Ταυτοποίηση αντισωμάτων έναντι των ερυθροκυτταρικών αντιγόνων

Transcript

1 Ταυτοποίηση αντισωμάτων έναντι των ερυθροκυτταρικών αντιγόνων ΦΟΥΝΤΟΥΛΗ ΚΑΛΛΙΟΠΗ, ΒΙΟΠΑΘΟΛΟΓΟΣ ΣΥΝΤΟΝΙΣΤΡΙΑ Δ/ΝΤΡΙΑ ΑΙΜΟΔΟΣΙΑΣ Πα.Γ.Ν.Ηρακλείου 1o ΠΑΝΕΛΛΗΝΙΟ ΣΥΝΕΔΡΙΟ ΙΑΤΡΙΚΗΣ ΒΙΟΠΑΘΟΛΟΓΙΑΣ Απριλίου 218 ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗΣ ΚΑΙ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗΣ ΑΝΤΙΕΡΥΘΡΟΚΥΤΤΑΡΙΚΩΝ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ

2 Ερυθροκυτταρικά αντιγόνα Σήμερα έχουν περιγραφεί 3 συστήματα, 35 γονίδια, 328 αντιγόνα, 114 αλλήλια και είναι γνωστοί όλοι οι πολυμορφισμοί αντιγόνων ομάδων αίματος. Από αυτά λιγότερα από 5 είναι πολυμορφικά, αλλά ακόμη λιγότερα μπορεί να προκαλέσουν την παραγωγή κλινικά σημαντικών αντισωμάτων

3 Εισαγωγή Φυσικά ή αναμενόμενα αντισώματα ΑΒΟ το μόνο σύστημα με αναμενόμενα αντισώματα αντι-α και/ή αντι-β Μη αναμενόμενα αντισώματα Είναι αποτέλεσμα προηγούμενων μεταγγίσεων, κυήσεων, μεταμόσχευσης ή από ενέσεις με ανοσογόνο υλικό. Ή σε ορισμένες περιπτώσεις, δεν μπορεί να εντοπιστεί κανένα συγκεκριμένο γεγονός ανοσοποίησης.

4 Εισαγωγή (συνέχεια) Μη αναμενόμενα αντισώματα μπορεί να βρεθούν σε ποσοστό.3% έως 2.8% του πληθυσμού, ανάλογα με τον πληθυσμό των ασθενών η δοτών που ελέγχουμε και την ευαισθησία της μεθόδου ανίχνευσης (albumin, LISS, PEG, μικροστήλες αιμοσυγκόλλησης η Solid-Phase test).

5 Μετάγγιση αίματος και μη αναμενόμενα ερυθροκυτταρικά αντισώματα 6% 5% Αλλοαντισώματα 18% Αντισώματα μη καθορισμένης σημασίας Αυτοαντισώματα 71% Παθητικά αντισώματα Transfusion 213;53:

6 Στόχος των διαδικασιών ταυτοποίησης αντισωμάτων Η ταυτοποίηση των αντισωμάτων που ανιχνεύονται στα screening tests έχει στόχο: Να καθορίσει αν αυτά τα αντισώματα είναι κλινικά σημαντικά Να εξασφαλίσει την διαθεσιμότητα συμβατών μονάδων RBCs για μετάγγιση.

7 ΑΑΒΒ 28: Κλινικά σημαντικό είναι το αντίσωμα που προκαλεί καταστροφή των αλλογενών ερυθρών British Commitee for Standards in Haematology (Chapman et al., 24) «Κλινικά σημαντικά είναι τα αντισώματα που προσθέτουν νοσηρότητα στον ασθενή λόγω βράχυνσης της επιβίωσης σημαντικού αριθμού των αλλογενών ερυθρών» Καταστροφή αλλογενών ερυθροκυττάρων και αιμολυτική αντίδραση συνδεόμενη με τη μετάγγιση Καταστροφή εμβρυικών ερυθροκυττάρων από IgG ερυθροκυτταρικά αντισώματα της μητέρας.

8 Η θερμοκρασία δραστικότητας του μη αναμενόμενου ερυθροκυτταρικού ab αποτελεί την 1 η ένδειξη της κλινικής του σημασίας Όταν αντιδρουν στους 37 ο C είναι δυνητικα σημαντικα και επιλεγεται μοναδα αρνητικη ως προς το Ag anti-a1 anti-m anti-n anti-lea anti-leb anti-lua anti-p1 anti-i Χωρις κλινικη σημασια όταν δεν είναι δραστικά στους 37 ο C Τα κλινικα σημαντικά abs συνήθως δρούν στους 37 C ή/και ανιχνεύονται με έμμεση δοκιμασία αντισφαιρινικού ορού(ιατ).

9 2 η ένδειξη κλινικής σημασίας για τα δρώντα στους 37 ο C είναι η ειδικότητα D>c>C>E>e>K>Jka/b>Fya/b>S/s(U)>M>N>HFAs Δραστικά στους 37 C / κλινικά σημαντικά Δραστικά στους 37 C / συνήθως αθώα Δραστικά στους 37 C / μερικές φορές κλινικά σημαντικά RH: D,C,c,E,e Kell: K,k Kidd: Jk a,jk b Duffy: Fy a,fy b MNS: S,s Bg Chido/ Rodgers Knops JMH Cs a Sd a Xg a Cartwright (Yt a ) Gerbich Dombrock Lutheran (Lu b ) Lan Landsteiner- Wiener

10 Antibody Panel vs. Screening test Το screening χρησιμοποιεί μόνο 2 η 3 κύτταρα (ανίχνευση μόνο) Ένα Panel αντισωμάτων είναι απλά μια διευρυμένη έκδοση του Screening αντισωμάτων για την ταυτοποίηση των abs

11 Panel ερυθροκυττάρων Συνήθως περιλαμβάνει 11 κύτταρα Τα δείγματα των ερυθρών Είναι προσεκτικά επιλεγμένα έτσι ώστε να αντιπροσωπεύουν όλα τα κλινικά σημαντικά ερυθροκυτταρικά αντιγόνα. Είναι ερυθροκύτταρα ομάδας O με διαφορετική αντιγονική έκφραση (D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1, Lea, Leb, K, k, Fya, Fyb, Jka and Jkb) ΓΙΑΤΙ ΕΡΥΘΡΑ ΟΜΑΔΟΣ Ο ;

12 ΦΑΙΝΟΤΥΠΟΙ PANEL CELLS

13 Panel ερυθροκυττάρων Ενα autocontrol θα πρέπει να μπαίνει σε ΌΛΑ τα panels ορός ή πλάσμα του ασθενούς + ερυθρά του ασθενούς

14 Panel ερυθροκυττάρων Τα δείγματα των ερυθρών Για το κάθε κλινικά σημαντικό αντίσωμα πρέπει να υπάρχουν τουλάχιστον δυο ερυθρά που φέρουν το αντίστοιχο αντιγόνο και τουλάχιστον δυο ερυθρά όπου το αντιγόνο δεν εκφράζεται. Μερικά αντισώματα είναι δοσοεξαρτώμενα και θα πρέπει να υπάρχει ομόζυγη έκφραση των αντιγόνων Duffy, Kidd, MNS και Rh. Από το σύστημα Rhesus,τα αντιγόνα C, c, E και e είναι δοσοεξαρτώμενα.

15 Dosage Effect Σύστημα Rhesus Το αντιγόνο D με την συνήθη έννοια δεν είναι δοσοεξαρτώμενο αφού το d δεν υπάρχει. Όμως, η ποσότητα του D αντιγόνου ποικίλει σημαντικά από άτομο σε άτομο με διαφορετικό Rhesus γονότυπο. Άτομα με γονότυπο R 1 r (DCe/dce) διαθέτουν σχετικά μικρό αριθμό D αντιγόνου ανά κύτταρο (1, - 15, D /RBC). Άτομα με γονότυπο R 2 R 2 (DcE/DcE) διαθέτουν σχετικά μεγάλο αριθμό D αντιγόνου ανά κύτταρο (16, - 33,5 D /RBC) Άτομα με γονότυπο R 1 R 2 (DCe/DcE) (23, - 31, D /RBC).

16 Panel ερυθροκυττάρων Τα δείγματα των ερυθρών Πρέπει να περιλαμβάνουν τουλάχιστον ένα δείγμα των φαινοτύπων R1R1 (CCDee) και R1wR1 (CwCDee) Πρέπει να υπάρχει τουλάχιστον από ένα κύτταρο με φαινότυπους R2R2 (ccdee), r r (Ccddee), r r (ccddee) και τουλάχιστον τρία κύτταρα με φαινότυπο rr(ccddee). Πρέπει να υπάρχει τουλάχιστον ένα Kell+ κύτταρο Το εσώκλειστο ένθετο θα πρέπει να αναφέρει την ύπαρξη κυττάρων με σπάνιο φαινότυπο. Το panel ερυθρών θα πρέπει να μπορεί να προσδιορίσει και την παρουσία μείγματος αντισωμάτων. Το profile των ερυθροκυττάρων είναι ειδικό για κάθε συσκευασία

17 Τεχνικές αναζήτηση αντισωμάτων Χρησιμοποιούνται διάφορες τεχνικές για την αναζήτηση αλλά και την ταυτοποίηση των αντισωμάτων. Όλες σκοπεύουν στην ανάδειξη κλινικά σημαντικών αντισωμάτων. Δεν υπάρχει ιδανική μέθοδος.

18 Τεχνικές αναζήτησης αντισωμάτων αντιδραστήρια Αντιδραστήριο Μηχανισμός δράσης Τεχνική Ανίχνευση αντισωμάτων Φυσιολογικός ορός 4-22o C(IgM)/άμεση φυγοκέντρηση 37οC(IgG/επώαση 45-6 IgM IgG Αντισφαιρινικός ορός (AHG) Προκαλεί ορατή συγκολληση ευαισθητοποιημένων με αντισώματα ερυθρών Αμεση δοκιμασία αντισφαιρινικού ορού (DAT) Έμμεση δοκιμασία αντισφαιρινικού ορού (ΙAT) Αλβουμίνη 22% Τροποποίση zeta δυναμικού Επώαση στους 37οC για 15-3 /ΙΑΤ IgG Πολυδύναμος(IgG και C3d) Μονοδύναμος(IgG) LISS Επιταχύνει την πρόσληψη του αντισώματος από τα ερυθρά Επώαση στους 37οC για 5-15 /ΙΑΤ IgG PEG Αφαιρεί νερό από το διάλυμα της αντίδρασης, συμπυκνώνει το αντίσωμα, αυξάνει την αλληλεπίδραση αντιγόνου/αντισώματος Επώαση στους 37οC για 1-3 /ΙΑΤ Δεν απαιτείται φυγοκέντρηση IgG Ενζυμα παπαίνη βρωμελίνη φυσίνη θρυψίνη Μειώνουν το αρνητικό φορτίο των ερυθρών Καταστρέφουν ή μειώνουν την έκφραση κάποιων αντιγόνων, ενώ ενισχύουν την έκφραση κάποιων άλλων Άμεση προσθήκη ενζύμου στο μείγμα ερυθρών/ορού -Χρήση ερυθρών επεξεργασμένων με ένζυμα Καταστρέφουν τα αντιγόνα ΜΝS, Duffy Ενισχύουν τα αντιγόνα Rh,Kidd,P,Lewis

19 Technology Column aggl. Solid phase red conventional tube Technology cell adherence Number of steps required 8 to to to 19 Washing step omitted one step multiple steps sample volume small small Larger Unitomity of testing in repeat testing Yes Yes Depends on technical skill of person putting up the test Clear and easily readable Variability in Yes Yes resoults interpretation detection og IgG abs Yes Yes Yes detection og IgM abs Yes No Yes detection of weaker expression of blood groups Yes Yes May detect Time taken to do ABO/D grouping (manual method) Antibody Screening Σύγκριση των τεχνολογιών που χρησιμοποιούνται στα ανοσοαιματολογικά τεστ it takes a minimum of 2 Faster method to do grouping Sensitivity for clinically Less than other better than CTT better than CTT Significant abs methods Sensitivity for clinically Significant abs 9-94% Aprox. 97% Aprox. 43% (Liss-IAT) Specificity 94,4% 94,3% 98,6%

20 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΝΤΙΕΡΥΘΡΟΚΥΤΤΑΡΙΚΩΝ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ Θερμικό εύρος δράσης Ειδικότητα Τάξη Υποτάξη Συγκέντρωση Ισχύς Ικανότητα να ενεργοποιούν το συμπλήρωμα υποτάξεις IgG Ευαισθησία ή αντοχή στα πρωτεολυτικά ένζυμα Επιλογή των κατάλληλων τεχνικών για ταυτοποίηση και κατευθύνουν ως προς την κλινική τους σημασία.

21 Antibody Μη αναμενόμενα αντισώματα Immunoglobulin Class Reactivity Papain /Ficin Associated with 4 C 22 C 37 C AHG HDN HTR Anti-M IgG > IgM Most Some Few Rare Sensitive Rare Rare Anti-N IgM > IgG Most Few Occ. Rare Sensitive No Rare Anti-S IgG > IgM Few Some Some Most Variable Yes Yes Anti-s IgG > IgM No Few Few Most Variable Yes Yes Anti-U IgG No Occ. Some Most Resistant Yes Yes Anti-P1 IgM (IgG rare) Most Most Resistant No Rare Anti-D IgG > IgM (IgA rare) Some Some Most Resistant Yes Yes Anti-C IgG > IgM Some Some Most Resistant Yes Yes Anti-E IgG > IgM Some Some Most Resistant Yes Yes Anti-c IgG > IgM Some Some Most Resistant Yes Yes Anti-e IgG > IgM Some Some Most Resistant Yes Yes Resistant or Anti-Lua IgM > IgG Some Most Few Most Rare No weakened Resistant or Anti-Lub IgG > IgM Few Few Few Most Mild Yes weakened Anti-K IgG > IgM Few Some Most Resistant Yes Yes Anti-k IgG > IgM Few Few Most Resistant Yes Yes Anti-Lea IgM > IgG Most Most Most Most Resistant No No Anti-Leb IgM > IgG Most Most Most Most Resistant No No Anti-Fya IgG > IgM Rare Rare Most Sensitive Yes Yes Anti-Fyb IgG > IgM Rare Rare Most Sensitive Yes Yes Anti-Jka IgG > IgM Few Few Most Resistant Yes Yes Anti-Jkb IgG > IgM Few Few Most Resistant Yes Yes

22 Συστήματα ερυθροκυτταρικών αντιγόνων /χαρακτηριστικά Abs 37 O C-AHG AHG RT AHG

23 Ευαισθησία στα πρωτεολυτικά ένζυμα Μειώνουν το επιφανειακό φορτίο των ερυθρών Αλλάζουν μερικές από τις αντιγονικές δομές των ερυθρών

24 Διαδικασία ελέγχου / Ταυτοποίηση 1. ΙΣΤΟΡΙΚΟ 2. ΑΥΤΟΚΟΝΤΡΟΛ 3. ΤΥΠΟΣ ΘΕΤΙΚΟΤΗΤΑΣ 4. ΑΠΟΚΛΕΙΣΜΟΣ 5. ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ 6. ΠΡΟΣΘΕΤΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ

25 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ 1. ΙΣΤΟΡΙΚΟ του ασθενούς Ηλικία, φύλο Φυλή Διάγνωση (Ιστορικό λεμφοϋπερπλαστικού ή αυτοάνοσου νοσήματος) Ιστορικό μεταγγίσεων / κυήσεων Ιστορικό μεταμόσχευσης Ιστορικό ενδοφλέβιας χορήγησης IVIG, RhIG, ALG Φάρμακα. Νέες θεραπείες-νέα εργαστηριακά προβλήματα; (περίπτωση του Daratumumab) Πρόσφατη μετάγγιση (αυτοκοντρόλ θετικό ή διπλός πληθυσμός, κλπ) Οικογενειακό ιστορικό δυσκολίας ανεύρεσης συμβατής μονάδος

26 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ 2. AUTOCONTROL Είναι σημαντικό να γνωρίζουμε πως αντιδρά ο ορός που ελέγχουμε με τα αυτόλογα ερυθρά. Εάν παρουσιάζεται θετικότητα μόνο με τα αλλογενή ερυθρά τότε ο ορός περιέχει μόνο αλλοαντισώματα. Παρουσία θετικότητας τόσο με τα αλλογενή όσο και με τα αυτόλογα ερυθρά μπορεί να σημαίνει παρουσία αυτοαντισώματος ή αυτοαντισώματος σε συνδυασμό με αλλοαντίσωμα ή και την παρουσία μεταγγισθέντων ερυθρών ευαισθητοποιημένων από αλλοαντίσωμα

27 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ 3. τύπος θετικότητας Αξιολογήστε και καταγράψτε τη διαφορετική ένταση των αντιδράσεων την έλλειψη μεταβλητότητας έντασης των αντιδράσεων τις αντιδράσεις σε διαφορετικές φάσεις του τεστ

28 Panel ερυθρών ακριβής καταγραφη αντιδράσεων IS/θ δωμ 37 C AHG

29 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ 4. αποκλεισμός Rh-hr Kell Kidd Duffy Lewis MNSs P LISS cell D C E c e K k Jk a Jk b Fy a Fy b Le a Le b M N S s P1 37ºC AHG Εντοπίστε τη γραμμή στην κορυφή του Panel που ορίζει τα αντιγόνα του κάθε συστήματος αντιγόνων αίματος. Μετακινηθείτε παράλληλα στη σειρά των αντιγόνων και διαγράψτε κάθε αντιγόνο (+) του panel το οποίο δεν έχει δώσει αντίδραση σε καμια φαση. Διαγράφω όλα τα αντιγόνα σε διπλή δόση που δεν αντιδρούν Δεν διαγραφουμε τα αντιγονα των Panel cells που είναι ετεροζυγα διότι το αντίσωμα μπορει να είναι ασθενες για να αντιδρασει

30 RBCs ασθενούς / Νόμος Landsteiner s Φαινοτύπιση των ερυθρών του ασθενούς Συγκρίνετε τον φαινότυπο με τα αποτελέσματα του panel. Αντιγόνα που δεν μπορει να διαγραφούν με αρνητικες αντιδρασεις στο panel συνήθως μπορεί να διαγραφούν εάν τα RBCs του ασθενούς διαθέτουν τα αντίστοιχα αντιγόνα. Τα άτομα ΔΕΝ κάνουν αλλοαντισώματα έναντι αντιγόνων που κατέχουν.

31 RBCs ασθενούς Αλλά θυμηθείτε: Τα αποτελέσματα της φαινοτύπισης είναι αναξιόπιστα αν προέρχονται από ασθενή: - που έχει πρόσφατα μεταγγιστεί με αλλογενή μεταμόσχευση stem cell με άμεση coombs (DAT) θετική (all red cells positive in the DAT will be positive in the IAT).

32 Ιδού ένα παράδειγμα:

33 Διαγραφή αντιγόνων που δεν αντιδρούν LISS Θ δωμ

34 Επισήμανση των αντιγόνων που δεν έχουν αποκλεισθεί Θ δωμ LISS

35 Σκεφτείτε τον συνήθη τρόπο αντίδρασης των abs Le a is normally a Cold-Reacting antibody (IgM) The E antigen will usually react at warmer temperatures LISS Θ δωμ

36 Ψάξτε αν κάποιο ταιριάζει Έλεγχος για σύνολο θετικοτήτων που ταιριάζουν με συγκεκριμένο ab E doesn t match and it s a warmer rx Ab Θ δωμ LISS

37 Ερμηνεία anti- Le a

38 Η ειδικότητα του αντισώματος επιβεβαιώνεται όταν : Ο ορός του ασθενή δίνει αντίδραση Θετική με 3 cells που εχουν το αντιγονο (κανόνας των «3») Ο ορός του ασθενή δίνει αντίδραση Αρνητική με 3 cells χωρίς το αντιγόνο (κανόνας των «3») Ο ασθενής δεν φέρει το αντίστοιχο αντιγόνο

39 Το προηγούμενο παράδειγμα πληροί τον κανόνα των «3» Ο ασθενής δεν φέρει το αντίστοιχο αντιγόνο 3 Positive cells 3 Negative cells Panel Cells 1, 4, and 7 είναι θετικά για το αντιγόνο και έδωσαν αντίδραση στην IS Panel Cells 8, 1, and 11 είναι αρνητικά για το αντιγόνο και δεν έδωσαν αντίδραση στην IS

40 Τι γίνεται αν είναι δύσκολη η ταυτοποίηση? Αν υπάρχουν πολλαπλά αντισώματα κι όχι ένα? Αν στο panel δεν υπαρχουν αρκετα κύτταρα ώστε να πληρούται ο κανόνας των «3»?

41 ΠΡΟΣΘΕΤΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ Διαδικασίες για τον εντοπισμό πολλαπλών abs Panel «Επιλεγμένων κυττάρων» Δοκιμασία εξουδετέρωσης Χημική επεξεργασία Proteolytic enzymes Sulfhydryl reagents ZZAP

42 ΠΡΟΣΘΕΤΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ 1 Δημιουργήστε και δοκιμάστε Panel "επιλεγμένων κυττάρων" Επιλέγουμε κύτταρα (flacon) από άλλα panel ή screening cells για να επιβεβαιώσουμε την ταυτότητα του αντισώματος η να διαγράψουμε ένα αντίσωμα. Η «επιλογή κυττάρων» από άλλα panels γίνεται με βάση τα χαρακτηριστικά τους.

43 Panel "επιλεγμένων κυττάρων" Ο αριθμός των κυττάρων που χρειάζονται εξαρτάται από το πόσα αντισώματα ανιχνεύονται. Κάθε κύτταρο με θετικό αντιγόνο για το ένα αντίσωμα, πρέπει να είναι αρνητικό για τα υπόλοιπα. Παράδειγμα: Σε ένα panel ανιχνεύονται 3 διαφορετικά πιθανά αντισώματα: anti-s, anti-jk a και anti-p 1 Επιλεγμένα κύτταρα που θα μπορούσαν να βοηθήσουν...

44 Panel "επιλεγμένων κυττάρων" Επιλεγμένα κύτταρα S Jk a P 1 IS LISS 37 AHG # # #8 + Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι αντί των 3 αντισωμάτων υπάρχουν 2 : τα anti-s και anti-jk a

45 ΠΡΟΣΘΕΤΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ 2 / Δοκιμασία εξουδετερωσης Εμπορικές ουσίες «substances» δεσμεύουν τα αντισώματα στον ορό του ασθενούς, ώστε να μην αντιδρούν με το αντίστοιχο αντιγόνο στο panel. P1 substance, Lea and Leb substance, I substance, Sda substance Πολλές από αυτές τις ουσίες εξουδετερώνουν τα cold antibodies Ιδιαίτερα χρήσιμη μέθοδος όταν συνυπάρχει στον ορό μη κλινικά σημαντικό ψυχρό αντίσωμα και κλινικά σημαντικό θερμό αντίσωμα

46 ΠΡΟΣΘΕΤΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ 3 / Χημική επεξεργασία Enzyme treated panel cells Τεχνική που χρησιμοποιείται για την απομάκρυνση αντιγόνων από την μεμβράνη των RBCs καταστρέφοντας το σιαλικό οξύ ή γλυκοπρωτεϊνες και «ενισχύοντας» άλλα αντιγόνα και μπορεί να είναι χρήσιμη εάν είναι περιορισμένα ή δεν είναι διαθέσιμα επιλεγμένα κύτταρα. Αντιγόνα που εξασθενούν: M, N, S, s, Duffy, Xga Αντιγόνα που ενισχύονται: Rh, Kidd, Lewis, I και P

47 Enzyme treatment Enzyme treament Anti-K Perfect match for anti-fy a Duffy antigens destroyed Kell antigens not affected

48 Dithiothreitol (DTT), 2-Mercaptoethanol (2-ME) Sulfhydryl Reagents Καταστρέφουν τους δισουλφιδικούς δεσμούς των IgM abs και επιτρέπουν την ανάδειξη των κλινικά σημαντικών IgG abs. Χρήσιμο όταν υπάρχουν και IgG και IgM αντισώματα (warm/cold) Χρήσιμο το DTT για την επίλυση της παρέμβασης του Daratumumab,το οποίο στοχεύοντας και στο CD38 αντιγόνο των ερυθρών (και πλασματοκυττάρων), δίνει εικόνα πανσυγκολλητίνης, στη δοκιμασία συμβατότητας αίματος. Το DTT αφαιρεί το CD38 αντιγόνο από την επιφάνεια του RBC και έτσι εξαλείφει την επίδραση της πανσυγκολλητίνης, επιτρέποντας την ακριβή εξέταση αλλοαντισώματος

49 ZZAP Ένας συνδυασμός πρωτεολυτικών ενζύμων και DTT. Μετουσιώνει Kell, M, N, S, Duffy και άλλα λιγοτερο συχνά ερυθροκυτταρικά αντιγόνα Δεν μετουσιώνει το Kx αντιγόνο Χρήσιμο σε τεχνικές προσρόφησης καθώς «ελευθερώνει" τα αυτοαντισώματα από τα κύτταρα του ασθενούς

50 ΠΡΟΣΘΕΤΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ Τεχνικές Προσρόφησης και Εκλουσης

51 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ Δύο Κατευθύνσεις RBCs ασθενούς + ορός ασθενούς ΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΗ ΠΛΗΡΟΦΟΡΗΣΗ

52 Εξελισσόμενες μέθοδοι στην immunohematology Τα τελευταία χρόνια έχουν εισαχθεί νέες τεχνολογίες που στοχεύουν στη βελτίωση των επιδόσεων και μερικές φορές στην εφαρμογή εναλλακτικών της συγκόλλησης μεθόδων. Η βελτίωση αυτή δεν περιορίζεται στην αναζήτηση μιας συνολικής αύξησης της ευαισθησίας της ειδικότητας. Λαμβάνει επίσης υπόψη την ικανότητα ανίχνευσης του «κλινικά σημαντικού» καθώς και τους περιορισμούς του ανθρώπινου λάθους, γεγονός που δικαιολογεί την εισαγωγή αυτοματοποίησης και μηχανοργάνωσης.

53 ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Εάν έχουν ταυτοποιηθεί κλινικά σημαντικά αλλοαντισώματα στον ασθενή, θα πρέπει να επιλεγεί για μετάγγιση, μονάδα αίματος αρνητική για το αντίστοιχο αντιγόνο Η ίδια τακτική ακολουθείται και για τους ασθενείς στους οποίους υπάρχει ιστορικό ύπαρξης αλλοαντισωμάτων στο παρελθόν, ακόμα και αν ο παρών έλεγχος είναι αρνητικός. Για τους ασθενείς με μη κλινικά σημαντικά αλλοαντισώματα ή αντισώματα έναντι αντιγόνων χαμηλής συχνότητας, αρκεί η συμβατή διασταύρωση στους 37 C Επίσης επειδή η διαδικασία ταυτοποίησης των αντισωμάτων χρειάζεται εμπειρία και γνώση των τεχνικών, η ύπαρξη ενός εργαστηρίου αναφοράς θα βοηθούσε στην επίλυση των δύσκολων περιπτώσεων.

54 Σας ευχαριστώ για την προσοχή σας!