Medical Journal of Tabriz University of Medical Sciences and Health Services Vol. 36, No. 4, Oct. Nov. 2014, Pages: 56-61 Development of a Multiplex PCR for Detection of Common Causative Agent of Respiratory Tract Infections Include Streptococcus Pneumonia, Staphylococcus Aureus, KlebsiellaPneumonia and Mycobacterium Tuberculosis Abbas Rami 1, Fatemeh Kazemi-Lomedasht 2, Mohammad Reza Pourshafie 1* 1 Department of Microbiology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran 2 Biotechnology Research Center, Venom and BiotherapeuticsMolecules Lab, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran Received: 3 Nov, 2013 Accepted: 10 Feb, 2014 Abstract Background and Objectives: Pneumonia is caused by a range of microorganisms. The incidence of bacterial pneumonia can be divided into two categories: hospital-acquired pneumonia and community-acquired pneumonia. Community acquired Pneumonia is a related leading cause in different populations. Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia are the most common cause of hospital-acquired pneumonia, and Streptococcus pneumonia and mycobacterium tuberculosis are Cause of community-acquired pneumonia. The aim of this was to investigate the common causative factors of respiratory tract infections include Streptococcus pneumonia, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumonia and mycobacterium tuberculosis using multiplex PCR was the main aim of this study. Materials & Methods: This study was experimental development. Multiplex PCR is a rapid, accurate molecular method for the simultaneous detection of two or more specific genes in a reaction.in this study, multiplex PCR method for simultaneous detection in the genome-specific sequences leading causes of pneumonia (Streptococcus pneumonia, mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aurous and Klebsiella pneumonia) was done. Specific genes that we chose in this study were: ply (pneumolysin) for Streptococcus pneumonia, nuc (thermonuclease) for the staphylococcus aureus, gyra (gyrase A) for Klebsiella pneumoniae and pnca gene for Mycobacterium tuberculosis, also the 16s ribosomal gene was used as a positive control. Results: After set-up procedure and observing specific bands, sequencing was confirmed the accuracy of observed bands.our results showed that the detection of Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Klebsiellapneumoniae and Mycobacterium tuberculosis in a Multiplex PCR reaction is possible. Conclusion: In fact, this method can be used for direct and simultaneous detection of these agents in the respiratory specimens. Keywords:Multiplex PCR Respiratory Tract Infections, Streptococcus Pneumonia, StaphylococcusAureus, KlebsiellaPneumonia, Mycobacterium Tuberculosis *Corresponding author: E-mail:pourshafie@pasteur.ac.ir
/ 75 مجله پششكي دانشگاه علوم پششكي و خدمات بهداشتي درماني تبزيش دوره 63 شماره 4 مهز وآبان 3636 صفحات 73-33 مقاله پضوهشي طزاحي يک روػ مولتیپلكظ پي عي آر بزای شناعايي باکتزی های شايع عامل عفونت های تنفغي 3 عباط رمي فاطمه کاظمي لمعه دشت 2 1 2 *3 محمد رضا پورشفیع بخش میکروبشناسی انستیتو پاستور ایران تهران ایران مرکس تحقیقات بیوتکنولوشی آزمایشگاه ونوم و فرآورده های بیولوشیک انستیتو پاستور ایران تهران ایران دريافت: 32/8/32 پذيزػ: 32/33/23 چكیده سمینه و اهداف:د ه ی ث ػیل طیف ػیؼی اص ثبکششی ب یش ع ب ایجبد هییؿی د. د هی ی اکشؼیبثی اص مبهؼی یی ػبهیب ثشمؼیش ثیوبسی دس م اهغ هخشلف اػز. د ه ی ثبکششیبل اص ظش ح اثشال ث د دػش سقؼین هیؿ د: د ه ی بی اکشؼبثی اص ثیوبسػیشبى د هی ی یبی اکشؼبثی اص مبهؼ.اػشبفیل ک ک عا سئ ع کلجؼیالد ه ی اص ؿیبیغسیشیي ػ اهیب د هی ی یبی اکشؼیبثی اص ثیوبسػیشبى ؼیش ذ اػیششدش ک د ه ی هبیک ثبکششی مس ثشکل صیغ ثبکششی بی ؿبخص دبس ط ی هیثبؿ ذ ک ػبهب د ه ی بی اکشؼبثی اص مبهؼ ؼیش ذ. یذ اص ا جیبم اییي هطبلؼ سخیص ػ اهب ػف ی رکش ؿذ اص طشیق ه لشیذلکغ دی ػی آس Reaction) (Multiplex Polymerase Chain هی ثبؿذ. مواد و روػ ها: ه لشیذلکغ دی ػی آس س ؽ ه لک لی دقیق ػشیؼی اػز ک ثشای سخیص نصهیبى د ییب د یذیي طى اخشیبدیی دس ی اک ؾ ثکبس هیس د. ایي هطبلؼ اص ع س ػؼ سجشثی هی ثبؿذ دس آى اص س ؽ ه لشیذلکغ دی ػی آس ثشای سخیص وضهیبى ػیکب غ یبی اخشیبدی ط م ػ اهب ثشمؼش د ه ی )اػششدش ک ک عد ه ی هبیک ثبکششی مس ثشکل صیغ اػشبفیل ک ک عا سئی ع کلجؼییالد ه یی ( ث یش هیییگیییشین. طى ییبی اخشیبدییی کیی هییب دس ایییي هطبلؼیی ا شخییبة کشدین:د هیی لیضیي ثییشای اػییششدش ک ک عد ه ییی سشه کلئییبص ثییشای اػشبفیل ک ک عا سئ ع طیشاص ثشای کلجؼیالد ه ی pnca ثشای هبیک ثبکششی مس ثشکل صیغ هیثبؿی ذ. وچ ییي هیب دس اییي هطبلؼی اص طى s16 سیج ص هی ثؼ اى ک ششل هثجز اػشفبد کشدین. يافته ها: ثؼذ اص ػز کشدى س ؽ هب ذ ی ثب ذ بی اخشیبدی م ز سبییذ بیی ثب یذ بی هی سد ظیش اص طل اػیشخشاد گشدییذ ثیشای سؼییي س الی )Sequencing( فشػشبد ؿذ. شبیج هطبلؼ هیب یبى داد کی سیخیص وضهیبى اػیششدش ک ک عد ه یی اػیشبفیل ک ک ع ا سئی ع کلجؼیالد ه ی هبیک ثبکششی مس ثشکل صیغ دس ی اک ؾ دی ػی آس هیؼش هیثبؿذ. نتیجه گیزی: دس اقغ هیس اى اص ایي س ؽ دس سخیص هؼشقین وضهبى ایي ػ اهب دس و بی س فؼی ث ش گیشی کشد. کلید واصه ها: ه لشیذلکغ دی ػی آس ػف ز بی س فؼی اػششدش ک ک ع د ه ی هبیک ثیبکششی م س ثشکلی صیغ اػیشبفیل ک ک ع ا سئی ع کلجؼیال د ه ی * ایویب یؼ ذ : pourshafie@pasteur.ac.ir مقدمه د ه ی ثیوبسی اػز ک اص صهبى بی ثؼیبس د س ؿی بخش ؿیذ ثی د) 1 (. عفونتهای مجاری تنفسی تحتانییکیی اص ػ اهیب ؿیبیغ ایجبدک ذ ثیوبسی بی مذی کی ذ یبس اىک یذ دس ک دکیبى ثضسگؼبالى دس ػشاػش د یب هیثبؿ ذ) 2 (. دبس طى بی ػبهیب LRTI دس ػ گش دػش ث ذی هیؿ ذ: 1 (باکتریهای مرسوو)تتپیپ( ؿیبهب اػیششدش ک ک ع د ه یی و فیل عآ فل ا ضا اػشبفیل ک ک ع ا سئ ع اسگب یؼن بی گیشم ه فی هخشلف 2 (ویروسهای تنفسوی اص مولی RSV آ فلی ا ضا دیبساآ فل ا ضا. 3 (باکتریهای غپرتپیپ(: هبیک دالػوب د ه یی کالهیذیبد ه یی
طزاحي يک روػ مولتیپلكظ پي عي آر بزای شناعايي باکتزی های شايع عامل عفونت های تنفغي عباط رمي و همكاران/ 78 کالهیذیب دؼیسبػی گ یبی هخشلیف لظیی ال. اط آسیذیکجییب رش سفب ر بی ػالئن ثبلی ی دس ػ دػش دبس طى بی فی اػیز. الجشی ػ اهب دیرشی ن هییس ا یذ ثبػیا ایجیبدLRTI ؿی ذ اص مولی قییبس ییب ثییبکششی ییبی ثییی یی اصی هبیک ثییبکششی م ییب هثب.س ثشکل صیغ) 3-2 (. د هی ی ییب د ه ییز الش یبة داخلیی دیشاه ی فضب بی آل ئ لی سی اػز) 4 (. ایي ثیوبسی اص ػف ز یبی هجبسی س فؼی سحشب ی اػز ک ثکب ػوذ اص هؼضالر ث ذاؿیشی دس ػشاػش م بى ثوبس هی س د. هشگ هیش بؿیی اص د هی ی یبی ثبکششییییبیی 2/7 ثشاثیییش ثییییشش اص د هییی ی یییبی یش ػیییی هیثبؿذ) 4 (.دبس طى بی هؼجت د ه ی س ؽ بی اکشؼیبة آ یب شبیج ثبلی ی هخشلف سیخ بی هشفب ر د ه ی ه جش ث ؿ بخز ػی سیخ اص ایي ثیوبسی ؿذ اػز: 1( د ه ی یبی اکشؼیبثی اص مبهؼی 2( د ه ی یبی اکشؼیبثی اص ثیوبسػیشبى 3( د هی ی دس ثیویبساى ػیشک ة ایو یی) 1 (. حیذ د 40 سیب 60 اص اییي ثیوبسی یب ثیذ ى سخیص ثبقی هیهب ذ ک ػلز آى ػذم هشامؼ ثیوبس ػذم اسمیبع دضؿ یض دس اخشیبس قشاس ذادى و ی ثیشای آصهیبیؾ هییثبؿیذ. دلیب دیرش حؼبػیز اخشیبدیز هشغیش دس س ؽ بی سخیییی هؼو ل اػز) 5 (. اکثش ایي ػف ز ب ثط س ه فقییزآهییضی س ػی ػ اهب ضذ هیکش ثی قبثب دسهبى ؼیش ذ) 6 (. سؼیییي ییز ػ اهیب ایجبدک ذ د ه ی داسای ا ویز ثبالیی هخی دب اص ظش ث ذاؿیز ػو هی ثش به سیضی م ز دسهبى ثیوبسی هیثبؿذ) 2 (. سؼیز یبی سخییی قؾ حیبسی سا دس ا شخبة داس ی ضذهیکش ثی ه بػیت شیج هطل ة ثبلی ی ثبصی هیک یذ) 6 (. دس اکثیش هطبلؼیبر ثییششیي هییییی اسد ایجبدک یییییذ د هییییی ی اکشؼیییییبثی اص مبهؼییییی سااػششدش ک ک عد ه ی دس سوبم گیش یبی ػی ی حشیی ک دکیبى ؿبهب هییؿی د) 5-4, 7(. دس د هی ی یبی اکشؼیبثی اص ثیوبسػیشبى اسگب یؼن بی گشم ه فی هثب کلجؼیال د ه ی ػی د ه بع گیشم هثجیز هثیب اػیشبفیل ک ک ع ا سئی ع دس ثییشش هی اسد هیب ذ ؿذ ا ذ) 4, 10-8(. اص س ؽ بی هش ػی ثیشای سیخیص د هی ی ث یش گییشی ؿیذ اػیز هیثال مذاػیبصی ثیبکششی اص خی ى هیبیغ م ت) Pleural ( ثی دؼی ثبفز سی ثش ک ػک دی ثش ک آل ئی الس ال اط) BAL ( کز آى) 11 (. شیبیج کیز خلی خی ى هوکیي اػز سب 3-2 س ص دس دػششع قشاس ریش ذ. سؼز بی ػش ل طی ییض سب ه قؼی ک و د م ػشم ثؼذ اص 3-2 فشی گشفشی ی ذ قبثیب اػشویبد هؼشجیش یؼیش ذ) 12 (.هشیذ بیی ثیش دبیی سکثییش اػییذ بی کلئیی NAAT(nucleicacidamplificationtests) طشاحیی ؿیذ اػز ک اص ظش دحز) accuracy ( حؼبػییز صهیبى م اثیذ ی ث ی ؿذ ا ذ ثشای سدیبثی دبس طى بی س فؼی هی سد اػیشفبد قیشاس هیگیش ذ) 13 (.س ؽ ه لشیذلکغ دی ػی آسیکی اص ا ی اع س ؽ یبی PCR اػز ک دس آى د یب د ذ ػکب غ ذ سا ثیب اػیشفبد اص د یب د ذ مفز دشایوش دس ی اک ؾ احذ هیسی اى سکثییش داد. اییي س ؽ هیس ا ذ ث ط س قبثب س م ی حفظ صهبى کیب ؾ صحویز ضی دس آصهبیرب ه سد اػشفبد قشاس گیشد) 13 (. هب دس اییي هطبلؼی ث طشاحی ث ی ػبصی ی س ؽ هی لشیذلکغ دیی ػیی آس ثیشای ؿ بػبئی وضهیبى د یبس هی سد اص ه وشیشیي ثیبکششی یبی س فؼیی هییدیشداصین. اییي ثیبکششی یب ؿیبهب:اػیششدش ک ک عد ه یی هبیک ثبکششی مس ثشکل صیغ ثشای د ه ی یبی اکشؼیبثی اص مبهؼی اػیشبفیل ک ک عا سئی ع کلجؼییالد ه ی ثیشای د هی ی یبی اکشؼبثی اص ثیوبسػشبى هیثبؿ ذ. مواد و روػها و ػ ی یب دس هحیی کیز ثالدآگیبس کیز داد ؿیذ ذ. هحی بی حب ی اػیشبفیل ک کلجؼییال دس دهیبی 37 دسمی ثی هیذر یی ؿیجب س ص ا ک ثی ؿیذ ذ. د ه کی ییض دس هحیی ثالدآگبس دهبی 5 37 دیاکؼیذکشثي ث هیذر یی ؿیجب س ص ا ک ث ؿذ. ػ ی ه سد اػشفبد هبیک ثبکششی م ییض دس ثخیؾ ػیب سحقیقبر سی ی دس هحی ل ى اؿشبیي ث هذر د بس فش کیز داد ؿذ.دس ایي هطبلؼ طى بیی اص ثبکششی ب ا شخیبة ؿیذ ذ کی دس ثبکششی ه سد ظش ه حیشث فشد ثی د ییض دس سویبم ػی ی یبی آى ثبکششی ثی سر داخلی حفبظز ؿذ حض س داؿیش ثبؿی ذ. اییي طى ب دس هطبلؼبر گ بگ ی ثشای ؿ بػیبئی اییي ثیبکششی یب هی سد ثییی سر اخشیبدییی هیی سد اػییشفبد قییشاس گشفشیی ا ییذ. ثییشای اػششدش ک د ه یی اػیشبفیل ک ک عا سئی ع کلجؼییالد ه ی هبیک ثییبکششی مس ثشکلیی صیغ ثیی سشسیییت طى ییبی اخشیبدییی pnca gyra nuc plyه سد ذ قشاس گشفز. ایي طى یب اص ػیبیز NCBI اػشخشاد دشایوش بی ا شخبثی اص هقبلی ثیب آ یب دی ؿیذ. ثشخی اص دشایوش ب یض ثش ویي هج ب طشاحی د ؿذ)مذ ل 1(. 3 توالی پرایمر 5 جدول 1: س الی دشایوش بی ه سد اػشفبد نا) باکتری :F GTCTGGCGTATGTTGACGATGAA کلجؼیال د ه ی R:GTTTCTGCAGACGCAGATCCAGA :F GCGATTGATGGTGATACGGTT اػشبفیل کک ع ا سئ ع R: AGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC :F CCCACTCTTCTTGCGGTTGA اػشبفیل کک ع د ه ی R: TGAGCCGTTATTTTTTCATACTG F:ATGCGGGCGTTGATCATCGTC هبیک ثبکششی م س ثشکل صیغ طول محصول 816 279 209 186 427 R: CGGTGTGCCGGAGATGCGG F:GCAAACAGGATTAGATACCC R: CGTCATCCCCACCTTCCTCC 16S هشش
/ 73 مجله پششكي دانشگاه علوم پششكي و خدمات بهداشتي درماني تبزيش دوره 63 شماره 4 مهز وآبان 3636 صفحات 73-33 اییي دشایوش یب سوبهیب دس ػیبیز NCBI ثالػیز ؿیذ الر یبی 6( ه بػجی اص ظش اخشیبدیز هب ذ ؿذ. وچ یي ثشای د کیشدى آ بلیض آ ب اص ظش دسدیذ سیکیب لی ح مفیزؿی ذگی ثبص یب ΔG غیش اص شمافضاس generuner ػبیزMPCR ث ش گیشی ؿذ. ثؼذ اص سؿیذ ثیبکششی یب دس هحیی یبی کیز ثؼیذ اص دش ػی اػیشخشاد DNA ثیب اػیشفذ اص کییز اػیشخشاد peq-lab آصهی ى singlepcr ثشای س س ثبکششی بی ه سد هطبلؼ طجیق دش سکیب صیش ا جبم ؿذ:ثؼذ اص ا جبمPCR )ؿشای دهبیی اک ؾ: 95 دسمی 30 ثب ی 94 دسم 30 ثب ی 72 دسم 70 ثب ی سؼذاد 45 ػییکب(ثشای ػکب غ ه سد ظش ش ثیبکششی اػیشخشاد یبی DNA هخلی طی اص کل ییی ییبی دوتووا ی)کلجؼیییال اػییشبفیل ک ()گییش A( سوو تووا ی)کلجؼیییال اػییشبفیل ک د ه کیی ()گییش B( چهارتووووا ی)گییییش C (ا جییییبم گشفییییز سییییب س ییییذ ث ی ػبصیMultiplexPCR ػ ی ب ثب ایي سشسیت د سر گییشد. ثی ط س مذاگب س ذ ث ی ػبصی ش ی اص ایي ػ هخلی DNA دس هشاحب کلی صیش ث ا جبم سػیذ)ثجض هشحل 5(: 1( ا شخبة حذاقب هششیبل ه سد یبص ثشای حیی ل هطلی ةسیشیي ثب ذ ب 2( ا شخیبة هطلی ةسیشیي دهیبی آ یلی ی ثیشای ثذػیز آ سدى ث ششیي ثب ذ ب حز ثب ذ بی کبرة احشوبلی ثؼیذ اص ا جیبم گشادیب ز دی ػی آسه بػتسشیي دهبی آ یلی 62 دسم سؼییي ؿذ.. 3( ا شخبة سؼذاد ػیکب یبی ه بػیت) 45 ( ثیشای ثشطیش ؿیذى هکب کوش ث دى یب دشس ث دى ثیؾ اص حذ ثب ذ ب 4( ا شخبة هذرصهبى ه بػت ثشای extention 5( ثشسػی ػ جؾ حذاقب حجن سقز DNA قبثب ؿ بػیبئی س ػیی ایییي س ؽ سخییییی سقییز ییبیی ػییشیبلی اص ػ ػذب ؼی ى بی ش ی اص ػ هخل هیکش ثی ثب هشمؼییز د ه فبسل ذ cfu/ml( 10 6( 8 ثش دبی ی 0/1 سب 5 سقیز دس ػشم فیضی ل طی اػششیب س ی ؿذ ک دس شیج دس آخیشیي سقیز 10 6 4 cfu/ml ػل ل ثیبکششی می د داسد)ؿیکبDNA.)1 ای ایي 15 ل ل اػشخشاد الکشش ف سص ا جبم ؿذ)ؿکب 2(. ا جبم ه لشیذلکغ دی ػی آس ثؼذ اص ا شخبة نخ اى کیشدى دهبی آ یلی هیضاى دشایوش ب دیرش هششییبل PCR 5 سقیز DNA اص ش ػ گش ثبکششی ک س ی ؿذ ث د ه سد آصهیبیؾ ه لشیذلکغ دی ػی آس قشاس گشفز. سؼییي س الی.)Sequencing( يافته ها اػشخشاد DNAثب اػشفبد اص کییز اػیشخشاد DNA ا جیبم گشدیذ ػذغ آصه ى دی ػی آس ث دی سر مذاگب ی ثیشای س س کل ی یب ثی ا جیبم سػیذ)ؿیکب ؿیوبس 1 (.دیغ اص هب ذ ی ثب ذ بی اخشیبدیی گشادیب یز دیی ػیی آس ثیشای کل ی ب ث سشسیت قبثب هب ذ دس ؿیکب 1 ة گزاؿیش ؿیذ. سؼز بی ه لشیذلکغ دی ػی آس ثشای گش یبی سشکیجیی A سب C دس 5 سقیز ثی ا جیبم سػیذ)ؿیکب 2(. گیش A ؿیبهب ثبکششی بی د ه کی bp( )209 اػیشبفیل ک bp( )279 کلجؼیال) bp 816( هیی ثبؿذ)ؿیکب 2 الیف(. گیش B ؿیبهب ثبکششی بی ثی هبیک ثیبکششی م) bp 186( کلجؼییال) bp 816( د ه کیییی bp( )209 اػییییشبفیل ک bp( )279 هییییی ثبؿذ)ؿیییکب 2 ة(. گیییش C ؿیییبهب ثیییبکششی یییبی هبیک ثبکششی م کلجؼیال د ه ک اػیشبفیل ک وچ ییي ک شیییشل هثجیییز طى 16 s ثیییبکششی یییب سحیییز ػ ییی اى )427bp(universal هی ثبؿذ)ؿکب 2 د( ثؼذ اص ػز کشدى س ؽ ه لشیذلکغ دی ػی آس دس و یبی رکییش ؿییذ ک شییشل هثجییز ثب ییذ بی اخشیبدییی دس طل الکشش ف سص هب ذ گشدیذ. ثب ذ بی ه سد ظش اص طل اػیشخشاد گشدیذ)ثب اػیشفبد اص کییز اػیشخشاد اص طل کییبطى( م یز سبییییذ ییبیی ثییشای ػک ئ ؼییی اسػییبل گشدیییذ. شییبیج ػک ئ ؼیی ثیب فشه یبی FASTAی ػیکب غ یب دس ػیبیز NCBI هقبیؼ ؿذ ک دس و آ ب ثیؾ اص 90 سبث می د داؿز. دس اقغ ػک ئ ؼیی دیحز ا جیبم دیی ػیی آس م د ثب ذ بی اخشیبدی سا سبییذ کشد. )7 ة الف شکل 1 :الف( شبیج PCR ػکب غ بی حبدب اصDNA اػشخشاد ؿذ ث س ؽ کیز اػشخشادDNA ثب ذ بی ؿوبس 1 سب 5 ث سشسیت هشث ث هبیک ثبکششی م) bp 186( کلجؼیال) bp 427bp(universal 816( ( د ه ک bp( 209( اػشبفیل ک bp( 279( هیثبؿ ذ.ة( الکشش ف سص اص آصه ى PCR-gradiant اک ؾ بی a سب f ث سشسیت دس دهب بی آ یلی 58/7 دسم 59/5 61/ 62/ 62/5/ 63/ اک ؾ بی 1 سب 9 یض ث سشسیت ثب دهبی آ یلی 57 دسم 58 /58/7 /59/5 /61 /62 /62/5 /63 /64 ث ا جبم سػیذ.
طزاحي يک روػ مولتیپلكظ پي عي آر بزای شناعايي باکتزی های شايع عامل عفونت های تنفغي عباط رمي و همكاران/ 36 د ة الف شکل 2 :الف( شبیج Multiplex-PCR ثبکششی بی گشA : د ه ک bp( 209( اػشبفیل ک bp( 279( کلجؼیال) bp 816( هبسکش ث سشسیت اص دبییي ث ثبال) 1000-900-800-700-600-500-400-300-200-100 (. ة( شبیج PCR گشB :هبیک ثبکششی م) bp 186( کلجؼیال) bp 816( د ه ک )209bp( اػشبفیل ک bp(.)279 د( شبیج PCR گش :C هبیک ثبکششی م) bp )186 کلجؼیال) bp bp(universal )816 427 ( د ه ک bp( )209 اػشبفیل ک 279bp( بحث دس اییي هطبلؼی هیب اص س ؽ MultiplexPCR ثیشای سیخیص وضهییبى اػییششدش ک ک عد ه ییی هبیک ثییبکششی مس ثشکلیی صیغ اػییشبفیل ک ک عا سئیی ع کلجؼیییالد ه ی اػییشفبد کییشدین. هطبلؼبر هشؼذدی اص اییي س ؽ ثیشای سیخیص ػ اهیب هخشلیف ػف ز بی ػیؼشن س فؼی سحشب ی اػین اص ػف یز یبی آسیذیی سیذی اػشفبد کشد ا ذ. دس اقغ هطبلؼ ی هب سبییذک ذ ی هطبلؼیبر آ بى ث د اػز. دس ریب ث ثشسػی ثشخی اص اییي هطبلؼیبر دشداخشی هیؿ د: س سهي وکیبساى دس ػیبل 2011 ؿ بػیبیی وضهیبى گ ی بی ثبکششیبیی هبیک دالػوب د ه یی کالهییذیب د ه یی لظیی ال د هی فیال سا دس و ی یبی کلی یکیی ثی س ؽ MultiplexPCR ثشسػی کشد ذ. دس ایي هطبلؼ ک دس آسال شبی اهشیکیب ا جیبم ؿیذ اص ػکب غ بی اخشیبدی MP181 دس هبیک دالػوب د ه یی Pan- legدس لظی ال د ه فیال ک دس طى ssra م د داؿیز CP-argدس کالهیذیب د ه ی ک دس طى کذ ک ذ ی دیش سئیي هوب ؼیز ک یذ ی آسط یي قشاس داؿز ث ش گیشی ؿذ. کیبسائی یبیی دس اییي هطبلؼی %90 سب %100 ث د. دس ػیبل 2008 لی ض وکیبساى گ ی یبی ثبکششیییبیی هبیک دالػییوب د ه ییی کالهیییذیب د ه ییی لظییی ال د ه فیال سا دس و بی ثیبلی ی دس دا یرب آ شی سح سشل یذ ثی س ؽ MultiplexPCR ه سد ثشسػی ؿ بػبیی قشاس داد ذ. دس اییي هطبلؼ ک ثش س ی 147 ثیوبس هجشال ثی د هی ی اکشؼیبثی اص مبهؼی د سر گشفز اص طى بی) nisehdatyc ( p1 ثیشای هبیک دالػیوب د ه یی قطؼی ی pst1 ثیشای کالهییذیب د ه یی طىmip ثیشای لظی ال د ه فیال ث ش گیشی ؿذ.دس ػبل 2006 کیبیغ وکیبساى ث ؿ بػبیی گ بی ثبکششیبیی د ه ک و فیلی ع آ فلی ا ضا ه ساکؼال کبسبسالیغ دس و بی ػیؼشن س فؼی سحشیب ی ثی طی س وضهبى دشداخش ذ. آ ب دس ایي هطبلؼی کی دس دا یرب کبس لی ؼیکب د سر گشفز اص طى بی د ه لیضیي ثیشای د ه کی ف هیبسار سد کشیبص ثیشای و فیلی ع آ فلی ا ضا ompb ثیشای ه ساکؼیال کبسبسالیغ اػشفبد کشد ذ. سک ی MultiplexPCR دس ایي هطبلؼ ثیب کبسایی %100 ث شیجی سػییذ.یبمیبى ا ی وکیبساى دس ػیبل 2008 ی س ؽMultiplexPCRسا ثشای ؿ بػبئی وضهیبى ػ اهیب ثبکششیبل سیذی آسیذی د ه ی دس ک دکبى ث ی ػیبصی کشد یذ. دس ایي هطبلؼی ثیبکششی یبی اػیشبفیل ک ک عا سئی ع د ه کی اػششدش ک ک عدبی طى ه ساکؼیالکبسبسالیغ و فیلی عآ فلی ا ضای ثیییذ ى کذؼییی ل Hip ث سدسالدشسییی صیغ کلجؼییییالد ه ی لظی الد هیییییی فیال کالهیذیبد ه ییییییی هبیک دالػییییییوب هبیک ثبکششی مس ثشکل صیغ ثی سشسییت اص طشییق طى یبی ply nuc s-23s16 pst-1 mip gyra porin capb gyrb copb pare sen-reg ه سد ؿ بػبئی قشاس گشفش ذ.دس اکثش هطبلؼبر ثشسػیی ؿیذ ثیشش سوشکض ثش ثبکششی بی ػبهب ػف ز بی س فؼی آسیذیی ثی د. دس حبلیکی دس هطبلؼی ای کی هیب ا جیبم دادیین ف کی ع ثیش س ی ثبکششی بی ػبهب د ه ی بی سیذی ؿذیذ ثؼییبس ؿیبیغ ثی د اػز.دس ه سد هبیک ثبکششی م ییض هطبلؼیبر ا یذکی دس هی سد ا جیبم MultiplexPCR ثیشای ؿ بػیبئی آى دس ک یبس ثیبکششی یبی دیریش ثی سر وضهبى ه م د اػز. ػکب غ بیی ک دس هطبلؼ هب ثیشای ؿ بػبیی یذ قیشاس گشفیز ییض گب یب ه حییشث فیشد ثی د. هیثال دشایوش بی ه سد اػشفبد ثشای ؿ بػیبیی طى gyra کلجؼییال دس یشم افضاس طشاحی د ؿذ. نتیجهگیزی ساحز ػبدگی دش صهیبى کین دس ا جیبم MultiplexPCR دس سخیص وضهبى ػ اهب ػف ی س فؼی رکیش ؿیذ یی هضییز ػویذ هحؼی ة هییؿی د. اص اییي س هییسی اى اص اییي س ؽ دس سخیص ایي ػ اهب دس و بی ثیبلی ی ین ث یش ثیشد. دس اقیغ هطبلؼ هب هقذهی ای ثیش ا جیبم اییي س ؽ دس و ی یبی کلی یکیی هحؼ ة هیگشدد. تقديز و تشكز ایي دش ط ثب ث دم ا ؼشیش دبػش س ایشاى د سر گشفشی اػیز. ثذیي ػیل اص کلی وکبسا ی ک دس ثخؾ هیکش ةؿ بػی ا ؼیشیش دبػش س ایشاى هب سا یبسی و د ذ بیز سکش قذسدا ی سا داسین.
/ 33 مجله پششكي دانشگاه علوم پششكي و خدمات بهداشتي درماني تبزيش دوره 63 شماره 4 مهز وآبان 3636 صفحات 73-33 References 1. Woodhead M. Community-acquired pneumonia in Europe: causative pathogens and resistance patterns.european Respiratory Journal 2002;36: 20-27. 2. Daley JWaAJ. Microbiological aspects of bacterial lowerrespiratory tract illness in children:typical pathogens. Paediatric Respiratory Reviews 2007; 8:204-211. 3. Yu-Shen Chen P-YL, Yung-Feng Huang, Chiao-Shan Chen, Ling-Hui Chiu, Nuan-Ya Huang, Kai-Sheng Hsieh, YaoShen Chen. Comparison of diagnostic tools with multiplexpolymerase chain reaction for pediatric lowerrespiratory tract infection: A single center study. Journal of Microbiology, Immunology and Infection 2012;xx:1-6. 4. Daum SECaRS. Bacterial Pneumonia, Lung Abscessand Empyema. Respiratory Infections 2007;12:501-553. 5. Vladimir Kaplan M, Derek C. Angus MD. Community-acquired pneumonia in the elderly. Critical Care Clinics 2003;19: 729-748. 6. Bartlett JG. Diagnostic Tests for Agents of Community-Acquired Pneumonia. Clinical Infectious Diseases 2011;52:296-304. 7. Keith P, Klugman SAM, Werner C. Albrich. Novel Approaches to the Identificationof Streptococcus pneumoniae as the Causeof Community-Acquired Pneumonia. Clinical Infectious Diseases 2008;47:202-206. 8. Jeffrey C, Hageman TMU, John S, Francis Daniel B. Jernigan J,Gary Wheeler, et.al. Severe CommunityacquiredPneumonia 8. Due to Staphylococcusaureus, 2003 04 Influenza Season. Emerging Infectious Diseases 2006;12:894-899. 9. Carmen Gonza lez MR, Jose Romero-Vivas MGl, Picazo ajj. Bacteremic Pneumonia Due to Staphylococcusaureus: A Comparisonof Disease Caused by Methicillin-Resistant and Methicillin- SusceptibleOrganisms. Clinical Infectious Diseases 1999;29:1171-1177. 10. Jenney AW, Farn JL, Wijburg OL,McGlinchey A. Seroepidemiology of Klebsiella pneumoniae in anaustralian TertiaryHospital and Its Implications for Vaccine Development. Journal of Clinical Microbiology 2006;44:102-107. 11. Nolte FS. Molecular Diagnostics for Detection of Bacterial andviral Pathogens in Community-Acquired Pneumonia. Clinical Infectious Diseases 2008; 47:123-126. 12. Rob Bohte RvF, Pieter J van den Broek. Aetiology of community-acquired pneumonia: aprospective study among adults requiringadmission to hospital. Thorax 1995; 50: 543-547. 13. Markoulatos NS, Moncany M. Multiplex Polymerase Chain Reaction: A Practical Approach. Journal of Clinical Laboratory Analysis 2002;16:47-51.