Total Anti-HAV. For the Qualitative Detection of Total Antibodies to Hepatitis A Virus. For use on IMMULITE 2000 systems

Total Anti-HAV For the Qualitative Detection of Total Antibodies to Hepatitis A Virus For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 Total Anti-HAV English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the qualitative detection of antibodies to hepatitis A virus (HAV) in human serum or plasma (heparinized, sodium citrate or EDTA), as an aid in the determination of immune status of HAV infection. Catalog Number: L2KAV2 (200 tests), L2KAV6 (600 tests) Test Code: aha Color: Light Green Summary and Explanation Hepatitis is an infectious liver disease caused by the Hepatitis A virus (HAV). Hepatitis A virus was first identified in human feces in 1973 1 and differs in many fundamental ways from Hepatitis B virus (HBV), Hepatitis C virus (HCV) and other viral causes of hepatitis. The virus is a small, non-enveloped, relatively heat stable RNA virus and is classified with the enterovirus group of the Picornaviridae family. 2,3,4 HAV accounts for a high incidence of acute hepatitis affecting humans throughout the world. Illness caused by HAV is characterized by fever, nausea, abdominal pain, loss of appetite and jaundice. These symptoms may appear 10-14 days after ingesting contaminated foods. Persons may shed HAV in their feces before disease symptoms appear. HAV infection is diagnosed by detection of immunoglobulin M (IgM) and IgG antibodies to HAV in human serum. Anti- HAV IgM is present at the acute or the early convalescent stage of infection. Anti-HAV IgG, which appears shortly after the IgM titer appears in the course of infection, remains detectable for a person's lifetime and confers lifelong protection against the disease. 4 Total anti-hav is useful in determining the immune status of a patient. A reactive total anti-hav (IgG and IgM) test in patient serum or plasma indicates past infection or immunization and associated immunity. 5 The test may be used to assess immune status in naturally infected 6 and experimentally vaccinated individuals 7 and for epidemiological studies. 8,9 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Total Anti-HAV is a solidphase, sequential competitive chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with polyclonal rabbit anti-hav antibody. The liquid phase consists of two reagents: 1) HAV antigen in a protein-based buffer and 2) alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal rabbit anti-hav antibody in buffer. In the first cycle, the patient sample and HAV antigen are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, anti-hav antibodies in the patient sample compete with the polyclonal rabbit anti-hav antibody for the limited numbers of HAV antigen. Unbound antigen and patient sample are then removed by a centrifugal wash. In the second cycle, the enzyme conjugated anti-hav antibody is added to the original reaction tube for another 30- minute incubation. During this time, the enzyme conjugated anti-hav antibody binds to the immobilized HAV antigen. The unbound conjugate is removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube, and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Specimen Collection The patient need not be fasting, and no special preparations are necessary. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Samples which are cloudy or have particulate material should be clarified by low-speed centrifugation. 2 IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01)

Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Total Anti-HAV has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 30 µl serum or plasma (heparinized, sodium citrate or EDTA). Storage: 3 days at 2 8 C. 10 For longer storage: at 20 C. 11 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Because no test method can offer complete assurance that laboratory specimens do not contain HIV, hepatitis B virus, or other infectious agents, specimens should be handled at the BSL 2 as recommended for any potentially infectious human serum or blood specimens in the CDC-NIH manual, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 1993. The Total Anti-HAV Adjustor, Total Anti- HAV Low Positive Control and Total Anti- HAV Positive Control may contain HAV. Always handle all controls as if capable of transmitting infectious agents. The concentration of anti-hav in a given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Total Anti-HAV EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied The principal components Bead Pack, Reagent Wedge, and Adjustor represent a matched set. Barcodes encode information about the test, including expiration dates, component lot numbers, and cutoff parameters. Total Anti-HAV Bead Pack (L2AV12) With barcode. 200 beads coated with a rabbit polyclonal anti-hav antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KAV2: 1 pack. L2KAV6: 3 packs. Total Anti-HAV Reagent Wedge (L2AVA2) With barcode. 11.5 ml of HAV antigen in a protein-based buffer. 7.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to rabbit polyclonal anti-hav, in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KAV2: 1 wedge. L2KAV6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations without damaging the barcode on the main label. Remove the foil seal from the top of the Reagent Wedge, and snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Invert the reagent wedge gently a few times to ensure thorough mixing and to remove any bubbles from the surface before each run, to avoid reagent sampling error. IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01) 3

Total Anti-HAV Adjustor (LAVR) 4 ml human serum reactive to HAV, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KAV2: 1 vial. L2KAV6: 2 vials. Total Anti-HAV Controls (LAVC1, LAVC2, LAVC3) Three vials containing 2 ml each. LAVC1 (Negative Control): human serum nonreactive to HAV, with preservative. LAVC2, LAVC3 (Low Positive Control, Positive Control): human serum reactive to HAV, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KAV2: 1 set. L2KAV6: 2 sets. For the current control ratio ranges, please refer to the Control insert. Aliquot Labels with barcodes are supplied with the kit, for use with the Adjustors and Controls. Before use, place the appropriate Aliquot Labels on test tubes, so the barcodes can be read by the barcode reader on the IMMULITE 2000. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: The controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor assay performance. The Controls should be processed at (or near) the beginning of every run containing patient samples to be tested for total anti-hav, and also when readjusting. For the current control ratio ranges, please refer to the Control insert. In addition to the controls provided, users may wish to run additional controls for their own purpose. Additional controls may be tested in accordance with guidelines or requirements of local, state and/or federal regulations or accrediting organizations. It is also recommended that, known reactive and nonreactive specimens be run periodically to assure pipetting accuracy for the dilution step. It is recommended that the user refer to published guidelines for general quality control recommendations and intervals for testing. Reagent Handling: Invert the reagent wedge gently a few times to ensure thorough mixing and to remove any bubbles from the reagent surface before each run, to avoid sampling error. Calculation of Cutoff and CO/S Ratio: The Master Cutoff of the assay was determined from representative samples to achieve optimal sensitivity and specificity for the assay. The cutoff is set equal to the average counts per second of the Adjustor (from the most recent adjustment) multiplied by Curve Parameter 1. (See the "Low Adjustor CPS" and "Curve Parameter 1" fields in the IMMULITE 2000 Kit Information screen, which can be accessed from the menu via Data Entry: Kit Entry.) Calculation of a cutoff/signal (co/s) ratio is done by using the following formula: CO/S Ratio = Mean Adjustor cps P1 Sample or Control cps Calculation and reporting of qualitative (reactive/nonreactive/indeterminate) and co/s ratio results are handled automatically by the IMMULITE 2000. The result for a sample is "indeterminate" if the counts per second for that sample fall within ±10% of the cutoff. The result is "reactive" if the sample's counts are below the indeterminate range, and "nonreactive" if above this range. 4 IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01)

Interpretation of Results A result of "Reactive" (co/s ratio of 1.1) indicates that the patient sample is reactive and that anti-hav antibodies were detected in the sample, which is indicative of either ongoing or previous infection. A result of "Nonreactive" (co/s ratio of < 0.9) indicates that the patient sample is nonreactive and that anti-hav antibodies were not detected in the sample. Any result of "Indeterminate" (co/s ratio between 0.9 and < 1.1) should be retested. Samples which still test as "Indeterminate" should be tested by an alternate method, or a second sample should be taken if possible within a reasonable period of time (e.g., one week). The magnitude of the measured results (cps) below the Cutoff is not indicative of the total amount of antibodies detected. Reports by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Total Anti-HAV EIA. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." An interpretation of the results is not recommended if the positive or negative control falls outside the range specified in the Quality Control section. Limitations The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical and vaccination history, symptomology and other laboratory findings. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed as a cutoff-tosignal ratio. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Specificity: A study was conducted to evaluate whether the measurement of total anti-hav is affected by closely related microorganisms. One hundred twenty-six seronegative sera containing antibodies to ANA (n = 6), Rubella (n = 20), HSV (n = 10), HIV (n = 10), HCV (n = 10), HBcAg (n = 10), CMV (n = 10), EBV (n = 20), Toxoplasma (n = 20) and rheumatoid factor (n = 10) were tested by the IMMULITE 2000 Total Anti-HAV assay. Out of 126 samples tested, 48 were reactive by IMMULITE 2000 and 43 were reactive by Abbott HAVAB EIA, with 9 indeterminate results. Hence, the results indicate that approximately 38% of samples were reactive to total anti-hav. (See "Specificity table). Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 540 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 80 volunteers into plain, heparinized, sodium citrate, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer plastic tubes. All samples were assayed by the IMMULITE 2000 Total Anti-HAV IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01) 5

procedure. Results are expressed as a cutoff-to-signal ratio. By linear regression: (Heparin) = 1.06 (Serum) + 0.31 r = 0.980 (EDTA) = 0.94 (Serum) + 0.28 r = 0.970 (SST) = 0.98 (Serum) + 0.29 r = 0.980 (Sodium Citrate) = 1.05 (Serum) + 0.29 r = 0.970 Means: 8.38 (Serum) 7.65 (Heparin) 8.38 (EDTA) 8.22 (SST) 7.74 (Citrate) Method Comparison: The assay was compared to a commercially available Abbott HAVAB EIA on 257 patient samples. Fifteen samples out of 257 were found discordant between IMMULITE 2000 and Abbott HAVAB EIA. Thirteen samples out of 15 were resolved by Abbott AxSYM assay to be concordant with the IMMULITE 2000 assay. The table below represents the final results of this study. IMMULITE 2000 Total Anti-HAV Abbott Reactive Ind Nonreactive Positive 175 3 3 Indeterminate 0 2 4 Negative 0 0 70 Total Agreement: 96.1% Relative Sensitivity: 100% Relative Specificity: 90.9% References 1) Feinstone SM, Kapikian AZ, Purcell RH. Hepatitis A: detection by immune electron microscopy of a virus like antigen associated with acute illness. Science 1973; 182, 1026-28. 2) Cohen JI, Ticehurst JR, Purcell RH, Buckler- White A, Baroudy BM. Complete nucleotide sequence of a wild-type hepatitis A virus: comparison with different strains of hepatitis A virus and other picornaviruses. J. Virol. 1987;61, 50-59. 3) Coulepis AG, Locarnini, SA, Westaway, EG. Tannock, GA, Gust ID. Biophysical and biochemical characterization of a hepatitis A virus. Intervirology 1982;18,107-207. 4) Stapleton JT. Host immune response to Hepatits A virus. J Infect Dis 1995;171 (suppl. 1):S9-14. 5) Weston SR, Martin P. Serological and molecular testing in viral hepatitis: an update. Can J. Gastroenterol 2001;15(3):177-84. 6) Lemon SM, Bin LN. Serum neutralizing antibody response to hepatitis A virus. J Infect Dis 1983;148:1033-39. 7) Flehmig B, Haage A, Heirricy U, Pfisterer M. Studies with an inactivated hepatitis A vaccine. In: AJ Zuckerman (Ed), Viral hepatitis and liver disease, 1988;100-5. 8) Yang NY, Yu PH, Mao ZX, Chen NL, Mao JS, In: Apparent infection of hepatitis A virus. Amer J Epidemiology 1988;127(3):599-604. 9) Tassopoulos NC, Roumeliotou-Karayannis A, Sakka M. Ticehurst J, et al. An epidemic of hepatitis A in an institution for young children. Amer J Epidemiol 1987;125(2): 302-7. 10) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995:354-60. 11) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1995:322-4. Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ratio) Within Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 0.35 0.01 2.9% 0.02 5.7% 2 0.40 0.01 2.5% 0.03 7.5% 3 0.69 0.03 4.3% 0.08 11.6% 4 0.87 0.03 3.4% 0.07 8.0% 5 0.88 0.03 3.4% 0.07 8.0% 6 1.47 0.05 3.5% 0.26 17.7% 7 1.76 0.07 4.0% 0.14 8.0% 8 12.2 0.74 6.1% 0.99 8.1% 9 15.7 0.84 5.4% 0.96 6.1% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. 6 IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01)

Specificity Reactive to Total 1 Anti-HAV By IML 2000 4 By Abbott HAVAB EIA 5 Number Sample Reactive to 2 tested 3 Anti-HCV 10 4 4 Anti-EBV IgG 10 4 3 Anti-HBc 10 4 4 Rheumatoid factor 10 2 5 Anti-EBV IgM 10 8 5 Anti-HSV IgG 10 3 3 ANA 6 1 1 Anti-HIV 10 3 3 Anti-CMV IgG 10 5 5 Toxoplasma IgM 10 4 3 Toxoplasma IgG 10 4 4 Rubella IgG 10 2 2 Rubella IgM 10 4 1 Česky. 1 Reaktivní s celkovými protilátkami proti HAV, 2 Vzorek reaktivní s, 3 Počet testovaných, 4 Pomocí IML 2000, 5 Pomocí Abbott HAVAB EIA. Ελληνικά. 1 Ενεργό στο Ολικά αντί-hav, 2 Δείγμα ενεργό σε, 3 Αριθμός εξετασθέντων, 4 Από την IML 2000, 5 Από την Abbott HAVAB EIA. Polski. 1 Reaktywny na Całkowite anty-hav, 2 Próbka reaktywna na, 3 Ilość przetestowanych, 4 Przez IML 2000, 5 Przez Abbott HAVAB EIA. Česky IMMULITE 2000 Celkové protilátky proti HAV Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke kvalitativní stanovení protilátek proti viru hepatitidy A (HAV) v lidském séru nebo v plazmě (heparinizovaná, s citrátem sodným nebo EDTA) jakožto pomůcky při klinické diagnostice imunitního stavu vůči infekci hepatitidy (HAV). Katalogové číslo: L2KAV2 (200 stanovení), L2KAV6 (600 stanovení) Kód metody: aha Barva: Světle zelená Shrnutí a vysvětlení Hepatitida je zánětlivé onemocnění jater, jehož nositelem je virus hepatitidy A (HAV). Poprvé byl virus hepatitidy rozpoznán v lidské stolici v roce 1973 1. V mnoha základních rysech se odlišuje od viru hepatitidy B (HBV) a C (HCV) a dalších virů, které způsobují žloutenku. Virus hepatitidy je malý, neobalený s relativně tepelně stálou RNA a řadí se mezi enteroviry rodu Picornaviridae. 2,3,4 HAV je zodpovědný za vysoký výskyt akutní hepatitidy na celém světě. Horečka, nevolnost, bolest v břiše, ztráta chuti a žloutenka jsou charakteristické pro nákazu virem hepatitidy A (HAV). První příznaky se objevují do 10 až 14 dnů od požití kontaminovaného jídla. HAV se může objevit ve stolici ještě před propuknutím prvních příznaků. Infekce hepatitidy je diagnostikována detekcí imunoglobulinu M (IgM) a IgG protilátek proti HAV v lidském séru. IgM protilátky proti HAV jsou přítomny u akutních fází nebo v počátečních stádiích rekonvalescence. IgG protilátky proti HAV, které se objevují krátce po výskytu IgM, zůstávají v organismu po celý život a představují celoživotní ochranu proti hepatitidě. 4 Stanovení celkových protilátek proti HAV je vhodné při klinické diagnostice imunitního stavu pacienta. Výskyt reaktivních celkových protilátek proti HAV (IgG a IgM) v séru nebo plazmě pacienta indikuje prodělanou infekci nebo imunizaci a získanou imunitu. 5 Test může být použit pro stanovení imunitního stavu přirozeně infikovaných 6 a experimentálně vakcinovaných jedinců 7 a pro epidemiologické studie. 8,9 Princip Stanovení Stanovení IMMULITE 2000 Celkové protilátky proti HAV je sekvenční kompetitivní chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena polyklonální králičí protilátkou proti HAV. Tekutá fáze sestává ze dvou činidel: 1) HAV antigen v pufru na bázi bílkoviny a 2) alkalická fosfatáza (z telecího střeva) konjugovaná s polyklonální králičí protilátkou proti HAV v pufru. IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01) 7

V prvním cyklu je vzorek a HAV antigen inkubován společně s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. Během této doby protilátky proti HAV ve vzorku pacienta soutěží s polyklonální králičí protilátkou proti HAV o omezený počet HAV antigenu. Nenavázaný antigen a vzorek pacienta jsou pak odstraněny centrifugačním mytím. Ve druhém cyklu je s enzymem konjugovaná protilátka proti HAV přidána do původní reakční zkumavky po dobu dalších 30 minut inkubace. Během této doby se s enzymem konjugovaná protilátka proti HAV váže na imobilizovaný HAV antigen. Nenavázaný enzymový konjugát je odstraněn centrifugačním mytím. Nakonec se do reakční zkumavky přidá chemiluminiscenční substrát a generovaný signál je přímo úměrný navázanému enzymu. Inkubační cykly: 2 30 minut. Odebírání vzorků Pacient nemusí být na lačno a nemusí se nijak speciálně připravovat. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Zakalené vzorky nebo vzorky s částicemi je třeba upravit nízkootáčkovou centrifugací. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Celkové protilátky proti HAV na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 30 µl séra nebo plazmy (heparinovaná nebo s citrátem sodným nebo EDTA). Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C. 10 Při delším skladování při teplotě 20 C. 11 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační prostředek byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Žádná metoda nemůže úplně zaručit, že laboratorní vzorky nenesou v sobě virus HIV, virus hepatitidy B nebo další infekční látky. S laboratorními vzorky by se mělo podle předpisu CDC-HIN 1993, zacházet v BSL 2 (Biologické, mikrobiologické a biomedicínské laboratoře), jako s potenciálně infekčními. Celkové protilátky proti HAV kalibrátor, Celkové protilátky proti HAV mírně pozitivní kontrola, Celkové protilátky proti HAV pozitivní kontrola mohou obsahovat HAV. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Při použití stanovení od jiného výrobce se koncentrace protilátek proti HAV v daném vzorku mohou lišit, vzhledem k odlišnostem v použité metodě a specifikaci reagencií. Proto by laboratorní výsledky pro lékaře měly obsahovat: "Následující výsledky byly získány metodou IMMULITE 2000 Celkové protilátky proti HAV EIA. Výsledky získané 8 IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01)

pomocí stanovení od jiných výrobců se nesmějí zaměňovat". Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Základní komponenty Zásobník s kuličkami, reagencie, kalibrátor představují ucelenou sadu. Čárový kód udává informaci o metodě, včetně expirace, šaržích komponentů a mezních parametrech. Celkové protilátky proti HAV zásobník s kuličkami (L2AV12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených polyklonálním králičí protilátkou proti HAV. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KAV2: 1 balení. L2KAV6: 3 balení. Celkové protilátky proti HAV reagencie (L2AVA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml HAV antigenu v pufru na bázi bílkoviny. 7,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s myší polyklonální protilátkou proti HAV, v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KAV2: 1 nádobka. L2KAV6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Pro řádné promíchání, zamezení chybám v měření a odstranění bublinek z povrchu obraťte jemně reagenci několikrát při každém cyklu. Celkové protilátky proti HAV kalibrátor (LAVR) 4 ml lidského séra reaktivního vůči HAV s konzervačním prostředkem. Skladování: 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců (rozdělený na alikvoty) při teplotě 20 C. L2KAV2: 1 ampulka. L2KAV6: 2 ampulky. Celkové protilátky proti HAV kontroly (LAVC1, LAVC2, LAVC3) Tři ampulky, každá obsahuje 2 ml. LAVC1 (Negativní kontrola): Lidské sérum nereaktivní vůči HAV s konzervačním prostředkem. LAVC2, LAVC3 (mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): Lidské sérum reaktivní vůči HAV s konzervačním prostředkem. Skladování: 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců (rozdělená na alikvoty) při teplotě 20 C. L2KAV2: 1 sada. L2KAV6: 2 sady. Aktuální kontrolní rozmezí najdete v příbalovém letáku kontroly. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Kontroly dodávané se soupravou by měly být používány jako materiál pro kontrolu kvality a monitorování stanovení. Kontroly by se měly stanovovat na začátku (nebo těsně před začátkem) každého cyklu, který obsahuje vzorek na testování metodou Celkové protilátky proti HAV a také po adjustaci. Aktuální kontrolní rozmezí najdete v příbalovém letáku kontroly. Mimo kontrol dodávaných se soupravou může laboratoř používat své vlastní kontrolní materiály. Dodatečné kontroly je možné testovat v souladu s pokyny a požadavky místních, státních a/nebo federálních předpisů nebo akreditačních organizací. IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01) 9

K zajištění přesného pipetování v kroku ředění se rovněž doporučuje pravidelně testovat známé reaktivní i nereaktivní vzorky. Uživatelům se také doporučuje dodržovat publikované směrnice týkající se kontroly kvality a intervalu testování. Nakládání s reagencií: Pro řádné promíchání, zamezení chybám v měření a odstranění bublinek z povrchu obraťte jemně reagenci několikrát při každém cyklu. Výpočet cut-off hodnoty a poměru CO/S: Hlavní cut-off hodnota tohoto testu byla určena z reprezentativních vzorků tak, aby bylo dosaženo optimální citlivosti a specificity stanovení. Cut-off hodnota je rovna průměrnému cps kalibrátoru (od poslední adjustace) vynásobenému parametrem kalibrační křivky 1 (Curve Parameter 1). (Viz políčka Low Adjustor CPS (cps nízkého kalibrátoru) a Curve Parameter 1 (parametr kalibrační křivky 1) na obrazovce přístroje IMMULITE 2000. Přístup je možný z nabídky přes KITS.) K výpočtu poměru hodnoty cut-off /signál (co/s) se používá následující vztah: CO/S = Střední hodnota cps kalibrátoru P1 CPS vzorku nebo kontroly Výpočet poměru co/s a hlášení kvalitativních výsledků (udávaných ve tvaru reaktivní/nereaktivní/neurčitý) provádí analyzátor IMMULITE 2000 automaticky. Výsledek pro vzorek je neurčitý, když je příslušné cps v rozmezí ±10% cut-off hodnoty. Výsledek je reaktivní, když je cps pro vzorek pod neurčitým rozmezím a nereaktivní, když je nad tímto rozmezím". Vyhodnocení výsledků Výsledek "Reaktivní" (poměr co/s 1,1) značí, že vzorek pacienta je reaktivní a že protilátky proti HAV byly ve vzorku přítomné, což svědčí o přetrvávající nebo prodělané infekci. Výsledek "Nereaktivní" (poměr co/s < 0,9) značí, že vzorek pacienta je nereaktivitní a že protilátky proti HAV nebyly ve vzorku zjištěny. Stanovení vzorků s výsledkem "Neurčitý" (poměr co/s mezi 0,9 a 1,1) je třeba opakovat. Pokud je výsledek opět "Neurčitý", je třeba použít jinou metodu, nebo, pokud je to možné, za přiměřenou dobu (např. jeden týden) odebrat další vzorek. Hodnota naměřených výsledků pod dolní hranicí neudává celkové množství naměřených protilátek. Výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři, by měl obsahovat sdělení: "Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení IMMULITE 2000 Celkové protilátky proti HAV EIA. Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat ". Nedoporučuje se vydávání výsledků v případě, že pozitivní nebo negativní kontrola vyjde mimo rozmezí, které je definováno v sekci kontroly kvality. Omezení Výsledky stanovení je třeba posuzovat s ohledem na klinickou anamnézu a dosavadní očkování pacienta, symptomatiku a ostatní laboratorní nálezy. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky 10 IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01)

se udávají jako poměr cut-off / signál. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka "Přesnost".) Specificita: Byla provedena studie pro vyhodnocení, zda stanovení Celkové protilátky proti HAV je ovlivněno blízce příbuznými mikroorganismy. Sto dvacet šest vzorků séra obsahujících protilátky proti ANA (n = 6), rubeole (n = 20), HSV (n = 10), HIV (n = 10), HCV (n = 10), HBcAg (n = 10), CMV (n = 10), EBV (n = 20), toxoplazmě (n = 20) a revmatoidnímu faktoru (n = 10) bylo testováno metodou IMMULITE 2000 Celkové protilátky proti HAV. Ze 126 testovaných vzorků bylo 48 reaktivních na IMMULITE 2000 a 43 bylo reaktivních na Abbott HAVAB EIA, 9 vzorků vykázalo neurčité výsledky. 38% vzorků bylo tedy reaktivních vůči celkovým protilátkám proti HAV. (Viz tabulka "Specificita".) Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky stanovení. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 540 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K zhodnocení vlivu alternativního typu vzorku byly odebrány vzorky krve od 80 dobrovolníků do obyčejných, heparinizovaných zkumavek, zkumavek s citrátem sodným, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Následující výsledky byly získány metodou IMMULITE 2000 Celkové protilátky proti HAV EIA. Výsledky se udávají v poměru cut-off / signál. Podle lineární regrese: (Heparin) = 1,06 (Sérum) + 0,31 r = 0,980 (EDTA) = 0,94 (Sérum) + 0,28 r = 0,970 (SST) = 0,98 (Sérum) + 0,29 r = 0,980 (citrát sodný) = 1,05 (Sérum) + 0,29 r = 0,970 Střední hodnoty: 8,38 (Sérum) 7,65 (Heparin) 8,38 (EDTA) 8,22 (SST) 7,74 (Citrát) Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno s komerčně dostupným stanovením Abbott HAVAB EIA u 257 vzorků. U patnácti vzorků z 257 byl zjištěn rozdíl mezi stanovením na analyzátoru IMMULITE 2000 a metodou Abbott HAVAB EIA. Metodou Abbott AxSYM bylo zjištěno, že výsledky 13 z 15 vzorků jsou v souladu se stanovením na analyzátoru IMMULITE 2000. Závěrečné výsledky této studie jsou znázorněny v tabulce. IMMULITE 2000 Celkové protilátky proti HAV Abbott Reaktivmí Neurč. Nereaktivní pozitivní 175 3 3 neurčité 0 2 4 negativní 0 0 70 Celková shoda: 96,1% Relativní citlivost: 100% Relativní specificita: 90,9% Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Ολικά αντί-hav Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποιοτική ανίχνευση των αντισωμάτων έναντι του ιού της ηπατίτιδας Α (HAV) στον ανθρώπινο ορό ή πλάσμα IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01) 11

(ηπαρινισμένο, κιτρικό νάτριο ή EDTA), σαν βοήθημα στον καθορισμό της ανοσολογικής κατάστασης της λοίμωξης HAV. Αριθμός Καταλόγου: L2KAV2 (200 εξετάσεις), L2KAV6 (600 εξετάσεις) Κωδικός εξετασης: aha Χρώμα: Ανοικτό Πράσινο Περίληψη και Επεξήγηση Η ηπατίτιδα είναι μία μολυσματική ηπατική νόσος που προκαλείται από τον ιό της Ηπατίτιδας Α (HAV). Ο ιός της Ηπατίτιδας ταυτοποιήθηκε για πρώτη φορά σε ανθρώπινα περιττώματα το 1973 1 και διαφέρει σε πολλές θεμελιώδεις πλευρές από τον ιό της Ηπατίτιδας Β (HBV), τον ιό της Ηπατίτιδας C (HCV) και άλλους ιούς που προκαλούν ηπατίτιδα. Ο ιός είναι ένας μικρός, χωρίς φάκελλο, σχετικά σταθερός στη θερμότητα RNA ιός και κατατάσσεται με την ομάδα των εντεροϊών της οικογένειας Picornaviridae. 2,3,4 Ο ιός HAV θεωρείται ως η κύρια αιτία της οξείας ηπατίτιδας στον άνθρωπο σε ολόκληρο τον κόσμο. Η νόσος που προκαλείται από τον HAV χαρακτηρίζεται από πυρετό, ναυτία, κοιλιακό άλγος, απώλεια όρεξης και ίκτερο. Αυτά τα συμπτώματα μπορεί να εμφανιστούν 10-14 ημέρες μετά την κατανάλωση μολυσμένων τροφών. Ο ιός HAV μπορεί να βρεθεί στα περιττώματα ορισμένων ανθρώπων πριν την εμφάνιση των συμπτωμάτων της νόσου. Η διάγνωση της λοίμωξης HAV γίνεται με ανίχνευση της ανοσοσφαιρίνης M (IgM) και των IgG αντισωμάτων έναντι του HAV στον ανθρώπινο ορό. Τα αντί-hav IgM είναι παρόντα στην οξεία ή την πρώιμη φάση ανάρρωσης της λοίμωξης. Τα αντί- HAV IgG, που εμφανίζονται σύντομα αφότου ο τίτλος IgM εμφανίζεται στην πορεία της λοίμωξης, παραμένουν ανιχνεύσιμα σε όλη τη ζωή ενός ανθρώπου και παρέχουν ισόβια προστασία έναντι της νόσου. 4 Η εξέταση ολικά αντί-hav είναι χρήσιμη για τον καθορισμό της ανοσολογικής κατάστασης του ασθενούς. Ένας αντιδραστικός συνολικός αντί-hav (IgG και IgM) έλεγχος στον ορό ή το πλάσμα του ασθενούς υποδηλώνει παλαιά λοίμωξη ή ανοσοποίηση και συνδεόμενη ανοσία. 5 Ο έλεγχος μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την εξακρίβωση της κατάστασης ανοσίας σε φυσιολογικά μολυσμένους 6 και πειραματικά εμβολιασμένα άτομα 7 και για επιδημιολογικές μελέτες. 8,9 Αρχή της Διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Ολικά αντί-hav είναι μία ξηρής φάσης, διαδοχική, διφασική, ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με πολυκλωνικό αντί-hav αντίσωμα κουνελιού. Η υγρή φάση αποτελείται από δύο αντιδραστήρια: 1) αντιγόνο HAV σε βάση ρυθμιστικού διαλύματος και 2) αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε πολυκλωνικό αντί-hav αντίσωμα κουνελιού σε ρυθμιστικό διάλυμα. Στον πρώτο κύκλο, το δείγμα ασθενούς και το αντιγόνο HAV επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, τα αντισώματα αντί-hav στο δείγμα του ασθενούς ανταγωνίζονται με τα πολυκλωνικά αντί- HAV αντισώματα για τον περιορισμένο αριθμό των HAV αντιγόνων. Το μη προσδεδεμένο αντιγόνο και δείγμα ασθενούς στη συνέχεια απομακρύνονται με φυγοκεντρική έκπλυση. Στο δεύτερο κύκλο, το συνδεδεμένο ένζυμο σε αντί-hav αντίσωμα προστίθενται στον αρχικό σωλήνα αντίδρασης για μία επιπλέον 30-λεπτη επώαση. Μέσα σε αυτό το χρόνο, το συνδεδεμένο ένζυμο με αντί-hav αντίσωμα δένεται στο ακινητοποιημένο HAV αντιγόνο. Το μη προσδεδεμένο σύμπλεγμα απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο σωλήνα αντίδρασης και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 2 30 λεπτά. Συλλογή Δείγματος Ο ασθενής δεν χρειάζεται να είναι νηστικός και δεν είναι απαραίτητη καμία ειδική προετοιμασία. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το 12 IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01)

εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Συνίσταται η χρήση υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Απαιτείται η φυγοκέντρηση των θολών δειγμάτων ή δειγμάτων που περιέχουν σωματίδια σε χαμηλές ταχύτητες. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Ολικά αντί-hav δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 30 µl ορού ή πλάσματος (ηπαρινισμένο, κιτρικό νάτριο ή EDTA). Φύλαξη: 3 μέρες στους 2 8 C 10 ή αποθήκευση στους 20 C για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα. 11 Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για διαγνωστική in vitro χρήση. Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά. Αζιδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl, σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Επειδή καμμία μέθοδος ελέγχου μπορεί ναπροσφέρει απόλυτη βεβαιότητα ότι τα εργαστηριακά δείγματα δεν περιέχουν HIV, ιό ηπατίτιδας Β ή άλλα μολυσματικούς παράγοντες, τα δείγματα πρέπει να χειρίζονται σύμφωνα με τη BSL2 όπως συστήνεται για οποιαδήποτε δυνητικά μολυσμένο ανθρώπινο ορό ή δείγμα αίματος στο εγχειρίδιο CDC-NIH, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 1993. Ο ρυθμιστής Ολικά αντί-hav, ο χαμηλός θετικός ορός ελέγχου Ολικά αντί-hav και ο θετικός ορός ελέγχου Ολικά αντί-hav μπορεί να περιέχουν HAV. Πάντα να χειρίζεστε όλους τους ορούς ελέγχου ως ικανούς να μεταφέρουν μολυσματικούς παράγοντες. Η συγκέντρωση του αντί-hav σε ένα συγκεκριμένο δείγμα με εξετάσεις από διαφορετικούς κατασκευαστές μπορεί να ποικίλλει εξαιτίας διαφορών στις μεθόδους εξετάσεων και την ειδικότητα των αντιδραστηρίων. Για αυτό, τα αποτελέσματα που αναφέρονται από το εργαστήριο στον ιατρό θα πρέπει να περιλαμβάνουν: «Τα ακόλουθα αποτελέσματα προέκυψαν με την IMMULITE 2000 Ολικά αντί-hav EIA. Αποτελέσματα που προέκυψαν από μεθόδους εξέτασης άλλων κατασκευαστών πιθανά δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν εναλλακτικά μεταξύ τους.» Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. Ανατρέξτε στο ένθετο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρησιμοποιείτε δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα κύρια συστατικά Συσκευασία Σφαιριδίων, Δοχείο Αντιδραστηρίου και IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01) 13

Ρθθμιστής είναι μία ολοκληρωμένη ενότητα. Οι γραμμικοί κώδικες περιέχουν πληροφορίες σχετικά με την εξέταση, που περιλαμβάνουν τις ημερομηνίες λήξης, τους αριθμούς παρτίδας των συστατικών και τις παραμέτρους ορίου αποκοπής. Συσκευασία σφαιριδίων Ολικά αντί- HAV (L2AV12) Με γραμμογράφηση. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με πολυκλωνικό αντί-hav αντίσωμα κουνελιού. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KAV2: 1 συσκευασία. L2KAV6: 3 συσκευασίες. Δοχείο Αντιδραστηρίων Ολικά αντί- HAV (L2AVA2) Με γραμμογράφηση. 11,5 ml αντιγόνου HAV σε υπόστρωμα πρωτεΐνης ρυθμιστικού διαλύματος. 7,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε πολυκλωνικό αντί-hav αντίσωμα κουνελιού, σε ρυθμιστικό διάλυμα. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KAV2: 1 δοχείο. L2KAV6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Αναδεύστε ήπια το δοχείο αντιδραστηρίου ήπια μερικές φορές για να εξασφαλιστεί πλήρης ανάμιξη και απομακρύνετε όποιες φυσαλίδες από την επιφάνεια πριν από κάθε κύκλο μέτρησης για την αποφυγή σφάλματος λήψης αντιδραστηρίου. Ρυθμιστής Ολικά αντί-hav (LAVR) 4 ml ανθρώπινου ορού αντιδραστικού έναντι του HAV, με συντηρητικό. Σταθερός στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα ή 6 μήνες (διαχωρισμένος) στους 20 C. L2KAV2: 1 φιαλίδιο. L2KAV6: 2 φιαλίδια. Οροί Ελέγχου Ολικά αντί-hav (LAVC1, LAVC2, LAVC3) Τρία φιαλίδια που περιέχουν 2 ml το καθένα. LAVC1 (Αρνητικός Ορός Ελέγχου): ανθρώπινος ορός μη αντιδραστικός έναντι του HAV, με συντηρητικό. LAVC2, LAVC3 (Χαμηλός Θετικός Ορός Ελέγχου, Θετικός Ορός Ελέγχου): ανθρώπινος ορός αντιδραστικός έναντι του HAV, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KAV2: 1 σετ. L2KAV6: 2 σετ. Για τα ισχύοντα εύρη λόγου, παρακαλούμε ανατρέξτε στο εσώκλειστο των ορών ελέγχου. Ετικέτες με γραμμικό κώδικα για τους διαμοιρασμένους ρυθμιστές και ορούς ελέγχου παράχονται με τη συσκευασία. Πριν τη χρήση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες στα σωληνάρια εξέτασης, έτσι ώστε οι γραμμικοί κώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης γραμμικού κώδικα του IMMULITE 2000. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Έμπλυμα του ανιχνευτή L2KPM: Κιτ καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες εξέτασης μιας χρήσης Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000. Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Χρονικό διάστημα επαναρύθμισης της καμπύλης: 2 εβδομάδες. Δείγματα Ελέγχου Ποιότητας: Οι οροί ελέγχου που παρέχονται με τη συσκευασία πρέπει να χρησιμοποιούνται σαν υλικό ποιοτικού ελέγχου για την παρακολούθηση της επίδοσης της εξέτασης. Οι οροί ελέγχου πρέπει να αναλύονται στο ξεκίνημα (ή κοντά) κάθε κύκλου μέτρησης που περιέχει δείγματα ασθενών για έλεγχο Ολικά αντί-hav καθώς και όταν γίνεται ρύθμιση. Για τα ισχύοντα εύρη λόγου, παρακαλούμε ανατρέξτε στο εσώκλειστο των ορών ελέγχου. 14 IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01)

Επιπλέον από τους ορούς ελέγχους που παρέχονται, οι χειριστές μπορεί να επιθυμούν να αναλύουν επιπρόσθετους ορούς ελέγχου για δικούς τους λόγους. Οι επιπρόσθετοι οροί ελέγχου μπορεί να αναλύονται σε συμφωνία με τις οδηγίες ή τις απαιτήσεις των τοπικών, πολιτειακών και/ή εθνικών κανονισμών ή των διαπιστευμένων οργανισμών. Επίσης προτείνεται η περιοδική μέτρηση γνωστών αντιδραστικών και μη αντιδραστικών δειγμάτων για τη διασφάλιση της ακρίβειας λήψης στο στάδιο της αραίωσης. Προτείνεται ο χειριστής να ανατρέχει σε δημοσιευμένες οδηγίες για γενικές συστάσεις ποιοτικού ελέγχου και τα μεσοδιαστήματα για έλεγχο. Διαχείριση αντιδραστηρίου: Αναδεύστε ήπια το δοχείο αντιδραστηρίου ήπια μερικές φορές για να εξασφαλιστεί πλήρης ανάμιξη και απομακρύνετε όποιες φυσαλίδες από την επιφάνεια πριν από κάθε κύκλο μέτρησης για την αποφυγή σφάλματος λήψης αντιδραστηρίου. Υπολογισμός του ορίου αποκοπής (Cut Off) και του λόγου CO/S: Το Κύριο Όριο αποκοπής (Master Cutoff) της εξέτασης καθορίστηκε από αντιπρωσοπευτικά δείγματα για να επιτευχθεί βέλτιστη ευαισθησία και ειδικότητα για την εξέταση. Το όριο αποκοπής ορίστηκε ίσο με το μέσο όρο κτύπων ανά δευτερόλεπτο (mean cps) του ρυθμιστή (από την πιο πρόσφατη ρύθμιση) πολλαπλασιασμένο με την Παράμετρο Καμπύλης 1. (Βλ. τα πεδία "Low Adjustor CPS" και "Curve Parameter 1" στην οθόνη του IMMULITE 2000 Kit Information screen, στην οποία μπορείτε να έχετε πρόσβαση από το μενού μέσω Data Entry: Kit Entry.) Ο υπολογισμός του λόγου (ratio) όριο αποκοπής/σήμα (cutoff/signal, co/s) προκύπτει με χρήση της παρακάτω εξίσωσης: CO/S Ratio = Μέσο cps Ρυθμιστή P1 Δείγμα ή Control cps Ο υπολογισμός και η αναφορά των ποιοτικών αποτελεσμάτων (αντιδραστικό/μη αντιδραστικό/ απροσδιόριστο) και των αποτελεσμάτων λόγου co/s διαχειρίζονται αυτόματα από τον IMMULITE 2000. Το αποτέλεσμα για ένα δείγμα αναφέρεται ως «Απροσδιόριστο» εάν οι κτύποι ανά δευτερόλεπτο για αυτό το δείγμα βρίσκονται στην περιοχή ±10% από το όριο αποκοπής. Το αποτέλεσμα ναφέρεται ως «Αντιδραστικό» εάν οι κτύποι του δείγματος είναι κάτω από το απροσδιόριστο εύρος και «Μη αντιδραστικό εάν είναι πάνω από αυτό το εύρος. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Ένα αποτέλεσμα «Αντιδραστικό» (Reactive, co/s λόγος 1,1) δείχνει την παρουσία αντί-hav αντισωμάτων και ότι ανιχνεύθηκαν στο δείγμα του ασθενή, γεγονός ενδεικτικό για ενεργή ή προηγούμενη λοίμωξη. Ένα αποτέλεσμα «Μη αντιδραστικό» (Nonreactive, λόγος co/s <0,9) δείχνει την απουσία αντί-hav και ότι δεν ανιχνεύθηκαν στο δείγμα. Κάθε αποτέλεσμα «Απροσδιόριστο» (Indeterminate, λόγος co/s μεταξύ 0,9 και <1,1) πρέπει να επανεξετάζεται. Δείγματα που εξακολουθούν να προκύπτουν ως «Απροσδιόριστο» θα πρέπει να εξετάζονται με μία εναλλακτική μέθοδο ή θα πρέπει να λαμβάνεται ένα δεύτερο δείγμα εάν είναι δυνατό μέσα σε ένα λογικό χρονικό διάστημα (π.χ. μία εβδομάδα). Η απόσταση των μετρούμενων αποτελεσμάτων (cps) πάνω από το όριο αποκοπής δεν είναι ενδεικτική για τη συνολική των αντισωμάτων που ανιχνεύθηκαν. Τα αποτελέσματα από το εργαστήριο στον ιατρό θα πρέπει να περιλαμβάνουν: «Τα ακόλουθα αποτελέσματα προέκυψαν με την IMMULITE 2000 Ολικά αντί-hav EIA. Αποτελέσματα που προέκυψαν από μεθόδους εξέτασης άλλων κατασκευαστών πιθανά δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν εναλλακτικά μεταξύ τους.» Δεν συστήνεται η ερμηνεία των αποτελεσμάτων εάν ο θετικός ή ο αρνητικός ορός ελέγχου δίνει αποτέλεσμα εκτός του εύρους που ορίζεται στο κεφάλαιο Ποιοτικός Έλεγχος. Περιορισμοί Τα αποτελέσματα της εξέτασης θα πρέπει να λαμβάνονται μαζί με το περιεχόμενο IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01) 15

του κλινικού ιστορικού και του εμβολιασμού του ασθενούς, τη συμπτωματολογία και άλλα εργαστηριακά ευρήματα. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε εργαστηριακές μεθόδους ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που, σαν ρουτίνα, εκτίθενται σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε, να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Δείτε παρακάτω τους πίνακες και τα γραφικά που αναπαριστούν την απόδοση της εξέτασης. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως αναλογία αποκοπής/σήμα (CO/S). (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ) Ειδικότητα: Πραγματοποιήθηκε μία μελέτη για να αξιολογηθεί εάν η μέτρηση των ολικών αντί-hav αντισωμάτων επηρεάζεται από στενά συγγενείς μικρκοοργανισμούς. 126 οροαρνητικοί οροί που περιείχαν αντισώματα έναντι των ANA (n = 6), Ερυθράς (n = 20), HSV (n = 10), HIV (n = 10), HCV (n = 10), HBcAg (n = 10), CMV (n = 10), EBV (n = 20), Τοξόπλασμα (n = 20) και ρευματοειδή παράγοντα (n = 10) αναλύθηκαν με τη μέθοδο IMMULITE 2000 Ολικά αντί-hav. Από τα 126 δείγματα που αναλύθηκαν, 48 ήταν αντιδραστικά με το IMMULITE 2000 και 43 ήταν αντιδραστικά με το Abbott HAVAB EIA, με 9 απροσδιόριστα αποτελέσματα. Έτσι, τα αποτελέσματα δείχνουν ότι περίπου 38% των δειγμάτων ήταν αντιδραστικά για ολικά αντί-hav. (Βλ. πίνακα "Specificity ). Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης (συνδεδεμένης και έμμεσης) σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 540 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3 000 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για να αξιολογηθεί η επίδραση διαφορετικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 80 εθελοντές σε απλούς, ηπαρινισμένους, με κιτρικό νάτριο, με EDTA και πλαστικούς σωλήνες κενού Becton Dickinson SST. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν με τη μέθοδο IMMULITE 2000 Ολικά αντί-hav. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε λόγος όριο αποκοπής προς σήμα. Με γραμμική παλινδρόμηση: (Ηπαρίνη) = 1,06 (Ορός) + 0,31 r = 0,980 (EDTA) = 0,94 (Ορός) + 0,28 r = 0,970 (SST) = 0,98 (Ορός) + 0,29 r = 0,980 (Κιτρικό νάτριο) = 1,05 (Ορός) + 0,29 r = 0,970 Μέσοι Όροι 8,38 (Ορός) 7,65 (Ηπαρίνη) 8,38 (EDTA) 8,22 (SST) 7,74 (Κιτρικό) Σύγκριση της Μεθόδου: Η μέθοδος συγκρίθηκε με μια διαθέσιμη στο εμπόριο ανάλυση, την Abbott HAVAB EIA σε 257 δείγματα. Δεκαπέντε από τα 257 δείγματα βρέθηκαν ασύμφωνα ανάμεσα στα IMMULITE 2000 και Abbott HAVAB EIA Δεκατρία από τα 15 δείγματα βρέθηκαν από την ανάλυση Abbott AxSYM ότι είναι σύμφωνα με την ανάλυση 16 IMMULITE 2000 Total Anti-HAV (PIEL2KAV-1 {4}, 2008-12-01)