ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ



Σχετικά έγγραφα
Bb Plus ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ

SC5b-9 Plus ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ

Ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός για τον υπολογισμό της συνολικής δραστηριό τητας για τη μεταβολική οδό του κλασικού συμπληρώματος σε ανθρώπινο ορό

CH50 Eq ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΞΗΓΗΣΗ ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ

C4d Fragment ΠΕΡΊΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΉΓΗΣΗ. MicroVue C4d Fragment Ενζυμικός Ανοσοπροσδιορισμός Περίληψη

H&R Legionella One Step Legionella pneumophila Antigen Test Device

Reagent Β: n º 1 φιαλίδιο x 4 ml.υγρό αντιδραστήριο, έτοιμο προς χρήση.

-Ανοσονεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

Reagent Β: n º 1 φιαλίδιο x 5 ml.υγρό αντιδραστήριο, έτοιμο προς χρήση.

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

Reagent Β: n º 1 φιαλίδιο x 5 ml.υγρό αντιδραστήριο, έτοιμο προς χρήση.

Reagent Β: n º 1 φιαλίδιο x 5 ml.υγρό αντιδραστήριο, έτοιμο προς χρήση.

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

- Ανοσονεφελομετρική μέθοδος

C5a ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΞΗΓΗΣΗ ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ. Κιτ ανοσοενζυματικού ποσοτικού προσδιορισμού του C5a σε ανθρώπινο ορό και πλάσμα

-Ανοσονεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

-Ανοσονεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

-Ανοσονεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

-Ανοσονεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

-Ανοσονεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

CIC-C1q ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΞΗΓΗΣΗ ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ

Reagent Β: n º 1 φιαλίδιο x 5 ml.υγρό αντιδραστήριο, έτοιμο προς χρήση.

C4a ΒΑΣΙΚΗ ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΞΗΓΗΣΗ

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

-Ανοσονεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

Ένθετο συσκευασίας του σετ ορών ελέγχου

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

-Ανοσονεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

ΜΕΘΟΔΟΣ Ανοσονεφελομετρική υπερευαίσθητη μέθοδος ενισχυμένη με latex.

Τοξικολογία Τροφίμων. Έλεγχος υπολειμμάτων με τη μέθοδο ELISA

C1-Inhibitor Plus ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ

Progensa PCA3 Urine Specimen Transport Kit

CIC-Raji ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ

QUANTA Lite ACA IgΜ III Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

ΚΙΤ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΟΡΟΥ SPE Beckman REF Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση

ELISA PeliClass human IgG subclass kit REF M1551

ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ 100 τεστ κωδικός Β Reagent Β: n º 1 φιαλίδιο x 2,5 ml.υγρό αντιδραστήριο, έτοιμο προς χρήση.

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

QUANTA Lite Sm ELISA Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

QUANTA Lite ACA Screen III Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

Φύλλο πρωτοκόλλου QIAsymphony SP

η ανάγκη τακτικής παρακολούθησης των επιπέδων των αυτοαντισωμάτων αντι-dsdna σε ασθενείς που πάσχουν από ΣΕΛ.

Σωληνάρια Leucosep LTK.615 ΕΝΘΕΤΟ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ. Για διαγνωστική χρήση in vitro PI-LT.615-GR-V3

ΑΝΟΣΟΒΙΟΧΗΜΙΚΟΣ ΑΝΑΛΥΤΗΣ

ΒΑΣΙΚΕΣ ΕΝΝΟΙΕΣ ΣΤΗΝ ΕΝΟΡΓΑΝΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

QUANTA Lite RNP ELISA Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

QUANTA Lite Για In Vitro διαγνωστική χρήση Πολυπλοκότητα κατά CLIA: Υψηλή. C1q CIC ELISA

- Ενισχυμένη με latex νεφελομετρική μέθοδος ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

ΛΟΗ Β. PDF created with pdffactory trial version

Κιτ QIAsymphony. DSP Circulating DNA

Φύλλο Πρωτοκόλλου QIAsymphony SP

Για χρήση στην παρασκευή και απομόνωση λευκοκυττάρων απευθείας από ολικό αίμα ΕΝΘΕΤΟ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ. Για In Vitro διαγνωστική χρήση PI-TT.

Reagent Β: n º 1 φιαλίδιο x 5 ml.υγρό αντιδραστήριο, έτοιμο προς χρήση.

ΓΕΝΙΚΗ ΠΑΘΟΛΟΓΙΑ ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΔΙΑΧΕΙΡΙΣΗ ΒΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΥΛΙΚΩΝ. Λ.Β. Αθανασίου Παθολογική Κλινική, Τμήμα Κτηνιατρικής, Π.Θ.

Φύλλο Πρωτοκόλλου QIAsymphony SP

LTK.615 ΕΝΘΕΤΟ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ

ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ PARASITE SUSPENSIONS. n Parasite suspensions σε φορμόλη ΕΝΔΕΔΕΙΓΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ ΣΥΝΟΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ

ΣΥΣΤΑΣΕΙΣ για τη βέλτιστη χρήση των υλικών ελέγχου με τις τεχνικές ηλεκτροφόρησης σε τριχοειδή και γέλη αγαρόζης

QUANTA Lite TM ENA 6 ELISA Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70 & Jo-1 Screening Test Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

PLATELIA HSV 2 IgG 1 Πλακέτα ΠΟΙΟΤΙΚΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ IgG ΕΝΑΝΤΙ ΤΟΥ ΙΟΥ HSV 2 ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ Ή ΠΛΑΣΜΑ ΜΕ ΑΝΟΣΟΕΝΖΥΜΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

QUANTA Lite TM ENA Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

QUANTA Lite TM ENA Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

CICP ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ ΠΕΡΊΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΉΓΗΣΗ. MicroVue CICP EIA Περίληψη

Φύλλο πρωτοκόλλου QIAsymphony SP

εξετάσεις Circulating Tumor Cell Control Kit

Η ΑΝΑΓΚΗ ΓΙΑ ΠΟΣΟΤΙΚΟΠΟΙΗΣΗ ΣΤΗΝ ΕΝΟΡΓΑΝΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

Osteocalcin. MicroVue Osteocalcin EIA Περίληψη ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ ΠΕΡΊΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΉΓΗΣΗ

QUANTA Lite ACA IgA III Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

3. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Το VRESelect αρ. καταλόγου περιέχει 20 πλάκες ανά συσκευασία.

LIFECODES B-Screen Πρωτόκολλο

ΔΕΛΤΙΟ ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ (Σύμφωνα με το Παρ.2 του Καν. 1907/2006) Όπως τροποποιήθηκε από τον Καν. 453/2010

Φύλλο πρωτοκόλλου QIAsymphony SP

Κιτ δοκιμασίας πλευρικής ροής Synovasure PJI

Εισαγωγή στο Εργαστήριο

ΔΕΛΤΙΟ ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ : CARBOCAL

Platelia Measles IgG. 1 Πλακέτα /12

QUANTA Lite TM Histone ELISA Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

LIFECODES Quik-ID Class II Πρωτόκολλο

εξετάσεις Circulating Tumor Cell Control Kit

ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ Ανώτατο Εκπαιδευτικό Ίδρυμα Πειραιά Τεχνολογικού Τομέα. Χημική Τεχνολογία. Εργαστηριακό Μέρος

Quantikine IVD ELISA. Συμπληρωματικό Ένθετο Συσκευασίας για τον Aνοσοπροσδιορισμό της Aνθρώπινης Eρυθροποιητίνης (Epo) Αριθμός Kαταλόγου DEP00

ΔΕΛΤΙΟ ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ

Χειρισμός Χημικών Ουσιών

Φύλλο Πρωτοκόλλου QIAsymphony SP

Εργαστηριακό πρωτόκολλο για μη αυτόματο καθαρισμό DNA από δείγμα 0,5 ml

ανασυνδυασμένης τρανσγλουταμινάσης ανθρώπινου ιστού ως πηγή αντιγόνου εξετάζεται στις αναφορές 11 και 12.

Biocompatibles. Greek I Ελληνικά Irinotecan ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ. Σύστημα Εμβολής για Χορήγηση Φαρμάκου ΑΠΟΣΤΕΙΡΩΜΕΝΟ ΓΙΑ ΜΙΑ ΧΡΗΣΗ ΜΟΝΟ ΜΗ ΠΥΡΕΤΟΓΟΝΟ

QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Kit

Εργαστηριακή άσκηση 3: Αιμοσυγκόλληση. Εργαστήριο Ανοσολογίας Εαρινό εξάμηνο 2019 Υπεύθυνες Διδάσκουσες: Βογιατζάκη Χρυσάνθη, Τσουμάνη Μαρία

Dako REAL Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse

1.ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗΝ ΠΟΙΟΤΙΚΗ ΚΑΙ ΠΟΣΟΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

ΑΝΟΣΟ ΟΚΙΜΑΣΙΑ: ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΡΟΦΗΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΣΤΕΡΕΑΣ ΦΑΣΕΩΣ ΜΕ ΣΥΝ ΕΣΗ ΕΝΖΥΜΟΥ (ELISA)

Τ.Ε.Ι. Ηπείρου Σχολή Τεχνολογίας Γεωπονίας Τμήμα Φυτικής Παραγωγής ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ ΚΕΦΑΛΑΙΟ 4 Ο. Εξοπλισμός. Δούμα Δήμητρα Άρτα, 2013

QUANTA Lite TM ssdna ELISA μονόκλωνου DNA ELISA Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

( 91 / 155 / ΕΚ & 93 / 112 ΕΚ ) : RAWASH. Τηλ Fax: R35 R C C

GAP IgM Helicobacter pylori

εξετάσεις Circulating Tumor Cell Control Kit

Transcript:

Ba Ανοσοαντίδραση για τον ποσοτικό προσδιορισμό του κλάσματος Ba του Παράγοντα Β, δείκτη για την ενεργοποίηση του Εναλλακτικού Μονοπατιού Συμπληρώματος, σε ανθρώπινα ούρα, πλάσμα, ή ορό. Αντιδραστήριο, Πρότυπα, Μάρτυρες και Προετοιμασία Δείγματος q Αραιώστε το Wash Buffer 1:20 με απεσταγμένο νερό q Αραιώστε δείγματα ούρω με Αραιωτικό Δείγματος 1:15 (π.χ. Δειγμα 25 µl + 350 µl Αραιωτικού) q q Περίληψη του EIA προσδιορισμού MicroVue Ba Αραιώστε τα δείγματα πλάσματος 1:1000 με Αραιωτικό Δείγματος Συμπληρώματος (Complement Specimen Diluent) χρησιμοποιώντας δύο στάδια (π.χ. 10 µl δείγματος πλάσματος + 990 µl Αραιωτικό Δείγματος à 40 µl αραιωμένο δείγμα πλάσματος + 360 µl Αραιωτικό Δείγματος) Αραιώστε τα δείγματα ορού 1:2000 με Αραιωτικό Δείγματος Συμπληρώματος (Complement Specimen Diluent) χρησιμοποιώντας δύο στάδια (π.χ. 10 µl δείγμα ορού + 990 µl Αραιωτικό Δείγματος à 20 µl αραιωμένου δείγματος ορού + 380 µl Αραιωτικό Δείγματος) Διαδικασία Αντίδρασης Προσθέστε 300 μl διαλύματος πλύσης (Wash Solution) μέσα στις μικροκυψέλες Προσθέστε 100 μl Αραιωτικού Δείγματος Συμπληρώματος (Complement Specimen Diluent) (blank), Προτύπων, Μάρτυρων και δειγμάτων στις μικροκυψέλες Επωάστε για 60 ± 5 λεπτά στους 18 26 ο C Ξεπλύνετε 5 φορές με Wash Buffer (Επωάστε κατά την πρώτη πλύση για 1 λεπτό) Προσθέστε 100 μl Συζεύγματος (Conjugate) Επωάστε για 60 ± 2 λεπτά στους 18 26 ο C Ξεπλύνετε 5 φορές με Wash Buffer (Επωάστε κατά την πρώτη πλύση για 1 λεπτό) Προσθέστε 100 μl Υπόστρωμα (Substrate) Επωάστε για 15 ± 1 λεπτά στους 18 26 ο C Προσθέστε 100 μl Διάλυμα Παύσης (Stop solution) Διαβάστε την Οπτική Πυκνότητα στα 450 nm. Αναλύστε τα αποτελέσματα της αντίδρασης χρησιμοποιώντας μια καμπύλη γραμμικής συνάρτησης (y = mx +b) iu Επωάστε για 1 λεπτό στους 18 26 ο C ΣΚΟΠΟΥΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Ξεπλύνετε 2 φορές με Wash Buffer (ξηρά κηλίδα) Ο ενζυματικός προσδιορισμός MicroVue Ba μετράει την ποσότητα του κλάσματος του συμπληρώματος Ba, ενός ενεργού τμήματος του Παράγοντα Β του εναλλακτικού μονοπατιού του συμπληρώματος, σε ανθρώπινα ούρα, πλάσμα ή ορό. Η μέτρηση του Ba σε ανθρώπινα ούρα, πλάσμα ή ορό παρέχει αποδείξεις για την εμπλοκή του εναλλακτικού μονοπατιού του συμπληρώματος. Μέτρηση της ενεργοποίησης του εναλλακτικού μονοπατιού του συμπληρώματος βοηθά στην διάγνωση διαφόρων ασθενειών του νεφρού, π.χ. χρόνια νεφρίτιδα με φλεγμονή τριχοειδών, νεφρίτιδα λύκου, καθώς και άλλες δερματοπάθειες π.χ. dermatitis herpetiformis και pemphigus vulgaris. Άλλες ασθένειες στις οποίες η ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού του συμπληρώματος έχει παρατηρηθεί ότι είναι η ηλικιακή εκφύλιση της ωχράς κηλίδας, αποβολή σε εγκυμοσύνη υψηλού κινδύνου, ρευματοειδής αρθρίτιδα, και δρεπανοκυτταρική αναιμία. 1,4,14-22 ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ Το εναλλακτικό μονοπάτι του συμπληρώματος παρέχει ενδογενή προστασία εναντίον μικροβιακών παραγόντων όταν λείπουν συγκεκριμένα αντισώματα. 5-9 Η ενεργοποίηση αυτού του μονοπατιού του συμπληρώματος μπορεί να προκληθεί από μια ποικιλία ουσιών περιλαμβανομένων μικροβιακών πολυσακχαριτών ή λιπίδίων, αρνητικών κατά Gram βακτηριακών λιποπολυσακχαριτών και επιφανειακών καθοριστικών παραγόντων που είναι παρόντες σε κάποιους ιούς, παράσιτα, κύτταρα θηλαστικών μολυσμένα με ιούς, και καρκινικά κύτταρα. Στα αυτοάνοσα νοσήματα, το εναλλακτικό μονοπάτι του συμπληρώματος, μπορεί να συμβάλει αμέσως στην βλάβη των ιστών. Μια κεντρική σημαντική αντίδραση, που συμβαίνει κατά την ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού, είναι η μετατροπή του ζυμογόνου Παράγοντα B, μοριακού βάρους 93 Kd, σε ένα ενεργό προτεολυτικό ένζυμο. Αυτό επιτυγχάνεται σε μία αντίδραση 2 σταδίων: Κατά τη διάρκεια του πρώτου σταδίου της αντίδρασης ο Παράγοντας Β σχηματίζει ένα σύμπλοκο εξαρτώμενο από μαγνήσιο με C3(H20) ή C3b. 8 Το C3(H20),B σύμπλοκο σχηματίζεται μόνο σε υγρή φάση ενώ το C3b,B σύμπλοκο σχηματίζεται είτε σε υγρή φάση ή σε στοχευμένη επιφάνεια. 5-8 Ο παράγοντας B, που είναι παρών στο C3(H20),B ή στο σύμπλοκο C3b,B, διαιρείται στα Ba (33 Kd) και Bb (60 Kd) κλάσματα στην αντίδραση του δευτέρου σταδίου από το ένζυμο του μονοπατιού του εναλλακτικού συμπληρώματος, τον Παράγοντα D. 5-8,13 Παρόλο που θεωρείται ότι η ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού συμβαίνει αρχικά λόγω απουσίας ειδικού αντισώματος, σε πολλές περιπτώσεις φαίνεται ότι η ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού μπορεί να συμβεί ως αποτέλεσμα της ενεργοποίησης του κλασικού μονοπατιού. Για παράδειγμα, ανοσοσύμπλοκα που είναι παρόντα σε ασθενείς που πάσχουν από αυτοάνοσο νόσημα μπορεί να προκαλέσουν την ενεργοποίηση του κλασικού μονοπατιού συμπληρώματος με αποτέλεσμα την παραγωγή κλασμάτων C3b. Όπως περιγράφηκε και παραπάνω, αυτά τα μόρια C3b είναι ικανά να προσδένουν τον Παράγοντα B και να ξεκινούν τον διαχωρισμό του σε κλάσματα Ba και Bb. Συνεπώς, η ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού μπορεί να προκληθεί σε καταστάσεις αυτοάνοσων νοσημάτων που μεσολαβούν 1388EL01 (2011/03)

αντισώματα και να συμβάλλει σημαντικά στην ενίσχυση της ενεργότητας του συμπληρώματος και, συνακόλουθα, της καταστροφής του ιστού. Υπολογίζοντας τα προϊόντα που προέρχονται από τη διάσπαση του Παράγοντα B, σε δείγματα, μπορούμε να εκτιμήσουμε την έκταση της χρήσης του εναλλακτικού μονοπατιού που συμβαίνει κατά τη διάρκεια της συλλογής δείγματος σε μία ασθένεια που διερευνάται. Το MicroVue Ba EIA παρέχει μία απλή, γρήγορη, μη ραδιενεργή, υψηλής ειδίκευσης και ποσοτική διαδικασία για την μέτρηση της ενεργότητας του Παράγοντα B. Είναι ιδανικό για έρευνες σχετικά με το ρόλο ή την υπόσταση του εναλλακτικού μονοπατιού συμπληρώματος σε πολυάριθμες μελέτες και κλινικές δοκιμές και για την παρακολούθηση της παραγωγής Ba in vitro. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η ανοσοενζυμική αντίδραση της MicroVue Ba για τον ποσοτικό προσδιορισμό του Ba σε ανθρώπινο ορό, πλάσμα ή άλλα δείγματα είναι μια διαδικασία τριών βημάτων, που χρησιμοποιεί (1) μία πλάκα μικροανάλυσης που είναι επικαλυμμένη με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού, που δεσμεύεται ειδικώς σε ανθρώπινο Ba, (2) ένα πολυκλωνικό αντίσωμα Παράγοντα Β πολυκλωνικών αντισωμάτων συζευγμένων με υπεροξειδάση (HRP), και (3) ένα χρωμογόνο υπόστρωμα. Στο πρώτο βήμα, τα πρότυπα, οι μάρτυρες, και τα δείγματα προστίθενται στις κυψέλες μικροανάλυσης που είναι επικαλυμμένες με ένα ειδικό μονοκλωνικό αντίσωμα αντι- Ba. Το Ba, αλλά όχι ο Παράγων B ή άλλα προϊόντα ενεργοποίησης συμπληρώματος που είναι παρόν στα πρότυπα, στους μάρτυρες, ή στα δείγματα, θα δεσμευθεί στο ακινητοποιημένο μονοκλωνικό αντίσωμα αντι- Ba. Μετά την επώαση, ένας κύκλος πλύσης απομακρύνει το μη συζευγμένο υλικό. Στο δεύτερο βήμα, το αντι-παράγοντας Β πολυκλωνικών αντισωμάτων δεσμευμένων με υπεροξειδάση χρένου (HRP) προστίθεται σε κάθε κυψέλη εξέτασης. Το συζευγμένο με αντι- Ba ένζυμο δεσμεύεται με το Ba που είναι συνδεδεμένο στα βοθρία μικροανάλυσης. Μετά την επώαση, ένας κύκλος πλύσης απομακρύνει το αδέσμευτο σύζευγμα που περισσεύει. Στο τρίτο βήμα, ένα ενζυμικό χρωμογόνο υπόστρωμα προστίθεται σε κάθε βοθρίο μικροανάλυσης. Το δεσμευμένο αντίσωμα συζευγμένο με HRP αντιδρά με το υπόστρωμα σχηματίζοντας μπλε χρώμα. Μετά την επώαση, η ενζυμική αντίδραση σταματά χημικά, το χρώμα αλλάζει σε κίτρινο και η ένταση του χρώματος υπολογίζεται φασματοφωτομετρικά στα 450 nm. Η ένταση του χρώματος του μίγματος της αντίδρασης είναι ανάλογη της συγκέντρωσης του παρόντος Ba στα δείγματα εξέτασης, στα πρότυπα και στους μάρτυρες. ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ 96 Αντιδράσεις για το κλάσμα του Ba του Παράγοντα B Το κιτ Ενζυμικής ανοσοαντίδρασης της MicroVue Ba περιέχει τα παρακάτω: A E Ba Πρότυπα: Μέρη 5159-5163 1 το καθένα, 1,5 ml Έτοιμο προς χρήση. Περιέχει μια γνωστή συγκέντρωση του Ba σε ανθρώπινο ορό, σταθεροποιητές πρωτεΐνης L H Μάρτυρας χαμηλής συγκέντρωσης: Μέρος 5164 1,5 ml Έτοιμο προς χρήση. Περιέχει μια γνωστή συγκέντρωση του Ba σε ανθρώπινο ορό, σταθεροποιητές πρωτεΐνης Μάρτυρας Υψηλής συγκέντρωσης: Μέρος 5165 1,5 ml Έτοιμο προς χρήση. Περιέχει μια γνωστή συγκέντρωση του Ba σε ανθρώπινο ορό, σταθεροποιητές πρωτεΐνης Επικαλυμμένες Λωρίδες Μέρος 5166 12 έκαστο Λωρίδες 8 βοθρίων, επικαλυμμένων με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού, ειδικό για ανθρώπινη Ba σε επανασφραγιζόμενο σάκο με έλασμα. Stop Solution (Διάλυμα Παύσης) Μέρος A9947 Περιέχει 1N (4%) Υδροχλωρικό οξύ 12 ml 20X Συμπυκνωμένο Διάλυμα Πλύσης Μέρος A9957 2 x 50 ml Το κάθε ένα περιέχει αλατούχο διάλυμα φωσφορικών (PBS), 1,0% Tween-20, και 0,035% ProClin 300 Αραιωτικό Δείγματος Μέρος A3670 50 ml Περιέχει PBS, 0,05% Tween-20, 2,5% σταθεροποιητές πρωτεΐνης, 0,035% ProClin 300 TMB Υπόστρωμα Μέρος 5059 12 ml Περιέχει 3,3, 5,5 tetramethylbenzidine (TMB) και υπεροξείδιο υδρογόνου (H 2O 2) Σύζευγμα Μέρος 5167 12 ml Περιέχει αντι-παράγοντα B πολυκλωνικών αντισωμάτων συζευγμένων με υπεροξειδάση χρένου(hrp) εναιωρούμενο σε σταθεροποιητικό ρυθμιστικό διάλυμα με συντηρητικό Το Tween 20 αποτελεί εμπορικό σήμα της ICI Americas Inc. Το ProClin αποτελεί σήμα κατατεθέν της Rohm and Haas Company. ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΟΥΝΤΑΙ ΑΛΛΑ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ Χρονόμετρο (εύρος 60 λεπτών) Πλάκα αραίωσης με 96 βοθρία ή δοκιμαστικοί σωλήνες και στατώ για την αραίωση των δειγμάτων (προαιρετικό) Καθαρές, μη χρησιμοποιούμενες πλάκες μικροανάλυσης για τη μέθοδο αντιγραφής πλάκας (προαιρετικό) Δοχείο για αραίωση ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης. Φιάλη πλύσης ή άλλο επικυρωμένο σύστημα πλύσης ανοσοανάλυσης Μικροπιπέτες και αποστειρωμένα ρύγχη πιπετών μιας χρήσης. Δοχεία αντιδραστηρίων για την προσθήκη του συζεύγματος, του υποστρώματος και του διαλύματος παύσης στην πλάκα (να χρησιμοποιούνται καθαρά, μη χρησιμοποιημένα δοχεία για κάθε αντιδραστήριο) Ρυθμιζόμενη πολυκάναλη πιπέτα (8 ή 12 καναλιών) ή επαναληπτικές μικροπιπέτες Καθαρές πιπέτες, 1 ml, 5 ml, και 10 ml Φωτόμετρο για ανάγνωση οπτικής πυκνότητας A 450 μεταξύ 0,0 και 3,0. Απιονισμένο ή αποσταγμένο νερό. 1388EL01 (2011/03) 2

ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ 1. Για in vitro διαγνωστική χρήση. 2. Να χειρίζεστε τα δείγματα ως ενδεχομένως βιοεπικίνδυνα υλικά. Ακολουθήστε τις Γενικές Προφυλάξεις, όταν χειρίζεστε περιεχόμενα αυτού του κιτ και δείγματα ασθενών. 3. Να φοράτε ρούχα προστασίας, γάντια, και προστασία για τα μάτια/πρόσωπο όταν χειρίζεστε τα περιεχόμενα αυτού του κιτ. 4. Χρησιμοποιήστε τα παρεχόμενα αντιδραστήρια ως ολοκληρωμένη μονάδα πριν από την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα της συσκευασίας. 5. Φυλάξετε τα αντιδραστήρια ανάλυσης όπως ορίζεται. 6. Μην χρησιμοποιείτε τις επικαλυμμένες λωρίδες εάν ο σάκος έχει τρυπήσει. 7. Το ProClin 300 χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Η τυχαία επαφή ή η κατάποση ρυθμιστικών διαλυμάτων ή αντιδραστηρίων που περιέχουν ProClin μπορεί να προκαλέσει ερεθισμό στο δέρμα, στα μάτια ή στο στόμα. Χρησιμοποιείτε ενδεικνυόμενες εργαστηριακές πρακτικές για να μειώσετε την έκθεση. Αναζητήστε ιατρική φροντίδα αν παρουσιαστούν συμπτώματα. 8. Το διάλυμα παύσης είναι διαβρωτικό και μπορεί να προκαλέσει ερεθισμό. Μην το καταπίνετε. Αποφύγετε την επαφή με τα μάτια, το δέρμα και τα ρούχα. Σε αντίθεση περίπτωση, ξεπλύνετε αμέσως την περιοχή με νερό. Εάν καταποθεί ειδοποιήστε ιατρό. 9. Για κάθε μονάδα δότη που χρησιμοποιείται στην προετοιμασία των Πρότυπων και Ρυθμιζόμενων διαλυμάτων δοκιμάστηκε μια μέθοδος εγκεκριμένη από τον FDA για την παρουσία αντισώματος έναντι του ανθρώπινου ιού επίκτητης ανοσοεπάρκειας, (HIV 1 και 2) και του ιού της ηπατίτιδας C, καθώς και της ηπατίτιδας B επιφανειακού αντιγόνου και βρέθηκαν να είναι αρνητικά (δεν ήταν επανειλημμένα αντιδραστικά). Επειδή καμία μέθοδος εξέτασης δεν εξασφαλίζει πλήρως την απουσία μολυσματικών παραγόντων, πρέπει να χειρίζεστε τα αντιδραστήρια αυτά σε Επίπεδο 2 Βιοασφάλειας, όπως προτείνεται για κάθε δυνητικά μολυσματικό ανθρώπινο ορό ή δείγμα αίματος στο εγχειρίδιο Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. (23) Κέντρο Ελέγχου Ασθενειών/Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. 10. Συνιστάται η χρήση πολυκάναλων ή επαναληπτικών πιπεττών για την εξασφάλιση έγκαιρης χορήγησης αντιδραστηρίων. 11. Για την ακριβή μέτρηση δειγμάτων, προσθέστε με ακρίβεια δείγματα και πρότυπα. Λάβετε με πιπέτα χρησιμοποιώντας μόνο βαθμονομημένα όργανα. 12. Η σωστή συλλογή και φύλαξη των προς εξέταση δειγμάτων είναι ουσιώδης για ακριβή αποτελέσματα (βλέπε ΣΥΛΛΟΓΗ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ). 13. Αποφύγετε μικροβιακή μόλυνση ή επιμόλυνση των δειγμάτων, ή των αντιδραστηρίων. 14. Μετρήστε το κάθε δείγμα εις διπλούν. 15. Μην χρησιμοποιείτε ένα βοθρίο μικροανάλυσης για περισσότερες από μία εξετάσεις. 16. Η χρήση χρόνων επώασης και θερμοκρασιών διαφορετικών από εκείνες που υποδεικνύονται στην ενόητα ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ ενδέχεται να δώσει εσφαλμένα αποτελέσματα. 17. Το υπόστρωμα TMB πρέπει να προστατεύεται από το φως και την επαφή με μέταλλο ή λάστιχο κατά τη φύλαξη και επώαση. Αποφύγετε επαφή με τα μάτια, το δέρμα και τα ρούχα. Σε αντίθετη περίπτωση, ξεπλύνετε αμέσως την περιοχή προσβολής με νερό. 18. Μην αφήνετε τα βοθρία να στεγνώσουν κατά τη διαδικασία ανάλυσης. 19. Όταν αφαιρείτε υγρό από τα βοθρία μικροανάλυσης, μην αποξέετε ή αγγίζετε τον πυθμένα των βοθρίων. 20. Αδρανοποιημένα με θέρμανση, υπερλιπαιμικά ή μολυσμένα δείγματα ενδέχεται να δώσουν εσφαλμένα αποτελέσματα. 21. Για να αποφύγετε το σχηματισμό αεροζόλ κατά την πλύση, χρησιμοποιήστε μια συσκευή για να αναρροφήσετε το υγρό πλύσης μέσα σε φιάλη που περιέχει λευκαντικό για οικιακή χρήση. 22. Για το πλύσιμο της πλάκας πρέπει να χρησιμοποιηθεί φιάλη πλύσης ή αυτοματοποιημένη συσκευή πλήρωσης (ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ, Βήμα 6). Για καλύτερα αποτελέσματα, μη χρησιμοποιείτε πολυκάναλες πιπέτες για να πλύνετε την πλάκα μικροανάλυσης. 23. Απαλλαγείτε από τα δοχεία και τα μη χρησιμοποιημένα περιεχόμενα τους σύμφωνα με τους Ομοσπονδιακούς, Κρατικούς και Τοπικούς κανονισμούς. ΦΥΛΑΞΗ Φυλάξτε το μη ανοιγμένο Κιτ στους 2-8 C. ΕΝΔΕΙΞΕΙΣ ΑΣΤΑΘΕΙΑΣ Η ΑΠΟΣΥΝΘΕΣΗΣ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Θολερότητα του Διαλύματος Πλύσης, υποδηλώνει αποσύνθεση αυτού του αντιδραστηρίου. Αν συμβεί αυτό, το διάλυμα πρέπει να απορριφθεί. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Αφήστε όλα τα αντιδραστήρια και τα υλικά για ανάλυση να φθάσουν στους 18 26 C πριν την χρήση. Αφού επιλέξετε τα αντιδραστήρια και υλικά που πρόκειται να χρησιμοποιηθούν στην ανάλυση, επιστρέψτε αμέσως τα μη χρησιμοποιημένα αντιδραστήρια στις κατάλληλες θερμοκρασίες φύλαξής τους (δείτε ΦΥΛΑΞΗ). Λωρίδες Μικροανάλυσης Προσδιορίστε τον αριθμό των λωρίδων που απαιτούνται για την ανάλυση. Συνιστάται το τυφλό, οι Μάρτυρες και τα Πρότυπα να εξεταστούν εις διπλούν. Επιστρέψτε τα μη χρησιμοποιούμενα αντιδραστήρια στους σάκους αποθήκευσης, σφραγίστε τους σάκους, και αποθηκεύεστε στους 2-8 C. Ασφαλίστε τις λωρίδες που πρέπει να χρησιμοποιηθούν στην ανάλυση στην βάση της πλάκας. 1388EL01 (2011/03) 3

Διάλυμα πλύσης (Wash Solution) Αναμείξτε το 20X Συμπυκνωμένο Διάλυμα Πλύσης αναστρέφοντας τη φιάλη αρκετές φορές. Εάν το 20X Συμπυκνωμένο Διάλυμα Πλύσης έχει αποθηκευτεί στους 2-8 C, μπορεί να έχουν δημιουργηθεί κρύσταλλοι. Για να διαλυθούν οι κρύσταλλοι, θερμάνετε τη φιάλη σε υδατόλουτρο στους 37-50 C μέχρι να διαλυθούν οι κρύσταλλοι, και στην συνέχεια αναμείξτε καλά. Παρασκευάστε το Διάλυμα πλύσης αραιώνοντας όλο το περιεχόμενο ενός από ταις φιάλες του 20X Συμπυκνωμένου Διαλύματος Πλύσης μέχρι το ένα λίτρο, με αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Αναμείξτε καλά. Το Διάλυμα Πλύσης είναι σταθερό επί 30 μέρες όταν αποθηκεύεται σε καθαρό δοχείο στους 2-8 C. Αν παρουσιαστεί αλλοίωση του χρώματος ή θολερότητα, απορρίψτε το αντιδραστήριο. Ba Τα Πρότυπα Διαλύματα και οι Μάρτυρες Τα Πρότυπα διαλύματα και οι Μάρτυρες δεν χρειάζονται αραίωση ή προετοιμασία πριν από την χρήση. ΧΕΙΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ Χειρισμός και απόρριψη όλων των δειγμάτων χρησιμοποιώντας Γενικές Προφυλάξεις. Όλες οι διαδικασίες χειρισμού των δειγμάτων πρέπει να γίνουν στους 2-8 C. Συλλογή δείγματος Ορός / Πλάσμα Εξαιτίας της ενεργοποίησης του συμπληρώματος, που συμβαίνει κατά τη διάρκεια της θρόμβωσης, η συγκέντρωση του Ba σε δείγματα φυσιολογικού ανθρώπινου ορού θα είναι υψηλότερη από τη συγκέντρωση σε δείγματα από Πλάσμα, με EDTA. Συνεπώς, τα επίπεδα Ba σε EDTA και πλάσμα, μπορεί να αντιπροσωπεύουν με μεγαλύτερη ακρίβεια τις in-vivo συγκεντρώσεις. Το κλάσμα Ba του Παράγοντα Β υπόκειται σε πρωτεόλυση σε δείγματα που έχουν συλλεχθεί ή αποθηκευτεί με μη ενδεδειγμένο τρόπο, και ο Παράγοντας Ba μπορεί να ενεργοποιηθεί σε δείγματα που δεν είχαν σωστό χειρισμό. Η σωστή συλλογή και αποθήκευση των δειγμάτων είναι απαραίτητη. 24 Για βέλτιστα αποτελέσματα πλάσματος, συνιστώνται σωλήνες συλλογής με K2 EDTA. Τα δείγματα ορού, πλάσματος με EDTA πρέπει να συλλέγονται άσηπτα, χρησιμοποιώντας τις καθορισμένες τεχνικές. 25 Τα δείγματα πρέπει να εξεταστούν αμέσως ή να αποθηκευθούν σε πάγο μέχρι να αναλυθούν. Παρόλ αυτά, αυτό το σύντομο διάστημα αποθήκευσης σε πάγο δεν πρέπει να ξεπεράσει τις δύο ώρες. Εάν το δείγμα δεν εξετασθεί μέσα σε δύο ώρες σύμφωνα με τις καθορισμένες παραπάνω τεχνικές, το δείγμα πρέπει να καταψυχθεί στους -70 C, ή χαμηλότερη θερμοκρασία. Ούρα Η ανάλυση MicroVue Ba μπορεί να διεξαχθεί με τη χρήση των πρώτων πρωινών ούρων χωρίς συντηρητικά ή δεύτερων πρωινών ούρων. Συνιστάται οι συλλογές να γίνονται πριν τις 10.00 π.μ. για να αποφεύγεται οποιαδήποτε πιθανή επιρροή ημερήσιας διακύμανσης. Το δείγμα ούρων μπορεί να διατηρηθεί σε ψυγείο (2 8 C) για λιγότερο από 1 ημέρα ή κατεψυγμένο σε -70 C για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα. Μην υποβάλλετε τα δείγματα σε περισσότερους από 5 κύκλους ψύξης/τήξης. Αποφύγετε την παρατεταμένη έκθεση στο φως, ιδιαίτερα στο ηλιακό. Κατά τη διάρκεια της επεξεργασίας ρουτίνας, τα δείγματα δεν επηρεάζονται από το συνηθισμένο, τεχνητό εργαστηριακό φωτισμό. Απόψυξη Παγωμένων Δειγμάτων Για την ελαχιστοποίηση του χρόνου χειρισμού των δειγμάτων, ετοιμάστε μια πλάκα (ή σωλήνες) αραίωσης και προσθέστε τον ανάλογο όγκο αραιωτικού (όπως περιγράφεται στην παρακάτω παράγραφο Αραίωση δείγματος). Αποψύξτε τα κατεψυγμένα δείγματα με σύντομη απόψυξη στους 37 C. Μεταφέρετε τα αποψυγμένα δείγματα αμέσως σε πάγο για να αποφύγετε την ενεργοποίηση του συμπληρώματος πριν από την αραίωση. Τα δείγματα δεν πρέπει να παραμένουν στον πάγο για περισσότερο από δύο ώρες. Μην αφήνετε τα δείγματα σε θερμοκρασία 37 C, καθώς μπορεί να συμβεί η ενεργοποίηση συμπληρώματος. Μην αποψύξετε τα δείγματα αργά στη θερμοκρασία δωματίου ή στον πάγο, διότι αυτό μπορεί να οδηγήσει στην ενεργοποίηση του Ba και να επηρεάσει τα αποτελέσματα. Τα δείγματα πρέπει να αναλύονται όσο το δυνατόν πιο σύντομα μετά την απόψυξη. Μπορείτε να πραγματοποιείτε έως πέντε κύκλους κατάψυξης/απόψυξης χωρίς να επηρεάζονται τα δείγματα. Εάν τα δείγματα πρέπει να καταψυχθούν εκ νέου για περαιτέρω ανάλυση, η Quidel συνιστά την κατάψυξη πολλαπλών υποδειγμάτων για να αποφευχθούν οι πολλαπλοί κύκλοι κατάψυξης/απόψυξης. Αραίωση Δείγματος Προσοχή: Χειριστείτε όλα τα δείγματα ως εν δυνάμει μολυσματικά. Χρησιμοποιείτε Γενικές Προφυλάξεις. Μην χρησιμοποιείτε δείγματα αδρανοποιημένα με θέρμανση, μολυσμένα, ή αποθηκευμένα σε μη ενδεδειγμένες συνθήκες. Σημείωση: Βλέπε Απόψυξη Κατεψυγμένων Δειγμάτων για σημαντικές πληροφορίες για τις κατάλληλες μεθόδους απόψυξης των κατεψυγμένων δειγμάτων. Ο σωστός χειρισμός των δειγμάτων είναι απαραίτητος για ακριβή αποτελέσματα. Τα δείγματα πρέπει να αραιωθούν ώστε οι A 450 τιμές που παρατηρούνται να είναι μεγαλύτερες από το LLOQ και να μην υπερβαίνουν τις A450 τιμές της ULOQ. Δείγματα με A450 τιμές εκτός αυτών των ορίων θα πρέπει να επαναεξετάζονται με καινούργια αραίωση. Παρασκευάστε κατάλληλη αραίωση (βλ. την παρακάτω παράγραφο) για κάθε δείγμα, χρησιμοποιώντας Αραιωτικό δείγματος. Σε κάθε αραίωση, να αναμιγνύετε ελαφρά, ώστε να αποφευχθεί ο σχηματισμός αφρού και φυσαλίδων. Μη φυλάσσετε ή επαναχρησιμοποιείτε τα αραιωμένα δείγματα. Όταν αραιωθούν, τα δείγματα πρέπει να προστεθούν στα βοθρία των μικροπλακών μέσα σε 30 λεπτά. Ούρα Η συνιστώμενη αραίωση για τα δείγματα ούρων σε Αραιωτικό είναι 1:15 για χρήση με την Ανοσοενζυματική εξέταση MicroVue Ba. 1388EL01 (2011/03) 4

Πλάσμα Αραιώστε τα δείγματα πλάσματος 1:1000 με Αραιωτικό Δείγματος χρησιμοποιώντας δύο στάδια: 1) 10 µl δείγματος πλάσματος + 990 µl Αραιωτικό Δείγματος 2) 40 µl αραιωμένο δείγμα πλάσματος + 360 µl Αραιωτικό Δείγματος Ορός Αραιώστε τα δείγματα ορού 1:2000 με Αραιωτικό Δείγματος χρησιμοποιώντας δύο στάδια: 1) 10 µl δείγμα ορού + 990 µl Αραιωτικό Δείγματος 2) 20 µl αραιωμένου δείγματος ορού + 380 µl Αραιωτικό Δείγματος Δείγματα με υψηλά επίπεδα ενεργοποίησης συμπληρώματος μπορεί να απαιτούν μεγαλύτερες αραιώσεις από αυτές που αναφέρονται. Προσθήκη αραιωμένων δειγμάτων στα βοθρία μικροανάλυσης: Η προσθήκη αραιωμένων δειγμάτων στα βοθρία μικροανάλυσης πρέπει να ολοκληρωθεί μέσα σε 5 λεπτά από την προσθήκη του πρώτου δείγματος. Οποιαδήποτε από τις δύο μεθόδους μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την προσθήκη των αραιωμένων δειγμάτων, Προτύπων και Μαρτύρων στα βοθρία. (βλέπε βήμα 4 για ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ). Για κύκλους ανάλυσης οπού εξετάζονται μόνο λίγα δείγματα, τα αραιωμένα διαλύματα και τα άλλα αντιδραστήρια μπορούν να προστεθούν κατευθείαν στο αντίστοιχο βοθρίο με μια μικροπιπέττα (100 µl/βοθρίο). Για μικρούς ή μεγάλους κύκλους, αλλά ειδικότερα για μεγάλους κύκλους, συνιστούμε την χρήση πολύ-κάναλης πιπέττας για προσθήκη δειγμάτων με τον ακόλουθο τρόπο. Για να τοποθετήσετε τα Πρότυπα, τους Μάρτυρες και τα αραιωμένα διαλύματα στα βοθρία μικροανάλυσης όσο το δυνατόν γρηγορότερα, μπορεί να χρησιμοποιηθεί μια διαδικασία αντιγραφής πλακών. Αντί για τη μεμονωμένη προσθήκη 100 µl κάθε Προτύπου, Μάρτυρα ή αραιωμένου διαλύματος σε βοθρία καλυμμένα με αντίσωμα, μπορεί να προστεθεί 120-130 µl κάθε διαλύματος σε μεμονωμένα βοθρία σε πλάκα τυφλού (δεν παρέχεται) που αντιστοιχεί στο τελικό επιθυμητό υπόδειγμα EIA. Αφού όλα τα δείγματα προς εξέταση έχουν προστεθεί στα βοθρία μικροανάλυσης στην πλάκα τυφλού, μεταφέρετε γρήγορα 100 µl από κάθε βοθρίο τυφλού στα βοθρία καλυμμένα με το αντίσωμα χρησιμοποιώντας μια πολυκάναλη μικροπιπέττα. Για να αποφύγετε την πιθανότητα επιμόλυνσης, τα ρύγχη της πιπέττας πρέπει να αλλάζουν κάθε φορά που υπάρχει αλλαγή στη σύνθεση των δειγμάτων προς μεταφορά. Η διαδικασία αντιγραφής πλακών μπορεί να χρησιμοποιηθεί και για την διευκόλυνση της προσθήκης των αντιδραστηρίων του Υποστρώματος, του Συζεύγματος και του Διαλύματος. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ Πριν ξεκινήσετε την ανάλυση διαβάστε ολόκληρο το ένθετο του προϊόντος. Πριν προχωρήσετε δείτε την ενότητα ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ και ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ. 1. Καταγράψτε τις θέσεις των βοθρίων που αντιστοιχούν στα τυφλά βοθρία, σε όλα τα προς εξέταση δείγματα, Πρότυπα, και Ρυθμιστικά διαλύματα καθώς και τον υποδεικνυόμενο αριθμό παρτίδας από τις ετικέτες των φιαλιδίων. Σημαδέψτε μια γωνία της πλάκας μικροανάλυσης για προσανατολισμό 2. Προετοιμάστε στις λωρίδες μικροανάλυσης ως εξής: a. Επανυδατώστε τα βοθρία μικροανάλυσης προσθέτοντας περίπου 300 µl Διαλύματος Πλύσης σε κάθε βοθρίο χρησιμοποιώντας μια φιάλη πλύσης ή αυτοματοποιημένη συσκευή πλύσης πλακών. b. Επωάστε τα βοθρία για ένα λεπτό στους 18-26 C. c. Αφαιρέστε το υγρό από τα βοθρία. d. Προσθέστε περίπου 300 µl Διαλύματος πλύσης σε κάθε βοθρίο. e. Αφαιρέστε το υγρό από τα βοθρία. f. Επαναλάβετε τα βήματα d-e μια φορά ακόμη, για συνολικά τρεις πλύσεις g. Αντιστρέψτε την πλάκα και χτυπήστε δυνατά πάνω σε απορροφητικό χαρτί για να αφαιρέσετε και το τελευταίο ίχνος υγρού. 3. Επιλέξτε ένα ή περισσότερα βοθρία ως τυφλά. Προσθέστε 100 µl Αραιωτικού Διαλύματος στα βοθρία που θα χρησιμοποιηθούν για να μηδενίσουν το φωτόμετρο. 4. Προσθέστε 100 µl Αραιωτικό Δείγματος, Πρότυπα και Ρυθμιστικά διαλύματα, ή αραιωμένα δείγματα στα καθορισμένα διπλά βοθρία μικροανάλυσης. Το βήµα αυτό πρέπει να έχει ολοκληρωθεί εντός 5 λεπτών. 5. Επωάστε στους 18-26 C για 60 ± 5 λεπτά. 6. Ξεπλύνετε τα βοθρία μικροανάλυσης 5 συνολικά φορές, ως εξής: a. Αφαιρέστε το υγρό από τα βοθρία b. Προσθέστε περίπου 300 µl Διαλύματος Πλύσης σε κάθε βοθρίο χρησιμοποιώντας μια φιάλη πλύσης ή αυτοματοποιημένη συσκευή πλύσης πλακών. c. Επωάστε τα βοθρία για 1 λεπτό στους 18-26 C. d. Αφαιρέστε το υγρό από τα βοθρία. e. Αντιστρέψτε την πλάκα και χτυπήστε δυνατά πάνω σε απορροφητικό χαρτί για να αφαιρέσετε και το τελευταίο ίχνος υγρού. f. Προσθέστε περίπου 300 µl Διαλύματος πλύσης σε κάθε βοθρίο. g. Αφαιρέστε το υγρό από τα βοθρία. h. Αντιστρέψτε την πλάκα και χτυπήστε δυνατά πάνω σε απορροφητικό χαρτί για να αφαιρέσετε και το τελευταίο ίχνος υγρού. i. Επαναλάβετε τα βήματα f-h τρεις φορές ακόμα για, σύνολικά, πέντε πλύσεις. j. Μετά τον πέμπτο κύκλο πλύσης, αντιστρέψτε την πλάκα και χτυπήστε δυνατά πάνω σε απορροφητικό χαρτί για να αφαιρέσετε και το τελευταίο ίχνος υγρού. 7. Χρησιμοποιώντας πολυκάναλη πιπέττα ή επαναληπτική πιπέττα, προσθέστε 100 µl Ba Συζεύγματος σε κάθε εκπλυμένο δοκιμαστικό βοθρίο, συμπεριλαμβανομένων και των τυφλών. 8. Επωάστε τις λωρίδες μικροανάλυσης στους 18-26 C για 60 ± 2 λεπτά. 1388EL01 (2011/03) 5

9. Ξεπλύνετε τα βοθρία μικροανάλυσης μετά την επώαση διάρκειας 60 λεπτών (βήμα 8), όπως περιγράφεται στην ενότητα ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ, βήμα 6. 10. Αμέσως μετά την διαδικασία έκπλυσης, προσθέστε 100 µl το TMB Διάλυμα Υποστρώματος σε κάθε βοθρίο, συμπεριλαμβανομένων και των τυφλών. 11. Επωάστε τις λωρίδες μικροανάλυσης στους 18-26 C για 15 ± 1 λεπτά. 12. Προσθέστε 100 µl Διαλύματος Παύσης σε κάθε βοθρίο για να σταματήσετε την ενζυμική αντίδραση. Το Διάλυμα Παύσης πρέπει να προστίθεται στα βοθρία με την ίδια σειρά και την ίδια συχνότητα όπως και το Διάλυμα Υποστρώματος. 13. Χτυπήστε απαλά την πλάκα για να διευκολυνθεί η ομοιόμορφη ανάπτυξη χρώματος. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ιδανικά αποτελέσματα μπορούν να ληφθούν χρησιμοποιωντας την αυτόματη λειτουργία μίξης του φωτομέτρου (auto-mix) πριν την μέτρηση της πλάκας. 14. Προσδιορίστε την ένδειξη απορρόφησης στα 450 nm για κάθε δοκιμαστικό βοθρίο εντός 10 λεπτών μετά από την προσθήκη Διαλύματος Παύσης (βήμα 12), πραγματοποιώντας διόρθωση τυφλού, σύμφωνα με το φασματοφωτομετρικό σύστημα που χρησιμοποιείτε. 15. Υπολογίστε τις απορροφήσεις των δειγμάτων και των Μαρτύρων από την πρότυπη καμπύλη. 16. Απορρίψτε τα εναπομείναντα αραιωμένα διαλύματα, το υπόστρωμα, και τις χρησιμοποιημένες λωρίδες μικροανάλυσης (βλέπε ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ). ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ Το Πιστοποιητικό Ανάλυσης που περιέχεται σε αυτήν τη συσκευασία αναφέρεται σε συγκεκριμένη παρτίδα και χρησιμοποιείται για να επαληθεύσει ότι τα αποτελέσματα που έχετε στο εργαστήριό σας είναι παρόμοια με αυτά που είχε η Quidel Corporation. Οι τιμές οπτικής πυκνότητας που παρέχονται προορίζονται μόνο για καθοδήγηση του χειριστού.. Τα αποτελέσματα που έχετε στο εργαστήριό σας μπορεί να διαφέρουν. Δίδεται το εύρος τιμών για το μάρτυρα ποιότητας. Οι τιμές του μάρτυρα προορίζονται για να επαληθεύσουν την εγκυρότητα της καμπύλης και τα αποτελέσματα των δειγμάτων. Κάθε εργαστήριο πρέπει να δημιουργήσει τις δικές του παραμέτρους για τα επιτρεπτά όρια της αντίδρασης. Εάν οι τιμές του μάρτυρα δεν είναι εντός των εργαστηριακών σας επιτρεπτών ορίων, τα αποτελέσματα της αντίδρασης πρέπει να θεωρηθούν ως αμφισβητήσιμα και τα δείγματα να επανεξεταστούν. ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Χρήση πρότυπης καμπύλης Η πρότυπη καμπύλη για την αντίδραση Ba EIA δημιουργείται χρησιμοποιώντας τις τιμές A450 από τις οποίες έχει αφαιρεθεί το τυφλό για κάθε πρότυπο (στον άξονα y) και της αντίστοιχης συγκέντρωσης για κάθε πρότυπο (στον άξονα x). Μετά τη γραμμική παλινδρόμηση, η δημιουργούμενη πρότυπη καμπύλη πρέπει να ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις επαλήθευσης (βλ. παρακάτω). Οι περισσότεροι υπολογιστές είναι σε θέση να εκτελέσουν τέτοιους υπολογισμούς. Εναλλακτικά, τα δεδομένα μπορεί να σχεδιάζονται με το χέρι και οι τιμές της εξέτασης των δειγμάτων να διαβάζονται απευθείας από την καλύτερα προσαρμοσμένη στην πρότυπη καμπύλη γραμμή. Ένα παράδειγμα μιας τυπικής πρότυπης καμπύλης φαίνεται στην Εικόνα 1. Εικόνα 1: Αντιπροσωπευτική Πρότυπη Καμπύλη 450 A 2,50 2,00 1,50 1,00 0,50 0,00 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 Συγκέντρωση Ba Δείγμα A 450 ng/ml Πρότυπο A 0.000 0 Πρότυπο B 0.052 0.05 Πρότυπο C 0.539 0.52 Πρότυπο D 1.098 1.03 Πρότυπο E 2.176 2.08 r = 1.000 m = 1.05 b = 0.0012 Υπολογισμός της ακριβούς συγκέντρωσης Ba σε Δείγματα εξέτασης Η πραγματική συγκέντρωση του Ba που βρίσκεται σε κάθε μη αραιωμένο δείγμα εξέτασης υπολογίζεται πολλαπλασιάζοντας τη συγκέντρωση Ba ng/ml, που προσδιορίζεται από την Πρότυπη Καμπύλη της συσκευασίας, με το αντίστροφο του χρησιμοποιούμενου συντελεστή αραίωσης του δείγματος. Εάν οι τιμές A450 για μια δεδομένη εξέταση δείγματος είναι μεγαλύτερες από τις υψηλότερες Πρότυπες (E) της συσκευασίας Ba, τα αποτελέσματα πρέπει να αναφερθούν ως «μεγαλύτερα από» τη συγκέντρωση Ba του υψηλότερου Πρότυπου (E) πολλαπλασιασμένα με τον συντελεστή αραίωσης του δείγματος. Αν απαιτείται μια πιο ακριβής συγκέντρωση Ba, το δείγμα πρέπει να επανεξεταστεί χρησιμοποιώντας έναν μεγαλύτερο συντελεστή αραίωσης. Σε όλες τις επαναληπτικές αντιδράσεις, πρέπει να τρέχουν επίσης τα Πρότυπα και οι Μάρτυρες της συσκευασίας Ba. ΕΠΑΛΗΘΕΥΣΗ y = 1,05x + 0,0012 R 2 = 1,00 Προσδιορίστε την κλίση, την τεταγμένη και τον συντελεστή συσχέτισης της προκύπτουσας ευθείας που ταιριάζει καλύτερα στα δεδομένα. Οι τιμές πρέπει να βρίσκονται εντός των ακολούθων ορίων για να γίνει αποδεκτή η ανάλυση: Συντελεστής συσχέτισης (r): 0,98 Κλίση (m): μεταξύ 0,052 και 1,63 y-τεταγμένη (b): μεταξύ (-) 0,05 και 0,05 1388EL01 (2011/03) 6

Αναφερθείτε στις ετικέτες των φιαλιδίων ή του προϊόν C του A για τα μέσα αποδεκτά όρια των τιμών της συγκέντρωσης Ba για τα Ρυθμιστικά Διαλύματα High και Low. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ Το MicroVue Ba Fragment Enzyme Immunoassay έχει χρησιμοποιηθεί για την εξέταση δειγμάτων που συνελέγησαν ως ούρα, ορός ή πλάσμα σε αντιπηκτικά K2 EDTA. Δεν έχουν εξεταστεί άλλα αντιπηκτικά. ΤΙΜΕΣ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Εξετάστηκαν πλάσμα EDTA από τριάντα πέντε (35) ορών από είκοσι εννιά (29) και Ούρα από δεκαέξι (16) φυσιολογικούς δότες με την Ανοσοενζυμική αντίδραση MicroVue Ba. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται παρακάτω. Δείγμα n Μέσος όρος Εύρος EDTA Πλάσμα 35 658 226-2153 Ορός 29 1642 436-3362 Ούρα 16 7.7 0.6-27.0 Σημείωση: Η μέση και τυπική απόκλιση (SD) των συγκεντρώσεων του κλάσματος Ba που προσδιορίζονται σε δείγματα πλάσματος ή ορού μπορεί να ποικίλουν μεταξύ των εργαστηρίων. Συνεπώς, συνιστάται το κάθε εργαστήριο να προσδιορίζει τη μέση τιμή για τη συγκέντρωση του κλάσματος Ba και την τυπική απόκλιση για τα δείγματα. ΑΠΟΔΟΣΗ ΤΟΥ ΤΕΣΤ Όρια LOD: Το όριο ανίχνευσης (LOD) για την αντίδραση Ba είναι 0,011 ng/ml και υπολογίζεται από το ανώτατο 3SD όριο σε μελέτη μηδενικού σταθερού. LLOQ: Το κατώτερο όριο ποσοτικοποίησης (LLOQ) για την αντίδραση Ba είναι 0,033 ng/ml, η κατώτερη συγκέντρωση στην πρότυπη καμπύλη που ανταποκρίνεται στα κριτήρια CLSI για την ακρίβεια και την επαναληψιμότητα. ULOQ: Το ανώτατο όριο ποσοτικοποίησης (ULOQ) για την αντίδραση Ba είναι 3,239 ng/ml, η ανώτατη συγκέντρωση που ανταποκρίνεται στα κριτήρια CLSI για την ακρίβεια και την επαναληψιμότητα. Ουσίες Που Επιδρούν Στην Ανάλυση Τα παρακάτω συστατικά δοκιμάστηκαν στην αντίδραση Ba και βρέθηκε ότι δεν αλληλεπιδρούν με την αντίδραση χρήση πλάσματος ή ορού δειγμάτων: Ουσία Χολερυθρίνη Αιμοσφαιρίνη Τριγλυκερίδια Γλυκόζη Χοληστερίνη Αλβουμίνη γ-σφαιρίνη Συγκέντρωση 40 mg/dl 500 mg/dl 3000 mg/dl 1200 mg/dl 500 mg/dl 6000 mg/dl 6000 mg/dl Τα παρακάτω συστατικά δοκιμάστηκαν στην αντίδραση Ba και βρέθηκε ότι δεν αλληλεπιδρούν με την αντίδραση χρησιμοποιώντας ούρων: Ουσία Ακετόνη Κρεατινίνη Γλυκόζη Χολερυθρίνη Αιμοσφαιρίνη Ουρία Συγκέντρωση 1000 mg/dl 500 mg/dl 2000 mg/dl 0,25 mg/dl 200 mg/dl 6000 mg/dl Τα ακόλουθα συστατικά βρέθηκαν ότι επηρεάζουν την αντίδραση, εάν χρησιμοποιηθούν δείγματα ούρων: Ουσία Αλβουμίνη χλωριούχο νάτριο Συγκέντρωση 340 mg/dl 170 mg/dl Ακρίβεια Η ακρίβεια Intra- και Inter-assay προσδιορίστηκε από την αντίδραση 20 επαναλήψεων σε 1 δείγμα πλάσματος, ενός δείγματος ορού και 2 δειγμάτων ούρων σε 10 διαφορετικές αναλύσεις. Δείγμα Ba Intra Assay 1 Inter-Assay 2 C.V. (%) C.V. (%) EDTA Πλάσμα 376,0 3,3 2,4 Ορός 1111 2,3 8,1 Ούρα 1,925 2,2 7,6 22,98 2,2 3,4 1 n = 20 αντίγραφα 2 n = 10 τρεξίματα Γραμμικότητα Η γραμμικότητα προσδιορίστηκε με τη συνεχή αραίωση δειγμάτων και τη σύγκριση των παρατηρούμενων τιμών με τις αναμενόμενες. Τα τυπικά αποτελέσματα δίνονται παρακάτω: Δείγμα EDTA Πλάσμα Ορός Ούρα Συντελεστής Αραίωσης Παρατηρούμενα 3 Αναμενόμενα 3 Ανάκτηση (%) 1:1000 0,634 0,634 100,0 1:1500 0,424 0,423 100,3 1:2000 0,323 0,317 101,9 1:3000 0,219 0,211 103,6 1:2000 1,464 1,464 100,0 1:3000 0,986 0,976 101,0 1:4000 0,734 0,732 100,3 1:5000 0,580 0,586 99,0 1:15 0,106 0,106 100,0 1:20 0,078 0,0795 98,1 1:25 0,064 0,0636 100,6 1:30 0,058 0,053 109,4 3 Ο συντελεστής αραίωσης δεν περιλαμβάνεται. 1388EL01 (2011/03) 7

Ανάκτηση Ακίδα Η ανάκτηση ακίδα πραγματοποιήθηκε με τον εμβολιασμό των δειγμάτων με γνωστή ποσότητα καθαρού Ba και τη σύγκριση των παρατηρούμενων τιμών με τις αναμενόμενες. Δείγμα Ba Ακίδα Αποτέλεσμα Ανάκτηση (%) Πλάσμα 1 593,1 857,8 103,8 Πλάσμα 2 356,6 233,3 646,4 109,6 Πλάσμα 3 590,0 845,5 102,7 Ορός 1 1194 1664 99,0 Ορός 2 2088 486,4 2648 102,8 Ορός 3 2497 2953 99,0 Ούρα 1 1,115 4,026 92,5 Ούρα 2 1,711 3,237 4,891 98,8 Ούρα 3 21,37 23,97 97,4 ΒΟΗΘΕΙΑ Για παραγγελίες ή για την τεχνική βοήθεια, παρακαλώ επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο. Πρόσθετες πληροφορίες για την Quidel, τα προϊόντα μας και τους αντιπροσώπους μας μπορούν να βρεθούν στον ιστοχώρο μας: www.quidel.com. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. Wan, K.C, W.H.P Lewis, P.C. Leung, P. Chien, and L.K. Hung. 1998. A longitudinal study of C3, C3d and factor Ba in burn patients in Hong Kong. BURNS 24(3):241-44. 2. Sundsmo, J., J. Chin, R. Papin, D. Fair, and Z Werb. 1985. Factor B, The complement alternative pathway serine proteinase, is a major constitutive protein synthesized and secreted by resident and elicited mouse macrophages. J EXP MED 161:306-22. 3. Ueda, A., J. Kearney, K. Roux, and J. Volanakis. 1986. Probing functional sites on complement protein B with monoclonal antibodies. J IMMUNOLOGY 138(4):1143-49. 4. Ambrus, J., M. Peters, A. Fauci, and E. Brown. 1990 The Ba fragment of complement factor B inhibits human B lymphocyte proliferation. J IMMUNOLOGY 144(5):1549-53. 5. Schreiber, R.D. and H.J. Müller-Eberhard. 1980. New developments in the activation of the alternative pathway of complement. In IMMUNOASSAYS: CLINICAL LABORATORY TECHNIQUES FOR THE 1980 S. Alan R. Liss, Inc., New York. 411-31. 6. Gotze, 0. and H.J. Müller-Eberhard. 1976. The alternative pathway of complement activation. ADV IMMUNOL 24:1-35. 7. Fearon, D.T. and K.F. Austen. 1980. Current concepts in immunology: the alternative pathway of complement a system for host resistance to microbial infection. NEW ENGL J MED 303:259-63. 8. Pangburn, M.K. and H.J. Müller-Eberhard. 1984. The alternative pathway of complement. SPRINGER SEMIN IMMUNOPATHOL 7:163-92. 9. Ratnoff, W.E., D.T. Fearon, and K.F. Austen. 1983. The role of antibody in the activation of the alternative complement pathway. SPRINGER SEMIN IMMUNOPATHOL 6:361-71. 10. Hugli, T.E. 1986. Biochemistry and biology of anaphylatoxins. COMPLEMENT 3:111-27. 11. Fearon, D.T. and K.F. Austen. 1977. Activation of the alternative complement pathway due to resistance of zymosan-bound amplification convertase to endogenous regulatory mechanisms. PROC NATL ACAD SCI (USA). 74(4):1683-87. 12. Fearon, D.T. 1979. Regulation of the amplification C3 convertase of human complement by an inhibitory protein isolated from human erythrocyte membrane. PROC NATL ACAD SCI (USA). 76(11):5867-71. 13. Fishelson, Z. and H.J. Müller-Eberhard. 1984. Residual hemolytic and proteolytic activity expressed by Bb after decay-dissociation of C3b, Bb. J IMMUNOL 132(3):1425-29. 14. Gotze, O., C. Bianco, and Z.A. Cohn. 1979. The induction of macrophage spreading by Factor B of the properdin system. J EXP MED 149:372-86. 15. Kolb, W.P., P.R. Morrow, and J.D. Tamerius. 1989. Ba and Bb Fragments of Factor B activation: Fragment production, biological activities, neoepitope expression and quantitation in clinical samples. COMPLEMENT AND INFLAMMATION 6(3):175-204. 1388EL01 (2011/03) 8

16. Sefton, M.V., et al. 1994. Using ELISA to evaluate complement activation by reference biomaterials J MAT SCI 5:622-27. 17. Mold, C., J.D. Tamerius, et al. 1995. Complement activation during painful crisis in sickle cell anemia. CLINICAL IMMUNOLOGY AND IMMUNOPATHOLOGY 70(3):314-20. 18. Manzi, S., J. Rairie, et al. 1996. Sensitivity and Specificity of plasma and urine complement split products as indicators of lupus disease activity. ARTHRITIS AND RHEUMATISM 39(7):1178-88. 19. Buyon, J, J. Tamerius, et al. 1992. Assessment of Disease activity and impending flare in patients with systemic lupus erythematosus. ARTHRITIS AND RHEUMATISM 35(9):1028-36. 20. Oppermann, M., C. Kurts, R. Zierz, E. Quentin, M. Weber, and O. Gotze. 1991. Elevated plasma levels of the immunosuppressive complement fragment Ba in renal failure. INTL SOC NEPHROLOGY 40:939-47. 21. Pryzdial, E. and D. Isenman. 1987. Alternative complement pathway activation fragment Ba binds to C3b. JBC 262(4):1519-25. 22. Buyon, J., J. Tamerius, S. Ordorcia, B. Young, and S. Abramson. 1992. Activation of the alternative complement pathway accompanies disease flares in systemic lupus erythematosus during pregnancy. ARTH AND RHEUM 35(1):56-61. 23. U.S. Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. 2007. BIOSAFETY IN MICROBIOLOGICAL AND BIOMEDICAL LABORATORIES (BMBL) 5th Edition. Washington: U.S. Government Printing Office. http://www.cdc.gov/od/ohs/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm 24. Mollnes, T.E., P. Garred, and G. Bergseth. 1988. Effect of time, temperature and anticoagulants on in vitro complement activation: Consequences for collection and preservation of samples to be examined for complement activation. CLIN EXP IMMUNOLOGY 73:484-488. 25. Centers for Disease Control. 1987. Recommendations for prevention of HIV transmission in health-care settings. MMWR. 36 (suppl. No. 2S):001. ΓΛΩΣΣΆΡΙΟ Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης στο CDROM Προοριζομενη Χρηση A034 Ba EIA Kit MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover, Germany 1388EL01 (2011/03) 9