Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON -TB Gold (QFT ) ELISA

Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON -TB Gold (QFT ) ELISA 2 x 96 (αρ. καταλόγου 0594-0201) 20 x 96 (αρ. καταλόγου 0594-0501) Εξέταση ολικού αίματος IFN-γ για τη μέτρηση της απάντησης στα πεπτιδικά αντιγόνα ESAT-6, CFP-10 και TB7.7(p4) Για in vitro διαγνωστική χρήση 0594-0201, 0594-0501 Cellestis, a QIAGEN Company Level 2, Office Tower 2, Chadstone Centre 1341 Dandenong Road, Chadstone, Victoria, 3148 Αυστραλία Αρ. τηλεφώνου: (Αυστραλία) +613-9840-9800 QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1 40724 Hilden, ΓΕΡΜΑΝΙΑ 1075115EL Αναθ. 01 www.quantiferon.com www.quantiferon.com

Περιεχόμενα 1. Προβλεπόμενη χρήση 4 2. Σύνοψη και επεξήγηση της εξέτασης 4 Αρχές της μεθόδου 5 Απαιτούμενος χρόνος για την εκτέλεση της ανάλυσης 5 3. Συστατικά και αποθήκευση 6 Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται 7 Αποθήκευση και χειρισμός 8 4. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις 9 Για in vitro διαγνωστική χρήση 9 Προειδοποιήσεις 9 Προφυλάξεις 10 5. Συλλογή και προετοιμασία δειγμάτων 12 6. Οδηγίες χρήσης 14 Στάδιο 1 Επώαση αίματος και συλλογή πλάσματος 14 Στάδιο 2 Ανάλυση ELISA για την ανθρώπινη IFN-γ 15 7. Υπολογισμοί και ερμηνεία αναλύσεων 19 Σχεδίαση της πρότυπης καμπύλης 19 Έλεγχος ποιότητας εξέτασης 19 8. Περιορισμοί 22 9. Χαρακτηριστικά απόδοσης 22 Κλινικές μελέτες 22 10. Τεχνικές πληροφορίες 25 Απροσδιόριστα αποτελέσματα 25 Θρομβωμένα δείγματα πλάσματος 25 Οδηγός αντιμετώπισης προβλημάτων 26 11. Βιβλιογραφία 28 12. Τεχνική υποστήριξη 30 13. Συνοπτική διαδικασία ανάλυσης 31 Στάδιο 1 επώαση αίματος 31 Στάδιο 2 Ανάλυση ELISA για την IFN-γ 31 Σημαντικές αλλαγές 33 Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA 07/2013 3

1. Προβλεπόμενη χρήση Η ανάλυση QuantiFERON-TB Gold (QFT ) είναι μια in vitro διαγνωστική εξέταση η οποία χρησιμοποιεί ένα μείγμα πεπτιδίων που μιμείται τις πρωτεΐνες ESAT-6, CFP-10 και TB7.7(p4) για να διεγείρει κύτταρα ηπαρινισμένου ολικού αίματος. Εκτελείται ανίχνευση ιντερφερόνης-γ (IFN-γ) μέσω μιας ενζυμικής μεθόδου ανοσοπροσρόφησης (ELISA) για τον προσδιορισμό της in vitro απάντησης σε αυτά τα πεπτιδικά αντιγόνα, τα οποία σχετίζονται με λοίμωξη από το Mycobacterium tuberculosis. Η QFT είναι μια εξέταση έμμεσης ανίχνευσης της λοίμωξης από M. tuberculosis (συμπεριλαμβανομένης και της νόσου) και προορίζεται για χρήση σε συνδυασμό με εκτιμήσεις κινδύνου, ακτινογραφικές εξετάσεις και άλλες ιατρικές και διαγνωστικές αξιολογήσεις. 2. Σύνοψη και επεξήγηση της εξέτασης Η φυματίωση είναι μεταδοτική νόσος που προκαλείται από μόλυνση από μικροοργανισμούς του συμπλέγματος M. tuberculosis (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum) και η οποία κατά κανόνα εξαπλώνεται σε νέους ξενιστές μέσω αερομεταφερόμενων πυρήνων σταγονιδίων από ασθενείς με πνευμονική φυματίωση. Αφού μολυνθεί, ένα άτομο μπορεί να ασθενήσει με φυματίωση μέσα σε μερικές εβδομάδες ή μήνες αλλά στις περισσότερες περιπτώσεις θα παραμείνει υγιές. Η λανθάνουσα λοίμωξη φυματίωσης (latent tuberculosis infection, LTBI), μια μη μεταδοτική ασυμπτωματική κατάσταση, επιμένει σε κάποια άτομα τα οποία ενδέχεται να αναπτύξουν ενεργή νόσο μερικούς μήνες ή και χρόνια αργότερα. Η διάγνωση της LTBI χρησιμεύει κυρίως στη λήψη απόφασης σχετικά με ενδεχόμενη χορήγηση φαρμακευτικής θεραπείας ώστε να αποφευχθεί η εκδήλωση ενεργής νόσου. Μέχρι πρόσφατα, η μοναδική μέθοδος διάγνωσης της LTBI ήταν η δερματική δοκιμασία φυματίνης (tuberculin skin test, TST ή εξέταση Mantoux). Δερματική ευαισθησία στη φυματίνη αναπτύσσεται από 2 έως 10 εβδομάδες μετά τη λοίμωξη. Ορισμένα μολυσμένα άτομα ωστόσο, όπως αυτά που πάσχουν από ένα ευρύ φάσμα παθήσεων οι οποίες διαταράσσουν τις ανοσολογικές λειτουργίες, αλλά και άτομα χωρίς τέτοιες παθήσεις, δεν αντιδρούν στη φυματίνη. Αντιστρόφως, κάποια άτομα με μικρές πιθανότητες μόλυνσης από M. tuberculosis παρουσιάζουν ευαισθησία στη φυματίνη και δίνουν θετικό αποτέλεσμα στη δοκιμασία TST μετά από εμβολιασμό με τον βάκιλλο Calmette-Guérin (BCG), μετά από μόλυνση από άλλα μυκοβακτηρίδια πλην αυτών του συμπλέγματος M. tuberculosis, ή λόγω άλλων απροσδιόριστων παραγόντων. Η LTBI πρέπει να διακρίνεται από την ενεργή φυματίωση, μια νόσο υποχρεωτικής δήλωσης η οποία προσβάλλει συνήθως τους πνεύμονες και το κατώτερο αναπνευστικό, αν και μπορεί να εκδηλωθεί και σε άλλα όργανα. Η διάγνωση ενεργής νόσου φυματίωσης γίνεται με βάση ευρήματα ιστορικού, αντικειμενικής εξέτασης, ακτινολογικά, ιστολογικά και μυκοβακτηριολογικά. Η ανάλυση QFT εξετάζει τις απαντήσεις κυτταροεξαρτώμενης ανοσίας (cell-mediated immunity, CMI) ενάντια σε πεπτιδικά αντιγόνα που μιμούνται τις μυκοβακτηριδιακές πρωτεΐνες. Αυτές οι πρωτεΐνες [ESAT-6, CFP-10 και TB7.7(p4)] απουσιάζουν από όλα τα στελέχη BCG και από τα περισσότερα μη φυματιώδη μυκοβακτηρίδια, εκτός από τα M. kansasii, M. szulgai και M. marinum.(1) Το αίμα των ατόμων που έχουν μολυνθεί από μικροοργανισμούς του συμπλέγματος M. tuberculosis συνήθως περιέχει λεμφοκύτταρα που αναγνωρίζουν αυτά και άλλα μυκοβακτηριδιακά αντιγόνα. Αυτή η διαδικασία αναγνώρισης περιλαμβάνει την παραγωγή και έκκριση της κυτοκίνης IFN-γ. Η ανίχνευση και ο επακόλουθος ποσοτικός προσδιορισμός της IFN-γ αποτελούν τη βάση για την ανάλυση αυτή. Τα αντιγόνα που χρησιμοποιούνται στην ανάλυση QFT είναι ένα μείγμα πεπτιδίων που μιμείται τις πρωτεΐνες ESAT-6, CFP-10 και TB7.7(p4). Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι αυτά τα πεπτιδικά αντιγόνα διεγείρουν απαντήσεις IFN-γ σε Τ κύτταρα ατόμων με μόλυνση από M. tuberculosis, αλλά συνήθως όχι και των ατόμων χωρίς μόλυνση ή των ατόμων που έχουν εμβολιαστεί με τον BCG και δεν εμφανίζουν νόσο ή κίνδυνο LTBI.(1 32) Ωστόσο, ορισμένες φαρμακευτικές αγωγές ή παθήσεις που επηρεάζουν τις ανοσολογικές λειτουργίες ενδέχεται να περιορίσουν τις απαντήσεις της IFN-γ. Οι ασθενείς με ορισμένες άλλες μυκοβακτηριδιακές λοιμώξεις ενδέχεται να παρουσιάσουν και αυτοί 4 Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON TB Gold (QFT) ELISA 07/2013

αντίδραση στις πρωτεΐνες ESAT-6, CFP-10 και TB7.7(p4), καθώς τα γονίδια που τις κωδικοποιούν βρίσκονται και στα M. kansasii, M. szulgai και M. marinum.(1, 23) Η ανάλυση QFT αποτελεί ταυτόχρονα εξέταση για την LTBI και χρήσιμο βοήθημα στη διάγνωση της μόλυνσης από μικροοργανισμούς του συμπλέγματος M. tuberculosis σε ασθενείς με ενεργή νόσο. Το θετικό αποτέλεσμα υποστηρίζει τη διάγνωση ενεργού νόσου φυματίωσης, αλλά θετικό αποτέλεσμα μπορεί να ληφθεί και μετά από μόλυνση από άλλα μυκοβακτηρίδια (π.χ. M. kansasii). Απαιτούνται και άλλες ιατρικές και διαγνωστικές αξιολογήσεις για να επιβεβαιωθεί ή να αποκλειστεί η ενεργή φυματίωση. Αρχές της μεθόδου Το σύστημα QFT χρησιμοποιεί εξειδικευμένα σωληνάρια αιμοληψίας, στα οποία συλλέγεται ολικό αίμα. Το αίμα επωάζεται μέσα στα σωληνάρια επί 16 έως 24 ώρες και στη συνέχεια το πλάσμα συλλέγεται και εξετάζεται ως προς την παρουσία IFN-γ η οποία παράγεται ως απάντηση στα πεπτιδικά αντιγόνα. Η ανάλυση QFT εκτελείται σε δύο στάδια. Αρχικά, συλλέγεται ολικό αίμα σε καθένα από τα σωληνάρια συλλογής αίματος της ανάλυσης QFΤ: ένα σωληνάριο μηδενικού μάρτυρα, ένα σωληνάριο αντιγόνου TB και ένα σωληνάριο μιτογόνου. Το σωληνάριο μιτογόνου μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως θετικός μάρτυρας στην ανάλυση QFT. Η χρήση του επιβάλλεται ιδιαίτερα στις περιπτώσεις όπου υπάρχουν αμφιβολίες ως προς την κατάσταση ανοσίας του ατόμου. Το σωληνάριο μιτογόνου μπορεί επίσης να λειτουργήσει ως μάρτυρας για την ορθότητα των χειρισμών και της επώασης του αίματος. Τα σωληνάρια θα πρέπει να επωαστούν στους 37 C το συντομότερο δυνατόν, εντός 16 ωρών από τη συλλογή του αίματος. Μετά από μια περίοδο επώασης διάρκειας 16 έως 24 ωρών, τα σωληνάρια φυγοκεντρούνται, το πλάσμα αφαιρείται και η ποσότητα της IFN-γ (IU/ml) προσδιορίζεται μέσω ELISA. Ένα δείγμα θεωρείται θετικό για την απάντηση IFN-γ όταν το σωληνάριο αντιγόνου TB δίνει αποτέλεσμα σημαντικά μεγαλύτερο από την τιμή IFN-γ του μηδενικού μάρτυρα σε IU/ml. Εάν χρησιμοποιηθεί δείγμα πλάσματος από το σωληνάριο μιτογόνου, τότε αυτό χρησιμεύει ως θετικός μάρτυρας IFN-γ για καθένα από τα εξεταζόμενα δείγματα. Οι χαμηλές απαντήσεις στο μιτογόνο (<0,5 IU/ml) συνιστούν απροσδιόριστο αποτέλεσμα όταν το δείγμα αίματος παρουσιάζει επίσης αρνητική απάντηση στα αντιγόνα TB. Τέτοιος συνδυασμός αποτελεσμάτων μπορεί να προκύψει εάν υπάρχουν ανεπαρκή λεμφοκύτταρα, μειωμένη λεμφοκυτταρική δραστηριότητα λόγω λανθασμένου χειρισμού του δείγματος, λανθασμένη πλήρωση/ανάμειξη του σωληναρίου μιτογόνου, ή αδυναμία των λεμφοκυττάρων του ασθενούς να παραγάγουν IFN-γ. Το μηδενικό δείγμα χρησιμεύει στη διόρθωση των αποτελεσμάτων για το υπόβαθρο, την επίδραση ετερόφιλων αντισωμάτων ή τη μη ειδική IFN-γ στα δείγματα αίματος. Το επίπεδο IFN-γ στο μηδενικό σωληνάριο αφαιρείται από το επίπεδο IFN-γ στο σωληνάριο αντιγόνου TB και το σωληνάριο μιτογόνου (εάν χρησιμοποιείται). Απαιτούμενος χρόνος για την εκτέλεση της ανάλυσης Παρακάτω υπολογίζεται ο χρόνος που απαιτείται για την ανάλυση QFT και αναφέρεται επίσης ο χρόνος για την ανάλυση πολλαπλών δειγμάτων σε παρτίδες: Επώαση σωληναρίων αίματος στους 37 C: 16 έως 24 ώρες ELISA: Περίπου 3 ώρες για μία πλάκα ELISA (28 έως 44 άτομα) <1 ώρα εργασίας Υπολογίστε άλλα 10 έως 15 λεπτά για κάθε επιπλέον πλάκα Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA 07/2013 5

3. Συστατικά και αποθήκευση Blood Collection Tubes (Σωληνάρια συλλογής αίματος)* 300 σωληνάρια 200 σωληνάρια 100 σωληνάρια Αρ. καταλόγου T0590-0301 0590-0201 T0593-0201 Αριθμός παρασκευών 100 100 100 QuantiFERON Nil Tube (σωληνάριο μηδενικού μάρτυρα) (γκρίζο πώμα, λευκός δακτύλιος) 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια QuantiFERON TB Antigen Tube (σωληνάριο αντιγόνου TB) (κόκκινο πώμα, λευκός δακτύλιος) QuantiFERON Mitogen Tube (σωληνάριο μιτογόνου) (μωβ πώμα, λευκός δακτύλιος) Ένθετο συσκευασίας σωληναρίων συλλογής αίματος QFT High Altitude (HA) Blood Collection Tubes (σωληνάρια συλλογής αίματος μεγάλου υψομέτρου) (για χρήση σε υψόμετρο μεταξύ 1.020 και 1.875 μέτρων)* 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια 1 1 1 300 σωληνάρια 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια Αρ. καταλόγου T0590-0505 0590-0501 T0593-0501 QuantiFERON HA Nil Tube (σωληνάριο μηδενικού μάρτυρα) (γκρίζο πώμα, κίτρινος δακτύλιος) QuantiFERON HA TB Antigen Tube (σωληνάριο αντιγόνου TB) (κόκκινο πώμα, κίτρινος δακτύλιος) QuantiFERON HA Mitogen Tube (σωληνάριο μιτογόνου) (μωβ πώμα, κίτρινος δακτύλιος) Ένθετο συσκευασίας σωληναρίων συλλογής αίματος QFT 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια 100 σωληνάρια 1 1 1 * Δεν διατίθενται όλες οι διαμορφώσεις προϊόντων σε κάθε χώρα. Συμβουλευτείτε το τμήμα εξυπηρέτησης πελατών της QIAGEN (για λεπτομέρειες βλ. www.qiagen.com) για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις διαμορφώσεις που είναι διαθέσιμες για παραγγελία. 6 Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON TB Gold (QFT) ELISA 07/2013

Συστατικά ανάλυσης ELISA Κιτ ELISA 2 πλακών Συσκευασία αναφοράς εργαστηρίου Αρ. καταλόγου 0594-0201 0594-0501 Σειρές μικροπλάκας (12 x 8 βυθίσματα) επικαλυμμένες με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού κατά της ανθρώπινης IFN-γ Human IFN-γ Standard, lyophilized (πρότυπο ανθρώπινης IFN-γ, λυόφιλο) (περιέχει ανασυνδυασμένη ανθρώπινη IFN-γ, καζεΐνη βοοειδούς, θιμεροσάλη 0,01% κ.ό.) 2 σετ με 12 σειρές μικροπλάκας των 8 βυθισμάτων 1 φιαλίδιο (8 IU/ml μετά την ανασύσταση) 20 σετ με 12 σειρές μικροπλάκας των 8 βυθισμάτων 10 φιαλίδια (8 IU/ml μετά την ανασύσταση) Green Diluent (πράσινο αραιωτικό) (περιέχει καζεΐνη βοοειδούς, φυσιολογικό ορό ποντικού, θιμεροσάλη 0,01% κ.ό.) 1 x 30 ml 10 x 30 ml Conjugate 100X Concentrate, lyophilized (συμπύκνωμα συζευγμένου μορίου 100X, λυόφιλο) (αντίσωμα ποντικού κατά της ανθρώπινης IFN-γ HRP, περιέχει θιμεροσάλη 0,01% κ.ό.) 1 x 0,3 ml (μετά την ανασύσταση) 10 x 0,3 ml (μετά την ανασύσταση) Wash Buffer 20X Concentrate (συμπύκνωμα ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης 20X) (ph 7,2, περιέχει ProClin 300 0,05% κ.ό.) Enzyme Substrate Solution (διάλυμα υποστρώματος ενζύμου) (περιέχει H 2 O 2, 3,3, 5,5 -τετραμεθυλοβενζιδίνη) 1 x 100 ml 10 x 100 ml 1 x 30 ml 10 x 30 ml Enzyme Stopping Solution (διάλυμα διακοπής 1 x 15 ml 10 x 15 ml ενζυμικής αντίδρασης) (περιέχει H 2 SO 4 0,5M) Ένθετο συσκευασίας QFT ELISA 1 1 Περιέχει θειικό οξύ. Βλ. προφυλάξεις στη σελ. 10. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται Επωαστήρας στους 37 C. Δεν απαιτείται CO 2. Βαθμονομημένες πιπέτες ρυθμιζόμενου όγκου για χορήγηση 10 µl έως 1.000 µl, με ρύγχη μίας χρήσης Βαθμονομημένη πολυκάναλη πιπέτα με δυνατότητα χορήγησης 50 µl και 100 µl, με ρύγχη μίας χρήσης Συσκευή ανακίνησης μικροπλακών Απιονισμένο ή αποσταγμένο νερό, 2 λίτρα Συσκευή έκπλυσης μικροπλακών (συνιστάται αυτόματη συσκευή) Συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών με φίλτρο 450 nm και φίλτρο αναφοράς 620 nm έως 650 nm Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA 07/2013 7

Αποθήκευση και χειρισμός Σωληνάρια συλλογής αίματος Αποθηκεύστε τα σωληνάρια συλλογής αίματος σε θερμοκρασία 4 C έως 25 C. Αντιδραστήρια του κιτ Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια του κιτ σε θερμοκρασία 2 C έως 8 C. Να προστατεύετε διαρκώς το διάλυμα υποστρώματος ενζύμου από το άμεσο ηλιακό φως. Ανασυσταθέντα και αχρησιμοποίητα αντιδραστήρια Για οδηγίες σχετικά με την ανασύσταση των αντιδραστηρίων, ανατρέξτε στην ενότητα 6 (σελίδα 15) Το ανασυσταθέν πρότυπο του κιτ μπορεί να διατηρηθεί μέχρι και για 3 μήνες εφόσον φυλάσσεται σε θερμοκρασία 2 C έως 8 C. Σημειώστε την ημερομηνία ανασύστασης του προτύπου του κιτ. Μετά την ανασύσταση, το αχρησιμοποίητο συμπύκνωμα συζευγμένου μορίου 100X πρέπει να επιστραφεί σε χώρο φύλαξης με θερμοκρασία 2 C έως 8 C και να χρησιμοποιηθεί εντός 3 μηνών. Σημειώστε την ημερομηνία ανασύστασης του διαλύματος συζευγμένου μορίου. Το διάλυμα εργασίας του συζευγμένου μορίου πρέπει να χρησιμοποιηθεί εντός 6 ωρών από την παρασκευή του. Το ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης σε συγκέντρωση εργασίας μπορεί να φυλαχθεί σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι και για 2 εβδομάδες. 8 Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON TB Gold (QFT) ELISA 07/2013

4. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση Προειδοποιήσεις Η λήψη αρνητικού αποτελέσματος στην ανάλυση QFT δεν αποκλείει το ενδεχόμενο μόλυνσης από M. tuberculosis ή ενεργού νόσου φυματίωσης: ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα ενδέχεται να οφείλονται στο στάδιο της μόλυνσης (π.χ. εάν το δείγμα ληφθεί προτού αναπτυχθεί η απάντηση κυτταροεξαρτώμενης ανοσίας), σε συννοσηρές παθήσεις που επηρεάζουν τις ανοσολογικές λειτουργίες, σε λανθασμένο χειρισμό των σωληναρίων συλλογής αίματος μετά τη φλεβοκέντηση, σε λανθασμένη εκτέλεση της ανάλυσης ή σε άλλες ανοσολογικές μεταβλητές. Ένα θετικό αποτέλεσμα στην ανάλυση QFT δεν θα πρέπει να αποτελεί το μοναδικό ή το καθοριστικό πειστήριο για την ανεύρεση μόλυνσης από M. tuberculosis. Η λανθασμένη εκτέλεση της ανάλυσης μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς θετικές απαντήσεις. Τυχόν θετικό αποτέλεσμα στην ανάλυση QFT θα πρέπει να ακολουθηθεί από περαιτέρω ιατρική και διαγνωστική αξιολόγηση για ενεργή νόσο φυματίωσης [π.χ. επίχρισμα και καλλιέργεια οξυάντοχων βακίλλων (AFB), ακτινογραφία θώρακα]. Οι πρωτεΐνες ESAT-6, CFP-10 και TB7.7(p4) απουσιάζουν από όλα τα στελέχη BCG και από τα περισσότερα γνωστά μη φυματιώδη μυκοβακτηρίδια, αλλά ένα θετικό αποτέλεσμα στην ανάλυση QFT δεν αποκλείεται να οφείλεται σε μόλυνση από M. kansasii, M. szulgai ή M. marinum. Εάν υποψιάζεστε το ενδεχόμενο τέτοιας μόλυνσης, ίσως θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν άλλες εναλλακτικές αναλύσεις. Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA 07/2013 9

Προφυλάξεις Αποκλειστικά για in vitro διαγνωστική χρήση. Κατά την εργασία με χημικά, φοράτε πάντα κατάλληλη προστατευτική ποδιά εργαστηρίου, γάντια μίας χρήσης και προστατευτικά γυαλιά. Για περισσότερες πληροφορίες, ανατρέξτε στα σχετικά δελτία δεδομένων ασφάλειας (SDS). Διατίθενται στο Διαδίκτυο σε εύχρηστη και συμπιεσμένη μορφή PDF, στην ιστοσελίδα www.qiagen.com/safety, όπου μπορείτε να βρείτε, να εμφανίσετε και να εκτυπώσετε τα SDS για όλα τα κιτ της QIAGEN καθώς και για τα συστατικά τους. ΠΡΟΣΟΧΗ: Να χειρίζεστε το ανθρώπινο αίμα ως δυνητικά μολυσματικό υλικό. Τηρήστε τις σχετικές κατευθυντήριες οδηγίες περί χειρισμού δειγμάτων αίματος. Οι παρακάτω φράσεις κινδύνου και ασφάλειας αφορούν τα συστατικά του κιτ QuantiFERON-TB Gold ELISA. Διάλυμα διακοπής ενζυμικής αντίδρασης QuantiFERON Xi Περιέχει θειικό οξύ: Ερεθιστικό. Φράσεις κινδύνου και ασφάλειας: R36/38, S26-36/37/39 Το πράσινο αραιωτικό περιέχει φυσιολογικό ορό ποντικού και καζεΐνη, τα οποία μπορούν να προκαλέσουν αλλεργικές αντιδράσεις αποφύγετε την επαφή με το δέρμα. Για επείγουσες καταστάσεις που αφορούν χημικές ουσίες Διαφυγή, διαρροή, έκθεση ή ατύχημα Καλέστε την CHEMTREC, ημέρα ή νύχτα Εντός των ΗΠΑ και του Καναδά: 1-800-424-9300 Εκτός των ΗΠΑ και του Καναδά: +1-703-527-3887 (δεκτές και κλήσεις με χρέωση του καλούμενου) Περισσότερες πληροφορίες Δελτία δεδομένων ασφαλείας: www.qiagen.com/safety Οι αποκλίσεις από τις οδηγίες στο ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA μπορούν να οδηγήσουν σε λανθασμένα αποτελέσματα. Διαβάστε προσεκτικά τις οδηγίες πριν τη χρήση. Μη χρησιμοποιήσετε το κιτ εάν κάποιο φιαλίδιο αντιδραστηρίου παρουσιάζει ενδείξεις ζημιάς ή διαρροής πριν τη χρήση. Μην αναμειγνύετε και μη χρησιμοποιείτε σειρές μικροπλάκας, πρότυπο ανθρώπινης IFN-γ, πράσινο αραιωτικό ή συμπύκνωμα συζευγμένου μορίου 100X από κιτ QFT διαφορετικών παρτίδων. Για τα υπόλοιπα αντιδραστήρια (συμπύκνωμα ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης 20X, διάλυμα υποστρώματος ενζύμου και διάλυμα διακοπής ενζυμικής αντίδρασης), μπορούν να χρησιμοποιηθούν διαλύματα από άλλα κιτ εφόσον δεν έχει παρέλθει η ημερομηνία λήξης και εφόσον καταγραφούν τα στοιχεία των παρτίδων. Απορρίψτε τα αχρησιμοποίητα αντιδραστήρια και τα βιολογικά δείγματα όπως ορίζουν οι τοπικοί και οι εθνικοί κανονισμοί. R36/38: Ερεθίζει τα μάτια και το δέρμα, S26: Σε περίπτωση επαφής με τα μάτια, πλύνετέ τα αμέσως με άφθονο νερό και ζητήστε ιατρική συμβουλή, S36/37/39: Να φοράτε κατάλληλη προστατευτική ενδυμασία, γάντια και μέσα προστασίας των ματιών/του προσώπου. 10 Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON TB Gold (QFT) ELISA 07/2013

Μη χρησιμοποιείτε τα σωληνάρια συλλογής αίματος και το κιτ ELISA μετά την ημερομηνία λήξης τους. Βεβαιωθείτε ότι ο εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως οι συσκευές έκπλυσης και ανάγνωσης πλακών, έχει βαθμονομηθεί και επικυρωθεί για χρήση. Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA 07/2013 11

5. Συλλογή και προετοιμασία δειγμάτων Η ανάλυση QFT χρησιμοποιεί τα εξής σωληνάρια συλλογής: 1. Σωληνάρια μηδενικού μάρτυρα QuantiFERON (γκρίζο πώμα με λευκό δακτύλιο, για χρήση σε υψόμετρα από 0 έως 810 m) 2. Σωληνάρια αντιγόνου TB (κόκκινο πώμα με λευκό δακτύλιο, για χρήση σε υψόμετρα από 0 έως 810 m) 3. Σωληνάρια μιτογόνου QuantiFERON (μωβ πώμα με λευκό δακτύλιο, για χρήση σε υψόμετρα από 0 έως 810 m) Σωληνάρια μεγάλου υψομέτρου (HA): 4. Σωληνάρια μηδενικού μάρτυρα HA QuantiFERON (γκρίζο πώμα με κίτρινο δακτύλιο, για χρήση σε υψόμετρα από 1.020 m έως 1.875 m) 5. Σωληνάρια αντιγόνου TB HA (κόκκινο πώμα με κίτρινο δακτύλιο, για χρήση σε υψόμετρα από 1.020 m έως 1.875 m) 6. Σωληνάρια μιτογόνου HA QuantiFERON (μωβ πώμα με κίτρινο δακτύλιο, για χρήση σε υψόμετρα από 1.020 m έως 1.875 m) Στο εσωτερικό τοίχωμα των σωληναρίων συλλογής αίματος υπάρχουν αποξηραμένα αντιγόνα, και συνεπώς το περιεχόμενο των σωληναρίων πρέπει να αναμιγνύεται σχολαστικά με το αίμα. Τα σωληνάρια πρέπει να τοποθετηθούν σε επωαστήρα στους 37 C το συντομότερο δυνατόν, εντός 16 ωρών από τη συλλογή του αίματος Για τα καλύτερα δυνατά αποτελέσματα θα πρέπει να ακολουθούνται οι παρακάτω διαδικασίες: 1. Για κάθε εξεταζόμενο, συλλέξτε μέσω φλεβοκέντησης 1 ml αίματος απευθείας στα σωληνάρια συλλογής αίματος QFT. Αυτή η διαδικασία πρέπει να εκτελείται από εκπαιδευμένο αιμολήπτη. Σε υψόμετρο μέχρι 810 μέτρων θα πρέπει να χρησιμοποιούνται τυπικά σωληνάρια συλλογής αίματος QFT. Σε υψόμετρο μεταξύ 1.020 και 1.875 μέτρων θα πρέπει να χρησιμοποιούνται σωληνάρια συλλογής αίματος μεγάλου υψομέτρου (HA) QFT. Εάν τα σωληνάρια συλλογής αίματος QFT χρησιμοποιούνται σε υψόμετρα εκτός των παρεχόμενων κλιμάκων ή εάν ληφθεί μικρός όγκος αίματος, μπορεί να συλλεχθεί αίμα με μια σύριγγα και να μεταφερθεί αμέσως 1 ml σε καθένα από τα τρία σωληνάρια. Για λόγους ασφάλειας, καλό είναι να γίνει αυτό με αφαίρεση της βελόνας της σύριγγας (σύμφωνα με τις κατάλληλες διαδικασίες ασφάλειας), αφαίρεση των πωμάτων από τα 3 σωληνάρια QFT και προσθήκη 1 ml αίματος σε καθένα από αυτά (μέχρι τη μαύρη ένδειξη στο πλάι της ετικέτας του σωληναρίου). Τοποθετήστε ξανά τα πώματα με ασφάλεια και αναμείξτε τα όπως περιγράφεται παρακάτω. Επειδή τα σωληνάρια του 1 ml αναρροφούν το αίμα σχετικά αργά, αφήστε το σωληνάριο πάνω στη βελόνα για 2 3 δευτερόλεπτα επιπλέον από τη στιγμή που το σωληνάριο θα φαίνεται να έχει γεμίσει, ώστε να βεβαιωθείτε ότι θα ληφθεί ο σωστός όγκος. Η μαύρη ένδειξη στο πλάι των σωληναρίων δείχνει τον όγκο πλήρωσης του 1 ml. Τα σωληνάρια συλλογής αίματος QFT έχουν επικυρωθεί για όγκους από 0,8 έως 1,2 ml. Εάν η στάθμη του αίματος σε κάποιο σωληνάριο δεν πλησιάζει στην ενδεικτική γραμμή, καλό είναι να ληφθεί νέο δείγμα αίματος. Εάν χρησιμοποιείται βελόνα τύπου πεταλούδας για την αιμοληψία, θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί ένα σωληνάριο εκκαθάρισης ώστε να διασφαλιστεί ότι η σωλήνωση έχει γεμίσει με αίμα προτού χρησιμοποιηθούν τα σωληνάρια συλλογής αίματος QFT. 12 Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON TB Gold (QFT) ELISA 07/2013

Εναλλακτικά, το αίμα μπορεί να συλλεχθεί σε ένα κοινό σωληνάριο με λιθιούχο ηπαρίνη ως αντιπηκτικό και κατόπιν να μεταφερθεί σε σωληνάρια QFT. Χρησιμοποιήστε αποκλειστικά λιθιούχο ηπαρίνη ως αντιπηκτικό αίματος καθώς τα άλλα αντιπηκτικά επηρεάζουν την ανάλυση. Γεμίστε ένα σωληνάριο συλλογής αίματος (ελάχιστος όγκος 5 ml) και ανακινήστε προσεκτικά αναστρέφοντας το σωληνάριο αρκετές φορές ώστε να διαλυθεί η ηπαρίνη. Το αίμα θα πρέπει να φυλαχθεί σε θερμοκρασία δωματίου (22 C ± 5 C) προτού μεταφερθεί στα σωληνάρια QFT για την επώαση, η οποία πρέπει να ξεκινήσει εντός 16 ωρών από την αιμοληψία. 2. Αμέσως μόλις γεμίσετε τα σωληνάρια, ανακινήστε τα δέκα (10) φορές αρκετά έντονα ώστε να βεβαιωθείτε ότι όλη η εσωτερική επιφάνεια του σωληναρίου έχει καλυφθεί με αίμα, προκειμένου να διαλυθούν τα αντιγόνα που βρίσκονται στα τοιχώματα του σωληναρίου, αλλά όχι εντονότερα από αυτό. Κατά τη στιγμή της πλήρωσης με αίμα, τα σωληνάρια θα πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία 17 25 C. Η υπερβολικά έντονη ανακίνηση μπορεί να προκαλέσει διάλυση του τζελ και θα μπορούσε να οδηγήσει σε αμφισβητούμενα αποτελέσματα. Εάν το αίμα έχει συλλεχθεί σε σωληνάριο ηπαρίνης, τα δείγματα πρέπει να αναμειχθούν ομοιόμορφα προτού μεταφερθούν σε σωληνάρια QFT. Βεβαιωθείτε ότι το αίμα έχει αναμειχθεί σχολαστικά με προσεκτική αναστροφή ακριβώς πριν τη μεταφορά. Μεταφέρετε κλάσματα του 1,0 ml (ένα για κάθε σωληνάριο QFT) σε κατάλληλα σωληνάρια μηδενικού μάρτυρα, αντιγόνου TB και μιτογόνου. Καλό είναι να γίνει αυτό με άσηπτη τεχνική, σύμφωνα με τις κατάλληλες διαδικασίες ασφάλειας, με αφαίρεση των πωμάτων από τα τρία σωληνάρια QFT και προσθήκη 1 ml αίματος σε καθένα από αυτά (μέχρι τη μαύρη ένδειξη στο πλάι της ετικέτας του σωληναρίου). Τοποθετήστε ξανά τα πώματα των σωληναρίων με ασφάλεια και αναμείξτε τα όπως περιγράφεται παραπάνω. 3. Επισημάνετε κατάλληλα τα σωληνάρια. Βεβαιωθείτε ότι όλα τα σωληνάρια (μηδενικού μάρτυρα, αντιγόνου TB, μιτογόνου) μπορούν να αναγνωριστούν από την ετικέτα τους ή με άλλο τρόπο αφού αφαιρεθεί το πώμα. 4. Μετά την πλήρωση, την ανακίνηση και την επισήμανση, τα σωληνάρια πρέπει να τοποθετηθούν σε επωαστήρα στους 37 C ± 1 C το συντομότερο δυνατόν, εντός 16 ωρών από τη συλλογή του αίματος. Πριν από την επώαση, φυλάξτε τα σωληνάρια σε θερμοκρασία δωματίου (22 C ± 5 C). Μην ψύχετε και μην καταψύχετε τα δείγματα αίματος. Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA 07/2013 13

6. Οδηγίες χρήσης Στάδιο 1 Επώαση αίματος και συλλογή πλάσματος Υλικά που παρέχονται Σωληνάρια συλλογής αίματος QFT (βλ. ενότητα 3). Υλικά που απαιτούνται (αλλά δεν παρέχονται) Βλ. ενότητα 3. Διαδικασία 1. Εάν το αίμα δεν επωαστεί αμέσως μετά τη συλλογή, θα πρέπει να γίνει ξανά ανάμειξη των σωληναρίων με αναστροφή τους για 10 φορές, ακριβώς πριν την επώαση. 2. Επωάστε τα σωληνάρια σε ΚΑΤΑΚΟΡΥΦΗ θέση, στους 37 C ± 1 C, για 16 έως 24 ώρες. Για την επώαση δεν απαιτείται ούτε CO 2 ούτε ύγρανση. 3. Μετά την επώαση στους 37 C, τα σωληνάρια συλλογής αίματος μπορούν να φυλαχθούν σε θερμοκρασία μεταξύ 4 C και 27 C μέχρι και για 3 ημέρες πριν από τη φυγοκέντρηση. 4. Μετά την επώαση των σωληναρίων στους 37 C, η συλλογή του πλάσματος διευκολύνεται με φυγοκέντρηση των σωληναρίων επί 15 λεπτά με ταχύτητα 2.000 έως 3.000 RCF (g). Το βύσμα γέλης θα διαχωρίσει τα κύτταρα από το πλάσμα. Εάν δεν συμβεί αυτό, τα σωληνάρια πρέπει να φυγοκεντρηθούν ξανά σε υψηλότερη ταχύτητα. Το πλάσμα μπορεί να συλλεχθεί και χωρίς φυγοκέντρηση, αλλά απαιτείται αυξημένη προσοχή ώστε να αφαιρεθεί το πλάσμα χωρίς να διαταραχθούν τα κύτταρα. 5. Τα δείγματα πλάσματος θα πρέπει να συλλέγονται αποκλειστικά και μόνο με πιπέτα. Μετά τη φυγοκέντρηση, αποφύγετε την παλινδρόμηση του υγρού κατά την αναρρόφηση και γενικά την ανάδευση του πλάσματος κατ' οποιονδήποτε τρόπο πριν τη συλλογή. Να φροντίζετε πάντοτε να μη διαταράσσετε το υλικό που βρίσκεται στην επιφάνεια της γέλης. Τα δείγματα πλάσματος μπορούν να φορτωθούν απευθείας από τα φυγοκεντρημένα σωληνάρια συλλογής αίματος στην πλάκα QFT ELISA, ακόμα και όταν χρησιμοποιούνται αυτοματοποιημένοι σταθμοί εργασίας ELISA. Τα δείγματα πλάσματος μπορούν να φυλαχθούν μέχρι και για 28 ημέρες σε θερμοκρασία 2 C έως 8 C ή σε θερμοκρασία μικρότερη των -20 C για παρατεταμένη χρονική περίοδο εφόσον έχει συλλεχθεί το πλάσμα. Για να εξασφαλιστεί η επάρκεια των δειγμάτων, συλλέξτε τουλάχιστον 150 µl πλάσματος. 14 Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON TB Gold (QFT) ELISA 07/2013

Στάδιο 2 Ανάλυση ELISA για την ανθρώπινη IFN-γ Υλικά που παρέχονται Κιτ ELISA QFT (βλ. ενότητα 3). Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται Βλ. ενότητα 3. Διαδικασία 1. Όλα τα δείγματα πλάσματος και τα αντιδραστήρια, εκτός από το συμπύκνωμα συζευγμένου μορίου 100X, πρέπει να φθάσουν σε θερμοκρασία δωματίου (22 C ± 5 C) πριν τη χρήση. Αφήστε να περάσουν τουλάχιστον 60 λεπτά για εξισορρόπηση. 2. Αφαιρέστε τις περιττές σειρές από το πλαίσιο, σφραγίστε ξανά τη θήκη αλουμινίου και τοποθετήστε την ξανά στο ψυγείο για φύλαξη μέχρι την επόμενη χρήση. Χρησιμοποιήστε τουλάχιστον 1 σειρά για τα πρότυπα QFT και επαρκή αριθμό σειρών για τον αριθμό των εξεταζόμενων ατόμων (βλ. Εικόνες 2A και 2B για τους τύπους 3 σωληναρίων και 2 σωληναρίων αντίστοιχα). Μετά τη χρήση, φυλάξτε το πλαίσιο και το καπάκι για χρήση με τις υπόλοιπες σειρές. 3. Ανασυστήστε το λυόφιλο πρότυπο του κιτ με τον όγκο απιονισμένου ή αποσταγμένου νερού που αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου του προτύπου. Αναμείξτε ήπια ώστε να περιοριστεί στο ελάχιστο ο σχηματισμός αφρού και να διασφαλιστεί πλήρης επαναδιαλυτοποίηση. Η ανασύσταση του προτύπου μέχρι τον καθορισμένο όγκο θα δώσει ένα διάλυμα με συγκέντρωση 8,0 IU/ml. Σημείωση: Ο όγκος ανασύστασης του προτύπου του κιτ διαφέρει ανάλογα με την παρτίδα. Χρησιμοποιήστε το ανασυσταθέν πρότυπο του κιτ για να σχηματίσετε μια σειρά αραιώσεων IFN-γ σε πράσινο αραιωτικό (GD) σε αναλογία 1 προς 4 (βλ. Εικ. 1). Το πρότυπο S1 (Πρότυπο 1) περιέχει 4 IU/ml, το S2 (Πρότυπο 2) περιέχει 1 IU/ml, το S3 (Πρότυπο 3) περιέχει 0,25 IU/ml και το S4 (Πρότυπο 4) περιέχει 0 IU/ml (GD μόνο). Τα πρότυπα πρέπει να αναλύονται τουλάχιστον εις διπλούν. Συνιστώμενη διαδικασία για διπλά πρότυπα α. Επισημάνετε 4 σωληνάρια ως «S1», «S2», «S3», «S4». Συνιστώμενη διαδικασία για τριπλά πρότυπα α. Επισημάνετε 4 σωληνάρια ως «S1», «S2», «S3», «S4». β. Προσθέστε 150 µl GD στα S1, S2, S3, S4. β. Προσθέστε 150 µl GD στο S1. γ. Προσθέστε 150 µl του προτύπου του κιτ στο S1 και αναμείξτε καλά. δ. Μεταφέρετε 50 µl από το S1 στο S2 και αναμείξτε καλά. ε. Μεταφέρετε 50 µl από το S2 στο S3 και αναμείξτε καλά. στ. Ένα σωληνάριο με GD μόνο θα χρησιμοποιηθεί ως μηδενικό πρότυπο (S4). γ. Προσθέστε 210 µl GD στα S2, S3, S4. δ. Προσθέστε 150 µl του προτύπου του κιτ στο S1 και αναμείξτε καλά. ε. Μεταφέρετε 70 µl από το S1 στο S2 και αναμείξτε καλά. στ. Μεταφέρετε 70 µl από το S2 στο S3 και αναμείξτε καλά. ζ. Ένα σωληνάριο με GD μόνο θα χρησιμοποιηθεί ως μηδενικό πρότυπο (S4). Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA 07/2013 15

150 µl 50 µl 50 µl Ανασυσταθέν πρότυπο του κιτ Πρότυπο 1 4,0 IU/ml Πρότυπο 2 1,0 IU/ml Πρότυπο 3 0,25 IU/ml Πρότυπο 4 0 IU/ml (πράσινο αραιωτικό) Εικόνα 1. Προετοιμασία της πρότυπης καμπύλης. Παρασκευάστε νέες αραιώσεις του προτύπου του κιτ για κάθε περίοδο εργασίας ELISA. 4. Ανασυστήστε το λυόφιλο συμπύκνωμα συζευγμένου μορίου 100X με 0,3 ml απιονισμένου ή αποσταγμένου νερού. Αναμείξτε ήπια ώστε να περιοριστεί στο ελάχιστο ο σχηματισμός αφρού και να διασφαλιστεί πλήρης διαλυτοποίηση του συζευγμένου μορίου. Η συγκέντρωση εργασίας του συζευγμένου μορίου παρασκευάζεται με αραίωση της απαιτούμενης ποσότητας ανασυσταθέντος συμπυκνώματος συζευγμένου μορίου 100X σε πράσινο αραιωτικό, όπως περιγράφεται στον Πίνακα 1 Παρασκευή συζευγμένου μορίου. Πίνακας 1. Παρασκευή συζευγμένου μορίου Αριθμός σειρών Όγκος συμπυκνώματος συζευγμένου μορίου 100X Όγκος πράσινου αραιωτικού 2 10 µl 1,0 ml 3 15 µl 1,5 ml 4 20 µl 2,0 ml 5 25 µl 2,5 ml 6 30 µl 3,0 ml 7 35 µl 3,5 ml 8 40 µl 4,0 ml 9 45 µl 4,5 ml 10 50 µl 5,0 ml 11 55 µl 5,5 ml 12 60 µl 6,0 ml Αναμείξτε σχολαστικά αλλά ήπια ώστε να αποφευχθεί ο σχηματισμός αφρού. Επιστρέψτε το αχρησιμοποίητο συμπύκνωμα συζευγμένου μορίου 100X στους 2 C έως 8 C αμέσως μετά τη χρήση. Χρησιμοποιήστε αποκλειστικά πράσινο αραιωτικό. 16 Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON TB Gold (QFT) ELISA 07/2013

5. Τα δείγματα πλάσματος που λαμβάνονται από τα σωληνάρια συλλογής αίματος και κατόπιν καταψύχονται ή φυλάσσονται επί περισσότερες από 24 ώρες πριν την ανάλυση πρέπει να ανακινούνται σχολαστικά προτού προστεθούν στο βύθισμα ELISA. Εάν τα δείγματα πλάσματος πρόκειται να προστεθούν απευθείας από τα φυγοκεντρημένα σωληνάρια QFT, θα πρέπει να αποφευχθεί οποιαδήποτε ανακίνηση του πλάσματος. 6. Προσθέστε 50 µl πρόσφατα παρασκευασμένου διαλύματος συζευγμένου μορίου σε συγκέντρωση εργασίας στα απαιτούμενα βυθίσματα ELISA, χρησιμοποιώντας πολυκάναλη πιπέτα. 7. Προσθέστε 50 µl από κάθε εξεταζόμενο δείγμα πλάσματος στα κατάλληλα βυθίσματα, χρησιμοποιώντας πολυκάναλη πιπέτα (ανατρέξτε στη συνιστώμενη διάταξη πλάκας στη σελίδα 17 και 17, Εικόνα 2A και 2B). Τέλος, προσθέστε 50 µl από καθένα από τα πρότυπα 1 έως 4. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1N 1A 1M S1 S1 S1 13N 13A 13M 21N 21A 21M B 2N 2A 2M S2 S2 S2 14N 14A 14M 22N 22A 22M C 3N 3A 3M S3 S3 S3 15N 15A 15M 23N 23A 23M D 4N 4A 4M S4 S4 S4 16N 16A 16M 24N 24A 24M E 5N 5A 5M 9N 9A 9M 17N 17A 17M 25N 25A 25M F 6N 6A 6M 10N 10A 10M 18N 18A 18M 26N 26A 26M G 7N 7A 7M 11N 11A 11M 19N 19A 19M 27N 27A 27M Η 8N 8A 8M 12N 12A 12M 20N 20A 20M 28N 28A 28M Εικόνα 2A. Συνιστώμενη διάταξη δειγμάτων για τα σωληνάρια μηδενικού μάρτυρα, αντιγόνου TB και μιτογόνου (28 αναλύσεις ανά πλάκα). S1 (Πρότυπο 1), S2 (Πρότυπο 2), S3 (Πρότυπο 3), S4 (Πρότυπο 4) 1N (Δείγμα 1. Μηδενικό πλάσμα), 1A (Δείγμα 1. Πλάσμα αντιγόνου TB), 1M (Δείγμα 1. Πλάσμα μιτογόνου) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 1N 5N 9N 13N 17N S1 S1 25N 29N 33N 37N 41N B 1A 5A 9A 13A 17A S2 S2 25A 29A 33A 37A 41A C 2N 6N 10N 14N 18N S3 S3 26N 30N 34N 38N 42N D 2A 6A 10A 14A 18A S4 S4 26A 30A 34A 38A 42A E 3N 7N 11N 15N 19N 21N 23N 27N 31N 35N 39N 43N F 3A 7A 11A 15A 19A 21A 23A 27A 31A 35A 39A 43A G 4N 8N 12N 16N 20N 22N 24N 28N 32N 36N 40N 44N Η 4A 8A 12A 16A 20A 22A 24A 28A 32A 36A 40A 44A Εικόνα 2B. Συνιστώμενη διάταξη δειγμάτων για τα σωληνάρια μηδενικού μάρτυρα και αντιγόνου TB (44 αναλύσεις ανά πλάκα). S1 (Πρότυπο 1), S2 (Πρότυπο 2), S3 (Πρότυπο 3), S4 (Πρότυπο 4) 1N (Δείγμα 1. Μηδενικό πλάσμα), 1A (Δείγμα 1. Πλάσμα αντιγόνου TB) Ένθετο συσκευασίας QuantiFERON-TB Gold (QFT) ELISA 07/2013 17