CT ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ.

COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test CT ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ. Πληροφορίες Παραγγελίας AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Tests P/N: 20759414 122 Specimen Preparation Kit ART: 07 5941 4 US: 83315 AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP 96 Tests P/N: 20759902 122 Amplification Kit ART: 07 5990 2 US: 83319 COBAS AMPLICOR CT DK 100 Tests P/N: 20757497 122 Chlamydia trachomatis ART: 07 5749 7 Detection Kit US: 83277 COBAS AMPLICOR DK 100 Tests P/N: 20757470 122 Detection Reagents Kit ART: 07 5747 0 US: 83276 COBAS AMPLICOR WB 500 Tests P/N: 20759899 123 Wash Buffer ART: 07 5989 9 US: 83314 Το κιτ που ακολουθεί μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση των Neisseria gonorrhoeae σε ενισχυμένα δείγματα με τη χρήση του AMPLICOR CT/NG Κιτ Ενίσχυσης. Η ανίχνευση των Neisseria gonorrhoeae είναι επιλογή χειριστή. COBAS AMPLICOR NG DK 100 Tests P/N: 20757535 122 Neisseria gonorrhoeae ART: 07 5753 5 Detection Kit US: 83278 Το κιτ που ακολουθεί μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου που έχει ενισχυθεί με τη χρήση του AMPLICOR CT/NG Κιτ Ενίσχυσης. Η ανίχνευση του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου είναι επιλογή χειριστή κατά την εξέταση δειγμάτων ούρων ή δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχτεί σε μέσα μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων. Η ανίχνευση του Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου είναι υποχρεωτική κατά την εξέταση των δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχτεί και μεταφερθεί με τη χρήση του AMPLICOR STD Κιτ Συλλογής και Μεταφοράς Δειγμάτων από Στυλεό. COBAS AMPLICOR IC DK 100 Tests P/N: 20757608 122 Internal Control Detection Kit ART: 07 5760 8 US: 83281 Το ακόλουθο κιτ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη συλλογή και τη μεταφορά των ενδοτραχηλικών και των ουρηθρικών δειγμάτων από στυλεό. AMPLICOR STD STD SWAB 50 Tests P/N: 20753920 122 Swab Specimen Collection ART: 07 5392 0 and Transport Kit US: 83075 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 1/36 P/N: 03788989 190

Προβλεπόμενη Χρήση Το COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis (CT) Test είναι μια ποιοτική in vitro εξέταση για την ανίχνευση του DNA C. trachomatis στα κλινικά δείγματα στον COBAS AMPLICOR Αναλυτή. Η εξέταση χρησιμοποιεί την τεχνική ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος Αλυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης (PCR) και τον υβριδισμό νουκλεϊκού οξέος για την ανίχνευση του C. trachomatis στα ουρογεννητικά δείγματα. Σύνοψη και Επεξήγηση της Εξέτασης Τα χλαμύδια είναι αρνητικά κατά gram, μη-κινητικά βακτήρια που υπάρχουν ως υποχρεωτικά ενδοκυτταρικά παράσιτα στα ευκαρυωτικά κύτταρα λόγω της ανικανότητας τους να συνθέσουν ATP. Το γένος Chlamydia αποτελείται από τέσσερα αναφερόμενα είδη: C. trachomatis, C. psittaci, C. peconim και C. pneumoniae (TWAR). Το C. psittaci και C. peconim είναι κυρίως ζωικό παθογόνο 1-3. Οι λοιμώξεις C. trachomatis σήμερα θεωρούνται η δεύτερη αιτία των σεξουαλικά μεταδιδόμενων νοσημάτων (STD) παγκοσμίως, όπου παρουσιάζονται περισσότερα από 89,1 εκατομμύρια περιστατικά ετησίως 4. Στις Ηνωμένες Πολιτείες παρουσιάζονται περίπου 3.000.000 περιστατικά ετησίως 5. Είναι γνωστό ότι τα C. trachomatis προκαλούν φλεγμονή του τραχήλου της μήτρας, φλεγμονώδη πυελική νόσο, επιπεφυκίτιδα και πνευμονία των νεογνών, ουρηθρίτιδα, επιδιδυμίτιδα και πρωκτίτιδα 1,6. Τα C. trachomatis είναι επίσης η πιο συχνή αιτία μη-γονοκοκκικής ουρηθρίτιδας στους άνδρες (περίπου 25-55% των περιπτώσεων). Στις γυναίκες, οι επιπτώσεις των χλαμυδιακών λοιμώξεων είναι σοβαρές αν δεν υπάρξει άμεση αντιμετώπιση. Καθώς περίπου τα τρία τέταρτα αυτών των λοιμώξεων είναι ασυμπτωματικές, πολλές περιπτώσεις δεν ανιχνεύονται και δεν αντιμετωπίζονται, οδηγώντας σε πρόσθετα προβλήματα ειδικότερα στις έγκυες γυναίκες. Τα μωρά που γεννιούνται από μητέρες με χλαμυδιακή λοίμωξη διατρέχουν υψηλό κίνδυνο ανάπτυξης επιπεφυκίτιδας με έγκλειστα και πνευμονίας. Πολλές μέθοδοι διατίθενται για την ανίχνευση των C. trachomatis στα κλινικά δείγματα. Αυτές οι μέθοδοι περιλαμβάνουν την άμεση χρώση Giemsa του μολυσμένου ιστού, την ανίχνευση των χλαμυδιακών έγκλειστων σωματιδίων σε μολυσμένα καλλιεργημένα κύτταρα με χρήση φθορίζουσας χρωστικής αντισώματος, την άμεση ανίχνευση αντιγόνου με χρήση φθορίζουσας χρωστικής αντισώματος και ιχνηθετών νουκλεϊκών οξέων 1,7-9. Η καλλιέργεια παρουσιάζει υψηλή ειδικότητα αλλά χαμηλότερη του 100% ευαισθησία όταν εφαρμόζεται σε κλινική πρακτική ρουτίνας. Καθώς η χλαμυδιακή καλλιέργεια δεν είναι 100% ευαίσθητη, έχει προταθεί η χρήση πολλαπλών εξετάσεων μη-καλλιέργειας για τον προσδιορισμό των μολυσμένων δειγμάτων που δεν εντοπίζει η καλλιέργεια 10. Οι μέθοδοι εξέτασης μη-καλλιέργειας χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό συστατικών οργανισμών (πρωτεΐνη ή νουκλεϊκό οξύ) που υποτίθεται ότι παρουσιάζουν συσχετισμό με τους μολυσμένους οργανισμούς. Αυτές οι μέθοδοι μπορούν να ανιχνεύσουν πρόσθετα θετικά δείγματα που δεν εντοπίζει η καλλιέργεια. Καθώς αυτές οι μέθοδοι είναι λιγότερο από 100% ειδικές, συνιστάται η επαλήθευση του αντιγόνου των C. trachomatis ή του νουκλεϊκού οξέος με μια εναλλακτική μέθοδο (συνιστώμενη ενέργεια 1993 CDC) 4. Βασικές Αρχές της Διαδικασίας Το COBAS AMPLICOR CT Test βασίζεται σε τέσσερις κύριες διαδικασίες: προετοιμασία δείγματος, ενίσχυση PCR 11,12 του DNA-στόχου με τη χρήση CT-ειδικών συμπληρωματικών εκκινητών, υβριδισμό των ενισχυμένων προϊόντων σε ολιγονουκλεοτιδικούς ιχνηθέτες ειδικούς για το(ους) στόχο(ους) και ανίχνευση των δεσμευμένων στον ιχνηθέτη ενισχυμένων προϊόντων με χρωματομετρικό προσδιορισμό. 2/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis Προετοιμασία Δείγματος PCR Ενίσχυση Η ανάπτυξη της ανάλυσης PCR περιλαμβάνει την ταυτοποίηση της ειδικής περιοχής του DNA στόχου προς ενίσχυση και τη σύνθεση δύο μικρών βιοτινιλυωμένων ολιγονουκλεοτιδικών εκκινητών που είναι συμπληρωματικοί στις πλευρές των περιοχών της αλληλουχίας στόχου. Οι βιοτινιλυωμένοι αυτοί εκκινητές δεσμεύονται στη συμπληρωματική πλευρική περιοχή και η DNA πολυμεράση επεκτείνει την αλληλουχία στο 5' έως το 3' κατεύθυνση χρησιμοποιώντας πλεόνασμα τριφωσφορικών δεοξυνουκλεοζιτών (dntps) στο μίγμα αντίδρασης δημιουργώντας έτσι μια βιοτινιλυωμένη συμπληρωματική αλληλουχία DNA που αποκαλείται κλώνος (amplicon). Ένας ολιγονουκλεοτιδικός ιχνηθέτης ειδικός για τον κλώνο (amplicon) δεσμεύεται σε μια σταθερή βάση (μικροσωματίδια) και χρησιμοποιείται για τον υβριδισμό (δέσμευση) του κλώνου (amplicon). Το σύστημα ανίχνευσης της ανάλυσης χρησιμοποιεί ένα συζεύκτη avidin-υπεροξειδάσης ραφανίδας (HRP) που δεσμεύει το βιοτινιλυωμένο κλώνο (amplicon) που είναι δεσμευμένος στα μικροσωματίδια. Για το σχηματισμό χρώματος χρησιμοποιείται υπόστρωμα υπεροξειδίου του υδρογόνου και χρωμοφόρος τετραμεθυλοβενζιδίνη (TMB). Το COBAS AMPLICOR CT Test είναι μια πολύπλοκη ανάλυση που επιτρέπει την ταυτόχρονη ενίσχυση του DNA στόχου των C. trachomatis, του DNA στόχου των Neisseria gonorrhoeae και του DNA του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου (CT/NG IC). Το αντιδραστήριο Κυρίου Μίγματος περιέχει ένα ζεύγος βιοτινιλυωμένων εκκινητών ειδικών για C. trachomatis, N. gonorrhoeae και CT/NG IC. Η ανίχνευση του ενισχυμένου DNA των N. gonorrhoeae μπορεί να εκτελεστεί στην επιλογή χειριστή. Η ανίχνευση του CT/NG IC πρέπει να εκτελείται κατά την εξέταση δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχτεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Μεταφοράς και Συλλογής Δειγμάτων από Στυλεό. Η ανίχνευση του CT/NG IC μπορεί εκτελεστεί με την επιλογή χειριστή κατά την εξέταση δειγμάτων ούρων ή δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχτεί και μεταφερθεί σε μέσα μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων. Τα ουρογεννητικά επιθηλιακά κύτταρα που έχουν συλλεχθεί με στυλεό ή έχουν κατακρημνιστεί από ούρα αντιμετωπίζονται με ένα καθαριστικό διάλυμα για την απελευθέρωση του χλαμυδιακού DNA που περιέχεται στα χλαμυδιακά δικτυοσώματα. Ένα δεύτερο καθαριστικό διάλυμα προστίθεται στη συνέχεια στο λυμένο δείγμα για ενίσχυση. Επιλογή Στόχου Εκτός από το χρωμοσωμικό DNA, τα C. trachomatis περιέχουν κρυπτικό πλασμίδιο περίπου 7.500 ζευγών βάσεων που είναι κοινό σε όλες τις ορολογικές ποικιλίες των C. trachomatis 13,14. Το COBAS AMPLICOR CT Test χρησιμοποιεί τους ειδικούς βιοτινιλυωμένους εκκινητές CP24 και CP27 για τον προσδιορισμό μιας αλληλουχίας περίπου 208 νουκλεοτιδίων μέσα στο κρυπτικό DNA πλασμίδιο των C. trachomatis. Ενίσχυση Στόχου Τα επεξεργασμένα δείγματα προστίθενται στο μίγμα ενίσχυσης σε σωληνάρια ενίσχυσης A-tubes στα οποία πραγματοποιείται ενίσχυση PCR. Το μίγμα αντίδρασης θερμαίνεται και πάλι για την αποδιάταξη του έλικα δίκλωνου DNA και την έκθεση των αλληλουχιών-στόχου ειδικών για τον εκκινητή στο C. trachomatis κρυπτικό πλασμίδιο. Καθώς το μίγμα ψύχεται, οι βιοτινιλυωμένοι εκκινητές CP24 και CP27 υβριδίζονται στο DNA-στόχο. Η θερμοσταθερή DNA πολυμεράση Thermus aquaticus (Taq pol), με την παρουσία πλεονάσματος τριφωσφορικών δεοξυνουκλεοζιτών (dntps), στους οποίους περιλαμβάνονται η τριφωσφορική δεοξυαδενοσίνη, δεοξυγουανοσίνη, δεοξυκυτιδίνη και η δεοξυουριδίνη (αντί της δεοξυθυμιδίνης), επεκτείνει τους υβριδισμένους εκκινητές κατά μήκος των προτύπων-στόχων για τη δημιουργία ενός μορίου δίκλωνου DNA 208 ζευγών βάσεων που ονομάζεται κλώνος (amplicon). Ο COBAS AMPLICOR Αναλυτής επαναλαμβάνει αυτόματα τη διαδικασία αυτή για έναν καθορισμένο αριθμό κύκλων, καθένας από τους οποίους έχει, θεωρητικά, ως αποτέλεσμα το διπλασιασμό των DNA κλώνων (amplicon). 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 3/36

Ενίσχυση Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου Στις διαδικασίες ενίσχυσης βάσει ενζύμων, όπως στην PCR, η αποτελεσματικότητα μπορεί να μειωθεί από αναστολείς που ενδέχεται να υπάρχουν στο κλινικό δείγμα. Το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου επιτρέπει την ταυτοποίηση των επεξεργασμένων δειγμάτων που περιέχουν ουσίες που ενδέχεται να αλληλεπιδράσουν με την ενίσχυση PCR. Το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου είναι ένα μη-μολυσματικό, ανασυνδυασμένο DNA πλασμίδιο με περιοχές δέσμευσης εκκινητή όμοιες με αυτές της αλληλουχίας-στόχου C. trachomatis, μια τυχαία εσωτερική αλληλουχία παρόμοιου μεγέθους και σύνθεσης βάσης με την αλληλουχίαστόχο C. trachomatis και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη που διαφοροποιεί το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου από τον κλώνο (amplicon)- στόχο. Τα χαρακτηριστικά αυτά επιλέχθηκαν για τη διασφάλιση ισοδύναμης ενίσχυσης του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου και του DNA στόχου του C. trachomatis. Το CT/NG Αντιδραστήριο Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου περιλαμβάνεται στο AMPLICOR CT/NG Κιτ Ενίσχυσης και εισάγεται σε κάθε αντίδραση ενίσχυσης για να συνενισχυθεί με το DNA στόχο από το κλινικό δείγμα. Το προαιρετικό COBAS AMPLICOR Κιτ Ανίχνευσης Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου περιέχει ένα IC-ειδικό ολιγονουκλεοτιδικό ιχνηθέτη δέσμευσης που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ταυτοποίηση ενός θετικού IC σήματος στο μίγμα αντίδρασης. Το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου έχει σχεδιαστεί για την ταυτοποίηση δειγμάτων που περιέχουν αναστολείς που αλληλεπιδρούν με την ενίσχυση και την ανίχνευση των 20 ή και περισσοτέρων αντιγράφων του νουκλεϊκού οξέος-στόχου των C. trachomatis όπως προσδιορίζεται από την ανάλυση Poisson. Η ανίχνευση του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου εκτελείται στην επιλογή χειριστή κατά την εξέταση δειγμάτων ούρων ή δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχτεί και μεταφερθεί σε μέσα μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων. Η ανίχνευση του CT/NG IC είναι υποχρεωτική κατά την εξέταση δειγμάτων από στυλεό που έχουν συλλεχτεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Μεταφοράς και Συλλογής Δειγμάτων από Στυλεό. Επιλεκτική Ενίσχυση Η επιλεκτική ενίσχυση του νουκλεϊκού οξέος-στόχου από το κλινικό δείγμα επιτυγχάνεται στo COBAS AMPLICOR CT Test με τη χρήση του ενζύμου AmpErase (ουρακίλη-n-γλυκοζυλάση) και της τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης (dutp). Το ένζυμο AmpErase αναγνωρίζει και καταλύει τη διάσπαση των κλώνων του DNA που περιέχουν δεοξυουριδίνη 15, αλλά όχι των κλώνων του DNA που περιέχουν δεοξυθυμιδίνη. Η δεοξυουριδίνη δεν υπάρχει στο φυσικό DNA, αλλά υπάρχει πάντοτε στον κλώνο (amplicon) λόγω της χρήσης τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης, αντί της τριφωσφορικής δεοξυθυμιδίνης, ως ενός από τα dntps του αντιδραστηρίου Κύριου Μίγματος. Για το λόγο αυτό, μόνο ο κλώνος (amplicon) περιέχει δεοξυουριδίνη. Η δεοξυουριδίνη καθιστά το μολυσματικό κλώνο (amplicon) ευαίσθητο στη διάσπαση από το ένζυμο AmpErase πριν από την ενίσχυση του DNA-στόχου. To ένζυμο AmpErase, που περιλαμβάνεται στο αντιδραστήριο Κύριου Μίγματος, καταλύει τη σχάση του DNA που περιέχει δεοξυουριδίνη στα ιζήματα της δεοξυουριδίνης ανοίγοντας την αλυσίδα της δεοξυριβόζης στη θέση C1. Όταν θερμαίνεται στο πρώτο βήμα θερμοκυκλοποίησης στο αλκαλικό ph του Κύριου Μίγματος, η αλυσίδα DNA του κλώνου (amplicon) διασπάται στη θέση της δεοξυουριδίνης, καθιστώντας το DNA μη ενισχύσιμο. Το ένζυμο AmpErase είναι αδρανές σε θερμοκρασίες πάνω από τους 55 C, δηλαδή, σε όλα τα βήματα της θερμοκυκλοποίησης, και για το λόγο αυτόν δεν καταστρέφει τον κλώνο (amplicon)-στόχο. Μετά την ενίσχυση, όλα τα υπολειμματικά ένζυμα αποδιατάσσονται με την προσθήκη του Διαλύματος Αποδιάταξης, προλαμβάνοντας έτσι την αποικοδόμηση οποιουδήποτε κλώνου (amplicon)-στόχου. Το ένζυμο AmpErase στο COBAS AMPLICOR CT Test έχει αποδειχτεί ότι αδρανοποιεί τουλάχιστον 10 3 αντίγραφα κλώνου (amplicon) C. trachomatis που περιέχουν δεοξυουριδίνη σε κάθε PCR. 4/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis Αντίδραση Υβριδισμού Μετά την ενίσχυση PCR, ο COBAS AMPLICOR Αναλυτής προσθέτει αυτόματα Διάλυμα Αποδιάταξης στα A-tubes για τη χημική αποδιάταξη του CT κλώνου (amplicon) και του CT/NG κλώνου(amplicon) Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου για το σχηματισμό μονόκλωνου DNA. Τα κλάσματα του αποδιαταγμένου κλώνου (amplicon) μεταφέρονται στη συνέχεια σε σωληνάρια ανίχνευσης (D-cups). Ένα εναιώρημα μαγνητικών σωματιδίων με επικάλυψη ολιγονουκλεοτιδικού ιχνηθέτη ειδικού για C. trachomatis (ή το Εσωτερικό Πρότυπο Έλεγχο στην επιλογή χειριστή) προστίθεται στα μεμονωμένα D-cup. Ο επισημασμένος με βιοτίνη CT και ο CT/NG κλώνος (amplicon) Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου υβριδίζονται στους ολιγονουκλεοτιδικούς ειδικούς για το στόχο ιχνηθέτες που είναι δεσμευμένοι στα μαγνητικά σωματίδια. Ο υβριδισμός του κλώνου (amplicon) στον ειδικό για το στόχο ιχνηθέτη αυξάνει τη συνολική ειδικότητα της εξέτασης. Αντίδραση Ανίχνευσης Μετά την αντίδραση υβριδισμού, ο COBAS AMPLICOR Αναλυτής πραγματοποιεί πλύση των μαγνητικών σωματιδίων στα D-cup για να απομακρυνθούν μη δεσμευμένα υλικά και στη συνέχεια προσθέτει συζεύκτη avidinυπεροξειδάσης ραφανίδας. Ο συζεύκτης avidin-υπεροξειδάσης ραφανίδας δεσμεύεται στον επισημασμένο με βιοτίνη κλώνο (amplicon) που υβριδίζεται στους ειδικούς για το στόχο ολιγονουκλεοτιδικούς ιχνηθέτες που είναι δεσμευμένοι στα μαγνητικά σωματίδια. Ο COBAS AMPLICOR Αναλυτής απομακρύνει το μη δεσμευμένο συζεύκτη πραγματοποιώντας πλύση των μαγνητικών σωματιδίων και στη συνέχεια σε κάθε D-cup προσθέτει διάλυμα υποστρώματος που περιέχει υπεροξείδιο του υδρογόνου και 3,3',5,5'-τετραμεθυλοβενζιδίνη (TMB). Με την παρουσία του υπεροξειδίου του υδρογόνου, η δεσμευμένη στο σωματίδιο υπεροξειδάση ραφανίδας καταλύει την οξείδωση της TMB για το σχηματισμό ενός έγχρωμου συμπλόκου, η απορρόφηση του οποίου μετράται σε μήκος κύματος των 660 nm από τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή. Αντιδραστήρια AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Εξετ. P/N: 20759414 122 Specimen Preparation Kit ART: 07 5941 4 AMPLICOR CT/NG US: 83315 Κιτ Προετοιμασίας Δειγμάτων CT/NG URINE WASH (CT/NG Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης Ούρων) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 300 mm Χλωριούχο νάτριο < 0,1% Καθαριστικό 0,09% Αζίδιο του νατρίου CT/NG LYS (CT/NG Αντιδραστήριo Λύσης) Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 1% Σταθεροποιητής Διαλύματος 0,09% Αζίδιο του νατρίου CT/NG DIL (CT/NG Αραιωτικό Δείγματος) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 6 mm Χλωριούχο μαγνήσιο < 25% Καθαριστικό 0,05% Αζίδιο του νατρίου 1 x 50 ml 1 x 25 ml 2 x 50 ml 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 5/36

AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP 96 Εξετ. P/N: 20759902 122 Amplification Kit ART: 07 5990 2 AMPLICOR CT/NG Κιτ Ενίσχυσης US: 83319 CT/NG MMX 3 x 1,8 ml (CT/NG Κύριο Μίγμα) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl EDTA 100 mm Χλωριούχο κάλιο Γλυκερόλη < 0,016% dutp < 0,01% AmpliTaq (Taq DNA Πολυμεράσης, μικροβιακό) < 0,005% datp, dctp, dgtp < 0,01% Ένζυμο AmpErase (ουρακίλη-n-γλυκοζυλάση) (μικροβιακό) < 0,0004% Εκκινητές SS01, SS02, CP24 και CP27, βιοτινιλυωμένοι 0,05% Αζίδιο του νατρίου CT/NG IC 3 x 0,1 ml (CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου) Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 0,001% μη μολυσματικό ανασυνδυασμένο DNA πλασμίδιο (μικροβιακό), που περιέχει αλληλουχίες δέσμευσης CT εκκινητή και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη < 0,005% Poly ra RNA (συνθετικό) EDTA Χρωστική ύλη αμαράνθης 0,05% Αζίδιο του νατρίου CT (+) C 1 x 0,8 ml [C. trachomatis (+) Ορός Ελέγχου] Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 0,001% μη μολυσματικό ανασυνδυασμένο DNA πλασμίδιο (συνθετικό), που περιέχει αλληλουχίες C. trachomatis < 0,005% Poly ra RNA (συνθετικό) < 0,5% Καθαριστικό EDTA 0,05% Αζίδιο του νατρίου NG (+) C 1 x 0,8 ml [C. trachomatis ( ) Ορός Ελέγχου] Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 0,001% μη μολυσματικό ανασυνδυασμένο DNA πλασμίδιο (συνθετικό) που περιέχει αλληλουχίες N. gonorrhoeae < 0,005% Poly ra RNA (συνθετικό) < 0,5% Καθαριστικό EDTA 0,05% Αζίδιο του νατρίου COBAS AMPLICOR CT DK 100 Εξετ. P/N: 20757497 122 Chlamydia trachomatis Detection Kit ART: 07 5749 7 COBAS AMPLICOR US: 83277 Chlamydia trachomatis Κιτ Ανίχνευσης CT PS1 1 x 100 Εξετάσεις (CT Αιώρημα Ιχνηθέτη 1) Ρυθμιστικό διάλυμα MES < 0,3% Εναιώρημα Dynabeads (παραμαγνητικά σωματίδια) επικαλυμμένο με ειδικό για C. trachomatis ολιγονουκλεοτιδικό ιχνηθέτη δέσμευσης CP35 0,9% Αζίδιο του νατρίου 6/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis CT4 (CT Αιώρημα Ιχνηθέτη 2) Ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου 25% Θειοκυανικό νάτριο < 0,2% Σταθεροποιητής Διαλύματος Xn 25% (w/w) Θειοκυανικό νάτριο + 1 x 100 Εξετάσεις Επιβλαβές COBAS AMPLICOR DK 100 Εξετ.P/N: 20757470 122 Detection Reagents Kit ART: 07 5747 0 COBAS AMPLICOR US: 83276 Κιτ Αντιδραστηρίων Ανίχνευσης DN4 1 x 100 Εξετάσεις (Διάλυμα Αποδιάταξης) 1,6% Υδροξείδιο του νατρίου EDTA Μπλε θυμόλη Xi 1,6% (w/w) Υδροξείδιο του νατρίου + Ερεθιστικό CN4 (Συζεύκτης Υπεροξειδάσης Αvidin-Ραφανίδας) Ρυθμιστικό διάλυμα tris-hci < 0,001% Συζεύκτης Υπεροξειδάσης Αvidin-Ραφανίδας Bόειος λευκωματίνη ορού (θηλαστικού) Emulsit 25 (Dai-ichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.) 0,1% Φαινόλη 1% Συντηρητικό ProClin 150 SB3 (Υπόστρωμα A) Διάλυμα κιτρικού άλατος 0,01% Υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,1% Συντηρητικό ProClin 150 SB (Υπόστρωμα B) 0,1% 3,3',5,5'-Τετραμεθυλοβενζιδίνη (TMB) 40% Διμεθυλοφορμαμίδιο (DMF) T 40% (w/w) Διμεθυλοφορμαμίδιο (DMF) 1 x 100 Εξετάσεις 5 x 75 Εξετάσεις 5 x 5 ml Τοξικό R: 61-20/21-36 Μπορεί να βλάψει το έµβρυο κατά τη διάρκεια της κύησης. Επιβλαβές όταν εισπνέεται και σε επαφή µε το δέρµα. Ερεθίζει τα µάτια. S: 53-45 Αποφεύγετε την έκθεση - εφοδιαστείτε µε τις ειδικές οδηγίες πριν από τη χρήση. Σε περίπτωση ατυχήµατος ή αν αισθανθείτε αδιαθεσία ζητήστε αµέσως ιατρική συµβουλή (δείξτε την ετικέτα αν είναι δυνατό). 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 7/36

COBAS AMPLICOR WB 500 Εξετ. P/N: 20759899 123 Wash Buffer ART: 07 5989 9 COBAS AMPLICOR US: 83314 Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης WB 2 x 250 Εξετάσεις (10Χ Πυκνό Διάλυμα Πλύσης) < 2% Φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα < 9% Χλωριούχο νάτριο EDTA < 2% Καθαριστικό 0,5% Συντηρητικό ProClin 300 Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Η χρήση του όρου αντίγραφο σε αυτό το εγχειρίδιο μεθόδου αναφέρεται σε 1 αντίγραφο νουκλεϊκού οξέος στόχου C. trachomatis. Ένα (1) αντίγραφο ισοδυναμεί με τη μικρότερη ποσότητα του νουκλεϊκού οξέος στόχου C. trachomatis που θα δημιουργήσει ένα θετικό αποτέλεσμα εξέτασης PCR. Αυτή η εξέταση προορίζεται για χρήση μόνο με ενδοτραχηλικά, ουρηθρικά δείγματα και δείγματα ούρων. Αυτή η εξέταση δεν προορίζεται για χρήση με φαρυγγικά, δείγματα ορθού ή άλλου τύπου διαφορετικά από αυτά που υποδεικνύονται. Μην αναρροφάτε με πιπέτα από το στόμα. Μην τρώτε, πίνετε ή καπνίζετε στους χώρους εργασίας των εργαστηρίων. Φοράτε προστατευτικά γάντια μιας χρήσης, χωρίς πούδρα, ποδιές εργαστηρίου και προστατευτικά γυαλιά όταν χειρίζεστε δείγματα και κιτ αντιδραστηρίων. Πλένετε καλά τα χέρια σας μετά το χειρισμό δειγμάτων και κιτ αντιδραστηρίων. Αποφεύγετε τη μόλυνση των αντιδραστηρίων από μικρόβια όταν αφαιρείτε τα κλάσματα δειγμάτων από τις φιάλες αντιδραστηρίων. Συνιστάται η χρήση αποστειρωμένων πιπετών και ακροφυσίων πιπετών μιας χρήσης. Μη συγκεντρώνετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες ή από διαφορετικές φιάλες της ίδιας παρτίδας. Η απόρριψη των αχρησιμοποίητων αντιδραστηρίων και των απορριμμάτων θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς. Μη χρησιμοποιείτε ένα κιτ μετά την ημερομηνία λήξης του. Διατίθενται Δελτία Δεδομένων Ασφάλειας Υλικών (MSDS) κατόπιν ζήτησης από τα τοπικά γραφεία της Roche. Η ροή των εργασιών στο εργαστήριο πρέπει να εκτελείται σε μονόδρομη κατεύθυνση, αρχίζοντας από την περιοχή προετοιμασίας πριν από την ενίσχυση και προχωρώντας προς την περιοχή προετοιμασίας μετά την ενίσχυση (ενίσχυση/ανίχνευση). Οι δραστηριότητες πριν από την ενίσχυση πρέπει να αρχίζουν με την προετοιμασία του αντιδραστηρίου και να συνεχίζονται με την προετοιμασία του δείγματος. Τα υλικά και ο εξοπλισμός πρέπει να προορίζονται αποκλειστικά για κάθε ενέργεια που προηγείται του ενίσχυσης και όχι για άλλες ενέργειες, ούτε να μεταφέρονται μεταξύ των περιοχών. Πρέπει να φοράτε γάντια σε κάθε περιοχή και να τα αλλάζετε πριν από την έξοδό σας από τη συγκεκριμένη περιοχή. Ο εξοπλισμός και τα υλικά που χρησιμοποιούνται για την προετοιμασία του αντιδραστηρίου δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται για ενέργειες προετοιμασίας δειγμάτων ή για το χειρισμό με πιπέτα ή την επεξεργασία ενισχυμένου DNA ή άλλων πηγών DNA-στόχου. Τα υλικά και ο εξοπλισμός που χρησιμοποιούνται μετά την ενίσχυση πρέπει να παραμένουν πάντοτε στον ειδικό χώρο που προορίζεται για την επεξεργασία μετά την ενίσχυση. 8/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis Σημείωση Τα δείγματα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικά και ο χειρισμός τους να γίνεται με ασφαλείς εργαστηριακές διαδικασίες, όπως αυτές που περιγράφονται στην τεκμηρίωση Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 16 και στο έγγραφο CLSI M29-A3 17. Καθαρίζετε καλά και απολυμαίνετε όλες τις επιφάνειες εργασίας με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απιονισμένο ή απεσταγμένο νερό. Τα οικιακά υγρά λευκαντικά του εμπορίου περιέχουν κατά κανόνα υποχλωριώδες νάτριο σε συγκέντρωση 5,25%. Η αραίωση οικιακού λευκαντικού σε αναλογία 1:10 παράγει διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 0,5%. Τα δείγματα που λαμβάνονται από το εργαστήριο με το στυλεό ακόμη μέσα στο AMPLICOR STM είναι μη αποδεκτά για εξέταση. Τα δείγματα αυτά πρέπει να απορρίπτονται και να συλλέγεται ένα νέο δείγμα. Τα δείγματα που έχουν συλλεχτεί και μεταφερθεί με το AMPLICOR STD Κιτ Μεταφοράς και Συλλογής Δειγμάτων από Στυλεό ενδέχεται να αναστείλουν την PCR. Η ανίχνευση του CT/NG IC πρέπει να εκτελείται κατά την εξέταση αυτών των δειγμάτων. Για δείγματα τα οποία μεταφέρονται σε μέσο μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων, οι στυλεοί θα πρέπει να αφήνονται στο σωληνάριο μεταφοράς καλλιέργειας, έτσι ώστε να υπάρχουν οπτικές αποδείξεις εμβολιασμού του δείγματος. Το COBAS AMPLICOR CT/NG Test για Chlamydia trachomatis αξιολογήθηκε με τη χρήση δειγμάτων που μεταφέρθηκαν με το στυλεό στο σωληνάριο του μέσου μεταφοράς καλλιέργειας Χλαμυδίων (CTM). Τα δείγματα CTM που μεταφέρθηκαν χωρίς στυλεούς δεν έχουν αξιολογηθεί και δεν συνιστάται η χρήση τους για αυτή την εξέταση. Η αποθήκευση των δειγμάτων ούρων σε θερμοκρασία δωματίου για περισσότερο από 24 ώρες μπορεί να οδηγήσει σε αποικοδόμηση του δείγματος. Τα δείγματα ούρων που αποθηκεύονται για περισσότερο από 24 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται για εξέταση. Τα CT/NG URINE WASH, CT/NG LYS, CT/NG DIL, CT/NG MMX, CT/NG IC, CT (+) C, NG (+) C, CT PS1 και IC PS1 περιέχουν αζίδιο του νατρίου. Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με το μόλυβδο και το χαλκό των σωληνώσεων και να δημιουργήσει υψηλής εκρηκτικότητας αζίδια μετάλλου. Όταν απορρίπτετε διαλύματα που περιέχουν αζίδιο του νατρίου στους νεροχύτες των εργαστηρίων, ρίχνετε άφθονη ποσότητα νερού για να αποφύγετε το σχηματισμό αζιδίου. Κατά το χειρισμό των DN4, CN4, SB3, SB και του Υποστρώματος Εργασίας (μίγμα αντιδραστηρίων SB3 και SB), φοράτε προστατευτικά γυαλιά, ποδιές εργαστηρίου και γάντια μιας χρήσης, χωρίς πούδρα. Αποφύγετε την επαφή των υλικών αυτών με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση τυχαίας επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού. Εάν δεν υπάρξει άμεση αντιμετώπιση, μπορεί να προκληθούν εγκαύματα. Εάν πέσουν σταγόνες από τα αντιδραστήρια, αραιώστε με νερό πριν τις σκουπίσετε. Αποφύγετε την επαφή του δέρματος ή των βλεννογόνων με το SB ή το Υπόστρωμα Εργασίας. Σε περίπτωση τυχαίας επαφής με το δέρμα, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού. Το SB και το υπόστρωμα εργασίας περιέχουν διμεθυλοφορμαμίδιο, το οποίο έχει χαρακτηριστεί ως τοξικό σε υψηλές δόσεις από το στόμα και μπορεί να προκαλέσει βλάβη στο έμβρυο. Θα πρέπει να αποφεύγεται η επαφή με το δέρμα, η εισπνοή αναθυμιάσεων και η κατάποση. Σε περίπτωση τυχαίας επαφής με το δέρμα, πλύνετε καλά με σαπούνι και νερό και ζητήστε αμέσως ιατρική βοήθεια. Για την προετοιμασία των δειγμάτων και των ορών ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια με βιδωτό πώμα, έτσι ώστε να αποφεύγεται το πιτσίλισμα και η ενδεχόμενη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων. Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα. 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 9/36

Αποθήκευση και Απαιτήσεις Χειρισμού Μην καταψύχετε τα αντιδραστήρια.. Αποθηκεύστε το CT/NG LYS στους 2-25 C. Αποθηκεύστε το CT/NG URINE WASH και CT/NG DIL στους 2-8 C. Αν σχηματιστεί κατακρήμνισμα σε οποιοδήποτε από αυτά τα αντιδραστήρια κατά την αποθήκευση, θερμάνετε σε θερμοκρασία δωματίου και ανακατέψτε καλά πριν από τη χρήση. Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Αποθηκεύστε το CT/NG MMX και CT/NG IC στους 2-8 C. Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Το Κύριο Μίγμα Εργασίας (που έχει προετοιμαστεί με την προσθήκη CT/NG IC σε CT/NG MMX) πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C και παραμένει σταθερό για 4 εβδομάδες. Αποθηκεύστε το CT (+) C και NG (+) C στους 2-8 C. Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Αποθηκεύστε το CT PS1 και CT4 στους 2-8 C. Τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μόλις το CT PS1 και το CT4 αναμιχθούν, το Αντιδραστήριο Εργασίας παραμένει σταθερό για 30 ημέρες στους 2-8 C. Αυτό το Αντιδραστήριο Εργασίας μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως και έξι κύκλους οργάνου (12 ώρες ανά κύκλο) και πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C μεταξύ των κύκλων οργάνου. Αποθηκεύστε το DN4 στους 2-25 C. Το DN4 παραμένει σταθερό μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μόλις ανοιχτεί, το DN4 παραμένει σταθερό για 30 ημέρες στους 2-8 C ή μέχρι την ημερομηνία λήξης, ανάλογα με την περίπτωση. Το DN4 μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως και για 6 κύκλους οργάνου (12 ώρες ανά κύκλο) και μπορεί να αποθηκευτεί στους 2-8 C μεταξύ των κύκλων οργάνου. Αποθηκεύστε το CN4 στους 2-8 C. Το CN4 παραμένει σταθερό μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μόλις ανοιχτεί, το αντιδραστήριο CN4 παραμένει σταθερό για 30 ημέρες στους 2-8 C ή μέχρι την ημερομηνία λήξης, ανάλογα με την περίπτωση. Το CN4 μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως και για 6 κύκλους οργάνου (12 ώρες ανά κύκλο) και πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C μεταξύ των κύκλων οργάνου. Αποθηκεύστε το SB3 και το SB στους 2-8 C. Αν δεν ανοιχτούν, τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Το Υπόστρωμα Εργασίας πρέπει να προετοιμάζεται κάθε μέρα αναμιγνύοντας το SB3 με το SB. Το Υπόστρωμα Εργασίας παραμένει σταθερό στον COBAS AMPLICOR Αναλυτή για 16 ώρες. Μην εκθέτετε τα SB3, SB ή το Υπόστρωμα Εργασίας σε μέταλλα, οξειδωτικά ή σε άμεση ηλιακή ακτινοβολία. Αποθηκεύστε το WB στους 2-30 C. Το WB παραμένει σταθερό μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Εξετάστε το WB και αν χρειάζεται, θερμάνετε στους 30-37 C για την επαναδιάλυση ενδεχόμενων κατακρημνίσεων. Το Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης Εργασίας (1Χ) που προετοιμάζεται με την αραίωση του WB 1:10 με απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-25 C στο COBAS AMPLICOR Δοχείο Ρυθμιστικού Διαλύματος Πλύσης και παραμένει σταθερό για 2 εβδομάδες από την ημερομηνία προετοιμασίας. Αποθηκεύστε τα μερικώς χρησιμοποιημένα αντιδραστήρια ανίχνευσης στους 2-8 C μεταξύ των αναλύσεων του οργάνου. Ελέγξτε την ημερομηνία λήξης των ανοιχτών αντιδραστηρίων ή των Αντιδραστηρίων Εργασίας πριν τη φόρτωση στον COBAS AMPLICOR Αναλυτή. 10/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis Παρεχόμενα Υλικά AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP P/N: 20759414 122 SpecimenPreparationKit ART:07 5941 4 AMPLICOR CT/NG US: 83315 Κιτ Προετοιμασίας Δειγμάτων CT/NG URINE WASH (CT/NG Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης Ούρων) CT/NG LYS (CT/NG Αντιδραστήριo Λύσης) CT/NG DIL (CT/NG Αραιωτικό Δείγματος) AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP P/N: 20759902 122 Amplification Kit ART: 07 5990 2 AMPLICOR CT/NG US: 83319 Κιτ Ενίσχυσης CT/NG MMX (CT/NG Κύριο Μίγμα) CT/NG IC (CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου) CT (+) C [C. trachomatis (+) Ορός Ελέγχου] NG (+) C [C. trachomatis ( ) Ορός Ελέγχου] COBAS AMPLICOR CT DK P/N: 20757497 122 Chlamydia trachomatis Detection Kit ART: 07 5749 7 COBAS AMPLICOR US: 83277 Chlamydia trachomatis Κιτ Ανίχνευσης CT PS1 (CT Αιώρημα Ιχνηθέτη 1) CT4 (CT Αιώρημα Ιχνηθέτη 2) COBAS AMPLICOR DK P/N: 20757470 122 Detection Reagents Kit ART: 07 5747 0 COBAS AMPLICOR US: 83276 Κιτ Αντιδραστηρίων Ανίχνευσης DN4 (Διάλυμα Αποδιάταξης) CN4 (Συζεύκτης Υπεροξειδάσης Αvidin-Ραφανίδας) SB3 (Υπόστρωμα A) SB (Υπόστρωμα B) 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 11/36

COBAS AMPLICOR WB P/N: 20759899 123 Wash Buffer ART: 07 5989 9 COBAS AMPLICOR US: 83314 Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης WB (10Χ Πυκνό Διάλυμα Πλύσης) Απαιτούμενα Μη Παρεχόμενα Υλικά Συλλογή Δειγμάτων - Στυλεοί συλλογής ενδοτραχηλικών και ουρηθρικών δειγμάτων: χρησιμοποιήστε μόνο στυλεούς συλλογής με ακροφύσια από dacron, rayon ή αλγινικό ασβέστιο με πλαστικές ή μη αλουμινένιες συρμάτινες λαβές - Χρησιμοποιείτε μόνο Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας 2SP ή SPG, Μέσο Μεταφοράς Χλαμυδίων Bartels ChlamTrans (Trinity Biotech Plc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4 MicroTest ή Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc.) - Σωληνάρια πολυπροπυλενίου συλλογής ούρων χωρίς συντηρητικό - Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest Για γυναίκες (x100) (Remel, Inc.) - Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest Για άνδρες (x100) (Remel, Inc.) Περιοχή Προετοιμασίας Αντιδραστηρίων Πριν από την Ενίσχυση - COBAS AMPLICOR A-ring τοποθετημένος με 12 A-tubes - Συγκρατητής COBAS AMPLICOR A-ring - Πιπέτα Eppendorf Multipette με Δοχείο 1,25 ml Combitip (αποστειρωμένη, σε μεμονωμένη συσκευασία) - Συσκευές πιπέτας (χωρητικότητα 100 μl)* με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης - Αναδευτήρας τύπου Vortex - Γάντια μιας χρήσης, χωρίς πούδρα Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων και Ορών Ελέγχου πριν από την Ενίσχυση - Σωληνάρια πολυπροπυλενίου 2,0 ml με βιδωτό πώμα, αποστειρωμένα, χωρίς σιλικόνη, κωνικά (Sarstedt 72.693.005 ή αντίστοιχα)** - Υποδοχείς σωληναρίων (Sarstedt 93.1428 ή αντίστοιχα) - Αποστειρωμένες πιπέτες μεταφοράς, βαθμονομημένες - Συσκευές πιπέτας (χωρητικότητα, 50 µl, 100 µl, 200 µl, 250 µl, 500 µl και 1000 µl)* με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης - Μικροφυγόκεντρος (μέγ. RCF 16.000 x g, ελάχ. RCF 12.500 x g), Eppendorf 5415C, HERMLE Z230M, ή ισοδύναμο - Εκτεταμένα ακροφύσια φραγής αερολυμάτων (Matrix 7055 ή αντίστοιχα) για χρήση με δείγματα που μεταφέρονται σε Μέσο Μεταφοράς Χλαμυδίων Bartels ChlamTrans (Trinity Biotech Plc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4 MicroTest ή Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc.) 12/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis - 37 C ± 2 C μονάδα θερμότητας - Αναδευτήρας τύπου Vortex - Απορροφητικό χαρτί - Γάντια μιας χρήσης, χωρίς πούδρα Περιοχή Ενίσχυσης/ Ανίχνευσης, Μετά την Ενίσχυση - COBAS AMPLICOR Αναλυτής και εκτυπωτής - Εγχειρίδιο Χρήστη για τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή Προαιρετικά: AMPLILINK Λογισμικό, συμπεριλαμβανομένων: Σταθμού Δεδομένων για το AMPLILINK Λογισμικό, με εκτυπωτή Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK Λογισμικού, Έκδοση Σειράς 3.2, για χρήση με το COBAS AmpliPrep Όργανο, τον COBAS TaqMan Αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή και τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή (για χρήση με το AMPLILINK Λογισμικό, Έκδοση Σειράς 3.2), ή Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK λογισμικού, Έκδοση Σειράς 3.3, για χρήση με το COBAS AmpliPrep όργανο, τον COBAS TaqMan αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 αναλυτή, τον COBAS AMPLICOR αναλυτή και το cobas p 630 όργανο (για χρήση με το AMPLILINK Λογισμικό, Έκδοση Σειράς 3.3) - Υποδοχείς των D-cups - Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό - Ορολογικές πιπέτες 5 ml - Βαθμονομημένος κύλινδρος (ελάχιστο 1 Λίτρο) - Αναδευτήρας τύπου Vortex - Γάντια μιας χρήσης, χωρίς πούδρα * Οι πιπέτες πρέπει να διαθέτουν ακρίβεια 3% του δηλούμενου όγκου. Τα ακροφύσια με φραγή αερολυμάτων ή θετική μετατόπιση πρέπει να χρησιμοποιούνται όπου προδιαγράφεται, για να αποφεύγεται η διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων και των κλώνων (amplicon). ** Για την προετοιμασία των δειγμάτων και των ορών ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια με βιδωτό πώμα, έτσι ώστε να αποφεύγεται το πιτσίλισμα και η ενδεχόμενη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα. Συλλογή, Μεταφορά και Αποθήκευση Δειγμάτων Σημείωση Όλα τα δείγματα πρέπει να θεωρούνται μολυσματικά, και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται ανάλογα. Τα μόνα αποδεκτά δείγματα είναι: 1. Δείγματα ούρων (ανδρών και γυναικών) που έχουν μεταφερθεί σε καθαρά δοχεία πολυπροπυλενίου. Μη χρησιμοποιείτε δείγματα ούρων που έχουν συλλεχθεί σε δοχεία που περιέχουν συντηρητικά. 2. Ενδοτραχηλικά και ουρηθρικά δείγματα από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί με χρήση του AMPLICOR STD Κιτ Συλλογής και Μεταφοράς Δειγμάτων από Στυλεό. 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 13/36

Η ανίχνευση του CT/NG IC πρέπει να εκτελεστεί κατά την εξέταση των αυτών των δειγμάτων. 3. Ενδοτραχηλικά και ουρηθρικά δείγματα από στυλεό που έχουν συλλεχθεί και μεταφερθεί στο: 2SP ή SPG Μέσο Μεταφοράς Καλλιέργειας, Μέσο Μεταφοράς Χλαμυδίων Bartels ChlamTrans (Trinity Biotech Plc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4 MicroTest (Remel, Inc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc.). Συλλογή Δειγμάτων Σημείωση Σημείωση Οι παρτίδες μέσων πρέπει να ποσοτικοποιούνται για χρήση σε κάθε εργαστήριο (βλέπε ενότητα Ποιοτικός Έλεγχος για λεπτομέρειες). Για αξιόπιστα αποτελέσματα εξέτασης, ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες για σωστή συλλογή δειγμάτων. Αυτή η εξέταση δεν προορίζεται για χρήση με φαρυγγικά, δείγματα ορθού ή άλλου τύπου διαφορετικά από αυτά που υποδεικνύονται. Για τη διασφάλιση της υψηλής ποιότητας μεταφοράς δειγμάτων στο εργαστήριο για εξέταση, τα ούρα και τα ουρογεννητικά δείγματα από στυλεό πρέπει να μεταφέρονται στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατό. Μην επιτρέπετε τη μεταφορά δειγμάτων χωρίς ελεγχόμενες συνθήκες θερμοκρασίας. Δείγματα Ούρων Ο ασθενής δεν θα πρέπει να έχει ουρήσει κατά τη διάρκεια των προηγούμενων 2 ωρών. 1. Συλλέξτε 10 έως 50 ml των πρώτων ούρων ούρησης σε ένα καθαρό δοχείο πολυπροπυλενίου χωρίς συντηρητικά. 2. Ασφαλίστε το δοχείο του δείγματος και τοποθετήστε την αντίστοιχη ετικέτα. Ακολουθήστε τη διαδικασία συλλογής και μεταφοράς του εργαστηρίου. Το δείγμα μπορεί να μεταφερθεί στην τοποθεσία εξέτασης σε θερμοκρασία δωματίου 18-25 C. Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί στο AMPLICOR Μεταφοράς Δείγματος (STM) Μέσο 1. Αφαιρέστε τη βλέννα από την έξω επιφάνεια του τραχήλου με έναν από τους μεγάλους παρεχόμενους στυλεούς και απορρίψτε. 2. Εισάγετε τον άλλο μεγάλο στυλεό μέσα στον τράχηλο μέχρι να μην είναι πλέον ορατό το ακροφύσιο του στυλεού. 3. Περιστρέψτε το στυλεό για 3-5 δευτερόλεπτα και απομακρύνετε, αποφεύγοντας την επαφή με τα τοιχώματα του κόλπου. 4. Τοποθετήστε το στυλεό στο σωληνάριο του AMPLICOR STM, φυγοκεντρίστε ή αναμίξτε το στυλεό έντονα στο υγρό για 15 δευτερόλεπτα. Η αναστολή της PCR ενδέχεται να προκύψει εάν ο στυλεός έρθει σε επαφή με το STM για περισσότερο από 15 δευτερόλεπτα. 5. Στραγγίστε το υγρό από το στυλεό πιέζοντας το στυλεό στο τοίχωμα του σωληναρίου. Οποιοδήποτε πλεόνασμα βλέννας στο δείγμα πρέπει να αφαιρεθεί σε αυτή τη φάση συλλέγοντός το επάνω στο στυλεό. Στραγγίστε το υπολειμματικό υγρό από τη βλέννα πιέζοντας το στυλεό στο τοίχωμα του σωληναρίου. Αφαιρέστε το στυλεό και τυχόν πλεόνασμα βλέννας που έχει συλλεχθεί και απορρίψτε το στυλεό. Πωματίστε το σωληνάριο. 14/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis Μεταφορά Δείγματος 6. Ασφαλίστε το δοχείο του δείγματος και τοποθετήστε την αντίστοιχη ετικέτα. Ακολουθήστε τη διαδικασία μεταφοράς του εργαστηρίου. Αποθηκεύστε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι τη μεταφορά τους στο εργαστήριο. Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί σε Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας (CTM) 1. Τα ενδοτραχηλικά και τα ουρηθρικά δείγματα από στυλεό μπορούν να συλλεχθούν και να μεταφερθούν σε Μέσο Μεταφοράς Καλλιέργειας 2SP ή SPG 1 έως 3 ml, Μέσο Μεταφοράς Χλαμυδίων Bartels ChlamTrans (Trinity Biotech Plc.), Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4 MicroTest, ή Σύστημα Μεταφοράς Καλλιέργειας M4RT MicroTest (Remel, Inc.). Χρησιμοποιήστε τις συνιστώμενες μεθόδους για τη δειγματοληψία κυλινδρικών και πλακωδών κυττάρων, μετά την απομάκρυνση της τραχηλικής βλέννας 16. 2. Χρησιμοποιήστε μόνο στυλεούς συλλογής με ακροφύσια από dacron, rayon ή αλγινικό ασβέστιο με πλαστικές ή μη αλουμινένιες συρμάτινες λαβές. Μη χρησιμοποιείτε στυλεούς συλλογής με ξύλινες ή αλουμινένιες λαβές. 3. Αφήστε τους στυλεούς στο μέσο μεταφοράς καλλιέργειας. Ασφαλίστε το δοχείο του δείγματος και τοποθετήστε την αντίστοιχη ετικέτα. Ακολουθήστε τη διαδικασία συλλογής και μεταφοράς του εργαστηρίου. Καταψύξτε τα δείγματα από στυλεούς, αν η μεταφορά τους στο εργαστήριο καθυστερεί για περισσότερο από μια ώρα από τη συλλογή. Δείγματα Ούρων 1. Τα δείγματα ούρων μπορούν να μεταφερθούν στην τοποθεσία εξέτασης στους 18-25 C. Τα δείγματα ούρων παραμένουν σταθερά για 24 ώρες στους 18-25 C. Τα δείγματα ούρων που δεν μπορούν να υποβληθούν σε επεξεργασία μέσα σε 24 ώρες από τη συλλογή πρέπει να αποθηκευτούν στους 2-8 C και να υποβληθούν σε επεξεργασία μέσα σε 7 ημέρες από τη συλλογή. Τα δείγματα ούρων που δεν μπορούν να υποβληθούν σε επεξεργασία μέσα σε 7 ημέρες από τη συλλογή μπορούν να αποθηκευτούν στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία και να εξεταστούν μέσα σε 30 ημέρες από την ημερομηνία συλλογής. 2. Τα δείγματα ούρων που απαιτούν μεταφορά σε κέντρα εκτός της τοποθεσίας εξέτασης πρέπει να μεταφέρονται κατά τη διάρκεια της νύχτας και να φτάνουν στον προορισμό τους εντός 24 ωρών. Η μεταφορά μπορεί να γίνει στους 18-25 C. Αν τα δείγματα ούρων μεταφερθούν στους 18-25 C, πρέπει να αποθηκευτούν στους 2-8 C μέχρι τη μεταφορά για να διασφαλιστεί ότι η περίοδος αποθήκευσης στους 18-25 C δεν θα υπερβεί τις 24 ώρες. Τα δείγματα πρέπει να μεταφέρονται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 18. Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί στο AMPLICOR Μέσο Μεταφοράς Δείγματος (STM) 1. Τα δείγματα από στυλεό παραμένουν σταθερά για 10 ημέρες στους 18-25 C. Τα δείγματα από στυλεό θα πρέπει να αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου και να υπόκεινται σε επεξεργασία μέσα σε 10 ημέρες από τη συλλογή. 2. Τα δείγματα από στυλεό που απαιτούν μεταφορά σε εξεταστικά κέντρα εκτός της τοποθεσίας πρέπει να αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την ώρα της μεταφοράς. Πρέπει να μεταφέρονται σε θερμοκρασία δωματίου και να φθάνουν στην τοποθεσία εξέτασης έτσι ώστε η επεξεργασία τους να μπορεί να εκτελεστεί μέσα σε 10 ημέρες από τη συλλογή. Τα δείγματα πρέπει να μεταφέρονται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 18. 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 15/36

Αποθήκευση Δειγμάτων Σημείωση Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί σε Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας (CTM) 1. Τα δείγματα από στυλεό μπορούν να μεταφερθούν στην τοποθεσία εξέτασης στους 18-25 C με την προϋπόθεση ότι ο συνολικός χρόνος αποθήκευσης και μεταφοράς στους 18-25 C είναι μικρότερος από μια ώρα. Καταψύξτε τα δείγματα από στυλεούς, αν η μεταφορά τους στο εργαστήριο καθυστερεί για περισσότερο από μια ώρα από τη συλλογή. 2. Τα δείγματα από στυλεό που απαιτούν μεταφορά σε εργαστήρια εκτός της τοποθεσίας εξέτασης θα πρέπει να μεταφέρονται σε θερμοκρασία ψύξης το συντομότερο δυνατόν μετά τη συλλογή και σύμφωνα με τις εργαστηριακές διαδικασίες για τη μεταφορά των χλαμυδιακών καλλιεργημένων δειγμάτων. Η μεταφορά των δειγμάτων πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 18. Η ψύξη ρουτίνας ή η παρατεταμένη αποθήκευση των δειγμάτων μπορεί να επηρεάσει την απόδοσή τους. Δείγματα Ούρων 1. Τα δείγματα ούρων, η επεξεργασία των οποίων δεν θα εκτελεστεί εντός 24 ωρών από τη συλλογή, πρέπει να αποθηκευτούν στους 2-8 C και να υποστούν επεξεργασία εντός 7 ημερών από τη συλλογή. Τα δείγματα ούρων, η επεξεργασία των οποίων δεν θα εκτελεστεί εντός 7 ημερών από τη συλλογή, μπορούν να αποθηκευτούν στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία έως και για 30 ημέρες. Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί στο AMPLICOR Μέσο Μεταφοράς Δείγματος (STM) 1. Τα δείγματα από στυλεό παραμένουν σταθερά για 10 ημέρες στους 18-25 C. Τα δείγματα από στυλεό πρέπει να αποθηκεύονται στους 18-25 C και να υπόκεινται επεξεργασία μέσα σε 10 ημέρες από τη συλλογή. 2. Τα δείγματα από στυλεό πρέπει να αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι τη μεταφορά. Πρέπει να μεταφέρονται στους 18-25 C και να φτάνουν στην τοποθεσία εξέτασης έτσι ώστε να μπορούν να υποστούν επεξεργασία εντός 10 ημερών από τη συλλογή. Δείγματα από Στυλεό που έχουν Συλλεχθεί σε Μέσα Μεταφοράς Καλλιέργειας (CTM) 1. Καταψύξτε τα δείγματα από στυλεό, αν η μεταφορά τους στο εργαστήριο ή η επεξεργασία δείγματος καθυστερεί για περισσότερο από μια ώρα από τη συλλογή. Τα δείγματα από στυλεό που απαιτούν μεταφορά σε εργαστήρια εκτός της τοποθεσίας εξέτασης θα πρέπει να μεταφέρονται το συντομότερο δυνατό μετά τη συλλογή σύμφωνα με τις εργαστηριακές διαδικασίες για τη μεταφορά των χλαμυδιακών καλλιεργημένων δειγμάτων. 2. Αποθηκεύστε τα δείγματα από στυλεό που δεν εξετάστηκαν κατά τη λήψη τους στο εργαστήριο εξέτασης στους 2-8 C και επεξεργαστείτε τα εντός 7 ημερών. Τα δείγματα από στυλεό που δεν μπορούν να υποστούν επεξεργασία μέσα σε 7 ημέρες από τη συλλογή μπορούν να αποθηκευτούν στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία και να εξεταστούν μέσα σε 30 ημέρες από τη συλλογή. 16/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis Οδηγίες Χρήσης Σημείωση Σημείωση Σημείωση Σημείωση Σημείωση Αριθμός Αναλύσεων Σημείωση Για λεπτομερείς οδηγίες λειτουργίας, για την εκτύπωση αποτελεσμάτων και την ερμηνεία ενδείξεων και σχολίων, ανατρέξτε (1) στο Εγχειρίδιο Χειριστή για τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή και (2), εάν χρησιμοποιείτε το AMPLILINK Λογισμικό, Έκδοση Σειράς 3.2, ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK Λογισμικού, Έκδοση Σειράς 3.2, για χρήση με το COBAS AmpliPrep Όργανο, τον COBAS TaqMan Αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή και τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή ή, εάν χρησιμοποιείτε το AMPLILINK Λογισμικό, Έκδοση Σειράς 3.3, ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK λογισμικού, Έκδοση Σειράς 3.3, για χρήση με το COBAS AmpliPrep όργανο, τον COBAS TaqMan αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 αναλυτή, τον COBAS AMPLICOR αναλυτή και το cobas p 630 όργανο. Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από τη χρήση. Όπου προδιαγράφεται, χρησιμοποιείτε συσκευές πιπέτας με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης. Απαιτείται ιδιαίτερη προσοχή για τη διασφάλιση της επιλεκτικής ενίσχυσης. Τα δείγματα ούρων και τα δείγματα από στυλεό πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος πριν από τη χρήση. Όπου προδιαγράφεται, χρησιμοποιείτε συσκευές πιπέτας με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης. Απαιτείται ιδιαίτερη προσοχή για τη διασφάλιση της επιλεκτικής ενίσχυσης. Η αναστολή της PCR ενδέχεται να μειωθεί αποθηκεύοντας τα επεξεργασμένα δείγματα κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 2-8 C πριν την προσθήκη του δείγματος στο Κύριο Μίγμα Εργασίας 21. Για την προετοιμασία των δειγμάτων και των ορών ελέγχου πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια με βιδωτό πώμα, έτσι ώστε να αποφεύγεται το πιτσίλισμα και η ενδεχόμενη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων. Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα. Κάθε κιτ περιέχει αντιδραστήρια για οκτώ αναλύσεις 12 δειγμάτων, οι οποίες μπορούν να εκτελεστούν ξεχωριστά ή ταυτόχρονα. Ένα τουλάχιστον αντίγραφο του C. trachomatis (+) Ορού Ελέγχου και ένα αντίγραφο του C. trachomatis ( ) Ορού ελέγχου πρέπει να περιλαμβάνεται σε κάθε ανάλυση εξέτασης (βλέπε ενότητα Ποιοτικός Έλεγχος ). Ο NG (+) Ορός Ελέγχου χρησιμοποιείται ως CT ( ) Ορός Ελέγχου για το COBAS AMPLICOR CT Test. Τα Αντιδραστήρια Προετοιμασίας Δειγμάτων συσκευάζονται για την εκτέλεση 100 εξετάσεων. Ο CT (+) Ορός Ελέγχου και NG (+) Ορός Ελέγχου διατίθενται σε μεμονωμένες φιάλες που περιέχουν υλικό που επαρκεί για την προετοιμασία 8 σετ επεξεργασμένων ορών ελέγχου. Το CT/NG Κύριο Μίγμα και το CT/NG Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου διατίθενται σε αυτές τις τρεις φιάλες η καθεμία από τις οποίες περιέχει υλικό που επαρκεί για την εκτέλεση έως και 32 εξετάσεων συμπεριλαμβανομένων των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Για την αποτελεσματικότερη χρήση των αντιδραστηρίων, τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να υφίστανται επεξεργασία σε παρτίδες πολλαπλάσιες του 12. 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 17/36

Ροή εργασίας Προετοιμασία Αντιδραστηρίων Σημείωση Το COBAS AMPLICOR CT Test μπορεί να ολοκληρωθεί σε μία ή και σε δύο ημέρες. Εάν η εξέταση πρόκειται να ολοκληρωθεί σε μία μόνο ημέρα εργασίας, ακολουθήστε τις οδηγίες στην Προετοιμασία Αντιδραστηρίων, Προετοιμασία Δειγμάτων, Προετοιμασία Ορών Ελέγχου, Ενίσχυση και Ανίχνευση με τη σειρά. Η εξέταση μπορεί να ολοκληρωθεί σε 2 ημέρες εκτελώντας Προετοιμασία Δειγμάτων την πρώτη ημέρα και στη συνέχεια εκτελώντας Προετοιμασία Αντιδραστηρίων, Προετοιμασία Ορών Ελέγχου, Ενίσχυση και Ανίχνευση τη δεύτερη ημέρα. Εναλλακτικά, εκτελέστε Προετοιμασία Αντιδραστηρίων, Προετοιμασία Δειγμάτων και Προετοιμασία Ορών Ελέγχου και προσθέστε τα προετοιμασμένα δείγματα και ορούς ελέγχου στο Κύριο Μίγμα την πρώτη ημέρα και στη συνέχεια εκτελέστε Ενίσχυση και Ανίχνευση τη δεύτερη ημέρα. Εκτελείται στην: Περιοχή Προετοιμασίας Αντιδραστηρίων Πριν από την Ενίσχυση 1. Καθορίστε τον απαιτούμενο αριθμό των A-rings που απαιτούνται για την εξέταση των δειγμάτων και των ορών ελέγχου του ασθενή. Τοποθετήστε το(α) A-ring στον(ους) αντίστοιχο(ους) συγκρατητή(ές). Ακόμη και αν δεν εκτελεστεί ανίχνευση του CT/NG Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου, πρέπει να γίνει προσθήκη του CT/NG IC στο Κύριο Μίγμα. 2. Προετοιμάστε το Κύριο Μίγμα Εργασίας προσθέτοντας 100 µl CT/NG IC σε ένα φιαλίδιο CT/NG MMX. Δεν απαιτείται η μέτρηση όγκου του Κύριου Μίγματος. Προσθέστε 100 µl CT/NG IC σε όλο το φιαλίδιο CT/NG MMX. Πωματίστε και πάλι το σωληνάριο και ανακατέψτε καλά αναστρέφοντας το σωληνάριο 10-15 φορές. Μη φυγοκεντρίζετε το Κύριο Μίγμα Εργασίας. Η ροζ χρωστική στο CT/NG IC χρησιμοποιείται για οπτική επιβεβαίωση ότι το CT/NG IC έχει προστεθεί στο CT/NG MMX. Απορρίψτε το υπολειπόμενο CT/NG IC. Ανακατέψτε καλά αναστρέφοντας 10-15 φορές. Το Κύριο Μίγμα Εργασίας πρέπει να αποθηκεύεται στους 2-8 C και να χρησιμοποιείται μέσα σε 4 εβδομάδες από την προετοιμασία. 3. Προσθέστε 50 μl Κύριου Μίγματος Εργασίας σε κάθε A-tube χρησιμοποιώντας μια επαναληπτική συσκευή πιπέτας ή μια συσκευή πιπέτας με ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης. Μην πωματίζετε το/τα Α-tube στη φάση αυτή. 4. Τοποθετήστε το/τα A-ring που περιέχει(ουν) Κύριο Μίγμα Εργασίας σε ένα πλαστικό επανασφραγιζόμενο σάκο και σφραγίστε τον καλά. Μεταφέρετε το/τα A-ring στην Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων Πριν από την Ενίσχυση. Αποθηκεύστε τα A-ring(s) που περιέχουν Κύριο Μίγμα Εργασίας στους 2-8 C στην Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων Πριν από την Ενίσχυση μέχρι να ολοκληρωθεί η διαδικασία προετοιμασίας δειγμάτων και ορών ελέγχου. Το Κύριο Μίγμα Εργασίας είναι σταθερό για 48 ώρες στους 2-8 C σε A-tubes σφραγισμένα στον πλαστικό σάκο. Προετοιμασία Δείγματος Εκτελείται στην: Περιοχή Προετοιμασίας Δειγμάτων Πριν από την Ενίσχυση Δείγματα Ούρων 1. Επικολλήστε ετικέτα σε ένα σωληνάριο 2,0 ml με βιδωτό πώμα για κάθε δείγμα ασθενή. Μη χρησιμοποιείτε σωληνάρια με ανοιγόμενο πώμα.. 2. Προσθέστε 500 µl CT/NG URINE WASH σε καθένα από τα σωληνάρια με τις αντίστοιχες ετικέτες. 3. Φυγοκεντρίστε το δείγμα ούρων καλά (3-10 δευτερόλεπτα). Αν χρησιμοποιείτε κατεψυγμένα δείγματα, αποψύξτε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου πριν τα φυγοκεντρίσετε (για όγκους δειγμάτων μεγαλύτερους από 2 ml η απόψυξη πρέπει να γίνεται κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 2-8 C), και συνεχίστε 18/36 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 8/2009, Revision 8.0

Chlamydia trachomatis την επεξεργασία ακόμη και αν υπάρχει κατακρήμνισμα. Αφαιρέστε προσεκτικά τα πώματα των δοχείων με τα δείγματα ούρων. Κατά το χειρισμό των δειγμάτων φροντίστε ώστε να μη μολυνθούν τα γάντια με ούρα στο πώμα. Σε περίπτωση μόλυνσης, αντικαταστήστε τα γάντια με ένα καθαρό ζευγάρι πριν μεταβείτε στο επόμενο δείγμα. 4. Προσθέστε 500 µl του κάθε καλά αναμεμιγμένου δείγματος ούρων ασθενή στο σωληνάριο με την κατάλληλη ετικέτα που περιέχει CT/NG URINE WASH. Χρησιμοποιήστε νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα. Επαναπωματίστε τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά φυγοκεντρίζοντας. 5. Επωάστε στους 37 C για 15 λεπτά. 6. Φυγοκεντρίστε στα 12.500 x g για 5 λεπτά. 7. Αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό και στεγνώστε κάθε σωληνάριο σε χωριστό φύλλο απορροφητικού χαρτιού. 8. Χρησιμοποιώντας ένα νέο ακροφύσιο πιπέτας φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα, προσθέστε 250 µl του CT/NG LYS σε κάθε σωληνάριο. Επαναπωματίστε τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά φυγοκεντρίζοντας. 9. Επωάστε τα σωληνάρια για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. 10. Χρησιμοποιώντας ένα νέο ακροφύσιο πιπέτας φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα, προσθέστε 250 µl του CT/NG DIL σε κάθε σωληνάριο. Επαναπωματίστε τα σωληνάρια και αναμίξτε καλά φυγοκεντρίζοντας. 11. Φυγοκεντρίστε τα σωληνάρια για 10 λεπτά στα 12.500 x g. 12. Τα επεξεργασμένα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν σε θερμοκρασία δωματίου έως και 2 ώρες πριν τη μεταφορά των κλασμάτων στα A-tubes που περιέχουν Κύριο Μίγμα Εργασίας. Αποθηκεύστε τα επεξεργασμένα δείγματα στους 2-8 C, αν τα κλάσματα δεν προστεθούν στα A-tubes εντός 2 ωρών. Τα επεξεργασμένα δείγματα που αποθηκεύτηκαν σε θερμοκρασία 2-8 C πρέπει να εξεταστούν εντός 7 ημερών. 13. Αν τα επεξεργασμένα δείγματα είχαν αποθηκευτεί στους 2-8 C, πρέπει να θερμανθούν σε θερμοκρασία δωματίου και να αναμιχθούν καλά φυγοκεντρίζοντας πριν την ενίσχυση. Αφού τα φυγοκεντρίσετε, φυγοκεντρίστε τα επεξεργασμένα δείγματα για 10 λεπτά στα 12.500 x g. 14. Χρησιμοποιώντας συσκευή πιπέτας με ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων, μεταφέρετε 50 µl του υπερκείμενου υγρού στο κατάλληλο A-tube. Χρησιμοποιήστε νέο ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων για κάθε δείγμα. Προσέξτε να μη διασπάσετε το καθίζημα (το καθίζημα μπορεί να μην είναι ορατό). Καταγράψτε τις θέσεις των δειγμάτων ασθενή στο χάρτη των A-ring. Πωματίστε τα A-tubes. 15. Αποθηκεύστε το υπόλοιπο του κάθε επεξεργασμένου δείγματος στους 2-8 C σε περίπτωση που απαιτηθεί επανεξέταση. Οποιαδήποτε επανεξέταση μπορεί να εκτελεστεί εντός 7 ημερών από την επεξεργασία δείγματος. Σημείωση Δείγματα από Στυλεό Δείγματα από Στυλεό που έχουν Μεταφερθεί σε AMPLICOR Μεταφοράς Δείγματος (STM) Μέσο Η ανίχνευση του CT/NG IC πρέπει να εκτελεστεί κατά την εξέταση αυτών των δειγμάτων. 1. Ελέγξτε το AMPLICOR STM σωληνάριο μεταφοράς δείγματος. Αν ένα δείγμα μεταφερθεί σε σωληνάριο με τον στυλεό να παραμένει μέσα, το δείγμα αυτό πρέπει να απορριφθεί και να γίνει συλλογή νέου δείγματος. 2. Διοχετεύστε με πιπέτα 1 ml του CT/NG DIL σε κάθε σωληνάριο μεταφοράς χρησιμοποιώντας μια ξεχωριστή αποστειρωμένη πιπέτα για κάθε σωληνάριο. 8/2009, Revision 8.0 COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test 19/36