ФАКУЛТЕТ ВЕТЕРИНАРСКЕ МЕДИЦИНЕ ОБРАЗАЦ Д 4 УНИВЕРЗИТЕТА У БЕОГРАДУ ИЗВЕШТАЈ О ОЦЕНИ ЗАВРШЕНЕ ДОКТОРСКЕ ДИСЕРТАЦИЈЕ

ФАКУЛТЕТ ВЕТЕРИНАРСКЕ МЕДИЦИНЕ ОБРАЗАЦ Д 4 УНИВЕРЗИТЕТА У БЕОГРАДУ ИЗВЕШТАЈ О ОЦЕНИ ЗАВРШЕНЕ ДОКТОРСКЕ ДИСЕРТАЦИЈЕ I ПОДАЦИ О КОМИСИЈИ: 1. Датум и назив органа који је именовао комисију: На 167. седници Комисије за процену подобности кандидата и тема за израду докторских дисертација, магистарских теза и специјалистичких радова, одржаној 10.09.2014. године, именована је комисија за оцену завршне докторске дисертације дипл. вет. Јелене В. Француски, асистента Факултета ветеринарске медицине на Катедри за патолошку физиологију, под насловом Ex vivo карактеристике мезенхималних матичних ћелија изолованих из синовијалне течности коленог зглоба паса различите старости, у саставу др Милица Ковачевић Филиповић, ванредни професор Факултета ветеринарске медицине, Универзитета у Београду, др Анита Радовановић, ванредни професор Факултета ветеринарске медицине, Универзитета у Београду, др Мирјана Лазаревић Мацановић, ванредни професор Факултета ветеринарске медицине, Универзитета у Београду, др Горан Тулић, ванредни професор Медицинског Факултета Универзитета у Београду. 2. Састав комисије са назнаком имена и презимена сваког члана, звања, назива уже научне области за коју је изабран у звање, годином избора у звање и назив факултета, установе у којој је члан комисије запослен: САСТАВ КОМИСИЈЕ: др Милица Ковачевић Филиповић, ванредни професор Факултета ветеринарске медицине, Универзитета у Београду. Ужа научна област Патолошка физиологија. Година избора у звање 2011. др Анита Радовановић, ванредни професор Факултета ветеринарске медицине, Универзитета у Београду. Ужа научна област Хистологија са ембриологијом. Година избора у звање 2013. 1

др Мирјана Лазаревић Мацановић, ванредни професор Факултета ветеринарске медицине, Универзитета у Београду. Ужа научна област Радиолошка ултразвучна и ендоскопска дијагностика. Година избора у звање 2014. др Горан Тулић, ванредни професор Медицинског Факултета, Универзитета у Београду Ужа научна област ортопедска хирургија са трауматологијом. Година избора у звање 2013. II ПОДАЦИ О КАНДИДАТУ: 1. Име, име једног родитеља, презиме: Јелена, Владимир, Француски 2. Датум рођења, општина, Република: 21.11.1982. Панчево, Србија 3. Датум одбране, место и назив магистарске тезе*: 4. Научна област из које је стечено академско звање магистра наука*: III НАСЛОВ ДОКТОРСКЕ ДИСЕРТАЦИЈЕ: Ex vivo карактеристике мезенхималних матичних ћелија изолованих из синовијалне течности коленог зглоба паса различите старости IV ПРЕГЛЕД ДОКТОРСКЕ ДИСЕРТАЦИЈЕ (навести броја страна поглавља, слика, шема, графикона и сл.): Докторска дисертација је написана на 142 стране и садржи 12 слика састављених из више појединачних фотографија, 6 шема, 7 графикона и 6 табела. V ВРЕДНОВАЊЕ ПОЈЕДИНИХ ДЕЛОВА ДОКТОРСКЕ ДИСЕРТАЦИЈЕ (дати кратак опис сваког поглавља дисертације: увода, прегледа литературе, циља и задатака истраживања, материјал и метода, резултата, дискусије, списка референци): У Уводу су изнета досадашња схватања везана за мезенхималне матичне ћелије (ММЋ) и њихову потенцијалну примену у терапији оштећења хрскавице. Терапијски потенцијал ММЋ лежи у чињеници да, упркос њиховом релативно малом броју у ткивима одраслих јединки, in vitro ове ћелије имају велики пролиферативни потенцијал и 2

способност диференцијације у адипоците, хондроците и остеобласте. Могућност диференцијације ММЋ у хондроците је једна од карактеристика која их чини ћелијама важним за репарацију дефеката хрскавице насталих као последица остеоартритиса. У овом поглављу је истакнуто да остеоартритиси представљају велики проблем у хуманој и ветеринарској медицини и да се учесталост овог обољења не повећава само са старењем, већ се оно све чешће јавља и код младих јединки. Један од приступа терапији остеоартритиса је покушај репарације оштећене хрскавице различитим типовима ћелија које имају хондрогени потенцијал. Осим самих хондроцита, за које је познато да се in vitro могу умножити и поново искористити за санирање дефеката хрскавице, испитује се могућност да се ММЋ изоловане из различитих ткива такође употребе за ову намену. Осим перихондријума, синовијална мембрана вероватно има најјачи хондрогени потенцијал. Како је узорковање ћелија синовијалне мембране инвазивно, алтернативни метод представља узорковање синовијалне течности (СТ). У њој се налазе ћелије које су највероватније одлубљене од синовијалне мембране, а за које је код људи и лабораторијских животиња већ доказано да имају пролиферативни и хондрогени потенцијал. Интернационално друштво за проучавање остеоартритиса (OARSI) је, на основу извршених бројних експерименталних студија, изнело мишљење да пас представља идеалан модел за испитивање остеоартритиса људи,тако да су информације добијене на псима важне не само за ветеринарску већ и за хуману медицину. И поред ове чињенице, у уводу је указано на недостатак литературних података који објашњавају везу између процеса старења и појаве остеоартритиса (ОА), али је истакнуто да генетски фактори, гојазност, механички фактори и друга обољења мишићно-скелетног система могу резултирати развојем овог патолошког стања. Поред тога, истакнуто је да недостају и подаци који се односе на карактеристике ћелија синовијалне течности као потенцијалног извора ћелија са значајним хондрогеним потенцијалом. Управо због тога, тема ове дисертације је актуелна и значајна. У првом делу поглавља Преглед литературе, изложена су конкретна актуелна сазнања и схватања која се односе на појам, дефиницију, поделу и карактеризацију матичних ћелија (МЋ). Као основне критеријуме дефинисања матичности кандидат наводи могућност самообнове, велики пролиферативни потенцијал и мултипотентност ћелија које се испитују. Такође, детаљно описује потенцијале за диференцијацију мезенхималних матичних ћелија (ММЋ) које су предмет овог рада, као и промене које настају са матурацијом ћелија. Кандидат истиче да је мали број истраживања посвећен испитивању особина ћелија које се налазе у синовијалној течности, а да код паса оваквих студија уопште нема. Код ове животињске врсте су до сада описане ММЋ из костне сржи, масног ткива и различитих ткивних структура у вези развоја зуба, међутим поступци узорковања тих ћелија доводе до оштећења ткива, болни су и захтевају општу анестезију животиње. Поред тога, истакнуто је да наведена ткива имају варијабилан хондрогени 3

потенцијал. Управо из тог разлога је важно да се као извор ћелија за регенерацију хрскавице употребе ткива и структуре које онтогенетски имају потенцијал да се развију у хрскавицу, као што су перихондријум и синовијална мембрана. У овом делу су, такође, описани биомаркери ћелијског старења, а изнета је и хипотеза старења ћелија in vivo и in vitro, као и досадашња сазнања и искуства у терапијској примени матичних ћелија у ветеринарској медицини, која су заправо врло оскудна. У другом делу прегледа литературе дат је детаљан опис анатомских, хистолошких и физиолошких карактеристика зглобних структура, укључујући и преглед синовијалне течности. Поред тога, истакнут је и значај употребе биомаркера у дијагностици обољења локомоторног система, са акцентом на серум амилоид А, који представља један од најважнијих протеина акутне фазе код паса. Опис хистолошке грађе хрскавице и синовијалне мембране паса, као и физиолошких механизама који се у овим структурама одвијају дат je са циљем да се стекне комплетан увид у структурну и функционалну целину зглоба, односно ткива која су извор матичних ћелија и која су евентуална мета ћелијске терапије у даљим истраживањима. Због тога су, такође, сажето описна механичка својства зглобне хрскавице, објашњен је утицај физичке активности на њен квалитет и изнета су досадашња схватања која се односе на процес старења хрскавице и настанак дегенеративних промена. Јасно су изнети савремени постулати патофизиолошког механизма настанка остеоартритиса, ћелијске терапије и ткивног инжињерства у терапији артропатија паса. У поглављу Циљеви и задаци истраживања дефинисана су два циља на основу којих је постављено 12 задатака: Први циљ је био да се окарактеришу и упореде ћелије изоловане из синовијалне течности младих и старих паса, односно да се утврди да ли те ћелије, умножене in vitro, имају особине ММЋ, потом да се in vitro испита њихов фенотип и потенцијал ка адипогенези, остеогенези и хондрогенези, а да се посебно, in vivo, испита њихов потенцијал ка хондрогенези. Други циљ је био да се окарактеришу и упореде зглобне структуре коленог зглоба паса различите старости и различитог типа физичке активности и то са клиничког, радиолошког и хистолошког аспекта како би се дефинисале промене везане за старење и утврдило присуство или одсуство инфламације у зглобу. Да би се остварили описани циљеви постављени задаци да се: 1. Код паса у овом испитивању изврши општи клинички, ортопедски и неуролошки преглед; 2. Код одабраних јединки изврши рендгенски преглед оба колена зглоба, левог и десног зглоба кука и лумбосакралног дела кичме методом рендгенографије; 3. Од одабраних јединки прикупи синовијална течност и изврши њен преглед у циљу дијагностике евентуалних субклиничких инфламаторних промена; 4

4. Из прикупљене синовијалне течности изолују и у култури умноже присутне адхерентне ћелије и методом проточне цитометрије одреди експресија површинских маркера на основу којих се изоловане ћелије могу сврстати у нехематопоетске ћелије мезенхималног порекла (CD90+, CD34-); 5. Одреди in vitro број ћелија које могу да стварају колоније фибробласта и време за које се могу удвојити у култури као и да се испита присуство СА-β-галактозидазе, маркера старења; 6. In vitro испита потенцијал умножених ћелија да се диферентују ка адипоцитима, остеобластима и хондроцитима; 7. In vivo, на моделу ксенотрансплантата имунодефицијентним мишевима, испита хондрогени потенцијал умножених ћелија; 8. Изврши макроскопски преглед зглобних структура и хистолошка и имунохистохемијска анализа хрскавице и синовијалне мембране У поглављу Материјал и методе наведен је коришћени материјал и дат је детаљан опис примењених метода. Узорци синовијалне течности, синовијалне мембране и хрскавице са субхондралном кости узорковани су из коленог зглоба 28 паса расе немачки овчар, мушког пола, који су сврстани у 4 групе према узрасту и нивоу физичке активности: млади радни, полицијски пси (n = 5), узраста 3-5 година; млади, нерадни власнички пси (n = 4) узраста 3-5 година; стари, радни полицијски пси (n = 13) старости 10-12 година и стари нерадни, власнички пси (n = 6) старости од 10-13 година. Хистолошке и имунохистохемијске анализе рађене су на узорцима синовијалне мембране и хрскавице са субхондралном кости 28 паса, док су жељене ћелије изоловане из синовијалне течности 5 младих и 5 старих радних паса. Време удвајања ћелија у култури, односно њихова брзина пролиферације (P3-P6) одређени су на основу броја засађених ћелија и броја ћелија након трипсинизације култура са 80% конфлуенце. Број ћелија способан да формира колоније одређен је CFU-F тестом (engl. Colony Forming Unit - Fibroblast). Присуство маркера старења, β-галактозидазе, потврђено је цитохемијски и квантификовано семиквантитативном методом. Проточном цитометријом установљене су фенотипске карактеристике умножених ћелија. Потенцијал за диференцијацију одређен је узгајањем ћелија у комерцијалном контролном медијуму и медијумима за адипогенезу, остеогенезу и хондрогенезу. Након 14 дана адипогене диференцијације, бојењем Oil Red О методом, испитивано је присуство масних капљица у ћелијама које су испољиле преадипоцитни фенотип. Након 5 и 10 дана остеогене диференцијације, биохемијски је одређена активност ензима алкалне фосфатазе у ћелијском лизату, док је in situ, на плочицама, алкална фосфатаза одређена цитохемијском методом. После 21 дан култивације ћелија у остеогеном медијуму, бојењем in situ ализарин црвеним, испитивано је присуство калцијума депонованог у екстрацелуларном матриксу (ЕЦМ), а имуноцитохемијском методом је доказано присуство остеокалцина. 5

Након тронедељне хондрогене диференцијације ћелија у условима који имитирају тродимензионалост ткива хрскавице in vivo (ћелијске пелете), хистолошком анализом, уз помоћ алцијан плавог, испитивано је присуство сулфатисаних гликозаминогликана (сгаг), а имунохистохемијски присуство колагена типа II. Концентрација сгаг одређена је и колориметријски и изражена у односу на количину ДНК добијену флуориметријским тестом, а вредности су прикaзане као однос количине ГАГ према ДНК у папаином дигестираним пелетама. In situ хибридизација је коришћена за испитивање експресије ирна колагена типа I. In vivo, потенцијал ка хондрогенези испитиван је на 2 месеца старим имунодефицијентним мишевима. Ћелије из културе која је имала најбољи пролиферативни потенцијал (млад пас), узгајане су три недеље у хондрогеном медијуму у класичном систему адхерентне културе, трипсинизоване су, и имплантиране субкутано, у смеши са целулозним хидрогелом као носачем. Након 6 недеља, мишеви су жртвовани, а створена структура даље је процесуирана за хистолошке анализе. Добијени препарати су анализирани већ наведеним хистолошким методама за доказивање сгаг и колагена типа II. Рендгенски преглед оба колена зглоба, обављен је методом рендгенографије. Снимања су извршена помоћу рендгенског уређаја марке Селенос 4 ЕИ Ниш, при фокус-филм растојању 80 cm. Рендгенографија колених зглобова је обављана у растерећењу, снимања су извршена у две стандардне пројекције: антеро-постериорној (АП) и медио-латералној (МЛ), а употребљене кондиције су износиле 48 kv i 10-16 mas. Да би се искључило истовремено присуство дисплазије кукова и синдрома cauda equina, обављено је рендгенско снимање карлице и лумбо-сакралног дела кичме свих испитиваних паса у вентро-дорзалној (ВД) и латеро-латералној (ЛЛ) пројекцији, при чему су кондиције за снимање износиле су 50-55 kv i 16 mas. По завршеној артротомији, извршен је и макроскопски преглед свих зглобних структура. Са латераног кондилуса фемура и латералног дела платоа тибије узети су узорци ткива за хистолошки и имунохистохемијски преглед хрскавице. За хистолошки преглед је узоркована и синовијална мембрана. Хистоморфометријски је одређена укупна дебљина хрскавице, укупан број хондроцита на вертикалном пресеку, као и густина и површина хондроцита. Светлосном микроскопијом анализиран је изглед површине хрскавице, облик хондроцита, морфологија изогених група, зона која дели калцификовану од некалцификоване хрскавице, субхондрална кост и заступљеност протеогликана и сгаг. На пресецима синовијалне мембране, одређиван је број слојева ћелија, присуство кратких и прстоликих набора, као и ћелијске инфилтрације. Имунохистохемијски је испитано присуство и локализација колагена типа I, II и X у хрскавици и CD44 молекула у синовијалној мембрани. Изведена је цитолошка и биохемијска анализа синовијалне течности, као и одређивање концентрације САА уз помоћ имуноензимског теста (ЕЛИСА). У поглављима Резултати и Дискусија, кандидат је изложио и анализирао добијене резултате и упоредио их са досадашњим научним сазнањима, логички их објаснио и извео 6

јасне закључке. Комисија je у овом извештају детаљније анализирала најинтересантније налазе из наведених поглавља. У поликлоналном систему узгајања ћелија у култури, ћелије изоловане из СТ имале су фибробластоидну морфологију и просечно време удвајања 31 сат, код младих паса и 46.5 сати код старих паса. CFU-F тестом је показано да између младих (0.55 ± 0.05 %) и старих паса (0.43 ± 0.23 %) нема значајних разлика у броју ћелија способних да формирају колоније. У просеку једна на 200 ћелија имала је способност стварања колонија, док је један мањи број ћелија имао способност формирања такозваних великих колонија састављених од више хиљада ћелија. У просеку је око 60% ћелија уможених до треће пасаже на својој површини експримирало CD90 молекул, док исте ћелије уопште нису експримирале CD34 молекул, типичан за ћелије хематопоетског порекла и присутан на ендотелним ћелијама. После адипогене диференцијације, мали број умножених ћелија је имао депоноване масне капљице, без обзира на старосну категорију животиња од којих су ћелије изоловане, док су депозити соли калцијума и активност алкалне фосфатазе били значајнији у културама ћелија изолованих од старијих паса. Овај налаз је важан јер указује да се ћелије СТ старих паса не могу користити за процедуре које имају за циљ репарацију или регенерацију зглобне хрскавице паса. Такође је занимљив налаз да су умножене ћелије и у хондрогеном и контролном медијуму формирале пелете које су биле богате екстрацелуларним матриксом који је садржао сгаг као и острвца ткива богата колагеном типа II. Овај налаз је интересантан са два аспекта: један је да умножене ћелије синовијалне течности имају потенцијал да се диферентују у хондроците после индукције са TGF-β који се налази у хондрогеном медијуму, али и спонтано, у контролном медијуму. Други аспект је да умножене и диференциране ћелије СТ могу да стварају хомогене структуре које имају велику сличност са интертериторијалним матриксом зглобне хијалине хрскавице која је богата колагеном типа II. Оригиналност овог налаза огледа се у чињеници да до сада није описан ни код једне врсте животиња, нити је овај феномен доказан са било којим другим ткивом као извором недиференцираних ћелија. In situ хибридизацијом је такође потврђена експресија ирнк за колегена типа I на површини пелета, што је указивало да се диференцијација ка хондроцитима који стварају хијалину хрскавицу одигравала у унутрашњости пелета, а да су на површини биле ћелије које су могле да стварају фиброзну хрскавицу. Како су ћелије у ксенотрансплантату синтетисале компоненте ЕЦМ карактеристичне за хрскавицу, доказано је да оне заправо задржавају дуготрајан (најмање два месеца) потенцијал да формирају компоненте ткива хрскавице. Активност ензима SAβ-галактозидазе уочена је у ћелијама младих и старих паса, али се са старењем паса број ћелија у којима се детектовала њена активност значајно повећао. Тај налаз је такође указивао да ћелије изоловане из СТ старих паса нису погодне за примену у терапијске сврхе. Како су испитиване ћелије показале ограничену мултипотентност, односно слабу адипогену диференцијацију и значајну експресију SA-β-галактозидазе, изнет је став да се изолована ћелијска популација не може окарактерисати као матична, али да она има 7

својства бипотентних прогенитора који се могу диференцирати у остеобласте и хондроците. Општим клиничким, ортопедским и неуролошким прегледом нису уочени знаци присуства обољења локомоторног система, нити је радиолошким прегледом колених зглобова установљено присуство промена које би говориле у прилог постојању остеоартритиса. Хистолошком анализом хрскавице уочено је да са старењем долази до смањивања дебљине хрскавице тибије, хипертрофије хондроцита површинске и средње зоне хрскавице фемура и експресије колагена типа X у некалцификованој хрскавици. То је указало на постојање дегенеративних промена које нису нарушиле функцију хрскавице, али представљају предуслов за могућу појаву ОА. Физичка активност је испољила позитиван утицај на очување структуре хијалине хрскавице током старења јер колаген типа X није био присутан у површинској зони хрскавице старих радних паса. На синовијалној мембрани је са старењем уочено локализовано повећање броја слојева ћелија интиме, без нарушавања њеног интегритета. Физичка активност је условила локалну појаву дугих прстоликих набора за које се може претпоставити да су се формирали као одговор на дуготрајно физичко оптерећење. У поглављу Литература приказане научне публикације се односе на области које су од значаја за урађену дисертацију и цитиране су на начин који објашњава и потврђује добијене резултате. VI ЗАКЉУЧЦИ ИСТРАЖИВАЊА (навести закључке који су приказани у докторској дисертацији): Добијени резултати, посебно најважнији, истакнути су у поглављу Закључци 1. Синовијална течност паса садржи популацију ћелија мезенхималног порекла које могу да формирају колоније фибробласта, пролиферишу и имају слаб адипогени, добар остеогени и висок хондрогени потенцијал in vitro. 2. Висок хондрогени потенцијал наведених ћелија се огледа у спонтаној синтези сулфатисаних гликозаминогликана и колагена типа ИИ који представљају основне компоненте екстрацелуларног матрикса хијалине хрскавице. 3. Испитиване ћелије in vivo задржавају дуготрајан хондрогени потенцијал што их чини занимљивим за даља испитивања у циљу регенерације хрскавице. 4. Ћелије изоловане из синовијалне течности старијих паса имају продужено време удвајања у култури, већи број старих ћелија и повећан остеогени потенцијал у односу на ћелије изоловане из синовијалне течности младих паса. 5. На основу свих изложених in vitro карактеристика може се претпоставити да синовијална течност паса садржи бипотентне и/или опредељене прогениторе за остеобласте и хондроците. 8

6. Старење доводи до умерених дегенеративних промена на хрскавици. Са старењем се смањује дебљина хрскавице тибије, долази до хипертрофије хондроцита у површинској и средњој зони и експресије колагена типа X у некалцификованој хрскавици. Ове промене могу да створе предуслов за развој дегенеративног остеоартритиса током старења. 7. Физичка активност има позитиван утицај на очување интегритета хрскавице током старења. Физичка активност смањује експресију колагена типа X у површинској зони хрскавице. VII ОЦЕНА НАЧИНА ПРИКАЗА И ТУМАЧЕЊА РЕЗУЛТАТА ИСТРАЖИВАЊА (навести да ли су добијени резултати у складу са поставњеним циљем и задацима истраживања, као и да ли закључци произилазе из добијених резултата): На основу свега изнетог, Комисија сматра да докторска дисертација дипломираног ветеринара и асистента Катедре за патолошку физиологију Факултета ветеринарске медицине Универзитета у Београду, Јелене В. Француски Ex vivo карактеристике мезенхималних матичних ћелија изолованих из синовијалне течности коленог зглоба паса различите старости представља оригинални допринос у истраживању мезенхималних матичних ћелија паса и обољења коштано-зглобог система. Добијени резултати су у складу са постављеним циљем и задацима истраживања а закључци произилазе из добијених резултата. VIII КОНАЧНА ОЦЕНА ДОКТОРСКЕ ДИСЕРТАЦИЈЕ: 1. Да ли је дисертација написана у складу са образложењем наведеним у пријави теме? Јесте 2. Да ли дисертација садржи све елементе прописане за завршену докторску дисертацију? Сарджи 3. По чему је дисертација оригиналан допринос науци? У овој тези је по први пут описан налаз острваца налик хијалиној хрскавици формираних in vitro, а од умножених ћелија синовијалне течности коленог зглоба паса. Показано је да су те ћелије код младих паса довољно потентне да се могу применити у протоколима за репарацију/регенерацију хрскавице, док се код старих паса исти тип ћелије не може користити за исту намену с обзиром на испољене ћелијске знаке старења и јачи остеогени потенцијал. Такође су по први пут описане промене на зглобној хрскавици 9

код нехондродистрофичних паса током старења и по први пут је описано на који начин умерена физичка активност код паса утиче на очување структуре хијалине хрскавице током старења. На основу ових налаза се даље може испитивати ефекат комбинације ћелија изолованих из синовијалне течности и биоматеријала у циљу санације дефеката хрскавице. 10

БИБЛИОГРАФИЈА Радови и конгресна саопштења из уже научне области: M23 1. Војводић Д, Миљановић Оливера, Ђурђевић Д, Гатарић С, Станојевић И, Обрадовић Драгана, Шурбатовић Маја, Француски Јелена. Effects of different anaesthetic agents on GM-CSF, MCP1, IL1ALPHA and TNFALPHA levels in rat sepsis model. Acta Veterinaria Serbia, 2013; 63(2-3):125-136 2. Андрић Н, Поповић Н, Степановић П, Француски Јелена, Ђурђевић Д. Biochemical changes in the blood serum of dogs treated with phenobarbital. Acta Veterinaria Serbia, 2010; 60 (5-6):573-584 M24 1. Француски Ј, Андрић Н, Илић В, Јовановић М, Лазаревић Мацановић М, Крстић В, Ковачевић-Филиповић М. Ретроспективна анализа клиничко патолошког налаза код опструкције доњих мокраћних путева мачака. Ветеринарски Гласник, Београд, 2013, 67 (1-2): 117-128 10.2298/ВЕТГЛ1302117Ф 2. Марковић Даница, Радовановић Анита, Милица Ковачевић Филиповић, Јелена Француски, Тодоровић Вера. Хистолошке карактеристике реакције меких ткива на имплантирани биокерамички материал и процена биокомпатибилности Ветеринарски гласник, Београд 2012; 66 (3-4): 285-97. Iздавач: Ветеринарска Комора Србије M34 1. Андрић Н, Француски Ј, Ковачевић-Филповић М. SAA concentration in CSF of dogs with different neurologycal disorders. Sixteenth biennial congress of the international society of animal clinical pathology. Copenhagen, Denmark, June 25-29, 2014. 2. Јелена Француски, Слађан Нешић, Вања Крстић, Ненад Андрић.Haws syndrome and suspected FIP - case report. Dvg-vet-congress / 15th ESVCP-ECVCP congress, Новембар 6-9, 2013 Берлин, Немачка 3. Марковић Даница, Тодоровић Вера, Цолић К., Ковачевић-Филиповић Милица, Радовановић Анита, Француски Јелена, Лужајић Тијана. Biomaterials in regenerative medicine: uses and perspectives. 0_27, 4. ISCAA International Symposium of Clinical and Applied Anatomy, 14. National Anatomy Congress, June 28 July 01, 2012, Ancara, Turkey. Vol.6. ISSN: 1307-8798. Izdavač Turkish Society of Aнatomy and Clinical Anatomy 1

M61 1. Милица Ковачевић Филиповић, Јелена Француски. Крвни размаз код паса и мачака техника и дијагностички значај. Зборник предавања XXXIV семинара за иновације знања ветеринара. Факултет ветеринарске медицине, Београд, 08. Фебруар 2013. год. M64 1. Милан Јовановић, Јелена Француски, Милош Вучићевић. Улога лабораторијске дијагностике у раду мале клиничке праксе, 287-292. Зборник радова, 25. Саветовање ветеринара Србије. Српско ветеринарско друштво, Златибор 11-14. септембар 2014. 2. Јелена Француски, Милица Ковачевић Филиповић. Значај прегледа урина код паса и мачака. Хемијски преглед урина - како га вршити и како га тумачити. Cliнica veteriнaria 2014. Копаоник (Брзеће), 23.-25. Јуна 2014, 108-13 IСБН 978-86- 81043-88-2 3. Милица Ковачевић Филиповић, Јелена Француски. Специфична тежина урина у диференцијалној дијагнози полиурије и полидипсије. Cliнica veteriнaria 2014. Копаоник (Брзеће), 23.-25. Јуна 2014, 114-21 IСБН 978-86-81043-88-2 4. Тања Недељковић, Александра Тарбук, Јелена Француски, Ненад Андрић. Секундарна имунолошки посредована хемолитичка анемија мачака-приказ случаја. Зборник радова, Петнаесто регионално саветовање из клиничке патологије и терапије животиња, Cliнica veteriнaria 2013. Београд, 24.-26. Мај 2013, 128-9 ИСБН 978-86-81043-70-7 5. Јелена Француски, Милица Ковачевић Филиповић. Анаплазма платис или како добро искористити крвни размаз. Билтен САСАП 2013, 47-50 стр 6. Ненад Андрић, Слађан Нешић, Јелена Француски. Инфламаторна обољења можданог ткива код малих животиња. Зборник радова, Петнаесто регионално саветовање из клиничке патологије и терапије животиња, Cliнica veteriнaria 2013. Београд, 24.-26. Мај 2013, 95-8 7. Јелена Француски, Милица Ковачевић Филиповић. Дијагностички значај прегледа ретикулоцита и прегледа урина паса и мачака. Зборник радова, Петнаесто регионално саветовање из клиничке патологије и терапије животиња, Cliнica veteriнaria 2013. Београд, 24.-26. Мај 2013, 119-121 8. Нурковић Ј, Лужајић Т, Француски Ј, Долићанин З, Радовановић А, Тодоровић В, Ковачевић-Филиповић М. Потенцијал за диференцијацију мезенхималних матичних ћелија из масног ткива човека. 5. Конгрес медицине спорта и спортских наука са мађународним учешћем, Београд; Књига апстраката 2012, стр. 10-11. 2012. 2

9. Француски Јелена, Ненад Андрић, Вања Крстић, Милан Јовановић, Радмила Ресановић, Милица Ковачевић-Филиповић. Дијагностика Бабезиозе паса светлосном микроскопијом. Зборник радова, 23. Саветовање ветеринара Србије. Српско ветеринарско друштво, Златибор 13-16. септембар 2012. Организатор - Српско ветеринарско друштво. 10. Јелена Француски, В. Хаџић, Олга Дивнић. Диабетес меллитус код пса - приказ случаја. Дванаесто регионално саветовање из клиничке патологије и терапије животиња, Cliнica veteriнaria, Суботица, 16.-18. јуна, 2011. 195-96 стр. 11. Даница Марковић, З. Којић, Милица Ковачевић Филиповић, Анита Радоваовић, Н. Андрић, Јелена Француски, Вера Тодоровић. Напредак у ветеринарској регенеративној медицине: могућност коришћења биоматеријала на бази калцијум фосфата на експерименталном моделу пацова, Зборник кратких садржаја 16. Саветовања доктора ветеринарске медицине Републике Српске 2011. 70-1 стр. 12. Милица Ковачевић Филиповић, Јелена Француски. Лабораторијска дијагностика инфламације. Тринаесто регионално саветовање из клиничке патологије и терапије животиња, Cliнica veteriнaria, Суботица, 16.-18. јуна, 2011. 127-131 стр. 13. Милош Вучићевић, Александар Дрљачић, Јелена Француски, Сергеј Иванов, Ружица Траиловић, Драгиша Траиловић. Прилог познавању физиолошких вредности основних хематолошких параметара крви домаћег балканског магарца у периоду пре и након повлачења са паше. Други сајам коњарства Horseville, узгој, репродукција и здравствена заштита коња 2011, стр 194-200 14. Јелена Француски, Милан Јовановић, Мирјана Лазаревић Мацановић. Лимфом мачака, Зборник радова.дванаесто регионално саветовање из клиничке патологије и терапије животиња. Cliнica veteriнaria, Суботица, 18.-20. јуна, 2010. 151-52 стр. 15. Јелена Француски, Наталија Милчић-Матић, Никола Поповић, Значај кућних гриња у клиничкој пракси малих животиња, Зборник радова. Дванаесто регионално саветовање из клиничке патологије и терапије животиња, Cliнica veteriнaria, Суботица, 18.-20. јуна, 2010. 57-58 стр. 16. Андрић Н, Степановић П, Јовановић М, Француски Јелена. Епилепсија малих животиња-терапија и разлози за незадовољавајући одговор на терапију. Зборник реферата и кратких садржаја 21. Саветовања Ветеринара Србије.Златибор 15-18.септембра 2010. 350-51стр. 17. Француски Јелена, Андрић Н. Нефропатија изазвана хроничном бабезиозом - дијагностика и терапија, Зборник радова. Једанаесто регионално саветовање из клиничке патологије и терапије животиња, Cliнica veteriнaria 2009. 116-17 str. 18. Прокић Б,Самоковлија Ана, Француски Јелена, Пурић В.Основне вредности параметара крви за време оперативног захвата. Зборник радова, Девето 3

19. Француски Јелена, Бошњак Јасна, Буинац Милана, Атанасијевић Н. Учесталост појављивања асептичног пододерматитиса код високо-млечних крава Холштајн расе Четврти симпозијум Исхрана, репродукција и заштита здравља говеда 2005. 20. Француски Јелена, Бошњак Јасна, Буинац Милана, Атанасијевић Н. Процена телесне кондиције крава. Четврти симпозијум Исхрана, репродукција и заштита здравља говеда 2005. Радови и конгресна саопштења из докторске дисертације М21 1. Ј.В. Француски, А. Радовановић, Н. Андрић, В. Крстић, Д. Богдановић, В. Хаџић, В. Тодоровић, М. Лазаревић Мацановић, S. Sourice Petit, S. Beck-Cormier, J. Guicheux, O. Gauthier, М. Ковачевић Филиповић. Age-related stifle cartilage changes in non-working and working german shepherd dogs. Journal of Comparative Pathology, Ref. No. YJCPA-D-14-00133R1 - in press M23 1. Јасмина Дебељак Мартачић, Јелена Француски, Тијана Лужајић, Немања Вуковић, Славко Мојсиловић, Неда Дрндаревић, Маријана Петаков, Марија Глибетић, Даница Марковић, Анита Радовановић, Вера Тодоровић, Милица Ковачевић Филиповић. Characterization of deciduous teeth stem cells isolated from grown dental pulp. Војносанитетски преглед, 2014; 71(8):735-741 M34 1. Јелена Француски, Ненад Андрић, Мирјана Лазаревић Мацановић, Даница Марковић, Анита Радовановић, Милица Ковачевић Филиповић. Serum amiloid A as a marker of inflammation in canine joint. 15 th Biennial Congress of the International Society for Animal Clinical Pathology &14 th Conference of the European Society of eterinary Clinical Pathology July, 3 rd - 7 th 2012, 144str. 2. Француски Јелена, Ковачевић Филиповић Милица, Sarah Beck, Sophie Sourice- Petit, Jerome Guicheux, Радовановић Анита. Preliminary report: Evaluation of Histological changes in Canine Knee Joint tissues in Spontaneous Osteoarthritis, 81-82. Europian Cooperation in the field of Scientific and Techincal Research, COST Action MP1005, 2nd Joint Meeting, Септембар 4-5, 2012., Беч, Аустрија. IСБН: 978-3- 9502481-7-3. Издавач/организатор Vienna University of Technology, Institute for Mechanics of Materials and Structures. 4

3. Француски Јелена, Дебељак Мартачић Јасмина, Радовановић Анита, Тодоровић Вера, Sophie Sourice-Petit, Sarah Beck, Jerome Guicheux, Ковачевић Филиповић Милица. Preliminary report: Canine Synovial Fluid as a source of cells with osteogenic and chondrogenic potential, 75-76. Europian Cooperation in the field of Scientific and Technical Research, COST Action MP1005, 2nd Joint Meeting, Септембар 4-5, 2012., Беч, Аустриа. IСБН: 978-3-9502481-7-3. Издавач/организатор Vienna University of Technology, Institute for Mechanics of Materials and Structures. M61 1. Милица Ковачевић Филиповић, Анита Радовановић, Јелена Француски, Татјана Божић. Матичне ћелије физиолошки основ клиничке примене Зборник предавања са XXXII семинара за иновације знања ветеринара. Факултет ветеринарске медицине, Београд, 18. Фебруар 2011. год. M64 1. Јелена Француски, Милица Ковачевић Филиповић. Матичне ћелије синовијалне течности паса, 157 161. Зборник радова, 23. Саветовање ветеринара Србије. Зборник радова, 25. Саветовање ветеринара Србије. Српско ветеринарско друштво, Златибор 11-14. септембар 2014. 2. Милица Ковачевић Филиповић, Јелена Француски. Хематопоетске и мезенхималне матичне ћелије: основни концепт клиничке примене, 175-182. Зборник радова, Зборник радова, 25. Саветовање ветеринара Србије. Српско ветеринарско друштво, Златибор 11-14. септембар 2014. 3. Француски Јелена, Андрић Ненад, Лужајић Тијана, Марковић Даница, Ковачевић Филиповић Милица, Радовановић Анита. Хистолошке карактеристике коленог зглоба радних паса старијих од десет година, 168-169. III конгрес српског анатомског друштва Србије, Медицински факултет у Нишу, 6-8 септембар 2012. ИБН: 978-86-6233-041-7. Издавач Галаксија, Ниш. Организатор Српско анатомско друштво. 4. Лужајић Тијана, Дебељак-Мартачић Јасмина, Француски Јелена, Петаков Маријана, Тодоровић Вера, Радовановић Анита, Ковачевић Филиповић Милица. Потенцијал за диференцијацију мезенхималних матичних ћелија из масног ткива пса, 142-143. III конгрес српског анатомског друштва Србије, Медицински факултет у Нишу, 6-8 септембар 2012. IСБН: 978-86-6233-041-7. Издавач Галаксија, Ниш. Организатор Српско анатомско друштво. 5. Сандра Милошевић, Јелена Француски, Ненад Андрић, Даница Марковић, Милица Ковачевић Филиповић, Анита Радовановић. Хистолошке карактеристике синовијалне мембране радних паса старијих од десет година, 166-167. III конгрес српског анатомског друштва Србије, Медицински факултет у Нишу, 6-8 септембар 2012. IСБН: 978-86-6233-041-7. Издавач Галаксија, Ниш. Организатор Српско анатомско друштво. 5