BD Haemophilus Test Medium Agar (HTM)

ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA-254058.05 Αναθ.: Sep 2011 BD Haemophilus Test Medium Agar (HTM) ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το BD Haemophilus Test Medium Agar (HTM) χρησιμοποιείται στη διαδικασία ευαισθησίας με διάχυση αντιμικροβιακού δίσκου για είδη Haemophilus όπως περιγράφεται στο Εγκεκριμένο Πρότυπο M2, που δημοσιεύτηκε από την Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). 1 ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Το Άγαρ Mueller Hinton συμπληρωμένο με 1% αιμοσφαιρίνη και 1% Εμπλουτισμό IsoVitaleX (Σοκολατούχο Άγαρ Mueller Hinton) υπήρξε στο παρελθόν το συνιστώμενο υλικό για Haemophilus influenzae. 2 Οι εκτεταμένες μελέτες που διενεργήθηκαν από τον Jorgensen και τους συναδέλφους του οδήγησαν στην ανάπτυξη του Άγαρ Υλικού Εξέτασης Haemophilus (HTM). 3,4 Το υλικό αυτό είναι άγαρ Mueller Hinton με συμπλήρωμα παράγοντα X (αιμίνη ή αιματίνη), παράγοντα V (νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο, NAD) και εκχυλίσματος ζυμομυκήτων. Το κύριο πλεονέκτημα του Άγαρ HTM σε σύγκριση με το Σοκολατούχο Άγαρ Mueller Hinton είναι η οπτική διαύγεια, που επιτρέπει τη μέτρηση της διαμέτρου ζώνης από το κάτω μέρος του τρυβλίου, σύμφωνα με την τυπική διαδικασία εξέτασης των μη απαιτητικών οργανισμών σε Άγαρ Mueller Hinton. Επιπλέον, το Άγαρ HTM περιέχει χαμηλά επίπεδα θυμιδίνης και, συνεπώς, είναι κατάλληλο για την εξέταση τριμεθοπρίνης/ σουλφαμεθοξαζόλης. Τα ερμηνευτικά κριτήρια για την εξέταση αντιμικροβιακής ευαισθησίας παρέχονται στο έγγραφο CLSI M100 (M2), το οποίο περιλαμβάνεται στο έγγραφο CLSI M2. 1 Για περισσότερες λεπτομέρειες συμβουλευτείτε αυτό το έγγραφο. Το BD Haemophilus Test Medium Agar αποτελείται από Άγαρ Mueller Hinton με συμπλήρωμα παράγοντα X (αιμίνη ή αιματίνη), παράγοντα V (νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο, NAD) και εκχυλίσματος ζυμομυκήτων. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ BD Haemophilus Test Medium Agar (HTM) Σύνθεση* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού Εκχύλισμα βοείου κρέατος 2,0 g Όξινο υδρόλυμα καζεΐνης 17,5 Άμυλο 1,5 Άγαρ 17,0 Εκχύλισμα ζυμομυκήτων 5,0 Αιματίνη 0,015 Νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο (NAD) 0,015 ph 7,3 ± 0,1 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τα τρυβλία εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Τυχόν υπερβολική συρρίκνωση αυτού του υλικού καλλιέργειας λόγω αποξήρανσης ενδέχεται να οδηγήσει σε ψευδή αποτελέσματα ευαισθησίας. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. PA-254058.05-1 -

ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες 5 ή 10 τρυβλίων επί μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Για τον ποιοτικό έλεγχο χρήστη, θα πρέπει να συμβουλεύεστε το πρότυπο της CLSI 1 ή, εάν εφαρμόζονται, τα κατάλληλα εθνικά πρότυπα. Θα πρέπει να εκτελούνται πρωτίστως οι διαδικασίες που περιγράφονται παρακάτω στην ενότητα Διαδικασία της Εξέτασης, χρησιμοποιώντας τα στελέχη αναφοράς που αναφέρονται στην ενότητα Υλικά που δεν παρέχονται. Τα τρυβλία BD Haemophilus Test Medium Agar (HTM) και οι αντιμικροβιακοί δίσκοι που χρησιμοποιούνται θα πρέπει να εξετάζονται τουλάχιστον δύο φορές την εβδομάδα για τη διασφάλιση της σωστής απόδοσης. Εμφάνιση μη ενοφθαλμισμένου υλικού καλλιέργειας: ανοικτό πορτοκαλί. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD Haemophilus Test Medium Agar (τρυβλία Stacker των 90 mm). Μικροβιολογικά ελεγμένο. Υλικά που δεν παρέχονται 1. Ζωμός ενοφθαλμίσματος σε σωληνάριο, όπως BD Trypticase Soy Broth (Ζωμός Αφομοιώματος Σόγιας - Καζεΐνης) ή Ζωμός Mueller Hinton II (με ρύθμιση κατιόντων), διανεμημένος σε όγκους 5 ml σε σωληνάρια για την παρασκευή τυπικού ενοφθαλμίσματος, και στείρος ζωμός ή αλατούχο διάλυμα για αραίωση του ενοφθαλμίσματος. 2. Πρότυπο σύγκρισης θειικού βαρίου (0,5 ml BaCl 2 0,048 M BaCl 2 [1,175% w/v BaCl 2. 2H 2 O] σε 99,5 ml H 2 SO 4 0,18 M [0,36 N] [1% v/v]). 3. Φωτομετρική συσκευή για ρύθμιση της θολερότητας του εναιωρήματος ενοφθαλμίσματος, έτσι ώστε να είναι ισοδύναμη με το πρότυπο 0,5 McFarland. 4. Ως εναλλακτική λύση στα παραπάνω υλικά (1 3), είναι δυνατό να χρησιμοποιηθεί το BD Prompt Inoculation System (συσκευή ογκομετρικής παρασκευής ενοφθαλμίσματος). 5,6 5. Καλλιέργειες ελέγχου - Haemophilus influenzae ATCC 49247, ATCC 49766 και ATCC 10211. 6. Χάρτινοι δίσκοι διαποτισμένοι με καθορισμένες ποσότητες αντιμικροβιακών παραγόντων, όπως οι δίσκοι εξέτασης ευαισθησίας BD Sensi-Disc. 7. Συσκευή διανομής, όπως διανεμητής Sensi-Disc 6 θέσεων. 8. Χάρακας ή άλλη συσκευή για τη μέτρηση του μεγέθους ζώνης σε χιλιοστόμετρα. 9. Θάλαμος επώασης που παράγει περιβάλλον περιεκτικότητας 5% σε CO 2 ή άλλη συσκευή που παράγει αερόβιο περιβάλλον εμπλουτισμένο με CO 2. 10. Αντιδραστήριο για την εκτέλεση ταχείας εξέτασης ß-λακταμάσης όπως Δίσκοι BD Cefinase. 11. Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Το υλικό αυτό δεν προορίζεται για άμεση χρήση με κλινικά δείγματα ή μεικτές καλλιέργειες. Η εξέταση ευαισθησίας με διάχυση σε δίσκο έχει σχεδιαστεί για χρήση με καθαρές καλλιέργειες. (δείτε επίσης ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ). Διαδικασία της εξέτασης 1. Παρασκευάστε μια χρώση Gram πριν εκκινήσετε την εξέταση ευαισθησίας για να επιβεβαιώσετε την καθαρότητα της καλλιέργειας και να επιβεβαιώσετε τη δοκιμαστική ταυτοποίηση του Haemophilus. PA-254058.05-2 -

2. Χρησιμοποιήστε αρκετές καλά απομονωμένες αποικίες που έχουν ληφθεί απευθείας από ολονύκτιο (κατά προτίμηση 20 έως 24 ωρών) τρυβλίο Σοκολατούχου Άγαρ, ως πηγή του ενοφθαλμίσματος. 3. Για ταχεία ανίχνευση των στελεχών που είναι ανθεκτικοί στην πενικιλλίνη, αμπικιλλίνη ή αμοξυκιλλίνη θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί μια ταχεία εξέταση ß-λακταμάσης. 4. Παρασκευάστε ένα εναιώρημα του οργανισμού εξέτασης σε Ζωμό Mueller Hinton, Ζωμό Mueller Hinton II ή αλατούχο διάλυμα 0,9%. Το εναιώρημα αυτό θα πρέπει να ρυθμιστεί σε θολερότητα προτύπου 0,5 McFarland χρησιμοποιώντας μια φωτομετρική συσκευή. Αυτό το εναιώρημα θα περιέχει περίπου 1-4 x 10 8 CFU/ml. Χρειάζεται προσοχή κατά την παρασκευή του εναιωρήματος γιατί τυχόν υψηλότερες συγκεντρώσεις ενοφθαλμίσματος μπορεί να οδηγήσουν σε ψευδή αποτελέσματα ανθεκτικότητας με ορισμένα αντιβιοτικά ß- λακτάμης, ιδιαίτερα όταν εξετάζονται στελέχη H. influenzae που παράγουν β-λακταμάση. 1 5. Εναλλακτικές μέθοδοι παρασκευής ενοφθαλμίσματος με συσκευές που επιτρέπουν την άμεση τυποποίηση των ενοφθαλμισμάτων χωρίς προσαρμογή της θολερότητας, όπως το BD Prompt Inoculation System, έχει διαπιστωθεί ότι είναι αποδεκτές για σκοπούς εξέτασης ρουτίνας, συμπεριλαμβανομένης της εξέτασης του H. influenzae. 1,3 6. Εντός 15 λεπτών από τη ρύθμιση της θολερότητας του ενοφθαλμίσματος, εμβαπτίστε έναν στείρο στυλεό στο κατάλληλα αραιωμένο ενοφθάλμισμα και περιστρέψτε τον αρκετές φορές πιέζοντας με δύναμη επάνω στο άνω εσωτερικό τοίχωμα του σωληναρίου, έτσι ώστε να εκπιέσετε την περίσσεια υγρού. 7. Ενοφθαλμίστε ολόκληρη την επιφάνεια άγαρ του τρυβλίου BD Haemophilus Test Medium Agar τρεις φορές, περιστρέφοντας το τρυβλίο 60 μεταξύ επιστρώσεων ώστε να προκύψει ομοιογενής ενοφθαλμισμός. 8. Το καπάκι μπορεί να αφεθεί μισάνοιχτο επί 3 έως 5 λεπτά, και το τρυβλίο να διατηρηθεί σε θερμοκρασία δωματίου, αλλά όχι περισσότερο από 15 λεπτά, έτσι ώστε να επιτρέπεται η απορρόφηση τυχόν επιφανειακής υγρασίας πριν από την εφαρμογή των διαποτισμένων με φάρμακο δίσκων. 9. Εφαρμόστε τους δίσκους με τη βοήθεια διανεμητή αντιμικροβιακού δίσκου, χρησιμοποιώντας άσηπτες προφυλάξεις. Οι περισσότεροι αντιμικροβιακοί παράγοντες παράγουν μεγαλύτερες ζώνες αναστολής όταν εξετάζονται έναντι του Haemophilus σε σύγκριση με άλλους οργανισμούς. Συνεπώς, δεν θα πρέπει να τοποθετούνται περισσότεροι από τέσσερις αντιμικροβιακοί δίσκοι σε κάθε τρυβλίο των 100 mm, συμπεριλαμβανομένων μέχρι έξι από τους ακόλουθους δίσκους: κεφαλοσπορίνες τρίτης γενιάς (π.χ., κεφοταξίμη, κεφταζιντίμη, κεφτριαξόνη, κεφτιζοξίμη), αζτρεονάμη, ιμιπενέμη ή κιπροφλοξασίνη. Αφού τοποθετηθούν οι δίσκοι στο άγαρ, πιέστε τους με μια στείρα βελόνα ή λαβίδα έτσι ώστε να έρθουν σε πλήρη επαφή με την επιφάνεια του υλικού. 10. Εντός 15 λεπτών από την εφαρμογή των δίσκων, αναστρέψτε τα τρυβλία και επωάστε τα για 16 έως 18 ώρες στους 35 C σε αερόβιο περιβάλλον εμπλουτισμένο με 5% διοξειδίου του άνθρακα. 11. Επιστρώστε ένα τρυβλίο BD Haemophilus Test Medium Agar με H. influenzae ATCC 10211 και επωάστε μαζί με τα τρυβλία εξέτασης ευαισθησίας για να προσδιοριστεί εάν το υλικό υποστηρίζει επαρκή ανάπτυξη. Αποτελέσματα 1. Εξετάστε τα τρυβλία μετά από επώαση 16 έως 18 ωρών. Θα πρέπει να προκύψει ανάπτυξη πλήρους ταπητίου. Εάν έχουν αναπτυχθεί μόνον απομονωμένες αποικίες, το ενοφθάλμισμα ήταν υπερβολικά αραιό και η εξέταση θα πρέπει να επαναληφθεί. 2. Μετρήστε τη διάμετρο των ζωνών πλήρους αναστολής (όπως κρίνεται με γυμνό οφθαλμό), συμπεριλαμβανομένης της διαμέτρου του δίσκου, με ακρίβεια χιλιοστού, με χρήση διαβήτη, χάρακα ή υποδείγματος που έχετε κατασκευάσει για αυτό το σκοπό. Η συσκευή μέτρησης πρέπει να συγκρατείται στο πίσω μέρος του τρυβλίου, που κρατάτε επάνω από μαύρο φόντο χωρίς αντανάκλαση, με άνωθεν φωτισμό. 3. Ως τελικό σημείο θα πρέπει να λαμβάνεται η περιοχή που δεν εμφανίζει καμία ορατή ανάπτυξη, η οποία είναι δυνατό να εντοπιστεί με γυμνό οφθαλμό. Αγνοήστε τυχόν αμυδρή ανάπτυξη μικροσκοπικών αποικιών, οι οποίες είναι δυνατό να ανιχνευτούν με δυσκολία κοντά στην άκρη της εμφανούς ζώνης αναστολής της ανάπτυξης. PA-254058.05-3 -

Με τη χρήση τριμεθοπρίνης και σουλφοναμιδών, τα ίχνη ανταγωνιστών στο υλικό ενδέχεται να επιτρέψουν ελαφρά ανάπτυξη. Συνεπώς θα πρέπει να αγνοήσετε τυχόν ελαφρά ανάπτυξη (20 ή λιγότερο της μικροβιακής ανάπτυξης), και να μετρήστε το πιο ορατό όριο για να προσδιορίσετε τη διάμετρο ζώνης. Υπολογισμός και ερμηνεία των αποτελεσμάτων Αναφερθείτε στο έγγραφο CLSI M100 (M2) για την ερμηνεία των αποτελεσμάτων που προκύπτουν με κλινικά απομονωμένους οργανισμούς Haemophilus. 1 Τα αποτελέσματα για τους οργανισμούς μπορεί να αναφερθούν ως "ανθεκτικός", "ενδιάμεσης ανθεκτικότητας" ή "ευαίσθητος" ανάλογα με τις διαμέτρους ζώνης που προκύπτουν. Οι οργανισμοί που εξετάζονται θετικοί για παραγωγή β-λακταμάσης θα πρέπει να θεωρούνται ανθεκτικοί στην αμπικιλλίνη, ανεξάρτητα από τις διαμέτρους ζώνης που προκύπτουν. Σημειώνεται ότι έχουν αναφερθεί ανθεκτικά στην αμπικιλλίνη στελέχη του H. influenzae που στερούνται δραστηριότητας ß-λακταμάσης. 7 Συνεπώς, εάν η διάμετρος ζώνης υποδεικνύει ανθεκτικότητα στην αμπικιλλίνη, ο απομονωμένος οργανισμός θα πρέπει να αναφέρεται ως ανθεκτικός σε αυτό το φάρμακο, ακόμη κι αν είναι αρνητική η εξέταση ß-λακταμάσης. Κάθε φορά που εκτελείται εξέταση ευαισθησίας ή σε εβδομαδιαία βάση θα πρέπει να περιλαμβάνονται καλλιέργειες ελέγχου, προκειμένου να τεκμηριώνεται ικανοποιητική απόδοση σύμφωνα με το πρότυπο CLSI M2 που περιλαμβάνει τους Πίνακες (M100) με τις σωστές διαμέτρους ζώνης. 1 Σημείωση: Ενημερωτικά συμπληρώματα στο έγγραφο M2 της CLSI ή αναθεωρημένες εκδόσεις, οι οποίες περιέχουν αναθεωρημένους πίνακες αντιμικροβιακών δίσκων και ερμηνευτικά πρότυπα, δημοσιεύονται περιοδικά. Για τις τρέχουσες συστάσεις, θα πρέπει να συμβουλεύεστε τους πλέον πρόσφατους πίνακες. Μπορείτε να παραγγείλετε το πλήρες κείμενο του προτύπου και ενημερωτικά συμπληρώματα από την National Committee for Clinical Laboratory Standards, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-1898, USA. Τηλέφωνο: ++1-610-688-1100. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ A. Μελέτη Επαναληψιμότητας 8 Αξιολογήθηκαν τρεις παρτίδες παραγωγής BD Haemophilus Test Medium Agar χρησιμοποιώντας τη διαδικασία εξέτασης ευαισθησίας αντιμικροβιακού δίσκου (M2-A4) που συνιστούσε η NCCLS εκείνη την περίοδο. 9 Στη μελέτη χρησιμοποιήθηκαν συνολικά 12 αντιμικροβιακοί παράγοντες (αμοξυκιλλίνη/κλαβουλανικό, αμπικιλλίνη, αμπικιλλίνη/σουλμπακτάμη, κεφακλόρη, κεφονισίδη, κεφτριαξόνη, κεφουροξίμη, χλωραμφαινικόλη, κιπροφλοξασίνη, ριφαμπίνη, τετρακυκλίνη, τριμεθοπρίμη/σουλφαμεθοξαζόλη) και 14 στελέχη H. influenzae. Από τα 14 στελέχη, επτά ήταν στελέχη American Type Culture Collection (ATCC) και τα υπόλοιπα επτά ήταν μητρικές καλλιέργειες, οι οποίες περιελάμβαναν έξι κλινικά απομονωμένους οργανισμούς και μια καλλιέργεια βιομηχανικού ποιοτικού ελέγχου. Οι διάμετροι ζώνης που προέκυψαν με κάθε μια από τις τρεις παρτίδες υλικών συγκρίθηκαν με τα ερμηνευτικά κριτήρια (Πίνακας 2A) του εγγράφου M2-A4. 9 Μόνο σε έξι περιπτώσεις προέκυψαν ζώνες με μια παρτίδα που παρήγαγε διαφορετική ερμηνευτική κατηγορία σε σύγκριση με τις άλλες δύο παρτίδες. Από τις έξι ασυμφωνίες, τέσσερις προέκυψαν με τετρακυκλίνη, μια με κεφακλόρη και μια με κεφουροξίμη. Στην περίπτωση της τετρακυκλίνης, το αποτέλεσμα θα παρήγαγε μια ερμηνευτική κατηγορία οργανισμού ευαίσθητου ή ενδιάμεσης ανθεκτικότητας (ελάσσων σφάλμα). Με την κεφακλόρη και την κεφουροξίμη, η διαφορά 1 mm που προέκυψε θα οδηγούσε σε κατηγορία ενδιάμεσης ανθεκτικότητας ή ανθεκτικού οργανισμού, που αποτελεί επίσης ελάσσων σφάλμα. Σε αυτή τη μελέτη, προέκυψαν πέντε στελέχη H. influenzae που παρήγαγαν β-λακταμάση. Με κάθε ένα από αυτά τα στελέχη, κάθε παρτίδα HTM παρήγαγε διαμέτρους ζώνης με την αμπικιλλίνη που θα ερμηνεύονταν ως ανθεκτικός οργανισμός. Δύο από τα πέντε στελέχη παρήγαγαν επίσης ακετυλτρανσφεράση χλωραμφαινικόλης (CAT). Οι ζώνες χλωραμφαινικόλης που προέκυψαν με αυτά τα δύο στελέχη θα ήταν σύμφωνες με την ανθεκτικότητα στη χλωραμφαινικόλη. 10,11 PA-254058.05-4 -

B. Σύγκριση με το Σοκολατούχο Άγαρ Mueller Hinton 8 Η διαδικασία δίσκου της NCCLS εκτελέστηκε με 213 κλινικά απομονωμένους οργανισμούς H. influenzae σε Άγαρ HTM και Σοκολατούχο Άγαρ Mueller Hinton. 9,12 Οι αντιμικροβιακοί παράγοντες που εξετάστηκαν ήταν αμπικιλλίνη, αμπικιλλίνη/σουλμπακτάμη, αμοξυκιλλίνη /κλαβουλανικό και χλωραμφαινικόλη. Αυτοί οι αντιμικροβιακοί παράγοντες ήταν οι μόνοι για τους οποίους είχαν οριστεί ερμηνευτικά κριτήρια διαμέτρου ζώνης για το Σοκολατούχο Άγαρ Mueller Hinton. 13,14 Προέκυψαν τα ακόλουθα αποτελέσματα. PA-254058.05-5 - BD Haemophilus Test Medium Agar S I R S 808 1 2 I 0 0 0 Σοκολατούχο Άγαρ Mueller Hinton R 0 0 41 Συμφωνία: 99,6% S = Ευαίσθητος I= Ενδιάμεσης ανθεκτικότητας R= Ανθεκτικός Προέκυψαν δύο μείζονα σφάλματα και ένα ελάσσων σφάλμα με την αμπικιλλίνη. Και στα δύο μείζονα σφάλματα, το BD Haemophilus Test Medium Agar παρήγαγε αποτέλεσμα ανθεκτικού οργανισμού, ενώ το Σοκολατούχο Άγαρ Mueller Hinton παρήγαγε αποτέλεσμα ευαίσθητου οργανισμού. Και οι δυο αυτοί απομονωμένοι οργανισμοί ήταν θετικοί στη β- λακταμάση. Συνεπώς, το αποτέλεσμα ανθεκτικού οργανισμού ήταν σωστό. Το ελάσσων σφάλμα προέκυψε με έναν απομονωμένο οργανισμό που παρήγαγε αποτέλεσμα ενδιάμεσης ανθεκτικότητας στο Άγαρ HTM και αποτέλεσμα ευαίσθητου οργανισμού στο Σοκολατούχο Άγαρ Mueller Hinton. Γ. Περιορισμοί της διαδικασίας Για κάποιους συνδυασμούς μικροοργανισμών και αντιμικροβιακών παραγόντων, η ζώνη αναστολής της ανάπτυξης ενδέχεται να μην έχει ευδιάκριτα οριοθετημένη άκρη, γεγονός που θα ήταν δυνατό να οδηγήσει σε εσφαλμένη ερμηνεία. Τυχόν εσφαλμένη συγκέντρωση ενοφθαλμίσματος ενδέχεται να δώσει ανακριβή αποτελέσματα. Οι ζώνες αναστολής ενδέχεται να είναι υπερβολικά μικρές, εάν το ενοφθάλμισμα είναι υπερβολικά πυκνό, ή υπερβολικά μεγάλες και δύσκολες στη μέτρηση, εάν το ενοφθάλμισμα είναι υπερβολικά αραιό. Τυχόν εσφαλμένη φύλαξη των αντιμικροβιακών δίσκων ενδέχεται να προκαλέσει απώλεια της ισχύος και τη λήψη ψευδώς ανθεκτικού αποτελέσματος. Η in vitro ευαισθησία ενός μικροοργανισμού σε έναν συγκεκριμένο αντιμικροβιακό παράγοντα δε σημαίνει απαραίτητα ότι ο παράγοντας θα είναι αποτελεσματικός in vivo. Για καθοδήγηση στην ερμηνεία των αποτελεσμάτων, να συμβουλευτείτε τις κατάλληλες αναφορές. 2,15 ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS). Approved standard: M2. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at www.clsi.org 2. Thornsberry, C., T.L. Gavan, E.H. Gerlach. 1977. Cumitech 6, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C 3. Jorgensen, J.H., J.S. Redding, L.A. Maher, and A.W. Howell. 1987. Improved medium for antimicrobial susceptibility testing of Haemophilus influenzae. J. Clin. Microbiol. 25:2105-2113. 4. Jorgensen, J.H., A.W. Howell, and L.A. Maher. 1990. Antimicrobial susceptibility testing of less commonly isolated Haemophilus species using Haemophilus test medium. J. Clin. Microbiol. 28:985-988. 5. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson. 1983. Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17:450-457. 6. Marsik, F., G. Evans, J. Fowler, and L. Thompson. 1989. Comparison of the BBL Prompt system, Abbott A-Just, and visual method for the preparation of Haemophilus influenzae inoculum for the Bauer-Kirby procedure, abstr. C-67, p. 404. Abstr. 89th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1989.

7. Doern, G.V., J.H. Jorgensen, C. Thornsberry, D.A. Preston, T.A. Tubert, J.S. Redding, and L.A. Maher. 1988. A national collaborative study of the prevalence of antimicrobial resistance among clinical isolates of Haemophilus influenzae. Antimicrob. Agents Chemother. 32:180-185. 8. Data on file. BD Diagnostic Systems, Sparks, MD, USA. 9. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1990. Approved standard: M2-A4. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 4th ed. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, Pa. 10. Azemun, P., T. Stull, M. Roberts, and A.L. Smith. 1981. Rapid detection of chloramphenicol resistance in Haemophilus influenzae. Antimicrob. Agents Chemother. 20:168-170. 11. Doern, G.V., G.S. Daum, and T.A. Tubert. 1987. In vitro chloramphenicol susceptibility testing of Haemophilus influenzae: disk diffusion procedures and assays for chloramphenicol acetyltransferase. J. Clin. Microbiol. 25:1453-1455. 12. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1984. Approved standard: M2-A3. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 3rd ed. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, Pa. 13. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1987. Second Informational Supplement: M100-S2. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, Pa. 14. Doern, G.V. and R.N. Jones. 1988. Antimicrobial susceptibility testing of Haemophilus influenzae, Branhamella catarrhalis, and Neisseria gonorrhoeae. Antimicrob. Agents Chemother. 32:1747-1753. 15. Woods, G.L., and J.A. Washington. 1995. Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p. 1327-1341. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. USA. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD Haemophilus Test Medium Αρ. κατ. 254058 Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ Prompt is a trademark of 3M ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. 2011 BD PA-254058.05-6 -