ΚΙΤ BACTEC MGIT 960 PZA

B ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA είναι μια ταχεία ποιοτική διαδικασία για εξετάσεις ευαισθησίας Mycobacterium tuberculosis, από καλλιέργεια, στην πυραζιναμίδη (PZA). Το Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA χρησιμοποιείται με το Σύστημα BACTEC MGIT. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ Ο έλεγχος ευαισθησίας στα αντιφυματικά φάρμακα είναι χρήσιμος για την κατάλληλη θεραπεία ασθενών με φυματίωση. Η θεραπεία της φυματίωσης γίνεται συνήθως με φαρμακευτική αγωγή πολλαπλών φαρμάκων που περιλαμβάνουν και το αντιμυκοβακτηριακό φάρμακο πυραζιναμίδη. Είναι σημαντικό τα συνταγογραφούμενα αντιμυκοβακτηριακά φάρμακα να εμφανίζουν την κατάλληλη δραστηριότητα κατά του Mycobacterium tuberculosis, δηλ. ευαισθησία του απομονωμένου στελέχους στο φάρμακο. Το Mycobacterium tuberculosis (MDR-TB) που παρουσιάζει αντοχή σε πολλαπλά φάρμακα έχει καταστεί τελευταία σοβαρό πρόβλημα για τη δημόσια υγεία.1 Η αντοχή σε οποιοδήποτε από τα κύρια φάρμακα, όπως η πυραζιναμίδη, καθιστά δυσκολότερη και πιο πολυδάπανη τη θεραπεία της νόσου. Η ταχεία ανίχνευση αυτών των ανθεκτικών απομονωμένων στελεχών είναι κρίσιμη για την αποτελεσματική αντιμετώπιση των ασθενών. Στον έλεγχο ευαισθησίας στα αντιφυματικά φάρμακα έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως δύο μέθοδοι. Η πρώτη μέθοδος, που είναι γνωστή ως Μέθοδος των Αναλογιών,2 χρησιμοποιεί Άγαρ Middlebrook and Cohn 7H10. Με τη μέθοδο αυτή συγκρίνονται οι μετρήσεις αποικιών σε υλικά που περιέχουν και δεν περιέχουν φάρμακο. Η εξέταση της πυραζιναμίδης απαιτεί κάποιες τροποποιήσεις σε σχέση με τις γενικές μεθόδους, γιατί το φάρμακο είναι ενεργό in vitro μόνο σε χαμηλότερες τιμές ph.3 Μια τροποποίηση στη μέθοδο των αναλογιών αναπτύχθηκε χρησιμοποιώντας υλικό άγαρ 7H10 σε ph 5,5, με συγκέντρωση φαρμάκου 25 50 µg/ml.4 Ένας περιορισμός της μεθόδου έγκειται στο ότι πολλά απομονωμένα στελέχη M. tuberculosis δεν αναπτύσσονται ή αναπτύσσονται ασθενώς σε ph 5,5. Οι μέθοδοι που βασίζονται σε άγαρ, όπως η μέθοδος αναλογιών άγαρ, δεν έχουν αποδειχθεί ικανοποιητικές στην εξέταση ευαισθησίας PZA λόγω της αποτυχίας πολλών απομονωμένων στελεχών να αναπτυχθούν όταν το άγαρ έχει καταστεί όξινο για την εξέταση PZA. Η δεύτερη μέθοδος, που είναι γνωστή ως ραδιομετρική μέθοδος ευαισθησίας BACTEC 460TB,5 βασίζεται στην παραγωγή ραδιενεργού 14C σημασμένου διοξειδίου του άνθρακα από τα αναπτυσσόμενα μυκοβακτήρια, που εκδηλώνεται στο σύστημα με μια αύξηση του Δείκτη Ανάπτυξης. Μια τροποποίηση της μεθόδου ευαισθησίας BACTEC 460TB αναπτύχθηκε χρησιμοποιώντας ένα τροποποιημένο ραδιομετρικό υλικό 7H12, το Υλικό Εξέτασης BACTEC PZA, με μειωμένο ph 6,0.6 Σε αυτό το ph, η δραστηριότητα PZA κατά των μυκοβακτηρίων μπορεί να προσδιοριστεί χωρίς αναστολή της ανάπτυξης των περισσότερων απομονωμένων στελεχών M. tuberculosis. Η εξέταση ευαισθησίας BACTEC 460TB PZA χρησιμοποιεί συγκέντρωση φάρμακου πυραζιναμίδης ίση με 100 µg/ml. Η εξέταση ευαισθησίας στο Σύστημα BACTEC 460TB έχει αποδειχθεί ικανοποιητική και θεωρείται σήμερα η μέθοδος αναφοράς για εξέταση ευαισθησίας PZA. Το Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI πρώην NCCLS) εξακολουθεί να συνιστά την συμπερίληψη δύο συγκεντρώσεων των κύριων φαρμάκων για εξέταση με τη διαδικασία εξέτασης MOP, εξαιρουμένης της ριφαμπίνης.2 Η χρήση του Οργάνου BACTEC MGIT σε συνδυασμό με το κιτ BACTEC MGIT 960 PZA αποτελεί μια μη ραδιομετρική μέθοδο για τον προσδιορισμό αντιμυκοβακτηριακής ευαισθησίας στην PZA. Το Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA έχει αναπτυχθεί ώστε να επιτρέπει την εξέταση ευαισθησίας σε συγκέντρωση πυραζιναμίδης 100 µg/ml. Αυτή η συγκέντρωση συσχετίζεται με τη συγκέντρωση που χρησιμοποιείται στο Σύστημα BACTEC 460TB. ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA είναι ένα σωληνάριο που περιέχει τροποποιημένο Ζωμό Middlebrook 7H9, το οποίο υποστηρίζει την ανάπτυξη και ανίχνευση μυκοβακτηρίων. Το σωληνάριο με Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA περιέχει μια φθορίζουσα ένωση ενσωματωμένη σε σιλικόνη στον πυθμένα ενός σωληναρίου 16 x 100 mm με στρογγυλό πυθμένα. Η φθορίζουσα ένωση είναι ευαίσθητη στην παρουσία του οξυγόνου που διαλύεται στο ζωμό. Η αρχική συγκέντρωση του διαλυμένου οξυγόνου σβήνει την εκπομπή από την ένωση και είναι δυνατή η ανίχνευση ελάχιστου φθορισμού. Αργότερα, ενεργά αναπτυσσόμενοι και ανεπνέοντες μικροοργανισμοί καταναλώνουν το οξυγόνο και επιτρέπεται ο φθορισμός της ένωσης. Το Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA είναι μια ποιοτική εξέταση 4 21 ημερών. Η εξέταση βασίζεται στην ανάπτυξη του απομονωμένου στελέχους M. tuberculosis σε ένα σωληνάριο που περιέχει φάρμακο και συγκρίνεται με ένα σωληνάριο που δεν περιέχει φάρμακο (Μάρτυρας Ανάπτυξης). Το όργανο BACTEC MGIT παρακολουθεί τα σωληνάρια για αυξημένο φθορισμό. Η ανάλυση του φθορισμού σε ένα σωληνάριο που περιέχει φάρμακο σε σύγκριση με το φθορισμό του σωληναρίου Μάρτυρα Ανάπτυξης χρησιμοποιείται από το όργανο για να προσδιορίσει τα αποτελέσματα ευαισθησίας. Το όργανο BACTEC MGIT ερμηνεύει αυτόματα αυτά τα αποτελέσματα και αναφέρει αποτέλεσμα ευαισθησίας ή αντοχής. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΙΤ BACTEC MGIT 960 PZA Έλεγχος ευαισθησίας του Mycobacterium tuberculosis στα αντιφυματικά φάρμακα Το σωληνάριο με Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA περιέχει 110 µl δείκτη φθορισμού και 7 ml ζωμό PZA. Ο δείκτης περιέχει Tris 4,7-διφαινυλ-1, 10-φαινανθρολίνη χλωριούχο πενταυδροξείδιο ρουθενίου σε ελαστική βάση σιλικόνης. Τα σωληνάρια είναι πωματισμένα με πώμα πολυπροπυλενίου. Κατά προσέγγιση σύσταση* ανά L κεκαθαρμένου νερού: Τροποποιημένος ζωμός Middlebrook 7H9... 5,9 g Πεπτόνη καζεΐνης... 1,25 g Το Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA περιέχει δύο λυοφιλοποιημένα φιαλίδια πυραζιναμίδης και έξι φιαλίδια Συμπληρώματος PZA. Κατά προσέγγιση σύνθεση* ανά φιαλίδιο λυοφιλοποιημένου φαρμάκου: Πυραζιναμίδη...20.000 µg Το Συμπλήρωμα BACTEC MGIT 960 PZA περιέχει 15 ml ζωμό εμπλουτισμού Κατά προσέγγιση σύσταση* Ανά L Κεκαθαρμένου νερού : Βόειος λευκωματίνη... 50,0 g Δεξτρόζη... 20,0 g Στεατικός πολυοξυαιθυλενεστέρας (POES)... 1,1 g Καταλάση... 0,03 g Ελαϊκό οξύ... 0,1 g *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. Φύλαξη και ανασύσταση των αντιδραστηρίων: U L005486JAA(01) 2014-03 Ελληνικά Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε στους 2 25 C. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. Ο ζωμός θα πρέπει να εμφανίζεται διάφανος και άχρωμος. Μη χρησιμοποιείτε εάν το προϊόν είναι θολό. Ελαχιστοποιήστε την έκθεση στο φως. Τα σωληνάρια φυλάσσονται όπως επισημαίνεται πριν από τη χρήση, μπορούν να ενοφθαλμιστούν μέχρι την ημερομηνία λήξης. 1

Φιαλίδια φαρμάκου BACTEC MGIT 960 PZA κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα λυοφιλοποιημένα φιαλίδια φαρμάκου στους 2 8 C. Μετά την ανασύσταση, το αντιβιοτικό διάλυμα μπορεί να καταψυχθεί και να φυλαχτεί στους 20 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία μέχρι έξι μήνες, μέχρι την αρχική ημερομηνία λήξης. Χρησιμοποιήστε αμέσως μετά την απόψυξη. Απορρίψτε τυχόν μη χρησιμοποιημένες ποσότητες. Συμπλήρωμα BACTEC MGIT 960 PZA Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε σε σκοτεινό μέρος στους 2 8 C. Αποφεύγετε την κατάψυξη ή υπερθέρμανση. Ανοίξτε και χρησιμοποιήστε πριν την ημερομηνία λήξης. Ελαχιστοποιήστε την έκθεση στο φως. Οδηγίες Χρήσης: Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου λυοφιλοποιημένου φαρμάκου του BACTEC MGIT 960 PZA με 2,5 ml στείρο απεσταγμένο/ απιονισμένο νερό για να δημιουργηθεί μητρικό διάλυμα 8000 µg/ml. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ: Για in vitro διαγνωστική χρήση. Η εργασία με ανάπτυξη M. tuberculosis σε καλλιέργεια απαιτεί πρακτικές, εξοπλισμό και εγκαταστάσεις περιορισμού Επιπέδου Βιολογικής Ασφάλειας (BSL) 3. Διαβάστε και ακολουθήστε τις οδηγίες που περιγράφονται στα εκάστοτε εσώκλειστα οδηγιών συμπεριλαμβανομένου του Σωληναρίου Δείκτη Ανάπτυξης Μυκοβακτηρίων BBL MGIT 7 ml. ΔΥΝΗΤΙΚΑ ΜΟΛΥΣΜΑΤΙΚΟ ΔΕΙΓΜΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ: Στα κλινικά δείγματα ενδέχεται να βρίσκονται παθογόνοι μικροοργανισμοί, συμπεριλαμβανομένων των ιών της ηπατίτιδας και του ιού της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου (HIV). Για το χειρισμό όλων των ειδών που είναι επιμολυσμένα με αίμα και άλλα σωματικά υγρά, θα πρέπει να ακολουθούνται οι Τυπικές προφυλάξεις 7-10 και οι κατευθυντήριες οδηγίες των ιδρυμάτων. Πριν από τη χρήση, ο χρήστης θα πρέπει να εξετάζει τα σωληνάρια και φιαλίδια για τυχόν ενδείξεις μόλυνσης ή αλλοίωσης. Απορρίψτε τυχόν σωληνάρια ή φιαλίδια εάν φαίνονται ακατάλληλα. Τα σωληνάρια που υφίστανται πτώση θα πρέπει να εξετάζονται προσεκτικά. Εάν παρατηρείται βλάβη, το σωληνάριο θα πρέπει να απορρίπτεται. Σε περίπτωση θραύσης του σωληναρίου: 1) Κλείστε τα συρτάρια του οργάνου 2) Απενεργοποιήστε το όργανο 3) Εκκενώστε αμέσως το χώρο 4) Συμβουλευτείτε τις κατευθυντήριες οδηγίες του εργαστηρίου σας. Ένα ενοφθαλμισμένο σωληνάριο που έχει σπάσει ή εμφανίζει διαρροή μπορεί να δημιουργήσει αερολύματα μυκοβακτηρίων. Συνεπώς, θα πρέπει να τηρείτε τον κατάλληλο χειρισμό. Τοποθετήστε όλα τα ενοφθαλμισμένα σωληνάρια MGIT στο αυτόκαυστο πριν από την απόρριψη. ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΕΝΟΦΘΑΛΜΙΣΜΑΤΟΣ Όλα τα παρασκευάσματα που περιγράφονται παρακάτω πρέπει να προέρχονται από καθαρές καλλιέργειες M. tuberculosis. Το εργαστήριο θα πρέπει να επιβεβαιώσει, με κατάλληλες τεχνικές ταυτοποίησης, ότι το απομονωμένο στέλεχος που πρόκειται να εξεταστεί είναι καθαρή καλλιέργεια M. tuberculosis. Το ενοφθάλμισμα μπορεί να παρασκευαστεί από στερεά υλικά καλλιέργειας ή από θετικό σωληνάριο BACTEC MGIT 7 ml. Επιπρόσθετα, για την παρασκευή ενός σωληναρίου οργανισμού MGIT, το οποίο κατόπιν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την παρασκευή του ενοφθαλμίσματος, μπορούν να χρησιμοποιηθούν καλλιέργειες που έχουν αναπτυχθεί σε υγρό και σε στερεό περιβάλλον. Κάθε μια εκ των επιλογών αυτών περιγράφεται παρακάτω. Παρασκευή του ενοφθαλμίσματος από στερεά υλικά καλλιέργειας: ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Είναι σημαντικό να παρασκευάζετε το ενοφθάλμισμα σύμφωνα με τις ακόλουθες οδηγίες ώστε να προκύψει η κατάλληλη συγκέντρωση οργανισμών για την εξέταση ευαισθησίας. 1. Προσθέστε 4 ml Ζωμού BBL Middlebrook 7H9 (ή ζωμού BBL MGIT) σε ένα στείρο σωληνάριο 16,5 x 128 mm με πώμα που περιέχει 8 10 γυάλινα σφαιρίδια. 2. Αποξύστε με ένα στείρο κρίκο όσο το δυνατόν περισσότερες αποικίες από ανάπτυξη ηλικίας μέχρι δεκατεσσάρων ημερών, προσπαθώντας να μην αφαιρέσετε στερεό υλικό καλλιέργειας. Εναιωρήστε τις αποικίες στο Ζωμό Middlebrook 7H9. 3. Υποβάλλετε σε περιδίνηση το εναιώρημα για 2 3 λεπτά ώστε να διασπαστούν οι μεγαλύτεροι σβώλοι. Το εναιώρημα θα πρέπει να υπερβαίνει σε θολερότητα πρότυπο 1,0 McFarland. 4. Αφήστε το εναιώρημα να σταθεί για 20 λεπτά χωρίς να το ταράξετε. 5. Μεταφέρετε το υπερκείμενο υγρό σε άλλο στείρο σωληνάριο 16,5 x 128 mm με πώμα (αποφύγετε τη μεταφορά ποσότητας ιζήματος) και αφήστε το να σταθεί για άλλα 15 λεπτά. 6. Μεταφέρετε το υπερκείμενο υγρό (θα πρέπει να είναι απαλό, χωρίς σβώλους) σε ένα τρίτο στείρο σωληνάριο 16,5 x 128 mm. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το εναιώρημα οργανισμών θα πρέπει να είναι έχει θολερότητα μεγαλύτερη από πρότυπο 0,5 McFarland σε αυτό το στάδιο. 7. Ρυθμίστε το εναιώρημα σε πρότυπο 0,5 McFarland συγκρίνοντας οπτικά με πρότυπο θολερότητας 0,5 McFarland. Μη ρυθμίζετε θολερότητα μικρότερη από πρότυπο 0,5 McFarland. 8. Αραιώστε 1 ml του ρυθμισμένου εναιωρήματος σε 4 ml στείρου αλατούχου διαλύματος (αραίωση 1:5). Χρησιμοποιήστε αυτό το υλικό όπως το ενοφθάλμισμα AST και προχωρήστε στη Διαδικασία Ενοφθαλμισμού για Εξέταση Ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA. Παρασκευή Ενοφθαλμίσματος από Θετικό Σωληνάριο BACTEC MGIT 7 ml: 1. Η πρώτη ημέρα ενός θετικού σωληναρίου BACTEC MGIT κατά το όργανο θεωρείται Ημέρα 0. 2. Για την παρασκευή του ενοφθαλμίσματος εξέτασης, θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί ένα θετικό σωληνάριο 7 ml MGIT την επόμενη ημέρα από την ημέρα που έγινε αρχικά θετικό στο όργανο BACTEC MGIT (Ημέρα 1), μέχρι και, συμπεριλαμβανομένης, της πέμπτης ημέρας (Ημέρα 5) μετά τη θετικότητα στο όργανο. Ένα σωληνάριο που είναι θετικό για διάστημα μεγαλύτερο από πέντε ημέρες θα πρέπει να ανακαλλιεργηθεί σε νέο σωληνάριο MGIT 7 ml που περιέχει Συμπλήρωμα Ανάπτυξης BACTEC MGIT και να εξεταστεί στο όργανο BACTEC MGIT μέχρι να γίνει θετικό, και να χρησιμοποιηθεί από την πρώτη έως την πέμπτη ημέρα μετά τη θετικότητα. Δείτε Παρασκευή Σωληναρίου Οργανισμού MGIT από Υγρά Υλικά Καλλιέργειας. 3. Εάν το σωληνάριο είναι θετικό Ημέρας 1 ή Ημέρας 2, δεν απαιτείται αραίωση. Χρησιμοποιήστε αυτό το υλικό όπως το ενοφθάλμισμα AST και προχωρήστε στη Διαδικασία Ενοφθαλμισμού για Εξέταση Ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA. 4. Εάν το σωληνάριο είναι θετικό Ημέρας 3, Ημέρας 4, ή Ημέρας 5, τότε αραιώστε 1 ml του θετικού ζωμού σε 4 ml στείρο αλατούχο διάλυμα (αραίωση 1:5). Αναμίξτε τα περιεχόμενα του σωληναρίου σχολαστικά. Χρησιμοποιήστε αυτό το υλικό όπως το ενοφθάλμισμα AST και προχωρήστε στη Διαδικασία Ενοφθαλμισμού για Εξέταση Ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA. Παρασκευή Σωληνάριου Οργανισμού MGIT από Υγρά Υλικά Καλλιέργειας. 1. Αναμείξτε τα περιεχόμενα του σωληναρίου μέσω αναστροφής ή περιδίνησης. 2. Πραγματοποιήστε αραίωση 1:100 προσθέτοντας 0,1 ml καλλιέργειας σε 10 ml Ζωμού BBL Middlebrook 7H9 ή Ζωμού BBL MGIT. Αναμείξτε καλά. 3. Προσθέστε 0,5 ml του εναιωρήματος αυτού σε σωληνάριο MGIT 7 ml συμπληρωμένο με 0,8 ml Συμπληρώματος Ανάπτυξης BACTEC MGIT Growth Supplement. 4. Πωματίστε ερμητικά και αναμείξτε ελαφρά μέσω αναστροφής 2 3 φορές. 2

5. Εισαγάγετε το σωληνάριο στο όργανο BACTEC MGIT και εξετάστε μέχρις ότου η εξέταση βγει θετική. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ο χρόνος μέχρι τη θετικότητα πρέπει να είναι 4 μέρες για χρήση ως ενοφθάλμισμα AST. Αν το σωληνάριο γίνει θετικό σε διάστημα < 4 ημερών, επιστρέψτε στο βήμα 1 και παρασκευάστε ένα νέο σωληνάριο οργανισμού. 6. Το σωληνάριο αυτό μπορεί πλέον να χρησιμοποιηθεί εντός διαστήματος μιας έως πέντε ημερών μετά την θετικότητα. Προχωρήστε στην ανωτέρω Παρασκευή Ενοφθαλμίσματος από Θετικό Σωληνάριο BACTEC MGIT 7 ml. Παρασκευή Σωληναρίου Οργανισμού MGIT από Στερεά Υλικά Καλλιέργειας. 1. Χρησιμοποιώντας στείρο κρίκο, αποξύστε την ανάπτυξη από μια κεκλιμένη καλλιέργεια και προσθέστε την σε σωληνάριο MGIT 7 ml συμπληρωμένο με Συμπλήρωμα Ανάπτυξης BACTEC MGIT Growth Supplement. 2. Πωματίστε ερμητικά και αναμείξτε ελαφρά μέσω αναστροφής 2 3 φορές. 3. Εισαγάγετε το σωληνάριο σε όργανο BACTEC MGIT και εξετάστε μέχρις ότου η εξέταση βγει θετική. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ο χρόνος μέχρι τη θετικότητα πρέπει να είναι 4 μέρες για χρήση ως ενοφθάλμισμα AST. Αν το σωληνάριο γίνει θετικό σε διάστημα < 4 ημερών, επιστρέψτε στο βήμα 1 και παρασκευάστε ένα νέο σωληνάριο οργανισμού. 4. Το σωληνάριο αυτό μπορεί πλέον να χρησιμοποιηθεί εντός διαστήματος μιας έως πέντε ημερών μετά την θετικότητα. Προχωρήστε στην ανωτέρω Παρασκευή Ενοφθαλμίσματος από Θετικό Σωληνάριο BACTEC MGIT 7 ml. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά: Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA που περιέχει από δύο φιαλίδια λυοφιλοποιημένου φαρμάκου και έξι φιαλίδια Συμπληρώματος ΡΖΑ (περίπου 50 εξετάσεις ανά κιτ). Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται: Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA, (25 σωληνάρια ανά χαρτοκιβώτιο), βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια, οργανισμοί ποιοτικού ελέγχου και εργαστηριακός εξοπλισμός που απαιτείται για την εκτέλεση της διαδικασίας. Διαδικασία Ενοφθαλμισμού για την Εξέταση Ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA: Κατά την παρασκευή του Σετ AST PZA πρέπει να δοθεί προσοχή στη σωστή ανασύσταση του λυοφιλοποιημένου φαρμάκου, τη χρήση καθαρής καλλιέργειας και τη σωστή αραίωση του οργανισμού για το Μάρτυρα Ανάπτυξης και το σωληνάριο PZA. Είναι σημαντικό να προσθέσετε το φάρμακο μόνο στο αντίστοιχο σωληνάριο MGIT που επισημαίνεται ως PZA. Χρησιμοποιήστε μόνο το Συμπλήρωμα BACTEC MGIT 960 PZA που παρέχεται με το κιτ και τα σωληνάρια με Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA όταν εκτελείτε το σετ AST PZA. 1. Επισημάνετε δύο σωληνάρια 7 ml με Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA για κάθε εξεταζόμενο απομονωμένο στέλεχος. Επισημάνετε ένα ως GC (Μάρτυρας Ανάπτυξης) και ένα ως PZA. Τοποθετήστε τα σωληνάρια στη σωστή σειρά στον φορέα δύο σωληναρίων του σετ AST (δείτε το Εγχειρίδιο Χρήσης του Οργάνου BACTEC MGIT). 2. Ασηπτικά προσθέστε 0,8 ml Συμπλήρωμα BACTEC MGIT 960 PZA σε κάθε σωληνάριο. 3. Χρησιμοποιώντας μια μικροπιπέττα, διανείμετε ασηπτικά 100 µl από το διάλυμα φαρμάκου 8000 µg/ml BACTEC MGIT 960 PZA στο κατάλληλα επισημασμένο σωληνάριο MGIT PZA. Δεν πρέπει να προστεθεί καμία ποσότητα διαλύματος φαρμάκου PZA στο κατάλληλα επισημασμένο σωληνάριο MGIT GC. Συγκέντρωση Όγκος που προστίθεται στα Τελική συγκέντρωση στα Φάρμακο φαρμάκου μετά σωληνάρια MGIT για εξέταση σωληνάρια MGIT την ανασύσταση* MGIT PZA 8.000 µg/ml 100 µl 100 µg/ml* *Το ΡΖΑ πρέπει να ανασυσταθεί χρησιμοποιώντας 2,5 ml στείρου/απιονισμένου νερού ώστε να επιτευχθεί η αναφερόμενη συγκέντρωση. 4. Προετοιμασία και ενοφθαλμισμός σωληναρίου Μάρτυρα Ανάπτυξης: Ασηπτικά διανείμετε 0,5 ml του ενοφθαλμίσματος AST (δείτε ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΕΝΟΦΘΑΛΜΙΣΜΑΤΟΣ ) σε 4,5 ml στείρου αλατούχου διαλύματος για να παρασκευάσετε το εναιώρημα 1:10 Μάρτυρα Ανάπτυξης. Αναμείξτε καλά το εναιώρημα Μάρτυρα Ανάπτυξης. Ενοφθαλμίστε 0,5 ml του εναιωρήματος 1:10 Μάρτυρα Ανάπτυξης στο σωληνάριο MGIT με επισήμανση GC. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Είναι σημαντικό να χρησιμοποιείτε το κατάλληλα παρασκευασμένο διάλυμα 1:10 για το σωληνάριο GC για να διασφαλίσετε ακριβή αποτελέσματα AST και να αποφύγετε σφάλματα του σετ AST PZA. 5. Ενοφθαλμισμός σωληναρίου που περιέχει φάρμακο: Ασηπτικά διανείμετε 0,5 ml του ενοφθαλμίσματος AST (δείτε ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΕΝΟΦΘΑΛΜΙΣΜΑΤΟΣ ) στο σωληνάριο MGIT με επισήμανση PZA. 6. Πωματίστε πάλι ερμητικά τα σωληνάρια. Αναμείξτε τα σωληνάρια καλά αναστρέφοντας απαλά τρεις έως τέσσερις φορές. 7. Εισάγετε το σετ PZA στο όργανο BACTEC MGIT χρησιμοποιώντας την επιλογή εισαγωγής του σετ AST (ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χρήσης του Οργάνου BACTEC MGIT). Βεβαιωθείτε ότι το σωληνάριο Μάρτυρα Ανάπτυξης βρίσκεται στην πρώτη αριστερή θέση σωληναρίου. Επιλέξτε ως φάρμακο στον ορισμό του 2ου σωληναρίου του φορέα σετ AST το φάρμακο ΡΖΑ όταν εκτελείτε την εισαγωγή του σετ AST. 8. Επιστρώστε 0,1 ml από το εναιώρημα του οργανισμού σε ένα τρυβλίο Άγαρ Σόγιας Trypticase με 5% Αίμα Προβάτου (TSA II). Τοποθετήστε σε μια πλαστική σακούλα. Επωάστε στους 35 37 C. 9. Ελέγξτε το τρυβλίο άγαρ με αίμα μετά από 48 ώρες για βακτηριακή επιμόλυνση. Εάν το τρυβλίο άγαρ με αίμα δεν παρουσιάζει ανάπτυξη, αφήστε την εξέταση PZA να προχωρήσει. Εάν το τρυβλίο άγαρ με αίμα εμφανίζει ανάπτυξη, απορρίψτε το σετ PZA (ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χρήσης του Οργάνου BACTEC MGIT) και επαναλάβετε την εξέταση με καθαρή καλλιέργεια Mycobacterium tuberculosis. Ποιοτικός έλεγχος χρήστη: Κατά την παραλαβή νέας παράδοσης ή αριθμού παρτίδας φιαλιδίων Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA ή Υλικού BACTEC MGIT 960 PZA, συνιστάται να εξεταστεί ο οργανισμός ελέγχου που αναφέρεται παρακάτω. Ο οργανισμός ελέγχου θα πρέπει να είναι καθαρή καλλιέργεια και η καλλιέργεια θα πρέπει να παρασκευαστεί σύμφωνα με τις οδηγίες της ενότητας ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΕΝΟΦΘΑΛΜΙΣΜΑΤΟΣ. Το σετ AST ποιοτικού ελέγχου θα πρέπει να παρασκευαστεί σύμφωνα με τις οδηγίες της ενότητας Διαδικασία Ενοφθαλμισμού για Εξέταση Ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA. Κατά την παρασκευή του Σετ AST ποιοτικού ελέγχου πρέπει να δοθεί προσοχή στη σωστή ανασύσταση του λυοφιλοποιημένου φαρμάκου, τη χρήση καθαρής καλλιέργειας και τη σωστή αραίωση του οργανισμού ποιοτικού ελέγχου για τα σωληνάρια Μάρτυρα Ανάπτυξης και PZA. Είναι σημαντικό να προσθέσετε το φάρμακο μόνο στο αντίστοιχο σωληνάριο MGIT που επισημαίνεται ως PZA. Ο ίδιος οργανισμός ελέγχου θα πρέπει να εξεταστεί ως ποιοτικός έλεγχος παρτίδας μια φορά εβδομαδιαίως, όταν εκτελούνται εξετάσεις ευαισθησίας. Η παρατήρηση των σωστών αποτελεσμάτων, που παρουσιάζονται παρακάτω, εντός 4 20 ημερών υποδεικνύει ότι τα αντιδραστήρια BACTEC MGIT 960 PZA είναι έτοιμα για χρήση στην εξέταση απομονωμένων οργανισμών ασθενών. Εάν δεν παρατηρηθούν τα κατάλληλα αποτελέσματα, μην αναφέρετε τα αποτελέσματα ασθενή. Επαναλάβετε τον ποιοτικό έλεγχο και τυχόν απομονωμένα στελέχη ασθενή που έχουν επηρεαστεί από την αρχική αστοχία ποιοτικού ελέγχου. Εάν η επανάληψη του ποιοτικού ελέγχου δεν αποδώσει τα αναμενόμενα, μην αναφέρετε τα αποτελέσματα ασθενή. Μη χρησιμοποιήσετε το προϊόν εάν δεν επικοινωνήσετε πρώτα με τον τοπικό Αντιπρόσωπο της BD. 3

Στελέχη Μάρτυρας Ανάπτυξης MGIT PZA M. tuberculosis ATCC 27294 Θετικό Ευαίσθητο Κατά την εξωτερική αξιολόγηση του Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA ο μέσος χρόνος μέχρι το αποτέλεσμα για τον οργανισμό ελέγχου ήταν επτά ημέρες με εύρος τέσσερις έως έντεκα ημέρες. Τα πιο συνήθη αίτια αστοχιών ποιοτικού ελέγχου κατά την εξωτερική αξιολόγηση ήταν ο υπερβολικός ενοφθαλμισμός των Σετ PZA και οι επιμολυσμένες καλλιέργειες ποιοτικού ελέγχου. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Το όργανο BACTEC MGIT παρακολουθεί τα σετ AST μέχρι να επιτευχθεί ένας προσδιορισμός ευαισθησίας ή αντοχής. Όταν ολοκληρωθεί η εξέταση του σετ, τα αποτελέσματα αναφέρονται από το όργανο BACTEC MGIT (ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χρήσης του Οργάνου BACTEC MGIT). Το όργανο BACTEC MGIT αναφέρει ένα αποτέλεσμα σετ AST ως Σφάλμα ( X ), απουσία ερμηνείας ευαισθησίας, όταν προκύπτουν ορισμένες συνθήκες που ενδέχεται να επηρεάσουν τα αποτελέσματα εξέτασης. Οι συνθήκες που μπορεί να οδηγήσουν σε αποτέλεσμα Σφάλματος ( X ) περιγράφονται στην Ενότητα 7 Αντιμετώπιση προβλημάτων, στο Εγχειρίδιο Χρήσης του Οργάνου BACTEC MGIT. Είναι σημαντικό να περιλαμβάνεται η μέθοδος εξέτασης, η ονομασία του φαρμάκου και η συγκέντρωση κατά την αναφορά των αποτελεσμάτων. Θα πρέπει να συμβουλευτείτε τον Πνευμονολόγο ή/και Ειδικό Λοιμωδών Νοσημάτων για τον έλεγχο φυματίωσης σχετικά με την κατάλληλη θεραπευτική αγωγή και δοσολογίες. Η αποκλειστική αντοχή στην πυραζιναμίδη είναι σπάνια, συνεπώς σε περίπτωση μη αναμενόμενων αποτελεσμάτων αντοχής, επικυρώστε την καθαρότητα και την ταυτοποίηση του απομονωμένου στελέχους που εξετάστηκε ως M. tuberculosis. Οι κατευθυντήριες οδηγίες για ελέγχους μυκοβακτηριακής καθαρότητας βρίσκονται στο πρότυπο CLSI M24.2 Αναφορά αποτελεσμάτων BACTEC MGIT 960 PZA Φάρμακο (συγκέντρωση) PZA (100 µg/ml) Αποτέλεσμα συστήματος BACTEC MGIT Συνιστώμενη Αναφορά Ενέργεια Ευαίσθητο Ανθεκτικό Εξετάστηκε απομονωμένος οργανισμός με το σύστημα BACTEC MGIT [PZA/100 µg/ml] και το αποτέλεσμα είναι ευαίσθητο Εξετάστηκε απομονωμένος οργανισμός με το σύστημα BACTEC MGIT [PZA/100 µg/ml] και το αποτέλεσμα είναι ανθεκτικό. Καμία ενέργεια. Εάν ο απομονωμένος οργανισμός έχει αντοχή μόνο στο PZA, επιβεβαιώστε ότι ο απομονωμένος οργανισμός που εξετάστηκε είναι καθαρή καλλιέργεια Mycobacterium tuberculosis. Σφάλμα X Καμία αναφορά. Επαναλάβετε την εξέταση. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA δεν ερμηνεύει το βαθμό ευαισθησίας του εξεταζόμενου απομονωμένου στελέχους. Τα αποτελέσματα αναφέρονται ως ευαίσθητα ή ανθεκτικά. Η εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA μπορεί να εκτελεστεί μόνο χρησιμοποιώντας το όργανο BACTEC MGIT. Δεν είναι δυνατή η χειροκίνητη ανάγνωση των Σετ PZA. Χρησιμοποιήστε μόνο καθαρές καλλιέργειες M. tuberculosis. Οι καλλιέργειες που είναι επιμολυσμένες ή ενδέχεται να περιέχουν πολλαπλά είδη μυκοβακτηρίων μπορεί να δώσουν εσφαλμένα αποτελέσματα και δεν θα πρέπει να εξετάζονται. Η απευθείας εξέταση από κλινικά δείγματα δεν συνιστάται. Τα εναιωρήματα που παρασκευάζονται από στέρεα υλικά καλλιέργειας πρέπει να αφήνονται να καθιζάνουν για το προκαθορισμένο χρονικό διάστημα πριν την προτυποποίηση. Τα παρασκευάσματα ενοφθαλμίσματος που παρασκευάζονται από στερεά υλικά θα πρέπει να συγκρίνονται οπτικά με πρότυπο θολερότητας 0,5 McFarland, διαφορετικά μπορεί να προκύψουν ανακριβή αποτελέσματα ή να δημιουργηθεί σφάλμα του Σετ AST. Εάν δεν χρησιμοποιηθεί η αραίωση 1:5 του εναιωρήματος οργανισμών, όταν υποδεικνύεται, για τον ενοφθαλμισμό των σωληναρίων που περιέχουν φάρμακο, μπορεί να προκύψουν ανακριβή αποτελέσματα. Εάν δεν χρησιμοποιηθεί αραίωση 1:10 του εναιωρήματος οργανισμών για τον ενοφθαλμισμό του σωληναρίου Μάρτυρα Ανάπτυξης ενδέχεται να προκύψουν ανακριβή αποτελέσματα ή να δημιουργηθεί σφάλμα του Σετ AST. Τυχόν μη ανασύσταση του φαρμάκου ΡΖΑ με τον κατάλληλο όγκο στείρου απιονισμένου νερού ενδέχεται να δώσει ανακριβή αποτελέσματα. Είναι σημαντικό να γίνεται καλή ανάμειξη των ενοφθαλμισμένων σωληναρίων. Τυχόν αστοχία στην επαρκή ανάμειξη των σωληναρίων μπορεί να οδηγήσει σε ψευδή αποτελέσματα ανθεκτικότητας. Τυχόν μη φόρτωση των σωληναρίων του σετ AST στο Φορέα Σετ AST με τη σωστή σειρά ενδέχεται να δώσει ανακριβή αποτελέσματα. Τυχόν μη επιλογή του κατάλληλου ορισμού φαρμάκου φορέα σετ ενδέχεται να οδηγήσει σε άκυρα ή ανακριβή αποτελέσματα. Τυχόν μη φόρτωση του Σετ AST στο όργανο με το σωστό τρόπο θα οδηγήσει σε ανώνυμη κατάσταση που πρέπει να επιλυθεί εντός οκτώ ωρών. Εάν η κατάσταση δεν επιλυθεί εντός οκτώ ωρών, το σετ AST πρέπει να απορριφθεί και να σχηματιστεί ξανά. Τυχόν μη χρήση του Συμπληρώματος BACTEC MGIT 960 PZA στο σετ AST ΡΖΑ ενδέχεται να δώσει ανακριβή αποτελέσματα. ΜΗΝ προσθέτετε Συμπλήρωμα BACTEC MGIT 960 SIRE ή Συμπλήρωμα Ανάπτυξης BACTEC MGIT στο σετ AST PZA. Τυχόν μη χρήση Υλικού BACTEC MGIT 960 PZA για το σετ AST ΡΖΑ ενδέχεται να δώσει ανακριβή αποτελέσματα. ΜΗΝ αντικαθιστάτε το Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA με Σωληνάρια Δείκτη Ανάπτυξης Μυκοβακτηρίων BBL MGIT 7 ml. ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΤΙΜΕΣ Εξετάστηκαν συνολικά 118 κλινικά απομονωμένα στελέχη M. tuberculosis με την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA σε τέσσερις γεωγραφικά διαφορετικούς τόπους. Η εξέταση περιελάμβανε νέους κλινικά απομονωμένους οργανισμούς και απομονωμένους οργανισμούς ανακαλλιέργειας από καλλιέργειες υγρών και στερεών μέσων. Εκτελέστηκαν συνολικά 228 εξετάσεις ευαισθησίας PZA (υγρές και στερεές). Κατά την εξωτερική αξιολόγηση του Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA, προέκυψαν εννέα εξετάσεις PZA από κλινικά απομονωμένα στελέχη για τα οποία απαιτήθηκε επαναληπτική εξέταση λόγω επιμόλυνσης (έξι απομονωμένα στελέχη) ή υπερβολικό ενοφθαλμισμό/διαδικαστικά σφάλματα (τρία απομονωμένα στελέχη). Ο μέσος χρόνος μέχρι το αποτέλεσμα για την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA είναι επτά ημέρες με εύρος από τέσσερις έως δεκαεπτά ημέρες. Τα δεδομένα παρουσιάζονται στην Εικόνα 1, στο τέλος του ένθετου. 4

ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ Αναλυτικές μελέτες Εύρος Ενοφθαλμίσματος AST Υγρών και Στερεών Υλικών Καλλιέργειας: Υγρά υλικά καλλιέργειας Η συνιστώμενη διαδικασία για την παρασκευή ενός Σετ ΡΖΑ από θετικό σωληνάριο MGIT 7 ml χρησιμοποιεί απευθείας ενοφθάλμισμα κατά την Ημέρα 1 και Ημέρα 2 μετά τη θετικότητα και ένα αραιωμένο (1:5) ενοφθάλμισμα κατά την Ημέρα 3 έως Ημέρα 5 μετά τη θετικότητα. Οι εσωτερικές μελέτες δείχνουν ότι τα ενοφθαλμίσματα που παρασκευάζονται από θετικό σωληνάριο MGIT 7 ml Ημέρας 1 έως Ημέρας 5 κυμαίνονται από 2,0 x 104 έως 7,5 x 106 CFU/mL. Στερεά υλικά καλλιέργειας Η συνιστώμενη διαδικασία για την παρασκευή Σετ ΡΖΑ από ανάπτυξη σε στερεά υλικά (μέχρι 14 ημέρες μετά από την πρώτη ορατή ανάπτυξη που παρατηρείται) χρησιμοποιεί μια αραίωση 1:5 εναιωρήματος οργανισμού ισοδύναμο με 0,5 Πρότυπο McFarland. Οι εσωτερικές μελέτες δείχνουν ότι τα ενοφθαλμίσματα που παρασκευάζονται από στερεά υλικά καλλιέργειας κυμαίνονται από 2,1 x 105 έως 3,9 x 106 CFU/mL. Επαναληψιμότητα παρτίδας: Η επαναληψιμότητα παρτίδας αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας εικοσιπέντε στελέχη M. tuberculosis (συμπεριλαμβανομένων τριών στελεχών ATCC). Κάθε στέλεχος εξετάστηκε εις τριπλούν με την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA. Κάθε τριπλότυπο αντιπροσώπευε μια ξεχωριστή συνθήκη εξέτασης που διαφοροποιούταν κατά παρτίδα ΡΖΑ, συμπλήρωμα ΡΖΑ και υλικό ΡΖΑ που χρησιμοποιήθηκε (τρεις παρτίδες έκαστο). Τα αποτελέσματα που παρατηρήθηκαν συγκρίθηκαν με τα αναμενόμενα αποτελέσματα. Η συνολική επαναληψιμότητα για την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA είναι 96,8%. Εξέταση Πάνελ Πρόκλησης CDC: Η απόδοση της εξέτασης ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας πάνελ στελεχών που εξασφαλίσθηκαν από τα Κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Λοιμώξεων (CDC), Ατλάντα, Georgia, Η.Π.Α. Το πάνελ αποτελείτο από εννέα στελέχη M. tuberculosis με γνωστά σχήματα ευαισθησίας (χρησιμοποιώντας BACTEC 460TB). Το πάνελ εξετάστηκε εις τριπλούν με την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA. Τα αποτελέσματα του BACTEC MGIT 960 PZA συγκρίθηκαν με τα αναμενόμενα αποτελέσματα του CDC. Η συνολική συμφωνία με τα αναμενόμενα αποτελέσματα CDC για την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA είναι 98,7%. Κλινική Αξιολόγηση Η εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA αξιολογήθηκε σε τέσσερις γεωγραφικά διαφορετικούς κλινικούς τόπους που αποτελούνταν από περιφερειακά κέντρα αναφοράς και εργαστήρια πανεπιστημιακών νοσοκομείων, συμπεριλαμβανομένων δύο τόπων εκτός Η.Π.Α.. Η εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA συγκρίθηκε με την μέθοδο εξέτασης ευαισθησίας BACTEC 460TB PZA. Εξέταση επαναληψιμότητας: Η επαναληψιμότητα της εξέτασης ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA αξιολογήθηκε στους κλινικούς τόπους χρησιμοποιώντας ένα πάνελ πέντε κατάλληλων στελεχών. Τα αποτελέσματα εξέτασης του BACTEC MGIT 960 PZA συγκρίθηκαν με τα αναμενόμενα αποτελέσματα. Η συνολική επαναληψιμότητα για την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA είναι 94%. Εξέταση Πάνελ Πρόκλησης CDC: Η απόδοση της εξέτασης ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA αξιολογήθηκε σε κάθε έναν από τους τέσσερις κλινικούς τόπους χρησιμοποιώντας πάνελ στελεχών που εξασφαλίσθηκαν από τα Κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Λοιμώξεων (CDC), Ατλάντα, Georgia, Η.Π.Α. Το πάνελ αποτελείτο από εννέα στελέχη M. tuberculosis με γνωστά σχήματα ευαισθησίας (χρησιμοποιώντας BACTEC 460TB). Από τα τριάντα έξι αποτελέσματα PZA που συλλέχθηκαν με την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA, τριάντα τρία συμφωνούσαν με τα αναμενόμενα αποτελέσματα του CDC. Ο υπολογισμός ποσοστού συμφωνίας με τα αναμενόμενα αποτελέσματα CDC για την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA είναι 91,7%. Εξέταση κλινικά απομονωμένων στελεχών: Εξετάστηκαν συνολικά 118 κλινικά απομονωμένα στελέχη M. tuberculosis με την εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA και την εξέταση ευαισθησίας BACTEC 460TB PZA. Η εξέταση περιελάμβανε νέους κλινικά απομονωμένους οργανισμούς και απομονωμένους οργανισμούς ανακαλλιέργειας από υγρές και στερεές πηγές καλλιέργειας. Προέκυψαν συνολικά 228 αποτελέσματα εξέτασης. Στον Πίνακα 1 παρουσιάζονται τα αποτελέσματα από εξέταση κλινικά απομονωμένων στελεχών για το φάρμακο PZA σε 100 µg/ml από καλλιέργειες υγρού μέσου, από καλλιέργειες στερεού μέσου και από συνδυασμό και των δύο καλλιεργειών μέσων. Πίνακας 1: Αποτελέσματα Κλινικά Απομονωμένων Στελεχών Εξέταση ευαισθησίας BACTEC MGIT 960 PZA σε σύγκριση με την εξέταση ευαισθησίας BACTEC 460TB Σύστημα BACTEC 460TB Σύστημα BACTEC MGIT 960 Αναμενόμενα αποτελέσματα PZA Ευαίσθητα αποτελέσματα Ανθεκτικά αποτελέσματα Πηγή # Εξετάσεων S R # Συμφωνίας Κατηγορία Συμφωνίας % (95% CI) ΥΓΡΟ 112 89 23 88 98,9% (93,9 100) ΣΤΕΡΕΟ 113* 90 23 88 97,8% (92,2 99,7) ΟΛΕΣ 225* 179 46 176 98,3% (95,2 99,7) # Συμφωνίας Κατηγορία Συμφωνίας % (95% CI) 22 95,7% (78,1 99,9) 20 87,0% (66,4 97,2) 42 91,3% (79,2 97,6) *Τρία οριακά αποτελέσματα του BACTEC 460TB δεν περιλαμβάνονται σε αυτόν τον πίνακα. Όλα τα αποτελέσματα με ασύμφωνα αποτελέσματα εξέτασης BACTEC MGIT 960 PZA εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας την εξέταση ευαισθησίας BACTEC 460TB PZA σε δύο ανεξάρτητους τόπους. Τα ασύμφωνα αποτελέσματα ήταν τα στελέχη εκείνα όπου το αποτέλεσμα της εξέτασης BACTEC MGIT 960 PZA διέφερε από το αποτέλεσμα εξέτασης BACTEC 460TB PZA. Τα οριακά αποτελέσματα δεν περιλαμβάνονται στους υπολογισμούς απόδοσης για το Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA. Από τα τέσσερα ασύμφωνα ευαίσθητα στo PZA (S-BACTEC MGIT 960, R-BACTEC 460TB) απομονωμένα στελέχη που εξετάστηκαν, ένα έδωσε ευαίσθητα αποτελέσματα και στους δύο ανεξάρτητους τόπους και τα άλλα τρία έδωσαν ανθεκτικά αποτελέσματα και στους δύο ανεξάρτητους τόπους. Από τα τρία ασύμφωνα ανθεκτικά στo PZA (R-BACTEC MGIT 960, S-BACTEC 460TB) απομονωμένα στελέχη που εξετάστηκαν, όλα έδωσαν ευαίσθητα αποτελέσματα και στους δύο ανεξάρτητους τόπους. Δύο από τα τρία οριακά αποτελέσματα ΡΖΑ του BACTEC 460TB (S-BACTEC MGIT 960, B-BACTEC 460TB) έδωσαν ευαίσθητα αποτελέσματα και στους δύο ανεξάρτητους τόπους. Ένα από τα τρία οριακά αποτελέσματα ΡΖΑ του BACTEC 460TB (R-BACTEC MGIT 960, B-BACTEC 460TB) έδωσε ευαίσθητο αποτέλεσμα σε έναν ανεξάρτητο τόπο. Ο άλλος ανεξάρτητος τόπος προσδιόρισε οριακό αποτέλεσμα. 5

ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ Αρ. κατ. Περιγραφή 245128 Κιτ BACTEC MGIT 960 PZA, χαρτοκιβώτιο 2 λυοφιλοποιημένων φιαλιδίων και έξι Συμπληρωμάτων ΡΖΑ. 245115 Υλικό BACTEC MGIT 960 PZA, χαρτοκιβώτιο 25 σωληναρίων. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Barenfanger, J. 1993. Making your lab safe against multi-drug resistant Mycobacterium tuberculosis. Clin. Microbiol. Newsl.15: 76-80. 2. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2003. Approved Standard M24-A. Susceptibility testing of mycobacteria, nocardiae, and other aerobic actinomycetes. CLSI, Wayne, Pa. 3. Butler, W.R. and Kilburn, 1982. Improved method for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to pyrazinamide. J.Clin. Microbiol. 16:1106-1109. 4. Heifets, L.B. and Iseman, M.D. 1985. Radiometric method for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to pyrazinamide in 7H12 broth. J.Clin.Microbiol. 21:200-204. 5. BD Diagnostic Systems. BACTEC 460TB System Product and Procedure Manual. 6. Salfinger, M. et al. 1989. Rapid radiometric method for pyrazinamide susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Res. Microbiol. 140:301-309. 7. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, PA. 8. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 9 U.S. Department of Health and Human Services. 2007. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 10. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/ EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. Τεχνική Εξυπηρέτηση και Υποστήριξη της BD Diagnostics: εκτός Ηνωμένων Πολιτειών, επικοινωνείτε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD ή τη διεύθυνση www.bd.com/ds. Εικόνα 1: Κατανομή του χρόνου μέχρι το αποτέλεσμα των BACTEC MGIT 960 PZA AST 6

Do not reuse / Не използвайте отново / Nepoužívejte opakovaně / Ikke til genbrug / Nicht wiederverwenden / Μην επαναχρησιμοποιείτε / No reutilizar / Mitte kasutada korduvalt / Ne pas réutiliser / Ne koristiti ponovo / Egyszer használatos / Non riutilizzare / Пайдаланбаңыз / Tik vienkartiniam naudojimui / Nelietot atkārtoti / Niet opnieuw gebruiken / Kun til engangsbruk / Nie stosować powtórnie / Não reutilize / Nu refolosiţi / Не использовать повторно / Nepoužívajte opakovane / Ne upotrebljavajte ponovo / Får ej återanvändas / Tekrar kullanmayın / Не використовувати повторно Manufacturer / Производител / Výrobce / Fabrikant / Hersteller / Κατασκευαστής / Fabricante / Tootja / Fabricant / Proizvođać / Gyártó / Fabbricante / Атқарушы / Gamintojas / Ražotājs / Tilvirker / Producent / Producător / Производитель / Výrobca / Proizvođač / Tillverkare / Üretici / Виробник Use by / Използвайте до / Spotřebujte do / Brug før / Verwendbar bis / Χρήση έως / Usar antes de / Kasutada enne / Date de péremption / Upotrijebiti do / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Дейін пайдалануға / Naudokite iki / Izlietot līdz / Houdbaar tot / Brukes for / Stosować do / Prazo de validade / A se utiliza până la / Использовать до / Použite do / Upotrebiti do / Använd före / Son kullanma tarihi / Використати до\line YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec měsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) ΕΕΕΕ-MM-HH / ΕΕΕΕ-MM (MM = τέλος του μήνα) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fin del mes) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj mjeseca) ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) ЖЖЖЖ-АА-КК / ЖЖЖЖ-АА / (АА = айдың соңы) MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mėnesio pabaiga) GGGG-MM-DD/GGGG-MM (MM = mēneša beigas) JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesiąca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârşitul lunii) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = конец месяца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet av månaden) YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) РРРР-MM-ДД / РРРР-MM (MM = кінець місяця) Catalog number / Каталожен номер / Katalogové číslo / Katalognummer / Αριθμός καταλόγου / Número de catálogo / Katalooginumber / Numéro catalogue / Kataloški broj / Katalógusszám / Numero di catalogo / Каталог нөмірі / Katalogo numeris / Kataloga numurs / Catalogus nummer / Numer katalogowy / Număr de catalog / Номер по каталогу / Katalógové číslo / Kataloški broj / Katalog numarası / Номер за каталогом Authorized Representative in the European Community / Оторизиран представител в Европейската общност / Autorizovaný zástupce pro Evropském společenství / Autoriseret repræsentant i De Europæiske Fællesskaber / Autorisierter Vertreter in der Europäischen Gemeinschaft / Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Représentant autorisé pour la Communauté européenne / Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji / Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben / Rappresentante autorizzato nella Comunità Europea / Европа қауымдастығындағы уәкілетті өкіл / Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Pilnvarotais pārstāvis Eiropas Kopienā / Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo we Wspólnocie Europejskiej / Representante autorizado na Comunidade Europeia / Reprezentantul autorizat pentru Comunitatea Europeană / Уполномоченный представитель в Европейском сообществе / Autorizovaný zástupca v Európskom spoločenstve / Autorizovano predstavništvo u Evropskoj uniji / Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Уповноважений представник у країнах ЄС In vitro Diagnostic Medical Device / Медицински уред за диагностика ин витро / Lékařské zařízení určené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medicinska pomagala za In vitro Dijagnostiku / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medicale per diagnostica in vitro / Жасанды жағдайда жүргізетін медициналық диагностика аспабы / In vitro diagnostikos prietaisas / Medicīnas ierīces, ko lieto in vitro diagnostikā / Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro / Медицинский прибор для диагностики in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Medicinski uređaj za in vitro dijagnostiku / Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik / İn Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Медичний пристрій для діагностики in vitro Temperature limitation / Температурни ограничения / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperaturbegrenzung / Περιορισμοί θερμοκρασίας / Limitación de temperatura / Temperatuuri piirang / Limites de température / Dozvoljena temperatura / Hőmérsékleti határ / Limiti di temperatura / Температураны шектеу / Laikymo temperatūra / Temperatūras ierobežojumi / Temperatuurlimiet / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limites de temperatura / Limite de temperatură / Ограничение температуры / Ohraničenie teploty / Ograničenje temperature / Temperaturgräns / Sıcaklık sınırlaması / Обмеження температури Batch Code (Lot) / Код на партидата / Kód (číslo) šarže / Batch-kode (lot) / Batch-Code (Charge) / Κωδικός παρτίδας (παρτίδα) / Código de lote (lote) / Partii kood / Numéro de lot / Lot (kod) / Tétel száma (Lot) / Codice batch (lotto) / Топтама коды / Partijos numeris (LOT) / Partijas kods (laidiens) / Lot nummer / Batch-kode (parti) / Kod partii (seria) / Código do lote / Cod de serie (Lot) / Код партии (лот) / Kód série (šarža) / Kod serije / Partinummer (Lot) / Parti Kodu (Lot) / Код партії Contains sufficient for <n> tests / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Dostatečné množství pro <n> testů / Indeholder tilstrækkeligt til <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / Περιέχει επαρκή ποσότητα για <n> εξετάσεις / Contenido suficiente para <n> pruebas / Küllaldane <n> testide jaoks / Contenu suffisant pour <n> tests / Sadržaj za <n> testova / <n> teszthez elegendő / Contenuto sufficiente per <n> test / <п> тесттері үшін жеткілікті / Pakankamas kiekis atlikti <n> testų / Satur pietiekami <n> pārbaudēm / Inhoud voldoende voor n testen / Innholder tilstrekkelig til <n> tester / Zawiera ilość wystarczającą do <n> testów / Conteúdo suficiente para <n> testes / Conţinut suficient pentru <n> teste / Достаточно для <n> тестов(а) / Obsah vystačí na <n> testov / Sadržaj dovoljan za <n> testova / Innehåller tillräckligt för <n> analyser / <n> test için yeterli malzeme içerir / Вистачить для аналізів: <n> Consult Instructions for Use / Направете справка в инструкциите за употреба / Prostudujte pokyny k použití / Se brugsanvisningen / Gebrauchsanweisung beachten / Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Consultar las instrucciones de uso / Lugeda kasutusjuhendit / Consulter la notice d emploi / Koristi upute za upotrebu / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l uso / Пайдалану нұсқаулығымен танысып алыңыз / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Skatīt lietošanas pamācību / Raadpleeg de gebruiksaanwijzing / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja użytkowania / Consultar as instruções de utilização / Consultaţi instrucţiunile de utilizare / См. руководство по эксплуатации / Pozri Pokyny na používanie / Pogledajte uputstvo za upotrebu / Se bruksanvisningen / Kullanım Talimatları na başvurun / Див. інструкції з використання Keep away from light / Пазете от светлина / Nevystavujte světlu / Må ikke udsættes for lys / Vor Licht schützen / Κρατήστε το μακριά από το φως / Mantener alejado de la luz / Hoida eemal valgusest / Conserver à l abri de la lumière / Držati dalje od svjetla / Fény nem érheti / Tenere al riparo dalla luce / Қараңғыланған жерде ұста / Laikyti atokiau nuo šilumos šaltinių / Sargāt no gaismas / Niet blootstellen aan zonlicht / Må ikke utsettes for lys / Przechowywać z dala od źródeł światła / Manter ao abrigo da luz / Feriţi de lumină / Хранить в темноте / Uchovávajte mimo dosahu svetla / Držite dalje od svetlosti / Får ej utsättas för ljus / Işıktan uzak tutun / Берегти від дії світла 7

Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD 21152 USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laoghaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2014 BD 8