/11 1. ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ

Platelia Rubella IgM 1 Πλακέτα 96 72851 ΠΟΙΟΤΙΚΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ IgM ΕΝΑΝΤΙ ΤΟΥ ΙΟΥ ΤΗΣ ΕΡΥΘΡΑΣ ΣΤΟΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ Ή ΠΛΑΣΜΑ ΜΕ ΑΝΟΣΟΕΝΖΥΜΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ 881142 2013/11 1. ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Η εξέταση Platelia Rubella IgM είναι μια ανοσοενζυμική ανάλυση που χρησιμοποιεί τη μέθοδο ανοσοκαθήλωσης για την ποιοτική ανίχνευση αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς στον ανθρώπινο ορό ή πλάσμα. 2. ΚΛΙΝΙΚΗ ΑΞΙΑ Η ερυθρά, γνωστή και ως «γερμανική ιλαρά», είναι μια ιογενής νόσος που απαντάται παγκοσμίως. Η λοίμωξη ερυθράς είναι κατά κύριο λόγο μια ήπια νόσος σε παιδιά και ενήλικες. Στις κλινικές εκδηλώσεις περιλαμβάνονται χαμηλός πυρετός, πονοκέφαλος, πονόλαιμος και γενικευμένα εξανθήματα. Ωστόσο, η λοίμωξη ερυθράς κατά την κύηση είναι πιο σοβαρή, με ικανοποιητικά τεκμηριωμένες πολλαπλές συγγενείς επιπλοκές, όπως κώφωση, καταρράκτης, νοητική καθυστέρηση και εμβρυϊκός θάνατος. Με την ενεργητική ανοσοποίηση των παιδιών προσχολικής ηλικίας έχει μειωθεί σημαντικά η εμφάνιση επιδημιών ερυθράς, ωστόσο εξακολουθεί να υπάρχει ανάγκη για ακριβή παρακολούθηση της ανοσολογικής κατάστασης, ειδικά για τις γυναίκες σε ηλικία τεκνοποίησης. Η παρουσία του αντισώματος ερυθράς IgG στις γυναίκες πριν από τη σύλληψη διασφαλίζει την προστασία του εμβρύου έναντι ενδεχόμενης λοίμωξης με τον ιό της ερυθράς κατά τη διάρκεια της κύησης. Η αποτελεσματικότητα του εμβολιασμού μπορεί, επίσης, να καθοριστεί με την ανίχνευση του αντισώματος ερυθράς IgG σε ορό μετά την ανοσοποίηση. Από την απομόνωση του ιού της ερυθράς το 1962 έως σήμερα, η ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων ερυθράς είναι ιδιαίτερα σημαντική λόγω του κινδύνου τερατογένεσης που ενέχει ο ιός. Στο παρελθόν, αναπτύχθηκαν διάφορες μέθοδοι εξέτασης, συμπεριλαμβανομένης της ουδετεροποίησης του ορού, της σύνδεσης συμπληρώματος και του ανοσοφθορισμού. Οι αναλύσεις αυτές είτε εφαρμόζονται με δυσκολία σε τυπικές εργαστηριακές συνθήκες είτε παρέχουν ασταθή ή ανομοιόμορφα αποτελέσματα. Με τις τεχνικές αναστολής της αιμοσυγκόλλησης είναι δυνατή η ταχεία διάγνωση τόσο της κατάστασης οξείας λοίμωξης όσο και της ανοσολογικής κατάστασης του ασθενή. Το 1971, οι Engvall και Perlmann περιέγραψαν τις πρώτες διαδικασίες ανοσοενζυμικής ανάλυσης. Η ανάπτυξη της διαδικασίας ανοσοενζυμικής ανάλυσης συνέβαλε στη βελτίωση της ειδικότητας και της ευαισθησίας κατά την ανίχνευση μεγάλου φάσματος αντιγόνων και αντισωμάτων. Οι ερμηνείες διαδοχικών ορολογικών εξετάσεων, που καταδεικνύουν την παρουσία αντισωμάτων IgM και την εμφάνιση ή τη σημαντική αύξηση στον τίτλο των αντισωμάτων IgG (διπλασιασμός του τίτλου) σε δύο δείγματα ορού που έχουν ληφθεί σε διάστημα τουλάχιστον τριών εβδομάδων, θα πρέπει να θεωρούνται απόδειξη της έκθεσης στον ιό της ερυθράς, ακόμη και εάν δεν υπάρχουν κλινικά παθογνωμονικά συμπτώματα της λοίμωξης. 3. ΑΡΧΗ Η εξέταση Platelia Rubella IgM είναι μια ποιοτική εξέταση για ανίχνευση αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς στον ανθρώπινο ορό ή πλάσμα με ανοσοενζυμική ανάλυση και δέσμευση του IgM στη στερεά φάση. Τα αντι-ανθρώπινα αντισώματα μ-αλυσίδων είναι επικαλυμμένα στη στερεά φάση (μικροβυθίσματα της μικροπλάκας). Ως συζεύκτης χρησιμοποιείται ένα μίγμα αντιγόνου ερυθράς και μονόκλωνου αντισώματος ερυθράς, επισημασμένο με υπεροξειδάση. Η εξέταση περιλαμβάνει τα παρακάτω βήματα:

Βήμα 1 Τα δείγματα των ασθενών, οι βαθμονομητές και οι οροί ελέγχου αραιώνονται σε αναλογία 1/21 και, στη συνέχεια, κατανέμονται στα μικροβυθίσματα της μικροπλάκας. Κατά τη διάρκεια αυτού του σταδίου επώασης μίας ώρας στους 37 C, τα αντισώματα IgM που υπάρχουν στο δείγμα δεσμεύονται στα αντισώματα anti-µ με τα οποία έχουν επικαλυφθεί τα μικροβυθίσματα της μικροπλάκας. Μετά την επώαση, τα αντισώματα IgG και άλλες πρωτεΐνες ορού απομακρύνονται με πλύσεις. Βήμα 2 Ο συζεύκτης (μίγμα αντιγόνου ερυθράς και μονόκλωνου αντισώματος έναντι του ιού της ερυθράς, επισημασμένο με υπεροξειδάση) προστίθεται στα μικροβυθίσματα της μικροπλάκας. Κατά τη διάρκεια αυτού του σταδίου επώασης μίας ώρας στους 37 C, ο συζεύκτης δεσμεύεται στα ειδικά αντισώματα IgM έναντι του ιού της ερυθράς που καθηλώνονται τελικά στη μικροπλάκα. Ο αδέσμευτος συζεύκτης απομακρύνεται με πλύσεις στο τέλος της επώασης. Βήμα 3 Η παρουσία ανοσοσυμπλεγμάτων (αντι-ανθρώπινα αντισώματα μ-αλυσίδων / IgM έναντι του ιού της ερυθράς / αντιγόνο ερυθράς / μονόκλωνο αντίσωμα έναντι του ιού της ερυθράς επισημασμένο με υπεροξειδάση) καταδεικνύεται από την προσθήκη σε κάθε μικροβύθισμα ενός ενζυματικού διαλύματος ανάπτυξης. Βήμα 4 Μετά την επώαση σε θερμοκρασία δωματίου (+18-30 C), η ενζυμική αντίδραση διακόπτεται με την προσθήκη ενός διαλύματος θειικού οξέος 1N. Η ένδειξη οπτικής πυκνότητας που λαμβάνεται με φασματοφωτόμετρο ρυθμισμένο σε μήκος κύματος 450/620 nm είναι ανάλογη της ποσότητας αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς που υπάρχουν στο δείγμα. 4. ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΣΧΕΤΙΚΑ ΜΕ ΤΟ ΠΡΟΪΟΝ Τα αντιδραστήρια παρέχονται σε επαρκή ποσότητα για την εκτέλεση 96 εξετάσεων. Όλα τα αντιδραστήρια προορίζονται αποκλειστικά για διαγνωστική χρήση in vitro. Ετικέτα Φύση των αντιδραστηρίων Παρουσίαση R1 Μικροπλάκα Μικροπλάκα: (Έτοιμο για χρήση): 12 ταινίες με 8 αποσπώμενα μικροβυθίσματα, επικαλυμμένα με αντι-ανθρώπινα αντισώματα μ- αλυσίδων R2 R3 Συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης (20x) Αρνητικός ορός ελέγχου Συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης (20x): Ρυθμιστικό διάλυμα TRIS-NaCl (ph 7,4), 2% Tween 20 Συντηρητικό: 0,04% ProClin 300 Αρνητικός ορός ελέγχου: Ανθρώπινος ορός, αρνητικός για αντισώματα IgM έναντι του ιού της ερυθράς και αρνητικός για αντιγόνα HBs, anti-hiv1, anti- HIV2 και anti-hcv Συντηρητικό: 0,1% ProClin 300 R4 Βαθμονομητής Βαθμονομητής: Ανθρώπινος ορός, θετικός για αντισώματα IgM έναντι του ιού της ερυθράς και αρνητικός για αντιγόνα HBs, anti-hiv1, anti- HIV2 και anti-hcv Συντηρητικό: 0,1% ProClin 300 R5 Θετικός ορός ελέγχου Θετικός ορός ελέγχου: Ανθρώπινος ορός, θετικός για αντισώματα IgM έναντι του ιού της ερυθράς και αρνητικός για αντιγόνα HBs, anti-hiv1, anti- HIV2 και anti-hcv Συντηρητικό: 0,1% ProClin 300 1 1 x 70 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml

R6a Αντιγόνο Αντιγόνο ερυθράς: Λυοφιλιωμένο αντιγόνο ερυθράς Συντηρητικό: 0,36% ProClin 300 R6b Συζεύκτης (101x) Συζεύκτης (101x): Μονόκλωνα αντισώματα ποντικού έναντι του ιού της ερυθράς επισημασμένα με υπεροξειδάση Συντηρητικό: 0,16% ProClin 300 R7 Αραιωτικό Αραιωτικό για δείγματα και συζεύκτη (έτοιμο για χρήση): Ρυθμιστικό διάλυμα TRIS-NaCl (ph 7,6), λευκωματίνη βόειου ορού 0,1% Tween 20 και ερυθρό της φαινόλης. Συντηρητικό: 0,15% ProClin 300 R9 Χρωμογόνο TMB Χρωμογόνο (έτοιμο για χρήση): 3.3.5.5 τετραμεθυλοβενζιδίνη (< 0,1%), H2O2 (<1%) R10 Διάλυμα αναστολής Διάλυμα αναστολής (έτοιμο για χρήση): Διάλυμα θειικού οξέος 1 N 4 x q.s. 8,0 ml 1 x 0,4 ml 1 x 80 ml 1 x 28 ml 1 x 28 ml Για τις συνθήκες αποθήκευσης και την ημερομηνία λήξης, ανατρέξτε στις ενδείξεις που αναγράφονται στη συσκευασία. 5. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων εξαρτάται από τη σωστή εφαρμογή της ακόλουθης ορθής εργαστηριακής πρακτικής: Μη χρησιμοποιείτε αντιδραστήρια που έχουν λήξει. Μην αναμιγνύετε και μη συνδυάζετε σε μια συγκεκριμένη ανάλυση αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες. ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ: Για το διάλυμα πλύσης (R2, στοιχεία ετικέτας: 20x, πράσινου χρώματος), χρωμογόνο (R9, στοιχεία ετικέτας: TMB, γαλαζοπράσινου χρώματος) και το διάλυμα αναστολής (R10, στοιχεία ετικέτας: 1N, κόκκινου χρώματος) μπορείτε να χρησιμοποιήσετε διαφορετικές παρτίδες από εκείνες που περιλαμβάνονται στο κιτ, με την προϋπόθεση ότι αυτά τα αντιδραστήρια είναι απολύτως ισοδύναμα και ότι θα χρησιμοποιηθεί η ίδια παρτίδα σε μια συγκεκριμένη ανάλυση. ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ: Επιπλέον, το διάλυμα πλύσης (R2, στοιχεία ετικέτας: 20x, πράσινου χρώματος) μπορεί να αναμιχθεί με τα υπόλοιπα 2 διαλύματα πλύσης που συμπεριλαμβάνονται σε διάφορα κιτ αντιδραστηρίων της Bio-Rad (R2, στοιχεία ετικέτας: 10x, μπλε χρώματος ή 10x, πορτοκαλί χρώματος), μετά από κατάλληλη ανασύσταση και με την προϋπόθεση ότι θα χρησιμοποιηθεί μόνο ένα μίγμα σε μια συγκεκριμένη ανάλυση. Πριν από τη χρήση, περιμένετε 30 λεπτά, ώστε τα αντιδραστήρια να αποκτήσουν θερμοκρασία δωματίου (+18-30 C). Ανασυστήστε προσεκτικά ή αραιώστε τα αντιδραστήρια αποφεύγοντας τυχόν μόλυνση. Μην εκτελείτε την εξέταση παρουσία δραστικών αερίων (οξέων, αλκαλίων, αλδεϋδών) ή σκόνης που θα μπορούσαν να επηρεάσουν την ενζυμική δραστηριότητα του συζεύκτη. Χρησιμοποιείτε υλικά από γυαλί που έχουν πλυθεί και ξεπλυθεί σχολαστικά με απιονισμένο νερό ή κατά προτίμηση υλικά μίας χρήσης. Η πλύση της μικροπλάκας αποτελεί ιδιαίτερα σημαντικό στάδιο σε αυτήν τη διαδικασία: τηρείτε το συνιστώμενο αριθμό κύκλων πλύσης και βεβαιωθείτε ότι όλα τα μικροβυθίσματα είναι πλήρως γεμάτα και, στη συνέχεια, άδεια. Οι εσφαλμένες πλύσεις ενδέχεται να οδηγήσουν σε ανακριβή αποτελέσματα. Μην αφήνετε τη μικροπλάκα να στεγνώσει στο διάστημα από το τέλος των πλύσεων και μέχρι την κατανομή των αντιδραστηρίων. Μη χρησιμοποιείτε ποτέ το ίδιο δοχείο για την κατανομή του συζεύκτη και του διαλύματος ανάπτυξης.

Η ενζυμική αντίδραση είναι εξαιρετικά ευαίσθητη σε μέταλλα ή μεταλλικά ιόντα. Επομένως, κανένα μεταλλικό στοιχείο δεν πρέπει να έρχεται σε επαφή με τα διάφορα διαλύματα που περιέχουν συζεύκτη ή χρωμογόνο. Το διάλυμα χρωμογόνου (R9) θα πρέπει να είναι άχρωμο. Η εμφάνιση μπλε χρώματος δηλώνει ότι το αντιδραστήριο δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί και πρέπει να αντικατασταθεί. Για κάθε δείγμα χρησιμοποιείτε νέο ακροφύσιο πιπέτας. Ελέγχετε αν οι πιπέτες και ο υπόλοιπος εξοπλισμός λειτουργούν σωστά και με ακρίβεια. Οδηγίες για την υγιεινή και την ασφάλεια Το υλικό ανθρώπινης προέλευσης που χρησιμοποιήθηκε στην προετοιμασία αντιδραστηρίων εξετάστηκε και βρέθηκε αρνητικό στην παρουσία αντιγόνου επιφανείας της ηπατίτιδας Β (HBs Ag), αντισωμάτων κατά του ιού της ηπατίτιδας C (anti-hcv) και του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (anti-hiv1 και anti HIV2). Καθώς καμία μέθοδος δεν μπορεί να εγγυηθεί απολύτως την απουσία μολυσματικών παραγόντων, πρέπει να χειρίζεστε τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης και τα δείγματα ασθενή ως εν δυνάμει μολυσματικά: Οποιοδήποτε υλικό, συμπεριλαμβανομένων των διαλυμάτων πλύσης, που έρχεται σε άμεση επαφή με δείγματα και αντιδραστήρια που περιέχουν υλικά ανθρώπινης προέλευσης, θα πρέπει να θεωρείται εν δυνάμει μολυσματικό. Χρησιμοποιείτε γάντια μίας χρήσης κατά το χειρισμό δειγμάτων και αντιδραστηρίων. Μην αναρροφάτε με πιπέτα από το στόμα. Αποφεύγετε τη διαρροή δειγμάτων ή διαλυμάτων που περιέχουν μολυσματικά υλικά. Τυχόν κηλίδες πρέπει να καθαρίζονται με λευκαντικό αραιωμένο κατά 10%. Στην περίπτωση κηλίδων οξέος, οι κηλίδες πρέπει αρχικά να εξουδετερωθούν με διττανθρακικό νάτριο και, στη συνέχεια, να καθαριστούν με λευκαντικό αραιωμένο κατά 10% και να σκουπιστούν με απορροφητικό χαρτί. Το υλικό που χρησιμοποιήθηκε για τον καθαρισμό πρέπει να απορρίπτεται σε δοχείο για μολυσμένα απορρίμματα. Τα δείγματα ασθενών, τα αντιδραστήρια που περιέχουν υλικά ανθρώπινης προέλευσης, καθώς και τα μολυσμένα υλικά και προϊόντα θα πρέπει να απορρίπτονται μετά την απολύμανση αποκλειστικά: - με εμβάπτιση σε λευκαντικό τελικής συγκέντρωσης 5% υποχλωριώδους νατρίου εντός 30 λεπτών, - ή με αποστείρωση σε αυτόκαυστο στους 121 C για τουλάχιστον 2 ώρες. ΠΡΟΣΟΧΗ: Μην τοποθετείτε στο αυτόκαυστο διαλύματα που περιέχουν υποχλωριώδες νάτριο Αποφεύγετε τυχόν επαφή του δέρματος και του βλεννογόνου με τα αντιδραστήρια, συμπεριλαμβανομένων όσων δεν θεωρούνται επικίνδυνα. Ο χειρισμός και η απόρριψη χημικών ουσιών και βιολογικών απορριμμάτων πρέπει να εκτελείται σύμφωνα με την ορθή εργαστηριακή πρακτική. Όλα τα αντιδραστήρια που περιλαμβάνονται στο κιτ προορίζονται αποκλειστικά για διαγνωστική χρήση in vitro. Για συστάσεις αναφορικά με τους κινδύνους και τις προφυλάξεις που σχετίζονται με κάποια χημικά συστατικά αυτού του κιτ εξέτασης, ανατρέξτε στα εικονογραφήματα που αναφέρονται στις ετικέτες και στις πληροφορίες που παρέχονται στο τέλος των οδηγιών χρήσης. Το Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας διατίθεται στη διεύθυνση www.bio-rad.com. 6. ΔΕΙΓΜΑΤΑ 1. Ο ορός και το πλάσμα (EDTA, ηπαρίνη ή κιτρικό οξύ) είναι οι συνιστώμενοι τύποι δείγματος. 2. Τηρείτε τις παρακάτω συστάσεις για το χειρισμό, την επεξεργασία και την αποθήκευση δειγμάτων αίματος: Συλλέγετε όλα τα δείγματα αίματος τηρώντας τις συνήθεις προφυλάξεις για φλεβοκέντηση. Για τον ορό, περιμένετε μέχρι τα δείγματα να πήξουν πλήρως πριν από τη φυγοκέντρηση. Διατηρείτε τα σωληνάρια κλειστά διαρκώς. Μετά τη φυγοκέντρηση, διαχωρίζετε τον ορό ή το πλάσμα από το πήγμα ή τα ερυθρά αιμοσφαίρια σε αεροστεγώς σφραγισμένο σωληνάριο αποθήκευσης. Τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν στους +2-8 C, εάν η εξέταση πραγματοποιηθεί εντός 7 ημερών. Εάν η εξέταση δεν πρόκειται να ολοκληρωθεί εντός 7 ημερών ή τα δείγματα πρόκειται να αποσταλούν, καταψύξτε τα στους -20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία.

Μη χρησιμοποιείτε δείγματα που έχουν αποψυχθεί περισσότερες από πέντε φορές. Τα δείγματα που έχουν καταψυχθεί πρόσφατα θα πρέπει να αναμιγνύονται καλά (Vortex) μετά την απόψυξή τους και πριν από την εξέταση. 3. Τα δείγματα που περιέχουν 90 g/l λευκωματίνης ή 100 mg/l μη συζευγμένης χολερυθρίνης, τα λιπαιμικά δείγματα που περιέχουν 36 g/l τριελαΐνης (τριγλυκεριδίων) και τα αιμολυμένα δείγματα που περιέχουν έως και 10 g/l αιμοσφαιρίνης δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα. 4. Μη θερμαίνετε τα δείγματα. 7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ 7.1 Απαιτούμενα υλικά που δεν παρέχονται Αναδευτήρας τύπου Vortex. Συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας με φίλτρα 450 και 620 nm (*). Επωαστής μικροπλάκας με θερμοστατική ρύθμιση στους 37 ± 1 C (*). Αυτόματη, ημιαυτόματη ή χειροκίνητη συσκευή πλύσης μικροπλάκας (*). Αποστειρωμένο, αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Γάντια μίας χρήσης. Γυαλιά ασφαλείας. Απορροφητικό χαρτί. Αυτόματες ή ημιαυτόματες, ρυθμιζόμενες ή σταθερές πιπέτες ή πολυ-πιπέτες για τη μέτρηση και τη διοχέτευση 10 µl έως 1000 µl και 1 ml, 2 ml και 10 ml. Βαθμονομημένοι κύλινδροι χωρητικότητας 25 ml, 50 ml, 100 ml και 1000 ml. Υποχλωριώδες νάτριο (λευκαντικό) και διττανθρακικό νάτριο. Δοχείο για βιολογικά επικίνδυνα απόβλητα. Σωληνάρια μίας χρήσης. (*) Για αναλυτικές πληροφορίες σχετικά με το συνιστώμενο εξοπλισμό, επικοινωνήστε με το τμήμα τεχνικής υποστήριξης. 7.2 Ανασύσταση αντιδραστηρίων R1: Αφήστε τη μικροπλάκα για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (+18-30 C) πριν ανοίξετε τη σακούλα. Αφαιρέστε το δίσκο μεταφοράς, τοποθετήστε αμέσως τις μη χρησιμοποιημένες ταινίες στη σακούλα και βεβαιωθείτε ότι υπάρχει αποξηραντικό υλικό. Σφραγίστε ξανά προσεκτικά τη σακούλα και αποθηκεύστε την στους +2-8 C. R2: Αραιώστε το διάλυμα πλύσης R2 με αποσταγμένο νερό σε αναλογία 1/20: για παράδειγμα, 50 ml R2 και 950 ml αποσταγμένου νερού, για να δημιουργηθεί το έτοιμο για χρήση διάλυμα πλύσης. Προετοιμάστε 350 ml αραιωμένου διαλύματος πλύσης για μία πλάκα 12 ταινιών, εάν η πλύση εκτελείται χειροκίνητα. R3, R4, R5: Αραιώστε σε αναλογία 1/21 με αραιωτικό (R7) (παράδειγμα: 300 μl R7 + 15 µl βαθμονομητή ή ορού ελέγχου). R6a: Το αντιγόνο ερυθράς είναι λυοφιλιωμένο. Για την ανάλυση 3 ταινιών, ανασυστήστε ένα φιαλίδιο λυοφιλιωμένου αντιγόνου προσθέτοντας 8 ml αραιωτικού (R7). Αναμίξτε καλά. Μετά την αραίωση, το διάλυμα αντιγόνου (R6a+R7) θα πρέπει να είναι πλήρως διαυγές. R6 (R6a+R6b) - Διάλυμα συζεύκτη εργασίας: Προσθέστε 80 μl συζεύκτη (R6b) σε κάθε φιαλίδιο ανασυσταμένου αντιγόνου ερυθράς (αραιωμένο R6a). Αναμίξτε καλά. Το διάλυμα συζεύκτη εργασίας πρέπει να ανασυσταθεί τουλάχιστον 1 ώρα πριν από τη χρήση. 7.3 Αποθήκευση και εγκυρότητα ανοικτών και/ή ανασυσταμένων αντιδραστηρίων Το κιτ πρέπει να αποθηκεύεται στους +2-8 C. Όταν το κιτ αποθηκεύεται στους +2-8 C πριν από το άνοιγμα, κάθε συστατικό μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην εξωτερική ετικέτα του κιτ. R1: Μετά το άνοιγμα, οι ταινίες παραμένουν σταθερές έως και για 8 εβδομάδες, εάν αποθηκευτούν στους +2-8 C στην ίδια προσεκτικά κλεισμένη σακούλα (ελέγξτε αν υπάρχει αποξηραντικό υλικό). R2: Μετά την αραίωση, το διάλυμα πλύσης μπορεί να διατηρηθεί για 2 εβδομάδες στους +2-30 C. Μετά το άνοιγμα, εάν το συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης αποθηκευτεί στους +2-30 C και δεν παρατηρηθεί μόλυνση, παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα.

R3, R4, R5, R6b, R7: Μετά το άνοιγμα και εάν δεν παρατηρηθεί μόλυνση, τα αντιδραστήρια που είναι αποθηκευμένα στους +2-8 C παραμένουν σταθερά έως και για 8 εβδομάδες. R6 (R6a+R6b): Μετά την ανασύσταση, το διάλυμα συζεύκτη εργασίας παραμένει σταθερό για 8 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (+18-30 C) ή 2 εβδομάδες στους +2-8 C. R9: Μετά το άνοιγμα και εάν δεν παρατηρηθεί μόλυνση, το αντιδραστήριο που είναι αποθηκευμένο στους +2-8 C παραμένει σταθερό έως και για 8 εβδομάδες. R10: Μετά από το άνοιγμα και εάν δεν παρατηρηθεί μόλυνση, το αντιδραστήριο που είναι αποθηκευμένο στους +2-8 C παραμένει σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα. 7.4 Διαδικασία Τηρείτε αυστηρά τη διαδικασία ανάλυσης και την ορθή εργαστηριακή πρακτική. Πριν από τη χρήση, αφήστε τα αντιδραστήρια να αποκτήσουν θερμοκρασία δωματίου (+18-30 C). Εάν χρησιμοποιείτε εύθραυστα μικροβυθίσματα απαιτείται ειδική προσοχή κατά το χειρισμό. Χρησιμοποιείτε όλους τους βαθμονομητές με κάθε ανάλυση, ώστε να διασφαλιστεί η εγκυρότητα των αποτελεσμάτων της ανάλυσης. 1. Καθορίστε προσεκτικά το διάγραμμα κατανομής και ταυτοποίησης για το βαθμονομητή, τους ορούς ελέγχου και τα δείγματα ασθενών. 2. Προετοιμάστε το αραιωμένο διάλυμα πλύσης (R2) [Ανατρέξτε στην ενότητα 7.2]. 3. Αφαιρέστε το δίσκο μεταφοράς και τις ταινίες (R1) από το προστατευτικό σακουλάκι [Ανατρέξτε στην ενότητα 7.2]. 4. Προετοιμάστε το διάλυμα συζεύκτη εργασίας R6 (R6a+R6b) [Ανατρέξτε στην ενότητα 7.2]. 5. Σε κατάλληλα επισημασμένα σωληνάρια, αραιώστε το βαθμονομητή και τους ορούς ελέγχου (R3, R4, R5), καθώς και τα δείγματα ασθενών (S1, S2 ) με αραιωτικό (R7) σε αναλογία 1/21: 300 µl αραιωτικού (R7) και 15 μl δείγματος. Στροβιλίστε τα αραιωμένα δείγματα. 6. Ακολουθώντας αυστηρά την παρακάτω σειρά, διοχετεύστε σε κάθε μικροβύθισμα 200 μl αραιωμένου βαθμονομητή, ορών ελέγχου και δειγμάτων ασθενών: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A R3 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R5 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12 7. Καλύψτε τη μικροπλάκα με ένα αυτοκόλλητο σφραγιστικό πλάκας και, στη συνέχεια, πιέστε σταθερά την πλάκα, ώστε να διασφαλιστεί στεγανή σφράγιση. Επωάστε τη μικροπλάκα αμέσως σε υδατόλουτρο που ελέγχεται από θερμοστάτη ή σε ξηρό επωαστή για 1 ώρα ± 5 λεπτά στους 37 C ± 1 C. 8. Στο τέλος της πρώτης περιόδου επώασης, αφαιρέστε το αυτοκόλλητο σφραγιστικό πλάκας. Αναρροφήστε το περιεχόμενο όλων των μικροβυθισμάτων σε ένα δοχείο για βιολογικά επικίνδυνα απόβλητα (που περιέχει υποχλωριώδες νάτριο). Πλύνετε τη μικροπλάκα 4 φορές με 350 μl διαλύματος πλύσης (R2). Αναστρέψτε τη μικροπλάκα και σκουπίστε απαλά με απορροφητικό χαρτί, για να αφαιρεθεί το υπολειπόμενο υγρό. 9. Διοχετεύστε αμέσως 200 μl διαλύματος συζεύκτη εργασίας (R6) σε όλα τα μικροβυθίσματα. Το διάλυμα πρέπει να αναδεύεται απαλά πριν από τη χρήση. 10. Καλύψτε τη μικροπλάκα με ένα αυτοκόλλητο σφραγιστικό πλάκας και, στη συνέχεια, πιέστε σταθερά την πλάκα, ώστε να διασφαλιστεί στεγανή σφράγιση. Επωάστε τη μικροπλάκα αμέσως σε υδατόλουτρο που ελέγχεται από θερμοστάτη ή σε ξηρό επωαστή για 1 ώρα ± 5 λεπτά στους 37 C ± 1 C. 11. Στο τέλος της δεύτερης περιόδου επώασης, αφαιρέστε το αυτοκόλλητο σφραγιστικό πλάκας. Αναρροφήστε το περιεχόμενο όλων των μικροβυθισμάτων σε ένα δοχείο για βιολογικά επικίνδυνα απόβλητα (που περιέχει υποχλωριώδες νάτριο). Πλύνετε τη μικροπλάκα 4 φορές με 350 μl διαλύματος πλύσης (R2). Αναστρέψτε τη μικροπλάκα και σκουπίστε απαλά με απορροφητικό χαρτί, για να αφαιρεθεί το υπολειπόμενο υγρό.

12. Διοχετεύστε γρήγορα 200 μl διαλύματος χρωμογόνου (R9) σε κάθε μικροβύθισμα και μακριά από το φως. H αντίδραση θα πρέπει να πραγματοποιηθεί σε σκοτεινό μέρος για 30 ± 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (+18-30 C). Μη χρησιμοποιείτε αυτοκόλλητο σφραγιστικό πλάκας κατά τη διάρκεια της συγκεκριμένης περιόδου επώασης. 13. Διακόψτε την ενζυμική αντίδραση προσθέτοντας 100 μl διαλύματος αναστολής (R10) σε κάθε μικροβύθισμα. Η κατανομή θα πρέπει να εκτελεστεί με την ίδια σειρά και συχνότητα όπως για το διάλυμα ανάπτυξης. 14. Σκουπίστε προσεκτικά το κάτω μέρος της πλάκας. Διαβάστε την τιμή οπτικής πυκνότητας στα 450/620 nm χρησιμοποιώντας μια συσκευή ανάγνωσης πλάκας εντός 30 λεπτών από τη διακοπή της αντίδρασης. Οι ταινίες πρέπει να φυλάσσονται πάντα μακριά από το φως πριν από την ανάγνωση. 15. Πριν από την αναφορά των αποτελεσμάτων, ελέγξτε την αντιστοιχία μεταξύ της ένδειξης και του διαγράμματος κατανομής της πλάκας και των δειγμάτων. 8 ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ 8.1 Υπολογισμός τιμής αναφοράς (CO) Η τιμή αναφοράς (CO) αντιστοιχεί στη μέση τιμή των οπτικών πυκνοτήτων (OD) των εξετάσεων εις διπλούν ορού ελέγχου αναφοράς (R4): 8.2 Υπολογισμός του λόγου δείγματος CO = μέση τιμή OD R4 Το αποτέλεσμα του δείγματος εκφράζεται ως λόγος χρησιμοποιώντας τον παρακάτω τύπο: 8.3 Ποιοτικός έλεγχος Λόγος δείγματος = OD δείγματος / CO Συμπεριλάβετε το βαθμονομητή και τους ορούς ελέγχου για κάθε μικροπλάκα και για κάθε ανάλυση και αναλύστε τα αποτελέσματα που έχουν ληφθεί. Για να θεωρηθεί έγκυρη η ανάλυση, θα πρέπει να πληρούνται τα εξής κριτήρια: Τιμές οπτικής πυκνότητας: - CO 0,300-0,80 x CO < OD R4 αντίγρ.1 < 1,20 x CO - 0,80 x CO < OD R4 αντίγρ.2 < 1,20 x CO (Η μεμονωμένη τιμή OD κάθε αντιγράφου του ορού ελέγχου αναφοράς (R4) δεν πρέπει να διαφέρει πάνω από 20% της τιμής CO). Λόγοι οπτικής πυκνότητας: - Λόγος R3 (OD R3 / CO) 0,30 - Λόγος R5 (OD R5 / CO) 1,50 Εάν αυτά τα κριτήρια ποιοτικού ελέγχου δεν πληρούνται, η ανάλυση θα πρέπει να επαναληφθεί.

8.4 Ερμηνεία αποτελεσμάτων Λόγος δείγματος Αποτέλεσμα Ερμηνεία Λόγος < 0,80 Αρνητικό 0,80 Λόγος < 1,00 Διφορούμενο Λόγος 1,00 Θετικό Το δείγμα θεωρείται αρνητικό στην παρουσία αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς. Το δείγμα θεωρείται διφορούμενο στην παρουσία αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς. Το αποτέλεσμα πρέπει να επιβεβαιωθεί με μια άλλη εξέταση που θα πραγματοποιηθεί σε δεύτερο δείγμα που θα ληφθεί τουλάχιστον 3 εβδομάδες μετά την πρώτη εξέταση. Το δείγμα θεωρείται θετικό στην παρουσία αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς. 8.5 Οδηγός αντιμετώπισης προβλημάτων Η μη επαλήθευση ή επανάληψη των αντιδράσεων συχνά οφείλεται σε: Ανεπαρκή πλύση της μικροπλάκας. Μόλυνση αρνητικών δειγμάτων από ορό ή πλάσμα με υψηλό τίτλο αντισωμάτων. Μόλυνση του διαλύματος ανάπτυξης από χημικούς οξειδωτικούς παράγοντες (λευκαντικό, μεταλλικά ιόντα...). Μόλυνση του διαλύματος αναστολής. 9 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ 9.1 Συχνότητα εμφάνισης Ο προσδιορισμός της συχνότητας εμφάνισης των αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς με χρήση της εξέτασης Platelia Rubella IgM (72851) διεξήχθη χρησιμοποιώντας έναν πίνακα 347 δειγμάτων από έγκυες γυναίκες. 2 δείγματα ήταν θετικά για αντισώματα IgM έναντι του ιού της ερυθράς. Με την ανάλυση Platelia Rubella IgM η συχνότητα εμφάνισης καθορίστηκε στο 0,6% (2/347). Tα χαρακτηριστικά απόδοσης της εξέτασης Platelia Rubella IgM έχουν αξιολογηθεί σε 2 τοποθεσίες, χρησιμοποιώντας συνολικά 809 δείγματα από έγκυες γυναίκες και δότες αίματος. Στην πρώτη τοποθεσία, διεξήχθη συγκριτική μελέτη χρησιμοποιώντας την εξέταση Platelia Rubella IgM TMB (72922). Στη δεύτερη τοποθεσία, η απόδοση της εξέτασης Platelia Rubella IgM αξιολογήθηκε σε σχέση με μια άλλη εξέταση EIA του εμπορίου. 9.2 Συγκριτική μελέτη (Τοποθεσία 1) Η απόδοση της εξέτασης Platelia Rubella IgM αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας έναν πίνακα 399 δειγμάτων που ομαδοποιήθηκαν ως εξής: 172 οροί από δότες αίματος 151 οροί από έγκυες γυναίκες 76 οροί από πίνακα του εμπορίου, θετικό για αντισώματα IgM έναντι του ιού της ερυθράς Platelia Rubella IgM TMB (72922) Platelia Rubella IgM (72851) Αρνητικό Διφορούμενο Θετικό Σύνολο Αρνητικό 319 0 1 320 Διφορούμενο 2 0 0 2 Θετικό 0 0 77 77 Σύνολο 321 0 78 399 Συνολική συμφωνία: 396/399 99,25% [IC 95% = 97,82% - 99,84%]

Σχετική ειδικότητα: 319/321 99,38%* [IC 95% = 97,77% - 99,92%] Σχετική ευαισθησία: 77/78 98,72% [IC 95% = 93,06% - 99,97%]. * Το διφορούμενο αποτέλεσμα θεωρήθηκε θετικό [IC 95%] = διάστημα εμπιστοσύνης 95%. Επιπλέον, με τα δύο κιτ αξιολογήθηκαν 60 οροί από 7 συμπληρωματικούς εμβολιασμούς (με δύο τύπους εμβολίων): τα αντισώματα IgM έναντι του ιού της ερυθράς εμφανίστηκαν με τον ίδιο τρόπο και στα 2 κιτ. 9.3 Χαρακτηριστικά απόδοσης (Τοποθεσία 2) Η απόδοση της εξέτασης Platelia Rubella IgM αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας έναν πίνακα 350 δειγμάτων από: 47 παιδιά ηλικίας 15 ετών ή μικρότερα (27 κορίτσια και 20 αγόρια) 299 ενήλικες (298 γυναίκες - έγκυες ή λεχώνες - και 1 άνδρας) 1 ορός από έρευνα του γαλλικού εθνικού προγράμματος ποιοτικού ελέγχου Τα αποτελέσματα συγκρίθηκαν με τα αποτελέσματα που λήφθηκαν από μια άλλη εξέταση ΕΙΑ του εμπορίου, η οποία χρησιμοποιήθηκε ως μέθοδος αναφοράς. Άλλη εξέταση ΕΙΑ Platelia Rubella IgM (72851) Αρνητικό Διφορούμενο Θετικό Σύνολο Αρνητικό 344 0 0 344 Διφορούμενο 1 0 0 1 Θετικό 0 1 4 5 Σύνολο 345 1 4 350 Σχετική ειδικότητα: 344/345 99,71%* [IC 95% = 98,40% - 99,99%] * Το διφορούμενο αποτέλεσμα θεωρήθηκε θετικό [IC 95%] = διάστημα εμπιστοσύνης 95%. Από τους 5 θετικούς ορούς: τα 4 δείγματα που βρέθηκαν θετικά με επαλήθευση είχαν ληφθεί από το ίδιο άτομο σε διαφορετικές χρονικές στιγμές, ο θετικός ορός με ανακόλουθα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκε ως θετικός με μια τρίτη εξέταση EIA του εμπορίου και αντιστοιχούσε σε δείγμα που είχε ληφθεί 4 μήνες μετά τον εμβολιασμό. 9.4 Διασταυρούμενη αντιδραστικότητα Ένας πίνακας 212 δειγμάτων, στα οποία περιλαμβάνονταν 164 θετικά δείγματα για CMV, τοξοπλάσμωση, EBV, HSV, VZV, παρωτίτιδα, ιλαρά και HIV και 48 θετικά δείγματα για ρευματοειδή παράγοντα, αυτοαντισώματα και ετερόφιλα αντισώματα μαζί με δείγματα θετικά για μυέλωμα, υποβλήθηκε σε εξέταση με τις αναλύσεις Platelia Rubella IgM (72851) και Platelia Rubella IgM TMB (72922). Από τα δείγματα αυτά, 1 δείγμα CMV IgM βρέθηκε θετικό με ανακόλουθα αποτελέσματα και 6 δείγματα ρευματοειδούς παράγοντα βρέθηκαν θετικά ή διφορούμενα και με τις δύο μεθόδους. Τέσσερα από αυτά τα 6 δείγματα επιβεβαιώθηκαν ως αρνητικά με άλλες εξετάσεις EIA του εμπορίου. 9.5 Ακρίβεια Ακρίβεια εντός της ανάλυσης (επαναληψιμότητα):

Για να αξιολογηθεί η επαναληψιμότητα εντός της ανάλυσης, εξετάστηκαν ένα αρνητικό και τρία θετικά δείγματα 30 φορές κατά τη διάρκεια της ίδιας ανάλυσης. Ο λόγος (OD δείγματος/co) καθορίστηκε για κάθε δείγμα. Η μέση τιμή λόγου, η τυπική απόκλιση (SD) και ο συντελεστής μεταβλητότητας (%CV) για κάθε δείγμα αναφέρονται στον παρακάτω πίνακα: Ακρίβεια εντός της ανάλυσης (επαναληψιμότητα) N=30 Αρνητικό δείγμα Θετικό δείγμα χαμηλής συγκέντρωσης Θετικό δείγμα Θετικό δείγμα υψηλής συγκέντρωσης Λόγος (OD δείγματος/co) Μέση τιμή 0,07 1,73 2,51 4,06 SD 0,002 0,03 0,06 0,11 %CV 2,7% 1,8% 2,5% 2,7% Ακρίβεια μεταξύ των αναλύσεων (αναπαραγωγιμότητα): Για να αξιολογηθεί η αναπαραγωγιμότητα μεταξύ των αναλύσεων, τα τέσσερα δείγματα (ένα αρνητικό και τρία θετικά) εξετάστηκαν εις διπλούν σε δύο αναλύσεις την ημέρα για περίοδο 20 ημερών. Ο λόγος (OD δείγματος/co) καθορίστηκε για κάθε δείγμα. Η μέση τιμή λόγου, η τυπική απόκλιση (SD) και ο συντελεστής μεταβλητότητας (%CV) για κάθε δείγμα αναφέρονται στον παρακάτω πίνακα: Ακρίβεια μεταξύ των αναλύσεων (αναπαραγωγιμότητα) Θετικό δείγμα Αρνητικό N=80 χαμηλής δείγμα συγκέντρωσης Θετικό δείγμα Θετικό δείγμα υψηλής συγκέντρωσης Λόγος (OD δείγματος/co) Μέση τιμή 0,04 1,19 2,24 3,60 SD 0,005 0,03 0,06 0,10 %CV 12,7% 2,8% 2,6% 2,8% 10 ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η διάγνωση της λοίμωξης ερυθράς θα πρέπει να βασίζεται αποκλειστικά σε ένα συνδυασμό κλινικών και βιολογικών στοιχείων. Το αποτέλεσμα μίας μόνο εξέτασης τιτλοποίησης αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς δεν αποτελεί επαρκή απόδειξη για τη διάγνωση πρόσφατης λοίμωξης από τον ιό της ερυθράς. Η διάγνωση πρόσφατης λοίμωξης μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο βάσει ολοκληρωμένων πληροφοριών ασθενή, συμπεριλαμβανομένων κλινικών και βιολογικών στοιχείων (σημαντική αύξηση αντισωμάτων IgG έναντι του ιού της ερυθράς σε 2 δείγματα ορού ασθενή που έχουν συλλεχθεί σε διάστημα 3 εβδομάδων και έχουν εξεταστεί στην ίδια ανάλυση, παρουσία αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς σε σημαντικά επίπεδα, εμφάνιση χαμηλής ισχύος δεσμού αντιγόνουαντισώματος IgG). Η παρουσία αντισωμάτων IgM έναντι του ιού της ερυθράς δεν αποτελεί επαρκή απόδειξη για την επιβεβαίωση πρόσφατης λοίμωξης, καθώς τα αντισώματα IgM ενδέχεται να παραμείνουν αρκετούς μήνες ή και χρόνια μετά τη λοίμωξη. Σε περίπτωση ανίχνευσης αντισωμάτων IgM, θα πρέπει να εκτελείται ποσοτικός προσδιορισμός των αντισωμάτων IgG έναντι του ιού της ερυθράς, καθώς και συμπληρωματική εξέταση της εξέλιξης των αντισωμάτων έναντι του ιού της ερυθράς τουλάχιστον σε ένα δεύτερο δείγμα ορού που θα συλλεχθεί τρεις εβδομάδες αργότερα. Εάν η εξέταση του δείγματος πραγματοποιηθεί υπερβολικά νωρίς κατά τη διάρκεια πρόσφατης πρωτογενούς λοίμωξης, ενδέχεται να μην υπάρχουν ακόμη αντισώματα IgM έναντι του ιού της ερυθράς. Εάν υπάρχει υποψία αντισωμάτων, θα πρέπει να ληφθεί ένα δεύτερο δείγμα 3 εβδομάδες περίπου μετά την πρώτη ανάλυση και να επαναληφθεί η εξέταση για αντισώματα IgM. Τα δείγματα που είναι θετικά στην παρουσία ρευματοειδούς παράγοντα ενδέχεται να δώσουν ψευδή θετικά αποτελέσματα.

11 ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΤΟΥ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΤΗ Όλα τα παρασκευασμένα αντιδραστήρια προετοιμάζονται σύμφωνα με το σύστημα ποιότητας που διαθέτουμε, από την παραλαβή των πρώτων υλών έως την εμπορευματοποίηση του τελικού προϊόντος. Κάθε παρτίδα υποβάλλεται σε αξιολόγηση ποιοτικού ελέγχου και διατίθεται στην αγορά μόνο εφόσον διασφαλιστεί ότι συμμορφώνεται με τα προκαθορισμένα κριτήρια αποδοχής. Τα αρχεία που σχετίζονται με την παραγωγή και τους ελέγχους κάθε μεμονωμένης παρτίδας φυλάσσονται εντός των εγκαταστάσεων της Bio-Rad. 12 ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. COOPER, L.Z., BUIMOVICI-KLEIN, E. 1985. : Rubella. In Virology: 1005-1020. Edited by Fields, B.N., et al. New York, New York: Raven Press. 2. DORSETT, P.H., MILLER, D.C., GREEN, K., BYRD, F. 1985. : Structure and function of the Rubella virus proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 150-S 156. 3. FORSGREN, M. 1985. : Standardization of techniques and reagents for the study of Rubella antibody. Rev. Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 129-S 132. 4. KALKKINEN, N., OKER-BLOM, C., AND PETTERSSON, R.F. 1984. : Three genes code for Rubella virus structural proteins El. E2a, E2b, and C. J. Gen. Virol, 65: 1549-1557. 5. LUCAS, G., et al. April 17-20, 1989. : Serological diagnosis of IgG immunoglobulins ant-rubella by immunoenzymatic assay in a commercially available kit. Nice: 4th European Congress of Clinical Microbiology. 308/PP20. 6. MAURIN, J. 1985. : Le virus de la rubéole. Bulletin de l Institut Pasteur 1969, 67, 483-502. Virologie médicale, chap. 34, 586-604. Flammarion Médecine Sciences. 7. NCCLS Document I/LA6-T Tentative Guideline December 1992 : Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test and Product intended for the Detection and Quantitation of Rubella IgG Test Products. 8. PETTERSSON, R., et al. 1985. : Molecular and antigenic characteristics and synthesis of Rubella virus structural proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 140-S 149. 9. WOLINSKY J.S. : Rubella. In Virology, 1990, 2nd Ed. 815-38. Edited by Fields, B.N., and al. New York: Raven Press, Ltd.

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincare 92430 Marnes-la-Coquette - France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 2013/11 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 881142 www.bio-rad.com