ΣΥΣΤΗΜΑ ΠΛΑΣΜΙΝΗΣ-ΠΛΑΣΜΙΝΟΓΟΝΟΥ Φυσιολογία Γαλακτοπαραγωγής & Αναπαραγωγής 6 ο Εξάμηνο ΕΖΠΥ Διδάσκων: Θεοδώρου Γεώργιος
Το σύστημα Πλασμίνης - Πλασμινογόνου Αποτελείται από 1. Πλασμινογόνο (ΠΓ) 2. Πλασμίνη (ΠΛ) 3. Ενεργοποιητές πλασμινογόνου (ΕΠ) 4. Αναστολείς ενεργοποιητών πλασμινογόνου (AΕΠI) 5. Αναστολείς πλασμίνης (ΑΠΛ)
Σύστημα πλασμίνης - πλασμινογόνου ΕΠ-Ι ΕΠ-Ο ΑΕΠ-1 ΑΕΠ-2 Πλασμινογόνο Πλασμίνη Πρωτεόλυση
Μετατροπή του Πλασμινογόνου σε Πλασμίνη Το Asp-ΠΓ μετατρέπεται σε Arg-ΠΓ με τη διάσπαση της πολυπεπτιδικής αλυσίδας στο δεσμό Lys77-Arg78 υπό την καταλυτική δράση της πλασμίνης Απελευθέρωση πεπτιδίου προ-ενεργοποίησης Διάσπαση του πεπτιδικού δεσμού Arg557-Ile558 από τη δράση των ΕΠ
Ενεργοποιητές Πλασμινογόνου 2 τύποι ενεργοποιητών: τύπου ουροκινάσης (u-pa) ιστικού τύπου (t-pa) Πρωτεϊνάσες τύπου σερίνης
Ενεργοποιητές Πλασμινογόνου Η ενεργότητά τους αυξάνεται όταν μετατρέπονται σε πρωτεΐνες διπλής αλυσίδας Ο ΕΠ-Ο έχει ειδικό υποδοχέα η πρόσδεση στον οποίο αυξάνει κατά πολύ την ενεργότητά του Ο ΕΠ-Ι δεν έχει ειδικό υποδοχέα. Συνδέεται σε χαμηλής πυκνότητας λιποπρωτεϊνικούς υποδοχείς οι οποίοι όμως, εκτός από τον ΕΠ-Ι, δεσμεύουν και τον ΕΠ-Ο και τον ΑΕΠ-1. Συνδέεται και με το ινοδωγόνο και τότε αυξάνει κατά πολύ την ενεργότητά του
Αναστολείς Ενεργοποιητών Πλασμινογόνου 2 τύποι, ο ΑΕΠ-1 και ο ΑΕΠ-2 Ανήκουν στην οικογένεια των σερπινών Η δράση του ΑΕΠ-1 εξαρτάται από δύο συμπαράγοντες, την βιτρονεκτίνη, που τον διατηρεί σταθερό στην ενεργό του μορφή και την ηπαρίνη που ενισχύει την ενεργότητά του απέναντι στην θρομβίνη. Ο ΑΕΠ-1 έχει ανασταλτική δράση κατά αμφοτέρων των ΕΠ Ο ΑΕΠ-2 έχει ανασταλτική δράση κατά του ΕΠ-Ο και κατά του ΕΠ-Ι μόνο ως προς τη μορφή της διπλής αλυσίδας, όχι κατά της μορφής της μονής αλυσίδας
Αναστολείς Πλασμίνης Ειδικός αναστολέας της Πλασμίνης: η α2 αντιπλασμίνη (α2-απ). Είναι σερπίνη Αναστέλλει τη δράση της ΠΛ όταν είναι ελεύθερη στο αίμα και στο γάλα. Η δράση της περιορίζεται σημαντικά όταν η ΠΛ προσδεθεί στο ινωδογόνο Άλλοι αναστολείς: ο α2-μγ και ο ΠΝ-1 οι οποίοι δεν είναι ειδικοί (καταλύουν διάφορες πρωτεϊνάσες μεταξύ των οποίων και η ΠΛ)
Παράγοντες που επηρεάζουν το Σύστημα ΠΛ-ΠΓ 1. Συχνότητα Άμελξης 2. Αριθμός Γαλουχίας 3. Στάδιο Γαλακτικής Περιόδου 4. Υγιεινή κατάσταση του μαστού (Αριθμός Σωματικών Κυττάρων) 5. Φυλή 6. Σύνθεση Γάλακτος
Υγιεινή Κατάσταση του Μαστού Παρόμοια εικόνα και στα τρία είδη (αγελάδες, πρόβατα, αίγες) Αύξηση SCC αύξηση της ενεργότητας της ΠΛ Η υψηλή ενεργότητα της ΠΛ παραμένει και μετά την εξάλειψη της μόλυνσης Το εύρημα αυτό συνάδει με τα αυξημένα επίπεδα ΠΛ στα ζώα μεγαλύτερης ηλικίας που έχουν εμφανίσει μαστίτιδα περισσότερες φορές στη ζωή τους
Φυλή Παράγοντας που επηρεάζει την ενεργοποίηση του συστήματος και στις αγελάδες αλλά περισσότερο στα πρόβατα (Albenzio et al., 2004 και Bianchi et al., 2004) Υψηλότερη ενεργότητα της ΠΛ για τις αγελάδες Holstein-Friesian από ό,τι για τις αγελάδες Jersey κατά τη διάρκεια της γαλουχίας (Richardson, 1983)
Σύνθεση Γάλακτος Αρνητική συσχέτιση ανάμεσα στην ΠΛ και την περιεκτικότητα του γάλακτος σε καζεΐνες. Το ίδιο ισχύει και για τον ΕΠ Θετική συσχέτιση ανάμεσα στην ΠΛ και τη συνολική περιεκτικότητα του γάλακτος σε πρωτεΐνες Θετική συσχέτιση έχει καταγραφεί και ανάμεσα στην ΠΛ και τον ΕΠ από τη μία και το ph του γάλακτος από την άλλη
Μέθοδος προσδιορισμού ΠΛ-ΠΓ-ΕΠ σε δείγματα γάλακτος Το αρχικό βήμα είναι η αποδέσμευση των ΠΛ, ΠΓ και ΕΠ από τα μικύλλια της καζεΐνης Αυτό επιτυγχάνεται με την επώαση του δείγματος με e-amino caproic acid (EACA) σε συγκέντρωση 0.1 Μ (2 h σε RT) Στη συνέχεια χρησιμοποιείται φυγοκέντρηση για την κατακρήμνιση των καζεϊνών και την ανάκτηση του ορού του γάλακτος >20.000g για τουλάχιστον 20 λεπτά.
Μέθοδος προσδιορισμού ΠΛ-ΠΓ-ΕΠ σε δείγματα γάλακτος Κεντρικό ρόλο στον προσδιορισμό των «ενεργοτήτων» των παραπάνω ενζύμων παίζει το τριπεπτίδιο Val-Leu-Lys το οποίο συντίθεται συζευγμένο με ένα χρωμοφόρο την p- nitroanilide Val-Leu-Lys-p-nitroanilide 405 nm p-nitroaniline
Μέθοδος προσδιορισμού ΠΛ-ΠΓ-ΕΠσε δείγματα γάλακτος Προσθήκη εξωγενούς u-pa Val-Leu-Lys-p-nitroanilide 405 nm p-nitroaniline
Μέθοδος προσδιορισμού ΠΛ-ΠΓ-ΕΠσε δείγματα γάλακτος Προσθήκη εξωγενούς ΠΓ Val-Leu-Lys-p-nitroanilide 405 nm p-nitroaniline
Μέθοδος προσδιορισμού ΠΛ-ΠΓ-ΕΠ σε δείγματα γάλακτος Ο προσδιορισμός των ενεργοτήτων των ενζύμων αυτών γίνεται με βάση πρότυπη καμπύλη γνωστών συγκεντρώσεων καθαρής πλασμίνης η οποία προστίθεται σε κελιά που δεν περιέχουν δείγμα