ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ ΑΝΟΙΚΤΑ ΑΚΑΔΗΜΑΙΚΑ ΜΑΘΗΜΑΤΑ Ενότητα 9: Μέθοδοι ανάλυσης γεωργικών φαρμάκων. Β Μέρος. Ουρανία Μενκίσογλου-Σπυρούδη
Άδειες Χρήσης Το παρόν εκπαιδευτικό υλικό υπόκειται σε άδειες χρήσης Creative Commons. Για εκπαιδευτικό υλικό, όπως εικόνες, που υπόκειται σε άλλου τύπου άδειας χρήσης, η άδεια χρήσης αναφέρεται ρητώς. 2
Χρηματοδότηση Το παρόν εκπαιδευτικό υλικό έχει αναπτυχθεί στα πλαίσια του εκπαιδευτικού έργου του διδάσκοντα. Το έργο «Ανοικτά Ακαδημαϊκά Μαθήματα στο» έχει χρηματοδοτήσει μόνο τη αναδιαμόρφωση του εκπαιδευτικού υλικού. Το έργο υλοποιείται στο πλαίσιο του Επιχειρησιακού Προγράμματος «Εκπαίδευση και Δια Βίου Μάθηση» και συγχρηματοδοτείται από την Ευρωπαϊκή Ένωση (Ευρωπαϊκό Κοινωνικό Ταμείο) και από εθνικούς πόρους. 3
ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ ΑΝΟΙΚΤΑ ΑΚΑΔΗΜΑΙΚΑ ΜΑΘΗΜΑΤΑ Μέθοδοι ανάλυσης γεωργικών φαρμάκων. Β Μέρος
Περιεχόμενα ενότητας 1. Εκτίμηση Αξιοπιστίας των Μεθόδων ανάλυσης. 2. Όρια ανίχνευσης. i. Όριο ανιχνεύσεως, Limit of Detection (LOD). ii. Όριο ποσοτικού προσδιορισμού LOQ ή LΟD. 3. Εκτίμηση του LOD & LOQ από τη σχέση: σήματος S /θορύβου N (S/N). 4. Έκφραση αποτελεσμάτων: εκφράζονται σε mg/kg σε συσχέτιση με το MRL. 5
Εκτίμηση Αξιοπιστίας των Μεθόδων ανάλυσης Επικύρωση μεθόδου- Method validation Η αξιοπιστία (reliability) των μεθόδων ανάλυσης εξαρτάται: Εξειδίκευση, specificity / Εκλεκτικότητα, selectivity Ακρίβεια, accuracy Ανάκτηση, recovery Επαναληψιμότητα, precision Ευαισθησία μεθόδου, sensitivity Ιδιαίτερη σημασία στην αξιολόγηση (evaluation) & επικύρωση (validation) των μεθόδων ανάλυσης. 6
Εκτίμηση Αξιοπιστίας των Μεθόδων ανάλυσης (1) Εξειδίκευση, specificity / Εκλεκτικότητα, selectivity Εξειδίκευση ικανότητα του ανιχνευτή (σε συνδυασμό με την εκλεκτικότητα της αναλυτικής μεθόδου ) να διακρίνει τη συγκεκριμένη δ.ο. π.χ. GC-MS -EI: ειδικός, όχι εκλεκτικός GC-MS -MS ειδικός και εκλεκτικός Εκλεκτικότητα: ικανότητα της αναλυτικής μεθόδου (εκχύλιση, καθαρισμός, και ειδικά ο ανιχνευτής) να διακρίνει τη συγκεκριμένη δ.ο. που προσδιορίζεται μεταξύ των υπολοίπων ενώσεων του δείγματος. π.χ.gc-ecd: εκλεκτικός, όχι ειδικός 7
Εκτίμηση Αξιοπιστίας των Μεθόδων ανάλυσης (2) Ακρίβεια : Η απόκλιση της μέτρησης από την πραγματική τιμή. Περιγράφει την ορθότητα του πειραματικού αποτελέσματος Εκφράζεται με το σφάλμα, error Αδυναμία και δυσκολία εκτίμησης επηρεάζεται από Τυχαία σφάλματα (random errors) και Συστηματικά σφάλματα (bias) Προσδιορίζεται με ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΑΝΑΚΤΗΣΗΣ!!! Σύγκριση του αποτελέσματος της ανάλυσης του δείγματος με γνωστό ειδικά παρασκευασμένο δείγμα Ανάκτηση ( R %) της ποσότητας που προστέθηκε στο δείγμα. 8
Εκτίμηση Αξιοπιστίας των Μεθόδων Επαναληψιμότητα: ανάλυσης (3) Πόσο κοντινές τιμές μετρήσεων λαμβάνονται από πολλές αναλύσεις του ίδιου δείγματος. διασπορά- Τυχαία σφάλματα αναλυτής, όργανα Τυπική απόκλιση SD εκφράζει την επαναληψιμότητα Συντελεστής παρέκκλισης, CV SD CV = RSD = x 100 διασπορά μετρήσεων x Ενδοεργαστηριακή επαναληψιμότητα, repeatability Διεργαστηριακή επαναληψιμότητα, reproducibility 9
Πραγματική τιμή 10
Εκτίμηση Αξιοπιστίας των Μεθόδων ανάλυσης (4) Ευαισθησία μεθόδου S = dr dc Το μέτρο της ικανότητας της μεθόδου ή του οργάνου να διακρίνουν μικρές διαφορές στη συγκέντρωση της ουσίας (γ.φ) που μετρείται. Εξαρτάται από το όργανο και από το δείγμα. Στη Γραμμική περιοχή καθορίζεται η κλίση καμπύλης αναφοράς και η επαναληψιμότητα. 11
Υπολείμματα, ppm Όρια ανίχνευσης (1) ~ θεωρητική αρχική συγκέντρωση (εφαρμόσθηκε) αρχική συγκέντρωση (μετρήθηκε) απώλειες πριν από το στόχο αποικοδόμηση/μείωση παρεμποδίσεις LOQ LOD Μέρες μετά την εφαρμογή ΚΑΤΑΝΑΛΩΣΗ Υποθετική καμπύλη αποικοδόμησης/υποβάθμισης Φ.Π. 12
Υπολείμματα, ppm Όρια ανίχνευσης (2) ~ αρχική συγκέντρωση (μετρήθηκε) Ποσότητα που προσδιορίζεται με ανάλυση. Ποσότητα που δεν προσδιορίζεται με ανάλυση αλλά υπάρχει στο δείγμα. παρεμποδίσεις LOQ LOD Μέρες μετά την εφαρμογή Υποθετική καμπύλη αποικοδόμησης/υποβάθμισης Φ.Π. 13
Όριο ανιχνεύσεως, Limit of Detection (LOD) Η μικρότερη συγκέντρωση μιας ουσίας σε ένα δείγμα που μπορεί να ανιχνευθεί ποιοτικά αλλά όχι να προσδιορισθεί και ποσοτικά με ακρίβεια υπό τις ορισμένες αναλυτικές συνθήκες της μεθόδου. Εξαρτάται από το σύστημα ανίχνευσης 14
Όριο ποσοτικού προσδιορισμού LOQ ή LΟD Limit of Determination (LΟD ή LDM), Limit of Quantitation (LOQ) Η ελάχιστη συγκέντρωση ή ποσότητα μιας ουσίας σε ένα δείγμα που μπορεί να προσδιορισθεί ποσοτικά με αποδεκτή ακρίβεια και βεβαιότητα υπό τις ορισμένες αναλυτικές συνθήκες της μεθόδου. Καθορίζεται για κάθε αναλυτική μέθοδο. Όριο ποσοτικού προσδιορισμού > Όριο ανιχνεύσεως. Στη νομοθεσία όταν το MRL ορίζεται στο όριο προσδιορισμού της μεθόδου αναφέρεται ως LΟD MRLs. 15
Εκτίμηση του LOD & LOQ από τη σχέση: σήματος S /θορύβου N (S/N) (1) 3 x SD of estimated LOD ή S/N = 3/1 6-10 x SD of estimated LOD ή S/N = 10/1) 16
Εκτίμηση του LOD & LOQ από τη σχέση: σήματος S /θορύβου N (S/N) (2) 1 pg/μl 0 pg/μl 10 pg/μl LOD 50 pg/μl LOQ 17
Έκφραση αποτελεσμάτων: εκφράζονται σε mg/kg σε συσχέτιση με το MRL (1) <LOD LOD < mg/kg (ppm)/ μg/kg (ppb)< LOQ LOQ <ppm /ppb Η τιμή LOD της μεθόδου που χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση αναφέρεται πάντα μαζί με τα αποτελέσματα των αναλύσεων. 18
Έκφραση αποτελεσμάτων: εκφράζονται σε mg/kg σε συσχέτιση με το MRL (2) Όριο αναφοράς -reporting limit, RL- το κατώτερο όριο που το αποτέλεσμα μιας ανάλυσης με τη συγκεκριμένη μέθοδο αναφέρεται με ακρίβεια (σύμφωνα με την καμπύλη αναφοράς που δημιούργησε το Εργαστήριο ανάλυσης). RL 19
Σημείωμα Χρήσης Έργων Τρίτων (1/2) Το Έργο αυτό κάνει χρήση των ακόλουθων έργων: Εικόνες/Φωτογραφίες Εικόνα 1,2,3,4: Εκτίμηση της ακρίβειας. Επεξεργασία Ο. Μενκίσογλου-Σπυρούδη. Εικόνα 5: Εκτίμηση του LOD & LOQ από τη σχέση: σήματος S /θορύβου N (S/N ). Επεξεργασία Ο. Μενκίσογλου-Σπυρούδη. 20
Σημείωμα Χρήσης Έργων Τρίτων (2/2) Το Έργο αυτό κάνει χρήση των ακόλουθων έργων: Διαγράμματα Διαγράμματα 1,2. Υποθετικές καμπύλες αποικοδόμησης/υποβάθμισης Φ.Π. Αρχείο δεδομένων Ο. Μεκνίσογλου-Σπυρούδη. Διάγραμμα 3: Έκφραση αποτελεσμάτων: εκφράζονται σε mg/kg σε συσχέτιση με το MRL. Αρχείο δεδομένων Ο. Μεκνίσογλου- Σπυρούδη. 21
Σημείωμα Αναφοράς Copyright, Ουρανία Μενκίσογλου-Σπυρούδη. «Γεωργικά Φάρμακα ΙΙI. Μέθοδοι ανάλυσης γεωργικών φαρμάκων. Β Μέρος.». Έκδοση: 1.0. Θεσσαλονίκη 2014. Διαθέσιμο από τη δικτυακή διεύθυνση: https://opencourses.auth.gr/courses/ocrs516/. 22
Σημείωμα Αδειοδότησης Το παρόν υλικό διατίθεται με τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Αναφορά - Παρόμοια Διανομή [1] ή μεταγενέστερη, Διεθνής Έκδοση. Εξαιρούνται τα αυτοτελή έργα τρίτων π.χ. φωτογραφίες, διαγράμματα κ.λ.π., τα οποία εμπεριέχονται σε αυτό και τα οποία αναφέρονται μαζί με τους όρους χρήσης τους στο «Σημείωμα Χρήσης Έργων Τρίτων». Ο δικαιούχος μπορεί να παρέχει στον αδειοδόχο ξεχωριστή άδεια να χρησιμοποιεί το έργο για εμπορική χρήση, εφόσον αυτό του ζητηθεί. [1] http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/ 23
ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ ΑΝΟΙΚΤΑ ΑΚΑΔΗΜΑΙΚΑ ΜΑΘΗΜΑΤΑ Τέλος ενότητας Επεξεργασία: Χρυσάνθη Χαρατσάρη Θεσσαλονίκη, Εαρινό εξάμηνο 2013-2014
ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ Σημειώματα
Διατήρηση Σημειωμάτων Οποιαδήποτε αναπαραγωγή ή διασκευή του υλικού θα πρέπει να συμπεριλαμβάνει: το Σημείωμα Αναφοράς το Σημείωμα Αδειοδότησης τη δήλωση Διατήρησης Σημειωμάτων το Σημείωμα Χρήσης Έργων Τρίτων (εφόσον υπάρχει) μαζί με τους συνοδευόμενους υπερσυνδέσμους. 26