Androstenedione. For use on IMMULITE 2000 systems

Androstenedione For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 Androstenedione English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of 4 -androstenedione in human serum. Catalog Numbers: L2KAO2 (200 tests) Test Code: AND Color: Brown Summary and Explanation 4 -Androstenedione is a steroid which serves as a major precursor for testosterone and estrone. 1,2,3 Its clinical interest derives from the fact that it is often elevated in cases of abnormal hair growth (hirsutism) and virilization. 1,6,8-12 Unlike the adrenal androgens dehydroepiandrosterone and its sulfate, circulating androstenedione originates both from the adrenals and from the ovaries. 1,12,13 Plasma levels increase steadily from about the seventh year of life, then gradually decline after the third decade. 2,4,13 Androstenedione exhibits a diurnal variation, being highest in the morning, and also a cyclical variation during the menstrual cycle, being highest near midcycle. 1,5,14,15 During pregnancy, there is an increase in the plasma level. 3,11 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Androstenedione is a solid-phase, competitive chemiluminescent enzyme immunoassay. Incubation Cycles: 1 60 minutes Time to First Result: 65 minutes Specimen Collection Neither EDTA nor heparinized plasma is recommended for use. Lipemic, hemolyzed, icteric or grossly contaminated samples may give erroneous results. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufactures may yield differing values, depending on tube materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Androstenedione has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 25 µl of serum Storage: 24 hours at 2 8 C or 2 months (aliquotted) at 20 C. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Androstenedione Bead Pack (L2AO12) With barcode. 200 beads, coated with polyclonal rabbit anti-androstenedione antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KAO2: 1 pack 2 IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25)

Androstenedione Reagent Wedge (L2AOA2) With barcode. 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to androstenedione in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KAO2: 1 wedge Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Androstenedione Adjustors (LAOL, LAOH) Two vials (Low and High), 2 ml each, of androstenedione in a processed human serum matrix. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KAO2: 1 set Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks Quality Control Samples: Follow government regulations or accreditation requirements for quality control frequency. Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of androstenedione. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme. Expected Values A reference range study was performed on serum samples from 48 male and 58 female adult laboratory volunteers using the IMMULITE 2000 Androstenedione procedure. Males: Median: 1.6 ng/ml (5.6 nmol/l) Central 95% range: 0.6 3.1 ng/ml (2.1 10.8 nmol/l) Females: Median: 1.7 ng/ml (5.9 nmol/l) Central 95% range: 0.3 3.3 ng/ml (1.0 11.5 nmol/l) Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations The growing graafian follicle secretes androstenedione, and a two-fold increase in its production occurs near the midcycle. Specimens drawn during this time may therefore yield androstenedione results which fall above the upper central 95% limit. 1,2 Diurnal variation has been observed. For example, in 11 healthy men 18 to 30 years of age, the mean 24-hour androstenedione concentration was 0.93 ng/ml, with a circadian amplitude equaling 42% of the mean. The major acrophase occurred in the morning at 07:10 hours; the major nadir occurred in the evening at 23:00; and there was a secondary acrophase at 16:35. The 95% confidence interval for acrophase/nadir was 68 minutes. 13 Accordingly, the time of collection should be noted. It should be remembered that exercise can have a significant impact on circulating androstenedione levels. Thus, in a study of 18 professional soccer players, the mean androstenedione concentration increased from a baseline of approximately 0.9 ng/ml to 1.8 ng/ml at end of game, declining to 0.7 ng/ml ninety IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25) 3

minutes afterwards. 14 In another study, the mean androstenedione level for 20 moderately trained men increased significantly, from a baseline mean of 1.11 ng/ml, to 1.41 ng/ml five minutes after a one-hour swim. 15 Steroid metabolites have been tested for crossreactivity in this assay (see "Specificity" section). However, the steroid metabolites tested are not exhaustive; therefore crossreactivity to all steroid metabolites can not be ruled out. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: ng/ml 3.4916 nmol/l Reportable Range: 0.3 10 ng/ml (1.04 to 35 nmol/l) The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: 0.3 ng/ml (1.0 nmol/l) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of multiple days, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with 3 androstenedione solutions (10, 40 and 100 ng/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for androstenedione, with an extremely low crossreactivity to other naturally occurring steroids or therapeutic drugs that may be present in patient samples. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Samples spiked with 100 and 200 mg/l of conjugated and unconjugated bilirubin were analyzed. Bilirubin may interfere with the assay, causing elevations. (See "Bilirubin" table.) Hemolysis: Samples spiked with 135, 270 and 540 mg/dl of hemoglobin were analyzed. Hemolysis may interfere with the assay, causing elevations. (See "Hemolysis" table.) Lipemia: May cause a depression of values. (See "Lipemia" table.) Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 26 volunteers into plastic plain serum, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of androstenedione, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 Androstenedione procedure. (Heparin) = 0.88 (Serum) 0.15 ng/ml r = 0.981 (SST) = 1.04 (Serum) 0.10 ng/ml r = 0.989 (EDTA) = All samples were > 10 ng/ml Means: 3.83 ng/ml (Serum Plastic) 3.20 ng/ml (Heparin Plastic) 3.87 ng/ml (SST Plastic) > 10 ng/ml (EDTA Plastic) Neither EDTA nor heparinized plasma are recommended for use. Method Comparison 1: The assay was compared to a commercially available solid phase radioimmunoassay for androstenedione (Kit A) on 78 endogenous patient samples. 4 IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25)

(Concentration range: approximately 0.5 to 6 ng/ml. See graph 1.) By linear regression: (IML 2000) = 1.12 (Kit A) 0.45 ng/ml r = 0.950 Means: 1.67 ng/ml (IMMULITE 2000) 1.88 ng/ml (Kit A) Method Comparison 2: The assay was also compared to IMMULITE/IMMULITE 1000 Androstenedione on 334 endogenous and spiked samples. (Concentration range: approximately 0.3 to 9.5 ng/ml. See graph 2.) By linear regression: (IML 2000) = 0.94 (IML) 0.05 ng/ml r = 0.992 Means: 2.49 ng/ml (IMMULITE 2000) 2.69 ng/ml (IMMULITE) References 1) Abraham GE. Ovarian and adrenal contribution to peripheral androgens during the menstrual cycle. J Clin Endocrinol Metab 1974;39:340. 2) Baird DT. Ovarian steroid secretion and metabolism in women. In: James VHT, Serio M, Giusti G, editors. The Endocrine Function of the Human Ovary. New York: Academic Press, 1976: 125-33. 3) Fiet J et al. Simultaneous radioimmunoassay of androstenedione, dehydroepiandrosterone and 11 -hydroxyandrostenedione in plasma. Horm Res 1980;13: 133-49. 4) Hummer L et al. An easy and reliable radioimmunoassay of serum androstenedione: age-related normal values in 252 females aged 2 to 70 years. Scand J Clin Lab Invest 1983;43:301-6. 5) Judd HL, Yen SSC. Serum androstenedione and testosterone levels during the menstrual cycle. J Clin Endocrinol Metab 1973;39:475. 6) Keenan BS et al. Plasma androgens in congenital adrenal hyperplasia; androstenedione concentration as an index of adrenal androgen suppression. J Lab Clin Med 1979;94:799-808. 7) Putz Z. A selective radioimmunoassay of androstenedione in plasma and saliva. J Clin Chem Clin Biochem 1982;20:761-4. 8) Raj S et al. Diagnostic value of androgen measurements in polycystic ovary syndrome. Obstet Gynecol 1978;52:169-71. 9) Redi B et al. Diagnostic strategy in hyperandrogenic syndrome. Horm Res 1983;18:117-24. 10) Sciarra F. Diagnosis of virilizing syndromes: endocrinological parameters. In: Milinatti G et al, editors. Androgenization in Women. New York: Raven Press 1983;85-115. 11) Tourniaire J, Pugeat M. Strategic approach of hyperandrogenism in women. Horm Res 1983;18:125-34. 12) Vermeulen A. Androgen secretion by adrenals and gonads. In: Mahesh V, Greenblatt RB, editors. Hirsutism and Virilism. Boston: John Wright PSG 1983;17-34. 13) Lejeune-Lenain C, Van Cauter E, Desir D, et al. Control of circadian and episodic variations of adrenal androgens secretion in man. J Endocrinol Invest 1987;10:267-76. 14) Lupo C, Baldi L, Bonifazi M, et al. Androgen levels following a football match. Eur J Appl Physiol 1985;54:494-6. 15) Velardo A, Pantaleoni M, Valerio L, et al. Influence of exercise on dehydroepiandrosterone sulphate and d 4 - androstenedione plasma levels in man. Exp Clin Endocrinol 1991;97:99-101. 16) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 0.73 0.11 15.1% 0.13 17.8% 2 1.08 0.10 9.3% 0.13 12.0% 3 3.52 0.31 8.8% 0.32 9.1% 4 7.29 0.45 6.2% 0.62 8.5% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25) 5

Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 8 in 8 5 2.32 4 in 8 1.21 1.16 104% 2 in 8 0.66 0.58 114% 2 8 in 8 5.25 4 in 8 2.61 2.63 99% 2 in 8 1.30 1.31 99% 1 in 8 0.66 0.66 101% 3 8 in 8 6.16 4 in 8 3.06 3.08 99% 2 in 8 1.58 1.54 103% 1 in 8 0.76 0.77 99% 4 8 in 8 7.07 4 in 8 3.44 3.54 97% 2 in 8 1.77 1.77 100% 1 in 8 0.82 0.89 93% 5 8 in 8 7.38 4 in 8 4.17 3.69 113% 2 in 8 2.07 1.85 112% 1 in 8 0.94 0.92 102% Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 ND A 0.54 0.50 108% B 2.03 2.00 102% C 5.04 5.00 101% 2 0.71 A 1.21 1.17 103% B 2.34 2.67 88% C 4.99 5.67 88% 3 1.79 A 2.27 2.20 103% B 3.66 3.70 99% C 6.28 6.70 94% 4 3.60 A 3.77 3.92 96% B 5.30 5.42 98% C 7.92 8.42 94% 5 7.57 A 7.75 7.69 101% B 9.07 9.19 98% C >10 >10 Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Bilirubin Conjugated 1 Unconjugated 2 Unspiked 3 100 mg/l 200 mg/l 100 mg/l 200 mg/l 1 2.03 2.04 2.17 2.22 2.31 2 2.27 2.14 2.23 2.17 2.35 3 3.71 4.21 4.23 4.13 4.61 4 6.42 6.56 7.02 6.21 6.80 Česky. 1 Konjugovaný, 2 Nekonjugovaný, 3 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Δεσμευμένη (άμεση), 2 Αδέσμευτη (έμμεση), 3 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Związana, 2 Niezwiązana, 3 Wyjściowa. 6 IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25)

Hemolysis Hemoglobin 1 Unspiked 2 135 mg/dl 270 mg/dl 540 mg/dl 1 2.3 2.9 2.6 2.9 2 2.4 2.2 2.4 2.8 3 4.5 4.5 5.0 4.9 4 6.5 7.7 8.7 8.4 Česky. 1 Hemoglobin, 2 Bez přídavku. Ελληνικά. 1 Αιμοσφαιρίνη, 2 Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1 Hemoglobiny, 2 Wyjściowa. Lipemia Triglycerides Added 1 mg/dl Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 2.03 1,000 2.10 1.93 109% 2,000 1.89 1.83 103% 3,000 1.64 1.73 95% 2 2.27 1,000 1.99 2.16 92% 2,000 1.71 2.04 84% 3,000 1.68 1.93 87% 3 3.71 1,000 3.47 3.52 99% 2,000 3.13 3.34 94% 3,000 2.90 3.15 92% 4 6.42 1,000 5.62 6.10 92% 2,000 5.01 5.78 87% 3,000 4.71 5.46 86% 5 9.96 1,000 8.40 9.46 89% 2,000 6.67 8.96 74% 3,000 6.42 8.47 76% Česky. 1 Přidané triglyceridy, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Προστιθέμενα τριγλυκερίδια, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Dodane trójglicerydy, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 %Z/O. Specificity Compound 1 ng/ml Apparent % Crossreactivity Added 2 ng/ml 3 4 Adrenosterone 30 2.93 9.8% Aldosterone 10,000 ND ND 5 -Androstan-3,17 -diol 1,000 ND ND 4 -Androsten-11 -ol-3,17- dione 50 1.6 3.2% Androsterone 500 2.92 0.584% Cholesterol 1,000 ND ND Corticosterone 1,000 ND ND Cortisol 10,000 0.67 0.007% Cortisone 6,000 1.44 0.023% Dexamethasone 1,000 ND ND DHEA 33 < 0.3 ND 16.5 < 0.3 ND DHEA-SO 4 15,000 < 0.3 ND 7,500 < 0.3 ND Deoxycorticosterone 10,000 3.76 0.037% Estradiol-17 10,000 0.31 0.003% Estriol 1,000 ND ND Estrone 1,000 ND ND 11-Ketotestosterone 1,500 1.21 0.081% Norethindrone 1,000 0.49 0.049% 17 -Hydroxyprogesterone 10,000 4.56 ND Pregnenolone 10,000 ND ND Prednisone 1,000 0.47 0.047% Progesterone 1,000 2.95 0.295% Spironolactone 1,000 0.3 0.030% 5 -Dihydrotestosterone 1,000 2.01 0.201% Testosterone 100 1.37 1.4% ND: not detectable 5 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 Zjevná koncentrace, 4 % Zkřížená reaktivita, 5 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 Εμφανής συγκέντρωση, 4 % Διασταυρ.Αντίδραση, 5 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 Zmierzona, 4 % reaktywności Krzyżowej, 5 ND: Nieoznaczlne. IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25) 7

Method Comparison 1 IMMULITE 2000 Androstenedione 7 6 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 Kit A, ng/ml (IML 2000) = 1.12 (Kit A) 0.45 ng/ml r = 0.950 Method Comparison 2 IMMULITE 2000 Androstenedione 10 8 6 4 2 0 0 2 4 6 8 10 IMMULITE Androstenedione, ng/ml (IML 2000) = 0.94 (IML) 0.05 ng/ml r = 0.992 English. Androstenedione Česky. Androstenedion. Ελληνικά. Ανδροστενεδιόνης. Polski. Androstenedion. Česky IMMULITE 2000 Androstenedion Použití : Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace androstendionu v lidském séru. Katalogové číslo : L2KAO2 (200 stanovení) Kód metody : AND Barva : Hnědá Shrnutí a vysvětlení 4 -Androstendion je steroid, který je hlavním prekurzorem testosteronu a estronu. 1,2,3 Klinicky zajímavý je z toho důvodu, že jeho koncentrace je často zvýšená v případě abnormálního ochlupení (hirsutizmus) a virilizace. 1,6,8-12 Na rozdíl od dehydroepiandrosteronu androgenu nadledvinek a jeho sulfátů se cirkulující androstendion tvoří v nadledvinkách i vaječnících. 1,12,13 Množství androstendionu v plazmě se od sedmého roku života postupně zvyšuje a po třicítce pozvolna klesá. 2,4,13 Androstendion vykazuje v průběhu dne výkyvy v koncentraci, přičemž nejvyšší je ráno. Cyklické změny množství nastávají i během menstruačního cyklu, vrcholné hodnoty jsou dosaženy kolem poloviny cyklu. 1,5,14,15 Během těhotenství koncentrace androstendionu v plazmě roste. 3,11 Princip Stanoveni Stanovení Androstenedionu na analyzátorech IMMULITE 2000 je konkurenční chemiluminiscenční enzymatická imunochemická reakce v pevné fázi. Inkubační cykly : 1 60 minut Čas do prvního výsledku : 65 minut Odebírání vzorků Použití EDTA nebo heparinizované plazmy se nedoporučuje. Lipemické, hemolyzované, žloutenkové nebo značně kontaminované vzorky můžou poskytovat chybné výsledky. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo 8 IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25)

antikoagulačních činidel. Stanovení Androstenedion na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku : 25 µl séra Skladování : 24 hodin při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 2 měsíce při teplotě 20 C. Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie : Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Chemiluminiscenční substrát : Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda : Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. Androstenedion zásobník s kuličkami (L2AO12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených polyklonální králičí protilátkou proti androstendionu. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KAO2 : 1 balení Androstenedion reagencie (L2AOA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s androstendionem, v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KAO2 : 1 nádobka Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii ; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Androstenedion kalibrátory (LAOL, LAOH) Dvě ampulky po 2 ml s vysokou a nízkou koncentrací androstendionu ve zpracované lidské sérové matrici. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KAO2 : 1 sada Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM : Chemiluminiscenční substrát L2PWSM : Promývací roztok L2KPM : Čistící roztok na jehly LRXT : Reakční zkumavky (na jedno použití) Dále potřebujete Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy : přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi : 2 týdny Vzorky ke kontrole kvality : Pokud jde o četnost kontroly kvality, je třeba řídit se platnými předpisy a akreditačními požadavky. Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou) androstendionu. Společnost Siemens Healthcare Diagnostics doporučuje používat obchodně dostupné materiály kontroly kvality o přinejmenším dvou koncentracích vysoké a nízké. Vyhovující funkčnosti se dosahuje, pokud zjištěné hodnoty analytu leží uvnitř přijatelného kontrolního rozmezí IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25) 9

analyzátoru nebo uvnitř rozmezí stanoveného příslušným interním systémem kontroly kvality dané laboratoře. Očekávané hodnoty Výzkum referenčního rozmezí se uskutečnil na vzorcích séra od dobrovolníků, 48 mužů a 58 žen, stanovených pomocí testu Androstenedion na analyzátorech IMMULITE 2000. Muži : Medián : 1,6 ng/ml (5,6 nmol/l) Střední 95 % rozmezí : 0,6 3,1 ng/ml (2,1 10,8 nmol/l) Ženy : Medián : 1,7 ng/ml (5,9 nmol/l) Střední 95 % rozmezí : 0,3 3,3 ng/ml (1,0 11,5 nmol/l) Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Zrající Graafův folikul vylučuje androstendion a v polovině cyklu se jeho tvorba zdvojnásobí. Vzorky odebrané v tomto období tudíž mohou dávat výsledky androstendionu, které se nachází nad horním limitem středních 95 %. 1,2 Bylo zjištěno kolísání v množství androstendionu během dne. Například u jedenácti zdravých mužů od 18 do 30 let věku byla střední hodnota 24-hodinové koncentrace androstendionu 0,93 ng/ml, s denní amplitudou rovnou 42 % střední hodnoty. Hlavní akrofáze byla v 7:10 ráno, hlavní nadir nastal v noci ve 23:00 a sekundární akrofáze nastala v 16:35. 95 % interval spolehlivosti pro akrofázi/nadir byl 68 minut. 13 Proto je nutné poznamenat čas odběru. Je třeba mít na paměti, že cvičení může mít na koncentraci androstendionu v cirkulaci podstatný vliv Při studii zahrnující 18 profesionálních fotbalistů vzrostla střední koncentrace androstendionu z výchozí hodnoty přibližně 0,9 ng/ml až na 1,8 ng/ml na konci hry a po dalších 90 minutách se propadla na 0,7 ng/ml. 14 V další studii podstatně narostla střední koncentrace androstendionu u 20 středně trénovaných mužů z výchozí střední hodnoty 1,11 ng/ml na 1,41 ng/ml pět minut po jednohodinovém plavání. 15 Byla testována zkřížená reaktivita tohoto stanovení s metabolity steroidů (viz tabulka "Specificita"). Počet testovaných metabolitů steroidů ovšem není vyčerpávající; nelze tedy vyloučit zkříženou reaktivitu se všemi metabolity steroidů. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all imunologickým stanovením. Clin Chem 1998:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktor : ng/ml 3,4916 nmol/l Rozsah měření : 0,3 10 ng/ml (1,04 až 35 nmol/l) Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost : 0,3 ng/ml (1,0 nmol/l) Přesnost : Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu několika dní, celkem 40 testů s 80 replikátů. (Viz tabulka "Přesnost".) Linearita : Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Linearita.) 10 IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25)

Zpětná výtěžnost : Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří roztoků androstendionu (10, 40 a 100 ng/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Zpětná výtěžnost.) Specificita : Protilátka je silně specifická vůči androstendionu s extrémně nízkou zkříženou reaktivitou vůči dalším přirozeně se vyskytujícím steroidům nebo lékům, které se můžou nacházet ve vzorcích pacientů. (Viz tabulka "Specificita".) Bilirubin : Byla provedená analýza vzorků s přídavkem 100 a 200 mg/l konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu. Bilirubin může se stanovením interferovat a způsobit zvýšení hodnot. (Viz tabulka "Bilirubin".) Hemolýza : Byla provedená analýza vzorků s přídavkem 135, 270 a 540 mg/dl hemoglobinu. Hemolýza může se stanovením interferovat a způsobit zvýšení hodnot. (Viz tabulka "Hemolýza".) Lipémie : Může způsobit pokles hodnot. (Viz tabulka "Lipémie".) Alternativní typ vzorku : K ohodnocení vlivu použití alternativních typů vzorků byla odebrána krev 26 dobrovolníkům do plastových obyčejných sérových, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Do úměrných objemů odpovídajících vzorků byly přidány i roztoky různých koncentrací androstendionu a výsledkem byly hodnoty z celého kalibračního rozpětí stanovení. Všechny vzorky byly následně stanoveny pomocí testu Androstenedion na analyzátorech IMMULITE 2000. (Heparin) = 0,88 (Sérum) 0,15 ng/ml r = 0,981 (SST) = 1,04 (Sérum) 0,10 ng/ml r = 0,989 (EDTA) = všechny vzorky byly > 10 ng/ml Střední hodnoty : 3,83 ng/ml (Sérum Plast) 3,20 ng/ml (Heparin Plast) 3,87 ng/ml (SST Plast) > 10 ng/ml (EDTA Plast) Použití EDTA nebo heparinizované plazmy se nedoporučuje. Srovnání metody 1 : Stanovení bylo porovnáno s komerčně dostupným radioimunochemickým testem androstendionu v pevné fázi (Kit A) na 78 endogenních vzorcích. (Koncentrační rozsah: přibližně 0,5 až 6 ng/ml. Viz graf 1.) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 1,12 (Kit A) 0,45 ng/ml r = 0,950 Střední hodnoty : 1,67 ng/ml (IMMULITE 2000) 1,88 ng/ml (Kit A) Srovnání metody 2 : Stanovení bylo rovněž porovnáno s testem Androstenedion na analyzátorech IMMULITE/IMMULITE 1000 na 334 endogenních vzorcích s přídavkem. (Koncentrační rozsah: přibližně 0,3 až 9,5 ng/ml. Viz graf 2.) Podle lineární regrese : (IML 2000) = 0,94 (IML) 0,05 ng/ml r = 0,992 Střední hodnoty : 2,49 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,69 ng/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Ανδροστενεδιόνης Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της 4 ανδροστενεδιόνης στον ανθρώπινο ορό. Αριθμοί καταλόγου: L2KAO2 (200 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: AND Χρώμα: Καφέ Περίληψη και επεξήγηση Η Δ 4 -ανδροστενεδιόνη είναι ένα στεροειδές που λειτουργεί ως σημαντική πρόδρομος ουσία της τεστοστερόνης και της οιστρόνης. 1,2,3 Το κλινικό ενδιαφέρον της οφείλεται στο γεγονός ότι συχνά παρουσιάζεται αυξημένη σε περιπτώσεις IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25) 11

μη φυσιολογικής τριχοφυίας (δασυτριχισμός) και αρρενοποίησης. 1,6,8-12 Αντίθετα με τα ανδρογόνα των επινεφριδίων, της δεϋδροεπιανδροστερόνης και του θεϊικού άλατός της, η κυκλοφορούσα ανδροστενεδιόνη εκλύεται τόσο από τα επινεφρίδια όσο και από τις ωοθήκες. 1,12,13 Τα επίπεδα στο πλάσμα αυξάνονται σταθερά από το έβδομο έτος της ηλικίας και μειώνονται σταδιακά μετά την τρίτη δεκαετία. 2,4,13 Η ανδροστενεδιόνη παρουσιάζει ημερήσια διακύμανση με ανώτατες τιμές το πρωί, καθώς και κυκλική διακύμανση κατά τη διάρκεια του έμμηνου κύκλου με ανώτατες τιμές στο μέσο του κύκλου. 1,5,14,15 Κατά την εγκυμοσύνη παρατηρείται αύξηση στα επίπεδα πλάσματος. 3,11 Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Ανδροστενεδιόνη είναι μια ξηρής φάσης ανταγωνιστική, χημειοφωταυγής, ενζυμική ανοσοανάλυση. Κύκλοι επώασης: 1 x 60 λεπτά Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά Συλλογή δειγμάτων Δεν συνιστάται η χρήση EDTA ή ηπαρινισμένου πλάσματος. Λιπιδαιμικα, αιμολυμένα, πολύ μολυσμένα δείγματα ή δείγματα με ίκτερο μπορεί να δώσουν λανθασμένα αποτελέσματα. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντρηση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Το IMMULITE 2000 Ανδροστενεδιόνης δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 25 µl ορού Φύλαξη: 24 ώρες στους 2 8 C ή 2 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (Bλ. Ένθετο.) Νερό: Χρήση απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων ανδροστενεδιόνης (L2AO12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με πολυκλωνικό αντίσωμα άντι-ανδροστενεδιόνης κουνελιού. Σταθερά στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KAO2: 1 συσκευασία Δοχείο αντιδραστηρίου ανδροστενεδιόνης (L2AOA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συνδεδεμένης με ανδροστενεδιόνη, σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερά στους 2 8 C έως την 12 IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25)

ημερομηνία λήξεως. L2KAO2: 1 δοχείο Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές ανδροστενεδιόνης (LAOL, LAOH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό), 2 ml έκαστο, ανδροστενεδιόνης σε μήτρα επεξεργασμένου ανθρώπινου ορού. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KAO2: 1 σετ Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσης) Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου Διαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000. Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Εφαρμόστε τους κρατικούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης για τη συχνότητα του ποιοτικού ελέγχου. Χρησιμοποιείτε δείγματα ποιοτικού ελέγχου σε δύο τουλάχιστον επίπεδα(χαμηλό και υψηλό) ανδροστενεδιόνης. Η Siemens Healthcare Diagnostics συνιστά τη χρήση εμπορικά διαθέσιμων υλικών ελέγχου ποιότητας με τουλάχιστον 2 επίπεδα (χαμηλό και υψηλό). Ένα ικανοποιητικό επίπεδο απόδοσης επιτυγχάνεται όταν οι τιμές που προκύπτουν βρίσκονται εντός του αποδεκτού εύρους των υλικών ελέγχου για τον αναλυτή ή εντός ενός καθορισμένου εύρους που καθορίστηκε με βάση ένα κατάλληλο πλαίσιο εσωτερικού εργαστηριακού ποιοτικού ελέγχου. Αναμενόμενες τιμές Μελέτη εύρους αναφοράς διενεργήθηκε σε δείγματα ορού 48 ενηλίκων ανδρών και 58 ενηλίκων γυναικών εθελοντών εργαστηρίου με χρήση της μεθόδου IMMULITE 2000 Ανδροστενεδιόνης. Άντρες: Διάμεση τιμή: 1,6 ng/ml (5,6 nmol/l) Κεντρικό εύρος 95%: 0,6 3,1 ng/ml (2,1 10,8 nmol/l) Γυναίκες: Διάμεση τιμή: 1,7 ng/ml (5,9 nmol/l) Κεντρικό εύρος 95%: 0,3 3,3 ng/ml (1,0 11,5 nmol/l) Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς.. Περιορισμοί Το αναπτυσσόμενο ώριμο ωοθηλάκιο εκκρίνει ανδροστενεδιόνη, ενώ στο μέσο του κύκλου η παραγωγή αυξάνεται στο διπλάσιο. Συνεπώς, τα δείγματα που λαμβάνονται στο διάστημα αυτό μπορεί να δώσουν τιμές που υπερβαίνουν το ανώτατο κεντρικό όριο 95%. 1,2 Αποκλίσεις έχουν παρατηρηθεί στη διάρκεια της ημέρας. Για παράδειγμα, σε 11 υγιείς άνδρες 18 έως 30 ετών, η μέση 24ωρη συγκέντρωση ανδροστενεδιόνης ήταν 0,93 ng/ml, με κιρκάδιο εύρος 42% του μέσου όρου. Το ζενίθ παρατηρήθηκε στις 07:10 το πρωί, το ναδίρ παρατηρήθηκε στις 23:00 το βράδυ, ενώ μια δευτερεύουσα κορύφωση παρατηρήθηκε στις 16:35. Το διάστημα εμπιστοσύνης 95% για το ζενίθ/ναδίρ ήταν 68 λεπτά. 13 Κατά συνέπεια, θα πρέπει να σημειωθεί η ώρα συλλογής του δείγματος. Να θυμάστε ότι η άσκηση μπορεί να επηρεάσει σημαντικά τα επίπεδα της IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25) 13

κυκλοφορούσας ανδροστενεδιόνης. Έτσι, σε μια μελέτη σε 18 επαγγελματίες παίκτες ποδοσφαίρου, η μέση συγκέντρωση ανδροστενεδιόνης αυξήθηκε από τη βασική τιμή των 0,9 ng/ml στα 1,8 ng/ml αμέσως μετά το πέρας του παιχνιδιού, ενώ μειώθηκε στα 0,7 ng/ml ενενήντα λεπτά αργότερα. 14 Σε μια άλλη μελέτη, το μέσο επίπεδο ανδροστενεδιόνης 20 μετρίως γυμνασμένων ανδρών παρουσιάστηκε σημαντικά αυξημένο σε σύγκριση με το βασικό μέσο όρο των 1,11 ng/ml σε 1,41 ng/ml πέντε λεπτά έπειτα από κολύμβηση μιας ώρας. 15 Οι μεταβολίτες στεροειδών ελέγχθηκαν για διασταυρούμενη αντίδραση για αυτή την εξέταση (βλ. παράγραφο «Ειδικότητα»). Ωστόσο, ο έλεγχος στεροειδών μεταβολιτών δεν ήταν πλήρης και για αυτό το λόγο η διασταυρούμενη αντίδραση για όλους τους μεταβολίτες στεροειδών δεν μπορεί να αποκλειστεί. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [Bλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: 27-33.] Δείγματα ασθενών που, εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για τα αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Παράγοντας μετατροπής: ng/ml 3,4916 nmol/l Εύρος μέτρησης: 0,3 10 ng/ml (1,04 έως 35 nmol/l) Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική Ευαισθησία: 0,3 ng/ml (1,0 nmol/l) Ακρίβεια: Για αρκετές ημέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision.) Γραμμικότητα: Τα δείγματα αναλύθηκαν σε διαφορετικές αραιώσεις. (Bλ. Πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ανάκτηση: Ορισμένα δείγματα (1 έως 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα ανδροστενεδιόνης (10, 40 και 100 ng/ml) και αναλύθηκαν. (Bλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα έχει υψηλή εξειδίκευση στην ανδροστενεδιόνη, με εξαιρετικά χαμηλή διασταυρούμενη αντίδραση σε άλλα φυσικά στεροειδή ή θεραπευτικά σκευάσματα που μπορεί να εμφανίζονται στα δείγματα των ασθενών. (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Αναλύθηκαν δείγματα εμπλουτισμένα με 100 και 200 mg/l συνδεδεμένης και έμμεσης χολερυθρίνης. Η χολερυθρίνη μπορεί να επηρεάσει την εξέταση και να δώσει αυξημένες τιμές. (Βλ. πίνακα "Bilirubin".) Αιμόλυση: Αναλύθηκαν δείγματα εμπλουτισμένα με 135, 270 και 540 mg/dl αιμοσφαιρίνης. Η αιμόλυση μπορεί να επηρεάσει την εξέταση και να δώσει αυξημένες τιμές. (Βλ. πίνακα "Hemolysis".) Λιπιδαιμία: Μπορεί να δώσει μειωμένες τιμές. (Βλ. πίνακα Lipemia.) Εναλλακτικοί τύποι δειγμάτων: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δειγμάτων, συλλέχθηκε αίμα από 26 εθελοντές σε πλαστικούς, απλού ορού, ηπαρινισμένους, EDTA και Becton Dickinson SST δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες. Ίσες ποσότητες των 14 IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25)

αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν με διάφορες ποσότητες ανδροστενεδιόνης, ώστε να ληφθούν τιμές καθόλο το εύρος καμπύλης της εξέτασης, και μετά εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία του IMMULITE 2000 Ανδροστενεδιόνης. (Ηπαρίνη) = 0,88 (ορός) 0,15 ng/ml r = 0,981 (SST) = 1,04 (ορός) 0,10 ng/ml r = 0,989 (EDTA) = Όλα τα δείγματα ήταν > 10 ng/ml Μέσοι όροι: 3,83 ng/ml (πλαστικός ορού) 3,20 ng/ml (πλαστικός ηπαρίνης) 3,87 ng/ml (πλαστικός SST) > 10 ng/ml (πλαστικός EDTA) Δεν συνιστάται η χρήση EDTA ή ηπαρινισμένου πλάματος. Σύγκριση της Μεθόδου 1: Η εξέταση συγκρίθηκε με μια κυκλοφορούσα στο εμπόριο ραδιο-ανοσοεξέταση ξηρής φάσης ανδροστενεδιόνης (Kit A) σε 78 ενδογενή δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 0,5 έως 6 ng/ml Βλ. γράφημα 1.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,12 (Kit A) 0,45 ng/ml r = 0,950 Μέσοι όροι: 1,67 ng/ml (IMMULITE 2000) 1,88 ng/ml (Kit A) Σύγκριση της Μεθόδου 2: Η μέθοδος συγκρίθηκε επίσης με την αντίστοιχη μέθοδο της IMMULITE/IMMULITE 1000 Ανδροστενεδιόνης σε 334 ενδογενή και εμπλουτισμένα δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 0,3 έως 9,5 ng/ml Βλ. γράφημα 2.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,94 (IML) 0,05 ng/ml r = 0,992 Μέσοι όροι: 2,49 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,69 ng/ml (IMMULITE) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. www.siemens.com/diagnostics Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 Androstenedion Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia 4 -androstendionu w ludzkiej surowicy. Numery katalogowe: L2KAO2 (200 testów) Kod testu: AND Kolor: Brązowy Wprowadzenie 4 androstendion jest steroidem, najważniejszym prekursorem testosteronu i estronu. 1,2,3 Jest interesujący klinicznie ze względu na fakt, że jego podniesiony poziom łączy się z nadmiernym wzrostem włosów (kirsutism) i wirilizacją. 1,6,8-12 Inaczej niż inne androgeny nadnerczy dehydroepiandrostendion i jego siarczan, krążący androstendion wywodzi się zarówno z nadnerczy jak i z jajników. 1,12,13 Jego poziom w osoczu wzrasta stopniowo od około 7 roku życia po czym opada po trzydziestym roku. 2,4,13 Androstendion wykazuje wahania dobowe, osiągając maksimum rano, a także wahania w obrębie cyklu menstruacyjnego z maksimum w pobliżu środka. 1,5,14,15 W ciąży poziom androstendionu w osoczu wzrasta. 3,11 Zasada testu IMMULITE 2000 Androstenedion jest immunoenzymatycznym, kompetycyjnym testem fazy stałej. Czas inkubacji: 1 60 minut Czas do pierwszego wyniku: 65 minut Preparatyka próbek Nie zaleca się wykonywać oznaczenia w osoczu EDTA i heparynowym. W próbkach lipemicznych, hemolizowanych, żółtaczkowych i silnie zanieczyszczonych wyniki testu mogą być błędne. Zalecane jest ultrawirowanie próbek lipemicznych. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25) 15

spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Na wynik oznaczenia może wpływać rodzaj probówek do których pobierana jest krew. Istotne znaczenia mają: producent i tworzywo oraz obecność lub brak bariery żelowej lub innego środka ułatwiającego oddzielenie surowicy, obecność aktywatorów skrzepu oraz brak/obecność antykoagulantów. Wpływ wszystkich wymienionych czynników na wynik Testu IMMULITE 2000 Androstendion nie jest znany. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ rodzaju pobieranego materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 25 µl surowicy Przechowywanie materiału: 24 godziny 2 8 C lub 2 miesiące w 20 C (rozpipetowane). Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty- HCV. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. Androstendion pojemnik z kulkami (L2AO12) Oznakowany kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych króliczym przeciwciałem poliklonalnym anty-androstendion. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KAO2: 1 pojemnik Androstendion - klin z odczynnikiem (L2AOA2) Oznakowany kodem kreskowym. 11,5 ml alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z androstendionem w buforze. Stabilny w 2 8 C do daty ważności. L2KAO2: 1 klin Nie uszkadzając kodu kreskowego klina zerwij taśmę zabezpieczającą w okresie transportu przesuwne zamknięcie komór z odczynnikiem. Usuń tymczasowe foliowe uszczelnienie komór i wsuń zamknięcie komór na prowadnice w pokrywie klina. Androstendion - kalibratory zestawu (LAOL, LAOH) Dwie fiolki (kalibrator niski i wysoki) zawierające po 2 ml androstendionu w matrycy preparowanej surowicy ludzkiej. Stabilne 30 dni w 2 8 C lub 6 miesiący w 20 C (rozpipetowane). L2KAO2: 1 zestaw Przed przystąpieniem do kalibracji umocuj na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Materiały dostarczane oddzielnie L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący. L2KPM: Roztwór czyszczący. LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) Ponadto niezbędne woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. 16 IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25)

Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000. Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie Próbki kontrolne: Przestrzegać przepisów państwowych i wymogów kontrolnych w zakresie częstotliwości kontroli jakości. Stosować kontrole lub pule surowic, co najmniej o niskim i wysokim poziomie androstendionu. Siemens Healthcare Diagnostics zaleca stosowanie dostępnych w handlu próbek kontroli jakości o co najmniej 2 poziomach (niskim i wysokim). Uznaje się, że test przebiega prawidłowo, gdy uzyskane wartości analitu plasują się w przyjętym dla Kontroli zakresie dla danego analizatora lub w zakresie opracowanym w ramach wewnątrzlaboratoryjnego systemu zapewnienia jakości. Oczekiwane wartości Zakres referencyjny wyznaczono na podstawie oznaczeń w grupie próbek od ochotników z laboratorium: 48 mężczyzn i 58 kobiet przy użyciu testu IMMULITE 2000 Androstendion. Mężczyźni: Mediana: 1,6 ng/ml (5,6 nmol/l); Środkowe 95%: 0,6 3,1 ng/ml (2,1 10,8 nmol/l) Kobiety: Mediana: 1,7 ng/ml (5,9 nmol/l); Środkowe 95%: 0,3 3,3 ng/ml (1,0 11,5 nmol/l) Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Rosnący pęcherzyk Graafa wydziela androstendion, którego poziom wzrasta dwukrotnie w okolicy środka cyklu. W próbkach pobranych w tym okresie poziom androstendionu może przekraczać limit środkowych 95%. 1,2 Obserwowane są dobowe wahania. Przykładowo: u 11 zdrowych mężczyzn pomiędzy 18 a 30 rokiem życia średnie dobowe stężenie androstendionu wynosiło 0,93 ng/ml a wahania dobowe dochodziły do 42% średniej. Maksimum przypadało o 7:10 rano, minimum o 23:00 w nocy, kolejny wzrost o 16:35. (Przy poziomie ufności 95% odstęp pomiędzy minimum/maksimum wynosił 68 minut.) 13 Tak więc należy notować czas pobrania próbki. Ćwiczenia fizyczne w znaczny sposób wpływają na poziom krążącego androstendionu. Badania u 18 zawodowych piłkarzy wykazały, że średni poziom androstendionu podczas meczu wzrasta z wartości podstawowej 0,9 ng/ml do 1,8 ng/ml, a następnie w ciągu 90 minut spada do 0,7 ng/ml. 14 W innych badaniach wykazano, że poziom androstendionu u przeciętnie wytrenowanych mężczyzn wzrósł po godzinnym pływaniu z wartości podstawowej 1,11 ng/ml do 1,41 ng/ml. 15 Badano możliwość reaktywności krzyżowej w teście pomiędzy metabolitami steroidów (patrz rozdział Specyficzność). Ponieważ badania nie wyczerpały wszystkich istniejących pochodnych steroidów, nie wykluczono całkowicie prawdopodobieństwa reakcji krzyżowych tego typu. Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato LM., Stuart MC: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin Chem 1988:34:27-33.] Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. IMMULITE 2000 Androstenedione (PIEL2KAO-4 {19}, 2012-10-25) 17