Βέλτιστες πρακτικές για τη χρήση του συστήματος υγρής χρωματογραφίας Agilent

Transcript

1 Βέλτιστες πρακτικές για τη χρήση του συστήματος υγρής χρωματογραφίας Agilent Τεχνικό σημείωμα Βέλτιστες πρακτικές - Τεχνικό σημείωμα Αυτό το τεχνικό σημείωμα περιγράφει τις βέλτιστες πρακτικές για τη χρήση του συστήματος υγρής χρωματογραφίας Agilent. Περιεχόμενα ιαχείριση 2 Τρόπος χειρισμού διαλυτών 2 Τρόπος προετοιμασίας δειγμάτων 3 Καθημερινές/εβδομαδιαίες εργασίες 4 Ενεργοποίηση/Απενεργοποίηση του συστήματος 5 Ενεργοποίηση του συστήματος 5 Απενεργοποίηση του συστήματος 6 Συστάσεις για απαερωτές 7 Συστάσεις για αντλίες 8 Συστάσεις για αντλίες με MCGV 8 9 Συστάσεις για δειγματολήπτες 14 Συστάσεις για αντλίες και δειγματολήπτες με προαιρετικό φίλτρο σε σειρά 15 Συστάσεις για στήλες 16 Συστάσεις για ανιχνευτές 17 Επιπρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τις αντλίες 1290 Infinity και 1290 Infinity II 18 Agilent Technologies

2 ιαχείριση Τρόπος χειρισμού διαλυτών ιαχείριση Τρόπος χειρισμού διαλυτών Χρησιμοποιείτε μόνο καθαρές φιάλες. Χρησιμοποιείτε μόνο φιάλες από βοριοπυριτικό γυαλί. Εκπλύνετε τη φιάλη με τον επιθυμητό διαλύτη πριν την επαναπληρώσετε. Οι φιάλες μπορούν να επιμολυνθούν με απορρυπαντικά από το πλυντήριο πιάτων. Αλλάζετε τους διαλύτες με βάση το νερό καθημερινά. Η ανάπτυξη άλγης μπορεί να μπλοκάρει τον απαερωτή ή τα φίλτρα. Η καθίζηση αδιάλυτων αλάτων μπορεί να μπλοκάρει τα φίλτρα ή τα τριχοειδή. Επιλέγετε τον όγκο του διαλύτη ώστε να χρησιμοποιείται εντός 1-2 ημερών. Χρησιμοποιείτε μόνο διαλύτες ποιότητας HPLC και νερό φιλτραρισμένο με φίλτρα 0,2 μm. Τα υπολείμματα ή οι μολύνσεις μπορεί να μπλοκάρουν τα φίλτρα ή τα τριχοειδή. Τοποθετείτε στις φιάλες σωστές ετικέτες στις οποίες αναγράφονται το περιεχόμενο και η ημερομηνία πλήρωσης/λήξης της φιάλης. Χρησιμοποιείτε φίλτρα εισόδου διαλύτη για να προστατέψετε το σύστημα από την είσοδο σωματιδίων. Μείωση του κινδύνου ανάπτυξης άλγης: χρησιμοποιείτε καστανόχρωμες φιάλες για υδατικούς διαλύτες, αποφεύγετε την άμεση έκθεση στο ηλιακό φως ή τυλίγετε τις φιάλες σε φύλλο αλουμινίου. ΠΡΟΣΟΧΗ Μόλυνση διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού Για την αποφυγή μόλυνσης, μην επαναχρησιμοποιείτε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού. Αλλάζετε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού μία φορά την εβδομάδα. Συνιστάται ιδιαίτερα η χρήση Κιτ κεφαλής φιάλης πλύσης στεγανοποιητικού ( ) Επιπλέον μετρήσεις με ακετονιτρίλιο (ACN) Φιλτράρισμα ACN με τη χρήση νάιλον φίλτρου 0,45 μm. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Το φιλτράρισμα μέσω νάιλον φίλτρων δεν συνιστάται για LCMS υψηλής ευαισθησίας. Γεμίστε καστανόχρωμες φιάλες με ACN και κρατήστε την ποσότητα στο ελάχιστο επίπεδο για να αποτρέψετε τυχόν φωτοχημικές αντιδράσεις και οξείδωση. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Προσθέστε 5 10 % νερό στο ACN, ειδικότερα για τις εφαρμογές LCMS, όταν υπάρχει 0,1 % μυρμηκικό οξύ (εάν είναι εφικτό). Εκπλένετε το σύστημα σε μηνιαία βάση με ζεστό νερό (60 70 C ( F)) - 1 L με ρυθμό 2 ml/min για την εξάλειψη των ιχνών από τα προϊόντα της αντίδρασης ACN. 2

3 ιαχείριση Τρόπος προετοιμασίας δειγμάτων Τρόπος προετοιμασίας δειγμάτων ΠΡΟΣΟΧΗ Πιθανή καθίζηση δείγματος Επιβεβαιώστε ότι το δείγμα είναι πλήρως διαλυτό τόσο στον χρησιμοποιούμενο διαλύτη δείγματος όσο και στην κινητή φάση στις αρχικές συνθήκες. Προσαρμόστε τις αντιστοιχίσεις του διαλύτη δείγματος όσο το δυνατόν πιο κοντά στην προτεινόμενη κινητή φάση για να αποφύγετε την καθίζηση. Φιλτράρετε, μεταγγίστε ή φυγοκεντρίστε το δείγμα για να το διαχωρίσετε από τα αδιάλυτα στερεά. Επιβεβαιώστε ότι ο διαλύτης δείγματος είναι απαλλαγμένος από σωματίδια. 3

4 Καθημερινές/εβδομαδιαίες εργασίες Τρόπος προετοιμασίας δειγμάτων Καθημερινές/εβδομαδιαίες εργασίες Καθημερινές εργασίες Αντικαταστήστε τους διαλύτες και τις φιάλες διαλύτη για τις κινητές φάσεις με βάση το νερό/ρυθμιστικό διάλυμα. Αντικαθιστάτε τους διαλύτες και τις φιάλες διαλύτη για την οργανική κινητή φάση το αργότερο κάθε δεύτερη ημέρα. Ελέγξτε την παρουσία διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού. Καθαρίστε κάθε δίαυλο με φρέσκο διαλύτη με ρυθμό 2,5 3 ml/min για 5 min. Εξισορροπήστε το σύστημά σας με τη σύνθεση της εφαρμογής σας για 15 min. Χρησιμοποιήστε διαμόρφωση για συστήματα Εβδομαδιαίες εργασίες Αλλάξτε διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού (10 %/90 % ισοπροπανόλη/νερό) και φιάλης. Εκπλύνετε όλους τους διαύλους με νερό, με ρυθμό 2,5 3 ml/min για 5 min την απομάκρυνση των εναποθέσεων αλάτων, εάν χρησιμοποιήθηκαν εφαρμογές με ρυθμιστικό διάλυμα. Επιθεωρήστε τα φίλτρα διαλύτη για ρύπους ή αποφράξεις. Καθαρίστε τα ή αλλάξτε τα, εάν δεν υπάρχει ροή από τη γραμμή διαλύτη κατά την αφαίρεσή τους από την είσοδο απαέρωσης. 4

5 Ενεργοποίηση/Απενεργοποίηση του συστήματος Ενεργοποίηση του συστήματος Ενεργοποίηση/Απενεργοποίηση του συστήματος Ενεργοποίηση του συστήματος Ενεργοποιήστε την αντλία Χρησιμοποιήστε νέα ή διαφορετική κινητή φάση (κατά περίπτωση). Καθαρίστε κάθε δίαυλο με ρυθμό 2,5 3 ml/min για 5 min. Ανοίξτε τη βαλβίδα εκκένωσης (1260) ή χρησιμοποιήστε την εντολή εκκένωσης (1290). Εξισορροπήστε το σύστημά σας με τη σύνθεση της εφαρμογής σας για 15 min. Χρησιμοποιήστε διαμόρφωση για συστήματα Ενεργοποίηση του δειγματολήπτη Καθαρίζετε τον αυτόματο δειγματολήπτη καθημερινά, πριν και μετά την ανάλυση δείγματος, ειδικότερα εάν χρησιμοποιείτε ρυθμιστικά διαλύματα. Ρυθμίστε τη ροή στην απαιτούμενη τιμή της εφαρμογής σας και κλείστε τη βαλβίδα εκκένωσης. Πραγματοποιήστε άντληση για περίπου 10 min. Χρησιμοποιήστε φρέσκο υγρό πλύσης βελόνης ή/και διαλύτες πλύσης της έδρας της βελόνης με αντίστροφη ροή, όπως μεθανόλη ή ακετονιτρίλιο και μίγματα νερού χωρίς ρυθμιστικό διάλυμα. Βεβαιωθείτε ότι τα φιαλίδια περιέχουν αρκετό διάλυμα δείγματος για όλες τις ενέσεις. Ενεργοποίηση του ανιχνευτή Προθερμάνετε τη λυχνία για τουλάχιστον 1 h. Μόνο για τους ανιχνευτές RI: εκπλύνετε την πλευρά αναφοράς και την πλευρά δείγματος με φρέσκο διαλύτη που χρησιμοποιείται για την τρέχουσα εφαρμογή. 5

6 Ενεργοποίηση/Απενεργοποίηση του συστήματος Απενεργοποίηση του συστήματος Απενεργοποίηση του συστήματος ΣΗΜΕΙΩΣΗ Χρησιμοποιήστε 50/50 Μεθανόλη/Νερό ή 2-προπανόλη/Νερό χωρίς πρόσθετα για να αποθηκεύσετε το σύστημα. Μακροχρόνια αποθήκευση της στήλης Εκπλύνετε τη στήλη με τον κατάλληλο διαλύτη που υπάρχει στο εγχειρίδιο στήλης. Αφαιρέστε και σφραγίστε τη στήλη και αποθηκεύστε σύμφωνα με την ορθή εργαστηριακή πρακτική, κατά περίπτωση. Μακροχρόνια απενεργοποίηση του συστήματος Εκπλύνετε το σύστημα με νερό για την απομάκρυνση του ρυθμιστικού διαλύματος. Αφαιρέστε όλα τα δείγματα από τον δειγματολήπτη και αποθηκεύστε σύμφωνα με την ορθή εργαστηριακή πρακτική. Χρησιμοποιήστε τους συνιστώμενους διαλύτες για την αποθήκευση του συστήματος. Απενεργοποιήστε το σύστημα. 6

7 Συστάσεις για απαερωτές Απενεργοποίηση του συστήματος Συστάσεις για απαερωτές ΠΡΟΣΟΧΗ Συμπύκνωση ατμού στο εσωτερικό του απαερωτή Εάν χρησιμοποιείται εσωτερικός ή υψηλής απόδοσης απαερωτής με διαλύτες χαμηλού σημείου ζέσεως, οι ατμοί διαλύτη μπορεί να παρουσιάζουν συμπύκνωση στο εσωτερικό του θαλάμου του απαερωτή, όταν η αντλία κενού είναι απενεργοποιημένη. Καθαρίστε όλους τους διαύλους διαλύτη με 2-προπανόλη και αφήστε την αντλία απαερωτή για δύο ακόμη ώρες. Ελέγχετε τη συμβατότητα του διαλύτη με τον απαερωτή και την εφαρμογή Χρησιμοποιείτε εσωτερικούς ή υψηλής απόδοσης απαερωτές για τυπικές εφαρμογές Χρησιμοποιείτε τον τυπικό απαερωτή (G1322A ή G7122A) για εφαρμογές RI Χρησιμοποιείτε τον τυπικό απαερωτή για εξαιρετικά πτητικούς διαλύτες με πίεση ατμού μεγαλύτερη από 100 mbar σε θερμοκρασία δωματίου. Χρησιμοποιήστε την επιλογή Evacuation Mode εάν η απόδοση απαέρωσης των εσωτερικών απαερωτών δεν είναι βέλτιστη. Μπορείτε να αποκτήσετε πρόσβαση σε αυτόν τον τρόπο λειτουργίας μέσω της οθόνης ελέγχου του οργάνου στο Agilent Lab Advisor. Εικόνα 1 Έλεγχος απαερωτή για εσωτερικούς απαερωτές στο Agilent Lab Advisor ΣΗΜΕΙΩΣΗ Ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη κατά την εκκίνηση της επιλογής Evacuation Mode. 7

8 Συστάσεις για αντλίες Συστάσεις για αντλίες με MCGV Συστάσεις για αντλίες Ελέγχετε την απόδοση των αντλιών σε τακτική βάση. Εκτελείτε προληπτική συντήρηση στο συνιστώμενο διάστημα χρήσης. Προετοιμάστε την αντλία σύμφωνα με τις συστάσεις, όπως περιγράφονται στην ενότητα ενεργοποίησης, για να διασφαλίσετε τη βέλτιστη απόδοση και τη βέλτιστη διάρκεια ζωής. Χρησιμοποιείτε τη λειτουργία πλύσης στεγανοποιητικού σύμφωνα με τις συστάσεις ώστε να διασφαλίζετε τη βέλτιστη απόδοση και τη βέλτιστη διάρκεια ζωής (βλ. παρακάτω). Συστάσεις για αντλίες με MCGV Επιλογή διαύλων για τη βαθμιδωτή βαλβίδα πολλαπλών διαύλων (MCGV) Χρησιμοποιείτε τους κατώτερους διαύλους (A ή/και D) για τα ρυθμιστικά διαλύματα. Εκπλένετε τακτικά όλους τους διαύλους MCGV με 200 ml ζεστού νερού για την απομάκρυνση τυχόν εναποθέσεων αλάτων. Ελέγχετε τη συμβατότητα των ρυθμιστικών διαλυμάτων και των οργανικών διαλυτών για την αποφυγή τυχόν καθίζησης στον θάλαμο ανάμιξης των MCGV. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Κατά την ανάμιξη μη συμβατών διαλυτών, μπορεί να προκύψει καθίζηση αλάτων στο σημείο ανάμιξης, με αποτέλεσμα την παρεμπόδιση της καθοδικής διαδρομής ροής και την πρόκληση βλάβης στα εξαρτήματα. 8

9 Συστάσεις για αντλίες Πλύση στεγανοποιητικού (υποχρεωτική χρήση, όταν είναι εγκατεστημένο) Πλύση στεγανοποιητικού (G4204A, G4220A, όλες οι αντλίες 1260) ΠΡΟΣΟΧΗ Μόλυνση διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού Για την αποφυγή μόλυνσης, μην επαναχρησιμοποιείτε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού. Αλλάζετε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού μία φορά την εβδομάδα. Συνιστάται ιδιαίτερα η χρήση Κιτ κεφαλής φιάλης πλύσης στεγανοποιητικού ( ) Συνιστάται ιδιαίτερα η χρήση της λειτουργίας πλύσης στεγανοποιητικού, όταν χρησιμοποιούνται νερό ή διαλύτες με βάση το νερό όπως ρυθμιστικό διάλυμα, άλλοι μη πτητικοί διαλύτες ή πρόσθετα που θα μπορούσαν να εναποτεθούν στα έμβολα και τα στεγανοποιητικά. Η λειτουργία πλύσης στεγανοποιητικού καθαρίζει αυτόματα αυτά τα εξαρτήματα σε τακτική βάση. Οφέλη της λειτουργίας πλύσης στεγανοποιητικού: Απομάκρυνση σωματιδίων, κρυστάλλων αλάτων και άλλων μη πτητικών υπολειμμάτων από τα έμβολα και τα στεγανοποιητικά, τα οποία μπορούν να βλάψουν το έμβολο και τα στεγανοποιητικά των εμβόλων Λίπανση στεγανοποιητικού/διεπιφάνεια εμβόλου Ψύξη εμβόλων Πλαίσιο διαλόγου πλύσης στεγανοποιητικού στο CDS σας Το πλαίσιο διαλόγου βρίσκεται κάτω από την οθόνη ελέγχου. Συνιστάται η χρήση των ρυθμίσεων που εμφανίζονται στην Εικόνα 2 στη σελίδα 11. Λάβετε υπόψη τα εξής: Οι ρυθμίσεις πλύσης στεγανοποιητικού ΔΕΝ αποτελούν παραμέτρους μεθόδου Η λειτουργία πλύσης στεγανοποιητικού πρέπει να ενεργοποιηθεί εκ νέου χειροκίνητα έπειτα από: εκκαθάριση ενός ΣΦΑΛΜΑΤΟΣ ενεργοποίηση Λειτουργία πλύσης στεγανοποιητικού: ΠΕΡΙΟΔΙΚΗ λειτουργία, για παράδειγμα 0,5 min κάθε 7 min Η ρύθμιση μπορεί να αλλάξει από την οθόνη ελέγχου, βλ. Εικόνα 2 στη σελίδα 11. Οι ρυθμίσεις είναι διαθέσιμες μέσω του μενού επιλογών, βλ. Εικόνα 4 στη σελίδα 11. Η τυπική ροή διαλύτη είναι 0,7 ml/min και κατά προσέγγιση αντιστοιχεί σε μια κατανάλωση 3 ml/h ή 0,5 L/εβδομάδα σε συνεχή λειτουργία 9

10 Συστάσεις για αντλίες Χρησιμοποιήστε 10 % 2-προπανόλη σε νερό 100 % 2-προπανόλη για εφαρμογές κανονικής φάσης Τοποθετήστε τη φιάλη διαλύτη πλύσης και τη φιάλη αποβλήτων κάτω από το όργανο ΜΗΝ ανακυκλώνετε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού Συνιστάται η χρήση του κιτ κεφαλής φιάλης πλύσης στεγανοποιητικού (αριθμός εξαρτήματος Agilent: ) Αλλάζετε διαλύτη σε εβδομαδιαία βάση Μην αναπληρώνετε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού, χρησιμοποιείτε πάντα κατάλληλα καθαρισμένες, νέες φιάλες Δοκιμάζετε την περισταλτική αντλία Αγγίξτε την περισταλτική αντλία με το δάκτυλό σας για να ελέγξετε εάν λειτουργεί η αντλία ή επαληθεύστε την ομαλή ροή διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού ελέγχοντας την εκροή του διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού από τη σωλήνωση 10

11 Συστάσεις για αντλίες Πίνακας 1 Πλαίσιο διαλόγου και λειτουργία πλύσης στεγανοποιητικού G4204A, G4220A όλες οι αντλίες 1260 Εικόνα 2 Ρυθμίσεις πλύσης στεγανοποιητικού (αντλίες 1290 Infinity) Εικόνα 3 Ρυθμίσεις πλύσης στεγανοποιητικού (όλες οι αντλίες 1260) Εικόνα 4 Μενού επιλογών (αντλίες 1290 Infinity) Εικόνα 5 Μενού επιλογών (όλες οι αντλίες 1260) 11

12 Συστάσεις για αντλίες Πλύση στεγανοποιητικού (G7104A, G7120A) ΠΡΟΣΟΧΗ Μόλυνση διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού Για την αποφυγή μόλυνσης, μην επαναχρησιμοποιείτε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού. Αλλάζετε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού μία φορά την εβδομάδα. Συνιστάται ιδιαίτερα η χρήση Κιτ κεφαλής φιάλης πλύσης στεγανοποιητικού ( ) Η αντλία πλύσης στεγανοποιητικού ενεργοποιείται όταν η αναλυτική αντλία μετακινεί το διαλύτη για την απομάκρυνση των εναποθέσεων από τα έμβολα και τα στεγανοποιητικά. Η λειτουργία πλύσης στεγανοποιητικού καθαρίζει αυτόματα αυτά τα εξαρτήματα σε τακτική βάση. Ο αισθητήρας πλύσης στεγανοποιητικού θα ελέγχει συνεχώς την απόδοση του συστήματος πλύσης στεγανοποιητικού και θα προειδοποιεί το χρήστη σε περίπτωση ανίχνευσης οποιασδήποτε ανωμαλίας. Λειτουργία πλύσης στεγανοποιητικού: Το διάστημα πλύσης στεγανοποιητικού έχει ρυθμιστεί σε 30 s κάθε 7 min. Η ροή έχει ρυθμιστεί σε 500 μl/min. Η ακεραιότητα του συστήματος πλύσης στεγανοποιητικού ελέγχεται ανά τακτά διαστήματα Η τυπική κατανάλωση διαλύτη είναι περίπου 1 L ανά εβδομάδα Χρησιμοποιείτε 10 % ισοπροπανόλη σε νερό 100 % ισοπροπανόλη για εφαρμογές κανονικής φάσης Τοποθετήστε τη φιάλη διαλύτη πλύσης και τη φιάλη αποβλήτων κάτω από το όργανο ΜΗΝ αναπληρώνετε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού, χρησιμοποιείτε πάντα κατάλληλα καθαρισμένες, νέες φιάλες Συνιστάται η χρήση του κιτ κεφαλής φιάλης πλύσης στεγανοποιητικού (αριθμός εξαρτήματος Agilent: ) Αλλάζετε διαλύτη σε εβδομαδιαία βάση ΜΗΝ ανακυκλώνετε τις φιάλες διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού 12

13 Συστάσεις για αντλίες Το σύμβολο EMF γίνεται κίτρινο μόλις ο αισθητήρας πλύσης στεγανοποιητικού των αντλιών ανιχνεύσει κάποια ανωμαλία Αλλάξτε το διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού και ενεργοποιήστε τη λειτουργία προετοιμασίας πλύσης στεγανοποιητικού από το μενού επιλογών (βλ. Εικόνα 6 στη σελίδα 13) Εικόνα 6 Μενού επιλογών Ελέγξτε τη σωλήνωση πλύσης στεγανοποιητικού και το φίλτρο για τυχόν συστροφές, διαρροές ή εμφράξεις Ελέγξτε τις σωληνώσεις αποβλήτων για εμφράξεις και βεβαιωθείτε ότι τα απόβλητα διαλύτη αποστραγγίζονται ελεύθερα: Εάν προκύψει συσσώρευση αποβλήτων διαλύτη στο σωλήνα, ο αισθητήρας δεν μπορεί να λειτουργήσει σωστά Ελέγξτε εάν η περισταλτική αντλία λειτουργεί σωστά Αγγίξτε την περισταλτική αντλία με το δάκτυλό σας για να βεβαιωθείτε ότι η αντλία λειτουργεί ή Επαληθεύστε την ομαλή ροή διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού ελέγχοντας την εκροή του διαλύτη πλύσης στεγανοποιητικού από τη σωλήνωση 13

14 Συστάσεις για δειγματολήπτες Συστάσεις για δειγματολήπτες Καθαρίζετε τον αυτόματο δειγματολήπτη μετά την ανάλυση δείγματος. Απομακρύνετε το ρυθμιστικό διάλυμα με νερό ποιότητας HPLC. Απομακρύνετε τις επιμολυντικές ουσίες χρησιμοποιώντας έναν ισχυρό διαλύτη, για παράδειγμα καθαρό ακετονιτρίλιο. Εναλλάσσετε τις επιλογές Mainpass (Κύρια διαδρομή) και Bypass (Παράκαμψη) ενώ εκτελείτε καθαρισμό. Χρησιμοποιείτε πάντα φρέσκο διαλύτη πλύσης για τη βελόνη ή τη λειτουργία πλύσης της έδρας. Απομακρύνετε το ρυθμιστικό διάλυμα με νερό ποιότητας HPLC. Απομακρύνετε τις επιμολυντικές ουσίες χρησιμοποιώντας έναν ισχυρό διαλύτη, για παράδειγμα καθαρό ακετονιτρίλιο. Τοποθετήστε τη δεξαμενή διαλύτη πλύσης για την πλύση της βελόνας (προαιρετικά: πλύση έδρας βελόνης) στο θάλαμο διαλυτών. Χρησιμοποιήστε κατάλληλο διαλύτη με βάση το δείγμα και τις ιδιότητες κινητής φάσης. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Ως προς τη σύστασή του, ο διαλύτης πλύσης βελόνης θα πρέπει να είναι ένας συμβατός διαλύτης με την ισχυρότερη διαλυτική δράση (ο πιο ισχυρός διαλύτης σας). Η επιλογή αποτελεί μέρος της ανάπτυξης μεθόδου. Ένα μίγμα 50 % έως και 100 % οργανικού διαλύτη σε απεσταγμένο νερό είναι μια καλή επιλογή για πολλές εφαρμογές. Ελέγξτε τη διαδρομή αποστράγγισης της εξόδου της θύρας πλύσης και επαληθεύστε ότι καταλήγει σε περιέκτη αποβλήτων. Γεμίστε κάθε φιαλίδιο με αρκετό διάλυμα δείγματος για όλες τις ενέσεις. Χρησιμοποιείτε μόνο τα συνιστώμενα φιαλίδια Agilent. Μην υπερπληρώνετε τα φιαλίδια, συγκεκριμένα, γεμίζετε κάθε φιαλίδιο μόνο μέχρι 90 %. Χρησιμοποιείτε διαφράγματα με σχισμή όταν αντλείτε μεγάλους όγκους ή όταν πραγματοποιείτε πολλαπλές αντλήσεις από το ίδιο φιαλίδιο. Φιλτράρετε, μεταγγίστε ή φυγοκεντρίστε το δείγμα για να το διαχωρίσετε από τα αδιάλυτα στερεά. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Ο διαλύτης δείγματος πρέπει να είναι απαλλαγμένος από σωματίδια. Φροντίστε ώστε οι διαλύτες δείγματος να αντιστοιχούν όσο το δυνατόν περισσότερο στην προτεινόμενη κινητή φάση. 14

15 Συστάσεις για αντλίες και δειγματολήπτες με προαιρετικό φίλτρο σε σειρά Συστάσεις για αντλίες και δειγματολήπτες με προαιρετικό φίλτρο σε σειρά Προαιρετικό φίλτρο σε σειρά για αντλίες και δειγματολήπτες (1290 Infinity και 1290 Infinity II) Στις περισσότερες περιπτώσεις, ο περιοριστικός παράγοντας για τη διάρκεια ζωής των στηλών UHPLC είναι η υψηλή διαφορική πίεση. Η σωματιδιακή ύλη στο δείγμα συλλέγεται στο πορώδες διάφραγμα εισόδου της στήλης, γεγονός το οποίο προκαλεί αύξηση της διαφορικής πίεσης μέχρι την επίτευξη του ορίου πίεσης του συστήματος. Συνιστάται η χρήση φίλτρου σε σειρά για την αποτροπή τυχόν εμφράξεων στο πορώδες διάφραγμα της στήλης, δηλαδή όταν η προετοιμασία δείγματος δεν επιτρέπει το φιλτράρισμα ή όταν το δείγμα ενδέχεται να σχηματίσει ίζημα. Οι παρακάτω μονάδες μπορεί να είναι εξοπλισμένες με επιπρόσθετο φίλτρο σε σειρά: Αντλίες (G7104A, G4204A): Συγκρότημα φίλτρου σε σειρά ( ) Όλοι οι αυτόματοι δειγματολήπτες της Agilent Technologies: Κιτ φίλτρου σε σειρά 1290 Infinity II ( ) Αυτό το φίλτρο σε σειρά με ονομαστικό μέγεθος πόρων φίλτρου 0,3 μm προστατεύει αποτελεσματικά τη στήλη UHPLC από αποφράξεις οφειλόμενες σε συσσώρευση σωματιδιακής ύλης από δείγματα ή από το σύστημα UHPLC. Πλεονεκτήματα του φίλτρου σε σειρά: Πολύ μικρός εσωτερικός όγκος Όγκος υστέρησης με άκαμπτο τριχοειδές 1,3 μl Όγκος υστέρησης με εύκαμπτο τριχοειδές 1,6 μl Ειδικά σχεδιασμένο για εργασία υπό υψηλές πιέσεις (μέγ. πίεση λειτουργίας 1300 bar) Συνιστάται η εγκατάσταση του φίλτρου σε σειρά στις αντλίες G4204A ή G7104A για την προστασία του καθοδικού συστήματος από αποφράξεις στις ακόλουθες περιπτώσεις: Όταν χρησιμοποιούνται συνδυασμοί διαλυτών, οι οποίοι μπορούν να σχηματίσουν ίζημα μετά την ανάμιξη. Όταν εκτελούνται εφαρμογές με ρυθμιστικά διαλύματα ή πρόσθετα, στις περιπτώσεις που χρησιμοποιούνται στήλες σωματιδίων μικρού μεγέθους Γενικές συμβουλές για αποτελεσματική χρήση του φίλτρου σε σειρά: Φιλτράρετε τους διαλύτες πριν από τη χρήση Τηρείτε τις βέλτιστες πρακτικές Εκτελείτε πλύση με αντίστροφη ροή στο φίλτρο της αντλίας σε εβδομαδιαία βάση (εκκινήστε τη διαδικασία πλύσης φίλτρου από το μενού επιλογών) Αλλάζετε το πορώδες διάφραγμα φίλτρου ( Πορώδες διάφραγμα 0,3 μm για φίλτρο σε σειρά, συσκ. των 5 ( )) έπειτα από κάθε 1000 ενέσεις ή όταν η διαφορική πίεση αυξάνεται κατά 15 % ΣΗΜΕΙΩΣΗ Βλ. Τεχνική σημείωση G για περαιτέρω πληροφορίες αναφοράς. 15

16 Συστάσεις για στήλες Συστάσεις για στήλες Χρησιμοποιείτε στήλες μόνο στην επισημασμένη πλευρά. Χρησιμοποιείτε πάντα κατάλληλους συνδέσμους για τη συγκεκριμένη στήλη που χρησιμοποιείται. Για τις στήλες των διαφόρων προμηθευτών απαιτούνται διαφορετικές διαστάσεις συνδέσμων. Η χρήση ακατάλληλων συνδέσμων μπορεί να οδηγήσει σε διασπορά κορυφής ή ακόμη και σε ολοκληρωτική βλάβη της στήλης. Η Agilent συνιστά τη χρήση συνδέσμων Γραμμής Α για την αντιμετώπιση των ασυμβατοτήτων συνδέσμων κατά τη χρήση στηλών διαφορετικών προμηθευτών. Τηρείτε πάντα τα όρια λειτουργίας και εφαρμογής, όπως προσδιορίζονται στον οδηγό χρήστη της στήλης. Εξισορροπήστε τη στήλη με όγκους στήλης πριν από τη χρήση. Συνιστάται η εκτέλεση μιας ενδιάμεσης πλύσης με μια κινητή φάση κατάλληλης σύστασης χωρίς πρόσθετα, πριν από την εξισορρόπηση στον τελικό διαλύτη με πρόσθετα. Συνιστάται η χρήση προστήλης για την προστασία της στήλης σας και την αύξηση της διάρκειας ζωής της. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Η μακροχρόνια αποθήκευση των στηλών θα πρέπει να γίνεται με τη χρήση του κατάλληλου διαλύτη αποθήκευσης. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τη χρησιμοποιούμενη στήλη ανατρέξτε στον Οδηγό χρήστη που περιλαμβάνεται στη συσκευασία της στήλης. 16

17 Συστάσεις για ανιχνευτές Συστάσεις για ανιχνευτές ΠΡΟΣΟΧΗ Συχνή ενεργοποίηση/απενεργοποίηση λυχνίας Μειωμένη διάρκεια ζωής λυχνίας Αποφεύγετε τη μη απαραίτητη ενεργοποίηση/απενεργοποίηση της λυχνίας. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Υπάρχει μια περίοδος ασφάλειας/ένας χρόνος αναμονής πριν από την επανενεργοποίηση της λυχνίας, μετά την απενεργοποίησή της. Προθερμάνετε τη λυχνία για τουλάχιστον 1 h. Διατηρείτε το περιβάλλον και τη θερμοκρασία περιβάλλοντος σταθερά. Μην εκθέτετε τον ανιχνευτή στο άμεσο ηλιακό φως. Μην εκθέτετε τον ανιχνευτή σε υπερβολικά μεγάλο ρεύμα αέρα από το HVAC. Εγκαταστήστε μια βαλβίδα αποσυμφόρησης της πίεσης όταν συνδέετε έναν δεύτερο ανιχνευτή μετά την κυψελίδα τύπου κασέτας Max-Light. Χρησιμοποιήστε τις συνιστώμενες γραμμές αποβλήτων για κάθε τύπο ανιχνευτή. Αποφεύγετε τη σύνθλιψη του σωλήνα αποβλήτων μετά την έξοδο της κυψελίδας. Βεβαιωθείτε ότι η κυψελίδα ροής του ανιχνευτή είναι απαλλαγμένη από φυσαλίδες. Μόνο για τους ανιχνευτές RI: εκπλύνετε την πλευρά αναφοράς και την πλευρά δείγματος με φρέσκο διαλύτη που χρησιμοποιείται για την τρέχουσα εφαρμογή. Εκπλύνετε την κυψελίδα ροής μετά τη χρήση. Χρησιμοποιήστε νερό ποιότητας HPLC για να απομακρύνετε τα άλατα. Χρησιμοποιήστε ισοπροπανόλη για να απομακρύνετε τους οργανικούς διαλύτες. Πριν αφαιρέσετε μια αχρησιμοποίητη κυψελίδα ροής με σκοπό να την αποθηκεύσετε, γεμίστε την με ισοπροπανόλη για να αποτρέψετε την ανάπτυξη άλγης. 17

18 Επιπρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τις αντλίες 1290 Infinity και 1290 Infinity II Επιπρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τις αντλίες 1290 Infinity και 1290 Infinity II Οι αντλίες Agilent 1290 Infinity και 1290 Infinity II είναι εξοπλισμένες με αυτόματες βαλβίδες εκκένωσης. Αυτό επιτρέπει μια ποικιλία πρόσθετων λειτουργιών που δεν είναι διαθέσιμες σε αντλίες Agilent με χειροκίνητη βαλβίδα εκκένωσης. Υπάρχει η δυνατότητα προετοιμασίας της αντλίας (ρύθμιση παραμέτρων και έναρξη λειτουργιών Purge, Condition ή Prime) μέσω του λογισμικού. Καθαρισμός Χρησιμοποιήστε τη λειτουργία Purge (Καθαρισμός) για: Πλήρωση του συστήματος με φρέσκο ή διαφορετικό διαλύτη. Διασφαλίστε ότι ο νέος διαλύτης είναι αναμίξιμος με τον προηγούμενο διαλύτη. Αποτρέψτε τυχόν πρόκληση βλάβης στον απαερωτή ή στην αντλία χρησιμοποιώντας ένα ενδιάμεσο βήμα με κάποιον αναμίξιμο διαλύτη, εάν απαιτείται. Απομάκρυνση φυσαλίδων αέρα από τους σωλήνες και τις κεφαλές της αντλίας Μετά τη χρήση της αντλίας για πρώτη φορά. Αφού η αντλία παραμείνει σε αδράνεια για λίγες ή περισσότερες ώρες (μπορεί να έχει προκύψει διάχυση αέρα στις γραμμές διαλύτη). Μόλις ολοκληρωθεί ο χρόνος προετοιμασίας, η μονάδα μεταβαίνει αυτόματα και πάλι σε αναλυτική λειτουργία. ιαμόρφωση Εάν εξακολουθούν να υπάρχουν φυσαλίδες αέρα στην κεφαλή αντλίας, η συνολική απόδοση της αντλίας μπορεί να φαίνεται σωστή, ωστόσο η αντλία θα εκτελεί επιπλέον εργασία με αποτέλεσμα να επηρεάζεται αρνητικά η αξιοπιστία/ακρίβεια. Για την αποτελεσματική απομάκρυνση του αέρα, μπορεί να χρησιμοποιηθεί η λειτουργία διαμόρφωσης. Κατά τη διάρκεια της λειτουργίας διαμόρφωσης, η αντλία παρέχει ροή στο σύστημα (στήλη) και χρησιμοποιούνται οι πιο πρόσφατες ρυθμίσεις μεθόδου, π.χ. για τη ροή, τη σύνθεση και τη μέγιστη πίεση. Χρησιμοποιήστε εύλογες ρυθμίσεις για το ρυθμό ροής (για παράδειγμα 1,5 ml/min), τη σύνθεση (για παράδειγμα A: 50 % B: 50 %) και τη διαφορική πίεση (>200 bar) για να διασφαλίσετε την αποτελεσματική απομάκρυνση φυσαλίδων αέρα από όλες τις κεφαλές. Εφόσον ενδείκνυται, δημιουργήστε μια επιπλέον μέθοδο διαμόρφωσης στην αρχή της ακολουθίας. Διαμορφώστε την αντλία εάν παρατηρήσετε: Υπερβολική διακύμανση πίεσης. Υπερβολική διακύμανση σύνθεσης (θόρυβος γραμμής βάσης/θόρυβος ανάμιξης μεταβολές επιπέδου θορύβου με τη σύνθεση), όταν είστε σίγουροι ότι ο τύπος διαλύτη είναι σωστά ρυθμισμένος και δεν υπάρχουν ενδείξεις διαρροής εκτός προδιαγραφών στην αντλία. 18

19 Επιπρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τις αντλίες 1290 Infinity και 1290 Infinity II Η διαμόρφωση μπορεί να είναι απαραίτητη στις εξής περιπτώσεις: Καθημερινά, κατά την εκκίνηση της αντλίας Έπειτα από μεγάλη διάρκεια παραμονής σε κατάσταση αναμονής Έπειτα από εξάντληση της ποσότητας διαλύτη Έπειτα από σέρβις ή επισκευή ΠΡΟΣΟΧΗ Πλήρωση άδειων γραμμών διαλύτη Βλάβη στο στεγανοποιητικό Χρησιμοποιήστε μια σύριγγα για την πλήρωση των άδειων γραμμών διαλύτη. Μην χρησιμοποιήσετε τη διαδικασία Prime για την πλήρωση των άδειων γραμμών διαλύτη. Προετοιμασία Η λειτουργία προετοιμασίας είναι χρήσιμη εάν έχει εισέλθει αέρας στις κεφαλές αντλίας. Η μονάδα αντλεί διαλύτη με μεγάλη ταχύτητα, χρησιμοποιώντας όλα τα έμβολα αντλίας ταυτόχρονα και τον διοχετεύει στη θέση αποβλήτων της αυτόματης βαλβίδας εκκένωσης. Αυτό γίνεται 20 φορές πριν ολοκληρωθεί η διαδικασία. Χρησιμοποιήστε τη λειτουργία Prime (Προετοιμασία) για: Πλήρωση των κεφαλών αντλίας όταν είναι εντελώς στεγνές. Απόφραξη μιας δυνητικά αποφραγμένης βαλβίδας. 19

20 Επιπρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τις αντλίες 1290 Infinity και 1290 Infinity II Οι λειτουργίες που περιγράφονται μπορούν να ενεργοποιηθούν από τη διεπαφή προγράμματος οδήγησης: 1290 Infinity ΣΗΜΕΙΩΣΗ Για τις ρυθμίσεις παραμέτρων, βλ. Εικόνα 2 στη σελίδα Εικόνα 7 Προετοιμασία της αντλίας (1290 Infinity). 1. Κάντε δεξί κλικ στον πίνακα ελέγχου της μονάδας 2. Επιλέξτε την κατάλληλη λειτουργία για να εκκινήσετε τη διαδικασία 20

21 Επιπρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τις αντλίες 1290 Infinity και 1290 Infinity II Το βελτιστοποιημένο για το χρήστη μενού επιλογών προετοιμασίας αντλίας αντικαθιστά το κλασικό μενού: Αντλίες 1290 Infinity II Εικόνα 8 Προετοιμασία της αντλίας (αντλίες 1290 Infinity II). 1. Κάντε δεξί κλικ στον πίνακα ελέγχου της μονάδας 2. Επιλέξτε Prepare Pump Επιλέξτε τη διαδικασία και συμπληρώστε επαρκώς τις παραμέτρους 4. Πατήστε Start για να εκτελέσετε την επιλεγμένη διαδικασία 21

22 Επιπρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τις αντλίες 1290 Infinity και 1290 Infinity II Γλωσσάρι λογισμικού Γλωσσάρι λογισμικού C Condition ιαμόρφωση E Evacuation Mode Τρόπος λειτουργίας εκκένωσης P Prepare Pump... Προετοιμασία αντλίας... Prime Προετοιμασία Purge Καθαρισμός S Start Έναρξη * GR* * GR* GR Part Number: GR Edition: 07/2016 Printed in Germany Agilent Technologies, Inc 2016 Agilent Technologies, Inc Hewlett-Packard-Strasse Waldbronn Germany