Toxoplasma Quantitative IgG

Toxoplasma Quantitative IgG For the Quantitative Measurement of IgG Antibodies to Toxoplasma gondii in Human Serum For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of IgG antibodies to Toxoplasma gondii in serum, as an aid in the determination of serological status to Toxoplasma gondii. This kit is not FDA-cleared for use in the testing (i.e. screening) of blood or plasma donors. Catalog Number: L2KTXP2 (200 tests), L2KTXP6 (600 tests) Test Code: TXP Color: Light Gray Summary and Explanation Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite capable of infecting most mammals, including humans. The organism is transmitted through ingestion of insufficiently cooked meat. Throughout the world, 1 to 90 percent of populations may be infected, 7 with 25 to 30 percent of the adult population infected in the United States. 3 While toxoplasmosis may be manifested in several forms, infections are usually clinically inapparent, and latent infections usually persist for life. 2 Overt clinical symptoms are similar to infectious mononucleosis, with lymphadenopathy, fever, headache, malaise and sometimes pneumonia and myocarditis. 6 As with other latent infections, acute toxoplasma infection can pose a serious threat to immunocompromised individuals and newborns who acquire the infection in utero. Immuno-suppressed patients may develop encephalitis, myocarditis or pneumonitis. 3 Congenital infections usually result as a consequence of asymptomatic acute maternal infection. This infection can cause premature delivery, spontaneous abortion or stillbirth. 4,6 Neonates may manifest chorioretinitis, hydrocephaly, microcephaly, cerebral calcification and psychomotor retardation. 1 The majority of congenitally infected children will not exhibit any symptoms until later in life. 4 Management of toxoplasmosis requires serological monitoring of infected individuals, 3 as the organism is not readily available for culture. Quantitative testing for the presence of toxoplasma IgG can be useful to determine prior infection and indicate reactivation of the infection. Accurate diagnostic information is important, particularly during pregnancy, as treatment with spiramycin can reduce the risk to the fetus. 5 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG is a solid-phase, enzyme-labeled chemiluminescent sequential immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with inactivated, partially purified Toxoplasma gondii antigen (RH strain tachyzoites from mouse peritoneum). The liquid phase consists of two reagents: 1) protein based buffer and 2) alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG antibody. In the first cycle, the on-board diluted patient sample (1-in-20) and the protein based buffer are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, IgG antibodies specific to Toxoplasma gondii in the sample binds to inactivated Toxoplasma gondii antigen on the bead. Unbound sample is then removed by centrifugal washes. In the second cycle, the enzyme conjugated monoclonal murine antihuman IgG antibody is added to the original reaction tube for additional 30 minutes incubation. The enzyme conjugated monoclonal murine antihuman IgG antibody binds to the immobilized IgG to form antibody sandwich complex. The unbound enzyme conjugate is removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is 2 IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06)

generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Time to First Result: 65 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Samples which are cloudy or have particulate material should be clarified by low-speed centrifugation. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µl serum. After automatic sample predilution, 10 µl is used for the immunoassay. Automatic Predilution Factor: 20. Storage: 3 days at 2 8 C, or 6 months at 20 C. 12 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. The bead is coated with inactivated toxoplasma antigen. However, caution is advised because of the possible presence of residual organism when working with, or disposing of, the materials supplied. The anti-toxoplasma IgG results determined for a given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Toxoplasma Quantitative IgG Bead Pack (L2TXP12) With barcode. 200 beads, coated with inactivated, partially purified Toxoplasma gondii antigen (RH strain tachyzoites from mouse peritoneum). Stable at 2 8 C until expiration date. L2KTXP2: 1 pack. L2KTXP6: 3 packs. Toxoplasma Quantitative IgG Reagent Wedge (L2TXPA2) With barcode. 2 reagents: 11.5 ml of a protein-based buffer, with preservative. 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG antibody in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KTXP2: 1 wedge. L2KTXP6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06) 3

barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Toxoplasma Quantitative IgG Adjustors (LTXPL, LTXPH) Two vials (Low and High), 4 ml each, of human serum with IgG reactive to toxoplasma, in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KTXP2: 1 set. L2KTXP6: 2 sets. Before running adjustors or controls, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes, so that the barcodes can be read by the on-board reader. Toxoplasma IgG Controls (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) Three vials (Negative, Low Positive and Positive), 2 ml each. LTXPC1 (Negative Control): One vial containing human serum with IgG nonreactive to toxoplasma, with preservative. LTXPC2, LTXPC3 (Low Positive Control, Positive Control): Two vials containing human serum with IgG reactive to toxoplasma, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KTXP2: 1 set. L2KTXP6: 2 sets. The IMMULITE 2000 software performs automatic on-board dilution of control samples, and the results will be tracked in the QC database. Enter controls as controls. Refer to the control insert for concentration levels. IgG/IgM Sample Diluent (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KTXP2: 1 vial. L2KTXP6: 1 vial. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2KTXP2: 3 labels. L2KTXP6: 5 labels. Kit Components Supplied Separately IgG/IgM Sample Diluent (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2IGZ2: 1 vial. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2IGZ2: 5 labels. L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LTXPCM: Tri-level Toxoplasma IgG Control Module Also required Distilled or deionized water; test tubes Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: Use Toxoplasma IgG Controls supplied with the kit. The negative and positive controls are intended to monitor for substantial reagent failure. The positive control provided will not ensure precision of the cut-off. In addition to the controls provided, users may wish to run additional controls to cover the upper range of the assay. Additional controls may be tested in accordance with guidelines or 4 IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06)

requirements of local, state and/or federal regulations or accrediting organizations. 11 It is also recommended that known reactive and nonreactive specimens be run periodically to assure pipetting accuracy for the dilution step. Interpretation of Results IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG assay is standardized in terms of the World Health Organization's Third International Standard for Anti- Toxoplasma Serum. The assay's cutoff is determined from representative reactive and nonreactive samples (confirmed by an ELISA method) using the ROC (Receiver Operating Characteristic) technique. Reactive: A result greater than or equal to 8 IU/mL is indicative of a past infection. Nonreactive: A result less than 6.5 IU/mL is considered to be nonreactive. Results less than 6.5 IU/mL should be reported as Nonreactive only, and no numerical concentration should be reported. Indeterminate : A result greater than or equal to 6.5 IU/mL and less than 8 IU/mL is considered indeterminate. Samples greater than 250 IU/mL should be reported as "greater than 250 IU/mL". Specimens reporting a result of greater than 250 IU/mL, when tested at the required 1-in-21 auto-dilution, may be further diluted with the IMMULITE 2000 IgG/IgM Sample Diluent. The presence of IgG antibodies to Toxoplasma gondii is an indication of previous exposure to the organism. A single specimen can be used to estimate the serological status of the individual. A result of "indeterminate" indicates an intermediate level of Toxoplasma gondii antibodies in the sample: the sample should therefore be retested. Samples which still test as "indeterminate" should be examined by an alternate method, or a second sample should be collected, if possible, within a reasonable period of time (e.g. one week). Any interpretation of the results is not recommended if the positive or negative control falls outside the range specified in the Quality Control section. The magnitude of the reported IgG level cannot be correlated to an endpoint titer. Reports by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG EIA. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Expected Values Individuals with the toxoplasma organism may not exhibit detectable levels of IgG antibody in the early stages of infection. Levels of IgG antibody to Toxoplasma gondii begin to rise one or two weeks after infection. Peak levels are reached in 6 to 8 weeks, then gradually decline over a period of months or even years. Low titers are generally detectable for life. The antibody titer does not correlate with severity of illness. 2,4,6 Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations The use of IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG to diagnose recent infection by testing paired sera has not been validated. The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical history, symptomology and other laboratory findings. The presence of IgG antibodies in a single specimen is not sufficient to distinguish between active and past infection. Patients suspected of having a primary or active toxoplasma infection should be tested for the presence of IgM antibodies to Toxoplasma gondii. For the determination of seroconversion from nonreactive to reactive, a second serum sample should be drawn three to four weeks after the acute, nonreactive sample, during the convalescent stage of the infection. The acute phase sample should be stored and tested in parallel with the convalescent sample. Individuals with an acute toxoplasma infection may not exhibit any detectable IgG antibodies at the early stage of infection. The results in HIV patients, in patients undergoing immunosuppressive therapy, IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06) 5

or in patients with other disorders leading to immunosuppression, should be interpreted with caution. The performance characteristics of this assay have not been established for use with specimens from neonates, cord blood, pretransplant patients, or body fluids other than serum, such as urine, saliva or amniotic fluid. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in IU/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 5.0 250 IU/mL. Standardized in terms of WHO 3rd IS for Anti-Toxoplasma Serum, Human. Analytical Sensitivity: 5.0 IU/mL. Precision: Samples were assayed in duplicate in 40 runs for a total of 80 replicates. (See Precision table.) Specificity: The specificity of the IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG assay was evaluated by testing 73 specimens reactive for Mycoplasma pneumoniae, syphilis, varicella-zoster virus, parvovirus B19, cytomegalovirus (CMV), Epstein-Barr virus, HSV 1 and measles. With these specimens, IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG and IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG show 99% agreement (72/73). Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 539 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 15 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked at various levels with sera containing IgG antibodies to Toxoplasma, and then assayed by the IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG procedure, with the following results. (Heparin) = 1.1 (Serum) 0.81 IU/mL r = 0.985 (EDTA) = 1.0 (Serum) + 1.4 IU/mL r = 0.949 (SST) = 1.1 (Plain Tubes) 2.9 IU/mL r = 0.915 Means: 65 IU/mL (Serum) 68 IU/mL (Heparin) 67 IU/mL (EDTA) 66 IU/mL (SST) Method Comparison 1: The assay was compared to IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG on 33 samples. (Concentration range: approximately 5 to 112 IU/mL. See Method Comparison 1 graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.0 (IML) + 2.0 IU/mL r = 0.994 Means: 30 IU/mL (IMMULITE 2000) 28 IU/mL (IMMULITE) Method Comparison 2: The assay was compared to IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG on 40 samples. (Concentration range: approximately 5 to 162 IU/mL. See Method Comparison 2 graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.04 (IML) + 1.3 IU/mL r = 0.963 6 IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06)

Means: 35 IU/mL (IMMULITE 2000) 33 IU/mL (IMMULITE) References 1) Daffos F. Prenatal management of 746 pregnancies at risk for congenital toxoplasmosis. N Engl J Med 1988;318: 271-5. 2) Krick JA, Remington JS. Toxoplasmosis in the adult: an overview. N Engl J Med 1978;298: 550-3. 3) Krogstad DJ, et al. Blood and tissue protozoa. In: Lennette EH, et al, editors. Manual of clinical microbiology. 4th ed. Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1985: 612-30. 4) McCabe RE, Remington JS. Toxoplasma gondii. In: Mandell, Douglas, Bennett, editors. Principles and practice of infectious diseases. 2nd ed. New York: John Wiley, 1985. 5) Jeannel D, et al. What is known about the prevention of congenital toxoplasmosis? Lancet 1990;336:359-61. 6) Remington JS. McLeod R. Toxoplasmosis. In: Braude, editor. Microbiology and infectious diseases. Philadelphia: Saunders, 1981. 7) Walls KW. Toxoplasmosis. In: Balows A, et al, editors. Laboratory diagnosis of infectious diseases. New York: Springer-Verlag, 1988: 998-1017. 8) Baltz ML, Searcy RL. Clinical significance and advanced serologic diagnosis of ToRCH infections. Am Clin Lab 1994 (Mar/Apr): 18-23. 9) Wilson M, et al. Seroepidemiology of toxoplasmosis in the United States. Abstract presented at the American Society for Microbiology, May 1994. 10) Approved standard procedures for the handling and processing of blood specimens, NCCLS Document H18-A, 1991. 11) International Quality Control testing: principles and definitions, NCCLS Document C24-A, 1991. 12) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995:358. 13) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. Additional references : Abdalla KF. Congenital toxoplasmosis among premature infants with different clinical pictures in Saudi Arabia. J Egypt Soc Parasitol, 1994 Dec. Albrecht H. Disseminated toxoplasmosis in AIDS patients report of 16 cases. Scand J Infect Dis 1995. Attia RA. Toxoplasma IgG & IgM antibodies. A case control study. J Egypt Soc Parasitol. 1995 Dec. Bretagne S. Central nervous system toxoplasmosis in AIDS (letter, comment). N Engl J Med 1993 May 6. Brindle R. Toxoplasma antibodies in HIV-positive patients from Nairobi. Trans R Soc Trop Med Hyg, 1991 Nov-Dec. Camargo ME. Avidity of specific IgG antibodies as markers of recent primary infection caused by Toxoplasma gondii. Rev Inst Med Trop Sao Paulo, 1991 May-Jun. Choi WY. Foodborne outbreaks of human toxoplasmosis. J Infect Dis, 1997 May. Derouin F. Predictive value of Toxoplasma gondii antibody titres on the occurrence of toxoplasmic encephalitis in HIVinfected patients. ANRS 005/ACTG 154 Trial Group. AIDS 1996 Nov. Durmaz R. Seropositivity of toxoplasmosis among reproductive-age women in Malatya, Turkey. J Egypt Soc Parasitol, 1995 Dec. El-Nawawy A. Maternal and neonatal prevalence of toxoplasma and cytomegalovirus (CMV) antibodies and hepatitis-b antigens in an Egyptian rural area. J Trop Pediatr, 1996 Jun. Gilbert RE. Prevalence of toxoplasma IgG among pregnant women in west London according to country of birth and ethnic group (see comments). BMJ, 1993 Jan 16. Gomez- Marin JE. A maternal screening program for congenital toxoplasmosis in Quindio Colombia and application of mathematical models to estimate indicences using age-stratified data. Am J Trop Med Hyg, 1997 Aug. Guerina NG. Neonatal serologic screening and early treatment for congenital Toxoplasma gondii infection : The New England Regional Toxoplasma Working Group Isee comments. N Engl J Med, 1994 Jun 30. Hajeer AH. Toxoplasma gondii : detection of antibodies in human saliva and serum. Parasite Immunol, 1994 Jan. Harning D. Recombinant Toxoplasma gondii surface antigen 1 (P30) expressed in Escherichia coli is recognized by human Toxoplasma-specific immunoglobulin M (IgM) and IgG antibodies. Clin Diagn Lab Immunol, 1996 May. Hellerbrand C. High predictive value of Toxoplasma gondii IgG antibody levels in HIV-infected patients for diagnosis of cerebral toxoplasmosis. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 1996 Nov. Idris MA. Prevalence of IgG antibodies against Toxoplasma gondii in human sera from Dhofar, Oman. Ann Trop Med Parasitol, 1994 Feb. Israelski DM. Prevalence of Toxoplasma infection in a cohort of homosexual men at risk of AIDS and toxoplasmic encephalitis (see comments). J Acquir Immune Defic Syndr, 1993 Apr. Jacquier P. Epidemiology of toxoplasmosis in Switzerland : national study of seroprevalence monitored in pregnant women 1990-1991. Schweiz Med Wochenschr Suppl, 1995. Johnson AM. Cloning of Toxoplasma gonddi gene fragments encoding diagnostic antigens. Gene, 1991 Mar 1. Julvez J. Seroepidemiology of toxoplasmosis in Niamey, Niger. Med Trop (Mars), 1996. Konishi E. Naturally occuring immunoglobulin M antibodies to Toxoplasma gondii in Japanese populations. Parasitology 1991 Apr. Lappalainen M. Outcome of children after maternal primary Toxoplasma infection during pregnancy with emphasis on avidity of specific IgG. The Study Group. Pediatr Infect Dis J 1955 May. Lebech M. Neonatal screening for congenital toxoplasmosis in Denmark : presentation of the design of a prospective study. Scand J Infect Dis Suppl, 1992. Lebech M. Occurrence of IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06) 7

toxoplasmosis in pregnant women in Denmark. A study of 5402 pregnant women. Ugeskr Laeger, 1995 Sep 18. Low incidence of congenital toxoplasmosis in children born to women infected with human immunodeficiency virus. European Collaborative Study and Research Network on Congenital Toxoplasmosis. 1996 Sep. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 1996 Sep. Petithory JC. Performance of European laboratories testing serum samples for Toxoplasma gondii. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 1996 Jan. Rai SK. Immunoglobulin M and G antibodies in mice in response to Toxoplasma gondii (S-273) infection and their antigen recognition patterns in western blotting on various post-infection days. Kansenshogaku Zasshi, 1994 Nov. Sadaruddin A. Seroepidemiology of toxoplasma gondii infection in young school children in Islamabad. JPMA J Pak Med Assoc, 1991 Jun. Sahwi SY. Toxoplasmosis as a cause of repeated abortion. J Obstet Gynaecol, 1995 Apr. Vinhal FA. Analysis of aqueous humor in ocular toxoplamsosis : detection of low avidity IgG specific to Toxoplasma gondii. Appl Parasitol, 1994 Feb. Zufferey J. Prevalence of latent toxoplasmosis and serological diagnosis of active infection in HIV-positive patients. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 1993 Aug. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (IU/mL) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 7.60 0.42 5.5% 1.25 16.4% 2 10.2 0.62 6.1% 1.05 10.3% 3 11.9 0.77 6.5% 2.30 19.3% 4 14.6 0.89 6.1% 1.24 8.6% 5 46.7 2.17 4.7% 4.21 9.0% 6 66.1 3.73 5.6% 6.63 10.0% 7 81.9 5.40 6.6% 11.8 14.4% 8 142 9.1 6.4% 17.1 12.0% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Method Comparison 1 (IU/mL) IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG 100 75 50 25 0 0 25 50 75 100 IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG, IU/mL (IML 2000) = 1.0 (IML) + 2.0 IU/mL r = 0.994 Method Comparison 2 (IU/mL) IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG 160 120 80 40 0 0 40 80 120 160 IMMULITE Toxoplasma Quantitative IgG, IU/mL (IML 2000) = 1.04 (IML) + 1.3 IU/mL r = 0.963 English. Toxoplasma Quantitative IgG Česky. Toxoplazma kvantitativní IgG. Ελληνικά. Toxoplasma Quantitative IgG. Polski. Toxoplasma IgG Ilościowo. Česky IMMULITE 2000 Toxoplazma kvantitativní IgG Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace IgG protilátek proti Toxoplasma gondii v séru, jakožto a 8 IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06)

pomůcky při určení sérologického stavu vůči Toxoplasma gondii. Katalogové číslo: L2KTXP2 (200 stanovení), L2KTXP6 (600 stanovení) Kód metody: TXP Barva: Světle šedá Shrnutí a vysvětlení Toxoplasma gondii je obligátním intracelulárním parazitem schopným nakazit většinu savců včetně člověka. Parazitující organizmus se přenáší požitím nedostatečně uvařeného masa. Celosvětově může být nakaženo 1 až 90 procent populace, 7 přičemž ve Spojených státech je infikováno 25 až 30 procent dospělé populace. 3 Zatímco toxoplazmóza se může projevovat několika způsoby, infekce je většinou inaparentní a latentní infekce obyčejně přetrvává celý život. 2 Zjevné klinické příznaky jsou podobné jako u infekční mononukleózy lymfadenopatie, horečka, bolesti hlavy, malátnost a někdy pneumónie a myokarditida. 6 Tak jako jiné latentní infekce může akutní infekce toxoplazmou představovat vážné riziko pro osoby s poruchami imunity a novorozence nakažené v děloze. U pacientů s imunosupresí se může vyvinout encefalitida, myokarditida nebo pneumónie. 3 Kongenitální infekce se obvykle projeví jako důsledek asymptomatické akutní těhotenské infekce. Tato infekce může zapříčinit předčasný porod, spontánní potrat nebo narození mrtvého dítěte. 4,6 U novorozenců se může projevit chorioretinitida, hydrocefalus, mikrocefalus, cerebrální kalcifikace a psychomotorická retardace. 1 U většiny kongenitálně infikovaných dětí se symptomy projeví až v pozdějším věku. 4 Sledování toxoplazmózy vyžaduje sérologické monitorování infikovaných jedinců, 3 protože Toxoplasma se nedá dobře kultivovat. Stanovení přítomnosti IgG protilátek proti Toxoplasma je vhodné k určení dřívější infekce a může být signálem reaktivace infekce. Přesné diagnostické informace jsou důležité zejména v těhotenství, protože léčba spiramycinem může snížit riziko poškození plodu. 5 Princip Stanovení IMMULITE 2000 Toxoplazma Quantitative IgG je enzymem značená chemiluminiscenční sekvenční imunometrická metoda v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena inaktivovaným, částečně purifikovaným antigenem Toxoplasma gondii (RH kmen tachyzoity z myší pobřišnice). Kapalná fáze se skládá ze dvou reagencií: 1) bílkovina na bázi pufru a 2) alkalická fosfatáza (z telecího střeva) konjugovaná s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgG. V prvním kroku se inkubuje analyzátorem automaticky naředěný vzorek pacienta (1:20) a pufr na bázi bílkoviny spolu s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. Přitom se IgG protilátka specifická pro Toxoplasma gondii ve vzorku naváže na inaktivovaný antigen Toxoplasma gondii na kuličce. Nenavázaný vzorek se pak odstraní centrifugačním mytím. V druhém kroku se do reakční zkumavky přidá s enzymem konjugovaná monoklonální myší protilátka proti lidskému IgG a probíhá další inkubace 30 minut. S enzymem konjugovaná monoklonální myší protilátka proti lidskému IgG se naváže na imobilizované IgG a vznikne sendvičový komplex. Nenavázaný enzymový konjugát se odstraní centrifugačním mytím. Nakonec se do testovací jednotky s kuličkou přidá chemiluminiscenční substrát a generovaný signál je přímo úměrný množství navázaného enzymu. Inkubační cykly: 2 30 minut. Čas do prvního výsledku: 65 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Zakalené vzorky nebo vzorky s částicemi je třeba upravit nízkootáčkovou centrifugací. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06) 9

zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Toxoplazma kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 10 μl séra. Po automatickém naředění vzorku se pro imunochemické stanovení použije 10 µl. Faktor automatického předředění: 20. Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců při teplotě 20 C. 12 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Kuličky jsou potažené imobilizovaným antigenem toxoplazmy. Při práci s dodaným materiálem nebo při jeho likvidaci se ale doporučuje postupovat obezřetně, protože může obsahovat zbytkové organizmy. Výsledky stanovení IgG protilátek proti toxoplazmě v daném vzorku získané pomocí testů od různých výrobců se můžou z důvodu rozdílů v použité metodě a specificity reagencie lišit. Proto by výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři, měl obsahovat sdělení: Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení Toxoplazma kvantitativní IgG EIA na analyzátorech IMMULITE 2000. Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. Toxoplazma kvantitativní IgG zásobník s kuličkami (L2TXP12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených imobilizovaným částečně purifikovaným Toxoplasma gondii antigenem (RH kmen tachyzoity z myší pobřišnice). Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KTXP2: 1 balení. L2KTXP6: 3 balení Toxoplazma kvantitativní IgG reagencie (L2TXPA2) Opatřeno čárovým kódem. 2 reagencie: 11,5 ml pufrovaného roztoku na bázi bílkovin, s konzervačním prostředkem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgG v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KTXP2: 1 nádobka. L2KTXP6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Toxoplazma kvantitativní IgG kalibrátory (LTXPL, LTXPH) 2 ampulky(s vysokou a nízkou koncentrací), každá 4,0 ml lidského séra s IgG protilátkami reaktivními vůči toxoplazmě v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření 10 IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06)

při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KTXP2: 1 sada. L2KTXP6: 2 sady. Před adjustací nebo testováním kontrol nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy Toxoplazma IgG kontroly (LTXPC1, LTXPC2, LTXPC3) 3 ampulky (negativní, mírně pozitivní a pozitivní), každá 2 ml. LTXPC1 (Negativní kontrola): Jedna ampulka obsahující lidské sérum s IgG protilátkami nereaktivními vůči toxoplazmě, s konzervačním prostředkem. LTXPC2, LTXPC3 (mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): 2 ampulky obsahující lidské sérum s IgG protilátkou působící vůči toxoplazmě, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KTXP2: 1 sada. L2KTXP6: 2 sady. Software analyzátoru IMMULITE 2000 provádí automatické ředění vzorků a kontrol. Výsledky jsou uloženy do QC databáze. Kontroly zadejte jako kontroly. Koncentrace najdete v letáčku přiloženém ke kontrolám. IgG/IgM diluent vzorků (L2IGZ2) K automatickému ředění vzorků pacientů a kontrol. 55 ml koncentrovaného diluentu (připraveného k použití), nehumánní bílkovino/pufrová matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při teplotě 20 C L2KTXP2: 1 ampulka. L2KTXP6: 1 ampulka. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2KTXP2: 3 štítky. L2KTXP6: 5 štítků. Materiál dodávaný zvlášť IgG/IgM diluent vzorků (L2IGZ2) K automatickému ředění vzorků pacientů a kontrol. 55 ml koncentrovaného diluentu (připraveného k použití), nehumánní bílkovino/pufrová matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při teplotě 20 C L2IGZ2: 1 ampulka. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2IGZ2: 5 štítků. L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků (16 100 mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků LTXPCM: Trojúrovňový Toxoplazma IgG kontrolní modul Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu, testovací zkumavky Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly Toxoplazma IgG dodané se soupravou. Negativní a pozitivní kontroly jsou určeny k monitorování případného závažného selhání reagencií. Dodané pozitivní kontroly nezajistí přesnost cut-off. Vedle dodaných kontrol se uživatelé můžou rozhodnout otestovat další kontroly a pokrýt tak horní rozmezí tohoto stanovení. Dodatečné kontroly je možné testovat v souladu s pokyny a požadavky místních, státních a/nebo federálních předpisů nebo akreditačních organizací. 11 K ověření přesného pipetování pro krok ředění se rovněž doporučuje pravidelně testovat známé reaktivní i nereaktivní vzorky. IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06) 11

Vyhodnocení výsledků Kvantitativní stanovení Toxoplazma kvatitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 je standardizováno s ohledem na Third International Standard for Anti-Toxoplasma Serum (třetí mezinárodní normu pro sérum proti toxoplazmě) Světové zdravotnické organizace. Hodnota cut-off tohoto stanovení je určená z reprezentativních reaktivních a nereaktivních vzorků (potvrzených metodou ELISA) za použití metody ROC (Receiver Operating Characteristic). Reaktivní: Výsledek větší nebo rovný 8 IU/ml značí prodělanou infekci. Nereaktivní: Výsledek menší než 6,5 IU/ml je považován za nereaktivní. Výsledky pod 6,5 IU/ml je třeba hlásit pouze jako nereaktivní a nepřipojit žádný číselný údaj o koncentraci. Neurčitý (Indeterminate): Výsledek větší nebo rovný 6,5 IU/ml a menší než 8 IU/ml se považuje za neurčitý. Vzorky s hodnotou nad 250 IU/ml je třeba hlásit jako větší než 250 IU/ml". Vzorek s výsledkem větší než 250 IU/ml" analyzovaný při automatickém ředění v požadovaném poměru 1:21, je možné dál ředit diluentem na vzorky IgG/IgM Diluent vzorků pro analyzátor IMMULITE 2000. Přítomnost IgG protilátek proti Toxoplasma gondii signalizuje kontakt s organizmem v minulosti. Ke zjištění sérologického stavu příslušného jedince je možné použít jediný vzorek. Výsledek"Neurčitý (Indeterminate)" označuje střední množství protilátek proti Toxoplasma gondii ve vzorku. Tento je proto nutné znovu analyzovat. Pokud je výsledek opět Neurčitý (Indeterminate), je třeba použít jinou metodu, nebo, pokud je to možné, za přiměřenou dobu (např. jeden týden) odebrat další vzorek. V případě, že se pozitivní nebo negativní kontroly dostanou mimo rozsah stanovený v části Kontrola kvality, doporučujeme zdržet se výkladu výsledků. Velikost naměřených hodnot protilátek IgG není možné korelovat s koncovým titrem. Výsledky stanovení, které laboratoř posílá lékaři, by měly obsahovat sdělení: Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení na analyzátorech IMMULITE 2000 Toxoplazma kvantitativní IgG EIA. Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat. Očekávané hodnoty Jedinci s organizmem toxoplazmy nemusí v počátečních stadiích infekce vykázat zjistitelné množství IgG protilátek. Množství IgG protilátek proti Toxoplasma gondii se začíná zvyšovat jeden nebo dva týdny po nakažení.vrchol dosahují mezi 6 a 8 týdnem, pak postupně klesají po dobu měsíců, ale i let. Nízké titry jsou obecně zjistitelné po celý život. Titr protilátek nekoreluje se závažností onemocnění. 2,4,6 Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Použití stanovení Toxoplazma kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 k určení diagnózy nedávné infekce analýzou dvojic séra nebylo schváleno. Výsledky stanovení je třeba posuzovat s ohledem na klinickou anamnézu pacienta, symptomatiku a ostatní laboratorní nálezy. Přítomnost IgG protilátek v jednom vzorku nepostačuje k rozlišení mezi aktivní a minulou infekcí. Vzorky od pacientů s podezřením na primární nebo aktivní infekci toxoplazmy je třeba otestovat, zdali se v nich nachází IgM protilátky proti Toxoplasma gondii. Ke stanovení sérokonverze z nereaktivní na reaktivní je třeba odebrat dva vzorky s časovým rozestupem tři až čtyři týdny po akutním, nereaktivním vzorku, a během fáze rekonvalescence. Vzorky odpovídající akutní fázi je třeba skladovat a testovat paralelně se vzorky odpovídajícími rekonvalescenci. Jedinci s akutní infekcí toxoplazmy nemusí v počátečních fázích infekce vykázat žádné zjistitelné množství IgG protilátek. Výsledky vzorků od pacientů s HIV, pacientů podstupujících imunosupresivní léčbu nebo pacientů s jinými poruchami 12 IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06)

vedoucími k imunosupresi, je nutné interpretovat s obezřetností. Tato metoda není určena pro použití se vzorky od novorozenců, vzorky pupečníkové krve a vzorky od pacientů před transplantací, nebo pro jiné tekutiny než sérum, jako jsou moč, sliny nebo plodová voda. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interferenci s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v IU/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření: 5,0 250 IU/ml. Standardizováno dle WHO 3rd IS pro Anti- Toxoplasma Serum, Human. Analytická citlivost: 5,0 IU/ml. Přesnost: Vzorky byly analyzovány dvojmo, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka "Přesnost".) Specificita: Specificita stanovení Toxoplazma kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 byla hodnocená pomocí testování 73 vzorků reaktivních na Mycoplasma pneumoniae, syfilis, virus neštovic (varicella-zoster), parvovirus B19, cytomegalovirus (CMV), virus Epstein-Barr, HSV 1 a virus spalniček. S těmito vzorky vykázaly testy stanovení Toxoplazma kvantitativní IgG na analyzátoru IMMULITE 2000 a stanovení Toxoplazma kvantitativní IgG na analyzátoru IMMULITE 99% shody (72/73). Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 539 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K určení vlivu alternativních typů vzorků byly stanoveny vzorky krve odebrané 15 dobrovolníkům do obyčejných, heparinizovaných, EDTA a do Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Do stejných objemů odpovídajících vzorků jsme přidali roztoky s různou koncentrací Toxoplazmy, abychom dostali hodnoty z celého koncentračního rozsahu tohoto testu. Vzorky jsme následně stanovili metodou Toxoplazma kvantitativní IgG na analyzátorech IMMULITE 2000. Výsledky byly následující: (Heparin) = 1,1 (Sérum) 0,81 IU/ml r = 0,985 (EDTA) = 1,0 (Sérum) + 1,4 IU/ml r = 0,949 (SST) = 1,1 (obyčejné zkumavky) 2,9 IU/ml r = 0,915 Střední hodnoty: 65 IU/ml (Sérum) 68 IU/ml (Heparin) 67 IU/ml (EDTA) 66 IU/ml (SST) Srovnání metody 1: Toto stanovení bylo porovnáno se stanovením Toxoplazma kvatitativní IgG na analyzátoru IMMULITE na 33 vzorcích (Koncentrační rozsah: přibližně 5 až 112 IU/ml. Viz graf Srovnání metody 1.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,0 (IML) + 2,0 IU/ml r = 0,994 Střední hodnoty: 30 IU/ml (IMMULITE 2000) 28 IU/ml (IMMULITE) IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06) 13

Srovnání metody 2: Toto stanovení bylo porovnáno se stanovením Toxoplazma kvantitativní IgG na analyzátoru IMMULITE na 40 vzorcích (Koncentrační rozsah: přibližně 5 až 162 IU/ml. Viz graf Srovnání metody 2.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,04 (IML) + 1,3 IU/ml r = 0,963 Střední hodnoty: 35 IU/ml (IMMULITE 2000) 33 IU/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση των IgG αντισωμάτων έναντι του ιού Toxoplasma gondii στον ανθρώπινο ορό, ως βοήθημα για την εκτίμηση του επιπέδου της ανοσίας έναντι του ιού Toxoplasma gondi. Αριθμός Καταλόγου: L2KTXP2 (200 αναλύσεις), L2KTXP6 (600 αναλύσεις) Κωδικός εξέτασης: TXP Χρώμα: Ανοιχτό Γκρί Περίληψη και Επεξήγηση Το Toxoplasma gondii είναι ένα obligate ενδοκυτταρικό παράσιτο ικανό να μολύνει τα περισσότερα θηλαστικά, συμπεριλαμβανομένων και των ανθρώπων. Ο μικροοργανισμός μεταδίδεται από συνεχή κατανάλωση μαγειρεμένου κρέατος. Σε όλο τον κόσμο το ποσοστό του μολυσμένου πληθυσμού μπορεί να κυμαίνεται από 1 έως 90%, 7 ενώ στις Η.Π.Α. το ποσοστό των μολυσμένων ενηλίκων είναι μεταξύ 25 και 30%. 3 Παρόλο που η τοξοπλάσμωση εκδηλώνεται με πολλές μορφές, δεν έχει συνήθως εμφανή κλινικά συμπτώματα, και οι λανθάνουσες μολύνσεις επιμένουν για όλη την περίοδο της ζωής του ασθενούς. 2 Τα εμφανή κλινικά συμπτώματα ομοιάζουν με εκείνα της μονοπυρήνωσης, με λεμφαδενοπάθεια, πυρετό, πονοκέφαλο, αδιαθεσία και μερικές φορές πνευμονία και μυοκαρδίτιδα. 6 Όπως και με άλλες λανθάνουσες μολύνσεις, η οξεία μόλυνση από τοξόπλασμα μπορεί να αποτελεί σοβαρή απειλή για τα ανοσοεκτεθειμένα άτομα και τα νεογέννητα τα οποία απαιτούν το εμβόλιο στη μήτρα. Οι ανοσοκατεσταλμένοι ασθενείς μπορεί να αναπτύξουν εγκεφαλίτιδα, μυοκαρδίτιδα ή πνευμονίτιδα. 3 Οι συγγενείς μολύνσεις είναι συνήθως αποτέλεσμα μιας οξείας ασυμπτωματικής μητρικής μόλυνσης. Αυτή μόλυνση μπορεί να προκαλέσει πρόωρη κύηση αποβολή ή γένεση νεκρού βρέφους. 4,6 Τα νεογνά μπορεί να εμφανίσουν χωριορετινίτιδα, υδροκεφαλία, μικροκεφαλία, εγκεφαλική ασβεστοποίηση και ψυχοκινητικές καθυστερήσεις. 1 Η πλειονότητα των συγγενών μολυσμένων παιδιών θα εμφανίσουν συμπτώματα αργότερα στη ζωή τους. 4 Η διαχείριση της τοξοπλάσμωσης απαιτεί ορολογικό έλεγχο των μολυσμένων ατόμων, 3 καθώς ο μικροοργανισμός δεν είναι ακόμα έτοιμος για καλλιέργεια. Η ποσοτική εξέταση για την παρουσία toxoplasma IgG αντισωμάτων μπορεί να χρησιμεύσει για να αποφασίσουμε αν μια μόλυνση είναι παλιότερη και να αποδείξουμε την επανενεργοποίησή της. Ακριβείς διαγνωστικές πληροφορίες είναι σημαντικές ειδικά κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, καθώς η θεραπεία με spiramycin μπορεί να μειώσει τον κίνδυνο για τα έμβρυο. 5 Αρχή της μεθόδου Η IMMULITE 2000 ποσοτική IgG Τοξοπλάσματος είναι μία ξηρής φάσης, σημασμένη με ένζυμο διαδοχική χημειοφωταυγής ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με απενεργοποιημένο, μερικώς κεκαθαρμένο αντιγόνο Toxoplasma gondii (RH αλυσίδα παρασίτων (tachyzoites) από περιτόναιο ποντικού). Η υγρή φάση αποτελείται από δύο αντιδραστήρια: 1) υπόστρωμα 14 IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06)

πρωτεϊνικού ρυθμιστικού διαλύματος και 2) αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε μονοκλωνικό αντί-ανθρώπινο IgG αντίσωμα ποντικού. Στον πρώτο κύκλο, το προαραιωμένο δείγμα ασθενούς (1 προς 20) και το πρωτεϊνικό ρυθμιστικό διάλυμα επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, τα αντισώματα IgG έναντι του Toxoplasma gondii στο δείγμα του ασθενούς προσδένονται στο απενεργοποιημένο αντιγόνο Toxoplasma gondii στο σφαιρίδιο. Το μη προσδεδεμένο δείγμα στη συνέχεια απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Στο δεύτερο κύκλο, το συνδεδεμένο ένζυμο σε μονοκλωνικό αντί-ανθρώπινο αντίσωμα IgG ποντικού προστίθεται στον αρχικό σωλήνα αντίδρασης για μία επιπλέον 30-λεπτη επώαση.το συνδεδεμένο ένζυμο σε μονοκλωνικό αντίανθρώπινο αντίσωμα IgG ποντικού προσδένεται στην ακινητοποιημένη IgG για το σχηματισμό του σάντουϊτς συμπλέγματος αντισωμάτων. Το μη προσδεδεμένο ένζυμο απομακρύνεται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στον αρχικό σωλήνα αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Επωαστικοί κύκλοι: 2 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά. Συλλογή δείγματος Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Τα δείγματα που είναι θολά ή έχουν συγκεκριμένο υλικό πρέπει να καθαρίζονται με φυγοκέντρηση μικρής ταχύτητας. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορός. Μετά την αυτόματη προαραίωση, χρησιμοποιούνται 10 µl για την ανοσοανάλυση. Αυτόματος Συντελεστής Προαραίωσης: 20. Φύλαξη: 3 μέρες στους 2 8 C, ή 6 μήνες στους 20 C. 12 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για διαγνωστική εργαστηριακή χρήση Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά. Αζίδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl,σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. IMMULITE 2000 Toxoplasma Quantitative IgG (PIEL2KTXP-5 {22}, 2009-10-06) 15