Chlamydia pneumoniaeiggselisa medac ελληνικά 0123 430TMBVPG/121104
ΚΑΤAΣΚΕΥΑΣΤΗΣ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Fehlandtstraße 3 D20354 Hamburg MAΡΚΕΤΙΝΓΚ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Geschäftseinheit Diagnostika Theaterstraße 6 D22880 Wedel Τηλέφωνο: ++49/ 4103 / 8006 348 Φαξ: ++49/ 4103 / 8006 359 ΙΕΥΘΥΝΣΗ ΠΑΡΑΓΓΕΛΙΩΝ Τηλέφωνο:: ++49/ 4103 / 8006 111 Φαξ: ++49/ 4103 / 8006 113 430TMBVPG/121104
Chlamydia pneumoniaeiggselisa medac Ενζυµικός ανοσοπροσδιορισµός για την ανίχνευση των αντισωµάτων IgG των χλαµυδίων πνευµονίας Cat. no.: 430/TMB ΜΟΝΟ ΓΙΑ IN VITRO ΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ ΕΙΣΑΓΩΓΗ Τα χλαµύδια είναι gramαρνητικά παθογόνα βακτήρια. Έχουν έναν υποχρεωτικά ενδοκυττάριο κύκλο ζωής σε βλεννογόνες επιφάνειες, ενδοθηλιακά κύτταρα, λείες µυϊκές ίνες και, σύµφωνα µε πρόσφατα ευρήµατα σε ορισµένες ιστικές δοµές του κεντρικού νευρικού συστήµατος. Τα χλαµύδια εξαρτώνται από φωσφαγώνα των κυττάρων του ξενιστή και αποτελούν ως εκ τούτου ενεργειακά παράσιτα. Το γένος των χλαµυδίων περιλαµβάνει τέσσερα είδη:τα C. pneumoniae, C. trachomatis, C. psittaci, και C. pecorum. Το C. pneumoniae και C. trachomatis είναι υποχρεωτικά παθογόνα για τον άνθρωπο. Το C. psittaci είναι παθογόνο για τον άνθρωπο και για διάφορα είδη ζώων. Μέχρι σήµερα, το C. pecorum έχει αποµονωθεί µόνο από ζώα. Οι λοιµώξεις από Chlamydia pneumoniae εµφανίζονται παγκοσµίως. Το φάσµα των ασθενειών, επιπλέον της γρίπης, περιλαµβάνει την ιγµορίτιδα, τη φαρυγγίτιδα, τη βρογχίτιδα, τη χρόνια αποφρακτική πνευµονία και την αντιδραστική αρθρίτιδα. Η αιτιολογική συσχέτιση µε το άσθµα λοιµωδών καταστάσεων, τη σαρκοείδωση, τον καρκίνο του πνεύµονα, την αρτηριοσκλήρυνση, το οξύ έµφραγµα του µυοκαρδίου, το εγκεφαλικό επεισόδιο, τη σκλήρυνση κατά πλάκας, και την όψιµη εµφάνιση νόσου του Alzheimer έχει συζητηθεί. Σύµφωνα µε τους Grayston και Saikku (1989), που πρώτοι περιέγραψαν τα είδη χλαµυδίων, σχεδόν κάθε άνθρωπος µολύνεται και ξαναµολύνεται από τα χλαµύδια κατά τη διάρκεια της ζωής του. Τα τις περισσότερες φορές ασθενή και/ή διάχυτα συµπτώµατα που συνοδεύουν τη λοίµωξη από C. pneumoniae καθιστούν την ανίχνευσή τους δύσκολη. Μη ανιχνεύσιµες µολύνσεις µπορούν να οδηγήσουν σε χρόνια εξέλιξη της ασθένειας µε δυσάρεστες συνέπειες. Η συχνότητα των µολύνσεων από C. pneumoniae είναι λιγότερο από 10% στα παιδιά προσχολικής ηλικίας, πάνω από 50% µετά τα 20 έτη και µέχρι 80 100% µετά τα 70 έτη. 430TMBVPG/121104 1
Η διάγνωση της λοίµωξης από C. pneumoniae βασίζεται στην αποµόνωση των παθογόνων από κυτταρικές καλλιέργειες, άµεση ανίχνευση του αντιγόνου, τεστ πολλαπλασιασµού νουκλεϊκών οξέων και σερολογία. Αποµόνωση των παθογόνων από κυτταρική καλλιέργεια απαιτεί τις περισσότερες φορές ειδικές άδειες, είναι χρονοβόρα, απαιτεί ειδικά εργαστήρια και είναι µόνο σε µερικές περιπτώσεις επιτυχής. Η άµεση µέθοδος ανοσοφθορισµού και ο ενζυµικός ανοσοπροσδιορισµός δεν έχουν ευρεία χρήση. Έχει αναφερθεί ότι έχουν χαµηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Σήµερα, εµπορικά διαθέσιµη PCR ή LCR δεν υπάρχει. Τα µειονεκτήµατα των µεθόδων καλλιέργειας και µη καλλιέργειας για τη διάγνωση των µολύνσεων από C. pneumoniae έχουν καταστήσει τη ορολογία την πιο συχνά χρησιµοποιούµενη µέθοδο. Για την ανίχνευση αντισωµάτων για ειδικά είδη ο µικροανοσοφθορισµός θεωρείται η µέθοδος αναφοράς. Η µέθοδος του µικροανοσοφθορισµού είναι επίπονη, υποκειµενική και απαιτεί εµπειρία. Το τεστ αυτό δεν είναι τυποποιηµένο. Η χρήση διαφορετικών αντιγόνων και διαφορετικών ορίων για παλιές, πρόσφατες ή τρέχουσες µολύνσεις έχουν ως αποτέλεσµα µεγάλες διαφορές στα αποτελέσµατα µεταξύ εργαστηρίων. Το κιτ Chlamydia pneumoniaeselisa medac χρησιµοποιεί καλά καθαρισµένο και ειδικό αντιγόνο. Η ανίχνευση των αντισωµάτων IgM, IgA και IgG επιτρέπει την αξιολόγηση της κατάστασης της λοίµωξης και βοηθάει στην επιλογή κατάλληλης θεραπευτικής αγωγής. Το κιτ Chlamydia pneumoniaeselisa medac καλύπτει τις ανάγκες για τυποποίηση, αντικειµενικότητα, επαναληψιµότητα και αυτοµατοποίηση των εργαστηρίων ρουτίνας. 2 430TMBVPG/121104
Εκτός από το Chlamydia pneumoniaeiggselisa medac Cat. no.: 430/TMB για 96 προσδιορισµούς, ιαθέτουµε επίσης τα παρακάτω προϊόντα: Chlamydia pneumoniaeigaselisa medac Cat. no.: 431/TMB για 96 προσδιορισµούς Chlamydia pneumoniaeigmselisa medac Cat. no.: 432/TMB για 96 προσδιορισµούς Chlamydia trachomatisiggpelisa medac Cat. no.: 497/TMB για 96 προσδιορισµούς, Chlamydia trachomatisigapelisa medac Cat. no.: 498/TMB για 96 προσδιορισµούς, ChlamydiaIgGrELISA medac Cat. no.: 480/TMB για 96 προσδιορισµούς, ChlamydiaIgArELISA medac Cat. no.: 490/TMB για 96 προσδιορισµούς, ChlamydiaIgMrELISA medac Cat. no.: 485/TMB για 96 προσδιορισµούς, chsp60iggelisa medac Cat. no.: 435/TMB για 96 προσδιορισµούς 430TMBVPG/121104 3
ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Η πλάκα είναι επικαλυµµένη µε ειδι κά καθαρισµένο αντιγόνο για τα C. pneumoniae. Τα ειδικά αντισώµατα για C. pneumoniae του δείγµατος συνδέονται στο αντιγόνο. Η συζευγµένη υπεροξειδάση των αντιανθρώπινων IgG αντισωµάτων συνδέεται στα αντισώµατα IgG (P = υπεροξειδάση). Επώαση µε TMB (*). Η αντίδραση σταµατάει µε την προσθήκη θειϊκού οξέος. Η απορρόφηση µετριέται φωτοµετρικά. Πλεονεκτήµατα της εξέτασης Υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Τα αποχωριζόµενα strips επιτρέπουν την αποτελεσµατική χρήση της εξέτασης. 4 430TMBVPG/121104
ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΤΟΥ ΚΙΤ Cat. no.: 430/TMB 1. MTP Μικροπλάκα: 12 x 8 πηγαδάκια, χρωµατισµένο ροζ (µε πλαίσιο και αποξηραντικό, αεροστεγώς συσκευασµένα σε σακούλα αλουµινίου), διασπώµενα, φόρµαu, καλυµµένα µε ειδικό αντιγόνο για C. pneumoniae και FCS, έτοιµα για χρήση. 2. CONTROL Αρνητικός µάρτυρας: 2 φιαλίδια 0,75 ml έκαστο, ανθρώπινος ορός, έτοιµος για χρήση, χρωµατισµένος κυανός, περιέχει NBCS, φαινόλη, ProClin 300 και gentamycin sulfate. 3. CONTROL + Θετικός µάρτυρας: 2 φιαλίδια 0,75 ml έκαστο, ανθρώπινος ορός, έτοιµος για χρήση, χρωµατισµένος κυανός, περιέχει BSA, φαινόλη, ProClin 300 και gentamycin sulfate. 4. WB Ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης: 1 φιαλίδιο µε 100 ml PBS/Tween (10 x), ph 7,27,4, περιέχει ProClin 300. 5. BACDIL ιαλύµα αραίωσης: 1 φιαλίδιο µε 110 ml PBS/Tween/NBCS, ph 7,07,2, έτοιµο για χρήση, χρωµατισµένο κυανό, περιέχει ProClin 300. 6. CON Conjugate: 4 φιαλίδια µε 5,0 ml έκαστο, αντιανθρώπινα IgG κατσίκας, HRPσυζευγµένα, έτοιµο για χρήση, χρωµατισµένο πράσινο, περιέχει BSA, φαινόλη, ProClin TM 300 και gentamycin sulfate. 7. TMB TMBΥπόστρωµα: 1 φιαλίδιο µε 10 ml, έτοιµο για χρήση. 8. STOP ιάλυµα τερµατισµού: 2 φιαλίδια µε 14 ml έκαστο, 0,5 M sulfuric acid (H 2 SO 4 ), έτοιµο για χρήση. 430TMBVPG/121104 5
1. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ ΥΛΙΚΟ/ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΟ ΚΑΤΑΣΤΑΣΗ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Κιτ εξέτασης κλειστό 2 8 C Μέχρι την ηµεροµηνία λήξης Μικροπλάκα ανοιγµένο 2 8 C σε σακούλα µε 12 εβδοµάδες αποξηραντικό Μάρτυρες ανοιγµένο 2 8 C 12 εβδοµάδες Ρυθµιστικό διάλυµα αραιωµένο 2 8 C 12 εβδοµάδες πλύσης ιαλύτης δείγµατος ανοιγµένο 2 8 C 12 εβδοµάδες Conjugate ανοιγµένο 2 8 C 12 εβδοµάδες TMBΥπόστρωµα ανοιγµένο 2 8 C 12 εβδοµάδες ιάλυµα τερµατισµού ανοιγµένο 2 8 C Μέχρι την ηµεροµηνία λήξης Μη χρησιµοποιείτε τα αντιδραστήρια µετά την ηµεροµηνία λήξης. 2. ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΧΡΕΙΑΖΟΝΤΑΙ ΑΛΛΑ Ε ΧΟΡΗΓΟΥΝΤΑΙ 2.1. Ύδωρ για ένεση (H 2 O redist.). Η χρήση απιονισµένου ύδατος µπορεί να παρεµποδίσει τη διαδικασία της εξέτασης. 2.2. Προσαρµοζόµενες µικροπιπέτες. 2.3. Καθαροί γυάλινοι ή πλαστικοί περιέκτες για αραίωση του ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης και του δείγµατος. 2.4. Κατάλληλη συσκευή για πλύση µικροπλάκας (e.g., ELISA washer). 2.5. Επωαστήρας για 37 C. 2.6. Συσκευή ανάγνωσης µικροπλάκας µε φίλτρα για 450 nm και 620 650 nm. 3. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Πριν την έναρξη της διαδικασίας της εξέτασης, όλα τα περιεχόµενα του κιτ θα πρέπει να έλθουν σε θερµοκρασία δωµατίου (RT). Υπολογίστε τα πηγαδάκια που χρειάζονται. 3.1. Μικροπλάκα Μετά από κάθε αφαίρεση strips η σακούλα αλουµινίου θα πρέπει να σφραγιστεί και πάλι σφιχτά µαζί µε το αποξηραντικό. Η φύλαξη και η σταθερότητα υποδεικνύονται στον στο κεφάλαιο 1. 6 430TMBVPG/121104
3.2. Ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης Αναµίξτε ένα µέρος ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης (10 x) µε εννιά µέρη ύδατος για ένεση(π.χ., 50 ml ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης (10 x) µε 450 ml ύδατος). 10 ml αραιωµένου ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης χρειάζονται για οκτώ πηγαδάκια. Οι κρύσταλλοι στο ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης (10 x) πρέπει να διαλυθούν µε θέρµανση (µέγιστο 37 C) ή/και ανακάτεµα σε θερµοκρασία δωµατίου. Μην αναµιγνύετε τα ειδικά αντιδραστήρια της εξέτασης (µικροπλάκα, µάρτυρες, conjugate)µε αντίστοιχα αντιδραστήρια διαφορετικών παρτίδων. Αντιθέτως, διαλύτης δείγµατος, ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης, ΤΜΒ Υπόστρωµα, και διάλυµα τερµατισµού µπορούν να χρησιµοποιηθούν αδιακρίτως σε όλα τα κιτ προσδιορισµού χλαµυδίων και µυκοπλάσµατος µε τη µέθοδο elisa. εν πρέπει να χρησιµοποιούνται αντιδραστήρια διαφορετικών κατασκευαστών. Έγκυρα και επαναλήψιµα αποτελέσµατα λαµβάνονται µόνο αν ακολουθηθεί µε ακρίβεια η διαδικασία της εξέτασης. 4. ΕΙΓΜΑ 4.1. Η εξέταση είναι κατάλληλη για δείγµατα ορού αλλά όχι για πλάσµα. 4.2. Προετοιµασία των ορών, π.χ. απενεργοποίηση δε χρειάζεται. Ωστόσο, οι οροί δε θα πρέπει να είναι επιµολυσµένοι µε µικροοργανισµούς ούτε να περιέχουν ερυθρά αιµοσφαίρια. 4.3. Οι οροί θα πρέπει να αραιωθούν 1:50 µε το διαλύτη δείγµατος. 5.A. ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ 5.1. Κόψτε τη σακούλα αλουµινίου πάνω από τη σύνδεση και βγάλτε τον απαιτούµενο αριθµό strips (δείτε 3.1.). Τα strips είναι έτοιµα για χρήση και δε χρειάζεται να υποβληθούν σε πρόπλυση. 5.2. Βάλτε µε πιπέτα 50 µl διαλύτη δείγµατος στο πηγαδάκι A1 ως τυφλό (δείτε 6.A.) και εις διπλούν 50 µl αρνητικού µάρτυρα, 50 µl θετικού µάρτυρα και τα αραιωµένα δείγµατα ασθενών. Αν χρειαστεί, τα πηγαδάκια της µικροπλάκας µπορούν να διατηρηθούν σε υγρό θάλαµο µέχρι και για 30 λεπτά σε θερµοκρασία δωµατίου πριν τη διαδικασία. 5.3. Επωάστε τα πηγαδάκια της µικροπλάκας για 60 λεπτά (± 5 λεπτά) στους 37 o C (± 1 C) σε υγρό θάλαµο ή σκεπασµένες µε κάλυµµα. 430TMBVPG/121104 7
5.4. Μετά την επώαση πλύνετε τα πηγαδάκια της µικροπλάκας τρεις φορές µε 200 µl ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης ανά πηγαδάκι. Προσέξτε να είναι πλήρη όλα τα πηγαδάκια. Μετά την πλύση στραγγίστε τα πηγαδάκια της µικροπλάκας σε διηθητικό χαρτί. Μην αφήνετε τα πηγαδάκια να στεγνώσουν! Συνεχίστε αµέσως! 5.5. Προσθέστε conjugate (πράσινο χρώµα) σε κάθε πηγαδάκι. Προσθέστε 50 µl conjugate µε πιπέτα στα πηγαδάκια αν η εξέταση γίνεται µε το χέρι. Παρακαλώ σηµειώστε: Όταν δουλεύετε µε αυτοµατοποιηµένα όργανα, προσθέστε 60 µl conjugate µε πιπέτα σε κάθε πηγαδάκι λόγω της µεγαλύτερης εξάτµισης στους θαλάµους επώασης των αυτόµατων συσκευών. Η καταλληλότητα του κιτ για χρήση σε αυτόµατους αναλυτές επιβεβαιώθηκε κατά την αξιολόγηση του. Παρόλα αυτά συστήνεται να επιβεβαιώνεται η συµβατότητά του µε τον αναλυτή που χρησιµοποιεί το εργαστήριο. 5.6. Επωάστε τα πηγαδάκια της µικροπλάκας πάλι για 60 λεπτά (± 5 λεπτά) στους 37 C (± 1 C) σε υγρό θάλαµο ή σκεπασµένα µε κάλυµµα. 5.7. Μετά την επώαση πλύνετε ξανά τα πηγαδάκια της µικροπλάκας (δείτε 5.4.). 5.8 Προσθέστε 50 µl TMBΥποστρώµατος σε κάθε πηγαδάκι και επωάστε τα πηγαδάκια της µικροπλάκας για 30 λεπτά (± 2 λεπτά) στους 37 o C (± 1 C) σε υγρό θάλαµο ή σφραγισµένα µε κάλυµµα επώασης στο σκοτάδι. Τα θετικά δείγµατα γίνονται κυανά. 5.9. Σταµατήστε την αντίδραση προσθέτοντας 100 µl διαλύµατος τερµατισµού σε κάθε πηγαδάκι. Τα θετικά δείγµατα γίνονται κίτρινα. Καθαρίστε τα πηγαδάκια της µικροπλάκας από κάτω πριν από τη φωτοµετρική ανάγνωση και φροντίστε να µην υπάρχουν φυσαλίδες αέρα στα πηγαδάκια. Η ανάγνωση θα πρέπει να γίνει µέσα σε 15 λεπτά µετά την προσθήκη του διαλύµατος τερµατισµού! 8 430TMBVPG/121104
5.B. ΠΙΝΑΚΑΣ ΓΙΑ ΤΗ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ ιαλύτης δείγµατος Αρνητικός µάρτυρας Θετικός µάρτυρας είγµα Τυφλό(A1) 50 µl Αρνητικός µάρτυρας 50 µl Θετικός µάρτυρας 50 µl είγµα 50 µl Επωάστε για 60 λεπτά στους 37 C, πλύνετε 3 x µε 200 µl ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης. Conjugate 50/60 µl *) 50/60 µl *) 50/60 µl *) 50/60 µl *) Επωάστε για 60 λεπτά στους 37 C, πλύνετε 3 x µε 200 µl ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης. TMBΥπόστρωµα 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl Επωάστε για 30 λεπτά στους 37 o C στο σκοτάδι. ιάλυµα Τερµατισµού 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Φωτοµετρική ανάγνωση στα 450 nm (ref. 620 650 nm) *) χειροκίνητη/αυτόµατη διαδικασία (δείτε 5.5.) 6.A. ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ (ΕΓΚΥΡΟΤΗΤΑ) ιαβάστε τις τιµές OD στα 450 nm (µήκος κύµατος αναφοράς 620 650 nm). Αφαιρέστε την τιµή OD από το τυφλό (πηγαδάκι A1) από όλες τις άλλες OD τιµές. Η τιµή OD του τυφλού πρέπει να είναι < 0,100. Η µέση τιµή OD του Αρνητικού µάρτυρα θα πρέπει να είναι < 0,100. Η τιµή OD του Θετικού µάρτυρα θα πρέπει να είναι > 0,800. Cutoff = µέση τιµή OD του Αρνητικού µάρτυρα + 0,380 Γκρίζα ζώνη = Cutoff ± 10% 430TMBVPG/121104 9
6.B. ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ: 6.B.1. ΠΟΙΟΤΙΚΗ Αποτέλεσµα αξιολόγηση OD < Γκρίζα ζώνη αρνητικό OD Cutoff +/ 10% αµφίβολο OD > Γκρίζα ζώνη θετικό 6.B.2. ΠΟΣΟΤΙΚΗ Cutoffindex:OD δείγµατος/od αξιολόγηση cutoff < 0,9 αρνητικό 0,9 1,1 αµφίβολο > 1,1 θετικό * είγµατα µε οπτική πυκνότητα µέσα στη γκρίζα ζώνη πρέπει να επανεξετάζονται µαζί µε φρέσκα δείγµατα που θα συλλεχθούν 14 µέρες αργότερα µε σκοπό να καθοριστεί η αλλαγή τίτλου. * Τα αποτελέσµατα πρέπει πάντα να ερµηνεύονται σε συνδυασµό µε κλινικά ευρή µατα και πρόσθετες διαγνωστικές παραµέτρους. * Υψηλές συγκεντρώσεις αιµοσφαιρίνης, βιλιρουβίνης και λιπιδίων στον ορό δεν επηρεάζουν τα αποτελέσµατα. * Αντίδραση µε αντιπυρηνικά αντισώµατα, ετερόφυλα αντισώµατα και αντισώµατα της C. psitacci και C. trachomatis δεν µπορούν να αποκλειστούν. 10 430TMBVPG/121104
6.C. ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΕΙ ΙΚΩΝ IgG και IgA Πιθανά αποτελέσµατα IgG IgA + + + + +/ +/ + +/ +/ + Ερµηνία 1. IgG και IgA θετικά: ένδειξη ενεργού λοίµωξης. Περαιτέρω κρίση µε βάση τα συµπτώµατα και την πορεία του τίτλου. 2. Μόνο IgG θετικό: ένδειξη προηγούµενης λοίµωξης. Σε περίπτωση κλινικής υποψίας προσδιορίστε µία κατά τέσσερις φορές αύξηση του τίτλου IgG ανάµεσα σε δύο δείγµατα ορού (διάστηµα µεταξύ τους 10 14 ηµέρες) και επανεξετάστε για IgA. 3. IgG θετικό, IgA γκρίζα ζώνη: Πιθανότητα καινούργιας ή αναζοπυρωµένης λοίµωξης ή συµπληρωµατικής λοίµωξης: επανεξετάστε τα IgG και IgA µετά από 10 14 ηµέρες. 4. Μόνο το IgG σε γκρίζα ζώνη: εν µπορεί να αποκλειστεί παλιά λοίµωξη. Σε περίπτωση κλινικής υποψίας επανεξετάστε τα IgG και IgA µετά από 10 14 ηµέρες. 5. Μόνο το IgA θετικό:πιθανότητα αρχόµενου σταδίου µίας ενεργού λοίµωξης ή µονήρης εµµονή των IgA. Επανεξετάστε τα IgA και IgG µετά από 10 14 ηµέρες. 6. Μόνο το IgA στην γκρίζα ζώνη: Πιθανότητα πολύ πρώιµου σταδίου µίας ενεργού φλεγµονής: επανεξετάστε τα IgG και IgA µετά από 10 14 ηµέρες. 7. IgG στη γκρίζα ζώνη, IgA θετικό: Πιθανότητα πρώιµου σταδίου ενεργού φλεγµονής. Επανεξετάστε τα IgG και IgA µετά από 10 14 ηµέρες.. 8. IgG και IgA αρνητικά: Καµιά ορολογική ένδειξη λοίµωξης. Σε περίπτωση δικαιολογηµένης κλινικής υποψίας διενεργήστε άµεσο προσδιορισµό αντιγόνων και επανεξετάστε τα IgG και IgA µετά από 10 14 ηµέρες. Σχόλιο: Σε περιπτώσεις νέων οξέων λοιµώξεων από χλαµύδια τα ορολογικά αποτελέσµατα αντισωµάτων µπορεί να είναι αρνητικά παρά την θετικά κλινική εικόνα και την ανίχνευση αντιγόνων. Αν χρειάζεται επιβεβαίωση ενός ορολογικού θετικού 430TMBVPG/121104 11
αποτελέσµατος ή αν χρειάζεται παρακολούθηση συνιστούµε την εξέταση µετά από 10 14 ηµέρες για εύρεση οροµετατροπής. 12 430TMBVPG/121104
7. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΠΙ ΟΣΗΣ Τα παρακάτω χαρακτηριστικά λειτουργία προσδιορίστηκαν κατά τη διαγνωστική αξιολόγηση. 7.A. ΕΙ ΙΚΟΤΗΤΑ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ Μελετήθηκαν οροί από ασθενείς χωρίς συµπτώµατα αναπνευστικής λοίµωξης για τον προσδιορισµό της ειδικότητας. Με την MIF µέθοδο δεν ανιχνεύθηκαν αντισώµατα της C. pneumoniae. Μελετήθηκαν οροί από ασθενείς µε υποψία για αναπνευστική λοίµωξη για τον προσδιορισµό της ευαισθησίας. Με την MIF µέθοδο δεν ανιχνεύθηκαν αντισώµατα της C. pneumoniae σε όλους τους ορούς. Οµάδα ασθενών Ειδικότητα IgA IgG Ασθενείς χωρίς συµπτώµατα αναπνευστικής λοίµωξης. Με την MIF µέθοδο δεν ανιχνεύθηκαν αντισώµατα της C. pneumoniae. Οµάδα ασθενών 93% (n = 86) 95% (n = 42) Ευαισθησία IgA IgG Ασθενείς χωρίς συµπτώµατα αναπνευστικής λοίµωξης. Με την MIF µέθοδο δεν ανιχνεύθηκαν αντισώµατα της C. pneumoniae. 95% (n = 74) 99% (n = 117) 430TMBVPG/121104 13
7.B. ΑΚΡΙΒΕΙΑ είγµα ιακύµανση IntraAssay είγµα ιακύµανση InterAssay (n = 11) OD SD CV (%) n OD SD CV (%) NC 0,032 0,009 27 21 NC 0,035 0,004 11 BC 0,772 0,038 5 21 BC 0,824 0,073 9 PC 1,990 0,062 3 21 PC 2,133 0,149 7 N 1 1,951 0,098 5 21 N 3 1,655 0,140 8 N 2 0,731 0,030 4 21 N 4 1,027 0,087 8 NC = Αρνητικός Μάρτυρας BC = Ασθενώς Θετικός Μάρτυρας (δεν περιλαµβάνεται στο κιτ) PC = Θετικός Μάρτυρας ΓΕΝΙΚΕΣ ΣΥΜΒΟΥΛΕΣ ΓΙΑ ΤΟ ΧΕΙΡΙΣΜΟ Μην ανταλλάσσετε τα φιαλίδια ή τα βιδωτά καπάκια τους για να αποφύγετε την επιµόλυνση του ενός από το άλλο. Τα αντιδραστήρια θα πρέπει να σφραγίζονται αµέσως µετά τη χρήση ώστε να αποφευχθεί η εξάτµιση και η µικροβιακή τους επιµόλυνση. Μετά τη χρήση, τα αντιδραστήρια θα πρέπει να φυλάσσονται κάτω από τις συνθήκες που συνιστώνται ώστε να διατηρηθούν µέχρι την ηµεροµηνία λήξης. Μετά τη χρήση, όλα τα περιεχόµενα του κιτ εξέτασης θα πρέπει να φυλάσσονται στην αρχική συσκευασία, για να αποφευχθεί το ανακάτεµα τους µε αντιδραστήρια άλλων συστηµάτων εξέτασης ή άλλων παρτίδων (δείτε επίσης 3.). ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΓΕΙΑ ΚΑΙ ΤΗΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑ Οι τοπικοί επαγγελµατικοί κανονισµοί για την υγεία και την ασφάλεια θα πρέπει να γίνονται σεβαστοί. Τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης έχουν εξεταστεί και βρέθηκε ότι είναι αρνητικά για HBsAg, για αντισώµατα έναντι του HIV1/2 και για HCV. Ωστόσο, συνίσταται αυτά τα υλικά καθώς και εκείνα που είναι ζωικής προέλευσης(δείτε τα περιεχόµενα του κιτ), θα πρέπει να τα χειρίζεστε ως δυνητικά µολυσµατικά και να λαµβάνετε όλα τα απαραίτητα µέσα προστασίας. 14 430TMBVPG/121104
ΚΑΤΑΣΤΡΟΦΗ ΤΩΝ ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Τα υπολείµµατα χηµικών και παρασκευασµάτων θεωρούνται γενικά επικίνδυνα απόβλητα. Η απαλλαγή από το είδος αυτό των αποβλήτων ρυθµίζεται από εθνικούς και τοπικούς νόµους και κανονισµούς. Επικοινωνήστε µε τις τοπικές αρχές ή µε εταιρίες διαχείρισης αποβλήτων που θα σας δώσουν συµβουλές σχετικά µε το πώς να απαλλαγείτε από επικίνδυνα απόβλητα. Ηµεροµηνία Έκδοσης: 12.11.2004 430TMBVPG/121104 15
ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ Balin, B.J., Gérard, H.C., Arking, E.J., Appelt, D.M., Branigan, P.J., Abrams, J.T., WhittumHudson, J.A., Hudson, A.P.: Identification and localization of Chlamydia pneumoniae in the Alzheimer s brain. Med. Microbiol. Immunol. 187, 2342 (1998). Christiansen, G., Boesen, T., Hjerno, K., Daugaard, L., Mygind, P., Madsen, A.S., Knudsen, K., Falk, E., Birkelund, S.: Molecular biology of Chlamydia pneumoniae surface proteins and their role in immunopathogenicity. Am. Heart J. 138, S491495 (1999). Danesh, J., Collins., Peto, R.: Chronic infections and coronary heart disease: is there a link? Lancet 350, 430436 (1997). Elkind, M.S., Lin, I.F., Grayston, J.T., Sacco, R.L.: Chlamydia pneumoniae and the risk of first ischemic stroke. The Northern Manhattan stroke study. Stroke 31, 15211525 (2000). Gérard, H.C., Schumacher, R.H., ElGabalawy, H., GoldbachManksy, R., Hudson, A.P.: Chlamydia pneumoniae present in the human synovium are viable and metabolically active. Microbiol. Pathol. 29, 1724 (2000). Grayston, J.T.: Epidemiology of Chlamydia pneumoniae (TWAR). In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 11. 14. September, 211214 (1996). Grayston, J.T., Aldous, M.B., Easton, A., Wang, S.P., Kuo C.C., Campbell, L.A. Altman, J.: Evidence that Chlamydia pneumoniae causes pneumonia and bronchitis. J. Infect. Dis. 168, 12311235 (1993). Gupta, S., Leatham, E.W., Carrington, D., Mendall, M.A., Kaski, J.C., Camm, A.J.: Elevated Chlamydia pneumoniae antibodies, cardiovascular events, and azithromycin in male survivors of myocardial infarction. Circulation 69, 401407 (1997). Gurfinkel, E., Bozovich, G., Caroca, A., Beck, E, Mautner, B.: Randomised trial of roxithromycin in ninqwave coronary syndromes: ROXIS pilot study. Lancet 350, 404407 (1997). Hahn, D.L., Peeling, R.W., Dillon, E., McDonald, R., Saikku, P.: Serologic Markers for C. pneumoniae in asthma. Ann. Allergy Asthma Immunol. 84, 227233 (2000). Heinzl, S.: Chlamydien, Arteriosklerose, Asthma und MS. Med. Monatsschr. Pharm. 23, 37 (2000). Hunter, S.F., Hafler, D.A.: Ubiquitous pathogens: links between infection and autoimmunity in MS? Neurology 55, 164165 (2000). Kuo, C.C., Jackson, L.A., Campbell, L.A., Grayston, J.T.: Chlamydia pneumoniae(twar). Clin. Microbiol. Rev. 8, 451461 (1995). 16 430TMBVPG/121104
LayhSchmitt, G., Bendl, C., Hildt, U., DongSi, T., Juttler, E., Schnitzler, P., GrondGinsbach, C., Grau, A.J.: Evidence for infection with Chlamydia pneumoniae in a subgroup of patients with multiple sclerosis. Ann. Neurol. 47, 652655 (2000). Maass, M., Bartels, C., Engel, P.M., Mamat, U., Sievers, H.H.: Endovascular presence of viable Chlamydia pneumoniae is a common phenomenon in coronary artery disease. J. Am. Coll. Cardiol. 31, 827832 (1998). Morré, S.A., De Groot, C.J., Killestein, J., Meijer, C.J., Polman, C.H., Van der Valk, P., Van den Brule, A.J.: Is Chlamydia pneumoniae present in the central nervous system of multiple sclerosis patients? Ann. Neurol. 48, 399 (2000). Muhlestein, J.B.: The link between Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis. Infect. Med. 14, 380382, 392, 426 (1997). Saikku, P.: Chronic Chlamydia pneumoniae infections. In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 11.14. September. 215218 (1996). Saikku, P., Leinonen, M., Mattila, K., Ekman, M.R., Nieminen, M.S., Mäkela, P.H., Huttunen, J.K., Valtonen, V.: Serological evidence of an association of a novel Chlamydia, TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infarction. Lancet 2, 983986 (1988). Saikku, P., Leinonen, M., Tenkanen, L., Linnanmäki, E., Ekman, M.R., Manninen, V., Manttari, M., Frick, M.H., Huttunen, J.K.: Chronic Chlamydia pneumoniae infection as a risk factor for coronary heart disease in the Helsinki Heart Study. Ann. Int. Med. 116, 272278 (1992). Samra, Z., Soffer, Y.: IgA antichlamydial antibodies as a diagnostic tool for monitoring of active chlamydial infection. Eur. J. Epidemiol. 8, 882884 (1992). Schumacher, H.R.: Chlamydial Arthritis. In: Chlamydia Research. Pekka Saikku (ed.). Proceedings of the 4 th Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Helsinki, Finland, 20.23. August. 229 (2000). Sriram, S., Stratton, C.W., Yao, S.: Chlamydia pneumoniae infection in the central nervous system in multiple sclerosis. Ann. Neurol. 46, 6 14 (1999). Stille, W., JustNübling, G.: Argumente für eine AntibiotikaTherapie der Arteriosklerose. Chemotherapie Journal 6, 15 (1997). 430TMBVPG/121104 17