Syphilis Screen. For use on IMMULITE 2000 systems

Syphilis Screen For use on 2000 systems

2000 Syphilis Screen English Intended Use: The 2000 Syphilis Screen test is a treponemal testing procedure for the qualitative detection of antibodies to Treponema pallidum in human serum or heparinized plasma on the 2000 Systems Analyzers as an aid in the diagnosis of syphilis. Catalog Numbers: L2KSY2 (200 tests), L2KSY6 (600 tests) Test Code: SYP Color: Dark Pink Summary and Explanation Syphilis is primarily transmitted via sexual contact, but can also be transmitted from mother to fetus. It is caused by the spirochete T. pallidum and has never been successfully cultured in artificial media. Syphilis infections are classified into early (infectious) and late (noninfectious) stages. Early syphilis may be further divided into primary, secondary, and early latent syphilis. The signs and symptoms of syphilis are numerous; before the advent of serological testing, precise diagnosis was very difficult. In fact, the disease was often confused with other diseases, particularly in its tertiary stage. If not treated, syphilis can cause serious effects such as damage to the heart, aorta, brain, eyes, and bones. In some cases these effects can be fatal. Therefore, the serological diagnosis of syphilis is very important. The serologic diagnosis of syphilis is classified into two groups: nontreponemal tests and treponemal tests. Nontreponemal tests (venereal disease research laboratory [VDRL], rapid plasma reagin [RPR]) detect antibodies formed by the host in response to lipid material released from damaged host cells as well as to lipoprotein-like material released from the spirochete. Treponemal tests detect specific treponemal antibodies, and the techniques used include agglutination (T. pallidum hemagglutination [TPHA], T. pallidum particle agglutination [TPPA]), immunoassay (enzyme immunoassay [EIA] or chemiluminescent immunoassay [CLIA], immunofluorescence (fluorescent treponemal antibody absorption [FTA-ABS]), and immunoblotting. Nontreponemal tests have poor sensitivity and specificity, and recombinant antigenbased treponemal tests have higher sensitivity and specificity than native antigen-based treponemal tests. 1,2,3 The 2000 Syphilis Screen assay uses a recombinant treponemal antigen and is a fully automated chemiluminescent immunoassay. Principle of the Procedure 2000 Syphilis Screen assay is a solid phase, one-step chemiluminescent enzyme immunoassay. The solid phase (bead) is coated with purified recombinant T. pallidum 17 (Tp17) antigen. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to purified recombinant T. pallidum 17 (Tp17) antigen. Patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, total antibody to T. pallidum in the sample forms the antigen sandwich complex with purified recombinant T. pallidum 17 (Tp17) antigen on the bead and enzyme conjugated purified recombinant T. pallidum 17 (Tp17) antigen in the reagent. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 1 30 minutes. Time to first result: 35 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. 2 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01)

Samples that are cloudy or have particulate material should be clarified by low-speed centrifugation. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. 2000 Syphilis Screen has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 100 µl serum or heparinized plasma. Storage: 3 days at 2 8 C; for long-term storage, keep specimens at 20 C. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. EDTA plasma should not be used as a sample type. Syphilis Positive Control (LSYC2) contains antibodies against T. pallidum. Syphilis Screen Adjustor (LSYR) contains antibodies against T. pallidum. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Syphilis Screen Bead Pack (L2SY12) With barcode. 200 beads, coated with purified recombinant T. pallidum 17 (Tp17) antigen. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KSY2: 1 pack. L2KSY6: 3 packs. Syphilis Screen Reagent Wedge (L2SYA2) With barcode. 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to purified recombinant T. pallidum 17 (Tp17) antigen. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KSY2: 1 wedge. L2KSY6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Syphilis Screen Adjustor (LSYR) One vial of lyophilized human serum with antibodies reactive to T. pallidum, with preservative. Reconstitute with 4.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 28 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KSY2: 1 vial. L2KSY6: 2 vials. Syphilis Screen Controls (LSYC1, LSYC2) LSYC1: (Negative Control): One vial of lyophilized human serum nonreactive to T. pallidum, with preservative. LSYC2: (Postive Control): One vial of lyophilized human serum with antibodies reactive to T. pallidum, with preservative. Reconstitute each vial with 6.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 28 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KSY2: 1 set. L2KSY6: 2 sets. 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01) 3

Before running adjustors or controls, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes, so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) LSYCM: Bi-level Syphilis Screen Control Module Also Required: Distilled or deionized water; test tubes. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the 2000 Systems Operator's Manual. See the 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control: To monitor system performance and chart trends, as a minimum requirement, quality control materials with at least two levels (low and high) of T. pallidum should be assayed on each day that samples are analyzed. Quality control samples should also be assayed when performing adjustment. Treat all quality control samples the same as patient samples. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme. Calculation of Cutoff and S/CO Ratio: The Master Cutoff of the assay was determined from representative samples to achieve optimal sensitivity and specificity for the assay. The cutoff is set equal to the average counts per second (mean cps) of the Adjustor (from the most recent adjustment) multiplied by Curve Parameter 1. (See the "Low Adjustor CPS" and "Curve Parameter 1" fields in the 2000 Kit Information screen, which can be accessed from the menu via Data Entry: Kit Entry.) Calculation of a signal/cutoff (s/co) ratio is done by using the following formula: S/CO Ratio = Sample or Control cps Mean Adjustor cps P1 Calculation and reporting of qualitative results (reactive / nonreactive / indeterminate) and signal/cutoff (s/co) ratio are handled automatically by the 2000. The result for a sample is reported as Indeterminate if the counts per second for that sample fall within 10% of the cutoff. The result is reported as Reactive if the sample's counts are above the indeterminate range, and Nonreactive if below this range. Interpretation of Results The cutoff of the 2000 Syphilis Screen assay was determined with reactive and nonreactive patient samples by ROC analysis, with a balanced consideration of sensitivity and specificity. A result of "Reactive" (ratio of 1.1) indicates that the patient sample is reactive and that T. pallidum antibodies were detected in the sample. A result of "Nonreactive" (ratio of < 0.9) indicates that the patient sample is nonreactive and that T. pallidum antibodies were not detected in the sample. Any result of "Indeterminate" (ratio 0.9 and < 1.1) should be retested. Samples which are reactive at the second test should be considered reactive. Samples which are non-reactive at the second test should be considered nonreactive. A second sample should be collected and tested no less than one week later when the result is repeatedly indeterminate. 4 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01)

The detection of T. pallidum total antibodies may indicate recent, past or successfully treated infections. This test cannot distinguish between treated and untreated infections. The magnitude of the measured results (cps) above the Cutoff is not indicative of the total amount of antibodies detected. The results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the 2000 Syphilis Screen chemiluminescent EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Expected Values Serum samples from 157 apparently healthy male and female volunteers were processed by the 2000 Syphilis Screen assay. These samples yielded a mean value of 0.12, a median value of 0.09 and a 95 th percentile of 1.12. Results are expressed as a signal-to-cutoff ratio. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations The 2000 Syphilis Screen assay allows testing for the presence of T. pallidum total antibodies. It detects both recent and past infections, but it cannot distinguish between different antibody classes. Detection of T. pallidum total antibodies may indicate recent, past or successfully treated syphilis. This test, therefore, cannot discriminate between active and treated disease and, as a consequence, may not be used for determining response to therapy. Test results are reported qualitatively as reactive or nonreactive for the presence of T. pallidum total antibodies. However, diagnosis of syphilis should not be established on the basis of a single test result, but should be determined in conjunction with clinical findings and other diagnostic procedures, as well as in association with medical judgment. Therefore a precise diagnosis should take into consideration clinical history, symptomatology and serological testing. Assay interference due to circulating antibodies against hepatitis A virus, yaws, pinta and leptospirosis has not been evaluated. The user is responsible for establishing cross-reactivity performance with these infectious agents. The results in HIV patients, in patients undergoing immunosuppressive therapy, or in patients with other disorders leading to immunosuppression, should be interpreted with caution. Heterophilic antibodies in human serum and plasma can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay s performance. Results are expressed as a signal-tocutoff ratio. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) High-dose Hook Effect: Whenever samples containing extremely high concentrations are tested in a one-step sandwich assay, the high-dose hook effect can mimic concentrations lower than expected. Data show that the high-dose hook effect did not extend down to the cutoff level of the assay on six high reactive samples, that were serially diluted and tested, indicating no sample misclassification. Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01) 5

Reproducibility: Reproducibility was conducted at 3 external clinical laboratories (2 in the U.S., 1 in the Netherlands) and included 2 different kit lots. Five samples targeting the assay range were prepared from pooled serum at Siemens Healthcare Diagnostics. The same panel was aliquotted, frozen, and provided for assay at all 3 testing sites using at least four replicates per run, 2 runs per day across 5 different days. (See Reproducibility tables.) Specificity: A study was conducted to evaluate whether the detection of T. pallidum antibody is affected by closely related microorganisms or other substances. Sera containing specific antibodies were tested by the 2000 Syphilis Screen assay with the following results (# reactive/# tested): CMV IgG (1/10), Epstein-Barr virus (1/10), ANA (0/10), HSV IgG (1/10), rubella IgG (1/10), toxoplasma IgG (0/10), rheumatoid factor (0/10), Borrelia burgdorferi IgG, US strain (2/10), Borrelia burgdorferi IgG,(European strain (0/10), Borrelia burgdorferi IgM, European strain (0/10), anti-hbs (1/10), HCV (5/20) and HBsAg (0/10). Twelve out of 140 samples yielded reactive results. These 12 samples were further tested by a commercially available blot assay and yielded results positive for T. pallidum antibody. Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 593 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from volunteers into plain, heparinized, and Becton Dickinson SST plastic vacutainer tubes. Forty-eight out of 88 samples were spiked with various concentrations of T. pallidum and assayed by the 2000 Syphilis Screen procedure. Results are expressed as a signal-to-cutoff ratio. (Heparin) = 1.06 (Serum) + 0.172 r = 0.99 n = 88 (SST) = 0.91 (Plain Tubes) + 0.105 r = 1.00 n = 88 Mean Ratios (n = 88): 3.29 (Serum) 3.65 (Heparin) 3.09 (SST) The use of heparinized plasma may increase ratio values at or near the cutoff level. EDTA plasma is not recommended as a sample type. Method Comparison: The assay was compared to a commercially available treponema assay on 280 samples. 2000 Predicate Assay Reactive Nonreactive Positive 54 2 Negative 0 224 Positive Agreement: 54/56 = 96.4% 95% Confidence Interval: 87.7 99.6% Negative Agreement: 224/224 = 100% Overall Agreement: 278/280 = 99.3% 95% Confidence Interval: 97.4 99.9% Clinical Performance: Three clinical sites (2 U.S. and 1 Netherland) recruited a total of 1,286 participants to compare performance of the 2000 Syphilis Screen to a commercially available treponema assay. Serum samples were analyzed in parallel with the predicate and test device (split approximately equally between 2 different test lots). Study participants may have qualified for more than one clinically important category (e.g., routine screening, medically confirmed syphilis patients, HIV-positive patients). Conservative estimates of overall agreement are presented that include indeterminate and equivocal results in the denominator. Test results obtained from both the 2000 and predicate assays for all study participants (n = 1,286) are presented below. The test assay demonstrated 99% positive agreement, negative agreement, and overall agreement with the predicate assay. 6 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01)

Total Study Population Positive Agreement: 457/460 = 99.3% (95% CI = 98.1% 99.9%) Negative Agreement: 814/825 = 98.7% (95% CI = 97.6% 99.3%) Overall Agreement: 1271/1286 = 98.8% (95% CI = 98.1% 99.3%) Medically diagnosed syphilis samples consisted of 281 patients (100 from the Netherlands and 181 from the U.S.) at various stages of disease (n = 78 (27.8%) primary infection; n = 24 (8.5%) secondary infection; n = 47 (16.7%) latent infection; n = 132 (47.0%) unknown stage of infection). Concordance of test results in this population showed 99% positive agreement, 75% negative agreement, and 98% overall agreement between the 2000 and predicate assays. Medically Diagnosed Syphilis Patients Predicate Assay 2000 Positive Negative Equivocal Total Reactive 270 2 1 273 Negative Agreement: 6/8 = 75% (95% CI = 34.9% 96.8%) Overall Agreement: 276/281 = 98.2% (95% CI = 95.9% 99.4%) 924 samples were sent for routine syphilis testing. (243 from the Netherlands and 681 from the U.S.). Concordance of test results in this population showed 99% positive agreement, negative agreement, and overall agreement between the 2000 and predicate assays. Samples Sent for Routine Syphilis Testing Negative Agreement: 558/563 = 99.1% (95% CI = 97.9% 99.7%) Overall Agreement: 917/924 = 99.2% (95% CI = 98.4% 99.7%) 420 patients with HIV infection participated in the study (94 from the Netherlands and 326 from the U.S.). Concordance of test results in this population showed 99% positive agreement, 96% negative agreement, and 98% overall agreement between the 2000 and predicate assays. Predicate Assay 2000 Positive Negative Equivocal Total Reactive 457 10 1 468 Nonreactive 0 814 0 814 Indeterminate 3 1 0 4 Total 460 825 1 1,286 Nonreactive 0 6 0 6 Indeterminate 2 0 0 2 Total 272 8 1 281 Positive Agreement: 270/272 = 99.3% (95% CI = 97.4% 99.9%) Predicate Assay 2000 Positive Negative Equivocal Total Reactive 359 5 0 364 Nonreactive 0 558 0 558 Indeterminate 2 0 0 2 Total 361 563 0 924 Positive Agreement: 359/361 = 99.4% (95% CI = 98.0% 99.9%) HIV-Positive Patients Predicate Assay 2000 Positive Negative Equivocal Total Reactive 260 7 0 267 Nonreactive 0 152 0 152 Indeterminate 1 0 0 1 Total 261 159 0 420 Positive Agreement: 260/261 = 99.6% (95% CI = 97.9% 100%) Negative Agreement: 152/159 = 95.6% (95% CI = 91.1% 98.2%) Overall Agreement: 412/420 = 98.1% (95% CI = 96.3% 99.2%) 306 specimens independently testing positive on treponemal and nontreponemal assays showed 100% positive agreement (302/302) between the 2000 and predicate assays. 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01) 7

Two samples tested negative on both the 2000 and predicate assays, and two samples tested positive on the 2000 assay and negative on the predicate assay (50% negative agreement). Overall agreement was 99% (304/306; 95% Confidence Interval (CI) = 98% 100%). References 1) Zrein M, Maure I, Boursier F, Soufflet L. recombinant antigen-based enzyme immunoassay for screening of Treponema pallidum antibodies in blood bank routine. J Clin Microbol. 1995 Mar; 33(3) 525-7. 2) Young H, Moyes A, Seagar L, McMillan A. Novel recombinant-antigen enzyme immunoassay for serological diagnosis of syphilis. J Clin Microbol. 1998 April; 36(4)-913-7. 3) Rodriguez I, Alvarez EL, Fernandex C, Miranda A. Comparison of a recombinant-antigen enzme immunoassay with Treponema pallidum hemagglutination test for serological confirmation of syphilis. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2002 Apr; 97(3):347-9. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ratio) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 0.09 0.004 4.4% 0.004 4.4% 2 0.11 0.006 5.5% 0.006 5.5% 3 0.82 0.051 6.2% 0.055 6.7% 4 1.01 0.065 6.4% 0.071 7.0% 5 1.03 0.063 6.1% 0.075 7.3% 6 1.51 0.084 5.6% 0.109 7.2% 7 2.40 0.138 5.8% 0.159 6.6% 8 6.39 0.488 7.6% 0.493 7.7% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Reproducibility (ratio) Lot 1: 3 Sites Sample 1 Reps 2 Mean 3 Within Day SD 4* Within Day %CV 5 Between Site SD 6** Between Site %CV 7 NC 8 180 0.11 0.01 4.5 0.01 8.9 PC 9 180 2.37 0.15 6.3 0.17 7.3 Low 10 Neg 120 0.11 0.01 10.4 0.02 22.6 High 11 Neg 120 0.78 0.04 5.1 0.06 7.7 Cut-off 12 120 0.98 0.06 6.1 0.07 7.1 Low 13 Pos 120 1.43 0.10 6.6 0.14 9.8 High 14 Pos 120 6.13 0.33 5.4 0.53 8.7 Reproducibility (ratio) Lot 2: 3 Sites Sample 1 Reps 2 Mean 3 Within Day SD 4* Within Day %CV 5 Between Site SD 6** Between Site %CV 7 NC 8 180 0.06 0.00 N/A 0.01 10.9 PC 9 180 2.63 0.15 5.81 0.16 6.15 Low 10 Neg 120 0.07 0.01 14.9 0.02 29.7 High 11 Neg 120 0.71 0.04 5.2 0.05 6.47 Cut-off 12 120 0.91 0.05 5.96 0.07 7.51 Low 13 Pos 120 1.35 0.09 6.91 0.12 9.07 High 14 Pos 120 5.50 0.29 5.20 0.49 8.91 * Multi-site within-run variation (pooled across sites) ** Multi-site total variation (within-run + days + sites) Česky. 1 Vzorek, 2 Replikáty, 3 Střední hodnota, 4 SD v jednom dni (*odchylka měření na více místech v rámci stanovení (výsledky z několika míst)), 5 %CV v jednom dni, 6 SD mezi různými 8 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01)

místy ( ** celková odchylka měření na více místech (v rámci stanovení + dny + místa)), 7 %CV mezi různými místy, 8 Negativní kontrola, 9 Pozitivní kontrola, 10 Mírně negativní, 11 Silně negativní, 12 Cut-off, 13 Mírně pozitivní, 14 Silně pozitivní. Ελληνικά. 1 Δείγμα, 2 Επαναλήψεις, 3 Μέσος όρος 4 SD κατά την ίδια ημέρα (*Διακύμανση κατά τον ίδιο κύκλο μέτρησης σε πολλές θέσεις (συγκεντρωτικά μεταξύ θέσεων)), 5 Κατά την ίδια ημέρα %CV, 6 BΜεταξύ θέσεων SD ( ** Συνολική διακύμανση σε πολλές θέσεις (κατά τον ίδιο κύκλο μέτρησης + ημέρες + θέσεις)), 7 Μεταξύ θέσεων %CV, 8 Αρνητικός ορός ελέγχου, 9 Θετικός ορός ελέγχου, 10 Χαμηλό αρνητικό, 11 Ψηλό αρνητικό, 12 Οριο αποκοπής, 13 Χαμηλό θετικό, 14 Ψηλό θετικό. Polski. 1 Próbka, 2 Powtórzenia, 3 Średnia, 4 SD dla dnia (*Zmienność pomiędzy ośrodkami w danej serii (Uwzględnia wszystkie ośrodki)), 5 % CV (współczynnik zmienności) dla dnia, 6 SD pomiędzy ośrodkami (**Całkowita zmienność uwzględniająca wszystkie ośrodki (dla poszczególnych serii + dla dni + dla ośrodków), 7 %CV pomiędzy ośrodkami, 8 Kontrola ujemna, 9 Kontrola dodatnia, 10 Nisko ujemna, 11 Wysoko ujemna, 12 Wartość decyzyjna, 13 Nisko dodatnia, 14 Wysoko dodatnia. Česky 2000 Syfilis screening Použití: Test 2000 Syfilis screening je treponemová měřící metoda pro kvalitativní stanovení protilátek proti Treponema pallidum v lidském séru nebo heparinizované plazmě na analyzátoru 2000 jako pomůcky při diagnostice syfilis. Katalogová čísla: L2KSY2 (200 testů), L2KSY6 (600 testů) Kód metody: SYP Barva: Tmavě Růžová Shrnutí a vysvětlení Syfilis se primárně přenáší pohlavním stykem, možný je ovšem také přenos z matky na plod. Původcem je spirocheta T. pallidum, kterou se nikdy se nepodařilo úspěšně vypěstovat v umělé půdě. Stádia syfilis se označují jako časné (infekční) a pozdní (neinfekční). Časná syfilis se dále dělí na primární, sekundární a časnou latentní syfilis. Existuje několik znaků a symptomů syfilis; před zavedením sérologického testování byla přesná diagnostika velmi obtížná. Ve skutečnosti se tato choroba často zaměňovala s jinými chorobami, zvláště v terciárním stádiu. Neléčená syfilis může mít vážné následky, jako např. poškození srdce, aorty, mozku, očí a kostí. V některých případech mohou mít tyto následky i smrtící účinek. Proto je sérologická diagnostika syfilis velmi důležitá. Sérologická diagnostika syfilis se dělí na dvě skupiny: netreponemální testy a treponemální testy. Nentreponemální testy (venereal disease research laboratory) [VDRL], rapid plasma reagin [RPR]) detekují protilátky vytvořené hostitelem v reakci na lipidy uvolněné z poškozených hostitelských buněk a na látku podobnou lipoproteinu uvolněnou ze spirochety. Treponemální testy detekují specifické treponemální protilátky a používané metody zahrnují aglutinaci (T. pallidum hemaglutinace [TPHA], T. pallidum aglutinace částic [TPPA]), imunochemické stanovení (enzymové imunochemické stanovení [EIA] nebo chemiluminiscenční imunochemické stanovení [CLIA], imunofluorescenční metody (fluorescent treponemal antibody absorption [FTA-ABS]) a imunobloty. Nentreponemální testy mají nízkou senzitivitu a specificitu. Treponemální testy na bázi rekombinantního antigenu mají vyšší senzitivitu a specificitu než treponemální testy na bázi nativního antigenu. 1,2,3 Stanovení 2000 Syfilis Screening používá rekombinantní treponemální antigen a je plně automatizovaným chemiluminiscenčním stanovením. Princip stanovení Stanovení 2000 Syfilis screening je jednokrokové chemiluminiscenční enzymově zesílené imunochemické stanovení v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena purifikovaným rekombinantním antigenem T. pallidum 17 (Tp17). Kapalná fáze se skládá z alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s purifikovaným rekombinantním antigenem T. pallidum 17 (Tp17). Vzorek pacienta se 30 minut inkubuje spolu s reagencií a potaženou kuličkou. Během této doby vytvoří celkové protilátky 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01) 9

proti T. pallidum ve vzorku sendvičový komplex s purifikovaným rekombinantním antigenem T. pallidum 17 (Tp17) na kuličce a purifikovaným rekombinantním antigenem T. pallidum 17 (Tp17) v reagencii. Nenavázaný vzorek a enzymový konjugát se poté odstraní centrifugačním promytím. Nakonec se do reakční zkumavky s kuličkou přidá chemiluminiscenční substrát a je generován signál přímo úměrný navázanému enzymu. Inkubační cykly: 1 30 minut. Čas do prvního výsledku: 35 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Zakalené vzorky nebo vzorky s částicemi je třeba upravit nízkootáčkovou centrifugací. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení 2000 Syfilis screening nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 100 µl séra nebo heparinizované plazmy. Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C, při delším skladování uchovávejte vzorek při 20 C. Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfylis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. EDTA plazma se jako vzorek nedoporučuje. Pozitivní kontrola syfilis (LSYC2) obsahuje protilátky proti T. pallidum. Adjustor Syfilis screening (LSYR) obsahuje protilátky proti T. pallidum. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky uvnitř krabice. Syfilis screening zásobník s kuličkami (L2SY12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených purifikovaným rekombinantním antigenem T. pallidum 17 (Tp17). Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KSY2: 1 balení. L2KSY6: 3 balení. Syfilis screening reagencie (L2SYA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s purifikovaným rekombinantním antigenem T. pallidum 17 10 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01)

(Tp17). Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KSY2: 1 nádobka. L2KSY6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Syfilis screening kalibrátor (LSYR) Jedna ampulka lyofilizovaného lidského séra s protilátkami proti T. pallidum, s konzervačním prostředkem. Rekonstituujte 4,0 ml destilované nebo deionizované vody. Promíchejte jemným kroužením nebo překlápěním do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Stabilní při 2 8 C 28 dní po rozpuštění, nebo 6 měsíců při 20 C rozdělené na alikvotní části. L2KSY2: 1 ampulka. L2KSY6: 2 ampulky. Syfilis screening kontroly (LSYC1, LSYC2) LSYC1: (negativní kontrola): Jedna ampulka lyofilizovaného lidského séra nereaktivního vůči T. pallidum, s konzervačním prostředkem. LSYC2: (pozitivní kontrola): Jedna ampulka lyofilizovaného lidského séra s protilátkami proti T. pallidum, s konzervačním prostředkem. Rekonstituujte každou ampulku 6,0 ml destilované nebo deionizované vody. Promíchejte jemným kroužením nebo překlápěním do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Stabilní při 2 8 C 28 dní po rozpuštění, nebo 6 měsíců při 20 C rozdělené na alikvotní části. L2KSY2: 1 sada. L2KSY6: 2 sady. Před adjustací a měřením kontrol nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminescenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) LSYCM: Dvojúrovňový kontrolní modul Syfilis screening Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům 2000. V manuálu k analyzátorům 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: K monitorování soupravy a trendů, jako minimální požadavek kontroly kvality, se požaduje měření kontrolních vzorků na minimálně dvou hladinách koncentrace (nízké a vysoké) T. pallidum každý den, kdy se toto stanovení ve vzorku provádí. Měření kontrolních vzorků se vyžaduje také vždy po adjustaci. S kontrolními vzorky nakládejte jako se vzorky pacientů. Siemens Healthcare Diagnostics doporučuje použít komerčně dostupné materiály ke kontrole kvality s minimálně dvěma hladinami koncentrace (nízkou a vysokou). Výsledek kontroly je uspokojivý, pokud jsou výsledky v mezích stanovených pro daný kontrolní materiál nebo v mezích stanovených interním předpisem dané laboratoře. Výpočet hodnoty cutoff a poměru S/CO: Kalibrační hodnota cutoff stanovení byla určena z reprezentativních vzorků tak, aby bylo dosaženo optimální senzitivity a specificity stanovení. Hodnota cutoff je rovna průměrné hodnotě cps kalibrátoru (z poslední adjustace) vynásobené parametrem kalibrační křivky 1 (Curve Parameter 1). (Viz políčka Low Adjustor CPS a Curve Parameter 1 na obrazovce Kit information přístroje 2000. Přístup je možný z nabídky přes KITS.) K výpočtu poměru signál / cutoff (s/co) je použita následující rovnice: Poměr S/CO = CPS vzorku nebo kontroly Průměr CPS kalibrátoru P1 Výpočet a hlášení kvalitativních výsledků (reaktivní / nereaktivní / neurčitý) a 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01) 11

poměru signál/cutoff (s/co) provádí analyzátor 2000 automaticky. Výsledek pro vzorek je vyhodnocen jako Neurčitý (Indeterminate), pokud je CPS vzorku v rámci intervalu 10% hodnoty cutoff. Výsledek je vyhodnocen jako Reaktivní (Reactive), je-li hodnota CPS nad rozmezím definovaným jako neurčité, a jako Nereaktivní (Nonreactive) pro hodnoty pod tímto rozmezím. Vyhodnocení výsledků Hondota cutoff stanovení 2000 Syfilis screening byla stanovena pomocí reaktivních a nereaktivních vzorků pacientů analýzou ROC s ohledem na optimální vyvážení senzitivity a specificity. Výsledek "Reaktivní" (poměr 1,1) znamená, že vzorek pacienta je reaktivní a byly v něm detekovány protilátky proti T. pallidum. Výsledek "Nereaktivní" (poměr < 0,9) znamená, že vzorek pacienta je nereaktivní a nebyly v něm detekovány protilátky proti T. pallidum. Všechny vzorky označené jako "Neurčitý (Indeterminate)" (poměr 0,9 a < 1,1) je třeba znovu analyzovat. Pokud je vzorek reaktivní při druhém měření, považuje se za reaktivní. Vzorek, který je při druhém měření nereaktivní, se považuje za nereaktivní. Pokud je výsledek opakovaně neurčitý, je třeba do týdne odebrat a změřit další vzorek. Zjištění přítomnosti celkových protilátek proti T. pallidum může znamenat nedávnou, minulou nebo úspěšně léčenou infekci. Tento test nerozlišuje mezi léčenou a neléčenou infekcí. Velikost naměřených výsledků (CPS), které jsou pod hodnotou cutoff, neudává celkové množství zjištěných protilátek. Výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři, by měl obsahovat sdělení: Následující výsledky byly získány prostřednictvím chemiluminiscenčního stanovení 2000 Syfilis Screen. Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat." Očekávané hodnoty Vzorky séra od 157 zjevně zdravých dobrovolníků a dobrovolnic byly analyzovány pomocí stanovení 2000 Syfilis screening. Střední hodnota výsledků byla 0,12, hodnota mediánu 0,09 a 95. percentil 1,12. Výsledky jsou vyjádřeny poměrem signál/cutoff. Tyto limity považujte pouze za doporučené. Každá laboratoř by si měla stanovit svá vlastní referenční rozmezí. Omezení Stanovení 2000 Syfilis screening umožňuje testování přítomnosti celkových protilátek proti T. pallidum. Detekuje jak současnou tak minulé infekce, nedokáže však rozlišit různé třídy protilátek. Detekce celkových protilátek proti T. pallidum může indikovat nedávnou, minulou nebo úspěšně léčenou syfilis. Tento test tedy neposkytuje rozlišení mezi aktivní a léčenou chorobou a proto se nesmí používat pro zjišťování odezvy na terapii. Výsledek testu se vyhodnocuje jako reaktivní nebo nereaktivní z hlediska přítomnosti celkových protilátek proti T. pallidum. Diagnostika syfilis by se ovšem neměla stanovovat pouze na základě výsledku jednoho testu, je nutné vzít také v úvahu klinický nález a výsledky jiných diagnostických metod spolu s úsudkem lékaře. Přesná diagnostika musí být tedy založena na klinické historii, symptomech a sérologickém testování. Interference s cirkulujícími protilátkami proti viru hepatitidy A, framboesií, pintou a leptospirózou nebyla stanovena. Za určení zkřížené reaktivity vůči těmto infekčním agens odpovídá uživatel. Výsledky pacientů HIV pozitivních, pacientů podstupujících imunosupresivní léčbu nebo pacientů s jinými poruchami vedoucími k potlačení imunity by měly být posuzovány s obezřetností. Heterofilní protilátky v lidském séru/ plazmy můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all imunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně 12 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01)

vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají jako poměr signál / cutoff. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) High-dose hook efekt: Při jednokrokové sendvičové analýze vzorků s extrémně vysokými koncentracemi může dojít k naměření falešně nízkých výsledků v důsledku efektu high-dose hook. Studie ukázala, že hodnota cutoff nebyla ovlivněna efektem high-dose hook u šesti vysoce reaktivních vzorků, které byly sériově naředěny a analyzovány. Přesnost: Vzorky byly měřeny ve dvou opakováních během 20 dnů, dvě kola měření za den, celkově 40 kol měření a 80 opakování (viz tabulka Přesnost ). Reprodukovatelnost: Reprodukovatelnost byla stanovena ve 3 externích klinických laboratořích (2 v USA, 1 v Nizozemí) a zahrnovala 2 různé šarže soupravy. V laboratořích Siemens Healthcare Diagnostics bylo připraveno pět vzorků s koncentrací v měřícím rozsahu metody. Tento panel byl rozdělen na alikvoty, ty byly zmraženy a rozeslány k testování na 3 uvedená místa. Každé měření bylo provedeno ve čtyřech replikátech, 2 měření denně, po dobu 5 různých dnů. (viz tabulky Reprodukovatelnost.) Specificita: Byla provedena studie vyhodnocující, zda je detekce protilátek proti T. pallidum ovlivněna blízce příbuznými mikroorganizmy nebo jinými látkami. Metodou 2000 Syfilis screening byla testována séra obsahující specifické protilátky s následujícími výsledky (# reaktivních/# testovaných): CMV IgG (1/10), virus Epstein-Barr (1/10), ANA (0/10), HSV IgG (1/10), Rubella IgG (1/10), Toxoplasma IgG (0/10), revmatoidní faktor (0/10), Borrelia burgdorferi IgG, kmen US (2/10), Borrelia burgdorferi IgG, evropský kmen (0/10), Borrelia burgdorferi IgM, evropský kmen (0/10), protilátky proti HBs (1/10), HCV (5/20) a antigen HBs (0/10). Dvanáct ze 140 vzorků bylo reaktivních. Těchto 12 bylo dále testováno komerčně dostupnou metodou blot s výsledkem pozitivním na T. pallidum. Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 593 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: : K určení vlivu alternativních typů vzorků byla odebrána krev od dobrovolníků do obyčejných, heparinizovaných, a Becton Dickinson SST vacutainer umělohmotných zkumavek. Do 48 z 88 vzorků byl přidán T. pallidum o různé koncentraci a tyto vzorky byly analyzovány pomocí stanovení 2000 Syfilis screening. Výsledky jsou vyjádřeny poměrem signál / cutoff. (Heparin) = 1,06 (Sérum) + 0,172 r = 0,99 n = 88 (SST) = 0,91 (obyč.zkumavky) + 0,105 r = 1,00 n = 88 Střední hodnoty poměrů (n = 88): 3,29 (Sérum) 3,65 (Heparin) 3,09 (SST) Použití heparinizované plazmy může zvýšit hodnoty poměru na hladině cutoff nebo blízko ní. EDTA plazma se jako vzorek nedoporučuje. 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01) 13

Srovnání metod: Stanovení bylo porovnáno s komerčně dostupnou metodou pro stanovení treponemy na 280 vzorcích. 2000 Komerčně dostupná metoda Reaktivní Nereaktivní Pozitivní 54 2 Negativní 0 224 Pozitivní shoda: 54/56 = 96,4% 95% interval spolehlivosti: 87,7 99,6% Negativní shoda: 224/224 = 100% Celková shoda: 278/280 = 99,3% 95% interval spolehlivosti: 97,4 99,9% Klinický výzkum: Tři klinická pracoviště (2 v USA a 1 v Nizozemí) provedla vyšetření celkem 1 286 účastníků pro porovnání stanovení 2000 Syfilis screening s komerčně dostupnou metodou pro stanovení treponemy. Vzorky séra byly testovány paralelně uvedenou komerční metodou a stanovením na analyzátoru 2000 (rozděleno přibližně na polovinu mezi 2 různé šarže soupravy). Účastníky výzkumu je možné rozdělit do více než jedné z klinicky důležitých kategorií (např. rutinní screening, klinicky potvrzený syfilis, HIV pozitivní pacienti). Výsledkem jsou konzervativní odhady celkové shody, které ve jmenovateli zahrnují neurčité a nejednoznačné výsledky. Výsledky získané pomocí analyzátoru 2000 a komerčně dostupné metody pro všechny účastníky výzkumu (n = 1 286) jsou uvedeny níže. Testovaná metoda vykazovala 99% pozitivní shody, negativní shody a celkové shody s komerčně dostupnou metodou. Celková populace výzkumu Komerčně dostupná metoda 2000 Pozitivní Negativní Nejednoznačný Celkem Reaktivní 457 10 1 468 Nereaktivní 0 814 0 814 Neurčitý 3 1 0 4 Celkem 460 825 1 1 286 Pozitivní shoda: 457/460 = 99,3% (95% CI = 98,1% 99,9%) Negativní shoda: 814/825 = 98,7% (95% CI = 97,6% 99,3%) Celková shoda: 1271/1286 = 98,8% (95% CI = 98,1% 99,3%) Vzorky s klinickou diagnózou syfilis zahrnovaly 281 pacientů (100 z Nizozemí, 181 z USA) v různých fázích choroby (n = 78 (27,8%) primární infekce; n = 24 (8,5%) sekundární infekce; n = 47 (16,7%) latentní infekce; n = 132 (47,0%) neznámá fáze infekce). Porovnání výsledků v této populaci představovalo 99% pozitivní shody, 75% negativní shody a 98% celkové shody mezi analyzátorem 2000 a komerčně dostupnou metodou. Pacienti s klinickou diagnózou syfilis Komerčně dostupná metoda 2000 Pozitivní Negativní Nejednoznačný Celkem Reaktivní 270 2 1 273 Nereaktivní 0 6 0 6 Neurčitý 2 0 0 2 Celkem 272 8 1 281 Pozitivní shoda: 270/272 = 99,3% (95% CI = 97,4% 99,9%) Negativní shoda: 6/8 = 75% (95% CI = 34,9% 96,8%) Celková shoda: 276/281 = 98,2% (95% CI = 95,9% 99,4%) 924 vzorků bylo odesláno na rutinní stanovení syfilis. (243 z Nizozemí a 681 z USA). Porovnání výsledků v této populaci představovalo 99% pozitivní shody, negativní shody a celkové shody mezi analyzátorem 2000 a komerčně dostupnou metodou. Vzorky odeslané na rutinní stanovení syfilis 2000 Pozitivní Komerčně dostupná metoda Negativní Nejednoznačný Celkem Reaktivní 359 5 0 364 Nereaktivní 0 558 0 558 Neurčitý 2 0 0 2 Celkem 361 563 0 924 Pozitivní shoda: 359/361 = 99,4% 14 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01)

(95% CI = 98,0% 99,9%) Negativní shoda: 558/563 = 99,1% (95% CI = 97,9% 99,7%) Celková shoda: 917/924 = 99,2% (95% CI = 98,4% 99,7%) Výzkumu se zúčastnilo 420 patientů HIV pozitivních (94 z Nizozemí a 326 z USA). Porovnání výsledků v této populaci představovalo 99% pozitivní shody, 96% negativní shody a 98% celkové shody mezi analyzátorem 2000 a komerčně dostupnou metodou. HIV pozitivní pacienti Komerčně dostupná metoda 2000 Pozitivní Negativní Nejednoznačný Celkem Reaktivní 260 7 0 267 Nereaktivní 0 152 0 152 Neurčitý 1 0 0 1 Celkem 261 159 0 420 Pozitivní shoda: 260/261 = 99,6% (95% CI = 97,9% 100%) Negativní shoda: 152/159 = 95,6% (95% CI = 91,1% 98,2%) Celková shoda: 412/420 = 98,1% (95% CI = 96,3% 99,2%) 306 vzorků nezávisle testovaných pomocí treponemových a netreponemových stanovení vykázalo 100% pozitivní shody (302/302) mezi stanovením pomocí analyzátoru 2000 a komerčně dostupnou metodou. Dva vzorky byly stanoveny jako pozitivní na analyzátoru 2000 a negativní s použitím komerčně dostupné metody (50% negativní shody). Celková shoda byla 99% (304/306; 95% interval spolehlivosti (CI) = 98% 100%). Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά 2000 Έλεγχος Σύφιλης Ενδεδειγμένη χρήση: Η εξέταση 2000 Έλεγχος Σύφιλης είναι μία τρεπονηματική διαδικασία ελέγχου για τον ποιοτικό προσδιορισμό αντισωμάτων έναντι του Treponema pallidum στον ανθρώπινο ορό ή σε ηπαρινισμένο πλάσμα στα συστήματα ανάλυσης 2000 σαν ένα βοήθημα στη διάγνωση της σύφιλης. Αριθμοί καταλόγου: L2KSY2 (200 εξετάσεις), L2KSY6 (600 εξετάσεις) Κωδικός ανάλυσης: SYP Χρώμα: Σκούρο Ροζ Περίληψη και Επεξήγηση Η σύφιλη μεταδίδεται κυρίως μέσω της σεξουαλικής επαφής, αλλά επίσης μπορεί να μεταδοθεί από τη μητέρα στο έμβρυο. Προκαλείται από τη σπειροχαίτη T. pallidum και ποτέ δεν καλλιεργήθηκε επιτυχώς σε τεχνητά μέσα. Οι λοιμώξεις σύφιλης κατηγοριοποιούνται σε πρώιμα (μεταδοτικά) και τελικά (μη μεταδοτικά) στάδια. Η πρώιμη σύφιλη μπορεί να διακριθεί περαιτέρω σε πρωτογενή, δευτερογενή και πρώιμη λανθάνουσα σύφιλη. Τα σημάδια και τα συμπτώματα της σύφιλης είναι πολυάριθμα και πριν την έλευση του ορολογικού ελέγχου η ακριβής διάγνωση ήταν πολύ δύσκολη. Συγκεκριμένα, η νόσος συχνά συγχέεται με άλλες νόσους, ιδιαίτερα στο τριτογενές της στάδιο. Εάν δεν αντιμετωπιστεί, η σύφιλη μπορεί να έχει σοβαρές επιπτώσεις όπως βλάβη στην καρδιά, στην αορτή, στον εγκέφαλο, στα μάτια και στα οστά. Σε μερικές περιπτώσεις αυτές οι επιπτώσεις μπορεί να είναι θανατηφόρες. Για αυτό, η ορολογική διάγνωση της σύφιλης είναι πολύ σημαντική. Η ορολογική διάγνωση της σύφιλης χωρίζεται σε δύο ομάδες: μη τρεπονηματικές δοκιμασίες και τρεπονηματικές δοκιμασίες. Οι μη τρεπονηματικές δοκιμασίες (venereal disease research laboratory [VDRL] και rapid plasma reagin [RPR]) ανιχνεύουν αντισώματα που σχηματίζονται από την 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01) 15

απόκριση του ξενιστή σε λιπιδικό υλικό που ελευθερώνεται από κύτταρα του ξενιστή που έχουν υποστεί βλάβη καθώς και σε υλικό παρόμοιο με λιποπρωτεΐνη που ελευθερώνεται από τη σπειροχαίτη. Οι τρεπονηματικές δοκιμασίες ανιχνεύουν ειδικά τρεπονηματικά αντισώματα και οι τεχνικές που χρησιμοποιούνται περιλαμβάνουν συγκόλληση (T. pallidum αιμοσυγκόλληση [TPHA], T. pallidum συγκόλληση σωματιδίων [TPPA]), ανοσοεξέταση (ενζυμική ανοσοεξέταση [EIA] ή χημειοφωταυγής ανοσοεξέταση [CLIA], ανοσοφθορισμός (απορρόφηση φθορισμού τρεπονηματικών αντισωμάτων [FTA-ABS]) και ανοσοαποτύπωση (immunoblotting). Οι μη τρεπονηματικές δοκιμασίες έχουν φτωχή ευαισθησία και ειδικότητα και οι τρεπονηματικές δοκιμασίες βασισμένες σε ανασυνδυασμένο αντιγόνο έχουν υψηλότερη ευαισθησία και ειδικότητα από τις βασισμένες σε γηγενές αντιγόνο τρεπονηματικές δοκιμασίες. 1,2,3 Η εξέταση 2000 Έλεγχος Σύφιλης χρησιμοποιεί ένα ανασυνδυασμένο τρεπονηματικό αντιγόνο και είναι μία πλήρως αυτοματοποιημένη χημειοφωταυγής ανοσοεξέταση. Αρχή της Διαδικασίας Η 2000 Έλεγχος Σύφιλης είναι μία ξηρής φάσης, ενός βήματος χημειοφωταυγής ενζυμική ανοσομετρική εξέταση. Η στερεά φάση (σφαιρίδια) είναι επικαλυμμένη με κεκαθαρμένο ανασυνδυασμένο αντιγόνο T. pallidum 17 (Tp17). Η υγρή φάση αποτελείται από αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε κεκαθαρμένο ανασυνδυασμένο αντιγόνο T. pallidum 17 (Tp17). Το δείγμα ασθενούς και το αντιδραστήριο επωάζονται μαζί με τα επικαλυμμένα σφαιρίδια για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, όλα τα αντισώματα έναντι του T. pallidum στο δείγμα σχηματίζουν το σάντουϊτς σύμπλεγμα αντιγόνου με το κεκαθαρμένο ανασυνδυασμένο αντιγόνο T. pallidum 17 (Tp17) στο σφαιρίδιο και το συνδεδεμένο ένζυμο σε κεκαθαρμένο ανασυνδυασμένο αντιγόνο T. pallidum 17 (Tp17). Το μη προσδεδεμένο δείγμα ασθενούς και το ένζυμο στη συνέχεια απομακρύνονται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο σωληνάριο αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 1 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 35 λεπτά. Συλλογή Δείγματος Συνίσταται η χρήση υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Δείγματα που είναι θολερά ή περιέχουν ιδιαίτερο υλικό πρέπει να καθαρίζονται με χαμηλής ταχύτητας φυγοκέντρηση. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντρηση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Τα σωληνάρια συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η 2000 Έλεγχος Σύφιλης δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους πιθανούς τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 100 µl ορού ή ηπαρινισμένου πλάσματος. Φύλαξη: 3 ημέρες στους 2 8 C, για μακρόχρονη φύλαξη, διατηρήστε τα δείγματα στους 20 C. Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για διαγνωστική in vitro χρήση. 16 2000 Syphilis Screen (PIEL2KSY-6 {13}, 2010-11-01)