B BBL Sensi-Disc Antimicrobial Discs για χρήση σε υλικά καλλιέργειας

B BBL Sensi-Disc Antimicrobial Discs για χρήση σε υλικά καλλιέργειας Αντιμικροβιακός παράγοντας Κωδικός Συγκ. Στρεπτομυκίνη *S-50 50 μg Ισονιαζίδη (Ισονικοτινυλυδραζίνη) INH-1 1 μg INH-5 1 5 μg π-αμινοσαλικυλικό οξύ PAS-10 10 μg PAS-50 50 μg Εθαμβουτόλη** EM-25 25 μg EM-50 50 μg Εθειοναμίδη*** EA-25 25 μg Ριφαμπίνη *RA-25 25 μg 8840231JAA(03) 2015-07 Ελληνικά ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Οι δίσκοι αυτοί χρησιμοποιούνται σε ποιοτικές διαδικασίες εξέτασης ευαισθησίας σε υλικά καλλιέργειας. Χρησιμεύουν ως εύχρηστη μέθοδος προσθήκης αντιμικροβιακών παραγόντων σε υλικά καλλιέργειας, ειδικά για ποιοτικές μελέτες μυκοβακτηριδίων και σχετικών μικροοργανισμών. Στη διαδικασία αυτή συνιστάται επίσης η χρήση ορισμένων δίσκων εξέτασης ευαισθησίας, όπως, στρεπτομυκίνης 10 μg, καναμυκίνης 30 μg και ριφαμπίνης 5 μg. 1,2 Οι δίσκοι προστίθενται σε μετρημένες ποσότητες υγροποιημένου υλικού άγαρ, π.χ., Middlebrook and Cohn 7H10 Agar ή Seven H11 Agar, για την παρασκευή συνιστώμενων συγκεντρώσεων του αντιμικροβιακού παράγοντα σε στερεοποιημένο άγαρ. 2 Με τους δίσκους αυτούς είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία Petri X Plate τεσσάρων διαμερισμάτων Falcon. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρία τμήματα για διάφορους παράγοντες ή διαφορετικές συγκεντρώσεις του ιδίου παράγοντα και το τέταρτο τμήμα ως μάρτυρας χωρίς φάρμακο. * Δεν προορίζεται για χρήση σε συμβατικές εξετάσεις ευαισθησίας σε δίσκο (Bauer-Kirby ή τυποποιημένο). ** Myambutol: Wyeth Laboratories *** Trecator: Wyeth Laboratories ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ Από το 1882, όταν ο Koch έδειξε ότι ο βάκιλλος της φυματίωσης ήταν η αιτία της φυματίωσης, έχει διερευνηθεί μια ποικιλία υλικών και μεθόδων σε μια προσπάθεια μείωσης του χρόνου που απαιτείται για την απομόνωση και την εξέταση ευαισθησίας σε φάρμακα. Οξυάντοχοι βάκιλλοι από ανθρώπινα δείγματα που καταδεικνύονται με μικροσκοπική εξέταση ή καλλιέργειες είναι συνήθως το Mycobacterium tuberculosis. Ωστόσο, είναι δυνατό να βρεθούν άλλοι παθογόνοι και πιθανώς μη παθογόνοι οξυάντοχοι μικροοργανισμοί. Αυτά τα ατυπικά ή μη ταξινομημένα μυκοβακτηρίδια πρέπει να αναγνωρίζονται και να χαρακτηρίζονται στο εργαστήριο επειδή η πρόγνωση και η απόκριση στη φαρμακευτική θεραπεία διαφέρουν σημαντικά για τη νόσο που προκαλείται από αυτούς τους μικροοργανισμούς. Αυτή η μέθοδος ευαισθησίας σε δίσκο σε υλικά καλλιέργειας έχει δειχθεί ότι είναι ένα πολύτιμο και αξιόπιστο εργαλείο για πολλά εργαστήρια. 3-5 Η απλότητα της παρασκευής του υλικού δίσκου, η ευκολία και η οικονομία παρασκευής οποιουδήποτε αριθμού πλακών εξέτασης, η σταθερότητα των φαρμάκων σε ξηρούς δίσκους, η εξάλειψη πιθανών σφαλμάτων αραίωσης και μέτρησης φαρμακευτικών διαλυμάτων, καθώς και η άμεση αναγνώριση του φαρμάκου και της συγκέντρωσης που υπάρχει σε κάθε υλικό μέσω της κωδικοποίησης των δίσκων, την καθιστούν μια επιθυμητή τεχνική. Μόνον ένα υλικό παρασκευάζεται. Τα διάφορα φάρμακα και οι συγκεντρώσεις τους παρέχονται από τους δίσκους. ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Οι δίσκοι αυτοί χρησιμοποιούνται για τη διαπότιση ολόκληρης της κοίτης άγαρ με αντιμικροβιακό παράγοντα σε συγκεκριμένη συγκέντρωση. Αυτό επιτυγχάνεται επικολλώντας πρώτα το δίσκο στο κέντρο του τεταρτημορίου της πλάκας και κατόπιν προσθέτοντας μια μετρημένη ποσότητα άγαρ. Η πλάκα τοποθετείται στο ψυγείο και διατηρείται ολονυκτίως, έτσι ώστε να επιτραπεί η διάχυση σε ολόκληρο το υλικό. Η πλάκα κατόπιν ενοφθαλμίζεται με τον υπό εξέταση μικροοργανισμό. Η εμφάνιση ή όχι ανάπτυξης θα εξαρτηθεί από το εάν ο μικροοργανισμός είναι ανθεκτικός ή ευαίσθητος στον παράγοντα, καθώς και από τη συγκέντρωση που χρησιμοποιείται στο τεταρτημόριο. Επειδή δε σχηματίζονται ζώνες, γίνεται χρήση του αριθμού αποικιών ή της απουσίας ανάπτυξης σε κάθε τεταρτημόριο ως ένδειξη ευαισθησίας στο φάρμακο. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Οι δίσκοι Sensi-Disc παρασκευάζονται με διαπότιση υψηλής ποιότητας απορροφητικού χαρτιού με επακριβώς προσδιορισμένες ποσότητες αντιμικροβιακών παραγόντων. Οι δίσκοι φέρουν σαφείς σημάνσεις και στις δύο πλευρές τους με γράμματα και αριθμούς που καθορίζουν την περιεκτικότητα στον εκάστοτε παράγοντα και φάρμακο. Τα Sensi-Disc παρέχονται σε φύσιγγες που περιέχουν 50 δίσκους έκαστη. Ο τελευταίος δίσκος σε κάθε φύσιγγα φέρει την ένδειξη X και περιέχει το φάρμακο σύμφωνα με την κωδικοποίηση. Οι φύσιγγες προορίζονται για χρήση σε δοσιμετρικές συσκευές μονού δίσκου.

Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις: Για in vitro διαγνωστική χρήση. Εφαρμόζετε άσηπτες τεχνικές και καθιερωμένες προφυλάξεις από μικροβιολογικούς κινδύνους καθόλη την πορεία όλων των διαδικασιών. 1,6 Εκτελείτε όλους τους χειρισμούς σε θάλαμο βιολογικής ασφάλειας. Αποστειρώνετε τις καλλιέργειες, τα δοχεία και άλλα μολυσμένα υλικά μετά τη χρήση. Για χειρισμούς κλινικών δειγμάτων που δεν παράγουν αερόλυμα, όπως π.χ. κατά την παρασκευή επιχρισμάτων οξυάντοχων μικροοργανισμών, απαιτούνται πρακτικές και διαδικασίες, εξοπλισμός και εγκαταστάσεις περιορισμού βιοασφάλειας επιπέδου 2. Όλες οι δραστηριότητες που παράγουν αερολύματα πρέπει να διεξάγονται σε θάλαμο βιολογικής ασφάλειας τάξης I ή II. Για εργαστηριακές δραστηριότητες πολλαπλασιασμού και χειρισμού καλλιεργειών του M. tuberculosis και του M. bovis απαιτούνται πρακτικές, εξοπλισμός και εγκαταστάσεις περιορισμού βιοασφάλειας επιπέδου 3. Οι μελέτες με πειραματόζωα απαιτούν επίσης ειδικές διαδικασίες. 6 Οδηγίες φύλαξης: 1. Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα δοχεία των δίσκων στους -20 έως +8 C. Εάν το ψυγείο του εργαστηρίου ανοίγεται και κλείνεται συχνά με αποτέλεσμα να μη διατηρείται κατάλληλη θερμοκρασία, τοποθετήστε σε αυτό ποσότητα επαρκή μόνο για χρήση που καλύπτει τις ανάγκες μίας εβδομάδας. 2. Αφήστε τα δοχεία να έλθουν σε θερμοκρασία δωματίου πριν από το άνοιγμα. Επιστρέφετε τους μη χρησιμοποιημένους δίσκους στη συντήρηση του ψυγείου μετά την ολοκλήρωση της εφαρμογής των δίσκων. 3. Χρησιμοποιείτε τους παλαιότερους δίσκους πρώτα. Αλλοίωση του προϊόντος: Απορρίπτετε τους δίσκους μετά το πέρας της ημερομηνίας λήξης τους. Απορρίπτετε επίσης τις φύσιγγες από τις οποίες είχαν αφαιρεθεί συχνά δίσκοι κατά τη διάρκεια μιας εβδομάδας. Απορρίψτε τα δοχεία που έχουν παραμείνει εκτός ψυγείου κατά την προηγούμενη νύκτα στο εργαστήριο ή, διαφορετικά, ελέγξτε τους δίσκους ως προς την απόδοσή τους. Η ημερομηνία λήξης ισχύει για δίσκους στο άθικτο δοχείο τους, εφόσον φυλάσσονται σύμφωνα με τις οδηγίες. Μην ανοίγετε παρά μόνον όταν είστε έτοιμοι για χρήση. ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΧΕΙΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ 1,2 Δείγματα, καθώς και δοκίμια που έχουν υποβληθεί σε πέψη και συμπύκνωση, π.χ. πτύελα, υγρό γαστρικής πλύσης, ούρα, υπεζωκοτικό υγρό, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, αρθρικό υγρό και άλλα υγρά, καθώς και εξιδρώματα και ιστοί, στα οποία διαπιστώθηκε οπτικά η παρουσία οξυάντοχων βακίλλων σε επιχρίσματα, είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν στη μέθοδο άμεσης εξέτασης ευαισθησίας. Καλλιέργειες που προέρχονται από δείγματα και δοκίμια είναι δυνατό να εξετάζονται με την έμμεση μέθοδο. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά: Στη συσκευασία αυτή παρέχονται Sensi-Disc Antimicrobial Discs για χρήση σε υλικά καλλιέργειας σύμφωνα με την επισήμανση. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται: 1. Middlebrook and Cohn 7H10 Agar Base ή Seven H11 Agar Base και Middlebrook OADC Enrichment. 2. Υδατόλουτρο, 45 C περίπου. 3. Πλάκες τύπου τεσσάρων διαμερισμάτων των 100 x 15 mm. 4. Δοσιμετρικές συσκευές μίας θέσης ή λαβίδα. 5. Λύχνος Bunsen, συνδεδεμένος σε πηγή αερίου. 6. Κρίκος ενοφθαλμισμού κατασκευασμένος από σύρμα από λευκόχρυσο ή νιχρώμιο (κράμα νικελίου/χρωμίου) διατομής 24 έως 26 gauge, εφαρμοσμένος σε τυπική υποδοχή στήριξης βακτηριολογικού συρμάτινου κρίκου. Το σύρμα είναι διαμορφωμένο σε κλειστό βρόχο διαμέτρου 2 ή 3 mm με στέλεχος μήκους 60 mm (2 1/2 ίντσες) περίπου. 7. Θάλαμος επώασης, 35 C ή άλλη κατάλληλη θερμοκρασία. 8. Πιπέτα Cornwall, στείρα, των 10 ml, ή άλλου τύπου πιπέτα για χορήγηση 5 ml περίπου υλικού. 9. Αντιδραστήρια και εξοπλισμός οξυάντοχων στελεχών μικροοργανισμών. 10. Μικροσκόπια, χαμηλής ισχύος (ή ανατομικά) και ελαιοκαταδυτικά. 11. Στείρο κεκαθαρμένο νερό ή αλατούχο διάλυμα 0,85%, όγκου 4,5 ml σε σωληνάρια με βιδωτό πώμα. 12. Πιπέτες, του 1 ml, και τριχοειδική πιπέτα Pasteur. 13. Σωληνάρια με βιδωτό πώμα των 16 x 125 mm. 14. Γυάλινα ή πλαστικά σφαιρίδια, διαμέτρου 1 έως 2 mm ή πλαστικά σφαιρίδια πολυστυρενίου υψηλής θερμότητας, όπως *Styrone 700, 27 διαφανή, αρ. 7. 15. Middlebrook 7H9 Broth. 16. Συσκευή ανάμειξης δοκιμαστικών σωληναρίων. 17. Πρότυπο MacFarland αρ. 1 (παρασκευασμένο με προσθήκη 0,1 ml BaCI 2 1% σε 9,9 ml H 2 SO 4 1%). 18. Για επώαση σε αερόβια ατμόσφαιρα εμπλουτισμένη με CO 2, σύστημα GasPak που τίθεται σε λειτουργία με αναλώσιμο φάκελο σχηματισμού διοξειδίου του άνθρακα GasPak, σύστημα GasPak με εξαέρωση, θάλαμο επώασης με διοξείδιο του άνθρακα ή άλλο κατάλληλο σύστημα. * Εμπορικό σήμα της Dow Chemical Co. 2

Διαδικασία της εξέτασης: A. Παρασκευή των πλακών 1. Παρασκευάστε την απαιτούμενη ποσότητα πλήρους στείρου υλικού. Το υλικό θα πρέπει να είναι υγρό και σε θερμοκρασία 50 C περίπου. 2. Με δοσιμετρική συσκευή μίας θέσης ή με στείρα λαβίδα, τοποθετήστε τους δίσκους κεντρικά σε τρία από τα τέσσερα τεταρτημόρια της πλάκας. Το τέταρτο τεταρτημόριο χρησιμεύει ως μάρτυρας χωρίς φάρμακο. 3. Επικολλήστε τους δίσκους στα κέντρα των τεταρτημορίων προσθέτοντας μία ή δύο σταγόνες του υλικού στο καθένα. Εάν το υλικό προστίθεται μέσω βελόνας, όπως στην περίπτωση πιπέτας Cornwall, μπορείτε να τοποθετήσετε υλικό στην περιφέρεια των δίσκων για να τους συγκρατήσετε στη θέση τους. Η μικρή ποσότητα άγαρ πρέπει να ζελατινοποιείται αμέσως. 4. Προσθέστε το υπόλοιπο των 5 ml του υλικού σε κάθε τεταρτημόριο. Η συγκέντρωση του αντιμικροβιακού παράγοντα που προκύπτει ανά ml υλικού θα είναι κατόπιν το ένα πέμπτο εκείνης της περιεκτικότητας του δίσκου. 5. Τοποθετήστε τις πλάκες στο ψυγείο και διατηρήστε τις ολονυκτίως, έτσι ώστε να επιτραπεί η διάχυση σε ολόκληρο το υλικό. 6. Ενοφθαλμίστε τις πλάκες όπως περιγράφεται παρακάτω. B. Άμεση εξέταση ευαισθησίας σε φάρμακα 1 Η άμεση εξέταση ευαισθησίας σε φάρμακα εκτελείται σε ένα δείγμα στο οποίο είναι δυνατό να καταδειχθούν οξυάντοχοι βάκιλλοι (AFB) σε επίχρισμα του δείγματος που έχει υποβληθεί σε πέψη και συμπύκνωση. 1. Υποβάλετε σε χρώση και παρατηρήστε τα επιχρίσματα συμπυκνωμένων κλινικών δειγμάτων, καταγράφοντας το μέσο αριθμό AFB που εντοπίζονται ανά ελαιοκαταδυτικό πεδίο (παρατηρήστε 20 θετικά πεδία περίπου). 2. Επιλέξτε αραιώσεις του υλικού πέψης δείγματος με βάση τα θετικά αποτελέσματα επιχρίσματος ως εξής: Μικροσκόπηση Ενοφθαλμισμός Λιγότεροι από 1 AFB/πεδίο Μη αραιωμένο και 10 2 (1:100) 1 10 AFB/πεδίο 10 1 και 10 3 (1:10 και 1:1000) Περισσότεροι από 10 AFB/πεδίο 10 2 και 10 4 (1:100 και 1:10.000) 3. Πραγματοποιήστε τις αραιώσεις που υποδεικνύονται με 0,5 ml του υλικού πέψης δείγματος και 4,5 ml στείρου νερού ή αλατούχου διαλύματος. Αναμείξτε και μεταφέρετε διαδοχικά 0,5 ml έως 4,5 ml για τις απαιτούμενες αραιώσεις. 4. Με τριχοειδική πιπέτα, ενοφθαλμίστε 3 σταγόνες πάνω σε κάθε τεταρτημόριο των υλικών φαρμάκου και μάρτυρα. Πάνω σε διπλές πλάκες υλικού, εμφυτεύονται δύο αραιώσεις ενοφθαλμισμάτων, συνήθως η μία εκατονταπλάσια της άλλης. Γ. Έμμεση εξέταση 1 Όπου είναι δυνατό, εκτελέστε την άμεση εξέταση. Η έμμεση εξέταση χρησιμοποιεί ως ενοφθάλμισμα μυκοβακτηριδιακή ανάπτυξη από πρωτογενή καλλιέργεια σε υγρό ή στερεό υλικό χωρίς φάρμακο και ενδείκνυται όταν: 1. Το επίχρισμα ήταν αρνητικό και η πρωτογενής καλλιέργεια έχει αναπτυχθεί. 2. Η ανάπτυξη στο μάρτυρα της άμεσης εξέτασης είναι ανεπαρκής για αξιόπιστη αναφορά. 3. Από ένα άλλο εργαστήριο αποστέλλεται μια καλλιέργεια αναφοράς. Για να είναι έγκυρη η εξέταση, το ενοφθάλμισμα πρέπει να είναι αρκετά μεγάλο (50 100 αποικίες στο τεταρτημόριο του μάρτυρα) έτσι ώστε να επιτυγχάνεται καλή ανάπτυξη, αλλά όχι τόσο μεγάλο ώστε να διεγείρει την ανθεκτικότητα σε φάρμακα λόγω της ανάπτυξης αυτόματα εμφανιζόμενων φαρμακοανθεκτικών μεταλλαγμάτων. 1. Αφαιρέστε 2 έως 5 mg περίπου υλικού ανάπτυξης από το υλικό χωρίς φάρμακο. Επιλέξτε ένα μικρό τμήμα κάθε αποικίας, εάν είναι δυνατό. 2. Μεταφέρετε το τμήμα της αποικίας σε ένα στείρο σωληνάριο με βιδωτό πώμα των 16 x 125 mm, που περιέχει 6 έως 8 γυάλινα ή πλαστικά σφαιρίδια και 3 ml υγρού υλικού polysorbate 80-αλβουμίνης (Middlebrook 7H9 Broth). 3. Ομογενοποιήστε τα κύτταρα σε συσκευή ανάμειξης δοκιμαστικών σωληναρίων επί 5 έως 10 min. 4. Αφήστε τα μεγάλα σωματίδια να κατασταλάξουν, αφαιρέστε το υπερκείμενο και ρυθμίστε την οπτική πυκνότητα έτσι ώστε να γίνει ισοδύναμη με το πρότυπο MacFarland αρ. 1 περίπου, με στείρο νερό ή στείρο αλατούχο διάλυμα 0,85%. 5. Αραιώστε έως τα 10 2 και 10 4 πραγματοποιώντας διαδοχικές δεκαπλάσιες αραιώσεις σε στείρο απεσταγμένο νερό ή σε αλατούχο διάλυμα 0,85%. 6. Προχωρήστε σύμφωνα με τις οδηγίες της ενότητας Άμεση εξέταση για τον ενοφθαλμισμό. Δ. Επώαση Μετά τον ενοφθαλμισμό, διατηρείτε τις πλάκες καλυμμένες από το φως και τοποθετήστε τις με την πλευρά με το υλικό προς τα κάτω, σε ένα δοχείο CO 2 GasPak άλλου κατάλληλου συστήματος που παρέχει αερόβια ατμόσφαιρα εμπλουτισμένη με CO 2 3 έως 10% περίπου και επωάστε στους 35 έως 37 C. Εάν ενδέχεται να λάβει χώρα απώλεια υγρασίας κατά τη διάρκεια της επώασης, τοποθετήστε τις πλάκες σε πλαστικές σακούλες (πολυαιθυλενίου) διαπερατές από το CO 2. Μετά την εξαέρωση των σακουλών με συμπίεση, σφραγίστε τις σακούλες με ταινία ή συσκευή θερμοσφράγισης ή διπλώστε τις δύο ή τρεις φορές και συρράψτε τις. Τοποθετήστε τις πλάκες σε σακούλες σε στοίβες το πολύ 6 πλακών. Για να αποτραπεί η συσσώρευση των σταγόνων υγρασίας στις πλάκες κατά τη διάρκεια της επώασης, τοποθετήστε τις πλαστικές πλάκες πάνω σε μονωτική επιφάνεια, π.χ., styrofoam ή χαρτόνι αρκετού πάχους, κ.λπ., και όχι απευθείας πάνω σε μεταλλικό ράφι, δίσκο ή καλάθι. Επωάστε τις σακούλες με τις πλάκες σε αερόβια ατμόσφαιρα εμπλουτισμένη με CO 2 3 έως 10% περίπου στους 35 έως 37 C. 3

Οι εξετάσεις ευαισθησίας σε φάρμακα είναι δυνατό να πραγματοποιηθούν μετά από 5 έως 7 ημέρες με ανατομικό μικροσκόπιο χαμηλής ισχύος και προκαταρκτική αναφορά τυχόν θετικών ευρημάτων καλλιέργειας κατά το χρόνο της αρχικής παρατήρησης. 7 Τελική αναφορά πρέπει να δίνεται μόνον αφού παρέλθουν 3 εβδομάδες επώασης επειδή η ανάπτυξη ανθεκτικών μεταλλαγμάτων ενδέχεται να είναι βραδύτερη σε υλικά καλλιέργειας που περιέχουν φάρμακο από ό,τι στο μάρτυρα. 1,2 ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Καλλιέργειες από δερματικές βλάβες για τις οποίες υπάρχει υποψία ότι είναι M. marinum, M. ulcerans ή M. haemophilum πρέπει να επωάζονται σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 33 C για πρωτογενή απομόνωση. Καλλιέργειες για τις οποίες υπάρχει υποψία ότι περιέχουν M. avium ή M. xenopi εμφανίζουν βέλτιστη ανάπτυξη στους 40 έως 42 C. 1 Επωάστε μια καλλιέργεια εις διπλούν στους 35 έως 37 C. Ποιοτικός έλεγχος χρήστη: Ελέγξτε το υλικό καλλιέργειας χωρίς φάρμακο ως προς την απόδοση, με ενοφθαλμισμό με καθαρές καλλιέργειες σταθερών στελεχών μυκοβακτηριδίων ελέγχου που παράγουν γνωστές, επιθυμητές αντιδράσεις. Ένα φαρμακοευαίσθητο στέλεχος του M. tuberculosis είναι ικανοποιητικό ως μάρτυρας για την κατάδειξη της δραστικότητας των φαρμάκων στα υλικά που χρησιμοποιούνται. 2 Πρέπει να τηρούνται οι απαιτήσεις ποιοτικού ελέγχου σύμφωνα με τους ισχύοντες τοπικούς, πολιτειακούς ή/και ομοσπονδιακούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης και τις πρότυπες διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου του εργαστηρίου σας. Συνιστάται ο χρήστης να ανατρέχει στις σχετικές κατευθυντήριες οδηγίες του CLSI και τους κανονισμούς του CLIA για τις κατάλληλες πρακτικές ποιοτικού ελέγχου. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 1 Άμεση εξέταση και Έμμεση εξέταση Μια εξέταση θεωρείται έγκυρη όταν υπάρχουν 50 ή περισσότερες αποικίες σε τουλάχιστον έναν από τους μάρτυρες. 1. Καταγράψτε τη βακτηριδιακή ανάπτυξη στα τεταρτημόρια των υλικών μάρτυρα και φαρμάκου, όπως υποδεικνύεται παρακάτω: Συρρέουσα (500 ή περισσότερες αποικίες) 4+ Σχεδόν συρρέουσα (200 500 αποικίες) 3+ 100 200 αποικίες 2+ 50 100 αποικίες 1+ Λιγότερες από 50 αποικίες Πραγματικός αριθμός αποικιών 2. Προσδιορίστε το ποσοστό των ανθεκτικών βακίλλων με τον ακόλουθο τύπο: Αριθμός αποικιών στο τεταρτημόριο του φαρμάκου Αριθμός αποικιών στο τεταρτημόριο του μάρτυρα Υπολογισμός δειγμάτων Ανάπτυξη Μη αραιωμένο 10 2 % ανθεκτικότητας Μάρτυρας 4+ 100 INH 0.2 μg/ ml 1+ 10 10% SM 2.0 μg/ ml 0 0 0% PAS 2.0 μg/ml 0 0 0% x 100 = % ανθεκτικότητας 10 αποικίες 100 αποικίες x 100% = 10% ανθεκτικότητας ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το μέγεθος αποικιών των μικροοργανισμών που αναπτύσσονται σε υλικά που περιέχουν φάρμακα ενδέχεται να είναι έκδηλα μικρότερο από ό,τι στο μάρτυρα, ιδιαίτερα με PAS. Επομένως, οι μετρήσεις βασίζονται στους αριθμούς αποικιών που παρατηρούνται και όχι στο μέγεθός τους. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ 1. Επειδή η παρατηρούμενη ευαισθησία σε φάρμακα είναι μια σύγκριση της ποσότητας ανάπτυξης σε υλικά μάρτυρα με την ποσότητα ανάπτυξης σε υλικά που περιέχουν φάρμακα, το ενοφθάλμισμα για κάθε καλλιέργεια πρέπει να διαθέτει επιβεβαιωμένη ομοιομορφία. Είναι απαραίτητη η επίτευξη ομοιόμορφου εναιωρήματος του ενοφθαλμίσματος και η αποφυγή σχηματισμού μεγάλων συσσωματωμάτων. 2. Επειδή ενδέχεται να λάβει χώρα μεταβολή της αναλογίας των ανθεκτικών βακτηριδίων με in vitro ανακαλλιέργεια, προτιμάται η άμεση εξέταση ευαισθησίας με χρήση του επεξεργασμένου δείγματος ως ενοφθάλμισμα, όποτε η εξέταση του επιχρίσματος αποκαλύπτει την παρουσία οξυάντοχων βακίλλων. 3. Εάν πραγματοποιούνται έμμεσες εξετάσεις ευαισθησίας από καλλιέργειες που έχουν διακριτές αποικίες, το ενοφθάλμισμα πρέπει να παρασκευάζεται από μια πλήρως αντιπροσωπευτική επιλογή. Πρέπει να λαμβάνεται δείγμα από όλους τους τύπους αποικιών που παρατηρούνται. 4

ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ Δίσκοι εθαμβουτόλης Πριν από τη διάθεσή τους, όλες οι παρτίδες δίσκων εθαμβουτόλης (EM-25 ή EM-50) εξετάζονται ως προς τα ειδικά χαρακτηριστικά προϊόντος. Αντιπροσωπευτικά δείγματα της παρτίδας αναλύονται ως προς τη συγκέντρωση της εθαμβουτόλης. Δίσκοι εθαμβουτόλης (EM-25 ή EM 50) τοποθετούνται σε σωληνάρια φυγοκέντρου μαζί με 5 ml επεξεργασμένου νερού, 2 ml κυανού της βρωμοθυμόλης και 10 ml βενζολίου. Τα σωληνάρια φυγοκεντρίζονται επί 5 min. Η στοιβάδα του βενζολίου κατόπιν μεταφέρεται σε κυψελίδα του 1 cm και η απορρόφηση μετράται σε φασματοφωτόμετρο υπεριώδους. Η απορρόφηση του δείγματος εξέτασης συγκρίνεται με ένα διάλυμα μάρτυρα που αποτελείται από 5 ml επεξεργασμένου νερού, 2 ml κυανού της βρωμοθυμόλης και 10 ml βενζολίου. Κατόπιν υπολογίζεται η ισχύς του δίσκου. Δίσκοι ισονιαζίδης Πριν από τη διάθεσή τους, όλες οι παρτίδες δίσκων ισονιαζίδης (INH-1 ή INH-5) εξετάζονται ως προς τα ειδικά χαρακτηριστικά προϊόντος. Αντιπροσωπευτικά δείγματα της παρτίδας αναλύονται για τη συγκέντρωση της ισονιαζίδης. Δίσκοι INH τοποθετούνται σε δοκιμαστικό σωλήνα μικροφυγοκέντρου με 500 µl απιονισμένου νερού. Μετά από 30 λεπτά, οι δίσκοι αναδεύονται και φυγοκεντρούνται. Το εκχύλισμα αραιώνεται σε όγκο 1 ml περίπου με προσθήκη 500 µl απιονισμένου νερού. Η ισχύς κάθε δείγματος αναλύεται με τη μέθοδο HPLC. Η ποσότητα INH που περιέχεται στο δίσκο υπολογίζεται με βάση την καμπύλη αναφοράς. Δίσκοι εθειοναμίδης Πριν από τη διάθεσή τους, όλες οι παρτίδες δίσκων εθειοναμίδης (EA-25) εξετάζονται ως προς τα ειδικά χαρακτηριστικά προϊόντος. Αντιπροσωπευτικά δείγματα της παρτίδας αναλύονται ως προς τη συγκέντρωση της εθειοναμίδης. Τοποθετούνται δίσκοι EA σε μια ογκομετρική φιάλη και εκχυλίζονται σε θερμοκρασία δωματίου με 10 ml μεθανόλης επί 18 έως 24 ώρες. Η απορρόφηση κάθε διαλύτη εκχυλίσματος προσδιορίζεται με φασματοφωτομετρία υπεριώδους. Το διάλυμα αναφοράς που χρησιμοποιείται είναι η μεθανόλη. Η ποσότητα εθειοναμίδης που υπάρχει στους δίσκους υπολογίζεται με βάση την απορρόφηση ενός πρότυπου διαλύματος αναφοράς (εντός 10%) της επιθυμητής συγκέντρωσης. Δίσκοι στρεπτομυκίνης Πριν από τη διάθεσή τους, όλες οι παρτίδες δίσκων στρεπτομυκίνης (S-50) εξετάζονται ως προς τα ειδικά χαρακτηριστικά προϊόντος. Αντιπροσωπευτικά δείγματα της παρτίδας αναλύονται ως προς τη συγκέντρωση της στρεπτομυκίνης, με μια διαδικασία προσδιορισμού που αναπτύχθηκε από την BD Diagnostics με βάση το πρωτόκολλο για παρόμοιους αντιμικροβιακούς παράγοντες που αναφέρεται στο Code of Federal Regulations, Part 460- Antibiotic Drugs Intended for Use in Laboratory Diagnosis, Subpart A Susceptibility Discs. Δίσκοι ριφαμπίνης Πριν από τη διάθεσή τους, όλες οι παρτίδες δίσκων ριφαμπίνης (RA-25) εξετάζονται ως προς τα ειδικά χαρακτηριστικά προϊόντος. Αντιπροσωπευτικά δείγματα της παρτίδας αναλύονται ως προς τη συγκέντρωση της ριφαμπίνης, με μια διαδικασία προσδιορισμού που αναπτύχθηκε από την BD Diagnostics με βάση το πρωτόκολλο για παρόμοιους αντιμικροβιακούς παράγοντες που αναφέρεται στο Code of Federal Regulations, Part 460- Antibiotic Drugs Intended for Use in Laboratory Diagnosis, Subpart A Susceptibility Discs. Δίσκοι π-αμινοσαλικυλικού οξέος Πριν από τη διάθεσή τους, όλες οι παρτίδες δίσκων π-αμινοσαλικυλικού οξέος (PAS-10 ή PAS 50) εξετάζονται ως προς τα ειδικά χαρακτηριστικά προϊόντος. Αντιπροσωπευτικά δείγματα της παρτίδας αναλύονται ως προς τη συγκέντρωση του π-αμινοσαλικυλικού οξέος. Τοποθετούνται δίσκοι PAS σε μια ογκομετρική φιάλη και εκχυλίζονται σε θερμοκρασία δωματίου με 10 ml υδροχλωρικού οξέος (HCI) 0,1 N. Μετά από 18 έως 24 ώρες, προσδιορίζεται η απορρόφηση κάθε εκχυλίσματος με φασματοφωτομετρία υπεριώδους. Το διάλυμα αναφοράς που χρησιμοποιείται είναι HCI 0,1 N. Η ποσότητα π-αμινοσαλικυλικού οξέος που υπάρχει στους δίσκους υπολογίζεται με βάση την απορρόφηση ενός πρότυπου διαλύματος αναφοράς (εντός 10%) της επιθυμητής συγκέντρωσης. ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ Αρ. κατ. Περιγραφή 231570 BD BBL Sensi-Disc Streptomycin, 50 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκωv 231571 BD BBL Sensi-Disc Isoniazid (ισονικοτινυλυδραζίνη), 1 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκων 231572 BD BBL Sensi-Disc Isoniazid (ισονικοτινυλυδραζίνη), 5 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκων 231573 BD BBL Sensi-Disc P-Aminosalicylic Acid, 10 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκων 231574 BD BBL Sensi-Disc P-Aminosalicylic Acid, 50 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκων 231575 BD BBL Sensi-Disc Ethambutol, 25 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκων 231576 BD BBL Sensi-Disc Ethambutol, 50 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκων 231577 BD BBL Sensi-Disc Ethionamide, 25 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκων 231578 BD BBL Sensi-Disc Rifampin, 25 μg, μία φύσιγγα των 50 δίσκων 5

ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Kent, P.T., and G.P. Kubica. 1985. Public health mycobacteriology: a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Atlanta. 2. Hawkins, J.E., R.J. Wallace, Jr., and B.A. Brown. 1991. In A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiology, 5th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Wayne, L.G., and I. Krasnow. Am. J. Clin. Pathol. 45:769. 4. Griffith, M., M.L. Barrett, H.L. Bodily, and R.M. Wood. 1967. Am. Clin. Pathol. 47:812. 5. Griffith, M.E., M.L. Matajack, M.L. Bissett, and R.M. Wood. 1971. Am. Rev. Respir. Dis. 103:423. 6. U.S. Public Health Service, Centers for Disease Control and Prevention, and National Institutes of Health. 1999. Biosafety in microbiology and biomedical laboratories, 4th ed. HHS Publication (CDC) 93:8395. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C 7. Runyon, E.H. 1973. Am. J. Clin. Pathol. 59:817. Τεχνική Εξυπηρέτηση και Υποστήριξη της BD Diagnostics: παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD ή τη διεύθυνση www.bd.com/ds. 6

Manufacturer / Производител / Výrobce / Fabrikant / Hersteller / Κατασκευαστής / Fabricante / Tootja / Fabricant / Proizvođać / Gyártó / Fabbricante / Атқарушы / 제조업체 / Gamintojas / Ražotājs / Tilvirker / Producent / Producător / Производитель / Výrobca / Proizvođač / Tillverkare / Üretici / Виробник / 生产厂商 Use by / Използвайте до / Spotřebujte do / Brug før / Verwendbar bis / Χρήση έως / Usar antes de / Kasutada enne / Date de péremption / 사용기한 / Upotrijebiti do / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Дейін пайдалануға / Naudokite iki / Izlietot līdz / Houdbaar tot / Brukes for / Stosować do / Prazo de validade / A se utiliza până la / Использовать до / Použite do / Upotrebiti do / Använd före / Son kullanma tarihi / Використати до\line / 使用截止日期 YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec měsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) ΕΕΕΕ-MM-HH / ΕΕΕΕ-MM (MM = τέλος του μήνα) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fin del mes) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj mjeseca) ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) ЖЖЖЖ-АА-КК / ЖЖЖЖ-АА / (АА = айдың соңы) YYYY-MM-DD/YYYY-MM(MM = 월말 ) MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mėnesio pabaiga) GGGG-MM-DD/GGGG-MM (MM = mēneša beigas) JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesiąca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârşitul lunii) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = конец месяца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet av månaden) YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) РРРР-MM-ДД / РРРР-MM (MM = кінець місяця) YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = 月末 ) Catalog number / Каталожен номер / Katalogové číslo / Katalognummer / Αριθμός καταλόγου / Número de catálogo / Katalooginumber / Numéro catalogue / Kataloški broj / Katalógusszám / Numero di catalogo / Каталог нөмірі / 카탈로그번호 / Katalogo / numeris / Kataloga numurs / Catalogus nummer / Numer katalogowy / Număr de catalog / Номер по каталогу / Katalógové číslo / Kataloški broj / Katalog numarası / Номер за каталогом / 目录号 Authorized Representative in the European Community / Оторизиран представител в Европейската общност / Autorizovaný zástupce pro Evropském společenství / Autoriseret repræsentant i De Europæiske Fællesskaber / Autorisierter Vertreter in der Europäischen Gemeinschaft / Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Représentant autorisé pour la Communauté européenne / Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji / Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben / Rappresentante autorizzato nella Comunità Europea / Европа қауымдастығындағы уәкілетті өкіл / 유럽공동체의위임대표 / Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Pilnvarotais pārstāvis Eiropas Kopienā / Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo we Wspólnocie Europejskiej / Representante autorizado na Comunidade Europeia / Reprezentantul autorizat pentru Comunitatea Europeană / Уполномоченный представитель в Европейском сообществе / Autorizovaný zástupca v Európskom spoločenstve / Autorizovano predstavništvo u Evropskoj uniji / Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Уповноважений представник у країнах ЄС / 欧洲共同体授权代表 In Vitro Diagnostic Medical Device / Медицински уред за диагностика ин витро / Lékařské zařízení určené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medicinska pomagala za In Vitro Dijagnostiku / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medicale per diagnostica in vitro / Жасанды жағдайда жүргізетін медициналық диагностика аспабы / In Vitro Diagnostic 의료기기 / In vitro diagnostikos prietaisas / Medicīnas ierīces, ko lieto in vitro diagnostikā / Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro / Медицинский прибор для диагностики in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Medicinski uređaj za in vitro dijagnostiku / Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik / İn Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Медичний пристрій для діагностики in vitro / 体外诊断医疗设备 Temperature limitation / Температурни ограничения / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperaturbegrenzung / Περιορισμοί θερμοκρασίας / Limitación de temperatura / Temperatuuri piirang / Limites de température / Dozvoljena temperatura / Hőmérsékleti határ / Limiti di temperatura / Температураны шектеу / 온도제한 / Laikymo temperatūra / Temperatūras ierobežojumi / Temperatuurlimiet / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limites de temperatura / Limite de temperatură / Ограничение температуры / Ohraničenie teploty / Ograničenje temperature / Temperaturgräns / Sıcaklık sınırlaması / Обмеження температури / 温度限制 Batch Code (Lot) / Код на партидата / Kód (číslo) šarže / Batch-kode (lot) / Batch-Code (Charge) / Κωδικός παρτίδας (παρτίδα) / Código de lote (lote) / Partii kood / Numéro de lot / Lot (kod) / Tétel száma (Lot) / Codice batch (lotto) / Топтама коды / 배치코드 ( 로트 ) / Partijos numeris (LOT) / Partijas kods (laidiens) / Lot nummer / Batch-kode (parti) / Kod partii (seria) / Código do lote / Cod de serie (Lot) / Код партии (лот) / Kód série (šarža) / Kod serije / Partinummer (Lot) / Parti Kodu (Lot) / Код партії / 批号 ( 亚批 ) Contains sufficient for <n> tests / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Dostatečné množství pro <n> testů / Indeholder tilstrækkeligt til <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / Περιέχει επαρκή ποσότητα για <n> εξετάσεις / Contenido suficiente para <n> pruebas / Küllaldane <n> testide jaoks / Contenu suffisant pour <n> tests / Sadržaj za <n> testova / <n> teszthez elegendő / Contenuto sufficiente per <n> test / <п> тесттері үшін жеткілікті / <n> 테스트가충분히포함됨 / Pakankamas kiekis atlikti <n> testų / Satur pietiekami <n> pārbaudēm / Inhoud voldoende voor n testen / Innholder tilstrekkelig til <n> tester / Zawiera ilość wystarczającą do <n> testów / Conteúdo suficiente para <n> testes / Conţinut suficient pentru <n> teste / Достаточно для <n> тестов(а) / Obsah vystačí na <n> testov / Sadržaj dovoljan za <n> testova / Innehåller tillräckligt för <n> analyser / <n> test için yeterli malzeme içerir / Вистачить для аналізів: <n> / 足够进行 <n> 次检测 Consult Instructions for Use / Направете справка в инструкциите за употреба / Prostudujte pokyny k použití / Se brugsanvisningen / Gebrauchsanweisung beachten / Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Consultar las instrucciones de uso / Lugeda kasutusjuhendit / Consulter la notice d emploi / Koristi upute za upotrebu / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l uso / Пайдалану нұсқаулығымен танысып алыңыз / 사용지침참조 / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Skatīt lietošanas pamācību / Raadpleeg de gebruiksaanwijzing / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja użytkowania / Consultar as instruções de utilização / Consultaţi instrucţiunile de utilizare / См. руководство по эксплуатации / Pozri Pokyny na používanie / Pogledajte uputstvo za upotrebu / Se bruksanvisningen / Kullanım Talimatları na başvurun / Див. інструкції з використання / 请参阅使用说明 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD 21152 USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laoghaire Co. Dublin, Ireland BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2015 BD 7