medac Asparaginase-Aktivitäts-Test MAAT Ελληνικά 550-VPG/010416

Transcript

1 medac Asparaginase-Aktivitäts-Test MAAT Ελληνικά 550-VPG/010416

2 ΚΑΤAΣΚΕΥΑΣΤΗΣ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Theaterstraße 6 D Wedel diagnostics@medac.de Τηλέφωνο: ++49/4103/ Φαξ : ++49/4103/ ΔΙΕΥΘΥΝΣΗ ΠΑΡΑΓΓΕΛΙΩΝ auftrag@medac.de Τηλέφωνο: ++49/4103/ Φαξ : ++49/4103/ VPG/010416

3 medac Asparaginase-Aktivitäts-Test (MAAT) Eνζυμική μέθοδος για τον ποσοτικό προσδιορισμό της ενεργότητος της ασπαραγινάσης σε ορό και πλάσμα Αριθμός καταλόγου: 550 Χρησιμοποιείται μόνο για in vitro διάγνωση ΕΙΣΑΓΩΓΗ Η L-ασπαραγινάση είναι ένα ένζυμο πολύ σημαντικό για την θεραπεία της οξείας λεμφοβλαστικής λευχαιμίας (ΟΛΛ) σε παιδιά και ενήλικες. Η θεραπεία με L-ασπαραγινάση στηρίζεται στην εξάντληση των επιπέδων της ασπαραγίνης στο πλάσμα και στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό λόγω της διάσπασης της από το προαναφερθέν ένζυμο σε ασπαρτικό οξύ και αμμωνία (βλέπε αρχή διαδικασίας, σελ.2). Το κιτ χρησιμοποιείται για την μέτρηση της ενεργότητος της ασπαραγινάσης κατά την διάρκεια της θεραπείας, αποσκοπώντας στην μέγιστη δυνατή βελτίωση της θεραπείας. Σκοπός της καταγραφής της ενεργότητος της ασπαραγινάσης είναι: Η μέτρηση της ενεργότητος της ασπαραγινάσης κατά την διάρκεια της θεραπείας, ως δείκτης για την εξάντληση της ασπαραγίνης. Η ανίχνευση της σιωπηλής απενεργοποίησης (silent inactivation), προκληθείσα από τον ανοσοποιητικό μηχανισμό, με αποτέλεσμα την μείωση του χρόνου δράσης της ασπαραγινάσης. Η παροχή πληροφοριών με τις οποίες δύναται να αποφασισθεί εάν θα αλλαχθεί ή όχι το χρησιμοποιούμενο στέλεχος ασπαραγινάσης ή εάν επέλθει αλλαγή στην δοσολογία για την βελτίωση της θεραπείας. Το ΜΑΑΤ είναι ένα ομοιογενές τεστ, με την χρήση του οποίου επιτυγχάνεται πλήρως η καταγραφή της ενεργότητος της ασπαραγινάσης. 550-VPG/

4 ΑΡΧΗ PRINCI ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Ασπαραγινάση Υπόστρωμα Ενζυμική υδρόλυση Προιόν Διάσπασης Α + Προιόν Διάσπασης B + Προιόν Διάσπασης B Χρωμογόνο Προιόν πρασίνου χρώματος Μέτρηση απορρόφησης στα nm H ασπαραγινάση διασπά ένα υπόστρωμα ανάλογο της ασπαραγίνης σε δύο προιόντα, Α και Β. Το προιόν διάσπασης Β αντιδρά περαιτέρω με ένα χρωμογόνο, σχηματίζοντας ένα σύμπλοκο πρασίνου χρώματος το οποίο απορροφά στα nm. Οι μετρήσεις της απορρόφησης ανάγονται σε ενεργότητες ασπαραγινάσης με την χρήση πρότυπης καμπύλης. 550-VPG/

5 ΠΛΕΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Ευέλικτοι χειρισμοί διότι τα strip είναι διασπώμενα και άρα χρησιμοποιούνται μόνο όσα πηγαδάκια (well) απαιτούνται Απλοί χειρισμοί διότι δεν υπάρχουν στάδια πλυσίματος και φυγοκέντρησης Μικρής διάρκειας διαδικασία (περίπου 2,5 ώρες) Υψηλής ακρίβειας αποτελέσματα με Ασπαραγινάση medac ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΤΟΥ ΚΙΤ Αριθμός καταλόγου : Μικροπλάκα (microplate): 6 x 8 πηγαδάκια (wells), διασπώμενα, φόρμα-u αεροστεγώς κλεισμένα σε σακκούλα αλουμινίου που περιέχει αποξηραντικό υλικό. 2. Μάρτυρας(control): 2 φυαλίδια, 0,5 ml έκαστον, με λυοφιλοποιημένη Ασπαραγινάση medac από Ε.coli σε ανθρώπινο ορό. 2. Βαθμονομητές (calibrators): 2 φυαλίδια, 0,5 ml έκαστον, με λυοφιλοποιημένη Ασπαραγινάση medac από Ε.coli, σε ανθρώπινο ορό: 3. 3 α.βαθμονομητής 1: 600 U/L 3 β.βαθμονομητής 2: 300 U/L 3 γ.βαθμονομητής 3: 50 U/L 3 δ.βαθμονομητής 4: 0 U/L 1. Αραιωτικό δείγματος: 1 φυαλίδιο, 110 ml, PBS/TWEEN/BSA, ph 7,2-7,4, έτοιμο προς χρήση, το οποίο περιέχει ProClin TM Υπόστρωμα: 2 φυαλίδια, 0,75 ml έκαστον, έτοιμο προς χρήση, το οποίο περιέχει ProClin TM Χρωμογόνο: 2 φυαλίδια, 1,0 ml έκαστον, συμπυκνωμένο, Επιβλαβές. Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. Διάθεση του εριεχομένου/περιέκτη σε συμμόρφωση με τους τοπικούς και εθνικούς κανονισμούς. 7. Αραιωτικό χρωμογόνου: 2 φυαλίδια, 2,0 ml έκαστον, έτοιμο προς χρήση. Δελτίο δεδομένων ασφαλείας παρέχεται εφόσον ζητηθεί. 550-VPG/

6 1. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ ΥΛΙΚΟ/ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟ ΜΟΡΦΗ ΦΥΛΑΞΗ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Κιτ Κλειστό ο C μέχρι την ημ/νια λήξης Μικροπλάκα Ανοιγμένο ο C στην σακκούλα με το αποξηραντικό Μάρτυρας ανοιγμένο/ ανασυσταθέν μέχρι την ημ/νια λήξης ο C 4 εβδομάδες Βαθμονομητής ανοιγμένο/ ανασυσταθέν ο C 4 εβδομάδες Αραιωτικό δείγματος Ανοιγμένο ο C 8 εβδομάδες Υπόστρωμα Ανοιγμένο ο C 4 εβδομάδες Χρωμογόνο Ανοιγμένο ο C 4 εβδομάδες Αραιωτικό χρωμογόνου Ανοιγμένο ο C 4 εβδομάδες Μην χρησιμοποιείτε ληγμένα αντιδραστήρια. 2. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΟΥΝΤΑΙ ΑΛΛΑ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ 2.1. Ρυθμιζόμενες πιπέττες 2.2. Γυάλινοι ή πλαστικοί περιέκτες για την αραίωση του δείγματος και του χρωμογόνου 2.3. Φωτόμετρο με φίλτρο στα nm. 3. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Πριν την έναρξη της διαδικασίας, όλα τα συστατικά του κιτ θα πρέπει να αποκτήσουν θερμοκρασία περιβάλλοντος. Υπολογίστε των αριθμό των wells που θα απαιτηθούν. 550-VPG/

7 3.1. Μικροπλάκα Μετά την απομάκρυνση των απαιτούμενων wells, η σακκούλα από αλουμίνιο που θα περιέχει τα wells που δεν χρησιμοποιήθηκαν καθώς και το αποξηραντικό υλικό, πρέπει να επανασφραγιστεί ερμητικά. Η φύλαξη και η σταθερότητα των wells αναφέρεται στον πίνακα της σελίδας Βαθμονομητές και μάρτυρες Για την επανασύσταση του λυοφιλοποιημένου μάρτυρα και βαθμονομητή προσθέτουμε 0,5 ml αραιωτικού δείγματος σε καθένα. Κατόπιν αναποδογυρίζουμε ελαφρά το κλειστό φυαλίδιο προκειμένου να επανασυσταθεί και το λυοφιλοποιημένο υλικό που υπάρχει στο πώμα Διάλυμα αραίωσης χρωμογόνου Αναμιγνύετε το χρωμογόνο με το αραιωτικό χρωμογόνου σε αναλογία μl διαλύματος χρωμογόνου απαιτείται για 8 wells. Παράδειγμα: Aριθμός wells Χρωμογόνο (μl) Αραιωτικό χρωμογόνου (µl) Σ (μl) Απαιτούμενος όγκος (μl) Σημείωση: Το χρωμογόνο όταν αναμιγνύεται με το αραιωτικό χρωμογόνου θερμαίνεται. Το μίγμα χρωμογόνου και διαλύτη χρωμογόνου δεν πρέπει να φυλάσσεται Πρέπει να χρησιμοποιείται αμέσως. Μην αναμιγνύετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες ή παραγωγούς. Αξιόπιστα και επαναλήψιμα αποτελέσματα επιτυγχάνονται εάν η διαδικασία του τεστ ακολουθείται με ακρίβεια και εάν χρησιμοποιούνται μόνο τα συγκεκριμένα αντιδραστήρια του κιτ. 550-VPG/

8 4. ΔΕΙΓΜΑ 4.1. Η εξέταση είναι κατάλληλη για δείγματα ορού και για EDTA πλάσμα. Τα δείγματα των ασθενών μπορούν να αποθηκευτούν για 7 ημέρες στους 2-8 C. Τυχόν μακροχρόνια αποθήκευση να γίνεται στη κατάψυξη σε θερμοκρασία -20 C. Να αποφεύγονται πολλαπλές αποψύξεις και επανακαταψύξεις των δειγμάτων Σε καμμία περίπτωση μην προεπεξεργαστείτε το δείγμα. Το δείγμα δεν πρέπει να είναι λιπαιμικός, δεν πρέπει να περιέχει ερυθροκύτταρα και δεν πρέπει να έχει επιμολυνθεί με μικροοργανισμούς Το δείγμα πρέπει να αραιωθεί σε αναλογία 1:10 με αραιωτικό δείγματος (π.χ 20 μl ορού με 180 μl αραιωτικού δείγματος). Δείγματα με τιμές εκτός κλίμακας πρέπει να αραιωθούν περαιτέρω. 5.Α. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΤΟΥ ΤΕΣΤ 5.1. Κόψτε την σακούλα αλουμινίου που περιέχει την μικροπλάκα πάνω από τη σύνδεση και βγάλτε όσα wells θα χρειασθείτε. (βλ. 3.1.) 5.2. Βάλτε με την χρήση πιπέτας 20 μl από το καθένα : μάρτυρα, βαθμονομητή και δείγματος στο well Προσθέστε 20 μl υποστρώματος σε καθένα well. Τα βήματα 5.2. και 5.3. θα πρέπει να εκτελεσθούν εντός 10 λεπτών. Κατόπιν αναδεύστε ελαφρώς προκειμένου να αναμιχθούν πλήρως τα αντιδραστήρια και επωάστε την μικροπλάκα σε θερμοκρασία περιβάλλοντος Επωάστε την καλυμμένη μικροπλάκα για 60 λεπτά ( 2 λεπτά) σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (22 ο C 1 ο C) Αμέσως μετά την λήξη της επωάσεως ετοιμάστε το διάλυμα του χρωμογόνου (βλ. 3.3.) Τοποθετήστε με την χρήση πιπέτας 100 μl διαλύματος χρωμογόνου σε όλα τα wells Επωάστε την καλυμμένη μικροπλάκα για 90 λεπτά ( 2 λεπτά) σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (22 ο C 1 ο C). Βεβαιωθείτε ότι όλα τα συστατικά αναμίχθηκαν καλά μέσω ελαφράς ανάδευσης. Βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχουν φυσσαλίδες αέρα στα wells πριν φωτομετρήσετε. Η φωτομέτρηση πρέπει να γίνει αμέσως μετά την λήξη της τελευταίας επώασης. 550-VPG/

9 5.Β. ΠΙΝΑΚΑΣ ΑΠΕΙΚΟΝΙΣΗΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΤΟΥ ΤΕΣΤ Βαθμονομητές Μάρτυρες Δείγματα Βαθμονομητές Μάρτυρες Δείγματα 20 μl μl μl Υπόστρωμα 20 μl 20 μl 20 μl Eπώαση 60 λεπτών, σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (22 ο C 1 ο C) Διάλυμα 100 μl 100 μl 100 μl χρωμογόνου Eπώαση 90 λεπτών, σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (22 ο C 1 ο C) Φωτομέτρηση στα 690 nm 720 nm 6.Α. ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ (ΑΞΙΟΠΙΣΤΙΑ) Φωτομετρήστε στα 690 nm nm. Η μέτρηση της απορρόφησης του τυφλού γίνεται στον αέρα. Το εύρος τιμών του μάρτυρα (control) αναγράφεται στην ετικέττα του φυαλιδίου. Κριτήρια αξιοπιστίας - Η ενεργότητα του μάρτυρα (control) πρέπει να είναι εντός του αναγραφόμενου στην ετικέττα εύρους τιμών. - Η απορρόφηση του βαθμονομητή 1 πρέπει να είναι 1, Η απορρόφηση του βαθμονομητή 4 πρέπει να είναι 0,150. Εάν τα αποτελέσματα δεν αναποκρίνονται στις προδιαγραφές πρέπει να επαναλάβετε την διαδικασία. Καμπύλη βαθμονόμησης (calibration curve) και ποσοτικοποίησης Για την απεικόνηση της ενεργότητος έναντι της απορροφήσεως προτείνεται η χρησιμοποίηση τριτοβάθμιας καμπύλης (cubic spline). Ο προσδιορισμός της ενεργότητος που αντιστοιχεί στην συγκεκριμένη απορρόφηση επιτυγχάνεται με την χρήση της καμπύλης βαθμονόμησης. 550-VPG/

10 Το εύρος των μετρήσεων κυμαίνεται από 30 εώς 600 U/L. Δείγματα με ενεργότητες χαμηλότερες του εύρους εκτιμούνται ως 30 U/L. Δείγματα με ενεργότητες μεγαλύτερες του εύρους εκτιμούνται ως 600 U/L. Αυτά τα δείγματα θα πρέπει να επανεκτιμηθούν σε μεγαλύτερες αραιώσεις. Εάν ένα δείγμα μετρήθηκε σε μεγαλύτερες από 1 : 10 αραιώσεις, η ενεργότητα που θα προσδιορισθεί από την καμπύλη βαθμονόμησης θα πρέπει να πολλαπλασιασθεί με τον επιπλέον συντελεστή αραίωσης. (π.χ: τελική αραίωση δείγματος 1 : 40, προσδιορισθείσα απορρόφηση 250 U/L πραγματική απορρόφηση = 250 U/L x 4 = 1000 U/L). 6.Β. ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ/ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΣ ΜΕΘΟΔΟΥ Το ΜΑΑΤ χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της ενεργότητος όλων των ειδών ασπαραγινάσης που είναι διαθέσιμες. Η βαθμονόμηση της εξέτασης έγινε σε σχέση με την Ασπαραγινάση medac, έτσι ώστε τα δείγματα των ασθενών που λαμβάνουν Ασπαραγινάση medac να μετρώνται με ακρίβεια. Η αξιολόγηση έγινε σε σύγκριση με τη μέθοδο αναφοράς (ΑΗΑ test, βλέπε Lanvers et al., 2002). Εξαιτίας της εξάρτησης της ενζυμικής ενεργότητας από τη μέθοδο μέτρησης, η μέτρηση των δειγμάτων που περιέχουν άλλες ασπαραγινάσες μπορεί να έχουν συστηματικές αποκλίσεις από τη μετρούμενη ενεργότητα. Για να καθοριστεί η απόκλιση για το Oncaspar έγινε μελέτη δειγμάτων ασθενών που παίρνουν Oncaspar σε σύγκριση με τη μέθοδο αναφοράς ΑΗΑ. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν αυξημένη ενεργότητα 24 % κατά μέσο όρο (SD = 10 %, N = 134). Για τη διασφάλιση της ποιότητας και για την παρακολούθηση των απαιτούμενων δόσεων κατά τη θεραπεία, αυτές οι φυσιολογικά οριακές αποκλίσεις μπορούν να μη ληφθούν υπόψη. Με τα σημερινά επιστημονικά δεδομένα δεν είναι εφικτό να καθορισθεί η οριακή τιμή της ενεργότητος της ασπαραγινάσης άνω της οποίας εγγυάται 100 % εξάντληση των επιπέδων της ασπαραγίνης για τον λόγο αυτό θα πρέπει κάθε επιστημονική ομάδα να καθορίζει την οριακή τιμή της ενεργότητος της ασπαραγινάσης σύμφωνα με τους στόχους που θέτει κατά την θεραπεία. Πάρα ταύτα οι Riccardi et al. (1981) παρατήρησαν ότι εάν η ενεργότητα της ασπαραγινάσης είναι 100 U/L και άνω, η εξάντληση των επιπέδων της ασπαραγίνης είναι εγγυημένη και επομένως η ενεργότητα των 100 U/L μπορεί να θεωρηθεί ως η ελάχιστη αποτελεσματική ενεργότητα. Υψηλές συγκεντρώσεις αιμοσφαιρίνης και χολερυθρίνης δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα. 550-VPG/

11 7. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΠΙΔΟΣΗΣ Ακολουθούν τα χαρακτηριστικά της μεθόδου, τα οποία καθορίζονται κατά την διάρκεια της μεθόδου. 7.Α. ΕΠΙΠΟΛΑΣΜΟΣ (PREVALENCE) Η ενεργότητα της ασπαραγινάσης για 102 ορούς που ελήφθησαν από δότες αίματος υπολογίστηκε 30 U/L. Ομοίως και για 52 ορούς από παιδιά. 7.Β. ΑΚΡΙΒΕΙΑ Δείγμα Διακύμανση (intra-assay variation) Mέση απορρό φηση Δείγμα SD CV (%) n Μέσος όρος Διακύμανση (inter-assay variation) SD CV (%) n Bάθμ.1 2,162 0,068 3,1 22 Μάρτ. 91,5 3,7 4,0 9 Mάρτ. 0,530 0,006 1,1 22 Νο. 3 38,2 1,7 4,5 9 Νο. 1 0,254 0,006 2,5 22 Νο ,5 7,5 6,0 9 Νο. 2 1,380 0,021 1,5 22 Νο ,3 33,7 8,0 9 Βάθμ = Bαθμονομητής; Μάρτ = Μάρτυρας; Νο = Ορός 7.Γ. ΑΝΑΚΤΗΣΗ Η μέση τιμή ανάκτησης 93,6 % (SD = 9,9 %) υπολογίστηκε προσθέτοντας κάθε μία από 3 καθορισμένες ενεργότητες σπαραγινάσης(ασπαραγινάση medac ) σε 3 διαφορετικούς ορούς. 550-VPG/

12 7.Δ. ΓΡΑΜΜΙΚΟΤΗΤΑ ΑΡΑΙΩΣΗΣ (DILUTION LINEARITY) H γραμμικότητα της αραίωσης ελέγχθηκε σε 10 ορούς οι οποίοι και εξετάσθηκαν σε 4-5 διαφορετικά διαλύματα. Αραίωση 1 U/L Αραίωση 2 U/L Αραίωση 3 U/L Αραίωση 4 U/L Αραίωση 5 U/L Μέσος όρος U/L No ,9 No ,6 No ,9 No ,5 No ,4 No ,3 No ,0 No ,8 No ,4 No ,4 SD U/L CV % 7.Ε. ΦΑΙΝΟΜΕΝΟ ΗΟΟΚ (Hook effect) Δεν εμφανίστηκε φαινόμενο ΗΟΟΚ σε ενεργότητες ασπαραγινάσης άνω των U/L. 7.Z. ΚΑΤΩΤΑΤΟ ΟΡΙΟ ΠΟΣΟΤΙΚΟΥ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ (LOQ) H μικρότερη συγκέντρωση που δύναται να προσδιορισθεί ανέρχεται στις 30 U/L. ΓΕΝΙΚΕΣ ΣΥΜΒΟΥΛΕΣ ΧΕΙΡΙΣΜΟΥ Προς αποφυγή επιμόλυνσης μην ανταλλάσετε τα πώματα των φιαλιδίων. Προς αποφυγή μικροβιακής επιμόλυνσης και εξάτμησης να κλείνετε τα αντιδραστήρια ερμητικά μετά την χρήση τους. Προς εξασφάλιση του αναγραφόμενου χρόνου ζωής του αντιδραστηρίου, μετά την χρήση του να φυλάσσεται ως συνίσταται. Προς αποφυγή ανάμιξης αντιδραστηρίων διαφορετικών κιτ ή παρτίδων, συνίσταται η τοποθέτηση και φύλαξη των αντιδραστηρίων που χρησιμοποιήθηκαν στο κουτί από το οποίο ελήφθησαν (βλ. και 3). 550-VPG/

13 ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ ΚΑΙ ΥΓΙΕΙΝΗΣ Θα πρέπει να ακολουθούνται οι καθορισμένοι κανόνες ασφάλειας και υγιεινής Παρόλο που τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης εξετάσθηκαν και βρέθηκαν αρνητικά για ΗBsAg, για αντισώματα έναντι του HIV-1/2 και του HCV, θα πρέπει να τα χειρίζεσθε ως δυνητικά μολυσματικά και να λαμβάνετε τις απαραίτητες προφυλάξεις. Ομοίως και για υλικά ζωικής προέλευσης (βλ.περιεχόμενα κιτ). ΑΠΟΡΡΙΨΗ Τα υπολείμματα του κιτ θεωρούνται ως επικύνδυνα απόβλητα, για τον λόγο αυτό η απόρριψή τους θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους εθνικούς και τοπικούς νόμους και κανονισμούς που υφίστανται. Επικοινωνήστε με τις τοπικές αρχές ή τις εταιρείες διαχείρησης αποβλήτων που θα σας δώσουν συμβουλές σχετικά με το πώς να απαλλαγείτε από επικύνδυνα απόβλητα. ημερομηνία σύνταξης: VPG/

14 Βιβλιογραφία Boos et al., Monitoring of asparaginase activity and asparagine levels in children on different asparaginase preparations; European Journal of Cancer, Vol. 32 A, No. 9, pp (1996). Boos J. medac Asparaginase-Activity-Test (MAAT): A new method to measure asparaginase activity; I-BFM-Meeting, Prag (2001). Lanvers et al., Analytical validation of a microplate reader-based method for the therapeutic drug monitoring of L-asparaginase in human serum; Analytical Biochemistry; 309, (2002). Mueller et al., Pegylated asparaginase (Oncaspar) in children with ALL: drug monitoring in reinduction according to the ALL/NHL-BFM protocols; British Journal of Hematology, 110, (2000). Riccardi R, Holcenberg JS, Glaubinger DL, et al., L-Asparaginase pharmacokinetics and asparagine levels in cerebrospinal fluid of rhesus monkeys and humans; Cancer Res; 41: (1981). 550-VPG/