Syphilis Total Ab 1 πλάκα - 96 72530 5 πλάκες - 480 72531

Syphilis Total Ab 1 πλάκα - 96 72530 5 πλάκες - 480 72531 ΚΙΤ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΟΙΟΤΙΚΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΟΣ ΕΝΑΝΤΙ ΤΟΥ TREPONEMA PALLIDUM ΣΤΟΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ Ή ΤΟ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΠΛΑΣΜΑ ΜΕ ΧΡΗΣΗ ΤΕΧΝΙΚΗΣ ΑΝΟΣΟΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΔΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 883679-11/2014

ΠΙΝΑΚΑΣ ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΩΝ 1. ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ... 2 2. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ... 2 3. ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ... 2 4. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ... 3 5. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ... 4 6. ΔΕΙΓΜΑΤΑ... 6 7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ... 6 8. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ... 9 9. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ... 10 10. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ.... 12 [GR] 1

1. ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Αυτά τα κιτ προορίζονται για από κατάλληλα εκπαιδευμένο και ειδικευμένο προσωπικό για την ποιοτική ανίχνευση αντισωμάτων έναντι του Treponema pallidum στον ανθρώπινο ορό ή το ανθρώπινο πλάσμα. Το προϊόν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον έλεγχο αιμοδοτών και να συμβάλει στη διάγνωση ασθενών για τους οποίους υπάρχει υποψία μόλυνσης από σύφιλη. 2. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Η σύφιλη είναι μια χρόνια λοίμωξη που εξελίσσεται σε διακριτά στάδια μόλυνσης: πρωτογενές, δευτερογενές, τριτογενές και τεταρτογενές. Αυτά τα στάδια συνοδεύονται από διάφορα κλινικά συμπτώματα, τα οποία δημιουργούν συνήθως αρχικά έλκη, γνωστά ως συφιλιδικά έλκη, και εν συνεχεία συφιλιδικά εξανθήματα που ακολουθούνται από μακροχρόνιες περιόδους λανθάνουσας κατάστασης. Εάν η λοίμωξη δεν αντιμετωπιστεί, ενδέχεται να έχει ως αποτέλεσμα την εμφάνιση καρδιαγγειακών προβλημάτων και νευρικής σύφιλης. Η λοίμωξη προκαλείται από τη σπειροχαίτη Treponema pallidum, και μεταδίδεται κυρίως μέσω σεξουαλικής επαφής, παρόλο που η ασθένεια μπορεί να μεταδοθεί μέσω μετάγγισης μολυσμένου αίματος. Είναι επίσης δυνατή η ενδομήτρια μόλυνση. Η καλλιέργεια του οργανισμού σε τεχνητά μέσα έχει αποδειχθεί σχεδόν αδύνατη και η διάγνωση της λοίμωξης συνήθως εξαρτάται από τη διαπίστωση της παρουσίας αντισωμάτων στο αίμα, τα οποία εμφανίζονται σύντομα μετά την αρχική μόλυνση και ενδέχεται να εξακολουθήσουν να υπάρχουν για πολλά χρόνια. Οι εξετάσεις για τη σύφιλη χωρίζονται σε τέσσερις κατηγορίες: άμεση εξέταση στο μικροσκόπιο, εξετάσεις για αντισώματα έναντι τρεπονήματος, εξετάσεις για αντισώματα διαφορετικά από αυτά έναντι του τρεπονήματος και άμεσες εξετάσεις αντιγόνων. Λόγω των μακροχρόνιων περιόδων λανθάνουσας κατάστασης και της μη συγκεκριμένης φύσης των εξετάσεων για αντισώματα διαφορετικά από αυτά έναντι του τρεπονήματος, οι μέθοδοι που ανιχνεύουν συγκεκριμένα αντισώματα έναντι του τρεπονήματος στα δείγματα αίματος γίνονται ολοένα δημοφιλέστερες στους σχετικούς ελέγχους. Μία από αυτές τις εξετάσεις είναι η Syphilis Total Ab. 3. ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η Syphilis Total Ab χρησιμοποιεί τρία ανασυνδυασμένα αντιγόνα σε μια δοκιμασία τύπου "σάντουιτς". Τα αντιγόνα ανιχνεύουν αντισώματα IgG, IgM και IgA που υποδεικνύουν συγκεκριμένα την παρουσία του T. pallidum, επιτρέποντας την ανίχνευση αντισωμάτων από την εξέταση καθ' όλα τα στάδια της λοίμωξης. Οι κοιλότητες επικαλύπτονται με ένα μίγμα ανασυνδυασμένων αντιγόνων 15Kd, 17Kd και 47Kd T. pallidum. Συγκεκριμένα αντισώματα στα δείγματα ορού ή πλάσματος συνδυάζονται με αυτά τα αντιγόνα και με τα ίδια αντιγόνα συζευγμένα με υπεροξειδάση της αγριοραπανίδας, όταν προστίθεται συζυγές σε μια κοιλότητα στην οποία έχει επωαστεί το δείγμα. Αφού το υλικό που δεν παρουσίασε αντίδραση αφαιρεθεί μέσω έκπλυσης, η παρουσία δεσμευμένου ενζύμου, η οποία υποδεικνύει την παρουσία συγκεκριμένων αντισωμάτων στο δείγμα, καταδεικνύεται από μια αλλαγή χρώματος στο χρώμα υποστρώματος χρωμογόνου. Η χρωματική ένταση συγκρίνεται με αυτή στις κοιλότητες ελέγχου, προκειμένου να καθοριστεί η παρουσία ή απουσία συγκεκριμένων αντισωμάτων. [GR] 2

4. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ 4.1. Περιγραφή Αναγνωριστικά στοιχεία ετικέτας R1 R2 R3 R4 R6 Microplate Concentrated Washing Solution (20X) Negative control Positive control Conjugate Περιγραφή Μικροπλάκα 12 ταινίες 8 κοιλοτήτων η καθεμία, επικαλυμμένες με ανασυνδυασμένα αντιγόνα (rag) T. pallidum Ειδικός αναγνωριστικός αριθμός = 97 Συμπυκνωμένο διάλυμα έκπλυσης (20X) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris NaCl ph 7,4 Συντηρητικό: ProClin 300 (0,04%) Δείγμα ελέγχου αρνητικού Ρυθμιστικό διάλυμα Tris που περιέχει BSA (Αλβουμίνη βόειου ορού) Συντηρητικό: ProClin 300 (0,1%) Δείγμα ελέγχου θετικού (άνθρωπος) Ανθρώπινος ορός που περιέχει αντισώματα έναντι του T.pallidum αρνητικός για HIV1/2, HBs Ag και HCV, αραιωμένος σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris που περιέχει BSA (Αλβουμίνη βόειου ορού) Συντηρητικό: ProClin 300 (0,1%) Συζυγές T.pallidum rag / Υπεροξειδάση Συντηρητικό: ProClin 300 (0,05%) Παρουσίαση / προετοιμασία 72530 1 πλάκα 70 ml Προς αραίωση 2,1 ml 1,6 ml 8 ml Παρουσίαση / προετοιμασία 72531 5 πλάκες 235 ml Προς αραίωση 2,1 ml 1,6 ml 30 ml R8 Substrate buffer Ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος Διάλυμα κιτρικού οξέος και οξικού νατρίου με ph 4,0, το οποίο περιέχει H 2 O 2 (0,015%) και DMSO (4%) 60 ml Προς ανασύσταση 60 ml Προς ανασύσταση R9 R10 Chromogen: TMB solution (11X) Stopping solution Χρωμογόνο: Διάλυμα TMB (ροζ) Διάλυμα που περιέχει 3,3, 5,5 τετραμεθυλική βενζιδίνη (TMB) Ανασχετικό διάλυμα Διάλυμα θειικού οξέος (H 2 SO 4 1N) 5 ml Προς αραίωση 28 ml 5 ml Προς αραίωση 28 ml 4.2. Απαιτήσεις αποθήκευσης και χειρισμού Αυτό το κιτ θα πρέπει να αποθηκεύεται στους +2-8 C. Κάθε στοιχείο του κιτ το οποίο διατηρείται στους +2-8 C μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στη συσκευασία (εκτός εάν υποδεικνύεται κάτι διαφορετικό). Μετά το άνοιγμα και εφόσον δεν υπάρχει επιμόλυνση, τα αντιδραστήρια R3, R4, R6, R8, R9 και R10 που διατηρούνται στους +2-8 C μπορούν να χρησιμοποιηθούν έως την ημερομηνία λήξης που υποδεικνύεται στην ετικέτα. [GR] 3

Αναγνωριστικά στοιχεία R1 R2 R8+R9 Διατήρηση Μετά το άνοιγμα της σφραγισμένης σε κενό αέρος σακούλας, οι ταινίες με τις μικροκοιλότητες που θα αποθηκευτούν στους +2-8 C μπορούν να χρησιμοποιηθούν για 1 μήνα στην αρχική τους σακούλα, εφόσον αυτή σφραγιστεί προσεκτικά. Το αραιωμένο διάλυμα έκπλυσης μπορεί να αποθηκευτεί στους +2-30 C για 2 εβδομάδες. Το συμπυκνωμένο διάλυμα έκπλυσης (R2) μπορεί να αποθηκευτεί στους +2-30 C. Μετά την ανασύσταση, τα αντιδραστήρια που έχουν αποθηκευτεί στο σκοτάδι μπορούν να χρησιμοποιηθούν για 6 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). 5. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Για διαγνωστική in vitro. Για από επαγγελματίες στον χώρο της υγειονομικής περίθαλψης. 5.1. Προφυλάξεις υγείας και ασφαλείας: Ο χειρισμός του παρόντος κιτ εξέτασης θα πρέπει να διεξάγεται μόνο από ειδικευμένο προσωπικό, καταρτισμένο στις εργαστηριακές διαδικασίες και εξοικειωμένο με τους δυνητικούς κινδύνους τους. Φορέστε κατάλληλο προστατευτικό ρουχισμό, γάντια και προστατευτικά για τα μάτια/το πρόσωπο και χειριστείτε τον εξοπλισμό σύμφωνα με την απαιτούμενη Ορθή Εργαστηριακή Πρακτική. Το κιτ εξέτασης περιέχει στοιχεία ανθρώπινου αίματος. Τα υλικά ανθρώπινης προέλευσης τα οποία χρησιμοποιούνται για την προετοιμασία του αντιδραστηρίων έχουν δοκιμαστεί και βρεθεί μη αντιδραστικά στο επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας B (HBs Ag), στα αντισώματα ενάντια στους ιούς ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV-1 και HIV-2) και στα αντισώματα ενάντια στον ιό της ηπατίτιδας C (HCV). Καμία γνωστή μέθοδος εξέτασης δεν μπορεί να εξασφαλίσει την πλήρη απουσία μολυσματικών παραγόντων. Για τον λόγο αυτό, η διαχείριση όλων των παραγώγων του ανθρώπινου αίματος, των αντιδραστηρίων και των ανθρώπινων δειγμάτων θα πρέπει να γίνεται ως ικανών να μεταδώσουν μολυσματικές ασθένειες, ακολουθώντας τις συνιστώμενες Γενικές Προφυλάξεις για μεταδιδόμενα διά του αίματος παθογόνα, όπως αυτές ορίζονται από τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Εκχύσεις βιολογικών υλικών: Οι εκχύσεις υλικών ανθρώπινης προέλευσης θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως δυνητικά μολυσματικές. Οι εκχύσεις που δεν περιέχουν οξύ θα πρέπει να απολυμανθούν άμεσα, μαζί με την περιοχή έκχυσης, τα υλικά και όλες τις επιμολυσμένες επιφάνειες ή τον εξοπλισμό, με κατάλληλο χημικό απολυμαντικό το οποίο είναι αποτελεσματικό για δυνητικά βιολογικά επικίνδυνα υλικά που σχετίζονται με τα χρησιμοποιούμενα δείγματα (συνήθως χλωρίνη οικιακής ς αραίωσης 1:10, 70-80% αιθανόλη ή ισοπροπανόλη, κάποιο ιωδοφόρο [όπως 0,5% Wescodyne Plus] κλπ.) και να σκουπιστούν καλά. Οι εκχύσεις που περιέχουν οξύ θα πρέπει να απορροφηθούν κατάλληλα (να σκουπιστούν) ή να εξουδετερωθούν, ενώ η περιοχή πρέπει να καθαριστεί καλά με νερό και να σκουπιστεί τελείως. Τα υλικά που χρησιμοποιήθηκαν για την απορρόφηση της έκχυσης ενδεχομένως να πρέπει να απορριφθούν ως βιολογικά επικίνδυνα απόβλητα. Στη συνέχεια, η περιοχή θα πρέπει να απολυμανθεί με κάποιο χημικό απολυμαντικό. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μην τοποθετείτε διαλύματα που περιέχουν χλωρίνη μέσα στο αυτόκλειστο! Απορρίπτετε όλα τα δείγματα και τα υλικά που χρησιμοποιούνται για τη διεξαγωγή της εξέτασης θεωρώντας ως εάν περιείχαν μολυσματικό παράγοντα. Η διαχείριση και η απόρριψη των εργαστηριακών, των χημικών και των βιολογικά επικίνδυνων αποβλήτων πρέπει να γίνεται σύμφωνα με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. [GR] 4

Για συστάσεις αναφορικά με τους κινδύνους και τις προφυλάξεις που σχετίζονται με κάποια χημικά συστατικά αυτού του κιτ εξέτασης, ανατρέξτε στα εικονογραφήματα που αναφέρονται στις ετικέτες και στις πληροφορίες που παρέχονται στο τέλος των οδηγιών ς. Το Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας διατίθεται στη διεύθυνση www.bio-rad.com. 5.2. Προφυλάξεις ως προς τη διαδικασία 5.2.1. Προετοιμασία Η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων εξαρτάται από τη σωστή εφαρμογή της παρακάτω Ορθής Εργαστηριακής Πρακτικής: Μην χρησιμοποιείτε αντιδραστήρια που έχουν λήξει. Μην αναμιγνύετε ή συσχετίζετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες σε μία εκτέλεση της εξέτασης. Πριν από τη, περιμένετε 30 λεπτά μέχρι τα αντιδραστήρια να σταθεροποιηθούν σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). Η ονομασία της εξέτασης, καθώς και ο ειδικός αναγνωριστικός αριθμός για την εξέταση, αναγράφονται στο πλαίσιο της κάθε μικροπλάκας. Αυτός ο ειδικός αναγνωριστικός αριθμός είναι επίσης τυπωμένος σε κάθε ταινία. Syphilis Total Ab: Ειδικός αναγνωριστικός αριθμός = 97 Επαληθεύστε τον ειδικό αναγνωριστικό αριθμό πριν από τη. Εάν ο αναγνωριστικός αριθμός λείπει ή είναι διαφορετικός από τον αναγραφόμενο αριθμό που αντιστοιχεί στην προς εξέταση δοκιμασία, η ταινία δεν θα πρέπει να χρησιμοποιείται. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για το διάλυμα έκπλυσης (R2, αναγνωριστικό στοιχείο ετικέτας: 20Χ, πράσινου χρώματος), το ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος υπεροξειδάσης (R8, αναγνωριστικό στοιχείο ετικέτας: ρυθμιστικό διάλυμα TMB, μπλε χρώματος), το χρωμογόνο (R9, αναγνωριστικό στοιχείο ετικέτας: TMB 11X., μοβ χρώματος) και το ανασχετικό διάλυμα (R10, αναγνωριστικό στοιχείο ετικέτας: 1N, κόκκινου χρώματος), είναι δυνατή η άλλων παρτίδων εκτός εκείνων που περιέχονται στο κιτ, με την προϋπόθεση ότι χρησιμοποιείται μόνο η ίδια παρτίδα κατά τη διάρκεια της ίδιας εκτέλεσης της εξέτασης. Αυτά τα αντιδραστήρια μπορούν να χρησιμοποιηθούν και με ορισμένα άλλα προϊόντα της εταιρείας μας. Για περισσότερες πληροφορίες, επικοινωνήστε με την τεχνική εξυπηρέτησή μας. Διεξάγετε προσεκτικά την ανασύσταση των αντιδραστηρίων, αποφεύγοντας τυχόν επιμόλυνση. Χρησιμοποιείτε γυάλινα είδη καλά πλυμένα και ξεπλυμένα με απιονισμένο νερό ή, κατά προτίμηση, υλικά μίας ς. Μην αφήνετε τη μικροπλάκα να στεγνώσει κατά το διάστημα μεταξύ της ολοκλήρωσης της έκπλυσης και της έναρξης κατανομής των αντιδραστηρίων. Η ενζυμική αντίδραση είναι εξαιρετικά ευαίσθητη στα ιόντα μετάλλων. Κατά συνέπεια, κανένα μεταλλικό στοιχείο δεν πρέπει να έρχεται σε επαφή με τα διάφορα διαλύματα που περιέχουν συζυγή ή υπόστρωμα. Το διάλυμα ανάπτυξης (ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος + χρωμογόνο) πρέπει να χρωματιστεί ροζ. Η αλλαγή αυτού του ροζ χρώματος λίγα λεπτά μετά την ανασύσταση υποδεικνύει ότι το αντιδραστήριο δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί και πρέπει να αντικατασταθεί. Η προετοιμασία του διαλύματος ανάπτυξης μπορεί να πραγματοποιηθεί σε έναν καθαρό πλαστικό υποδοχέα ή γυάλινο δοχείο μίας ς που έχει προηγουμένως πλυθεί με 1N HCl, ξεπλυθεί προσεκτικά με απεσταγμένο νερό και στεγνωθεί. Αυτό το αντιδραστήριο θα πρέπει να φυλάσσεται μακριά από το φως. Ποτέ μην χρησιμοποιείτε το ίδιο δοχείο για να κατανείμετε το συζυγές και το διάλυμα ανάπτυξης. 5.2.2. Επεξεργασία Μην αλλάζετε τη διαδικασία της δοκιμασίας. Μην διεξάγετε την εξέταση παρουσία αντιδραστικών υδρατμών (οξέα, αλκαλικά, αλδεΰδες) ή κόνεων που θα μπορούσαν να αλλοιώσουν την ενζυμική δραστηριότητα του συζυγούς. Χρησιμοποιείτε νέο ρύγχος κατανομής για κάθε δείγμα. Η έκπλυση των κοιλοτήτων αποτελεί κρίσιμο στάδιο της διαδικασίας: Τηρείτε τον συνιστώμενο αριθμό κύκλων έκπλυσης και βεβαιωθείτε ότι όλες οι κοιλότητες γεμίζουν πλήρως και, στη συνέχεια, εκκενώνονται πλήρως. Η ανεπαρκής έκπλυση μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή αποτελέσματα. [GR] 5

Ακολουθήστε προσεκτικά τις διαδικασίες έκπλυσης που περιγράφονται, για να εξασφαλίσετε τη βέλτιστη απόδοση της εξέτασης. Με κάποια όργανα, ενδέχεται να απαιτείται η βελτιστοποίηση της διαδικασίας έκπλυσης (αύξηση του αριθμού των κύκλων του σταδίου της έκπλυσης και/ή του όγκου του ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης για κάθε κύκλο), προκειμένου να επιτευχθεί ένα αποδεκτό επίπεδο φόντου OD για το αρνητικό δείγμα. Για προσαρμογές και ειδικές διαδικασίες, επικοινωνήστε με την εταιρεία μας. 6. ΔΕΙΓΜΑΤΑ Συλλέξτε ένα δείγμα αίματος σύμφωνα με τις τρέχουσες πρακτικές. Οι εξετάσεις πρέπει να πραγματοποιούνται επί μη αραιωμένων δειγμάτων ορού ή πλάσματος (τα οποία έχουν συλλεχθεί με EDTA, κιτρικό νάτριο, νατριούχο ηπαρίνη ή ACD) Τα δείγματα τα οποία περιέχουν συσσωματώματα πρέπει να καθαρίζονται με φυγοκέντρηση πριν από την εξέταση. Τα δείγματα θα πρέπει να αποθηκεύονται στους +2-8 C, εάν η εξέταση πρόκειται να διεξαχθεί εντός 7 ημερών, ή στους -20 C για μεγαλύτερες περιόδους. Μην επαναλαμβάνετε περισσότερους από 5 κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Μπορούν να χρησιμοποιηθούν δείγματα που έχουν υποβληθεί σε θερμική επεξεργασία στους 56 C για 1/2 ώρα. Τα δείγματα που περιέχουν έως 120 g/l αλβουμίνης, 200 mg/l χολερυθρίνης, 33 g/l τριελαΐνης ή 2 g/l αιμογλοβίνης δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα. Ωστόσο, δεν συνιστάται η υπερλιπαιμικού ορού ή πλάσματος ή ορού ή πλάσματος που έχει υποστεί υπεραιμόλυση. Τα δείγματα θα πρέπει να έχουν αποψυχθεί και να είναι καλά αναμεμιγμένα πριν από την εξέταση. Εάν τα δείγματα πρόκειται να μεταφερθούν, πρέπει να συσκευάζονται σύμφωνα με τους κανονισμούς που ισχύουν σχετικά με τη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων και, κατά προτίμηση, να μεταφέρονται κατεψυγμένα. 7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ 7.1. Απαιτούμενα υλικά που δεν παρέχονται Απεσταγμένο νερό. Υποχλωριώδες νάτριο (χλωρίνη οικιακής ς) και διττανθρακικό νάτριο. Απορροφητικό χαρτί. Γάντια μίας ς. Προστατευτικά γυαλιά. Σωλήνες μίας ς. Αυτόματες ή ημιαυτόματες, ρυθμιζόμενες ή σταθερές πιπέτες ή πολυκάναλες πιπέτες που μπορούν να μετρούν και να χορηγούν 50 μl, 1 ml και 10 ml. Βαθμονομημένοι κύλινδροι χωρητικότητας 100 ml και 1 L. Σύστημα έκπλυσης μικροπλακών, αυτόματο, ημιαυτόματο ή χειροκίνητο (*). Eπωαστήρας μικροπλακών, με ρύθμιση θερμοκρασίας στους 37 C ±1 C (*). Δοχείο βιολογικά επικίνδυνων αποβλήτων. Αναγνώστης μικροπλακών εξοπλισμένος με φίλτρα 450, 490 nm και 620-700 nm (*). (*) Επικοινωνήστε μαζί μας για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τον εξοπλισμό που συνιστάται από το τεχνικό μας τμήμα. 7.2. Προετοιμασία αντιδραστηρίων 7.2.1. Αντιδραστήρια έτοιμα προς Αντιδραστήριο 1 (R1): Μικροπλάκα Κάθε πλαίσιο στήριξης που περιέχει 12 ταινίες είναι τυλιγμένο σε αεροστεγή συσκευασία. Ανοίξτε τη συσκευασία κόβοντας με το ψαλίδι ή με ένα νυστέρι 0,5 έως 1 εκ. πάνω από το σημείο σφράγισης. Ανοίξτε τη συσκευασία και αφαιρέστε το πλαίσιο. Επανατοποθετήστε τις μη χρησιμοποιημένες ταινίες στη συσκευασία. Κλείστε προσεκτικά τη συσκευασία και επανατοποθετήστε τη στη φύλαξη στους +2-8 C. Αντιδραστήριο 3 (R3): Δείγμα ελέγχου αρνητικού Αντιδραστήριο 4 (R4): Δείγμα ελέγχου θετικού [GR] 6

Αντιδραστήριο 6 (R6): Συζυγές Ανακινήστε πριν από τη, για να ομογενοποιήσετε. Αντιδραστήριο 10 (R10): Ανασχετικό διάλυμα 7.2.2. Αντιδραστήρια προς ανασύσταση Αντιδραστήριο 2 (R2): Συμπυκνωμένο διάλυμα έκπλυσης (20X) Αραιώστε το διάλυμα έκπλυσης σε αναλογία 1:20 σε απεσταγμένο νερό, για να δημιουργήσετε έτοιμο προς διάλυμα έκπλυσης. Προετοιμάστε 800 ml για μία πλάκα των 12 ταινιών. Αντιδραστήριο 8 (R8) + Αντιδραστήριο 9 (R9): Διάλυμα ενζυμικής ανάπτυξης Αραιώστε το χρωμογόνο (R9) στο ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος σε αναλογία 1:11 (π.χ. 1 ml αντιδραστηρίου R9 + 10 ml αντιδραστηρίου R8), λαμβάνοντας υπόψη ότι τα 10 ml είναι αναγκαία και επαρκή για την επεξεργασία 12 ταινιών. Ομογενοποιήστε. 7.3. Διαδικασία δοκιμασίας Ακολουθήστε αυστηρά τη διαδικασία. Χρησιμοποιήστε ορούς δειγμάτων ελέγχου αρνητικού και θετικού σε κάθε εξέταση, προκειμένου να επικυρώσετε την ποιότητά της. Ακολουθήστε την Ορθή Εργαστηριακή Πρακτική: 1) Εξετάστε με προσοχή τη διαδικασία κατανομής και αναγνώρισης των δειγμάτων που θα ακολουθήσετε. 2) Προετοιμάστε το αραιωμένο διάλυμα έκπλυσης R2 3) Βγάλτε το πλαίσιο στήριξης και τον απαιτούμενο αριθμό ταινιών (R1) από την προστατευτική συσκευασία. Επανατοποθετήστε τις μη χρησιμοποιημένες ταινίες στη συσκευασία τους. Κλείστε τη συσκευασία και επανατοποθετήστε τη στη φύλαξη στους +2-8 C. 4) Κατανείμετε στην κοιλότητα με την ακόλουθη σειρά (συνιστώμενη κατανομή πλάκας): 50 μl δείγματος ελέγχου αρνητικού (R3) στις Α1, B1, C1 50 μl δείγματος ελέγχου θετικού (R4) στις D1, E1 50 µl μη αραιωμένου δείγματος σε κάθε κοιλότητα F1, G1 κ.λπ. 50 μl συζυγούς (R6) σε κάθε κοιλότητα Ανάλογα με το σύστημα που χρησιμοποιείται, είναι δυνατή η αλλαγή της θέσης των δειγμάτων ελέγχου ή της σειράς κατανομής. Ομογενοποιήστε το μίγμα αντίδρασης με 3 τουλάχιστον αναρροφήσεις ή μέσω ενός αναδευτήρα μικροπλάκας επί 5 δευτερόλεπτα. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η κατανομή δειγμάτων και δειγμάτων ελέγχου μπορεί να ελεγχθεί οπτικά σε αυτό το στάδιο του χειρισμού. Υπάρχει διαφορά χρωματισμού ανάμεσα σε μια κενή κοιλότητα και σε μια κοιλότητα που περιέχει δείγμα. Χορηγήστε το συζυγές εντός 5 λεπτών από την κατανομή των δειγμάτων. Υπάρχει σαφής διαφορά χρωματισμού ανάμεσα σε μια κενή κοιλότητα και σε μια κοιλότητα που περιέχει διάλυμα συζυγούς με κόκκινο χρώμα (R6) (ανατρέξτε στην παράγραφο 7.7) 5) Εάν είναι εφικτό, καλύψτε την πλάκα με νέα αυτοκόλλητη μεμβράνη. 6) Επωάστε τη μικροπλάκα για 30 έως 35 λεπτά στους 37 C ± 1 C. 7) Εάν απαιτείται, αφαιρέστε την αυτοκόλλητη μεμβράνη. Αναρροφήστε τα περιεχόμενα όλων των κοιλοτήτων σε ένα δοχείο υγρών αποβλήτων και προσθέστε σε κάθε κοιλότητα τουλάχιστον 370 μl διαλύματος έκπλυσης. Αναρροφήστε ξανά και επαναλάβετε την έκπλυση για τουλάχιστον 4 φορές (Συνολικά 5 κύκλοι έκπλυσης). Ο υπολειπόμενος όγκος δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 10 μl (εάν είναι απαραίτητο, στεγνώστε τις ταινίες αναποδογυρίζοντάς τις επάνω σε απορροφητικό χαρτί). Εάν διαθέτετε αυτόματο πλυντήριο, ακολουθήστε τον ίδιο κύκλο λειτουργιών. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Προχωρήστε στο βήμα έκπλυσης εντός 20 λεπτών. [GR] 7

8) Προετοιμάστε διάλυμα ανάπτυξης (αντιδραστήριο R8 + R9). 9) Κατανείμετε γρήγορα σε κάθε κοιλότητα 50 μl προετοιμασμένου διαλύματος ανάπτυξης (R8+R9), που έχετε προετοιμάσει αμέσως πριν από τη. Αφήστε την αντίδραση να εξελιχθεί στο σκοτάδι για 25 έως 35 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). Μην χρησιμοποιείτε αυτοκόλλητη μεμβράνη κατά τη διάρκεια αυτής της επώασης. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η κατανομή του διαλύματος ανάπτυξης, το οποίο είναι ροζ, μπορεί να ελεγχθεί οπτικά σε αυτό το στάδιο του χειρισμού. Υπάρχει σαφής διαφορά χρωματισμού ανάμεσα σε μια κενή κοιλότητα και σε μια κοιλότητα που περιέχει διάλυμα υποστρώματος με ροζ χρώμα. (Ανατρέξτε στην παράγραφο 7.7). 10) Προσθέστε 50 μl ανασχετικού διαλύματος (R10) ακολουθώντας την ίδια αλληλουχία και τον ίδιο ρυθμό κατανομής όπως εφαρμόστηκε για το διάλυμα υποστρώματος. Ομογενοποιήστε το μίγμα αντίδρασης. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η κατανομή του άχρωμου ανασχετικού διαλύματος μπορεί να ελεγχθεί οπτικά σε αυτό το στάδιο του χειρισμού. Ο χρωματισμός του υποστρώματος -ροζ (για τα αρνητικά δείγματα) ή μπλε (για τα θετικά δείγματα)- χάνεται από τις κοιλότητες οι οποίες γίνονται άχρωμες (για τα αρνητικά δείγματα) ή κίτρινες (για τα θετικά δείγματα) μετά την προσθήκη ανασχετικού διαλύματος. 11) Σκουπίστε προσεκτικά το κάτω μέρος κάθε πλάκας. Περιμένετε τουλάχιστον 4 λεπτά μετά την προσθήκη του ανασχετικού διαλύματος και, εντός 30 λεπτών μετά τη διακοπή της αντίδρασης, πραγματοποιήστε ανάγνωση της οπτικής πυκνότητας στα 450/620-690 nm μέσω του αναγνώστη πλακών. 12) Ελέγξτε αν συμφωνούν οι φασματοφωτομετρικές και οπτικές μετρήσεις και η κατανομή των πλακών και των δειγμάτων με τη διαδικασία αναγνώρισης. 7.4. Ποιοτικός έλεγχος Χρησιμοποιήστε τα δείγματα ελέγχου αρνητικού (R3) και θετικού (R4) για κάθε εκτέλεση της εξέτασης, προκειμένου να επικυρώσετε τα αποτελέσματά της. (Ανατρέξτε στην παράγραφο 7.5). 7.5. Κριτήρια επικύρωσης εξέτασης Αυτή η εξέταση επικυρώνεται, όταν πληρούνται οι ακόλουθες συνθήκες: 1) Για το δείγμα ελέγχου αρνητικού R3: OD R3 0,080 Εάν μια τιμή δείγματος ελέγχου υπερβαίνει αυτήν την τιμή, αγνοήστε την και συνεχίστε επαναλαμβάνοντας τον υπολογισμό με τις δύο υπόλοιπες τιμές του δείγματος ελέγχου αρνητικού. 2) Για το δείγμα ελέγχου θετικού R4: OD R4 0,700 7.6. Υπολογισμός / Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Η οριακή τιμή προσδιορίζεται με το δείγμα ελέγχου αρνητικού R3: Υπολογίστε τη μέση τιμή της καταμετρημένης απορροφητικότητας για το δείγμα ελέγχου αρνητικού R3 και την οριακή τιμή (COV) ως εξής: COV = Μέση τιμή OD R3 + 0,100 Τα δείγματα με OD μικρότερη από τη COV θεωρούνται αρνητικά από το Syphilis Total Ab. Τα αποτελέσματα ακριβώς κάτω από την οριακή τιμή (COV -10% < OD < COV) θα πρέπει, ωστόσο, να ερμηνεύονται με προσοχή. Συνιστάται να πραγματοποιείται επανεξέταση των αντίστοιχων δειγμάτων εις διπλούν, εφόσον το επιτρέπουν τα συστήματα και οι εργαστηριακές διαδικασίες. Τα δείγματα με OD μεγαλύτερη ή ίση με τη COV θεωρούνται θετικά από το Syphilis Total Ab και θα πρέπει να επανεξετάζονται εις διπλούν πριν από την τελική ερμηνεία. Τα δείγματα που επανεξετάζονται και παρουσιάζουν τιμή μεγαλύτερη από τη COV σε τουλάχιστον μία από τις επαναλήψεις θεωρούνται θετικά και θα πρέπει να διερευνηθούν περαιτέρω. Τα δείγματα που παρουσιάζουν τιμή μικρότερη από την οριακή και στις δύο επαναλήψεις θεωρούνται αρνητικά. [GR] 8

Σε περίπτωση πολύ χαμηλής οπτικής πυκνότητας για τα εξετασμένα δείγματα (αρνητική OD) και όταν η παρουσία των δειγμάτων καθώς και του αντιδραστηρίου ελέγχεται, τα αποτελέσματα μπορούν να ερμηνευτούν ως αρνητικά. Συνιστάται να επιβεβαιώνετε τα θετικά δείγματα σύμφωνα με τις τρέχουσες συστάσεις και τους αλγόριθμους της εκάστοτε χώρας. 7.7. Φασματοφωτομετρική επαλήθευση μεταφοράς δείγματος και συζυγούς με πιπέτα (προαιρετικά) Δείγματα και δείγματα ελέγχου Η παρουσία των δειγμάτων και των δειγμάτων ελέγχου στην κοιλότητα μπορεί να επαληθευτεί μέσω αυτόματης ανάγνωσης στα 450/620 nm. Μια κοιλότητα στην οποία έχει προστεθεί δείγμα θα έχει OD ανάμεσα σε 0,050 και 1,100. Συζυγές Το συζυγές χρωματίζεται κόκκινο. Η παρουσία του συζυγούς στις κοιλότητες μπορεί να ελεγχθεί μέσω αυτόματης ανάγνωσης στα 450/620 nm. Μια κοιλότητα με δείγμα και συζυγές θα έχει OD 1,200. Επαλήθευση μεταφοράς διαλύματος ανάπτυξης με πιπέτα Η παρουσία του ροζ διαλύματος ανάπτυξης στην κοιλότητα μπορεί να επαληθευτεί μέσω αυτόματης ανάγνωσης στα 492 nm. Μια κοιλότητα που περιέχει διάλυμα ανάπτυξης πρέπει να έχει οπτική πυκνότητα >0,100 (μικρότερη οπτική πυκνότητα υποδεικνύει ανεπαρκή χορήγηση του διαλύματος ανάπτυξης). 8. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Όπως όλες οι ορολογικές εξετάσεις για τη σύφιλη, η ερμηνεία των αποτελεσμάτων που προκύπτουν από τη δοκιμασία Syphilis Total Ab EIA πρέπει να χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με τα κλινικά συμπτώματα, το ιατρικό ιστορικό και άλλα εργαστηριακά ευρήματα του ασθενούς, για τη διατύπωση συνολικής κλινικής διάγνωσης. Δεν διατίθενται μεμονωμένες εξετάσεις ή οριστικά πρότυπα αναφοράς για κάθε στάδιο της ασθένειας. Ως εκ τούτου, η διάγνωση της σύφιλης βασίζεται κυρίως στις ορολογικές εξετάσεις και απαιτεί αποτελέσματα τόσο από μεθόδους χωρίς τρεπόνημα όσο και από μεθόδους με τρεπόνημα. Καμιά διαγνωστική εξέταση δεν εξασφαλίζει απόλυτα πως ένα δείγμα δεν περιέχει χαμηλά επίπεδα αντισωμάτων έναντι του T. pallium, όπως αυτά που υπάρχουν σε ιδιαίτερα πρώιμα στάδια της λοίμωξης. Συνεπώς, ένα αρνητικό αποτέλεσμα ανά πάσα στιγμή δεν αποκλείει την πιθανότητα έκθεσης σε μόλυνση από σύφιλη. Οποιαδήποτε τεχνική ELISA ενδέχεται να προκαλέσει ψευδώς θετικές αντιδράσεις. Συνιστάται ο έλεγχος της προσδιοριστικότητας της αντίδρασης οποιουδήποτε δείγματος έχει βρεθεί θετικό κατ' επανάληψη, σύμφωνα με τα κριτήρια ερμηνείας του κιτ Syphilis Total Ab, χρησιμοποιώντας την κατάλληλη μέθοδο: Δοκιμασία αιμοσυγκόλλησης Treponema pallidum. Όλα τα αποτελέσματα εξετάσεων τρεπονήματος τείνουν να παραμένουν αντιδραστικά έπειτα από τη μόλυνση από τρεπόνημα, επομένως, δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση της ανταπόκρισης στη θεραπεία. Λόγω της εξακολούθησης της αντιδραστικότητας, συνήθως εφ' όρου ζωής του ασθενούς, οι εξετάσεις τρεπονήματος δεν χρησιμεύουν στον προσδιορισμό υποτροπής ή εκ νέου μόλυνσης σε ασθενείς που παρουσίασαν αντιδραστικό αποτέλεσμα. Σε αυτήν την περίπτωση, συνιστάται η άλλων δοκιμασιών: Syphilis IgM EIA, RPR και TPHA. Η φασματοφωτομετρική μέθοδος για την επαλήθευση του δείγματος και την απόθεση του διαλύματος ανάπτυξης συζυγούς δεν επιτρέπει την επαλήθευση της ακρίβειας του χορηγούμενου όγκου δειγμάτων και συζυγούς. Με αυτήν τη μέθοδο υποδεικνύεται μόνο η παρουσία του δείγματος και του συζυγούς. Το ποσοστό σφαλμάτων με αυτήν τη μέθοδο σχετίζεται άμεσα με την ακρίβεια του χρησιμοποιούμενου συστήματος (ένας αθροιστικός συντελεστής διακύμανσης της χορήγησης και της ανάγνωσης άνω του 10% μειώνει σημαντικά την ποιότητα αυτού του βήματος). [GR] 9

9. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ 9.1. Μέτρηση ακρίβειας Η επαναληψιμότητα και η ενδιάμεση ακρίβεια έχουν προσδιοριστεί με τη δειγμάτων με διαφορετικές συγκεντρώσεις αντισωμάτων σύφιλης. Τα δείγματα εξετάστηκαν 30 φορές κατά τη διάρκεια της ίδιας σειράς εξετάσεων, προκειμένου να προσδιοριστεί η επαναληψιμότητα. Τα δείγματα εξετάστηκαν επίσης εις διπλούν κατά τη διάρκεια 20 ημερών με ρυθμό 2 εξετάσεων ημερησίως. Η αναλογία σημαίνει ότι υπολογίστηκαν οι τυπικές αποκλίσεις και οι συντελεστές διακύμανσης (CV). 9.1.1. Επαναληψιμότητα: Δείγματα Αρ. Μέση τιμή αναλογιών Τυπική απόκλιση Συντελεστής διακύμανσης % Χαμηλά αρνητικό 30 0,14 0,014 9,5% Υψηλά αρνητικό 30 0,68 0,051 7,5% Χαμηλά θετικό Syphilis ab 30 1,90 0,070 3,7% Θετικό Syphilis ab 30 3,76 0,130 3,5% Οι συντελεστές διακύμανσης που αποκτήθηκαν στα θετικά δείγματα δεν υπερβαίνουν το 10%. 9.1.2. Ενδιάμεση ακρίβεια Δείγμ ατα Χαμη λά αρνητ ικό Υψηλ ά αρνητ ικό Χαμη λά θετικό Syphil is ab Θετικ ό Syphil is ab Α ρ. Μέση τιμή αναλο γίας Εντός δοκιμασίας Τυπικ ή απόκλ ιση Συντελεσ τής διακύμα νσης % Μεταξύ δοκιμασιών / χειριστών Τυπικ ή απόκλ ιση Συντελεσ τής διακύμα νσης % Μεταξύ ημερών Τυπικ ή απόκλ ιση Συντελεσ τής διακύμα νσης % Συνολική αναπαραγωγιμότ ητα Τυπικ ή απόκλ ιση Συντελεσ τής διακύμα νσης % 80 0,15 0,035 22,5% 0,023 14,7% 0,017 10,9% 0,045 29,0% 80 0,74 0,038 5,1% 0,074 10,0% 0,006 0,8% 0,084 11,2% 80 2,30 0,112 4,9% 0,312 13,5% 0,099 4,3% 0,346 15,0% 80 4,13 0,180 4,3% 0,543 13,1% 0,195 4,7% 0,604 14,6% Οι συντελεστές διακύμανσης που αποκτώνται στα θετικά δείγματα είναι μικρότεροι ή ίσοι του 15%. [GR] 10

9.2. Κλινική απόδοση Η κλινική απόδοση της δοκιμασίας Syphilis Total Ab προσδιορίστηκε μέσω της εξέτασης δειγμάτων από διερευνητικές και αναδρομικές μελέτες: Διερευνητική μελέτη: - 5195 δείγματα από τυχαίους αιμοδότες, - 460 δείγματα από ασθενείς με υποψία σύφιλης Αναδρομική μελέτη: - 350 θετικά δείγματα από ασθενείς με σεξουαλικά μεταδιδόμενο νόσημα. Οι μελέτες διεξήχθησαν σε 2 τοποθεσίες αιμοδοσίας, σε ένα κέντρο σεξουαλικά μεταδιδόμενων νοσημάτων και στις εγκαταστάσεις της Bio-Rad. 9.2.1. Διαγνωστική προσδιοριστικότητα Η μελέτη διεξήχθη σε δείγματα ορού και πλάσματος EDTA τα οποία συλλέχθηκαν σε 2 τράπεζες αίματος από τυχαίους δότες στη Γαλλία. Διεξήχθη επίσης μελέτη προσδιοριστικότητας σε δείγματα από ασθενείς. Όλα τα αποτελέσματα συγκρίθηκαν με αυτά που προέκυψαν από άλλες εξετάσεις σύφιλης με πιστοποίηση CE. Πίνακας 1: Τεστ προσδιοριστικότητας (ΑΑ = Αρχικά αντιδραστικό, ΑΕ= Αντιδραστικό κατ' επανάληψη) Πληθυσμό ς Τοποθεσί α Τύπος δειγμάτων Συνολικός αριθμός δειγμάτων Αρχικά αντιδραστι κό (ΑΑ) Αντιδραστι κό κατ' επανάληψ η (ΑΕ) Προσδιορι στικότητα ΑΕ (%) Διάστημα αξιοπιστίας 95% (%) Ορός SST 3127 2 2* 3125/3125 Αιμοδότες Αρ. 1 + Αρ. 2 Πλάσμα EDTA K2 2068 2 2* 2066/2066 Σύνολο 5195 4 4* Ασθενείς Αρ. 3 Ορός 351 1 1 100% 5191/5191 99,72% 350/351 99,93% - 100% 98,42 100% *! "#$μ%&%% &() * %+&(, -, %&' ". % -/010. 23 ) (%.(+&450,% 5"&(, - μ" - //0 ) 2,(μ%+#%+67(/ 08 EIA μ".(+&2. 2#0+0 CE %. 2,/"#+&0, % %. 9 &2 3. 2/ 2$(+μ9 ) (%$ : +&(, ; 8. * 2+) (2* (+&(, 9&0&%8 9.2.2. Διαγνωστική ευαισθησία Αναδρομική μελέτη: Η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε 350 κατεψυγμένα δείγματα, 2 από τα οποία ορίστηκαν ως αρνητικά, ενώ τα 348 επιβεβαιώθηκαν ως θετικά με τις δοκιμασίες σύφιλης με πιστοποίηση CE. Ανάμεσα σε αυτά τα 348 θετικά δείγματα, 7 δείγματα προέρχονταν από ασθενείς σε πρώιμο στάδιο της λοίμωξης. Και τα 348 δείγματα βρέθηκαν θετικά με τη δοκιμασία Bio-Rad Syphilis Total Ab. Διερευνητική μελέτη: Συνολικά 460 φρέσκα δείγματα αξιολογήθηκαν με τη δοκιμασία Bio-Rad Syphilis Total Ab και συγκρίθηκαν με εξετάσεις σύφιλης με πιστοποίηση CE. 348 βρέθηκαν αρνητικά τόσο από την εξέταση της Bio-Rad όσο και από την εξέταση αναφοράς (με δύο δείγματα να χαρακτηρίζονται ως ψευδώς θετικά κατά την εξέταση EIA αναφοράς) 109 βρέθηκαν θετικά και με τις δύο εξετάσεις δοκιμασίας. 3 δείγματα παρουσίαζαν αντιφατικά αποτελέσματα (μετά την επανεξέταση με τη δοκιμασία Bio-Rad): 1 δείγμα θετικό με τη δοκιμασία Bio-Rad και υψηλά αρνητικό με τις εξετάσεις αναφοράς. Αυτό το δείγμα με χαμηλό ποσοστό σύφιλης βρισκόταν στο όριο της οριακής τιμής και για τις δύο εξετάσεις EIA: [GR] 11

1 δείγμα θετικό με τις εξετάσεις αναφοράς και αρνητικό με τη δοκιμασία Bio-Rad (από 1 ασθενή χωρίς ενδείξεις) 1 δείγμα θετικό με τις εξετάσεις αναφοράς, αρνητική ΑΑ και θετικό στην επανεξέταση με τη δοκιμασία Bio-Rad. Αναδρομικές και διερευνητικές μελέτες: Η καθολική διαγνωστική ευαισθησία ισούται με 99,56% (457/459) με διάστημα αξιοπιστίας στο 95% από [98,44% - 99,95%]. Κλινική ευαισθησία Επίσης μελετήθηκε η κλινική ευαισθησία σε 3 πάνελ του εμπορίου και 1 πάνελ ορομετατροπής. Η δοκιμασία Bio-Rad Syphilis Total Ab συγκρίθηκε με μια δοκιμασία σύφιλης με πιστοποίηση CE. Η ανίχνευση κάθε δείγματος των πάνελ είναι ισοδύναμη ανάμεσα στη δοκιμασία της Bio-Rad και τη δοκιμασία σύφιλης αναφοράς. 9.3. Αναλυτική ευαισθησία Η αναλυτική ευαισθησία αξιολογήθηκε σε 2 πρότυπα NIBSC και υπολογίστηκε στην οριακή τιμή μέσω ς παλινδρόμησης: 1. Το όριο ανίχνευσης για IgG / IgM αξιολογήθηκε σε 3 παρτίδες της δοκιμασίας Syphilis Total Ab και υπολογίστηκε στα 0,53 miu/ml με διάστημα αξιοπιστίας 95% [0,10 miu/ml 1,30 miu/ml] χρησιμοποιώντας το πρότυπο IgM/IgG του ΠΟΥ (κωδικός NIBSC: 05/132). 2. Το όριο ανίχνευσης για IgG αξιολογήθηκε σε 1 παρτίδα της δοκιμασίας Syphilis Total Ab και υπολογίστηκε στα 0,11 miu/ml με διάστημα αξιοπιστίας 95% [0,02 miu/ml 0,27 miu/ml] χρησιμοποιώντας το πρότυπο IgG του ΠΟΥ (κωδικός NIBSC: 05/122). 9.4. Αναλυτική προσδιοριστικότητα / Μελέτη διασταυρούμενης αντιδραστικότητας Συνολικά 125 δείγματα δυνητικής παρεμβολής τα οποία περιείχαν αντισώματα κατά παθογόνων που θα μπορούσαν να οδηγήσουν σε μολυσματικές ασθένειες (νόσος Lyme, τοξοπλάσμωση, EBV, λεπτοσπείρωση, ΣΕΛ (λύκος), αντίσωμα ηπατίτιδας A, αντίσωμα ηπατίτιδας B, αντίσωμα ηπατίτιδας C, HTLV I/II και HIV), δείγματα από την ομάδα ασθενών κινδύνου (έγκυες γυναίκες και πολύτοκες γυναίκες) ή δείγματα από ασθενείς με διαταραχές του ανοσοποιητικού (ρευματοειδείς παράγοντες) εξετάστηκαν με τη δοκιμασία Syphilis Total Ab. Ανάμεσα στα 125 δείγματα που εξετάστηκαν, 1 δείγμα βρέθηκε θετικό κατ' επανάληψη με τη δοκιμασία Syphilis Total Ab. Αυτό το δείγμα επαληθεύτηκε ως αληθώς θετικό με άλλες δοκιμασίες σύφιλης EIA και δοκιμασίες επιβεβαίωσης με πιστοποίηση CE. Η προσδιοριστικότητα που παρατηρήθηκε σε αυτόν τον πληθυσμό-στόχο ισοδυναμεί με 100% (124/124) με διάστημα αξιοπιστίας 95% [97,1% - 100,0%]. 9.5. Φαινόμενο «αγκίστρου» Η πιθανή εμφάνιση του φαινομένου του «αγκίστρου» μελετήθηκε με την εξέταση 6 θετικών για σύφιλη δειγμάτων υψηλής τιτλοδότησης σε διαφορετικές αραιώσεις. Η ισοδυναμία των αποτελεσμάτων που παρατηρήθηκε μεταξύ μη αραιωμένων και αραιωμένων δειγμάτων υποδεικνύει την απουσία του φαινομένου του «αγκίστρου» στα δείγματα που εξετάστηκαν. 10. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ. 1. Levinson SS. The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference. J. Clin. Immunoassay 15: 108-115,1992. 2. Norris S.J. Plypeptides of Treponema pallidum: Progress toward understanding their structural, functional and immunological role. Microbiological Reviews, Setpt. 1993 Vol 57. [GR] 12

3. Larsen SA, Steiner BM, and Rudolph AH. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis. Clin Microbiol Rev. 1995 Jan; 8(1):1 21. 4. Zrein M, Maure I, Boursier F, Soufflet L. Recombinant antigen-based enzyme immunoassay for screening of Treponema pallidum antibodies in blood bank routine. J Clin Microbol. 1995 Mar; 33(3):525 7. 5. Singh AE and Romanowski. Syphilis: Review with emphasis on clinical, epidemiological, and some biologic features. Clin Microbiol Rev. 1999 Apr; 12(2):187 209. 6. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank. Clin Chem Lab Med. 2009. 47:596-606. 7. International Journal of STD & AIDS 2009; 20: 300 309. 8. Screening donated Blood for Transfusion-Transmissible infections. World Health Organization. 2009 9. M. J. Loeffelholz, and M. J. Binnicker, It Is Time to Use Treponema-Specific Antibody Screening Tests for Diagnosis of Syphilis, J Clin Microbiol, 50 (2012), 2-6. [GR] 13

[GR] 14

[GR] 15