Chlamydia Rapid Test (Cassette) (Swab/Ούρα)

Transcript

1 Chlamydia Rapid Test (Cassette) (Swab/Ούρα) ΣΚΟΠΟΣ ΧΡΗΣΗΣ Το Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) είναι μια ταχεία χρωματογραφική ανοσοβιολογική εξέταση για την ποιοτική ανίχνευση του Chlamydia trachomatis σε γυναικείο τραχηλικό δείγμα, αρσενικό ουρήθρας επιχρίσματος και ανδρικά δείγματα ούρων για να βοηθήσουν στην διάγνωση της λοίμωξης από χλαμύδια. ΕΙΣΑΓΩΓΗ Το Chlamydia trachomatis είναι η πιο κοινή αιτία των σεξουαλικά μεταδιδόμενων αφροδίσιων μολύνσεων στον κόσμο. Αποτελείται από στοιχειώδη φορείς (η μολυσματική μορφή) και δικτυωτό ή έγκλειστα (το έντυπο αντιγραφόμενες). Το Chlamydia trachomatis έχει τόσο υψηλό επιπολασμό και ασυμπτωματικό ρυθμό μεταφοράς, με συχνές σοβαρές επιπλοκές και στις γυναίκες και στα νεογνά. Επιπλοκές της λοίμωξης από χλαμύδια σε γυναίκες περιλαμβάνουν τραχηλίτιδα, ουρηθρίτιδα, ενδομητρίτιδα, πυελική φλεγμονώδη νόσο (PID) και αυξημένη συχνότητα εμφάνισης της έκτοπης κύησης και στειρότητα. Κάθετη μετάδοση της νόσου κατά την διάρκεια του τοκετού από τη μητέρα στο νεογνό μπορεί να οδηγήσει σε επιπεφυκίτιδα ή πνευμονία. Στους άνδρες, οι επιπλοκές της λοίμωξης από χλαμύδια περιλαμβάνουν ουρηθρίτιδα και επιδιδυμίτιδα. Τουλάχιστον το 40% των περιπτώσεων μη γονοκοκκικής ουρηθρίτιδας είναι που σχετίζονται με λοίμωξη από χλαμύδια. Περίπου το 70% των γυναικών με ενδοτραχηλικές λοιμώξεις και μέχρι το 50% των ανδρών με λοιμώξεις ουρήθρας είναι ασυμπτωματικές. Παραδοσιακά, η μόλυνση από χλαμύδια έχει διαγνωσθεί με ανίχνευση σε ιστοκαλλιέργεια εγκλείσματα κύτταρα Chlamydia. Μέθοδος καλλιέργειας είναι η πιο ευαίσθητη και ειδική εργαστηριακή μέθοδο, αλλά είναι εργασίας εντάσεως, ακριβή, χρονοβόρα (48-72 ώρες) και δεν είναι συνήθως διαθέσιμη στα περισσότερα ιδρύματα. ΔΙΑΔΙΑΚΑΣΙΑ Το Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) είναι μια ποιοτική, ανοσολογική δοκιμή πλευρικής ροής για την ανίχνευση αντιγόνου χλαμύδια από γυναικείο τραχηλικό δείγμα, αρσενικό ουρήθρας επιχρίσματος και ανδρικά δείγματα ούρων. Στη δοκιμή αυτή, ειδικό για το αντιγόνο Chlamydia αντίσωμα επιστρώνεται στην περιοχή της γραμμής της δοκιμής. Κατά τη διάρκεια της δοκιμής, το αντιγόνο που εκχυλίστηκε αντιδρά με ένα αντίσωμα για Chlamydia το οποίο είναι επικαλυμμένο πάνω σε σωματίδια. το μίγμα μεταναστεύει επάνω για να αντιδράσει με το αντίσωμα προς Chlamydia επί της μεμβράνης και να δημιουργήσουν μια έγχρωμη γραμμή στην δοκιμή περιοχή της γραμμής. Η παρουσία αυτής της έγχρωμης γραμμής στην περιοχή γραμμής εξέτασης δείχνει ένα θετικό αποτέλεσμα, ενώ η απουσία της υποδηλώνει ένα αρνητικό αποτέλεσμα. Για να χρησιμεύσει ως μάρτυρας της διαδικασίας, μια έγχρωμη γραμμή θα εμφανίζεται πάντα στην περιοχή ελέγχου της γραμμής, που δείχνει ότι έχει την προσθήκη επαρκούς όγκου δείγματος και την απορρόφησή του από τη μεμβράνη. ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΚΙΤ Ξεχωριστά συσκευασμένα τεστ Κάθε συσκευή περιέχει μια ταινία με χρωματιστά συζυγών και ενεργά αντιδραστήρια που προ-εξαπλώθηκαν στις αντίστοιχες περιοχές. Δοκιμαστικοί σωλήνες εξαγωγής buffer A Περιέχει 0,2Μ NaOH

2 buffer Β Εσώκλειστο Περιέχει 0,2Μ HCl Για οδηγίες λειτουργίας. Γυναικείο swab ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ 1. Χρονόμετρο 2. Στείρα αρσενικά μάκτρα ουρήθρας 3. Θετικό control 4. Αρνητικό control ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΟ ΤΟΥ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Για επαγγελματική in vitro διαγνωστική χρήση. Μην χρησιμοποιείτε το κιτ δοκιμασίας πέραν της ημερομηνίας λήξης. Μην χρησιμοποιείτε το κιτ εάν η συσκευασία έχει τρυπήσει ή δεν είναι καλά σφραγισμένη. Απορρίψτε μετά την πρώτη χρήση. Η δοκιμασία δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί περισσότερο από μία φορά. Μην τρώτε, πίνετε ή καπνίζετε στην περιοχή, όπου τα δείγματα και τα σύνεργα που χρησιμοποιούνται. Χειριστείτε όλα τα δείγματα σαν να περιέχουν μολυσματικούς παράγοντες. Λάβετε τις καθιερωμένες προφυλάξεις έναντι των μικροβιολογικών κινδύνων σε όλη την διαδικασία και να ακολουθηθούν οι τυπικές διαδικασίες για τη σωστή διάθεση των δειγμάτων. Να φοράτε προστατευτικό ρουχισμό όπως εργαστηριακά παλτά, γάντια μιας χρήσης και προστασία για τα μάτια όταν τα δείγματα αναλύονται. Τα χρησιμοποιούμενα υλικά δοκιμής πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τους τοπικούς, πολιτειακούς ή / και ομοσπονδιακούς κανονισμούς. Η υγρασία και η θερμοκρασία μπορεί να επηρεάσει αρνητικά τα αποτελέσματα. Χρησιμοποιείτε μόνο αποστειρωμένα swab για την απόκτηση ενδοτραχηλικά δείγματα. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Αποθηκεύστε το συσκευασμένο σε σφραγισμένη σακούλα είτε σε θερμοκρασία δωματίου ή στο ψυγείο (2-30 C). Η δοκιμή είναι σταθερή μέχρι την ημερομηνία λήξης που είναι τυπωμένη στην σφραγισμένη συσκευασία. Η δοκιμή πρέπει να παραμένει στην σφραγισμένη συσκευασία μέχρι την χρήση. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. Μην το χρησιμοποιείτε μετά την ημερομηνία λήξης. ΣΥΛΛΟΓΗ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ Το Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) μπορεί να πραγματοποιηθεί με χρήση από θηλυκό τραχηλικό δείγμα, αρσενικό ουρήθρας και ανδρικά δείγματα ούρων. Η ποιότητα των δειγμάτων που λαμβάνονται είναι εξαιρετικής σημασίας. Η ανίχνευση του Chlamydia απαιτεί μια δυναμική και τεχνική διεξοδική συλλογή που παρέχει κυτταρικό υλικό και όχι μόνο σωματικά υγρά. Για τη συλλογή γυναίκειου τραχηλικού δείγματος: 1. Χρησιμοποιήστε την μπατονέτα που παρέχονται στο κιτ. Εναλλακτικά, μπορεί να χρησιμοποιηθεί οποιοδήποτε μάκτρο με πλαστικό άξονα. 2. Πριν από τη συλλογή του δείγματος, απομακρύνετε τη περίσσεια βλέννα από την ενδοτραχηλικό περιοχή με ένα κομμάτι βαμβάκι και απορρίψτε το. Το Swab πρέπει να εισαχθεί στο ενδοτραχηλικό κανάλι, μετά τη διασταύρωση squamocolumnar μέχρι το μεγαλύτερο μέρος του άκρου να μην είναι πλέον ορατό. Αυτό θα επιτρέψει την εξαγωγή σε μορφή στήλης ή κυβοειδή επιθηλιακά κύτταρα, τα οποία είναι η κύρια δεξαμενή του οργανισμού Chlamydia. Σταθερά περιστρέψτε το 360ο σε μία κατεύθυνση (δεξιόστροφα ή αριστερόστροφα), αφήστε το για 15 δευτερόλεπτα, στη συνέχεια, απομακρύνετε το Swab. Αποφύγετε τη μόλυνση από

3 exocervical ή κολπικά κύτταρα. Μην χρησιμοποιείτε 0,9% χλωριούχο νάτριο για το χειρισμό των Swab πριν από τη συλλογή των δειγμάτων. 3. Εάν η δοκιμή πρόκειται να διεξαχθεί αμέσως, βάλτε το Swab στο σωλήνα εξαγωγής. Για τη συλλογή αντρικής ουρήθρας δείγματος: 1. Standard πλαστικά- ή συρμάτινα αποστειρωμένα μάκτρα πρέπει να χρησιμοποιούνται για τη συλλογή δείγματος ουρήθρας. Καθοδηγήστε ασθενείς να μην ουρήσουνγια τουλάχιστον μία ώρα πριν από τη συλλογή του δείγματος. 2. Τοποθετήστε το στυλεό στην ουρήθρα περίπου 2-4 cm, περιστρέψτε το στυλεό 360ο σε μία κατεύθυνση (δεξιόστροφα ή αριστερόστροφα), αφήστε το για 10 δευτερόλεπτα, στη συνέχεια αποσύρετε το. Μην χρησιμοποιείτε 0,9% χλωριούχο νάτριο για το χειρισμό των Swab πριν από τη συλλογή των δειγμάτων. 3. Εάν η δοκιμή πρόκειται να διεξαχθεί αμέσως, βάλτε το Swab στο σωλήνα εξαγωγής. Για τη συλλογή αντρικών ούρων δείγματος: 1. Συλλέξτε κ.εκ. καθαρά πρώτα πρωινά ούρα σε αποστειρωμένο δοχείο ούρων. Με δείγματα ούρων το πρωί είναι δυνατό να επιτευχθούν οι υψηλότερες συγκεντρώσεις του Chlamydia αντιγόνου. 2. Ανακατέψτε το δείγμα ούρων. Μεταφέρετε 10 ml του δείγματος ούρων σε μία φυγόκεντρο, προσθέστε 10 ml απεσταγμένου νερού και φυγοκεντρείστε σε 3000 rpm για 15 λεπτά. 3. Απορρίψτε προσεκτικά το υπερκείμενο, κρατήστε το σωλήνα ανεστραμμένο και αφαιρέστε τυχόν υπερκείμενο από το χείλος του σωλήνα με στύπωση πάνω σε απορροφητικό χαρτί. 4. Εάν η δοκιμή πρόκειται να διεξαχθεί αμέσως, χειριστείτε τα ούρα, σύμφωνα με τις Οδηγίες Χρήσης. Συνιστάται ότι τα δείγματα να υποβάλλονται σε επεξεργασία όσο το δυνατόν συντομότερα μετά τη συλλογή. Εάν η άμεση δοκιμή δεν είναι δυνατόν, τα δείγματα του ασθενή πρέπει να τοποθετηθεί σε ένα στεγνό σωλήνα μεταφοράς για αποθήκευση ή μεταφορά. Τα μάκτρα μπορεί να αποθηκευτούν για 4-6 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) ή ώρες σε ψυγείο (2-8 C). Τα δείγματα ούρων μπορούν να αποθηκεύονται σε ψυγείο (2-8 C) για 24 ώρες. Μην καταψύχετε. Όλα τα δείγματα πρέπει να φθάσουν σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) πριν από τη δοκιμή. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΤΕΣΤ Επιτρέψτε τη δοκιμή, το δείγμα, τα αντιδραστήρια και / ή τα controls να φθάσουν σε θερμοκρασία δωματίου (15-30C) πριν από τη δοκιμασία. 1. Αφαιρέστε τη συσκευή από την σφραγισμένη αλουμινένια συσκευασία και χρησιμοποιήστε το συντομότερο δυνατό. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται εάν η δοκιμή εκτελείται αμέσως μετά το άνοιγμα της θήκης αλουμινίου. 2. Εκχυλίστε το αντιγόνο Chlamydia σύμφωνα με τον τύπο δείγματος. Για τη συλλογή γυναίκειου τραχηλικού δείγματος και τη συλλογή αντρικής ουρήθρας δείγματος: Κρατήστε το αντιδραστήριο Α κάθετα και προσθέστε 4 ολόκληρες σταγόνες του αντιδραστηρίου Α (περίπου 300 μl) στο σωλήνα εξαγωγής. Το αντιδραστήριο Α είναι άχρωμο. Αμέσως τοποθετήστε το Swab, συμπιέζουν το κάτω μέρος του σωλήνα και περιστρέψτε το Swab 15 φορές. Αφήστε να σταθεί για 2 λεπτά. Προσθέστε 4 σταγόνες του αντιδραστηρίου Β (περίπου 300 μl) στο σωλήνα εξαγωγής. Το διάλυμα θα γίνει θολό. Συμπιέστε το κάτω μέρος του σωλήνα και περιστρέψτε το Swab 15 φορές μέχρις ότου το διάλυμα μετατρέπεται σε ένα καθαρό χρώμα με ελαφριά πράσινη ή μπλε απόχρωση. Αν το Swab είναι αιματηρό, το χρώμα θα γίνει κίτρινο ή καφέ. Αφήστε να σταθεί για 1 λεπτό. Πατήστε το Swab κατά την πλευρά του σωλήνα και να αποσύρει το Swab ενώ πιέζετε το σωληνάριο. Κρατήστε όσο πιο πολύ υγρό στο σωλήνα όσο το δυνατόν. Τοποθετήστε το άκρο του σταγονόμετρου στο επάνω μέρος του σωλήνα εξαγωγής. Για τη συλλογή αντρικών ούρων δείγματος:

4 Προσθέστε 4 σταγόνες από το αντιδραστήριο Β (περίπου 300 μl) στο ίζημα των ούρων στο σωλήνα φυγοκέντρησης, στη συνέχεια, ανακινήστε το υγρό πάνω και κάτω με πιπέτα αναμείξετε ζωηρά μέχρις ότου το εναιώρημα είναι ομοιογενές. Μεταφέρετε όλο το διάλυμα από το σωλήνα φυγοκέντρησης σε ένα σωλήνα εξαγωγής. Αφήστε να σταθεί για 1 λεπτό. Κρατήστε το Αντιδραστήριο Α όρθιο και προσθέστε 5 πλήρεις σταγόνες αντιδραστηρίου Α (περίπου 300 μl) και στη συνέχεια προσθέτετε το σωλήνα εξαγωγής. Βορτεξάρετε ή πατήστε το κάτω μέρος του σωλήνα για να αναμιχθεί το διάλυμα. Αφήστε να σταθεί για 2 λεπτά. Τοποθετήστε το άκρο του σταγονόμετρου στο επάνω μέρος του σωλήνα εξαγωγής. 3. Τοποθετήστε τη συσκευή σε μια καθαρή και επίπεδη επιφάνεια. Προσθέστε 3 πλήρεις σταγόνες διαλύματος (περίπου 100 μl) στο βοθρίο δείγματος (S) της συσκευής δοκιμασίας, στη συνέχεια, ξεκινήστε το χρονόμετρο. Αποφύγετε την παγίδευση φυσαλίδων στο δείγματος (S). 4. Περιμένετε την έγχρωμη γραμμή (ες) να εμφανιστεί. Διαβάστε το αποτέλεσμα σε 10 λεπτά. Μην ερμηνεύετε το αποτέλεσμα μετά από 20 λεπτά. ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ 1. Η ένταση του χρώματος στην περιοχή δοκιμής (Τ) μπορεί να ποικίλει ανάλογα με τη συγκέντρωση των ουσιών που υπάρχουν στο δείγμα. Ως εκ τούτου, κάθε απόχρωση του χρώματος στην περιοχή της δοκιμής θα πρέπει να θεωρείται θετική. Εκτός αυτού, το επίπεδο των ουσιών δεν μπορεί να προσδιοριστεί με αυτή την ποιοτική δοκιμή. 2. Ανεπαρκής όγκος δείγματος, εσφαλμένη διαδικασία λειτουργίας, ή η εκτέλεση ληγμένων δοκιμών είναι οι πιο πιθανοί λόγοι για την αποτυχία στη ζώνη ελέγχου. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ Τα εσωτερικά controls περιλαμβάνονται στο τεστ. Μια έγχρωμη ταινία που εμφανίζεται στην περιοχή ελέγχου (C) εκλαμβάνεται σαν εσωτερικός έλεγχος διαδικασίας. Επιβεβαιώνει την επάρκεια όγκου του δείγματος και την ορθή διαδικαστική τεχνική. Τα εξωτερικά controls δεν παρέχονται με αυτό το κιτ. Συνιστάται να τρέχετε θετικά και αρνητικά controls στα πλαίσια της καλής εργαστηριακής πρακτικής για να επιβεβαιώσετε τη διαδικασία δοκιμής και να επαληθευτεί η ορθή απόδοση της δοκιμής. 1. Το Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) χρησιμοποιείται μόνο για in vitro διαγνωστική χρήση. Αυτή η δοκιμή θα πρέπει να χρησιμοποιείται για την ανίχνευση του αντιγόνου Chlamydia από γυναικεία τραχηλικό δείγμα, αρσενικό ουρήθρας και ανδρικά δείγματα ούρων. Δεν μπορεί να προσδιοριστεί ούτε η ποσοτική τιμή ούτε ο ρυθμός αύξησης στη συγκέντρωση του αντιγόνου Chlamydia από αυτήν την ποιοτική δοκιμασία.

5 2. Αυτή η δοκιμή θα δείξει μόνο την παρουσία του Chlamydia αντιγόνου σε δείγματα από βιώσιμων και μη βιώσιμων χλαμύδια. Η επίδοση με δείγματα εκτός από θηλυκά τραχήλου της μήτρας, αρσενικό ουρήθρας και αρσενικό ούρα δεν έχει αξιολογηθεί. 3. Η ανίχνευση χλαμύδια εξαρτάται από τον αριθμό των οργανισμών που υπάρχουν στο δείγμα. Αυτό μπορεί να επηρεάζεται από τις μεθόδους συλλογής δείγματος και παράγοντες του ασθενούς, όπως η ηλικία, το ιστορικό των Σεξουαλικώς Μεταδιδόμενα Ασθένειες (STDs), παρουσία των συμπτωμάτων, κ.λ.π. Το ελάχιστο επίπεδο ανίχνευσης αυτής της δοκιμής μπορεί να ποικίλλει ανάλογα με την οροπαραλλαγή. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματα της δοκιμής θα πρέπει να ερμηνεύονται σε συνδυασμό με άλλα εργαστηριακά και κλινικά δεδομένα είναι στη διάθεση του ιατρού. 4. Θεραπευτική αποτυχία ή η επιτυχία δεν μπορεί να προσδιοριστεί ως αντιγόνο καθώς μπορεί να παραμείνει μετά από κατάλληλη serovars θεραπεία. 5. Υπερβολικό αίμα πάνω στο βαμβάκι μπορεί να προκαλέσει ψευδώς θετικά αποτελέσματα. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ Διασταυρούμενη αντιδραστικότητα Το αντίσωμα που χρησιμοποιείται στο Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) έχει δειχθεί να ανιχνεύσει όλες τις γνωστές Chlamydia serovars. Τα στελέχη Chlamydia psittasi και Chlamydia pneumoniae έχουν δοκιμαστεί με το Chlamydia Rapid Δοκιμή (Swab / Ούρα), και έδειξαν να αντιδρούν εγκάρσια όταν δοκιμάστηκε σε αναστολές των 109 Μονάδων σχηματισμού αποικιών (CFU) / ml. Διασταυρούμενη αντιδραστικότητα με άλλους οργανισμούς έχει μελετηθεί χρησιμοποιώντας αιωρήματα του 109 CFU / ml. Οι ακόλουθοι οργανισμοί βρέθηκαν αρνητικό όταν ελέγχθηκαν με το Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα): Ευαισθησία Το Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) έχει αξιολογηθεί με δείγματα που ελήφθησαν από ασθενείς STD κλινικές. Η PCR χρησιμοποιείται ως μέθοδος αναφοράς για το Chlamydia

6 Rapid Test (Swab / Ούρα). Δείγμα θεωρείται θετικό εάν η PCR έδειξε ένα θετικό αποτέλεσμα. Τα δείγματα θεωρήθηκαν αρνητικά αν η PCR έδειξε ένα αρνητικό αποτέλεσμα. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) έχει υψηλή ευαισθησία σε σχέση με το PCR. Εξειδίκευση Το Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) χρησιμοποιεί ένα αντίσωμα που είναι εξαιρετικά ειδικό για το αντιγόνο Chlamydia σε θηλυκό τραχηλικό δείγμα, αρσενικό ουρήθρας και ανδρικά δείγματα ούρων. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι Chlamydia Rapid Test (Swab / Ούρα) έχει υψηλή εξειδίκευση σε σχέση με PCR. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. Sanders J.W. et al Evaluation of an Enzyme Immunoassay for Detection of Chlamydia trachmatis in Urine of Asymptomatic Men. J.Clinical Microbiology, 32,24-27, (1994). 2. Jaschek, G. et al Direct Detection of Chlamydia trachomatis in Urine Specimens from Symptomatic and Asymptomatic Men by Using a Rapid Polymerase Chain Reaction Assay. J. Clinical Microbiology, 31, , (1993). 3. Schachter, J Sexually transmitted Chlamydia trachomatis infection. Postgraduate Medicine, 72, 60-69, (1982).