3gAllergy Specific IgE Universal Kit. For use on IMMULITE 2000 systems (IMMULITE 2000 and IMMULITE 2000 XPi automated immunoassay analyzers)

3gAllergy Specific IgE Universal Kit For use on IMMULITE 2000 systems (IMMULITE 2000 and IMMULITE 2000 XPi automated immunoassay analyzers)

IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of allergen-specific IgE in human serum, as an aid in the clinical diagnosis of IgE-mediated allergic disorders. Catalog Number: L2KUN6 (600 tests) Test Code: SPE Color: Light Gray Summary and Explanation Many allergies are mediated by immunoglobulins of the IgE class. In sensitized individuals suffering from this immediate (atopic or anaphylactic) type of allergy, IgE molecules act as points of contact between the allergen and specialized cells that release histamine and other agents upon exposure to the allergen; this initiates the events which we recognize as allergic reactions. 5,9 When evaluated in the light of other clinical and laboratory findings, in vitro allergenspecific IgE tests can help the physician identify the allergen (or allergens) to which an individual is sensitive. Principle of the Procedure IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE is a solid-phase, two-step, chemiluminescent immunoassay that exploits liquid phase kinetics in a bead format. 10,11 It represents a significant advance over conventional methods relying on allergens attached to a solid-phase support, such as a paper disk. The solid phase (bead) is coated with anti-ligand. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgE antibody in a human/nonhuman serum buffer matrix. Individual ligand-labeled allergens and panels in liquid phase are not supplied in the kit but are required for the run. In the first cycle, the patient sample and the ligand-labeled specific allergen are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, specific IgE in the sample binds to the ligandlabeled allergen, which in turn binds to the anti-ligand on the bead. Unbound sample is then removed by centrifugal washes. In the second cycle, the enzyme conjugated monoclonal murine anti-human IgE antibody is added to the original reaction tube for additional 30 minutes incubation. The enzyme conjugated monoclonal murine anti-human IgE antibody binds to immobilized IgE. The unbound enzyme conjugate is removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes Time to first result: 65 minutes Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators. IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE has not been tested with all possible variations of tube types. 2 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

Volume Required: 50 µl serum Storage: 7 days at 2 8 C*, or 6 months at 20 C. 13 * Data on file at Siemens Healthcare Diagnostics. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Caution: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. Safety data sheets (MSDS) available on www.siemens.com/diagnostics. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. 3gAllergy Specific IgE Bead Pack (L2UN12) With barcode. 200 beads, coated with anti-ligand. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KUN6: 3 packs 3gAllergy Specific IgE Reagent Wedge (L2UNA6) With barcode. 30 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgE antibody in a human/nonhuman serum buffer matrix, dispensed equally into chambers B and C. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KUN6: 1 wedge Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. 3gAllergy Specific IgE Adjustors (L2UNJ3, L2UNJ4) Two vials (Low and High), 2.0 ml each, of human IgE in a nonhuman serum matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KUN6: 2 sets Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. 3gAllergy Specific IgE Adjustor Antibody (L2UNS1) Two tubes, 2.75 ml each of liquid, ready-to-use ligand-labeled polyclonal goat anti-human IgE antibody, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. This reagent is placed in the Allergen Holder Wedge when running the Specific IgE Adjustors. L2KUN6: 2 sets 3gAllergy Specific IgE (SPE) Universal Kit Controls (L2UNC1, L2UNC2) Two vials, 2 ml each of human IgE in a nonhuman serum matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KUN6: 2 sets Refer to the control insert for concentration levels. Before use, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. 3gAllergy Specific IgE Control Antibody (L2UNS2) Two tubes, 2.75 ml each of liquid, ready-to-use ligand-labeled polyclonal goat anti-human IgE antibody, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. This reagent is placed in IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 3

the Allergen Holder Wedge when running the IMMULITE 2000 IgE Controls. L2KUN6: 2 sets Kit Components Supplied Separately 3gAllergy Specific IgE Sample Diluent (L2UNZ) For on-board dilution of samples. One vial, concentrated (ready-to-use), human serum albumin matrix, with preservative. Storage: 30 days (after opening) at 2 8 C or 6 months (aliquotted) at 20 C. Dispose of in accordance with applicable laws. L2UNZ: 25 ml Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2UNZ: 3 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2AW1-3: Allergen Holder Wedges (barcoded) L2AW1, 400930-02: serially coded 1 33 L2AW2, 400930-03: serially coded 34 66 L2AW3, 400930-04: serially coded 67 99 L2ATC: Allergen Tube Caps L2ATS2: Allergen Tube Septa Also Available MC6LCM, DC1LCM, DC2LCM, L2SNCCM: Human serum-based allergen-specific IgE controls Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. 3gAllergy Specific Allergens and Mixed Allergen Panels Individual allergens are packaged and sold in 40 and 20 test modules containing 2.75 ml and 1.75 ml, respectively. Mixed allergen panels are packaged and sold in 40 test modules only containing 2.75 ml each. Each allergen tube contains specific allergens or a mix of allergens in a proteinbased buffer matrix, with preservative. Do not freeze. Store refrigerated: stable at 2 8 C until the expiration date marked on the label or 90 days onboard instrument. Do not use if signs of microbial contamination such as a cloudy appearance have been observed. Individual allergens and mixed allergen panels are intended for use with the IMMULITE 2000 systems analyzers. For a full list and catalog numbers, please refer to the 3gAllergy Menu. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Allergen Loading 1 Select an open position on the Reagent Carousel through the software. 2 Replace caps on Allergen Tubes with septa. Do not invert the Allergen Tube once the septum is installed. 3 Place Allergen Tubes containing IMMULITE 2000 specific allergens, specific allergen panels, Specific IgE Adjustor Antibody, and/or Specific IgE Control Antibody in the Allergen Holder Wedge, with the barcodes facing the open side of the wedge. 4 Close the wedge and scan the allergen barcodes with the hand-held imaging scanner. 5 Once scanning is complete, load the Allergen Holder Wedge into the reagent carousel. 6 Repeat this procedure to load subsequent Allergen Holder Wedges. The Allergen Holder Wedge must be scanned prior to installation into the instrument to ensure correct instrument operation. Removing or replacing any vials within the allergen wedge will require rescanning of the wedge with the barcode scanner to update the allergen information. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks 4 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

Quality Control Samples: To monitor adjustment, use the controls supplied with the kit. Specific allergen controls are also available, see Kit Components Supplied Separately section. The specific allergen controls (DC1LCM, DC2LCM, MC6LCM and L2SNCCM) should be tested to monitor allergen performance. Interpretation of Results Individual Allergen Results: The class number is an indication of the amount of endogenous IgE specific for the selected allergen. Quantitative values (ku/l) and interpretation of class results for two scoring systems (standard and extended) are provided in the tables below. 16 The standard classification system utilizes the following class cutoffs: Class 0* ku/l Reactivity for Individual/ Panel Allergen(s) 0.10 Absent or ND 0.10 0.34 Very Low I 0.35 0.69 Low II 0.70 3.49 Moderate III 3.50 17.49 High IV 17.5 52.49 V 52.5 99.99 VI 100 Very High * Class 0 in the standard system signifies: not detectable by second-generation assays. ND: not detectable by IMMULITE 2000 3gAllergy. The extended classification system utilizes the following class cutoffs. Reactivity for Individual/ Class ku/l Panel Allergen(s) 0 0.10 Absent or ND 0/1 0.10 0.24 Very Low I 0.25 0.39 Low II 0.40 1.29 Moderate III 1.30 3.89 High IV 3.90 14.99 V 15.00 24.99 VI 25 Very High ND: not detectable by IMMULITE 2000 3gAllergy. The choice of classification systems can be made by the user within the IMMULITE 2000 operational software. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Mixed Allergen Panel Results A positive result (see Interpretation of Results for standard and extended classification systems) with a Mixed Allergen Panel indicates that antibodies to one or more of the component allergens in the panel are present in elevated amounts in the patient serum sample. To identify the allergen-specific IgE, the sample should be retested with individual allergens corresponding to components of the panel. A negative result (< 0.10 ku/l) indicates the absence or nondetectable levels of IgE specific for the panel's component allergens. Panel value results cannot be compared with quantitative results based on testing for individual allergens, nor can they be considered the cumulative total of individual allergen results. Limitations A definitive clinical diagnosis should not be made solely on the basis of an in vitro allergen-specific IgE result. Diagnosis should be made by the physician only after all clinical and laboratory findings have been evaluated. 2,4 In vitro allergen-specific IgE results should not be used as a definitive guide to selecting an initial dose for immunotherapy. A skin test with the proposed initial dilution of the allergenic extract should be performed first to demonstrate the patient's ability to tolerate the dose. In food allergy, circulating IgE antibodies may remain undetectable if directed towards allergens which are revealed or altered during processing or digestion and which therefore do not exist in the original food for which the patient is tested. 1,3 Identical results for different allergens may not be associated with clinically equivalent manifestations, due to differences in IgE-binding capacity. 6 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 5

The user should be aware of the possibility of clinical crossreactivity within an allergen family. 7,8 In drug or occupational allergy, a negative result may be observed in patients who are hypersensitive to drug or occupational allergens in the following circumstances: The symptoms are mediated without IgE involvement. The sample is collected less than 2 weeks after the allergic reaction. The test should be repeated after 2 weeks to confirm results. The sample is collected a long period of time after the last allergic reaction occurred. It has been shown that the IgE antibody concentration decreases with time. The following special considerations apply to latex allergy testing: The possibility of clinical crossreactivity exists between latex and certain foods including avocado, banana, chestnut, and kiwi. 12 Since the latex assay measures allergen-specific IgE, type IV delayed reaction or irritation from latex will not be detected. Class 0 results for insect venoms indicate absent or very low levels of circulating venom-specific IgE antibodies. Such results do not preclude existence of current or future clinical hypersensitivity to insect sting. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin. Chem. 1988:34: 27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ku/l. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE has been the subject of a number of published studies. 14,15 Reportable Range: 0.10 100 ku/l (2 nd WHO IRP 75/502 human serum IgE) Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; determined in accordance with CLSI EP17-A 35 ): 0.03 ku/l Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CLSI EP17-A 35 ): 0.10 ku/l Functional Sensitivity: (concentration with 20% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP5-A2 36 ): 0.20 ku/l Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Specificity: The antibodies are highly specific for human IgE and exhibit no crossreactivity to other human Immunoglobulin classes. Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 500 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. 6 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

Method Comparison: The assay was compared to AlaSTAT Microplate Allergen-Specific IgE, a standard scoring assay, on 7520 samples. IMMULITE 2000 6 1 3 31 42 303 5 11 76 33 35 4 3 178 168 26 10 3 1 292 604 49 2 2 2 16 229 886 98 1 108 172 94 4 0 3912 118 11 2 0 1 2 3 4 5 6 AlaSTAT Microplate Total Agreement: 97% Relative Sensitivity: 96% Relative Specificity: 97% Total Identical: 81% Class 1 Identical: 99% Class 2 Identical: 100% Means of Class Scores: 1.29 (AlaSTAT) 1.37 (IML 2000) The same data was analyzed in a regression analysis with the following results: (IML 2000) = 0.989 (AlaSTAT) + 1.21 ku/l r = 0.87 Means: 8.53 ku/l (AlaSTAT) 9.64 ku/l (IMMULITE 2000) Clinical Performance: Samples were assayed in singlicate across 24 specific allergens. Clinical diagnosis was based on patient donor history and/or skin test data. 17-34 Results of Clinical Study*, n = 4214 Clinical Diagnosis IMMULITE 2000 Clinical Normal Positive 595 101 Negative 537 2981 Agreement: 84.9% 95% Confidence Interval: 84 86% Specificity: 96.7% 95% Confidence Interval: 96 97% Sensitivity: 54.4% 95% Confidence Interval: 50 55% Allergens Included: Common Sagebrush (W43), Wingscale (W75), Red Maple (T27), White Hickory (T41), Sweet Gum (T211), Red Cedar (T219), American Cockroach (I206), Bayberry/Sweet Gale (T218), Baccharis (W67), Dog Fennel (W46), Locust Tree (T208), Live Oak (T103), Hormodendrum hordei (M45), Stemphylium solani (M88), Red Mulberry (T71), Privet (T210), White Bald Cypress (T37), Egg (F245), Cashew (F202), Clam (F207), Oyster (F290), Pistachio (F203), Scallop (F338), and Walnut (F256). *Data on file at Siemens Healthcare Diagnostics. References 1) Aas K. The diagnosis of hypersensitivity to ingested foods. Clin Allergy 1978;8:39 50. 2) Barbee RA, et al. Longitudinal changes in allergen skin test reactivity in a community population sample. J Allergy Clin Immunol 1987;79:16 24. 3) Bleumink E. Food allergy: the chemical nature of the substance eliciting symptoms. World Rev Nutr Diet 1970;12: 505 70. 4) Bloch K, Salvaggio J. Use and interpretation of diagnostic immunologic laboratory tests. JAMA 1982; 246:2734 58. 5) Halpern GM. Markers of human allergic disease. J Clin Immunoassay 1983;6:131 8. 6) Lichtenstein LM, et al. IgE antibody measurements in ragweed hay fever; relationship to clinical severity and the results of immunotherapy. J Clin Invest 1973; 52:472 82. 7) Lowenstein H. Cross reactions among pollen antigens. Allergy 1980;35:198 200. 8) Weber RW, Nelson HS. Pollen allergens and their interrelationships. Clin Rev Allergy 1985;3: 291 318. 9) Wide L, Bennich H, Johansson SGO. Diagnosis of allergy by an in vitro test for allergen antibodies. Lancet 1967;2:1105 7. 10) El Shami AS, Alaba O. Liquid-phase in vitro allergen-specific IgE assay with in situ immobilization. Adv Biosci 1989;74:191 201. 11) Alaba O, El Shami AS. Evaluation of nonspecific IgE binding: comparison of two in vitro allergen assays. Adv Biosci 1989;74:203 14. 12) Pecquet C. IgE-mediated allergy to latex in 80 patients. Presented at the XVth European Congress of Allergology and Clinical Immunology, Paris, 12 May 1992. 13) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995:358. 14) Li TM, Chuang T, Tse S, Hovanec-Burns D, El Shami AS. Development and validation of a third generation allergen-specific IgE assay on the continuous random access IMMULITE 2000 analyzer. Ann Clin Lab Sci 2004;34(1):67-74. Available via www.annclinlabsci.org. 15) Guilloux L, Hamberger C. Évaluation du dosage des IgE spécifiques sur l'immulite 2000 DPC. Immuno-analyse & Biologie Spécialisée. 2004;19(1):71-80. Available via IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 7

www.sciencedirect.com. 16) Hoffman DR. Comparison of methods of performing the radioallergosorbent test: Phadebas, Fada- Nalebuff, and Hoffman protocols. Ann Allergy. 1980 Dec;45(6):343-6. 17) Bernstein IL, et al. Allergy Diagnostic Testing: An Updated Practice Parameter. Ann Allergy Asthma Immunol 2008;100(3) Sup 3:S1-S148. 18) Weber RW. Cross-reactivity of pollen allergens: impact on allergen immunotherapy. Ann Allergy Asthma Immunol 2007;99:203-212. 19) Weber RW. Cross-reactivity of Pollen Allergens. Curr Allergy Asthma Rep 2004;4:401-408. 20) White JF, Bernstein DI. Key pollen allergens in North America. Ann Allergy Asthma Immunol 2003;91:425-35. 21) Compes E, et al. Hypersensitivity to black locust (Robinia pseudoacacia) pollen: allergy mirages. Ann Allergy Asthma Immunol 2006; 96(4):586-92. 22) Willison L, et al. Pistachio vicilin, Pis v 3, is immunoglobulin E-reactive and cross-reactive with the homologous cashew allergen, Ana o 1. Clin Exp Allergy 2008;38:1229-38. 23) Clark A, Ewan P. Good prognosis, clinical features, and circumstances of peanut and tree nut reactions in children treated by a specialist allergy center. J Allergy Clin Immunol 2008;122(2):286-9. 24) Barre et al. Vicilin allergens of peanut and tree nuts (walnut, hazelnut, and cashew nut) share structurally related IgE-binding epitopes. Mol Immunol 2008;45:1231-40. 25) Maloney J, Rudengren M, Ahlstedt S, Bock S, Sampson H. The use of serum-specific IgE measurements for diagnosis of peanut, tree nut, and see allergy. J Allergy Clin Immunol 2008;122(1):145-151. 26) Goetz D, Whisman B, Goetz. Crossreactivity among edible nuts: double immunodiffusion, crossed immunoelectrophoresis, and human specific IgE serologic surveys. Ann Allergy Asthma Immunology 2005;95:45-52. 27) http://www.allergen.org/allergen.aspx International Union of Immunological Societies Allergen Nomenclature Sub-Committee. 28) Leung P, et al. IgE reactivity against a crossreactive allergen in crustacean and mollusca: evidence for tropomyosin as the common allergen. J Allergy Clin Immunol 1996;98(5): 954-61. 29) Aalberse R, Akkerdaas J, van Ree R. Cross-reactivity of IgE antibodies to allergens. Allergy 2001;56:478-90. 30) Sidenius K, Hallas T, Poulsen L, Mosbech H. Allergen cross-reactivity between house-dust mites and other invertebrates. Allergy 2001;56:723-33. 31) Ferreira F, Hawranek P, Gruber N, Wopfner N. Allergic cross-reactivity: from gene to the clinic. Allergy 2004;59:243-67. 32) Zhang Y, Hiroaki M, Morita E. Case report: cross-reactivity among shrimp, crab and scallops in a patient with a seafood allergy. J Dermatology 2006;3:174-77. 33) Purohit A, et al. role of tropomyosin as a cross-reacting allergen in sensitization to cockroach in patients from Martinique (French Caribbean Island) with a respiratory allergy to mite and a food allergy to crab and shrimp. Europ Ann Allergy and Clin Immunol 2007;39:85-88. 34) Nakmura A, et al. Effect of maillard reaction on allergenicity of scallop tropomyosin. J Agric Food Chem 2005;53:7559-64. 35) CLSI. Protocols for the Determination of Limits of Detection and Quantitation; Approved Guideline. CLSI document EP17-A Vol. 24 (No. 34). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA, 2004. 36) Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline-Second Edition. CLSI Document EP5-A2. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA, 2004. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. 8 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

Tables and Graphs Precision (ku/l) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 %CV 5 SD %CV 1 0.5 0.05 10 0.06 12 2 0.7 0.07 10 0.08 11 3 1.1 0.04 3.6 0.05 4.5 4 1.1 0.08 7.3 0.08 7.3 5 1.5 0.08 5.3 0.09 6.0 6 1.6 0.15 9.4 0.16 10 7 1.8 0.10 5.6 0.10 5.6 8 1.9 0.14 7.4 0.16 8.4 9 2.1 0.12 5.7 0.14 6.7 10 2.4 0.10 4.2 0.14 5.8 11 3.0 0.15 5.0 0.17 5.7 12 3.4 0.12 3.5 0.16 4.7 13 3.6 0.20 5.6 0.24 6.7 14 4.1 0.28 6.8 0.32 7.8 15 6.1 0.28 4.6 0.36 5.9 16 8.9 0.44 4.9 0.56 6.3 17 9.5 0.53 5.6 0.65 6.8 18 10 0.36 3.6 0.50 5.0 19 12 0.56 4.7 0.76 6.3 20 15 0.67 4.5 0.67 4.5 21 19 1.7 8.9 1.9 10 22 43 1.9 4.4 2.6 6.0 Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 Wewnątrz serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Linearity (ku/l) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 32 in 32 5 96.6 16 in 32 53.8 48.3 111 8 in 32 26.6 24.2 110 4 in 32 12.1 12.1 100 2 in 32 5.74 6.04 95 1 in 32 3.04 3.02 101 2 32 in 32 53.7 16 in 32 30.1 26.8 112 8 in 32 13.8 13.4 103 4 in 32 6.81 6.71 102 2 in 32 3.40 3.35 101 1 in 32 1.70 1.68 101 3 32 in 32 36.4 16 in 32 17.3 18.2 94 8 in 32 9.48 9.11 104 4 in 32 4.78 4.55 106 2 in 32 2.48 2.28 109 1 in 32 1.21 1.14 106 Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 32 v 32. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 32 στα 32. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 32 w 32. Česky IMMULITE 2000 3gAllergy Specifické IgE Univerzální Kit Použití : Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke kvantitativnímu stanovení koncentrace alergen specifických IgE v lidském séru, jakožto pomůcky při klinické diagnóze alergických poruch zprostředkovaných IgE imunoglobuliny. Katalogové číslo : L2KUN6 (600 stanovení) Kód metody : SPE Barva : Světle šedá IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 9

Shrnutí a vysvětlení Imunoglobuliny třídy IgE zprostředkovávají četné alergie. U citlivých jedinců trpících tímto přímým typem alergie (atopickým nebo anafylaktickým) působí IgE molekuly jako styčné body mezi alergenem a specializovanými buňkami, které po vystavení organizmu alergenu uvolňují histamin a ostatní agens. To způsobuje příznaky, které označujeme za alergickou reakci. 5,9 Pokud hodnotíme in vitro testy alergen specifických IgE společně s ostatními klinickými a laboratorními nálezy, můžou nám pomoci určit alergen (nebo alergeny), na který je daný jedinec citlivý. Princip stanovení Stanovení 3gAllergy Specifické IgE na analyzátorech IMMULITE 2000 je dvoukroková chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi, která využívá kinetiku kapalné fáze na pevné fázi ve formě kuličky. 10,11 To představuje významný pokrok oproti konvenčním metodám, kde byly alergeny naneseny na pevnou fázi, například na papírový disk. Pevná fáze (kulička) je potažena antiligandem. Kapalná fáze se skládá z alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgE v lidské/nehumánní sérové pufrové matrici. Jednotlivé ligandem značené alergeny a panely v kapalné fázi se v soupravě nedodávají, ale jsou pro stanovení nutné. V prvním kroku se pacientský vzorek a ligandem značený specifický alergen inkubují s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. V této fázi se specifický IgE ve vzorku naváže na ligandem značený alergen, který se opět naváže na antiligand na kuličce. Nenavázaný vzorek se poté odstraní centrifugačním mytím. V druhém kroku se do reakční zkumavky přidá s enzymem konjugovaná myší protilátka proti lidskému IgE a probíhá další inkubace 30 minut. S enzymem konjugovaná monoklonální myší protilátka proti ldskému IgE se naváže na imobilizovaný IgE. Nenavázaný enzymový konjugát se odstraní centrifugačním mytím. Poté se do reakční zkumavky s kuličkou přidá substrát a je generován signál úměrný množství navázaného enzymu. Inkubační cykly : 2 30 minut Čas do prvního výsledku : 65 minut Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Odběrové zkumavky od různých výrobců mohou poskytovat rozdílné výsledky podle materiálů a přísad, jako jsou gelové nebo mechanické separátory, aktivátory koagulace. Stanovení IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE nebylo testováno se všemi možnými typy zkumavek. Potřebný objem vzorku : 50 μl séra Skladování : 7 dní při teplotě 2 8 C* nebo 6 měsíců při teplotě 20 C. 13 * Údaje jsou uloženy u Siemens Healthcare Diagnostics. Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie : Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Upozornění : Souprava obsahuje materiál živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. Bezpečnostní listy (MSDS/SDS) jsou k dispozici na www.siemens.com/diagnostics. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na 10 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 0,1 g/dl. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát : Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda : Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky dodané se soupravou. 3gAllergy Specifické IgE zásobník s kuličkami (L2UN12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených antiligandem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KUN6 : 3 balení 3gAllergy Specifické IgE reagencie (L2UNA6) Opatřeno čárovým kódem. 30 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgE v humánní/nehumánní sérové pufrované matrici, rovnoměrně rozdělené do komor B a C. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KUN6 : 1 nádobka Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii ; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. 3gAllergy Specifické IgE kalibrátory (L2UNJ3, L2UNJ4) Dvě ampulky po 2 ml s vysokou a nízkou koncentrací lidského IgE v nehumánní sérové matrici, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při 20 C. L2KUN6 : 2 sady Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. 3gAllergy Specifické IgE protilátka proti kalibrátoru (L2UNS1) Dvě zkumavky s kapalinou, každá po 2,75 ml ligandem značené polyklonální kozí protilátky proti lidskému IgE (připravené k použití), s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. Tato reagencie se při stanovení kalibrátorů IMMULITE 2000 Specifické IgE (adjustaci) vkládá do zásobníku na alergeny. L2KUN6 : 2 sady 3gAllergy Specifické IgE. (SPE) kontroly z univerzální soupravy (L2UNC1, L2UNC2) Dvě ampulky po 2 ml lidského IgE v nehumánní sérové matrici, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při 20 C. L2KUN6 : 2 sady Hodnoty koncentrace najdete na letáčku přiloženém ke kontrolám. Před použitím nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. 3gAllergy Specifické IgE protilátka proti kontrole (L2UNS2) Dvě zkumavky s kapalinou, každá po 2,75 ml ligandem značené polyklonální kozí protilátky proti IgE (připravené k použití), s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. Tato reagencie se při stanovení kontrol IMMULITE 2000 Specifické IgE vkládá do zásobníku na alergeny. L2KUN6 : 2 sady Materiál dodávaný zvlášť 3gAllergy Specifické IgE diluent vzorků (L2UNZ) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků analyzátorem. 1 lahvička koncentrované (připravené k použití) sérové/albuminové matrice, IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 11

s konzervačním prostředkem. Skladování : 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při teplotě 20 C. Likvidujte s platnými předpisy. L2UNZ : 25 ml Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2UNZ : 3 štítky L2SUBM : Chemiluminiscenční substrát L2PWSM : Promývací roztok L2KPM : Čistící roztok na jehly LRXT : Reakční zkumavky (na jedno použití) L2AW1-3 : Zásobníky s alergeny (s čárovým kódem) L2AW1, 400930-02 : kódy 1 33 L2AW2, 400930-03 : kódy 34 66 L2AW3, 400930-04 : kódy 67 99 L2ATC : Uzávěry zkumavek na alergeny L2ATS2 : Septa zkumavek na alergeny Rovněž lze dodat : MC6LCM, DC1LCM, DC2LCM, L2SNCCM : Alergen specifické IgE kontroly na bázi lidského séra Dále potřebujete : Destilovanou nebo deionizovanou vodu, testovací zkumavky, kontroly. 3gAllergy Specifické alergeny a smíšené panely alergenů Jednotlivé alergeny se dodávají v baleních po 40 a 20 testech, která obsahují 2,75 ml resp. 1,75 ml. Smíšené alergenové panely se dodávají pouze v balení po 40 testech, které obsahuje 2,75 ml. Každá alergenová ampule obsahuje specifický alergen nebo směs alergenů v pufrové matrici na bázi bílkoviny, s konzervačním prostředkem. Nezmrazujte. Skladujte v chladničce : stabilní při teplotě 2 8 C až do data exspirace uvedeného na štítku nebo 90 dní v přístroji. Nepoužívejte, pokud jsou zjevné známky mikrobiální infekce, jako je zakalení. Jednotlivé alergeny a panely směsí alergenů jsou určeny k použití na analyzátorech IMMULITE 2000. Úplný seznam a katalogová čísla naleznete v nabídce 3gAllergy. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy : přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Zakládání alergenů do analyzátoru 1 Pomocí softwaru si vyberte volnou pozici na karuselu na reagencie. 2 Na zkumavky s alergeny dejte místo uzávěru septa. Po umístění septa už zkumavky na alergeny nepřeklápějte. 3 Do zásobníku s alergeny vložte zkumavky na alergeny obsahující IMMULITE 2000 specifické alergeny, panely specifických alergenů, specifickou IgE protilátku proti kalibrátoru a/nebo specifickou IgE protilátku proti kontrole. Čárové kódy natočte čelem k otevřené straně zásobníku. 4 Zásobník zavřete a ručním zobrazovacím skenerem načtěte čárové kódy alergenů. 5 Po dokončení načítání založte zásobník s alergeny do karuselu na reagencie. 6 Postup opakujte při zakládání dalších zásobníků s alergeny. Zásobník s alergeny musí být načtený před založením do analyzátoru, aby byla zajištěna jeho správná činnost. Po odebrání některé ampulky ze zásobníku s alergeny nebo jejím přemístění je nutné zásobník opět načíst a tím zaktualizovat informace o alergenech. Doporučený interval mezi adjustacemi : 2 týdny Vzorky ke kontrole kvality : K monitorování adjustace použijte kontroly dodané se soupravou. Lze rovněž dodat specifické alergenové kontroly, viz část Materiál dodávaný zvlášť. Tyto specifické alergenové kontroly (DC1LCM, DC2LCM, MC6LCM a L2SNCCM) se testují pro kontrolu parametrů alergenů. 12 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

Vyhodnocení výsledků Výsledky samostatných alergenů : Ukazatelem množství endogenních IgE specifických pro vybraný alergen je číslo třídy. V následující tabulce jsou uvedeny kvantitativní hodnoty (ku/l) a interpretace výsledku dané třídy pro dva systémy vyhodnocení (standardní a rozšířený). 16 Standardní klasifikace používá pro jednotlivé třídy následující cut off hodnoty : Třída 0* ku/l 0,10 Reaktivita vzhledem k jednotlivým alergenům / panelům alergenů Žádná nebo nedetekovatelná 0,10 0,34 Velmi nízká I 0,35 0,69 Nízká II 0,70 3,49 Střední III 3,50 17,49 Vysoká IV 17,5 52,49 V 52,5 99,99 VI 100 Velmi vysoká * Třída 0 znamená ve standardních systémech : nedetekovatelné metodami 2. generace Nedetekovatelné pomocí IMMULITE 2000 3gAllergy Systém rozšířené klasifikace používá pro jednotlivé třídy následující cut off hodnoty : Třída 0* ku/l 0,10 Reaktivita vzhledem k jednotlivým alergenům / panelům alergenů Žádná nebo nedetekovatelná 0,10 0,24 Velmi nízká I 0,25 0,39 Nízká II 0,40 1,29 Střední III 1,30 3,89 Vysoká IV 3,90 14,99 V 15.00 24,99 VI 25 Velmi vysoká Nedetekovatelné pomocí IMMULITE 2000 3gAllergy Výběr systému klasifikace provede uživatel pomocí operačního softwaru IMMULITE 2000. Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Výsledky smíšeného panelu alergenů Pozitivní výsledek (viz Vyhodnocení výsledků pro standardní a rozšířené klasifikační systémy) smíšeného panelu alergenů poukazuje na to, že se v séru pacienta ve zvýšeném množství vyskytují protilátky proti jedné nebo více alergenovým složkám panelu. K identifikaci alergen specifického IgE, by měly být vzorky znovu testovány s jednotlivými alergeny, které odpovídají složkám panelu. Negativní výsledek (< 0,10 ku/l) je známkou nepřítomnosti nebo nedetekovatelných hladin IgE specifického pro alergeny obsažené v panelu. Výsledné hodnoty panelu nemohou být porovnávány s kvantitativními výsledky založenými na testování jednotlivých alergenů, ani nemohou být považovány za celkový součet jednotlivých alergenových výsledků. Omezení Pouze na základě výsledku in vitro alergen specifického IgE testu by se neměla určovat konečná klinická diagnóza. Lékař by měl diagnózu určit až po vyhodnocení všech klinických a laboratorních nálezů. 2,4 Výsledky in vitro alergen specifického IgE testu by se neměly používat jako rozhodný ukazatel při výběru počáteční dávky pro imunoterapii. Nejdřív je třeba provést kožní zkoušku s navrhovaným počátečním ředěním extraktu alergenu, aby se projevila schopnost pacienta tolerovat tuto dávku. Při potravinové alergii můžou cirkulující protilátky proti IgE zůstat nezjistitelné pokud jsou namířeny proti alergenům, které se objevují nebo mění během zpracování a trávení potravy, a které se proto nenachází v původní potravině na kterou je pacient testován. 1,3 Shodné výsledky pro různé alergeny není možné spojovat s klinicky rovnocennými projevy, a to z důvodu rozdílů ve vazebné kapacitě IgE. 6 Uživatel by si měl být vědom možnosti klinické zkřížené reaktivity v rámci skupiny alergenů. 7,8 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 13

V případě alergií na léky a profesních alergií může dojít k negativním výsledkům u pacientů hypersenzitivních vůči lékům a profesním alergenům v následujících případech: Symptomy jsou zprostředkovány bez účasti IgE. Vzorek byl odebrán méně než 2 týdny po alergické reakci. Test by se měl zopakovat po 2 týdnech pro potvrzení výsledků. Vzorek byl odebrán dlouho po poslední alergické reakci. Bylo zjištěno, že koncentrace protilátek IgE s časem klesá. Při testování alergie na latex je třeba zvážit následující body : Existuje možnost klinické zkřížené reaktivity mezi latexem a některými potravinami včetně avokáda, banánu, kaštanu a kiwi. 12 Protože test na latex stanovuje alergen specifické IgE, typ IV, opožděná reakce nebo dráždění způsobené latexem nebude odhaleno. Výsledek třída 0 pro hmyzí jed znamená nepřítomnost nebo nezjistitelné množství cirkulujících IgE protilátek specifických vůči jedu. Tento výsledek nevylučuje existence stávající nebo budoucí klinické hypersenzitivity na hmyzí bodnutí. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: 27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno ; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ku/l. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) IMMULITE 2000 3gAllergy Specifické IgE stanovení je předmětem mnoha publikovaných studií. 14,15 Hlášený rozsah : 0,10 100 ku/l (referenční lidský sérový IgE 2. WHO IRP 75/502) Analytická citlivost : Limit blanku (nejvyšší hodnota očekávaná pro vzorek bez analytu stanovená v souladu s CLSI EP17-A 35 ) : 0,03 ku/l Limit detekce (nejnižší detekovatelná koncentrace; stanovená v souladu s CLSI EP17-A 35 ) : 0,10 ku/l Funkční citlivost : (koncentrace s 20% variačním koeficientem (CV) stanovená v souladu s CLSI EP5-A2 36 ) : 0,20 ku/l Přesnost : Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Precision.) Linearita : Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearity.) Specificita : Protilátky jsou silně specifické vůči lidskému IgE a nevykazují žádnou zkříženou reaktivitu vůči třídám lidského imunoglobulinu. Bilirubin : Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza : Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 500 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie : Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. 14 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

Srovnání metody : Stanovení bylo porovnáno s testem AlaSTAT Microplate Allergen-Specific IgE (test se standardním vyhodnocením) na 7520 vzorcích. IMMULITE 2000 6 1 3 31 42 303 5 11 76 33 35 4 3 178 168 26 10 3 1 292 604 49 2 2 2 16 229 886 98 1 108 172 94 4 0 3912 118 11 2 0 1 2 3 4 5 6 AlaSTAT Microplate Celková shoda : 97% Relativní citlivost : 96% Relativní specificita : 97% Celkem totožných : 81% Totožných třídy 1 : 99% Totožných třídy 2 : 100% Střední hodnoty výsledků tříd : 1,29 (AlaSTAT) 1,37 (IML 2000) Stejné údaje byly analyzovány pomocí lineární regrese s těmito výsledky : (IML 2000) = 0,989 (AlaSTAT) + 1,21 ku/l r = 0,87 Střední hodnoty : 8,53 ku/l (AlaSTAT) 9,64 ku/l (IMMULITE 2000) Klinické srovnání : Vzorky byly testovány po jednom u 24 specifických alergenů. Klinická diagnóza byla stanovena na základě historie dárce a/nebo na základě kožních testů. 17-34 Výsledky klinické studie*, n = 4214 Klinická diagnóza IMMULITE 2000 klinická normální pozitivní 595 101 negativní 537 2981 Shoda : 84,9% 95% interval spolehlivosti : 84 86% Specificita : 96,7% 95% interval spolehlivosti : 96 97% Senzitivita : 54,4% 95% interval spolehlivosti : 50 55% Použité alergeny : pelyněk (W43), lebeda lesklá (W75), javor červený (T27), bílý ořech (T41), ambroň západní (T211), jalovec viržinský (T219), americký šváb (I206), indiánský strom (T218), baccharis (W67), rmen smradlavý (W46), trnovník akát (T208), dub (T103), Hormodendrum hordei (M45), Stemphylium solani (M88), morušovník červený (T71), ptačí zob (T210), tisovec dvouřadý (T37), vejce (celé) (F245), ořech kešu (F202), škeble (F207), ústřice (F290), pistácie (F203), lastura (F338) a vlašský ořech (F256). *údaje jsou uloženy u Siemens Healthcare Diagnostics. Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 3gAllergy Ειδικές IgE Universal Kit Ενδεδειγμένη χρήση: Για εργαστηριακή διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση του ειδικού αλλεργιογόνου IgE στον ανθρώπινο ορό ως βοήθημα στην κλινική διάγνωση των αλλεργικών διαταραχών των IgE-μεσολαβητών. Αριθμός καταλόγου: L2KUN6 (600 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: SPE Χρώμα: Ανοικτό Γκρι Περίληψη και Επεξήγηση Οι ανοσοσφαιρίνες της IgE τάξης μεσολαβούν σε αρκετές αλλεργίες. Σε ευαίσθητα άτομα που υποφέρουν από αυτόν τον άμεσο (ασυμπτωματικό ή αναφυλακτικό) τύπο αλλεργίας, τα IgE μόρια δρουν ως σημεία επαφής μεταξύ του αλλεργιογόνου και των εξειδικευμένων μορίων που απελευθερώνουν ισταμίνη και άλλους παράγοντες κατά την έκθεση τους στο αλλεργιογόνο. Τότε ξεκινούν τα γεγονότα που ταυτοποιούνται ως αλλεργικές αντιδράσεις. 5,9 Οι in vitro IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 15

ειδικών αλλεργιογόνων IgE αναλύσεις, όταν εκτιμώνται μαζί με άλλα κλινικά και εργαστηριακά ευρήματα, μπορούν να βοηθήσουν τον θεραπευτή στην ταυτοποίηση του αλλεργιογόνου(ή των αλλεργιογόνων) στο οποίο ένα άτομο παρουσιάζει ευαισθησία. Αρχή της ιαδικασίας Η IMMULITE 2000 3gAllergy Ειδικές IgE είναι μία ξηρής φάσης, δύο βημάτων ανοσοανάλυση που εκμεταλλεύεται την κινητική της υγρής φάσης σε μορφή σφαιριδίων. 10,11 Παρουσιάζει σημαντική πρόοδο σε σχέση με τις συμβατικές μεθόδους που βασίζονται σε αλλεργιογόνα προσκολλημένα σε βάση ξηρής φάσης όπως π.χ. ο χάρτινος δίσκος. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με αντί-ligand. Η υγρή φάση αποτελείται από αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε μονοκλωνικό αντί-ανθρώπινο IgE αντίσωμα ποντικού σε ένα υπόστρωμα ρυθμιστικού διαλύματος ανθρώπινου/μη ανθρώπινου ορού. Τα μεμονωμένα σημασμένα με ligand αλλεργιογόνα και ομάδες δεν παρέχονται με τη συσκευασία αλλά απαιτούνται για την εκτέλεση της εξέτασης. Στον πρώτο κύκλο, το δείγμα ασθενούς και το σημασμένο με ligand ειδικό αλλεργιογόνο επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, η ειδική IgE του δείγματος προσδένεται στο σημασμένο με ligand αλλεργιογόνο, το οποίο με τη σειρά του προσδένεται στο αντι-ligand πάνω στο σφαιρίδιο. Το μη προσδεδεμένο δείγμα στη συνέχεια απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Στο δεύτερο κύκλο, το συνδεδεμένο ένζυμο σε μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι της ανθρώπινης IgE προστίθεται στο αρχικό σωληνάριο αντίδρασης για επιπλέον επώαση 30 λεπτών. Το συνδεδεμένο ένζυμο σε μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι της ανθρώπινης IgE προσδένεται στην ακινητοποιημένη IgE. Το μη προσδεδεμένο ένζυμο απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο σωληνάριο αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 2 30 λεπτά Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά Συλλογή δείγματος Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Τα σωληνάρια συλλογής αίματος από διαφορετικούς κατασκευαστές μπορεί να παράγουν διαφορετικές τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα πρόσθετα, συμπεριλαμβανομένων των τζελ ή των φυσικών φραγμών, των ενεργοποιητών πήξης. Ο IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE δεν έχει δοκιμαστεί με όλες τις δυνατές παραλλαγές σωληναρίων. Απαιτούμενος Όγκος: 50 µl ορού Φύλαξη: 7 ημέρες στους 2 8 C* ή 6 μήνες στους 20 C. 13 * Από δεδομένα σε αρχείο της Siemens Healthcare Diagnostics. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για διαγνωστική εργαστηριακή χρήση Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Προσοχή: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. 16 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

Τα δεδομένα ασφαλείας (MSDS/SDS) βρίσκονται στον διαδικτυακό χώρο www.siemens.com/diagnostics. Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά. Αζίδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl, σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. εν πρέπει να μολυνθεί. Προσφύγετε στο εσώκλειστο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρήση απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Υλικά που διατίθενται Τα υλικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων 3gAllergy Ειδικές IgE (L2UN12) Με γραμμογράφηση. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με anti-ligand. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KUN6: 3 συσκευασίες οχείο αντιδραστηρίου 3gAllergy Ειδικές IgE (L2UNA6) Με γραμμογράφηση. 30 ml αλκαλική φωσφατάση (έντερο μόσχου) συνδεδεμένη με μονοκλωνικά μη ανθρώπινα αντισώματα IgE σε ανθρώπινο/μη ανθρώπινο ορό μήτρας ρυθμιστικού, κατανεμημένο ισόποσα στα δοχεία B και C. Σταθερό στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KUN6: 1 δοχείο Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές 3gAllergy Ειδικές IgE (L2UNJ3, L2UNJ4) ύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό), 2,0 ml το καθένα ανθρώπινης IgE σε μήτρα μη ανθρώπινου ορού, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KUN6: 2 σετ Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από το κατάλληλο σύστημα. Ρυθμιστής αντισώματος 3gAllergy Ειδικές IgE (L2UNS1) ύο σωληνάρια, 2,75 ml το καθένα, έτοιμου για χρήση ligand-σημασμένου πολυκλωνικού αντί-ανθρώπινου IgE αντισώματος κατσικιού, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξης. Αυτό το αντιδραστήριο τοποθετείται στην κασετίνα αλλεργιογόνων όταν «τρέχουν» οι Ρυθμιστές της Specific IgE. L2KUN6: 2 σετ Έλεγκτες του universal kit της 3gAllergy Ειδικές IgE (SPE) (L2UNC1, L2UNC2) ύο φιαλίδια, 2 ml το καθένα ανθρώπινης IgE σε μη ανθρώπινη μήτρα ορού, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα, ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KUN6: 2 σετ Για τα επίπεδα συγκέντρωσης συμβουλευτείτε το ένθετο του ελέγχου. Πριν τη χρήση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από το κατάλληλο σύστημα. IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 17

Ελεγκτής αντισώματος 3gAllergy Ειδικές IgE (L2UNS2) ύο σωληνάρια, 2,75 ml το καθένα με υγρό, έτοιμου για χρήση ligandσημασμένου πολυκλωνικού αντίανθρώπινου IgE αντισώματος από κατσίκι, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. Αυτό το αντιδραστήριο τοποθετείται στην κασετίνα αλλεργιογόνων όταν «τρέχουν» οι Έλεγχοι της IMMULITE 2000 IgE. L2KUN6: 2 σετ Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά Αραιωτικό δείγματος 3gAllergy Ειδικές IgE (L2UNZ) Για την αραίωση των δειγμάτων. Ένα φιαλίδιο συμπυκνωμένου (έτοιμου για χρήση) ανθρώπινου ορού μήτρας αλβουμίνης, με συντηρητικό. Φύλαξη: 30 μέρες (μετά το άνοιγμα) στους 2 8 C ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. Η απόρριψη να γίνεται σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. L2UNZ: 25 ml Ετικέτες με barcode χορηγούνται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν την χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα 16 100 mm στο δοκιμαστικό σωλήνα, έτσι ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από το κατάλληλο σύστημα. L2UNZ: 3 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2AW1-3: Κασετίνα αλλεργιογόνων (με barcode) L2AW1, 400930-02: με σειριακή κωδικοποίηση 1 33 L2AW2, 400930-03: με σειριακή κωδικοποίηση 34 66 L2AW3, 400930-04: με σειριακή κωδικοποίηση 67 99 L2ATC: Καπάκια για σωληνάρια αλλεργιογόνων L2ATS2: ιαφράγματα για σωληνάρια αλλεργιογόνων Επίσης διατίθενται MC6LCM, DC1LCM, DC2LCM, L2SNCCM: Έλεγχοι allergen-specific IgE βασισμένοι σε ανθρώπινο ορό Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. Ειδικά αλλεργιογόνα και μείγματα αλλεργιογόνων 3gAllergy Τα ειδικά αλλεργιογόνα είναι συσκευασμένα και πωλούνται σε μονάδες των 40 και 20 εξετάσεων που περιέχουν 2,75 ml και 1,75 ml, αντίστοιχα. Οι ομάδες μειγμάτων αλλεργιογόνων είναι συσκευασμένες και πωλούνται μόνο σε μονάδες των 40 εξετάσεων που περιέχουν 2,75 ml η καθεμία. Κάθε σωληνάριο αλλεργιογόνου περιέχει ειδικά αλλεργιογόνα ή μείγμα αλλεργιογόνων σε υπόστρωμα ρυθμιστικού διαλύματος πρωτεϊνικής βάσης, με συντηρητικό. Μην τα καταψύχετε. Φυλάσσετε στο ψυγείο: σταθερό στους 2 8 C, έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα ή 90 ημέρες στο όργανο. Μην τα χρησιμοποιήσετε εάν παρατηρηθούν σημάδια μικροβιακής μόλυνσης, όπως η θολερότητα. Μεμονωμένα αλλεργιογόνα και σειρές ανάμεικτων αλλεργιογόνων προορίζονται για χρήση με τους αναλυτές των συστημάτων IMMULITE 2000. Για τον πλήρη κατάλογο και τους αριθμούς καταλόγου, ανατρέξτε στο Μενού 3gAllergy. ιαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000. Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Τοποθέτηση αλλεργιογόνων 1 ιαλέξτε μία ελεύθερη θέση στον δίσκο αντιδραστηρίων χρησιμοποιώντας το λογισμικό. 2 Αντικαταστήστε τα καπάκια στα σωληνάρια των αλλεργιογόνων με διαφράγματα. Μετά την τοποθέτηση του διαφράγματος μην αναποδογυρίζετε τα σωληνάρια των αλλεργιογόνων. 18 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

3 Τοποθετείστε τα σωληνάρια των αλλεργιογόνων που περιέχουν IMMULITE 2000 ειδικά αλλεργιογόνα, ομάδες ειδικών αλλεργιογόνων, Specific IgE ρυθμιστές αντισώματος, και/ή Specific IgE ελεγκτές αντισώματος στην κασετίνα αλλεργιογόνων έτσι ώστε τα barcodes να είναι ορατά από την έξω πλευρά της κασετίνας. 4 Κλείστε την κασετίνα και διαβάστε (scan) τα barcodes των αλλεργιογόνων με τη χειροκίνητη ηλεκτρονική συσκευή ανάγνωσης κειμένου. 5 Όταν ολοκληρωθεί η ανάγνωση τοποθετείστε την κασετίνα αλλεργιογόνων στο δίσκο αντιδραστηρίων. 6 Επαναλάβετε αυτή την διαδικασία τοποθετώντας τις υπόλοιπες κασετίνες αλλεργιογόνων. Η κασετίνα αλλεργιογόνων πρέπει να ανιχνεύεται με ηλεκτρονικά μέσα (σκανάρεται) πριν την εγκατάσταση στο μηχάνημα ώστε να εξασφαλιστεί η σωστή λειτουργία του μηχανήματος. Η μετακίνηση ή η αντικατάσταση των φιαλίδιων μέσα στην κασετίνα αλλεργιογόνων απαιτεί επανανίχνευση (rescanning) του αντιδραστηρίου με την ηλεκτρονική μηχανή ανίχνευσης του barcode ώστε να γίνεται η προσθήκη νέων δεδομένων των αλλεργιογόνων. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες είγματα ποιοτικού ελέγχου: Για την καταγραφή της ρύθμισης, χρησιμοποιείστε τους ελεγκτές που συνοδεύουν το σετ. Επίσης είναι διαθέσιμα ειδικά αλλεργιογόνα, δες την παράγραφο Kit Components Supplied Separately. Οι ελεγκτές των ειδικών αλλεργιογόνων (DC1LCM, DC2LCM, MC6LCM and L2SNCCM) πρέπει να δοκιμάζονται ώστε να παρακολουθείται η εκτέλεση των αλλεργιογόνων. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Αποτελέσματα ειδικών αλλεργιογόνων: Ο αριθμός της κλάσης αποτελεί μια ένδειξη της ποσότητας της ενδογενούς IgE specific για τα επιλεγμένα αλλεργιογόνα. Τα ποσοτικά αποτελέσματα (ku/l) και η ερμηνεία των αποτελεσμάτων σε κλάσεις δύο συστημάτων βαθμολόγησης (πρότυπο και εκτεταμένο) παρουσιάζονται στους παρακάτω πίνακες. 16 Το πρότυπο σύστημα ταξινόμησης χρησιμοποιεί τα παρακάτω όρια κλάσης: Κλάση 0* ku/l Αντιδραστικότητα για αλλεργιογόνο(α) μεμονωμένο(α)/σειράς 0,10 Απουσία ή ND 0,10 0,34 Πολύ χαμηλή I 0,35 0,69 Χαμηλή II 0,70 3,49 Μέτρια III 3,50 17,49 Υψηλή IV 17,5 52,49 V 52,5 99,99 VI 100 Πολύ υψηλή * Η τάξη 0 στο πρότυπο δείχνει: μη ανιχνεύσιμη από αναλύσεις δεύτερης γενιάς. ND: μη ανιχνεύσιμο από το IMMULITE 2000 3gAllergy. Το εκτεταμένο σύστημα ταξινόμησης αξιοποιεί τα ακόλουθα όρια τάξης. Κλάση ku/l Αντιδραστικότητα για αλλεργιογόνο(α) μεμονωμένο(α)/σειράς 0 0,10 Απουσία ή ND 0/1 0,10 0,24 Πολύ χαμηλή I 0,25 0,39 Χαμηλή II 0,40 1,29 Μέτρια III 1,30 3,89 Υψηλή IV 3,90 14,99 V 15,00 24,99 VI 25 Πολύ υψηλή ND: μη ανιχνεύσιμο από το IMMULITE 2000 3gAllergy. Η επιλογή του συστήματος ταξινόμησης μπορεί να επιτευχθεί μέσω του λειτουργικού λογισμικού του IMMULITE 2000. Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 19

Αποτελέσματα μειγμάτων αλλεργιογόνων Ένα θετικό αποτέλεσμα (δείτε το κεφάλαιο Ερμηνεία Αποτελεσμάτων για καθιερωμένα και διευρυμένα συστήματα ερμηνείας) Μείγματος Αλλεργιογόνων υποδεικνύει την ύπαρξη αντισωμάτων σε αυξημένα επίπεδαστο δείγμα ορού του ασθενούς σε ένα ή περισσότερα από τα αλλεργιογόνα που περιέχονται στο Μίγμα Αλλεργιογόνων. Για να αναγνωριστεί το ειδικό αλλεργιογόνο IgE, το δείγμα θα πρέπει να επαναελεγθεί για μεμονωμένα αλλεργιογόνα που αντιστοιχούν στα συστατικά του Μίγματος. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα (< 0,10 ku/l) σημαίνει απουσία ή μη ανιχνεύσιμα επίπεδα IgE ειδικά για τα αλλεργιογόνα συστατικά της σειράς. Οι αριθμητικές τιμές του Μίγματος δεν μπορούν να συγκριθούν με τα ποσοτικά αποτελέσματα που προκύπτουν από τον έλεγχο μεμονωμένων αλλεργιογόνων, ούτε μπορούν να θεωρηθούν ως άθροισμα των αποτελεσμάτων των επιμέρους μεμονωμένων αλλεργιογόνων. Περιορισμοί Μια συγκεκριμένη κλινική διάγνωση δεν πρέπει να στηρίζεται αποκλειστικά στο in vitro αποτέλεσμα ειδικού αλλεργιογόνου IgE. Η διάγνωση πρέπει να γίνεται από τον θεραπευτή μόνο μετά από την εκτίμηση όλων των κλινικών και εργαστηριακών ευρημάτων. 2,4 Τα in vitro αποτελέσματα των ειδικών αλλεργιογόνων IgE δεν πρέπει να χρησιμοπούνται ως ένας καθοριστικός οδηγός για την επιλογή της αρχικής δόσης της ανοσοθεραπείας. Για να εξακριβωθεί η ικανότητα ανοχής του ασθενή στην δοσολογία,πρέπει να προηγηθεί δερματική δοκιμή με το προτεινόμενο αρχικό διάλυμα των εκχυλισμάτων του αλλεργιογόνου. Στις τροφικές αλλεργίες, τα IgE αντισώματα που κυκλοφορούν παραμένουν μη ανιχνεύσιμα εάν κατευθύνονται προς αλλεργιογόνα που εμφανίζονται ή μεταβάλλονται κατά την διάρκεια της επεξεργασίας ή της πέψης και που γι αυτόν τον λόγο δεν υπάρχουν στην αρχική τροφή για την οποία εξετάστηκε ο ασθενής. 1,3 Πανομοιότυπα αποτελέσματα για διαφορετικά αλλεργιογόνα δεν πρέπει να συσχετίζονται με κλινικά ισότιμες εκδηλώσεις, λόγω της διαφοράς στην ικανότητα σύνδεσης της IgE. 6 Ο χρήστης πρέπει να γνωρίζει την πιθανότητα κλινικής διασταυρούμενης αντίδρασης μέσα στην οικογένεια των αλλεργιογόνων. 7,8 Σε φαρμακευτικές ή καταληπτικές αλλεργίες, ένα αρνητικό αποτέλεσμα μπορεί να παρατηρηθεί σε ασθενείς που είναι υπερευαίσθητοι σε φαρμακευτικά ή καταληπτικά αλλεργιογόνα στις ακόλουθες περιπτώσεις: Τα συμπτώματα είναι έμμεσα χωρίς την εμπλοκή της IgE. Το δείγμα συλλέχθηκε σε λιγότερο από 2 εβδομάδες μετά την αλλεργική αντίδραση. Η εξέταση πρέπει να επαναληφθεί μετά από 2 εβδομάδες για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων. Το δείγμα συλλέχθηκε σε μεγάλο χρονικό διάστημα από την τελευταία αλλεργική αντίδραση. Έχει αποδειχθεί ότι η συγκέντρωση των αντισωμάτων IgE μειώνεται με το χρόνο. Οι παρακάτω ειδικοί λόγοι ισχύουν για την δοκιμή αλλεργίας στο latex: Η πιθανότητα κλινικής διασταυρούμενης αντίδρασης υπάρχει μεταξύ latex και συγκεκριμένων τροφών όπως το αβοκάντο, η μπανάνα, το κάστανο και το ακτινίδιο. 12 Επειδή η ανάλυση του latex μετράει το ειδικό αλλεργιογόνο IgE, η τύπου IV καθυστερημένη αντίδραση ή ερεθισμός από το latex δεν θα ανιχνευθεί. Τα αποτελέσματα της κλάσης 0 για το δηλητήριο των εντόμων δείχνει απουσία ή πολύ χαμηλά επίπεδα των κυκλοφορούντων ειδικών για δηλητήρια αντισωμάτων IgE. Τα αποτελέσματα αυτά δεν αποκλείουν την ύπαρξη τωρινής ή μελλοντικής κλινικής υπερευαισθησίας στο δήγμα εντόμων. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε εργαστηριακές μεθόδους 20 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] είγματα ασθενών που, σαν ρουτίνα, εκτίθενται σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε, να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για δεδομένα αντιπροσωπευτικά της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ku/l. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Η ανάλυση IMMULITE 2000 3gAllergy Ειδικές IgE έχει αποτελέσει αντικείμενο αρκετών δημοσιευμένων μελετών. 14,15 Αναφερόμενο εύρος: 0,10 100 ku/l (ανθρώπινος ορός IgE 2. WHO IRP 75/502) Αναλυτική ευαισθησία: Όριο του τυφλού (η υψηλότερη αναμενόμενη τιμή για δείγμα χωρίς αναλύτη που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17-A 35 ): 0,03 ku/l Όριο της ανίχνευσης (χαμηλότερη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17-A 35 ): 0,10 ku/l Λειτουργική Ευαισθησία: (συγκέντρωση με 20% συντελεστή διασποράς (CV) που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP5-A2 36 ): 0,20 ku/l Ακρίβεια: Τα δείγματα υφίσταντο αναλύσεις εις διπλούν σε διάστημα 20 ημερών, δύο τρεξίματα την ημέρα, σε σύνολο 40 τρεξιμάτων και 80 επαναλήψεων. (βλ. Πίνακα "Precision".) Γραμμικότητα: Τα δείγματα δοκιμάστηκαν με διάφορες διαλύσεις. (βλ. Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Τα αντισώματα έχουν υψηλή ειδικότητα για την ανθρώπινη IgE και δεν παρουσιάζουν διασταυρούμενη αντίδραση με άλλες τάξεις ανθρώπινης ανοσοσφαιρίνης. Χολερυθρίνη: Παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 500 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3000 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Σύγκριση της Μεθόδου: Η ανάλυση συγκρίθηκε με την ανάλυση AlaSTAT Microplate Allergen-Specific IgE, μία πρότυπη ανάλυση βαθμολόγησης, σε 7520 δείγματα. IMMULITE 2000 6 1 3 31 42 303 5 11 76 33 35 4 3 178 168 26 10 3 1 292 604 49 2 2 2 16 229 886 98 1 108 172 94 4 0 3912 118 11 2 0 1 2 3 4 5 6 AlaSTAT Microplate Συνολική Συμφωνία: 97% Σχετική Ευαισθησία: 96% Σχετική ειδικότητα: 97% Συνολικά ταυτόσημα: 81% Κλάσης 1 ταυτόσημα: 99% Κλάσης 2 ταυτόσημα: 100% Μέσοι όροι των σκορ των κλάσεων: 1,29 (AlaSTAT) 1,37 (IML 2000) Τα ίδια δεδομένα αναλύθηκαν με μια ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης και έδωσαν τα παρακάτω αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,989 (AlaSTAT) + 1,21 ku/l r = 0,87 Μέσοι όροι: 8,53 ku/l (AlaSTAT) 9,64 ku/l (IMMULITE 2000) IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 21

Κλινική απόδοση: Αναλύθηκαν δείγματα εις απλούν για 24 ειδικά αλλεργιογόνα. Η κλινική διάγνωση βασίστηκε στο ιστορικό των ασθενών (δότες) και/ή σε δεδομένα δερματικού ελέγχου. 17-34 Αποτελέσματα της κλινικής μελέτης*, n = 4214 Κλινική ιάγνωση IMMULITE 2000 Κλινικό Φυσιολογικό Θετικό 595 101 Αρνητικό 537 2981 Συμφωνία: 84,9% 95% ιάστημα εμπιστοσύνης: 84 86% Ειδικότητα: 96,7% 95% ιάστημα εμπιστοσύνης: 96 97% Ευαισθησία: 54,4% 95% ιάστημα εμπιστοσύνης: 50 55% Αλλεργιογόνα που περιλαμβάνονται: Φασκόμηλο το κοινό (Common Sagebrush, W43), Είδος αιωνόβιου θάμνου (Wingscale, W75), Κόκκινος σφένδαμος (Red Maple, T27), Λευκή καρυά (White Hickory, T41), Γλυκό κόμμι (Sweet Gum, T211), Κόκκινος κέδρος (Red Cedar, T219), Αμερικάνικη κατσαρίδα (American Cockroach, I206), αφνοκούκι (Bayberry/Sweet Gale, T218), Βάκχαρις (Baccharis, W67), Μάραθο (Dog Fennel, W46), Χαρουπιά (Locust Tree, T208), ρυς (Live Oak, T103), Hormodendrum hordei (M45), Stemphylium solani (M88), Κόκκινη μουριά (Red Mulberry, T71), Λίγουστρο (Privet, T210), Λιμναίο κυπαρίσσι (White Bald Cypress, T37), Αυγό (Egg, F245), Κάσιους (Cashew, F202), Μαλάκιο (Clam, F207), Στρείδι (Oyster, F290), Φιστίκι Αιγίνης (Pistachio, F203), Πίνα (Scallop, F338) και Καρύδι (Walnut, F256). *Από δεδομένα σε αρχείο της Siemens Healthcare Diagnostics. Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. www.siemens.com/diagnostics Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów Immulite 2000 do ilościowego oznaczenia poziomu alergenowospecyficznej IgE w surowicy ludzkiej, przydatny w diagnostyce klinicznej IgEzależnych chorób alergicznych. Numer katalogowy: L2KUN6 (600 testów) Kod testu: SPE Kolor: Jasno szary Wprowadzenie Przeciwciała klasy IgE uczestniczą w mechanizmach wielu reakcji alergicznych. U uczulonych osób cierpiących na nadwrażliwość natychmiastową (atopową lub anafilaktyczną), cząsteczka IgE pośredniczy w kontakcie antygenualergenu z wyspecjalizowanymi komórkami (komórki tuczne), które po związaniu alergenu wydzielają histaminę lub inne mediatory. W konsekwencji zostaje uruchomiony ciąg następstw rozpoznawanych jako reakcje alergiczne. 5,9 Oznaczenie in vitro poziomu alergenowo-specyficznej IgE w zestawieniu z wynikami innych badań laboratoryjnych i obserwacjami klinicznymi jest pomocne w określeniu alergenu wywołującego uczulenie. Zasada testu IMMULITE 2000 3gAllergy IgE Specyficzne jest dwuetapowym, chemiluminescencyjnym immunotestem fazy stałej w postaci kulki wykorzystującym kinetykę wiązania alergenu charakterystyczną dla fazy ciekłej. 10,11 Rozwiązanie takie posiada istotną przewagę nad klasycznymi rozwiązaniami, w których alergeny związane są z unieruchomione są na fazie stałej w postaci papierowego krążka. Faza stała (kulka) opłaszczona jest anty-ligandem. Faza ciekła składa się fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) sprzężonej z mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-ige ludzka w buforowanej matrycy mieszanej surowicy ludzkiej i zwierzęcej. Pozostające w 22 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

postaci ciekłej alergeny sprzężone z ligandem, pojedyncze lub w panelach, nie wchodzą w skład zestawu, lecz są niezbędne dla przeprowadzenia oznaczenia. W pierwszym etapie próbka badana i sprzężony z ligandem konkretny alergen inkubowane są przez 30 minut z opłaszczoną kulką. W trakcie inkubacji, specyficzna IgE z próbki wiąże alergen sprzężony z ligandem, który z kolei wiąże się z anty-ligandem związanym z kulką. Niezwiązana próbka usuwana jest następnie przez wirowanie połączone z płukaniem. W drugim etapie, do oryginalnej probówki reakcyjnej dodawany jest koniugat enzymu i mysiego przeciwciała monoklonalnego anty-ige ludzka. W trakcie 30 minutowej inkubacji sprzężone z enzymem przeciwciało monoklonalne anty-ige ludzka wiąże unieruchomioną na kulce IgE. Niezwiązany koniugat enzymu usuwany jest następnie przez wirowanie połączone z płukaniem. Ostatecznie do probówki reakcyjnej z kulką dodawany jest substrat chemiluminescencyjny, a generowany sygnał jest proporcjonalny do ilości związanego enzymu. Czas inkubacji: 2 30 minut Czas do pierwszego wyniku: 65 minut Preparatyka próbek Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Próbówki do pobierania próbek pochodzące od różnych producentów mogą dawać różne wyniki spowodowane użytymi materiałami i dodatkami, takimi jak żele i bariery fizyczne, substancje przyspieszające wykrzepianie. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE nie został określony. Wymagana objętość próbki: 50 µl surowicy Przechowywanie materiału: 7 dni w 2 8 C* lub 6 miesięcy w 20 C. 13 * Wyniki w posiadaniu Siemens Healthcare Diagnostics. Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Przestroga: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. Karty charakterystyk substancji i preparatów chemicznych (SDS/MSDS) są dostępne na www.siemens.com/diagnostics. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl jest dodawany jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 23

Elementy zestawu Elementy zestawu stanowią komplet. Zestaw działa w oparciu o kod kreskowy. 3gAllergy IgE Specyficzne Pojemnik z kulkami (L2UN12) Z kodem kreskowym. 200 Kulek opłaszczonych anty ligandem. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KUN6: 3 pojemniki 3gAllergy IgE Specyficzne Klin odczynnikowy (L2UNA6) Z kodem kreskowym. 30 ml fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-ige ludzka w buforowanej matrycy surowicy ludzkiej i zwierzęcej, podzielonej równo między komorę B i C. Stabilny w temp. 2 8 C do daty ważności. L2KUN6: 1 klin Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. 3gAllergy Specific IgE Specyficzne kalibratory (L2UNJ3, L2UNJ4) Dwie fiolki (Niski i Wysoki), każdy po 2,0 ml ludzkiej IgE w matrycy surowicy zwierzęcej z konserwantem. Po otwarciu stabilne przez 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2KUN6: 2 zestawy Przed wykonaniem kalibracji umocować na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. 3gAllergy IgE Specyficzne Przeciwciało kalibratora (L2UNS1) Dwie probówki zawierające po 2,75 ml płynnego, gotowego do użycia, sprzęgniętego z ligandem poliklonalnego koziego przeciwciała anty-ige, z konserwantem. Stabilny w temp. 2 8 C do daty ważności. Odczynnik musi znajdować się w Statywie dla alergenów podczas oznaczania Kalibratorów IgE Specyficznej. L2KUN6: 2 zestawy 3gAllergy IgE Specyficzne (SPE) Zestaw uniwersalnych kontroli (L2UNC1, L2UNC2) Dwie fiolki, każda po 2 ml ludzkiej IgE w matrycy surowicy zwierzęcej, z konserwantem. Po otwarciu stabilne przez 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2KUN6: 2 zestawy Stężenia podane w ulotce dołączonej do kontroli. Przed wykonaniem umieść odpowiednie nalepki (dostarczone z zestawem) na probówkach by umożliwić rozpoznanie przez czytnik kodów kreskowych aparatu. 3gAllergy IgE Specyficzna Przeciwciało kontrolne (L2UNS2) Dwie probówki zawierające po 2,75 ml płynnego, gotowego do użycia, sprzęgniętego z ligandem poliklonalnego koziego przeciwciała anty-ige, z konserwantem. Stabilny w temp. 2 8 C do daty ważności. Odczynnik musi znajdować się w Statywie dla alergenów podczas oznaczania IMMULITE 2000 Kontroli IgE Specyficznej. L2KUN6: 2 zestawy Materiały dostarczane oddzielnie 3gAllergy IgE Specyficzna Rozcieńczalnik próbek (L2UNZ) Do automatycznego rozcieńczania badanych próbek. Fiolka zawierająca koncentrowaną (gotową do użytku) matrycę albuminy ludzkiej, z konserwantem. Po otwarciu stabilny przez 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). Usuwać zgodnie z odpowiednimi przepisami. L2UNZ: 25 ml Wraz z rozcieńczalnikiem dostarczane są nalepki z kodami kreskowymi. Nalepkę umieścić na probówce (16 100 mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2UNZ: 3 nalepki L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Zestaw czyszczący LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2AW1-3: Kliny statywów dla alergenów (z kodami kreskowymi) 24 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

L2AW1, 400930-02: oznakowane kolejno 1 33 L2AW2, 400930-03: oznakowane kolejno 34 66 L2AW3, 400930-04: oznakowane kolejno 67 99 L2ATC: Kapturki na probówki dla alergenów alergenami L2ATS2: Perforowane kapturki na probówki dla alergenów Również dostępne: MC6LCM, DC1LCM, DC2LCM, L2SNCCM: Kontrole dla alergenowospecyficznej IgE w matrycy ludzkiej surowicy. Ponadto niezbędne: woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole. 3gAllergy Specific Specyficzne Alergeny I Mieszane Panele Alergenów Alergeny pojedyncze są konfekcjonowane i sprzedawane w fiolkach przewidzianych dla 40 i 20 oznaczeń, o zawartości, odpowiednio: 2,75 ml i 1.75 ml. Mieszaniny paneli alergenów są konfekcjonowane i sprzedawane wyłącznie w fiolkach przewidzianych dla 40 oznaczeń o zawartości 2,75 ml, we wszystkich przypadkach. Fiolka zawiera pojedynczy alergen lub mieszaninę alergenów w matrycy buforowanego roztworu białka, z konserwantem. Nie zamrażać. Przechowywać w lodówce: Stabilne w temperaturze 2 8 C do daty ważności podanej na etykiecie lub 90 dni w analizatorze. Nie używać w przypadku pojawienia się oznak kontaminacji mikrobiologicznej w postaci różnych form zmętnienia. Poszczególne alergeny i panele zmieszanych alergenów przeznaczone są do użycia z analizatorami IMMULITE 2000. Pełną listę numerów katalogowych można znaleźć w menu 3gAllergy. Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000. Ładowanie alergenów 1 Za pomocą programu ustawić karuzelę odczynnikową w pozycji otwartej. 2 Korki zamykające probówki z alergenami zastąpić perforowanymi kapturkami. Probówki zamknięte kapturkami przechowywać w pozycji pionowej. 3 W Statywie dla alergenów umieścić Probówki ze specyficznymi alergenami IMMULITE 2000, panelami alergenów, Przeciwciało specyficzne dla kalibratora IgE i/lub IgE Specyficzne Przeciwciało kontrolne, oznakowane kodami kreskowymi zorientowanymi ku otwartej części statywu. 4 Zamknąć statyw i skanować kody kreskowe alergenów ręcznym skanerem. 5 Po zakończeniu skanowania umieścić Statyw dla alergenów na karuzeli odczynnikowej. 6 Procedurę powtarzać z kolejnymi statywami dla alergenów. Prawidłowy przebieg oznaczenia wymaga zeskanowania kodu kreskowego Statywu dla alergenów przed umieszczeniem go w aparacie. Wymiana lub wyjęcie ze statywu fiolek z alergenem pociąga za sobą konieczność powtórnego skanowania kodów statywu dla uaktualnienia danych o załadowanych alergenach. Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie Próbki Kontroli Jakości: Do kontroli kalibracji przeznaczone są kontrole dostarczone w zestawie. Dostępne są również kontrole specyficzne dla alergenów, zobacz Rozdział materiały dostarczane oddzielnie. Specyficzne kontrole alergenów (DC1LCM, DC2LCM, MC6LCM i L2SNCCM) są oznaczane w monitorowaniu jakości oznaczeń. IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 25

Interpretacja wyników Wyniki dla poszczególnych alergenów: Numer klasy jest wskaźnikiem poziomu endogennej IgE specyficznej dla wybranego alergenu. Wartości ilościowe (ku/l) i interpretacja wyników w klasie dla dwóch typów skali (standardowego i rozszerzonego) zawarto w tabelach poniżej. 16 Standardowy system klasyfikacji oparty jest na następujących punktach odcięcia. Klasa 0* ku/l Reaktywność alergenów pojedynczych/ w panelu 0,10 Brak lub ND 0,10 0,34 Bardzo niska I 0,35 0,69 Niska II 0,70 3,49 Umiarkowana III 3,50 17,49 Wysoka IV 17,5 52,49 V 52,5 99,99 VI 100 Bardzo wysoka * Klasa 0 w systemie standardowym oznacza: nie oznaczalne w testach drugiej generacji. ND:nie oznaczlne w IMMULITE 2000 3gAllergy. Rozszerzony system klasyfikacji oparty jest na następujących punktach odcięcia. Klasa ku/l Reaktywność alergenów pojedynczych/ w panelu 0 0,10 Brak lub ND 0/1 0,10 0,24 Bardzo niska I 0,25 0,39 Niska II 0,40 1,29 Umiarkowana III 1,30 3,89 Wysoka IV 3,90 14,99 V 15,00 24,99 VI 25 Bardzo wysoka ND:nie oznaczlne w IMMULITE 2000 3gAllergy. Wybór systemu klasyfikacji może być dokonywany przez użytkownika za pomoca programu operacyjnego IMMULITE 2000. Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Wyniki dla Panelu mieszanych alergenów Wynik dodatni (porównaj Interpretacja wyników w standardowym i rozszerzonym systemie klasyfikacji) dla Mieszanego panelu alergenów wskazuje, że w badanej próbce surowicy znajduje się podniesione stężenie przeciwciał specyficznych dla pojedynczego alergenu lub podniesione stężenia przeciwciał specyficznych dla kilku alergenów wchodzących w skład panelu. Dla uściślenia wyniku, swoistość IgE w próbce musi być określona w oddzielnych testach w stosunku do każdego z alergenów wchodzącego w skład panelu. Wynik ujemny (< 0,10 ku/l) wskazuje na nieobecność IgE swoistej dla alergenów składających się na panel lub stężenie poniżej wykrywalnego poziomu. Wyniki uzyskane dla panelu alergenów nie mogą być porównywane z ilościowymi wynikami uzyskanymi dla pojedynczych alergenowych składników Panelu, a także nie mogą być traktowane addytywnie jako suma oznaczeń IgE dla pojedynczych składników panelu. Ograniczenia Ostateczna diagnoza nie powinna opierać się wyłącznie na wynikach oznaczeń alergenowi-specyficznej IgE in vitro. Diagnoza powinna być postawiona przez lekarza wyłącznie po uwzględnieniu całości obserwacji klinicznych i wyników badań laboratoryjnych. 2,4 Wyniki oznaczeń alergenowospecyficznych IgE in vitro nie powinny być ostatecznym kryterium przy doborze schematu odczulania. Tolerancja sugerowanej początkowej dawki odczulającej powinna być przetestowana w teście skórnym. W alergiach pokarmowych IgE specyficzne mogą być niewykrywalne w krążeniu, gdy ich swoistość ograniczona jest do epitopów ulegających modyfikacji lub powstających de novo w trakcie obróbki pokarmu lub w procesie trawienia, tym samym nieobecnych w formie pokarmu zastosowanej w teście jako alergen. 1,3 26 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

W związku z różnicami w pojemności wiązania przeciwciał IgE, identyczne liczbowo stężenia poziomu IgE swoistych w stosunku do różnych alergenów mogą odpowiadać objawom klinicznym o różnym nasileniu. 6 Należy uświadamiać sobie kliniczne konsekwencje reaktywności krzyżowej możliwej wśród antygenów w obrębie tej samej rodziny alergenów. 7,8 W przypadku alergii związanej z lekami i alergenami przemysłowymi (zawodowymi) można obserwować wyniki ujemne u badanych z nadwrażliwością na leki lub alergeny zawodowe gdy: Mechanizmy prowadzące do wystąpienia objawów nie są IgE zależne. Próbka została pobrana w okresie krótszym niż 2 tygodnie od wystąpienia reakcji alergicznej. W takim przypadku, dla potwierdzenia wyniku test powinien być powtórzony po 2 tygodniach. Próbka została pobrana po długim okresie czasu od wystąpienia ostatniego epizodu reakcji alergicznej. Wykazano, że poziom IgE ulega obniżeniu w miarę upływu czasu. W przypadku diagnostyki uczulenia na lateks należy pamiętać, że Istnieje możliwość wystąpienia klinicznych konsekwencji krzyżowej reaktywności pomiędzy lateksem i takimi owocami jak awokado, banan, kasztan jadalny i kiwi. 12 Wynik oznaczenia specyficznej IgE pozostanie ujemny w przypadku reakcji nadwrażliwości typu późnego (IV typ) i podrażnienia lateksem. Plasujący się w klasie 0 wynik oznaczenia IgE specyficznych dla jadu owadów świadczy o niewykrywalnym stężeniu krążących przeciwciał (lub ich braku), nie wyklucza jednak istniejącej lub przyszłej, klinicznie istotnej, nadwrażliwości na użądlenie. Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin. Chem. 1988:34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i wykresach. Wyniki podano w ku/l. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą surowicy, a próbki pobierano do probówek bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) IMMULITE 2000 3gAllergy IgE Specyficzne stał się przedmiotem szeregu publikacji. 14,15 Zakres raportowanych wyników: 0,10 100 ku/l (2. WHO IRP 75/502, IgE z ludzkiej surowicy) Czułość analityczna: Zakres Ślepej próby (najwyższa oczekiwana wartość dla próbki bez analitu; określona zgodnie z CLSI EP17-A 35 ): 0,03 ku/l Granica wykrywalności: (najniższe oznaczalne stężenie; określona zgodnie z CLSI EP17-A 35 ): 0,10 ku/l Czułość funkcjonalna: (stężenie z 20% współczynnikiem zmienności (CV) określona zgodnie z CLSI EP5-A2 36 ): 0,20 ku/l Precyzja: Próbki testowano przez okres 20 dni w duplikatach, dwa razy dziennie, co dało w sumie 40 serii i 80 powtórzeń (patrz: Tabela Precyzja). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom (patrz: Tabela Liniowość). IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 27

Specyficzność: Przeciwciała są wysoko specyficzne w stosunku do ludzkiej IgE i nie wykazują reaktywności krzyżowej z przeciwciałami innych klas. Bilirubina: Obecność bilirubiny związanej i wolnej w stężeniu do 200 mg/l nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 500 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do 3000 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Porównanie metod: Wynik testu porównywano z wynikami uzyskanymi przy użyciu mikropłytkowego testu AlaSTAT standardowy system kwalifikacji wyników. Porównanie obejmowało 7520 próbek. IMMULITE 2000 6 1 3 31 42 303 5 11 76 33 35 4 3 178 168 26 10 3 1 292 604 49 2 2 2 16 229 886 98 1 108 172 94 4 0 3912 118 11 2 0 1 2 3 4 5 6 AlaSTAT Microplate Całkowita zgodność: 97% Względna czułość: 96% Względna specyficzność: 97% całkowita identyczność: 81% Identyczność w obrębie 1 klasy: 99% Identyczność w obrębie 2 klas: 100% Średnie dla klas: 1,29 (AlaSTAT) 1,37 (IML 2000) Wynik powyższe poddano również analizie regresji uzyskując równanie: (IML 2000) = 0,989 (AlaSTAT) + 1,21 ku/l r = 0,87 Średnie: 8,53 ku/l (AlaSTAT) 9,64 ku/l (IMMULITE 2000) Znaczenie kliniczne: Próbki w jednym powtórzeniu oznaczano w stosunku do 24 specyficznych alergenów. Rozpoznanie kliniczne opierano na historii choroby badanego albo wynikach testu skórnego lub łącznie na obu metodach. 17-34 Wyniki badań klinicznych*, n = 4214 IMMULITE 2000 Rozpoznanie kliniczne Zmiany kliniczne Brak zmian Dodatnie 595 101 Ujemne 537 2981 Zgodność: 84,9% Dla poziomu ufności 95%: 84 86% Specyficzność: 96,7% Dla poziomu ufności 95%: 96 97% czułość: 54,4% Dla poziomu ufności 95%: 50 55% Badane alergeny: Artemisia trójzębowa (W43), Wierzbówka (W75), Klon czerwony (Acer rubrum) (T27), Orzesznik pięciolistkowy (T41), Ambrowiec amerykański (balsamiczny) (T211), Cedr wirginijski (T219), Karaluch amerykański (I206), Woskownica (T218), Berberys (W67), Rumian psi (W46), Ceratonia siliqua (T208), Dąb wirginijski (T103), Hormodendrum hordei (M45), Stemphylium solani (M88), Morwa czerwona (T71), Ligustr (T210), Cypryśnik błotny (T37), Jajko (F245), Orzech Cashew (F202), Mięczak jadalny (F207), Ostryga (F290), Pistacje (F203), Przegrzebek (F338) i orzech włoski (F256). *Wyniki w posiadaniu Siemens Healthcare Diagnostics. Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. www.siemens.com/diagnostics System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE and 3gAllergy are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics. 2014 Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. 28 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)

Origin: UK 2014-01-21 Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KUN 7 {25} Changes in this Edition: cc#eu22167: (1) Added explanation of IMMULITE 2000 Systems on front page (2) removed US Patent and paragraph referring to polymer/co-polymer matrix from Principle of the Procedure (3) revised alternate tube type information (4) added Data on file at Siemens Healthcare Diagnostics to Storage (5) added MSDS information and caution statement for material of animal origin to Warnings and Precautions (6) corrected component codes under Kit Components Supplied Separately (7) added CM designation to allergen controls (8) added 90-day onboard stability claim to 3gAllergy Specific Allergens and Mixed Allergen Panels section (9) removed references to IMMULITE 2500 (10) changed standard and extended classification system table headings to Reactivity for Individual/Panel Allergen(s) (11) under Mixed Allergen Panel Results, changed wording for negative result from components to component allergens (12) added trademark symbols after IMMULITE 2000 3gAllergy (13) added 2 nd WHO IRP 75/502 human serum IgE to Reportable Range (14) italicized scientific names (15) changed placement of % signs under Clinical Performance and in Precision and Linearity tables (16) added in vitro to IVD symbol definition Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! υνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21) 29

Symbol Definition En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie BEAD PACK Symbol Definition En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Harmful Cz: Škodlivé El: Επιβλαβές Pl: Szkodliwy lub drażniący En: Corrosive Cz: Korozivní El: ιαβρωτικό Pl: Żrący En: Toxic Cz: Toxické El: Τοξικό Pl: Toksyczny En: Dangerous for the environment Cz: Nebezpečné pro životní prostředí El: Επικίνδυνο για το περιβάλλον Pl: Niebezpieczny dla środowiska En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami LOT En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: ιατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów 2008-01 En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) TEST UNIT REAG WEDGE REAG WEDGE A REAG WEDGE B REAG WEDGE D ADJUSTOR ADJUSTOR L ADJUSTOR H En: Test Unit Cz: Testovací Jednotky El: Μονάδες ανάλυσης Pl: Jednostki testowe En: Reagent Wedge Cz: Reagencie El: οχείο Αντιδραστηρίων Pl: Klin odczynnikowy En: Adjustor Cz: Kalibrátor El: Ρυθμιστής Pl: Kalibrator En: Adjustor, low Cz: Kalibrátor, nízký El: Ρυθμιστής, χαμηλό Pl: Kalibrator, niski En: Adjustor, high Cz: Kalibrátor, vysoký El: Ρυθμιστής, υψηλό Pl: Kalibrator, wysoki 30 IMMULITE 2000 3gAllergy Specific IgE Universal Kit (PIEL2KUN-7 {25}, 2014-01-21)