενες προφυλάξεις κατά των μικροβιολογικών κινδύνων καθ' όλη τη διάρκεια των διαδικασιών. Μετά τη χρήση, οι χρησιμοποιημένες πλάκες, οι συλλέκτες των δειγμάτων και άλλα δυνητικά μολυσμένα υλικά θα πρέπει να αποστειρώνονται ή να απορρίπτονται σε συμμόρφωση με τις ενδεδειγμένες διαδικασίες του εργαστηρίου. Στα κλινικά δείγματα ενδέχεται να εμφανιστούν παθογόνοι μικροοργανισμοί, συμπεριλαμβανομένων των ιών της ηπατίτιδας και του Ιού Ανοσοανεπάρκειας του Ανθρώπου. Κατά τον χειρισμό όλων των στοιχείων που επιμολύνονται με αίμα ή άλλα σωματικά υγρά θα πρέπει να τηρούνται οι γενικές προφυλάξεις και οι οδηγίες του εκάστοτε φορέα. Είναι απαραίτητη η προσεκτική ανάγνωση και η συμμόρφωση με τις οδηγίες. Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων των εξετάσεων θα πρέπει να πραγματοποιείται βάσει του ιστορικού του ασθενούς, της πηγής του δείγματος, της μορφολογίας της αποικίας και των αποτελεσμάτων τυχόν άλλων εξετάσεων που έχουν διεξαχθεί. Για συστάσεις αναφορικά με τους κινδύνους και τις προφυλάξεις που σχετίζονται με κάποια χημικά συστατικά αυτού του κιτ εξέτασης, ανατρέξτε στα εικονογραφήματα που αναφέρονται στις ετικέτες και στις πληροφορίες που παρέχονται στο τέλος των οδηγιών χρήσης. Το Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας διατίθεται στη διεύθυνση www.bio-rad.com. 1
5. ΟΔΗΓΙΕΣ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗΣ Φυλάσσετε τις πλάκες σε θερμοκρασία 2 έως 8 C και μακριά από το φως. Η παρατεταμένη έκθεση στο φως ενδέχεται να οδηγήσει σε αποχρωματισμό των οργανισμών ελέγχου ποιότητας ή των στελεχών των ασθενών. Φυλάσσετε τις πλάκες στην αρχική τους συσκευασία μέχρι να τις χρησιμοποιήσετε. Κλείνετε τη συσκευασία μετά από κάθε αφαίρεση πλάκας. Οι πλάκες πρέπει να χρησιμοποιούνται πριν από την ημερομηνία λήξης που υποδεικνύεται στην ετικέτα και αναγράφεται επάνω στην πλάκα. 6. ΑΛΛΟΙΩΣΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Μην χρησιμοποιείτε πλάκες εάν φέρουν ενδείξεις επιμόλυνσης, εάν έχουν ξεραθεί, εάν έχουν σπάσει ή εάν παρουσιάζουν οποιαδήποτε άλλη αλλοίωση. 7. ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΔΙΑΧΕΙΡΙΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Αυτή η συσκευή έχει αξιολογηθεί βάσει της χρήσης πρωκτικών επιχρισμάτων και δειγμάτων κοπράνων. Συνιστάται η χρήση εγκεκριμένων συσκευών μεταφοράς για τη συλλογή των εν λόγω δειγμάτων. Ακολουθήστε τις συνιστώμενες από τον κατασκευαστή διαδικασίες της συσκευής μεταφοράς. Για τη φύλαξη των δειγμάτων των ασθενών, ανατρέξτε στις τρέχουσες οδηγίες. 1 8. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά Πλάκες άγαρ VRESelect της Bio-Rad Απαιτούμενα υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά μέσα καλλιέργειας Οργανισμοί ελέγχου ποιότητας Άλλος εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται Διαδικασία εξέτασης Η επιφάνεια άγαρ του VRESelect θα πρέπει να είναι λεία και υγρή. Πριν από τον ενοφθαλμισμό, αφήστε το μέσο να ζεσταθεί σε θερμοκρασία δωματίου, ιδανικά μακριά από το φως. Κατά τη χρήση του μέσου ακολουθείτε τις ασηπτικές τεχνικές. Εάν τα πρωκτικά επιχρίσματα ή τα δείγματα κοπράνων δεν εξεταστούν άμεσα μετά τη λήψη τους, τοποθετήστε τα στη συντήρηση μέχρι την ώρα της εξέτασής τους. Ενοφθαλμισμός Είναι σημαντικό να χωρίσετε σε τομείς το δείγμα προκειμένου να δημιουργήσετε καλά απομονωμένες αποικίες. Χρησιμοποιήστε τη μέθοδο της δημιουργίας τεταρτημορίων μέσω ενός κρίκου ενοφθαλμισμού, ξεκινώντας από το αρχικό σημείο του ενοφθαλμισμού. Από πρωκτικά επιχρίσματα: Άμεσος ενοφθαλμισμός Ενοφθαλμίστε χωρίζοντας σε τομείς το δείγμα. Έμμεσος ενοφθαλμισμός Τοποθετήστε το επίχρισμα σε 0,5 ml στείρου φυσιολογικού ορού. Αναμίξτε με αναδευτήρα vortex για 20 δευτερόλεπτα. Ενοφθαλμίστε άμεσα. Χρησιμοποιώντας ένα βαμβακοφόρο στυλεό ή κρίκο ενοφθαλμισμού μίας χρήσης, μεταφέρετε περίπου 10-50 µl του αιωρήματος επάνω στο μέσο VRESelect και χωρίστε σε τομείς για απομόνωση. Από δείγματα κοπράνων: Έμμεσος ενοφθαλμισμός Τοποθετήστε ένα μέρος των κοπράνων σε στείρο φυσιολογικό ορό (περίπου 0,5g/mL). Αναμίξτε με αναδευτήρα vortex για 20 δευτερόλεπτα. Ενοφθαλμίστε άμεσα. Χρησιμοποιώντας ένα βαμβακοφόρο στυλεό ή κρίκο ενοφθαλμισμού μίας χρήσης, μεταφέρετε περίπου 10-50 µl του αιωρήματος επάνω στο μέσο VRESelect και χωρίστε σε τομείς για απομόνωση. Επώαση Επωάστε το ενοφθαλμισμένο VRESelect σε αντεστραμμένη θέση, αεροβίως για 24 έως 28 ώρες στους 35-37 C, προστατεύοντας την πλάκα από το φως. 2
9. ΕΡΜΗΝΕΙΑ Μετά από 24 έως 28 ώρες επώασης, οι ροζ αποικίες μπορούν να καταγραφούν ως ανθεκτικός στη βανκομυκίνη εντερόκοκκος Enterococcus faecium. Οι μπλε αποικίες θα πρέπει να επιβεβαιώνονται μέσω μιας άμεσης δοκιμής καταλάσης. Οι αρνητικές σε καταλάση αποικίες μπορούν να καταγραφούν ως ανθεκτικός στη βανκομυκίνη εντερόκοκκος Enterococcus faecalis. Επώαση 24/28 ώρες Ερμηνεία Συνιστώμενη ενέργεια Ροζ αποικίες VREfm Καταγραφή αποικιών VREfm Μπλε αποικίες Πιθανές αποικίες VREfs Εκτέλεση άμεσης δοκιμής καταλάσης. Εάν η καταλάση είναι αρνητική: Καταγραφή αποικιών VREfs Εάν η καταλάση είναι θετική: Δεν βρέθηκαν αποικίες VREfs Δεν βρέθηκε αποικία ή βρέθηκαν άχρωμες αποικίες Δεν βρέθηκε αποικία VREfm ή VREfs 10. ΑΠΟΔΟΣΗ Η έρευνα πραγματοποιήθηκε βάσει 86 δειγμάτων κοπράνων και 311 πρωκτικών επιχρισμάτων. Ο ενοφθαλμισμός της καλλιέργειας πραγματοποιήθηκε με VRESelect και Bile Esculin Azide + 6 μg/ml βανκομυκίνης. Οι πλάκες άγαρ επωάστηκαν στους 35-37 C αεροβίως για 24-28 ώρες με το μέσο VRESelect, και για 24 και 48 ώρες με το μέσο BEAV. Από τα πρωκτικά επιχρίσματα, ανιχνεύθηκαν 82 αποικίες VRE από το σύνολο των δύο ειδών δειγμάτων. Από τα δείγματα κοπράνων, ανιχνεύθηκαν 10 αποικίες VREfm. BEAV 24 ώρες BEAV 48 ώρες VRESelect 24-28 ώρες Ευαισθησία 85 % 91 % 100 % Προσδιοριστικότητα μετά από δοκιμή καταλάσης σε μπλε αποικίες Δεν διατίθεται Δεν διατίθεται 99 % Η ελάχιστη συγκέντρωση των αποικιών VREfs και VREfm μετά από αξιόπιστη ανίχνευση με τη χρήση κρίκου ενοφθαλμισμού 10 µl μέσω του VRESelect είναι 10 3 CFU/ml. 11. ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ ΧΡΗΣΤΗ Εξετάστε τις πλάκες για τυχόν αλλοιώσεις (δείτε ενότητα 6 παραπάνω). Ελέγξτε την απόδοση μέσω του ενοφθαλμισμού ενός αντιπροσωπευτικού δείγματος πλακών με νέες καλλιέργειες οργανισμών σταθερού ελέγχου που παράγουν γνωστές, επιθυμητές αντιδράσεις. Συνιστώμενα στελέχη προς εξέταση: Enterococcus faecalis ATCC 29212 Enterococcus faecalis ATCC 51299 Enterococcus faecium ATCC 700221 Από αιώρημα 0,5 της κλίμακας McFarland, πραγματοποιήστε αραίωση 1:10 και χωρίστε σε τομείς για απομόνωση. Στελέχη Enterococcus faecalis ATCC 29212 Enterococcus faecalis ATCC 51299 Enterococcus faecium ATCC 700221 Αναμενόμενα αποτελέσματα μετά από 24-28 ώρες στους 35-37 C Καμία ανάπτυξη μπλε αποικίες ροζ αποικίες Οι δοκιμές ελέγχου ποιότητας θα πρέπει να πραγματοποιούνται σε συμμόρφωση με τους τοπικούς, κρατικούς και ομοσπονδιακούς κανονισμούς ή με τις προϋποθέσεις πιστοποίησης και τις καθιερωμένες διαδικασίες ελέγχου ποιότητας του εργαστηρίου σας. Ανατρέξτε στα σχετικά έγγραφα του Ινστιτούτου Κλινικών και Εργαστηριακών Προτύπων CLSI (NCCLS) και στους κανονισμούς του Νόμου/Τροποποίηση Βελτίωσης Κλινικών Εργαστηρίων (CLIA) για τις ενδεικνυόμενες Διαδικασίες Ελέγχου Ποιότητας. 3
12. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Οι απαιτήσεις ανάπτυξης κάποιων αποικιών VRE μπορεί να οδηγήσουν σε μερική ή πλήρη αναστολή στην καλλιέργεια. Κάποια δείγματα μπορεί να οδηγήσουν στη δημιουργία ακαθόριστων χρωμάτων στο φόντο του μέσου, στο σημείο απόθεσης όπου η συγκέντρωση του υλικού είναι υψηλή. Η ερμηνεία των χρωματισμών των αποικιών θα πρέπει να πραγματοποιείται σε καλά απομονωμένες αποικίες. Οι συσπειρωμένες αποικίες των εντερόκοκκων Enterococcus gallinarum και Enterococcus casseliflavus μπορεί να εμφανίζονται με γκρι, ανοιχτό μπλε ή ροζ χρώμα. Οι εγγενώς ανθεκτικοί στη βανκομυκίνη Leuconostoc, Pediococcus και Lactobacillus αναστέλλονται ή εμφανίζονται ως άχρωμες σημειακές αποικίες (μπλε ή ροζ με συσπειρωμένες αποικίες). Σε κάποια στελέχη του VREfs -όπως το ATCC 51299 - τα οποία παρουσιάζουν χαμηλή αντοχή στη βανκομυκίνη (MIC<32 mg/l), οι αποικίες ενδέχεται να μην αναπτύξουν το χαρακτηριστικό μπλε χρώμα μέχρι το πέρας των 28 ωρών. Εάν εμφανιστούν λευκές αποικίες στις 24 ώρες, θα πρέπει να πραγματοποιείται δεύτερη ανάγνωση στις 28 ώρες. Η ανάπτυξη των ευαίσθητων στη βανκομυκίνη εντερόκοκκων μπορεί να παράγει πολύ χαμηλά ποσοστά μπλε αποικιών. Σε περίπτωση αμφιβολίας, συνιστάται η υποκαλλιέργεια του ύποπτου στελέχους με το VRESelect (με κατάτμηση αιωρήματος 1 αποικίας σε 0,5 ml φυσιολογικό ορό) ή η εκτέλεση μιας εξέτασης ελάχιστης ανασταλτικής πυκνότητας (MIC) σε αρνητικές σε καταλάση μπλε αποικίες για επιβεβαίωση της αντοχής στη βανκομυκίνη. Επάνω στο VRESelect μπορεί να αναπτυχθούν κάποια Gram-αρνητικά βακτήρια, αλλά το μέγεθος και το χρώμα των αποικιών επιτρέπει τη διαφοροποίηση από τον VREfm ή τον VREfs. Η παρατεταμένη έκθεση στο φως ενδέχεται να οδηγήσει σε αποχρωματισμό των οργανισμών ελέγχου ποιότητας ή των στελεχών των ασθενών. Ελαχιστοποιήστε την έκθεση των πλακών του VRESelect στο φως τόσο πριν όσο και κατά τη διάρκεια της επώασης. 13. ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Βασικές Εργαστηριακές Διαδικασίες στην Κλινική Βακτηριολογία. Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας. Γενεύη. 1991.1η έκδοση. 4
Οι αποθηκευμένες πλάκες θα πρέπει να προστατεύονται από το φως. Πιστοποιητικό ανάλυσης διαθέσιμο στη διεύθυνση http://www.bio-rad.com/certificate. Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette Γαλλία Τηλ. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Φαξ: +33 (0) 1 47 41 91 33 2015/02 www.bio-rad.com 5