LightCycler MRSA Advanced Test For Use With The LightCycler 2.0 Instrument

LightCycler MRSA Advanced Test For Use With The LightCycler 2.0 Instrument ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ. LightCycler MRSA Advanced Test LC MRSA 96 Tests P/N: 05352894 190 LightCycler Advanced Lysis Kit LYS ADV 96 Tests P/N: 05205743 190 ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το LightCycler MRSA Advanced Test είναι μια ποιοτική εξέταση για in vitro διαγνωστική χρήση για την άμεση ανίχνευση ρινικού αποικισμού από ανθεκτικό στη μεθικιλίνη Staphylococcus aureus (MRSA) ως βοήθημα στην πρόληψη και τον έλεγχο των λοιμώξεων από MRSA σε μονάδες υγειονομικής περίθαλψης. Η εξέταση διεξάγεται στο LightCycler 2.0 Όργανο χρησιμοποιώντας δείγματα ρινικών επιχρισμάτων από ασθενείς με υποψία αποικισμού, με αφαίρεση επιχρισμάτων και μηχανική λύση για την προετοιμασία των δειγμάτων και στη συνέχεια με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) για την ενίσχυση του DNA του MRSA και με χρήση ειδικών για το στόχο φθοριζόντων ιχνηθετών υβριδισμού για την ανίχνευση του ενισχυμένου DNA. Το LightCycler MRSA Advanced Test δεν προορίζεται για τη διάγνωση λοιμώξεων από MRSA, ούτε για την καθοδήγηση ή την παρακολούθηση της θεραπείας των λοιμώξεων αυτών. Η διενέργεια παράλληλων καλλιεργειών είναι απαραίτητη μόνο για την ανάκτηση οργανισμών για επιδημιολογική τυποποίηση ή περαιτέρω δοκιμές ευαισθησίας. ΣΥΝΟΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Ο Staphylococcus aureus είναι ένα ευκαιριακό παθογόνο που μεταφέρεται ως συμβιών οργανισμός στο δέρμα και στους μυκτήρες στο 30% περίπου του φυσιολογικού πληθυσμού και μπορεί να προκαλέσει ένα ευρύ φάσμα ασθενειών, οι οποίες αποβαίνουν μοιραίες σε διάστημα 30 ημερών από τη μόλυνση στο 34% περίπου των περιπτώσεων 1,2. Η γρήγορη προσαρμογή του Staphylococcus aureus στην επιλεκτική πίεση των θεραπειών με αντιβιοτικά οδήγησε στην εμφάνιση και την εξάπλωση των ανθεκτικών στη μεθικιλίνη στελεχών Staphylococcus aureus (MRSA). Το γονίδιο meca βρίσκεται σε ένα μεγάλο μεταθετό γενετικό στοιχείο που ονομάζεται Χρωμοσωμική Σταφυλοκοκκική Κασέτα mec (Staphylococcal Cassette Chromosome, SCCmec) και ευθύνεται για την ανθεκτικότητα στη μεθικιλίνη και σε άλλα αντιβιοτικά της β-λακτάμης. Το γονίδιο meca κωδικοποιεί την τροποποιημένη πενικιλλινοδεσμευτική πρωτεΐνη, PBP2a ή PBP2, που παρουσιάζει πολύ χαμηλή χημική συγγένεια με όλα τα αντιβιοτικά της β-λακτάμης διευκολύνοντας τη φυσιολογική σύνθεση της στοιβάδας πεπτιδογλυκάνης ακόμη και παρουσία των αντιβιοτικών αυτών 3. Ένας μεγάλος αριθμός στελεχών MRSA έχει εμφανιστεί και εξαπλωθεί παγκοσμίως, και το SCCmec έχει πλέον ενσωματωθεί σε διαφορετικές γενεαλογικές σειρές του ευαίσθητου στη μεθικιλίνη Staphylococcus aureus 4. Μέχρι σήμερα έχουν διαχωριστεί επτά τύποι SCCmec (I VII) και έχουν περιγραφεί αρκετές παραλλαγές αυτών των τύπων SCCmec 4. Οι λοιμώξεις που σχετίζονται με την παροχή υγειονομικής περίθαλψης (HAI) και έχουν προκληθεί από MRSA αποτέλεσαν πρόσφατα ένα σημαντικό ζήτημα για τις μονάδες υγειονομικής περίθαλψης παγκοσμίως, λόγω των υψηλών ποσοστών μόλυνσης, θνησιμότητας και του υψηλού κόστους θεραπείας 5 8. Επιπλέον, ο MRSA κοινότητας (CA-MRSA) έχει εξαπλωθεί τα τελευταία χρόνια 9, 10, 11 τροφοδοτώντας το δίκτυο των νοσοκομειακών λοιμώξεων, και τονίζοντας την ανάγκη για ολοκληρωμένα προγράμματα ελέγχου λοιμώξεων. Το 2008 συνοψίστηκαν οι συστάσεις που προέκυψαν από κατευθυντήριες οδηγίες ορισμένων κυβερνητικών οργανισμών, επαγγελματικών οργανισμών και φορέων δημόσιας υγείας, ώστε να βοηθήσουν τα ιδρύματα να δώσουν προτεραιότητα και να υλοποιήσουν τις προσπάθειες πρόληψης της μετάδοσης του MRSA 12. Όλα τα προγράμματα πρόληψης της μετάδοσης του MRSA πρέπει να περιλαμβάνουν ορισμένες στρατηγικές - κλειδιά, όπως ο έλεγχος ενεργούς επιτήρησης, η υγιεινή των χεριών, η απομόνωση ασθενών και άλλες Η ενότητα «Πληροφορίες Αναθεώρησης Εγγράφου» βρίσκεται στο τέλος του παρόντος εγγράφου. 05540178001-06EL 1 Doc Rev. 6.0

ενέργειες πρόληψης της μετάδοσης. Η ανίχνευση PCR του MRSA σε πραγματικό χρόνο (Real Time PCR) μειώνει σημαντικά το χρόνο ανίχνευσης (λιγότερο από 2 ώρες εργαστηριακού χρόνου) σε σχέση με τις τυπικές εξετάσεις καλλιέργειας, βελτιώνοντας συνεπώς την αποτελεσματικότητα των στρατηγικών ελέγχου και αντιμετώπισης. ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η ανίχνευση του MRSA με το LightCycler MRSA Advanced Test βασίζεται σε 3 κύριες διαδικασίες: Προετοιμασία δείγματος με μηχανική λύση των βακτηριακών κυτταρικών τοιχωμάτων Ενίσχυση PCR του DNA στόχου και ανίχνευση με ειδικούς ιχνηθέτες υβριδισμού Αυτόματη έκδοση αποτελεσμάτων μετά την ανάλυση κορυφής τήξης Προετοιμασία Δειγμάτων Η μηχανική λύση των δειγμάτων ρινικών επιχρισμάτων πραγματοποιείται με τη χρήση του LightCycler Advanced Lysis Κιτ και του MagNA Lyser Οργάνου. Οι κεφαλές των στυλεών τοποθετούνται μέσα σε σωληνάρια λύσης και θερμαίνονται ώστε να αδρανοποιηθούν όλα τα βακτήρια. Στη συνέχεια, τα σωληνάρια λύσης μεταφέρονται στο MagNA Lyser Όργανο, όπου εκτελείται μηχανική λύση των βακτηριακών κυτταρικών τοιχωμάτων που οδηγεί σε μη κεκαθαρμένα κυτταρολυτικά διαλύματα. Μετά από σύντομη φυγοκέντριση για την καθίζηση των γυάλινων σωματιδίων και των ινών του στυλεού, τα επεξεργασμένα δείγματα μεταφέρονται σε τριχοειδή και υποβάλλονται σε ανάλυση PCR χρησιμοποιώντας το LightCycler MRSA Advanced Test και το LightCycler 2.0 Όργανο. Ενίσχυση PCR Επιλογή Στόχου Οι εκκινητές και οι ιχνηθέτες του LightCycler MRSA Advanced Test ανιχνεύουν μια αλληλουχία ιδιοτήτων ενδεικτική της ενσωμάτωσης της χρωμοσωμικής κασέτας SCCmec στο χρωμόσωμα του Staphylococcus aureus, που υποδηλώνει την παρουσία DNA του MRSA. Ενίσχυση Τα δείγματα που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία και το μίγμα ενίσχυσης που περιέχει «hot start» Taq πολυμεράση τοποθετούνται στα LightCycler Τριχοειδή (20 µl), στα οποία πραγματοποιείται η ενίσχυση PCR. Κάθε αντίδραση LightCycler MRSA Advanced Test περιέχει ένα εσωτερικό πρότυπο ελέγχου, που έχει σχεδιαστεί για τον έλεγχο της παρουσίας αναστολέων στα δείγματα και την παρακολούθηση της ακεραιότητας των αντιδραστηρίων. Το ένζυμο AmpErase (ουρακίλη-nγλυκοζυλάση), που περιλαμβάνεται στο LightCycler MRSA Advanced Test, αναγνωρίζει και καταλύει τη διάσπαση των κλώνων DNA, οι οποίοι περιέχουν δεοξυουριδίνη, αλλά όχι του DNA που περιέχει δεοξυθυμιδίνη. Εφόσον οι κλώνοι (amplicon) που δημιουργούνται με το LightCycler MRSA Advanced Test περιέχουν δεοξυουριδίνη, οι εν δυνάμει παράγοντες επιμόλυνσης των κλώνων (amplicon) εξαλείφονται κατά τη διάρκεια ενός παρατεταμένου σταδίου θέρμανσης που πραγματοποιείται πριν από την έναρξη της ενίσχυσης PCR. Η αλληλουχία στόχου ενός πλασμιδίου ενισχύεται ταυτόχρονα στο Θετικό Ορό Ελέγχου. Ο Θετικός Ορός Ελέγχου προορίζεται για την παρακολούθηση τυχόν προβλημάτων στα αντιδραστήρια και περιλαμβάνεται σε κάθε ανάλυση. Κάθε ανάλυση περιλαμβάνει επίσης έναν Αρνητικό Ορό Ελέγχου που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση επιμόλυνσης αντιδραστηρίου ή περιβαλλοντικής μόλυνσης από DNA του MRSA. 05540178001-06EL 2 Doc Rev. 6.0

Ειδική ανίχνευση προϊόντων PCR με Ιχνηθέτες Υβριδισμού Η ανίχνευση των κλώνων (amplicon) MRSA και Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου πραγματοποιείται με φθορισμό χρησιμοποιώντας ένα ζεύγος ειδικών ιχνηθετών υβριδισμού. Οι ιχνηθέτες δεσμεύονται σε μια ειδική εσωτερική αλληλουχία στο τμήμα που υποβλήθηκε σε ενίσχυση και τοποθετούνται σε κοντινή απόσταση ο ένας από τον άλλο. Μετά από διέγερση, οι δεσμευμένοι ιχνηθέτες εκπέμπουν ένα σήμα φθορισμού συγκεκριμένου μήκους κύματος χρησιμοποιώντας μια διαδικασία που ονομάζεται Μεταφορά Ενέργειας Συντονισμού Φθορισμού (FRET). Το φως που εκπέμπεται μετράται με το LightCycler 2.0 Όργανο. Ειδικοί κλώνοι (amplicon) MRSA ή εσωτερικού προτύπου ελέγχου ανιχνεύονται παράλληλα σε δυο διαφορετικά κανάλια ανίχνευσης και μπορούν, με τον τρόπο αυτό, να διαφοροποιηθούν. Μετά την ολοκλήρωση της διαδικασίας PCR πραγματικού χρόνου, εκτελείται αυτόματα μια ανάλυση κορυφής τήξης από το LightCycler 2.0 Όργανο. Κλώνοι (amplicon) μονόκλωνου DNA με δεσμευμένους ιχνηθέτες υβριδισμού υποβάλλονται σε αυξανόμενες θερμοκρασίες. Όταν επιτευχθεί μια συγκεκριμένη θερμοκρασία στα προϊόντα PCR, αποδεσμεύεται ο ένας από τους δύο ιχνηθέτες, προκαλώντας απώλεια του σήματος φθορισμού. Η μείωση του σήματος φθορισμού παρατηρείται σε μια συγκεκριμένη θερμοκρασία και οδηγεί σε κορυφές τήξης, που χρησιμοποιούνται για την ταυτοποίηση και το διαχωρισμό των ειδικών κλώνων (amplicon) για το MRSA και το Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου. Αυτόματη έκδοση αποτελεσμάτων μετά την ανάλυση κορυφής τήξης Μετά την εκτέλεση οπτικής ανίχνευσης των κορυφών τήξης χρησιμοποιώντας τις Γραμμές της τιμής T M στο LightCycler Λογισμικό, τα αποτελέσματα εξέτασης μεταφέρονται σε ένα ειδικό εργαλείο ερμηνείας (το Micro Analysis Software) και δημιουργείται μια αναφορά με τα αποτελέσματα IVD. 05540178001-06EL 3 Doc Rev. 6.0

ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ LightCycler Advanced Lysis Kit LightCycler Advanced Lysis Κιτ (P/N: 05205743 190) LYS (Αντιδραστήριο Λύσης) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris EDTA < 15% Σωματίδια πυριτίου 0,09% Αζίδιο του νατρίου LYS ADV 96 Εξετάσεις 96 x 0,6 ml LightCycler MRSA Advanced Test (P/N: 05352894 190) MRSA RXNMX (Μίγμα Αντίδρασης MRSA) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris < 0,1% Χλωριούχο μαγνήσιο Χλωριούχο κάλιο < 0,001% datp, dctp, dgtp, dutp 0,19% Οκτυλογλυκοσίδιο 0,03% Λευκωματίνη Βόειου Ορού (θηλαστικού) < 0,1% FastStart DNA Taq Πολυμεράσης (μικροβιακό) < 0,1% Ένζυμο AmpErase (ουρακίλη-n-γλυκοζυλάση) (μικροβιακό) 0,09% Αζίδιο του νατρίου MRSA DETMX (Μίγμα Ανίχνευσης MRSA) 0,05% Διάλυμα Brij 35 Ρυθμιστικό διάλυμα Tris < 0,01% EDTA < 0,01% εκκινητές MRSA < 0,01% Ειδικοί για το MRSA και το Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου MRSA ολιγονουκλεοτιδικοί ιχνηθέτες με φθορίζουσα επισήμανση 0,09% Αζίδιο του νατρίου 0,001% Poly ra RNA (συνθετικό) < 0,001% Μη μολυσματικό DNA πλασμιδίου (μικροβιακό) που περιέχει αλληλουχίες δέσμευσης εκκινητών MRSA και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη MRSA (+) C (Θετικός Ορός Ελέγχου MRSA) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris < 0,01% EDTA 0,002% Poly ra RNA (συνθετικό) 0,09% Αζίδιο του νατρίου < 0,001% Μη μολυσματικό πλασμίδιο DNA (μικροβιακό) που περιέχει αλληλουχίες MRSA LC MRSA 96 Εξετάσεις 3 x 0,352 ml 3 x 0,176 ml 1 x 0,176 ml 05540178001-06EL 4 Doc Rev. 6.0

ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ A. ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ. Η χρήση αυτού του προϊόντος πρέπει να επιτρέπεται μόνο σε προσωπικό εκπαιδευμένο στις τεχνικές PCR. B. Η παρούσα εξέταση προορίζεται για χρήση μόνο με δείγματα ρινικών επιχρισμάτων. Γ. Μην εκτελείτε αναρρόφηση με πιπέτα από το στόμα. Δ. Απαγορεύεται το κάπνισμα και η κατανάλωση τροφίμων και ποτών στους χώρους εργασίας του εργαστηρίου. Φοράτε προστατευτικά γάντια μίας χρήσης, ποδιές εργαστηρίου και προστατευτικά γυαλιά κατά το χειρισμό δειγμάτων και αντιδραστηρίων των κιτ. Πλένετε καλά τα χέρια σας μετά το χειρισμό δειγμάτων και αντιδραστηρίων εξέτασης. E. Αποφεύγετε τη μόλυνση των αντιδραστηρίων από μικρόβια όταν αφαιρείτε τα κλάσματα δείγματος από τις φιάλες αντιδραστηρίων. Συνιστάται η χρήση αποστειρωμένων ακροφυσίων πιπετών μίας χρήσης. ΣΤ. Μη συνδυάζετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες ή από διαφορετικές φιάλες της ίδιας παρτίδας. Ζ. Μην αναμιγνύετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες κιτ. Η. Η απόρριψη των αχρησιμοποίητων αντιδραστηρίων, των απορριμμάτων και των δειγμάτων θα πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς. Θ. Μη χρησιμοποιείτε ένα κιτ μετά την ημερομηνία λήξης του. Ι. Δελτία Δεδομένων Ασφάλειας Υλικών (MSDS) διατίθενται κατόπιν αίτησης από τα τοπικά γραφεία της Roche. ΙΑ. Τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να πραγματοποιείται με ασφαλείς εργαστηριακές διαδικασίες, όπως εκείνες που περιγράφονται στην τεκμηρίωση Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 13 και στο έγγραφο CLSI M29-A3 14. Καθαρίζετε καλά και απολυμαίνετε όλες τις επιφάνειες εργασίας με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απιονισμένο ή απoσταγμένο νερό. Σημείωση: Τα οικιακά υγρά λευκαντικά που διατίθενται στο εμπόριο περιέχουν κατά κανόνα υποχλωριώδες νάτριο σε συγκέντρωση 5,25%. Η αραίωση οικιακού λευκαντικού σε αναλογία 1:10 παράγει διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 0,5%. ΙΒ. ΙΓ. ΙΔ. Τα αντιδραστήρια LYS, MRSA RXNMX, MRSA DETMX και MRSA (+) C περιέχουν αζίδιο του νατρίου. Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με το μόλυβδο και το χαλκό των σωληνώσεων και να δημιουργήσει υψηλής εκρηκτικότητας αζίδια μετάλλου. Κατά την απόρριψη διαλυμάτων που περιέχουν αζίδιο του νατρίου στους νεροχύτες των εργαστηρίων, ρίχνετε άφθονη ποσότητα νερού για να αποφευχθεί ο σχηματισμός αζιδίων. Φοράτε προστατευτικά γυαλιά, ποδιές εργαστηρίου και γάντια μίας χρήσης όταν χειρίζεστε αντιδραστήρια. Αποφεύγετε την επαφή των υλικών αυτών με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού. Αν δεν υπάρξει άμεση αντιμετώπιση, μπορεί να προκληθούν εγκαύματα. Αν πέσουν σταγόνες από τα αντιδραστήρια, αραιώστε με νερό πριν τις σκουπίσετε. Η μόλυνση από Θετικούς Ορούς ελέγχου και θετικά δείγματα μπορεί να αποφευχθεί μόνο με την εφαρμογή των ορθών εργαστηριακών πρακτικών και με την προσεκτική τήρηση των διαδικασιών που περιγράφονται στο παρόν ένθετο συσκευασίας. 05540178001-06EL 5 Doc Rev. 6.0

ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ ΧΕΙΡΙΣΜΟΥ A. Αποθηκεύετε το LightCycler Advanced Lysis Κιτ (LYS) σε όρθια θέση στους 15 έως 25 C αμέσως μετά την παραλαβή του. B. Αποθηκεύετε το LightCycler MRSA Advanced Test Κιτ (MRSA RXNMX, MRSA DETMX και MRSA (+) C) στους 15 έως 25 C αμέσως μετά την παραλαβή του. Αν δεν ανοιχτούν, τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μετά το άνοιγμα, αποθηκεύστε τα υπόλοιπα αντιδραστήρια MRSA RXNMX και MRSA DETMX στους 15 έως 25 C για έως και 30 ημέρες. Τα αντιδραστήρια MRSA RXNMX και MRSA DETMX μπορούν να υποβληθούν σε έως και 5 κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Γ. Μετά το άνοιγμα, αποθηκεύστε το υπόλοιπο αντιδραστήριο MRSA (+) C στους 15 έως 25 C ή στους 2 έως 8 C για έως και 30 ημέρες. Το αντιδραστήριο MRSA (+) C μπορεί να υποβληθεί σε έως και 22 κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Δ. Προστατεύετε το αντιδραστήριο MRSA DETMX από την έκθεση στο φως. E. Το Κύριο Μίγμα Εργασίας (που προετοιμάζεται με προσθήκη MRSA RXNMX και MRSA DETMX) πρέπει να προετοιμάζεται εκ νέου και να χρησιμοποιείται εντός 24 ωρών από την προετοιμασία. Εάν το Κύριο Μίγμα Εργασίας δεν χρησιμοποιηθεί αμέσως μετά την προετοιμασία, το Κύριο Μίγμα Εργασίας πρέπει να αποθηκευτεί για έως και 24 ώρες στους 2 έως 8 C, προστατευμένο από το φως. ΣΤ. Τα δείγματα που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία και οι Αρνητικοί Οροί Ελέγχου που έχουν ληφθεί από στυλεούς Liquid Stuart και στυλεούς Amies με γέλη (με ή χωρίς άνθρακα) παραμένουν σταθερά για έως και 1 ημέρα στους 15 έως 25 C ή για έως και 5 ημέρες στους 2 έως 8 C ή για έως και 12 μήνες στους -15 έως -25 C. Ζ. Η ενίσχυση πρέπει να ξεκινήσει αμέσως μετά την προσθήκη των δειγμάτων και των ορών ελέγχου που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία στο Κύριο Μίγμα Εργασίας. Αν κάτι τέτοιο δεν είναι εφικτό, αποθηκεύστε τα γεμάτα τριχοειδή μακριά από το φως για έως και 3 ώρες στους 2 έως 8 C. ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ A. LightCycler Advanced Lysis Kit LightCycler Advanced Lysis Κιτ (P/N: 05205743 190) LYS ADV LYS (Αντιδραστήριο Λύσης) B. LightCycler MRSA Advanced Test (P/N: 05352894 190) LC MRSA MRSA RXNMX (Μίγμα Αντίδρασης MRSA) MRSA DETMX (Μίγμα Ανίχνευσης MRSA) MRSA (+) C (Θετικός Ορός Ελέγχου MRSA) 05540178001-06EL 6 Doc Rev. 6.0

ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ Όργανα και Λογισμικό LightCycler 2.0 Όργανο (P/N: 03 531 414 201) LightCycler Λογισμικό 4.1 (P/N: 04 898 915 001) ή νεότερο LightCycler MRSA Advanced Software Set v1.2 CE (P/N: 06 364 861 190) ή νεότερο Φυγόκεντρος Περιστρεφόμενου Δίσκου LC 2.0 [P/N: 03 709 582 001 (230 V) ή P/N: 03 709 507 001 (110 V)] Σημείωση: Αν έχετε ήδη αγοράσει μια Φυγόκεντρο Περιστρεφόμενου Δίσκου LC [P/N: 12 189 682 001 (230 V) ή P/N: 03 030 512 001 (115 V)], απαιτείται επίσης ένα σετ ρότορα LightCycler Περιστρεφόμενου Δίσκου 2.0 [P/N: 03 724 697 001]. Ή τυπική επιτραπέζια μικροφυγόκεντρος που περιέχει ρότορα για σωληνάρια 2,0 ml και προσαρμογείς φυγόκεντρου LC [P/N: 11 909 312 001] MagNA Lyser Όργανο [P/N: 03 358 976 001 (230 V) ή 03 358 968 001 (110 V)] Προαιρετική συσκευή ανάγνωσης γραμμωτού κώδικα [P/N: 05 536 421 001] Αντιδραστήρια και Αναλώσιμα LightCycler Multicolor Compensation Set (P/N: 04 484 355 001) LightCycler Τριχοειδή, 20 µl (P/N: 04 929 292 001) ΑΛΛΑ ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ Μέσο μεταφοράς BD CultureSwab Liquid Stuart (BD P/N: 220099 ή 220109) ή μέσο μεταφοράς Copan Venturi Transystem Liquid Stuart (Copan Italia International P/N: 141C ή 139C), ή μέσο μεταφοράς BD CultureSwab plus Amies με γέλη χωρίς άνθρακα (BD P/N: 220116 ή 220117) ή μέσο μεταφοράς Copan Venturi Transystem plus Amies με γέλη χωρίς άνθρακα (Copan Italia International P/N: 108C ή 134C), ή μέσο μεταφοράς BD CultureSwab plus Amies με γέλη με άνθρακα (BD P/N: 220121 ή 220122) ή μέσο μεταφοράς Copan Venturi Transystem plus Amies με γέλη με άνθρακα (Copan Italia International P/N: 114C ή 136C) Γάντια μίας χρήσης, χωρίς πούδρα Γάζα Αιθανόλη (70%) Ρυθμιζόμενες Συσκευές Πιπέτας*: (χωρητικότητας: 10 µl, 100 µl και 1.000 µl) με αποστειρωμένα ακροφύσια μικροπιπέτας φραγής φίλτρου ή θετικής μετατόπισης, χωρίς DNase Μονάδα ξηρής θερμότητας ρυθμισμένη στους 95 C (± 2 C): VWR (P/N: 12621-088) ή αντίστοιχη μονάδα σωληναρίων 2,0 ml: VWR (P/N: 12985-050) Μικροφυγόκεντρος με απόδοση φυγόκεντρου δύναμης 8.000 20.000 x g με ρότορα κατάλληλο για σωληνάρια 2,0 ml με βιδωτό πώμα: (P/N: Eppendorf μοντέλο 5417C) ή αντίστοιχη Αποστειρωμένα σωληνάρια μικροφυγόκεντρου 1,5 ml, από πολυπροπυλένιο, με Σιλικόνη: (P/N: Eppendorf Αρ. παραγγελίας 0030 108.051 ή αντίστοιχα 05540178001-06EL 7 Doc Rev. 6.0

Αναδευτήρας τύπου Vortex: Fisher (P/N: 12-812) ή αντίστοιχος Προαιρετικό εργαλείο μικροσωληναρίων: VWR (P/N: 20170-688) ή Rainin (P/N: PJ-4A) ή αντίστοιχο * Οι πιπέτες πρέπει να διαθέτουν ακρίβεια 3% του δηλούμενου όγκου. Τα ακροφύσια με φραγή αερολυμάτων ή θετική μετατόπιση, χωρίς DNase, πρέπει να χρησιμοποιούνται όπου ορίζεται, για την αποφυγή της διασταυρούμενης μόλυνσης των δειγμάτων και των κλώνων (amplicon). ΣΥΛΛΟΓΗ, ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Σημείωση: Όλα τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να θεωρούνται μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται ανάλογα. A. Συλλογή Δειγμάτων 1. Εμποτίστε το στυλεό με δύο σταγόνες (περίπου 50 µl) αποστειρωμένου φυσιολογικού ορού ή χρησιμοποιήστε τον στεγνό. 2. Εισαγάγετε προσεκτικά το στυλεό στο εσωτερικό του μυκτήρα σε βάθος περίπου 1,3 cm (και τις δύο κεφαλές ταυτόχρονα, σε περίπτωση στυλεού διπλής κεφαλής) και περιστρέψτε τον πάνω στο βλεννογόνο πέντε φορές ασκώντας ταυτόχρονα ελαφριά πίεση στο εξωτερικό της μύτης (ώστε να διασφαλιστεί η επαφή των κεφαλών του στυλεού με το εσωτερικό της μύτης). 3. Εισαγάγετε τον ίδιο στυλεό στον άλλο μυκτήρα και επαναλάβετε τη διαδικασία. 4. Επανατοποθετήστε το στυλεό στο δοχείο του και τοποθετήστε την κατάλληλη ετικέτα. B. Μεταφορά και Αποθήκευση Δειγμάτων Η μεταφορά των δειγμάτων πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 15. Τα δείγματα μπορούν να μεταφερθούν στους 15 έως 25 C. Τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν πριν υποβληθούν σε επεξεργασία (συμπεριλαμβανομένου του χρόνου που απαιτείται για τη μεταφορά), όπως ορίζεται παρακάτω. Το δείγμα που έχει ληφθεί με στυλεούς Liquid Stuart είναι σταθερό στους 15 έως 25 C για έως και 5 ημέρες, στους 2 έως 8 C για έως και 5 ημέρες, στους -15 έως -25 C για έως και 1 μήνα. Το δείγμα που έχει ληφθεί με στυλεούς Amies με γέλη με άνθρακα ή χωρίς άνθρακα είναι σταθερό στους 15 έως 22 C για έως και 4 ημέρες (στους 25 C το ποσοστό ευστοχίας ήταν 95% την 6η ημέρα). 05540178001-06EL 8 Doc Rev. 6.0

ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Προετοιμασία Οργάνου A. Εγκατάσταση του Micro Analysis Software (MAS) Για την εγκατάσταση ενημερώσεων, ελέγξτε αν παρέχονται επιπλέον πληροφορίες με το προϊόν. 1. Συνδεθείτε ως Administrator στη Μονάδα Ελέγχου του LightCycler. 2. Εισαγάγετε το CD του LightCycler MRSA Advanced Software Set v1.2 CE (ή νεότερο) στη μονάδα CD της Μονάδας Ελέγχου του LightCycler. Ξεκινήστε την εγκατάσταση του MAS κάνοντας διπλό κλικ στο αρχείο setup.exe στο CD. 3. Για την πρώτη εγκατάσταση: α. αν δεν είναι ήδη εγκατεστημένο το Microsoft Data Access Components 2.8, θα σας ζητηθεί να το εγκαταστήσετε στην αρχή της εγκατάστασης του MAS. Η εγκατάσταση του Microsoft Data Access Components 2.8 είναι απαραίτητη, διαφορετικά το MAS δεν θα λειτουργεί σωστά. β. αν δεν είναι ήδη εγκατεστημένο το Microsoft.NET Framework 2.0 (x86), θα σας ζητηθεί να το εγκαταστήσετε στην αρχή της εγκατάστασης του MAS. Η εγκατάσταση του Microsoft.NET Framework 2.0 (x86) είναι απαραίτητη, διαφορετικά το MAS δεν θα λειτουργεί σωστά. γ. αν δεν είναι ήδη εγκατεστημένο το Microsoft Windows Installer 3.1, θα σας ζητηθεί να το εγκαταστήσετε στην αρχή της εγκατάστασης του MAS. Η εγκατάσταση του Microsoft Windows Installer 3.1 είναι απαραίτητη, διαφορετικά το MAS δεν θα λειτουργεί σωστά. δ. αν δεν είναι ήδη εγκατεστημένο το Microsoft Visual Studio 2008 Report Viewer, θα σας ζητηθεί να το εγκαταστήσετε στην αρχή της εγκατάστασης του MAS. Η εγκατάσταση του Microsoft Visual Studio 2008 Report Viewer είναι απαραίτητη, διαφορετικά το MAS δεν θα λειτουργεί σωστά. ε. αν δεν είναι ήδη εγκατεστημένο το Microsoft SQL Server 2005 Express SP2 (x86), θα σας ζητηθεί να το εγκαταστήσετε στην αρχή της εγκατάστασης του MAS. Η εγκατάσταση του Microsoft SQL Server 2005 Express SP2 (x86) είναι απαραίτητη, διαφορετικά το MAS δεν θα λειτουργεί σωστά. 4. Αν σας ζητηθεί να εκτελέσετε επανεκκίνηση, επιβεβαιώστε πατώντας <Yes>. Σημείωση: Μην αφαιρείτε το CD του LightCycler MRSA Advanced Software Set κατά τη διάρκεια της διαδικασίας επανεκκίνησης. 5. Μετά την επανεκκίνηση, ακολουθήστε τις οδηγίες του προγράμματος οδηγού εγκατάστασης. Πατήστε <Next> για να αρχίσει η εγκατάσταση του MAS. 6. Επιλέξτε <Just Me> αν πρόκειται να εργάζεται μόνο ένας χειριστής στη Μονάδα Ελέγχου του LightCycler. Επιλέξτε <Everyone> αν περισσότεροι από ένας χειριστές πρόκειται να εργάζονται στη Μονάδα Ελέγχου του LightCycler. 7. Επιβεβαιώστε ότι η εγκατάσταση του MAS ολοκληρώθηκε με επιτυχία, κάνοντας κλικ στο <Close>, στο παράθυρο <Installation Complete>. 8. Οι φάκελοι δεδομένων για τα αρχεία *.ixo και *.pdf δημιουργούνται αυτόματα (<C:\Export to MAS>, <C:\Export to MAS\ColorCompensations> και <C:\Export to MAS\Macros>). 05540178001-06EL 9 Doc Rev. 6.0

B. Εγκατάσταση και εξαγωγή του LightCycler MRSA Advanced Macros 1. Εγκαταστήστε το *.lckit macros του LightCycler MRSA Advanced MCC Macro v1.0 (MRSA MCC_04484355001A_1.0.Ickit) ή νεότερο και του LightCycler MRSA Advanced Macro v1.0 (MRSA_05352894190_1.0.Ickit) ή νεότερο από το CD του LightCycler MRSA Advanced Software Set v1.2 CE (ή νεότερο). 2. Ανατρέξτε στο κεφάλαιο «Εκτέλεση μιας Roche Macro», στο Εγχειρίδιο Χειριστή Α του LightCycler 2.0 Οργάνου. 3. Εξαγάγετε και τις δύο μακροεντολές στο <C:\Export to MAS\Macros>. Όταν σας ζητηθεί να αποθηκεύσετε το αρχείο, επιλέξτε τον τύπο αρχείου *.ixo και μην αλλάξετε το αρχικό όνομα της μακροεντολής. Γ. Έλεγχος της εγκατάστασης του Micro Analysis Software (MAS) 1. Αντιγράψτε τα παρακάτω αρχεία σωστής λειτουργίας (proof files) από το CD του LightCycler MRSA Advanced Software Set v1.2 CE (ή νεότερο) στο φάκελο <C:\Export to MAS> (μην αποθηκεύετε τα αρχεία σε υποφακέλους). α. MRSA Advanced Proof File v1.2 CE.ixo ή νεότερο β. MRSA Advanced Proof File v1.2 CE.pdf ή νεότερο 2. Αντιγράψτε τα παρακάτω αρχεία αντιστάθμισης χρώματος από το CD του LightCycler MRSA Advanced Software Set v1.2 CE (ή νεότερο) στο φάκελο <C:\Export to MAS\ ColorCompensations>. α. MRSA_CCE_080905-01.ixo β. MRSA_CCO_080905-01.ixo 3. Αν το MAS δεν είναι ήδη ενεργοποιημένο, κάντε διπλό κλικ στο εικονίδιο του MAS στην επιφάνεια εργασίας και πατήστε <Load>. 4. Επιλέξτε το αρχείο MRSA Advanced Proof File v1.2 CE.ixo (ή νεότερο) στο φάκελο <C:\Export to MAS>. 5. Συμπληρώστε τις πληροφορίες «Lot No.», «Expiration Date» και «Lab Info» στα κατάλληλα πεδία του παραθύρου «MRSA Configuration Settings». Advanced Lysis Κιτ Lot No 11A00000 Expiration Date 12201812 MRSA Advanced Test Lot No 23A00000 Expiration Date 24201812 Προσωπικές πληροφορίες Lab Info Roche Lab 6. Επιλέξτε τον τύπο αναφοράς <MRSA Combined> και προχωρήστε κάνοντας κλικ στο <OK>. Το αρχείο θα αναλυθεί αυτόματα και θα εμφανιστούν τα δεδομένα. 7. Εκτυπώστε την αναφορά. 05540178001-06EL 10 Doc Rev. 6.0

8. Πλοηγηθείτε στο φάκελο <C:\Export to MAS>, ανοίξτε και εκτυπώστε το αρχείο MRSA Advanced Proof File v1.2 CE.pdf (ή νεότερο). 9. Βεβαιωθείτε ότι η αναφορά MAS και η αναφορά σε αρχείο PDF που εκτυπώσατε περιλαμβάνουν τα ίδια αποτελέσματα. Διαφορετικά, επικοινωνήστε με τα τοπικά γραφεία της Roche για την παροχή τεχνικής υποστήριξης. Δ. Απεγκατάσταση του Micro Analysis Software (MAS) 1. Συνδεθείτε ως Administrator στη Μονάδα Ελέγχου του LightCycler. 2. Κάντε κλικ στο <Start> στη γραμμή εργασιών της Μονάδας Ελέγχου του LightCycler. 3. Επιλέξτε <Start> / <Control Panel> / <Add/Remove Programs> στην κάτω αριστερή γωνία της επιφάνειας εργασίας των Windows. 4. Εμφανίζεται μια λίστα με όλα τα προγράμματα που είναι εγκατεστημένα τη δεδομένη στιγμή. Κάντε κλικ στο <MAS>. 5. Επιλέξτε <Remove> και επιβεβαιώστε κάνοντας κλικ στο <Yes>. Σημείωση: Το CD του MRSA Advanced Software Set παρέχει μια λειτουργία απεγκατάστασης και επισκευής. Η λειτουργία απεγκατάστασης μπορεί να χρησιμοποιηθεί αντί της διαδικασίας που περιγράφηκε παραπάνω. Η λειτουργία επισκευής μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανάκτηση των αρχείων του Micro Analysis Software που έχουν καταστραφεί ή λείπουν. E. Πείραμα Πολυχρωματικής Αντιστάθμισης με τη χρήση του LightCycler Multicolor Compensation Set για χρήση με το LightCycler 2.0 Όργανο Ακολουθήστε τα παρακάτω βήματα για τη δημιουργία ενός νέου αρχείου Αντιστάθμισης Χρώματος ή για την αντικατάσταση ενός αρχείου Αντιστάθμισης Χρώματος που έχει λήξει. 1. Αποψύξτε τα φιαλίδια 1, 2, 3 και 5. Στροβιλίστε ελαφρώς και εκτελέστε σύντομη φυγοκέντρηση (spin down). 2. Εκτελέστε τριπλή αραίωση του φιαλιδίου 2 αναμιγνύοντας ταυτόχρονα: α. 10 µl του διαλύματος που περιέχεται στο φιαλίδιο 2 β. 20 µl ρυθμιστικού διαλύματος από ένα σωληνάριο με LYS χωρίς να μεταφέρετε γυάλινα σωματίδια 3. Διοχετεύστε με πιπέτα 10 µl από κάθε συστατικό σε ξεχωριστά LightCycler τριχοειδή (20 µl). α. Τριχοειδές αρ. 1: φιαλίδιο 1 β. Τριχοειδές αρ. 2: βήμα αραίωσης E2 γ. Τριχοειδές αρ. 3: φιαλίδιο 3 δ. Τριχοειδές αρ. 4: φιαλίδιο 5 Σημείωση: Απορρίψτε την αραίωση του φιαλιδίου 2 μετά την ολοκλήρωση της ανάλυσης. 4. Διοχετεύστε με πιπέτα 10 µl ρυθμιστικού διαλύματος από ένα σωληνάριο με LYS (χωρίς να μεταφέρετε γυάλινα σωματίδια) σε κάθε τριχοειδές για να επιτευχθεί ο συνολικός όγκος των 20 µl. 5. Σφραγίστε κάθε τριχοειδές με ένα πώμα, χρησιμοποιώντας το Εργαλείο Πωματισμού. 05540178001-06EL 11 Doc Rev. 6.0

6. Φυγοκεντρίστε τα τριχοειδή χρησιμοποιώντας Φυγόκεντρο Περιστρεφόμενου Δίσκου LC 2.0 ή μια τυπική φυγόκεντρο και προσαρμογείς φυγόκεντρου. Τα σωληνάρια πρέπει να βρίσκονται στις παρακάτω θέσεις του Περιστρεφόμενου Δίσκου: α. Θέση 1 Περιστρεφόμενου Δίσκου: CCB (φιαλίδιο 1) β. Θέση 2 Περιστρεφόμενου Δίσκου: CC530 (φιαλίδιο 2) γ. Θέση 3 Περιστρεφόμενου Δίσκου: CC610 (φιαλίδιο 3) δ. Θέση 4 Περιστρεφόμενου Δίσκου: CC670 (φιαλίδιο 5) Σημείωση: Μη μειώνετε τον όγκο που χρησιμοποιείται για κάθε τριχοειδές. 7. Μεταφέρετε τον LightCycler Περιστρεφόμενο Δίσκο Δειγμάτων στο LightCycler 2.0 Όργανο. Αν χρησιμοποιείτε μια τυπική φυγόκεντρο, μεταφέρετε τα τριχοειδή στον LightCycler Περιστρεφόμενο Δίσκο Δειγμάτων με τη σειρά που περιγράφηκε στο βήμα E6. Σημείωση: Μην αλλάζετε τη σειρά των αντιδραστηρίων στον Περιστρεφόμενο Δίσκο. 8. Ξεκινήστε και αποθηκεύστε το Πείραμα Αντιστάθμισης Χρώματος (CCE). α. Για χρήση του LightCycler MRSA Advanced MCC Macro ανατρέξτε στο κεφάλαιο «Εκτέλεση μιας Roche Macro», στο Εγχειρίδιο Χειριστή A του LightCycler 2.0 Οργάνου. Σημείωση: Μη χρησιμοποιείτε το πεδίο <assay lot number>. Αν θέλετε να προσθέσετε τον αριθμό παρτίδας ανάλυσης στο πείραμα, εισαγάγετε τις πληροφορίες στο κατάλληλο πεδίο, στον επεξεργαστή δείγματος. β. Αποθηκεύστε την ανάλυση ακολουθώντας τις υποχρεωτικές συμβάσεις ονομασίας για το πείραμα αντιστάθμισης χρώματος: MRSA_CCE_YYMMDD-xx, όπου Y=έτος, M=μήνας, D=ημέρα και xx=αριθμός ανάλυσης. γ. Μόλις ολοκληρωθεί η ανάλυση, δημιουργείται αυτόματα μια LightCycler αναφορά και μπορεί να εκτυπωθεί. 9. Επαλήθευση Ανάλυσης Στην αναφορά δεν θα υποδεικνύεται αν το Πείραμα Αντιστάθμισης Χρώματος ήταν επιτυχές. Η επιτυχία του Πειράματος Αντιστάθμισης Χρώματος καθορίζεται μόνο χρησιμοποιώντας το Αντικείμενο Αντιστάθμισης Χρώματος, που δημιουργήθηκε από το CCE στην αρχική ανάλυση MRSA Advanced. α. Αν η αναφορά του LightCycler Λογισμικού (LCS) για το Πείραμα Αντιστάθμισης Χρώματος (CCE) περιλαμβάνει την ένδειξη <User Developed or Modified Test Method>, το CCE είναι άκυρο. Επαναλάβετε το Πείραμα Αντιστάθμισης Χρώματος (από το βήμα E1). β. Αν η αναφορά του LCS για το Πείραμα Αντιστάθμισης Χρώματος (CCE) δεν περιέχει κάποια ένδειξη, προχωρήστε στο επόμενο βήμα. 10. Δημιουργήστε ένα Αντικείμενο Αντιστάθμισης Χρώματος (CCO). α. Ενεργοποιήστε τη μονάδα ανάλυσης Αντιστάθμισης Χρώματος και πατήστε το κουμπί <save CC object>. β. Δημιουργήστε ένα σύντομο, μοναδικό όνομα χρησιμοποιώντας τις υποχρεωτικές συμβάσεις ονομασίας για το Αντικείμενο Αντιστάθμισης Χρώματος: MRSA_CCO_YYMMDD-xx, όπου Y=έτος, M=μήνας, D=ημέρα και xx=αριθμός ανάλυσης. γ. Το αντικείμενο αυτό χρησιμοποιείται για περαιτέρω ανάλυση των αναλύσεων με το LightCycler MRSA Advanced Test. 11. Εξαγάγετε και τα δύο αρχεία CCE και CCO στο <C:\Export to MAS\ColorCompensations>. Όταν σας ζητηθεί να αποθηκεύσετε το αρχείο, επιλέξτε τον τύπο αρχείου *.ixo και μην αλλάξετε τα αρχικά ονόματα των αρχείων. 05540178001-06EL 12 Doc Rev. 6.0

Προετοιμασία Δειγμάτων και Ορών Ελέγχου A. Προετοιμασία Δείγματος 1. Επικολλήστε την κατάλληλη ετικέτα στο σωληνάριο LYS για κάθε δείγμα ασθενή. Σημείωση: Μη σημειώνετε στα πώματα των σωληναρίων. 2. Αφαιρέστε το στυλεό από το δοχείο μεταφοράς. 3. Τοποθετήστε μία μόνο κεφαλή στυλεού σε ένα σωληνάριο LYS. Σημείωση: Αν χρησιμοποιείτε στυλεό μονής κεφαλής, μπορείτε να πραγματοποιήσετε άμεση καλλιέργεια με γραμμική διασπορά (streaking) του στυλεού στην πλάκα πριν από την τοποθέτησή του στο σωληνάριο LYS. 4. Κρατήστε το στέλεχος του στυλεού κοντά στη στεφάνη του σωληναρίου, ανασηκώστε το στυλεό λίγα χιλιοστά από το κάτω μέρος και λυγίστε το στέλεχος πάνω στη στεφάνη του σωληναρίου για να προκαλέσετε τη θραύση του. Σημείωση: Χρησιμοποιήστε μια γάζα κατά τη θραύση του στυλεού, για να ελαχιστοποιήσετε τον κίνδυνο μόλυνσης. Χρησιμοποιείτε καινούρια γάζα για κάθε στυλεό. 5. Κλείστε καλά το πώμα του σωληναρίου LYS. B. Προετοιμασία αρνητικoύ ορού ελέγχου Σημείωση: Η προετοιμασία του Αρνητικού Ορού Ελέγχου (NC) πρέπει να πραγματοποιείται ταυτόχρονα με εκείνη των δειγμάτων που θα υποβληθούν σε εξέταση. 1. Επικολλήστε την κατάλληλη ετικέτα Αρνητικού Ορού Ελέγχου στο σωληνάριο LYS. Σημείωση: Μη σημειώνετε στα πώματα των σωληναρίων. 2. Τοποθετήστε έναν αποστειρωμένο στυλεό στο δοχείο μεταφοράς του. Ανατρέξτε στην ενότητα «Άλλα Απαιτούμενα Μη Παρεχόμενα Υλικά» για τη λίστα συνιστώμενων στυλεών. 3. Επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου για τουλάχιστον 1 λεπτό. 4. Αφαιρέστε το στυλεό από το δοχείο μεταφοράς. 5. Τοποθετήστε μία μόνο κεφαλή στυλεού σε ένα σωληνάριο LYS. 6. Κρατήστε το στέλεχος του στυλεού κοντά στη στεφάνη του σωληναρίου, ανασηκώστε το στυλεό λίγα χιλιοστά από το κάτω μέρος και λυγίστε το στέλεχος πάνω στη στεφάνη του σωληναρίου για να προκαλέσετε τη θραύση του. Σημείωση: Χρησιμοποιήστε μια καινούρια γάζα κατά τη θραύση του στυλεού, για να ελαχιστοποιήσετε τον κίνδυνο μόλυνσης. 7. Κλείστε καλά το πώμα του σωληναρίου LYS. 05540178001-06EL 13 Doc Rev. 6.0

Γ. Επεξεργασία Δειγμάτων και Ορών Ελέγχου 1. Θερμάνετε τα δείγματα και τον Αρνητικό Ορό Ελέγχου στους 95 ± 2 C για 2 λεπτά σε μονάδα ξηρής θερμότητας. 2. Εκτελέστε λύση στα δείγματα και τον Ορό Αρνητικού Ελέγχου με το MagNA Lyser Όργανο για 70 δευτερόλεπτα με ταχύτητα 5.000 rpm. Ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χειριστή του MagNA Lyser Οργάνου για λεπτομέρειες σχετικά με τη χρήση του. 3. Φυγοκεντρίστε τα δείγματα και τον Αρνητικό Ορό Ελέγχου στα 8.000 20.000 x g σε θερμοκρασία δωματίου για 1 λεπτό. Σημείωση: Τα δείγματα που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία και οι Αρνητικοί Οροί Ελέγχου που έχουν ληφθεί από στυλεούς Liquid Stuart και στυλεούς Amies με γέλη (με ή χωρίς άνθρακα) παραμένουν σταθερά για έως και 1 ημέρα στους 15 έως 25 C ή για έως και 5 ημέρες στους 2 έως 8 C ή για έως και 12 μήνες στους -15 έως -25 C. Προετοιμασία Αντιδραστηρίου 1. Αποψύξτε το MRSA RXNMX και το MRSA DETMX και το MRSA (+) C σε θερμοκρασία δωματίου. Βεβαιωθείτε ότι τα αντιδραστήρια έχουν αποψυχθεί πλήρως πριν από τη χρήση. 2. Στροβιλίστε το MRSA RXNMX και το MRSA DETMX και το MRSA (+) C για 3 5 δευτερόλεπτα και εκτελέστε σύντομη φυγοκέντριση για τη συλλογή υλικού στη βάση του σωληναρίου. 3. Προετοιμάστε το Κύριο Μίγμα Εργασίας για τον αριθμό των δειγμάτων και των ορών ελέγχου που υποβάλλονται σε εξέταση σε ένα σωληνάριο μικροφυγόκεντρου από πολυπροπυλένιο με σιλικόνη. (Χρησιμοποιήστε τον Πίνακα 1 ως οδηγό.) Κάθε ανάλυση πρέπει να περιέχει τουλάχιστον ένα δείγμα, ένα Θετικό Ορό Ελέγχου (PC) και έναν Αρνητικό Ορό Ελέγχου (NC). Σημείωση: Στους συνιστώμενους όγκους περιλαμβάνονται 2 αντιδράσεις για τον Αρνητικό και για το Θετικό ορό ελέγχου, καθώς και ένας επιπλέον όγκος προκειμένου να αντισταθμιστεί ο «νεκρός όγκος» και να διευκολυνθεί η διοχέτευση με πιπέτα από το σωληνάριο ανάμιξης στα τριχοειδή LC. Σημείωση: Χρησιμοποιήστε το Εργαλείο Μικροσωληναρίων (VWR P/N 20170-688 ή Rainin P/N PJ-4A) ή αντίστοιχο ως βοήθημα για το άνοιγμα των σωληναρίων MRSA RXNMX και MRSA DETMX, αν χρειάζεται. Πίνακας 1 Προετοιμασία Κύριου Μίγματος Εργασίας Αριθμός Δειγμάτων Όγκος MRSA RXNMX (µl) Όγκος MRSA DETMX (µl) Συνολικός Όγκος (µl)* 1 40 20 60 2 50 25 75 3 60 30 90 4 70 35 105 5 80 40 120 6 90 45 135 7 100 50 150 8 110 55 165 9 120 60 180 10 130 65 195 11 150 75 225 05540178001-06EL 14 Doc Rev. 6.0

Αριθμός Δειγμάτων Όγκος MRSA RXNMX (µl) Όγκος MRSA DETMX (µl) Συνολικός Όγκος (µl)* 12 160 80 240 13 170 85 255 14 180 90 270 15 190 95 285 16 200 100 300 17 210 105 315 18 220 110 330 19 230 115 345 20 240 120 360 21 260 130 390 22 270 135 405 23 280 140 420 24 290 145 435 25 300 150 450 26 310 155 465 27 320 160 480 28 330 165 495 29 340 170 510 30 350 175 525 *Περιλαμβάνει τον όγκο των NC, MRSA (+) C και το νεκρό όγκο. 4. Στροβιλίστε το Κύριο Μίγμα Εργασίας για 3-5 δευτερόλεπτα και εκτελέστε σύντομη φυγοκέντριση για τη συλλογή υλικού στη βάση του σωληναρίου. Το Κύριο Μίγμα Εργασίας πρέπει να υποβάλλεται καθημερινά σε εκ νέου προετοιμασία. Απορρίψτε το Κύριο Μίγμα Εργασίας που δεν έχει χρησιμοποιηθεί εάν παρέλθουν 24 ώρες από την προετοιμασία του. Προετοιμασία Δειγμάτων και Ορών Ελέγχου που Έχουν Υποβληθεί σε Επεξεργασία 1. Τοποθετήστε τον απαιτούμενο αριθμό LightCycler τριχοειδών στον Περιστρεφόμενο Δίσκο LC ή στους προσαρμογείς φυγόκεντρου. Απαιτούνται ένα (1) τριχοειδές για τον PC (θέση 1), 1 τριχοειδές για τον NC που έχει υποβληθεί σε επεξεργασία (θέση 2) και 1 τριχοειδές για κάθε δείγμα που έχει υποβληθεί σε επεξεργασία (θέσεις 3 και παραπάνω). Σημείωση: Ο χειρισμός των LightCycler τριχοειδών πρέπει να πραγματοποιείται από το τμήμα συλλογής υγρών του τριχοειδούς. 2. Διοχετεύστε με πιπέτα 15 µl του Κύριου Μίγματος Εργασίας στο τμήμα συλλογής υγρού κάθε τριχοειδούς. 3. Διοχετεύστε με πιπέτα 5 µl καθαρού υπερκείμενου υγρού από κάθε επεξεργασμένο δείγμα στα τριχοειδή αρ. 3 και παραπάνω. Αλλάζετε το ακροφύσιο πιπέτας μετά από κάθε δείγμα. 05540178001-06EL 15 Doc Rev. 6.0

4. Διοχετεύστε με πιπέτα 5 µl του αρνητικού ορού ελέγχου που έχει υποβληθεί σε επεξεργασία, στο τριχοειδές αρ. 2. Σημείωση: Τα δείγματα που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία και οι Αρνητικοί Οροί Ελέγχου που έχουν ληφθεί από στυλεούς Liquid Stuart και στυλεούς Amies με γέλη (με ή χωρίς άνθρακα) παραμένουν σταθερά για έως και 1 ημέρα στους 15 έως 25 C ή για έως και 5 ημέρες στους 2 έως 8 C ή για έως και 12 μήνες στους -15 έως -25 C. Αν χρησιμοποιείτε κατεψυγμένα επεξεργασμένα δείγματα, αποψύξτε τα σε θερμοκρασία δωματίου, στροβιλίστε τα για 10 δευτερόλεπτα και στη συνέχεια φυγοκεντρίστε στα 8.000 20.000 x g για 1 λεπτό, σε θερμοκρασία δωματίου. 5. Διοχετεύστε με πιπέτα 5 µl του MRSA (+) C που έχει αποψυχθεί στο τριχοειδές αρ. 1. 6. Σφραγίστε κάθε τριχοειδές με ένα πώμα, χρησιμοποιώντας το Εργαλείο Πωματισμού. 7. Φυγοκεντρίστε τα τριχοειδή στη Φυγόκεντρο Περιστρεφόμενου Δίσκου LC 2.0 ή χρησιμοποιώντας μια τυπική φυγόκεντρο και προσαρμογείς φυγόκεντρου. 8. Μεταφέρετε τον LightCycler Περιστρεφόμενο Δίσκο Δειγμάτων στο LightCycler 2.0 Όργανο. Σημείωση: Αν χρησιμοποιείτε μια τυπική φυγόκεντρο, μεταφέρετε τα τριχοειδή στον LightCycler Περιστρεφόμενο Δίσκο Δειγμάτων με τη σειρά που περιγράφηκε στο βήμα 1. Σημείωση: Η ενίσχυση πρέπει να ξεκινήσει αμέσως μετά την προσθήκη των δειγμάτων και των ορών ελέγχου που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία στο Κύριο Μίγμα Εργασίας. Αν κάτι τέτοιο δεν είναι εφικτό, μπορείτε να αποθηκεύσετε τα γεμάτα τριχοειδή για έως και 3 ώρες, μακριά από το φως, στους 2 έως 8 C. Φόρτωση και Λειτουργία του LightCycler 2.0 Οργάνου 1. Συνδεθείτε στο LightCycler Λογισμικό. 2. Εκκινήστε το LightCycler MRSA Advanced Macro (για λεπτομέρειες, ανατρέξτε στο κεφάλαιο «Εκτέλεση μιας Roche Macro», στο Εγχειρίδιο Χειριστή A του LightCycler 2.0 Οργάνου. Σημείωση: Μη χρησιμοποιείτε το πεδίο <assay lot number>. Πριν από την έναρξη της διαδικασίας ανάλυσης αποτελεσμάτων, θα σας ζητηθεί από το MAS να εισαγάγετε τις πληροφορίες αντιδραστηρίου (μπορείτε να εισαγάγετε τον αριθμό παρτίδας ανάλυσης στο κατάλληλο πεδίο του επεξεργαστή δείγματος στο LightCycler Λογισμικό). 3. Ονομάστε την ανάλυση χρησιμοποιώντας ένα μοναδικό αναγνωριστικό στοιχείο. 4. Περιορίστε τη λίστα φόρτωσης προεπιλογής στον αριθμό των δειγμάτων που πρόκειται να υποβληθούν σε εξέταση. Αν κατά λάθος διαγραφούν πάρα πολλές θέσεις δείγματος, ξεκινήστε τη διαδικασία από το βήμα 2. 5. Σαρώστε τις ετικέτες γραμμωτού κώδικα των δειγμάτων, εισαγάγετε χειροκίνητα τα ονόματα των δειγμάτων στο πεδίο ονόματος δείγματος ή διατηρήστε τις προκαθορισμένες ρυθμίσεις. Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε το πεδίο <Run Note> για να εισαγάγετε δεδομένα, αν απαιτείται. Σημείωση: Μην αλλάζετε τα προεπιλεγμένα ονόματα των Θετικών και Αρνητικών Ορών Ελέγχου. 6. Ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη και ξεκινήστε την ανάλυση LightCycler MRSA Advanced Test. 05540178001-06EL 16 Doc Rev. 6.0

ΑΠΟΤΕΛΈΣΜΑΤΑ Ταυτοποίηση Κορυφής και Αυτόματη Ανάλυση Αποτελεσμάτων: Σημείωση: Μην ξεκινάτε την ανάλυση δεδομένων όσο βρίσκεται σε εξέλιξη μια ανάλυση του LightCycler. Η χειροκίνητη Εμφάνιση της τιμής T M απαιτεί χειροκίνητο χειρισμό σε δύο μονάδες Εμφάνισης της τιμής T M που έχουν επιλεγεί αυτόματα. Οι μονάδες Απόλυτης Ποσοτικοποίησης δεν χρησιμοποιούνται για την ανάλυση της εξέτασης αυτής. Στο παράθυρο της κορυφής τήξης, εμφανίζονται όλες οι καμπύλες των επιλεγμένων γραφημάτων. Η ρύθμιση των γραμμών τιμής T M για κάθε μονάδα ανάλυσης προκαθορίζεται στο LightCycler MRSA Advanced Macro. Μπορείτε να επιλέξετε ή να αποεπιλέξετε μια γραμμή τιμής T M χωρίς τη δημιουργία ένδειξης. Οι τιμές αναφοράς κάθε μονάδας ανάλυσης προκαθορίζονται στο LightCycler MRSA Advanced Macro σύμφωνα με τον παρακάτω πίνακα και δεν πρέπει να αποεπιλεγούν ή να αλλαχθούν. Αν αλλάξουν κατά λάθος, πληκτρολογήστε τις σωστές τιμές από τον Πίνακα 2. Πίνακας 2 Τιμές αναφοράς CH 610 CH 670 Τιμή αναφοράς 0,085 0,100 Οι κορυφές ορίζονται ως οι μέγιστες τιμές πάνω από την τιμή αναφοράς. Οι ώμοι (shoulders) δεν θεωρούνται κορυφές. Παραδείγματα τυπικών κορυφών Θετικού Ορού Ελέγχου (Γράφημα 1, Κανάλι 610) και Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου (Γράφημα 2, Κανάλι 670) και κορυφής με ώμο (shoulder) (Γράφημα 3): Γράφημα 1 05540178001-06EL 17 Doc Rev. 6.0

Γράφημα 2 Γράφημα 3 Προσαρμογή των γραμμών της τιμής T M : 1. Μετά την ολοκλήρωση της ανάλυσης, ο οδηγός πειραμάτων εμφανίζει το μήνυμα <Analyses have been created>. 2. Μετακινήστε το παράθυρο του μηνύματος στο κάτω μέρος της οθόνης ώστε να βλέπετε τις τιμές T M και τις τιμές Αναφοράς (μην πατήσετε <Finish>). 3. Κάντε κλικ στη μονάδα ανάλυσης Εμφάνισης της τιμής T M 610. Εμφανίζεται μια επισκόπηση όλων των θέσεων. 4. Μειώστε το μέγεθος του παραθύρου εμφάνισης του γραφήματος μετακινώντας με κύλιση τη γραμμή της αριστερής μπάρας του παραθύρου αυτού στα δεξιά. Οι στήλες «Baseline», «TM1» και «Height1» πρέπει να είναι πλέον ορατές. Σημείωση: Αν είναι επιλεγμένες περισσότερες από μία θέσεις, θα εμφανιστούν οι ρυθμίσεις του τριχοειδούς που επιλέχθηκε πρώτο. Σημείωση: Η μετατόπιση των γραμμών επηρεάζει όλα τα ενεργοποιημένα και επιλεγμένα τριχοειδή. 5. Κάντε κλικ στη θέση του Θετικού Ορού Ελέγχου (#PC#) για να τον επιλέξετε. 6. Αν η γραμμή της τιμής T M δεν είναι τοποθετημένη στη μέγιστη τιμή κορυφής (πάνω από την τιμή αναφοράς), μετακινήστε την στη μέγιστη τιμή κορυφής, εστιάζοντας μόνο στο καθορισμένο εύρος των τιμών T M (βλ. Πίνακα 3). 7. Αν δεν υπάρχουν κορυφές πάνω από την τιμή αναφοράς, διατηρήστε τη γραμμή της τιμής T M στην προεπιλεγμένη θέση. Βεβαιωθείτε ότι οι γραμμές δεν επισημαίνουν κάποια κλίση στις υπάρχουσες κορυφές (π.χ. εκτός του καθορισμένου εύρους τιμών T M ). 8. Βεβαιωθείτε ότι εμφανίζονται τιμές στις στήλες «TM1» και «Height1» για το συγκεκριμένο δείγμα (οποιεσδήποτε τιμές). Αν δεν παρατηρούνται τιμές (κενό), επανατοποθετήστε τη γραμμή της τιμής T M στη μέγιστη τιμή κορυφής. Οι τιμές πρέπει να εμφανίζονται πλέον στις στήλες «TM1» και «Height1». 05540178001-06EL 18 Doc Rev. 6.0

Πίνακας 3 Καθορισμένο εύρος τιμών T M MRSA (CH 610) Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου (CH 670) Χαμηλή T M ( C) Υψηλή T M ( C) 57,00 62,00 57,00 62,00 Σημείωση: Σε δείγματα χωρίς κορυφές (π.χ. στον Αρνητικό Ορό Ελέγχου) η αυτόματη προσαρμογή κλίμακας ρυθμίζεται στην υψηλότερη τιμή υποβάθρου. Η προκαθορισμένη τιμή αναφοράς ενδέχεται να μην είναι ορατή σε αυτή την περίπτωση. Αν θέλετε να εμφανίσετε την τιμή αναφοράς, επιλέξτε τη συγκεκριμένη θέση τριχοειδούς μαζί με το Θετικό Ορό Ελέγχου. Σημείωση: Οι επισημασμένες κορυφές εκτός του καθορισμένου εύρους τιμών T M αναγράφονται στην αναφορά MAS. 9. Προχωρήστε στην ανίχνευση κορυφής, όπως περιγράφεται παραπάνω, στα βήματα 5 έως 8, για όλες τις υπόλοιπες θέσεις (οροί ελέγχου και δείγματα). 10. Κάντε κλικ στη μονάδα ανάλυσης Εμφάνισης της τιμής T M 670. 11. Προχωρήστε στην ανίχνευση κορυφής, όπως περιγράφεται παραπάνω, στα βήματα 4 έως 8, για όλες τις θέσεις (οροί ελέγχου και δείγματα). Ολοκλήρωση εμφάνισης της τιμής T M : 1. Μετακινήστε ξανά το παράθυρο του οδηγού πειράματος στο κέντρο της οθόνης και πατήστε <Finish>. 2. Δημιουργείται αυτόματα μια LightCycler αναφορά και μπορεί να εκτυπωθεί. 3. Το πείραμα αποθηκεύεται αυτόματα. Σημείωση: Σε περίπτωση αλλαγών στα πεδία ονόματος δείγματος του LightCycler Λογισμικού μετά την αποθήκευση, ο χειριστής πρέπει να ανανεώσει τη βάση δεδομένων επιλέγοντας και κάνοντας κλικ στα εικονίδια «Abs Quant 610» και «Abs Quant 670» και αποθηκεύοντας ξανά το αρχείο. 4. Εξαγάγετε το αρχείο *.ixo κάνοντας κλικ στο <File> \ <Export>, στο φάκελο <C:\Export to MAS>. Αυτόματη εμφάνιση αποτελεσμάτων με τη χρήση του Micro Analysis Software (MAS): 1. Κάντε διπλό κλικ στο εικονίδιο MAS στην επιφάνεια εργασίας του υπολογιστή και πατήστε <Start>. 2. Επιλέξτε το πείραμα MRSA Advanced που πρόκειται να αναλυθεί από το φάκελο <C:\Export to MAS> και φορτώστε το αρχείο *.ixo. 3. Σαρώστε ή εισαγάγετε χειροκίνητα τις πληροφορίες σχετικά με τον Αριθμό Παρτίδας και την Ημερομηνία Λήξης που παρέχονται με το Advanced Lysis Κιτ και το LightCycler MRSA Advanced Test. 4. Εισαγάγετε προσωπικές πληροφορίες (π.χ. όνομα χειριστή), αν το επιθυμείτε. Σημείωση: Εφεξής, θα χρησιμοποιούνται οι πιο πρόσφατες πληροφορίες που έχετε εισαγάγει στο MAS. 5. Επιλέξτε την κατάλληλη μορφή αναφοράς (σε πίνακα, ομαδοποιημένη ή συνδυαστική). 05540178001-06EL 19 Doc Rev. 6.0

6. Το αρχείο *.ixo του πειράματος MRSA Advanced θα αναλυθεί αυτόματα και τα δεδομένα θα εμφανιστούν στην επιλεγμένη μορφή αναφοράς. 7. Εκτυπώστε την αναφορά MAS και/ή εξαγάγετέ την ως *.pdf. Σημείωση: Στην αναφορά MAS εμφανίζονται τα αποτελέσματα IVD, επομένως οι πληροφορίες αυτές αντικαθιστούν εκείνες που παρέχονται στη γενική LightCycler αναφορά (αναφορά LCS). ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ 1. Τα αποτελέσματα υπολογίζονται με το LightCycler Λογισμικό από σήματα φθορισμού που έχουν μετρηθεί και ενσωματωμένους αλγόριθμους υπολογισμού και παρουσιάζονται με το Micro Analysis Software (MAS). 2. Οι επαληθεύσεις ανάλυσης, ορών ελέγχου και δείγματος εκτελούνται αυτόματα από το MAS. Σημείωση: Μπορούν να δημιουργηθούν ενδείξεις και σχόλια για τις παραμέτρους «RUN STATUS», «CONTROLS STATUS» και «SAMPLE STATUS» Ο χειριστής πρέπει να ελέγξει την εκτύπωση της αναφοράς MAS για ενδείξεις ή σχόλια σε όλα τα πεδία. Σημείωση: Η λήψη αρνητικού αποτελέσματος με το LightCycler MRSA Advanced Test δεν αποκλείει την ύπαρξη ρινικού αποικισμού MRSA. 3. Για μια έγκυρη ανάλυση, τα αποτελέσματα ερμηνεύονται ως εξής: Αποτέλεσμα CH 610 (MRSA) ΘΕΤΙΚΟ Αποτέλεσμα CH 670 (IC) ΘΕΤΙΚΟ ή ΑΡΝΗΤΙΚΟ Αποτέλεσμα MRSA Σχόλιο DETECTED ΑΡΝΗΤΙΚΟ ΑΡΝΗΤΙΚΟ ΑΡΝΗΤΙΚΟ ΘΕΤΙΚΟ NOT DETECTED IC not detected Ερμηνεία Το δείγμα είναι θετικό για MRSA DNA. Υποψία ρινικού αποικισμού από MRSA. Άκυρο αποτέλεσμα. Επαναλάβετε τη διαδικασία PCR με δείγμα που έχει υποβληθεί σε επεξεργασία και έχει αποψυχθεί ή με νέο δείγμα. Αν η ένδειξη παραμένει, αναφέρετε το άκυρο αποτέλεσμα. Επικοινωνήστε με τα τοπικά γραφεία της Roche Δεν ανιχνεύτηκε DNA του MRSA. Μη πιθανός ρινικός αποικισμός από MRSA. 05540178001-06EL 20 Doc Rev. 6.0

Μπορούν να αναφερθούν επιπλέον σχόλια για Θετικό Ορό Ελέγχου, Αρνητικό Ορό Ελέγχου και Αποτέλεσμα Δείγματος από το MAS: Σχόλιο Peak(s) outside Target T M range Peak(s) outside IC T M range Ερμηνεία Ανίχνευση κλώνων (amplicon) εκτός καθορισμένου εύρους τιμών MRSA T M Ανίχνευση κλώνων (amplicon) εκτός καθορισμένου εύρους τιμών IC T M Αν στο MAS εμφανίζεται το σχόλιο «Peak(s) outside Target T M range» για ένα Δείγμα που έχει χαρακτηριστεί «Not Detected / Valid» ή «Invalid / Invalid» (στήλες «Αποτέλεσμα MRSA» και «Κατάσταση» αντίστοιχα στην αναφορά του MAS), υπάρχει υποψία ότι το δείγμα είναι θετικό για DNA του MRSA. Συλλέξτε ένα άλλο δείγμα (ή χρησιμοποιήστε την άλλη κεφαλή του στυλεού διπλής κεφαλής) και επαναλάβετε την εξέταση χρησιμοποιώντας εναλλακτική διαδικασία, όπως καλλιέργεια, για τον προσδιορισμό της κατάστασης ρινικού αποικισμού στον ασθενή. Τα Δείγματα που έχουν χαρακτηριστεί «Detected / Valid» (στήλες «Αποτέλεσμα MRSA» και «Κατάσταση» αντίστοιχα στην αναφορά του MAS) και για τα οποία εμφανίζεται στο MAS το σχόλιο «Peak(s) outside Target T M range», ερμηνεύονται ως θετικά για DNA του MRSA (πιθανολογούμενος ρινικός αποικισμός MRSA). Η παρουσία αυτών των σχολίων στη γραμμή «Controls Status» της αναφοράς MAS δεν επηρεάζει την ερμηνεία του «Controls Status» ή του «Run Status» που δημιουργείται από το MAS και εμφανίζεται στην αναφορά του MAS. 4. Οι παρακάτω ενδείξεις ενδέχεται να εμφανιστούν από το MAS: Ένδειξη Σχόλια Ερμηνεία Κατάσταση Διορθωτική Ενέργεια Επαναλάβετε την ανάλυση LightCycler. Invalid File could Αναζητήστε τη σωστή Εφαρμόστηκε λάθος Run macro not be μακροεντολή στο Μακροεντολή version loaded LightCycler Λογισμικό και/ή στο MRSA Advanced Software Set. User Developed or Modified Test Method Lysis Kit expired Οι κρίσιμες παράμετροι στα αρχεία *.ixo του CCE και / ή του CCO και / ή του MRSA Advanced *.ixo διαφέρουν από εκείνες στα αρχεία *.ixo αναφοράς του MRSA Advanced Macros. Οι πιθανές αιτίες περιγράφονται στο Εγχειρίδιο Χειριστή του LightCycler 2.0 Οργάνου (π.χ. τροποποιώντας τις προκαθορισμένες ρυθμίσεις της Μακροεντολής). Το LightCycler Advanced Lysis Κιτ έχει λήξει Run Run Αν εμφανίζονται επιπλέον ενδείξεις, ανατρέξτε στη διορθωτική ενέργεια που παρέχεται για την αντίστοιχη ένδειξη. Αν δεν εμφανίζονται επιπλέον ενδείξεις, επαναλάβετε το πείραμα. Αν η ένδειξη αυτή εμφανίζεται επανειλημμένα, επικοινωνήστε με τη Roche Service στην περιοχή σας. Επαναλάβετε την ανάλυση LightCycler με αντιδραστήρια που δεν έχουν λήξει. 05540178001-06EL 21 Doc Rev. 6.0

Ένδειξη Σχόλια Ερμηνεία Κατάσταση Διορθωτική Ενέργεια Το LightCycler Επαναλάβετε την MRSA MRSA Test Run ανάλυση LightCycler με Advanced Test έχει expired αντιδραστήρια που δεν λήξει έχουν λήξει. CCO expired on YYMMDD 1 CCO NAME MULTIPLE CCO USED NO CCO USED LCS VERSION Το αρχείο Αντιστάθμισης Χρώματος είναι παλαιότερο των έξι μηνών. Το όνομα του Αντικειμένου Αντιστάθμισης Χρώματος είναι εσφαλμένο Χρήση διαφορετικών αρχείων Αντιστάθμισης Χρώματος στις μονάδες ανάλυσης Ένα ή περισσότερα αρχεία Αντιστάθμισης Χρώματος λείπουν από τις μονάδες ανάλυσης Χρησιμοποιήθηκε λάθος έκδοση LightCycler Λογισμικού για τη διαδικασία Run Run Run Run Run Προετοιμάστε μια νέα ανάλυση Αντιστάθμισης Χρώματος και δημιουργήστε ένα νέο Αντικείμενο Αντιστάθμισης Χρώματος. Επαναλάβετε την ανάλυση LightCycler που πραγματοποιήθηκε με το CCO που έχει λήξει. Προετοιμάστε μια νέα ανάλυση Αντιστάθμισης Χρώματος και δημιουργήστε ένα νέο Αντικείμενο Αντιστάθμισης Χρώματος σύμφωνα με τις συμβάσεις ονομασίας που αναφέρονται στο παρόν έγγραφο. Επαναλάβετε την ανάλυση LightCycler που πραγματοποιήθηκε με το CCO με εσφαλμένο όνομα Ανοίξτε το αρχείο *.ixo του πειράματος MRSA στο LightCycler Λογισμικό και επιλέξτε το σωστό Αντικείμενο Αντιστάθμισης Χρώματος. Αποθηκεύστε το πείραμα και εξαγάγετε ξανά. Ανοίξτε το αρχείο *.ixo του πειράματος MRSA στο LightCycler Λογισμικό και επιλέξτε το σωστό αρχείο Αντιστάθμισης Χρώματος. Αποθηκεύστε το πείραμα και εξαγάγετε ξανά. Ανοίξτε το LightCycler Λογισμικό και αναζητήστε το σωστό αριθμό έκδοσης. 05540178001-06EL 22 Doc Rev. 6.0

Ένδειξη Σχόλια Ερμηνεία Κατάσταση Διορθωτική Ενέργεια Ανοίξτε το αρχείο *.ixo του πειράματος MRSA στο LightCycler Οι τιμές αναφοράς Λογισμικό και διορθώστε Run μπορεί να έχουν τις τιμές αναφοράς BASELINE αλλάξει κατά λάθος. σύμφωνα με τον Πίνακα 2. Αποθηκεύστε το πείραμα και εξαγάγετέ το ξανά. NC PC NC NAME PC NAME NC: Target peak(s) detected NC: IC not detected PC: PC not detected Ανιχνεύτηκαν κλώνοι (amplicon) στο εύρος τιμών MRSA T M του Αρνητικού Ορού Ελέγχου Δεν ανιχνεύτηκε IC στον Αρνητικό Ορό Ελέγχου Δεν ανιχνεύτηκε MRSA στόχου στο Θετικό Ορό Ελέγχου Το προεπιλεγμένο όνομα του Αρνητικού Ορού Ελέγχου έχει αλλάξει Το προεπιλεγμένο όνομα του Θετικού Ορού Ελέγχου έχει αλλάξει Controls Controls Controls Controls 1 Το MAS αποστέλλει προειδοποίηση 30 ημέρες πριν από τη λήξη των αντιδραστηρίων. Ανατρέξτε στην ενότητα «Ποιοτικός Έλεγχος». Ανατρέξτε στην ενότητα «Ποιοτικός Έλεγχος». Ανοίξτε το αρχείο *.ixo του πειράματος MRSA στο LightCycler Λογισμικό και πληκτρολογήστε #NC#. Αποθηκεύστε το πείραμα και εξαγάγετε ξανά. Ανοίξτε το αρχείο *.ixo του πειράματος MRSA στο LightCycler Λογισμικό και πληκτρολογήστε #PC#. Αποθηκεύστε το πείραμα και εξαγάγετε ξανά. 05540178001-06EL 23 Doc Rev. 6.0