Bb Plus ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ

Transcript

1 Bb Plus Ανοσοαντίδραση για τον ποσοτικό προσδιορισμό του κλάσματος Bb του Παράγοντα Β, δείκτης για την ενεργοποίηση του Εναλλακτικού Μονοπατιού Συμπληρώματος, σε ανθρώπινο πλάσμα ή ορό Αραιώστε το Wash Buffer 1:20 με DI Νερό Ανασύσταση κάθε προτύπου και μάρτυρα με 1.0 ml Hydrating Reagent (αφήστε να ηρεμήσει για 15 λεπτά και αναμίξτε απαλά πριν την χρήση) Αραιώστε τα δείγματα πλάσματος 1:10 με Αραιωτικό Δείγματος Συμπληρώματος (Complement Specimen Diluent) (.. 50 L L) ( 30 ) Αραιώστε τα δείγματα ορού 1:20 με Αραιωτικό Δείγματος Συμπληρώματος (Complement Specimen Diluent) (.. 25 L L) ( 30 ) Προσθέστε 300 μl διαλύματος πλύσης (Wash Solution) μέσα στις μικροκυψέλες Επωάστε για 1 λεπτό στους ο C Προσθέστε 100 μl Αραιωτικού είγματος Συμπληρώματος (Complement Specimen Diluent) (blank), Προτύπων, Μάρτυρων και δειγμάτων στις μικροκυψέλες Επωάστε για 30+1 λεπτά στους ο C Ξεπλύνετε 5 φορές με Wash Buffer (Επωάστε κατά την πρώτη πλύση για 1 λεπτό) Προσθέστε 50 μl Συζεύγματος (Conjugate) Επωάστε για 30+1 λεπτά στους ο C Ξεπλύνετε 5 φορές με Wash Buffer (Επωάστε κατά την πρώτη πλύση για 1 λεπτό) Προσθέστε 100 μl Υπόστρωμα (Substrate) Επωάστε για 15+1 λεπτά στους ο C Ξεπλύνετε 2 φορές με Wash Buffer (λεκές ξηρός) Προσθέστε 100 μl ιάλυμα Παύσης (Stop solution) ιαβάστε την Οπτική Πυκνότητα στα 450 nm. Αναλύστε τα αποτελέσματα της αντίδρασης χρησιμοποιώντας μια καμπύλη γραμμικής συνάρτησης (y = mx +b) iu ΣΚΟΠΟΥΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Ο ενζυμικός προσδιορισμός MicroVue Bb Plus μετράει την ποσότητα του κλάσματος του συμπληρώματος Bb, ενός ενεργού τμήματος του Παράγοντα Β του εναλλακτικού μονοπατιού του συμπληρώματος, σε ανθρώπινο πλάσμα ή ορό. Η μέτρηση του Bb σε ανθρώπινο πλάσμα ή ορό παρέχει αποδείξεις για την εμπλοκή του εναλλακτικού μονοπατιού του συμπληρώματος. Μέτρηση της ενεργοποίησης του εναλλακτικού μονοπατιού του συμπληρώματος βοηθά στην διάγνωση διαφόρων ασθενειών του νεφρού, π.χ. χρόνια νεφρίτιδα με φλεγμονή τριχοειδών, νεφρίτιδα λύκου, καθώς και άλλες δερματοπάθειες π.χ. dermititis herpetiformis και pemphigus vulgaris. Άλλες ασθένειες στις οποίες η ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού του συμπληρώματος έχει παρατηρηθεί είναι η ρευματοειδής αρθρίτιδα, δρεπανοκυτταρική αναιμία, και αρνητικές κατά Gram βακτηριακές μολύνσεις. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ Το εναλλακτικό μονοπάτι του συμπληρώματος παρέχει ενδογενή προστασία εναντίον μικροβιακών παραγόντων όταν λείπουν συγκεκριμένα αντισώματα. 1-5 Η ενεργοποίηση αυτού του μονοπατιού του συμπληρώματος μπορεί να προκληθεί από μια ποικιλία ουσιών περιλαμβανομένων μικροβιακών πολυσακχαριτών ή λιπίδίων, αρνητικών κατά Gram βακτηριακών λιποπολυσακχαριτών και επιφανειακών καθοριστικών παραγόντων που είναι παρόντες σε κάποιους ιούς, παράσιτα, κύτταρα θηλαστικών μολυσμένα με ιούς, και καρκινικά κύτταρα. Στα αυτοάνοσα νοσήματα, το εναλλακτικό μονοπάτι του συμπληρώματος, μπορεί να συμβάλει αμέσως στην βλάβη των ιστών. Μια κεντρική σημαντική αντίδραση που συμβαίνει κατά την ενεργοποίηση του εναλλακτική μονοπατιού είναι η μετατροπή του ζυμογόνου Παράγοντα B, μοριακού βάρους 93 Kd σε ένα ενεργό προτεολυτικό ένζυμο. Αυτό επιτυγχάνεται σε μία αντίδραση 2 σταδίων. Κατά τη διάρκεια του πρώτου σταδίου της αντίδρασης ο Παράγοντας Β σχηματίζει ένα σύμπλοκο εξαρτώμενο από μαγνήσιο με C3(H20) ή C3b. 4 Το C3(H20),B σύμπλοκο σχηματίζεται μόνο σε υγρή φάση ενώ το C3b,B σύμπλοκο σχηματίζεται είτε σε υγρή φάση ή σε στοχευμένη επιφάνεια. 1-4 Ο παράγοντας B, που είναι παρών στο C3(H20),B ή στο σύμπλοκο C3b,B, διαιρείται στα Ba (33 Kd) και Bb (60 Kd) κλάσματα στην αντίδραση του δευτέρου σταδίου από το ένζυμο του μονοπατιού του εναλλακτικού συμπληρώματος, τον Παράγοντα D. 1-4 Το απορρέον C3b,Bb δι-μοριακό σύμπλοκο είναι το ένζυμο C3 κονβερτάση (convertase) του εναλλακτικού μονοπατιού. Η υπομονάδα Bb είναι η καταλυτική ενεργή θέση του συμπλόκου που είναι ικανή να διαιρεί το C3 στα C3a και C3b κλάσματα. 1-4,6 Τα επιπλέον C3b κλάσματα που παράγονται με αυτόν τον τρόπο μπορεί να σχηματίσουν το C3b,Bb,C3b τρι-μοριακό σύμπλεγμα που είναι το ένζυμο C5 κονβερτάση (convertase) του εναλλακτικού μονοπατιού. Το C5 convertase είναι ικανό να διαιρεί το C5 στα C5a και C5b κλασματα. 1-4,6 1307EL03 (2011/09)

2 Οι C3 και C5 κονβερτάσες (convertases) του εναλλακτικού μονοπατιού μπορούν να σταθεροποιηθούν από τον Παράγοντα P [που επίσης ονομάζεται προπεριδίνη (Properdin)], ένα συστατικό του εναλλακτικού μονοπατιού που είναι συνήθως παρόν στο ανθρώπινο πλάσμα ή ορό, 1-4 ή από το νεφρικό παράγοντα C3, ένα αυτοαντίσωμα που παράγεται σε ορισμένους ασθενείς που παρουσιάζουν εκτεταμένη δραστηριότητα του εναλλακτικού μονοπατιού. 5 Οι C3 και C5 κονβερτάσες (convertases) του εναλλακτικού μονοπατιού μπορούν να διαχωριστούν, και συνεπώς να αδρανοποιηθούν, από αυτόματο διαχωρισμό αποσύνθεσης, 7 ή από τη σύνδεση του Παράγοντα H ή του Υποδοχέα Συμπληρώματος 1 (CR1 ). 4,8 Το κλάσμα Bb που διαχωρίζεται από τη μία ή την άλλη κονβερτάση (convertase) διατηρεί ορισμένες βιολογικές ενεργότητες, π.χ. διατήρηση λειτουργικής αιμολυτικής ενεργότητας 4,9 την ικανότητα να προκαλεί εξάπλωση μακροφάγων, 10 και ενεργοποίηση πλασμινογόνου. 11 Παρόλο που θεωρείται ότι η ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού συμβαίνει αρχικά λόγω απουσίας ειδικού αντισώματος, σε πολλές περιπτώσεις φαίνεται ότι η ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού μπορεί να συμβεί ως αποτέλεσμα της ενεργοποίησης του κλασικού μονοπατιού. Για παράδειγμα, ανοσοσύμπλοκα που είναι παρόντα σε ασθενείς που πάσχουν από αυτοάνοσο νόσημα μπορεί να προκαλέσουν την ενεργοποίηση του κλασικού μονοπατιού συμπληρώματος με αποτέλεσμα την παραγωγή C3b κλασμάτων. Όπως περιγράφηκε και παραπάνω, αυτά τα C3b μόρια είναι ικανά να προσδένουν τον Παράγοντα B και να ξεκινούν τον διαχωρισμό του σε Ba και Bb κλάσματα. Συνεπώς, η ενεργοποίηση του εναλλακτικού μονοπατιού μπορεί να προκληθεί σε καταστάσεις αυτοάνοσων νοσημάτων που μεσολαβούν αντισώματα και να συμβάλλει σημαντικά στην ενίσχυση της ενεργότητας του συμπληρώματος και, συνακόλουθα, της καταστροφής του ιστού. Υπολογίζοντας τα προϊόντα που προέρχονται από τη διάσπαση του Παράγοντα B, σε δείγματα, μπορούμε να εκτιμήσουμε την έκταση της χρήσης του εναλλακτικού μονοπατιού που συμβαίνει κατά τη διάρκεια της συλλογής δείγματος σε μία ασθένεια που διερευνάται. Το MicroVue Bb Plus EIA παρέχει μία απλή, γρήγορη, μη ραδιενεργή, υψηλής ειδίκευσης και ποσοτική διαδικασία για την μέτρηση της ενεργότητας του Παράγοντα B. Είναι ιδανικό για έρευνες σχετικά με το ρόλο ή την υπόσταση του εναλλακτικού μονοπατιού συμπληρώματος σε πολυάριθμες μελέτες και κλινικές δοκιμές και για την παρακολούθηση της παραγωγής Bb in vitro. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Η ανοσοενζυμική αντίδραση της MicroVue Bb Plus για τον ποσοτικό προσδιορισμό του Bb σε ανθρώπινο ορό, πλάσμα ή άλλα δείγματα είναι μια διαδικασία τριών βημάτων, που χρησιμοποιεί (1) μία πλάκα μικροανάλυσης που είναι επικαλυμμένη με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού που προσδένεται ειδικώς σε ανθρώπινο Bb, (2) ένα αντίσωμα ποντικού έναντι ανθρώπινου Bb συζευγμένο με HRP, και (3) ένα χρωμογόνο υπόστρωμα. Στο πρώτο βήμα, τα πρότυπα, οι μάρτυρες, και τα δείγματα προστίθενται στις κυψέλες μικροανάλυσης που είναι επικαλυμμένες με ένα ειδικό αντι- Bb μονοκλωνικό αντίσωμα. Το Bb, αλλά όχι ο Παράγοντας B ή άλλα προϊόντα ενεργοποίησης συμπληρώματος που είναι παρόν στα πρότυπα, στους μάρτυρες, ή στα δείγματα, θα προσδεθεί στο ακινητοποιημένο αντι- Bb μονοκλωνικό αντίσωμα. Μετά την επώαση, ένας κύκλος πλύσης απομακρύνει το μη προσδεδεμένο υλικό. Στο δεύτερο βήμα, το ποντικίσιο αντι- Bb αντίσωμα που είναι συζευγμένο με υπεροξειδάση χρένου (HRP) προστίθεται σε κάθε κυψέλη εξέτασης. Το συζευγμένο με αντι- Bb ένζυμο προσδένεται στο Bb που είναι συνδεδεμένο στις κυψέλες μικροανάλυσης. Μετά την επώαση, ένας κύκλος πλύσης απομακρύνει το αδέσμευτο σύζευγμα που περισσεύει. Στο τρίτο βήμα, ένα ενζυμικό χρωμογόνο υπόστρωμα προστίθεται σε κάθε κυψέλη μικροανάλυσης. Το δεσμευμένο αντίσωμα συζευγμένο με HRP αντιδρά με το υπόστρωμα σχηματίζοντας μπλε χρώμα. Μετά την επώαση, η ενζυμική αντίδραση σταματά χημικά, το χρώμα αλλάζει σε κίτρινο και η ένταση του χρώματος υπολογίζεται φασματοφωτομετρικά στα 450 nm. Η ένταση του χρώματος του μίγματος της αντίδρασης είναι ανάλογη της συγκέντρωσης του παρόντος Bb στα δείγματα εξέτασης, στα πρότυπα και στους μάρτυρες. ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ 96 Αντιδράσεις για το κλάσμα του Bb του Παράγοντα B Το κιτ Ενζυμικής ανοσοαντίδρασης της MicroVue Bb Plus περιέχει τα παρακάτω: 1307EL03 (2011/09) 2 A B C D E L H Bb Plus Πρότυπα Μέρη A9948 A ml το καθένα (λυοφιλιωμένα). Το καθένα περιέχει μια γνωστή συγκέντρωση του Bb σε ανθρώπινο ορό διαλυμένο σε PBS, σταθεροποιητές πρωτεΐνης, 0,035% ProClin 300 Bb Plus Μάρτυρας Χαμηλής Συγκέντρωσης Μέρος A ml (λυοφιλιωμένα) Περιέχει ανθρώπινο ορό με μη ανιχνεύσιμα κλάσματα που περιέχουν Bb, διαλυμένο σε PBS, σταθεροποιητές πρωτεΐνης, 0,035% ProClin 300 Bb Plus Μάρτυρας Υψηλής Συγκέντρωσης Μέρος A ml (λυοφιλιωμένα) Περιέχει ανθρώπινο ορό με μη ανιχνεύσιμα κλάσματα που περιέχουν Bb, διαλυμένα σε PBS, σταθεροποιητές πρωτεΐνης, 0,035% ProClin 300 Πλάκα μικροανάλυσης Μέρος A x 8 wells 12 ταινίες με οκτώ-φρεάτια επικαλυμμένες με κεκαθαρμένο μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικιού ειδικό για ανθρώπινη Bb σε επανασφραγιζόμενο σάκο με έλασμα Stop Solution (Διάλυμα Παύσης) Μέρος A9947 Περιέχει 1N Υδροχλωρικό οξύ 12 ml

3 20X Συμπυκνωμένο Διάλυμα Πλύσης Μέρος A ml Το κάθε ένα περιέχει αλατούχο διάλυμα φωσφορικών (PBS), 1,0% Tween-20, και 0,035% ProClin 300 Αραιωτικό Δείγματος Συμπληρώματος Μέρος A ml Περιέχει PBS, 0,05% Tween-20, 2,5% σταθεροποιητές πρωτεΐνης, 0,035% ProClin 300 TMB Υπόστρωμα Μέρος ml Περιέχει 3,3, 5,5 tetramethylbenzidine (TMB) και υπεροξείδιο υδρογόνου (H2O2) Bb Plus Σύζευγμα Μέρος A ml Περιέχει αντι-ανθρώπινο Bb συζευγμένο με υπεροξειδάση εναιωρούμενο σε σταθεροποιητικό ρυθμιστικό διάλυμα με συντηρητικό Hydrating Reagent Μέρος A ml Περιέχει 0,035% ProClin 300 Το Tween 20 αποτελεί εμπορικό σήμα της ICI Americas Inc. Το ProClin αποτελεί σήμα κατατεθέν της Rohm and Haas Company. ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΟΥΝΤΑΙ ΑΛΛΑ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ Χρονόμετρο (περιοχή μέτρησης: 60 ) Υπολογιστής χειρός ή άλλη υπολογιστική μέθοδος για επιβεβαίωση της ανάλυσης Καθαρές, μη χρησιμοποιημένες πλάκες μικροανάλυσης ή / και δοκιμαστικοί σωλήνες και στατώ Δοχείο για αραίωση ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης. Φιάλη πλύσης ή άλλο σύστημα πλύσης ανοσοαντίδρασης Ρυθμιζόμενη πολυκάναλη πιπέτα (8 ή 12 καναλιών) ή επαναληπτικές μικροπιπέτες (προαιρετικά) Καθαρές πιπέτες, 1 ml, 5 ml, και 10 ml Μικροπιπέτες και ρύγχη πιπεττών Συσκευή για ανάγνωση οπτικής πυκνότητας μεταξύ 0,0 and 2,0 Απιονισμένο ή αποσταγμένο νερό ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ 1. Για In-Vitro διαγνωστική χρήση. 2. Η χρήση ηπαρινισμένου πλάσματος σε αυτή την ανάλυση μπορεί να δώσει εσφαλμένα αποτελέσματα. 3. Να χειρίζεστε τα δείγματα ως ενδεχομένως βιοεπικίνδυνα υλικά. Ακολουθήστε τις Γενικές Προφυλάξεις, όταν χειρίζεστε περιεχόμενα αυτού του κιτ και δείγματα ασθενών. 4. Να φοράτε ρούχα προστασίας, γάντια, και προστασία για τα μάτια/πρόσωπο όταν χειρίζεστε τα περιεχόμενα αυτού του κιτ. 5. Απαλλαχθείτε από τα δοχεία και τα μη χρησιμοποιημένα περιεχόμενα τους σύμφωνα με τους ισχύοντες, Κρατικούς και Τοπικούς κανονισμούς. 6. Χρησιμοποιήστε τα παρεχόμενα αντιδραστήρια, ως ολοκληρωμένη μονάδα, πριν από την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα της συσκευασίας. 7. Φυλάξετε τα αντιδραστήρια ανάλυσης όπως ορίζεται. 8. Μην χρησιμοποιείτε τις επικαλυμμένες ταινίες εάν ο σάκος έχει τρυπήσει. 9. Όταν προσθέτετε ή αναρροφάτε υγρά από τα φρεάτια μικροανάλυσης, μην αποξέετε ή αγγίζετε τον πυθμένα τωνφρεατίων. 10. Η χρήση χρόνων επώασης και θερμοκρασιών διαφορετικών από εκείνες που υποδεικνύονται στην ενότητα «Διαδικασία» ενδέχεται να δώσει εσφαλμένα αποτελέσματα. 11. Μην αφήνετε τα φρεάτια μικροανάλυσης να στεγνώσουν όταν έχει ξεκινήσει η ανάλυση. 12. Μην χρησιμοποιείτε ένα φρεάτιο μικροανάλυσης για περισσότερες από μια εξετάσεις. 13. Συνιστάται η χρήση πολυκαναλικών ή επαναληπτικών πιπεττών για την εξασφάλιση συγχρονισμένης χορήγησης αντιδραστηρίων. 14. Για την ακριβή μέτρηση δειγμάτων προσθέστε με ακρίβεια δείγματα και πρότυπα. Πιπεττάρετε με προσοχή και μόνο με βαθμονομημένες πιπέττες 15. Η σωστή συλλογή και φύλαξη των προς εξέταση δειγμάτων είναι ουσιώδης για ακριβή αποτελέσματα (βλέπε ΣΥΛΛΟΓΉ ΚΑΙ ΦΎΛΑΞΗ ΔΕΙΓΜΆΤΩΝ, σελίδα 5). 16. Αποφύγετε μικροβιακή μόλυνση ή επιμόλυνση των δειγμάτων, αντιδραστηρίων ή υλικών. Ενδέχεται να ληφθούν λανθασμένα αποτελέσματα σε περίπτωση επιμόλυνσης. 17. Κάθε μονάδα δότη που χρησιμοποιήθηκει στην προετοιμασία των Πρότυπων και Ρυθμιζόμενων διαλυμάτων δοκιμάστηκε με μια μέθοδο εγκεκριμένη από τον FDA για την παρουσία αντισώματος του ανθρώπινου ιού ανοσοανεπάρκειας, (HIV 1 και 2) και του ιού της ηπατίτιδας C, καθώς και του επιφανειακού αντιγόνου της ηπατίτιδας B και βρέθηκαν να είναι αρνητικά (δεν ήταν επανειλημμένα αντιδραστικά). Ωστόσο, επειδή καμία μέθοδος εξέτασης δεν μπορεί να προσφέρει σίγουρη επιβεβαίωση ότι απουσιάζουν οι μολυσματικοί παράγοντες, αυτά τα αντιδραστήρια θα πρέπει να χειρίζονται με Βιοπροστασία Επιπέδου 2 όπως συνιστά για κάθε ενδεχόμενο μολυσματικό ανθρώπινο όρο ή δείγμα αίματος, το εγχειρίδίο «Βιοπροστασίας στα Μικροβιολογικά και Βιοιατρικά Εργαστήρια» του 2007, των Κέντρων Ελέγχου Ασθενειών και/ή Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. 18. Το ProClin 300 χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Η τυχαία επαφή ή κατάποση ρυθμιστικών διαλυμάτων ή αντιδραστηρίων που περιέχουν ProClin μπορεί να οδηγήσει προκαλέσει ερεθισμό στο δέρμα, στα μάτια ή στο στόμα. Χρησιμοποιείτε τις ενδεδειγμένες εργαστηριακές πρακτικές για να μειώσετε την έκθεση. Αναζητήστε ιατρική φροντίδα αν παρουσιαστούν συμπτώματα. 19. Το Συμπυκνωμένο Υπόστρωμα είναι φωτοευαίσθητο. Αποφύγετε παρατεταμένη έκθεση σε έντονο ή άμεσο φως. Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια σε σκοτάδι, όταν δεν χρησιμοποιούνται. 1307EL03 (2011/09) 3

4 20. Για να αποφύγετε το σχηματισμό αεροζόλ κατά την πλύση, χρησιμοποιήστε μια συσκευή για να αναρροφήσετε το υγρό πλύσης μέσα σε φιάλη που περιέχει λευκαντικό για οικιακή χρήση. 21. Αδρανοποιημένα με θέρμανση, υπερλιπαιμικά ή μολυσμένα δείγματα ενδέχεται να δώσουν εσφαλμένα αποτελέσματα. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Αφήστε όλα τα αντιδραστήρια και τα υλικά για ανάλυση να φθάσουν στους C πριν την χρήση. Αφού επιλέξετε τα αντιδραστήρια και υλικά που πρόκειται να χρησιμοποιηθούν στην ανάλυση, επιστρέψτε αμέσως τα μη χρησιμοποιημένα αντιδραστήρια στις κατάλληλες θερμοκρασίες φύλαξής τους (δείτε ΦΥΛΑΞΗ). Ταινίες Μικροανάλυσης Προσδιορίστε τον αριθμό ταινιών που απαιτούνται για την ανάλυση. Αφαιρέστε τον αριθμό των ταινιών που απαιτείται. Ασφαλίστε τις ταινίες που πρέπει να χρησιμοποιηθούν στην ανάλυση στην βάση της πλάκας. Τοποθετήστε τις ταινίες που δεν χρειάζονται στη σακούλα φύλαξης, σφραγίστε εκ νέου τη σακούλα και επιστρέψτε στη φύλαξη στους 2-8 C. Διάλυμα πλύσης (Wash Solution) Παρασκευάστε το Διάλυμα Πλύσης για την πλύση τωνφρεατίων μικροανάλυσης, αραιώνοντας 50 ml του 20X Συμπυκνωμένου Διαλύματος, μέχρι το ένα λίτρο, με αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Αναμίξτε καλά πριν την χρήση. Το Διάλυμα Πλύσης είναι σταθερό επί 30 ημέρες όταν αποθηκεύεται σε καθαρό δοχείο στους 2-8 C. Αν παρουσιαστεί αλλοίωση του χρώματος ή θολότητα, απορρίψτε το αντιδραστήριο. Ανάκτηση Πρότυπου Bb Plus και Ρυθμιστικού Διαλύματος Προσθέστε 1.0 ml Αντιδραστηρίου Ενυδάτωσης σε κάθε φιαλίδιο Προτύπου A-E, και στα Ρυθμιστικά Διαλύματα Low και High. Αφήστε τα λυοφιλιωμένα πρότυπα να επανενυδατωθούν για τουλάχιστον 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Αναμίξτε καλά. Αποφύγετε το σχηματισμό αφρού ή φυσαλίδων κατά την ανάμιξη. Τα ανακτημένα πρότυπα και ρυθμιστικά διαλύματα είναι σταθερά για 30 ημέρες όταν φυλάσσονται στους 2-8 C. Αραίωση Διαλύματος Προσοχή: Χειριστείτε όλα τα δείγματα ως εν δυνάμει μολυσματικά. Μην χρησιμοποιείτε αδρανοποιημένα με θέρμανση ή μολυσμένα δείγματα. Συνιστάται τα δείγματα πλάσματος να αραιωθούν 1:10 σε Αραιωτικό Δείγματος για χρήση με την Ανοσοενζυματική εξέταση MicroVue Bb Plus. Συνιστάται τα δείγματα του πλάσματος να αραιωθούν 1:20 σε Αραιωτικό Δείγματος. Όταν αραιωθούν, τα δείγματα πρέπει να προστεθούν στα φρεάτια των μικροπλακών μέσα σε 30 λεπτά. Μην αποθηκεύετε ή επαναχρησιμοποιείτε αραιωμένα δείγματα. Ό,τι δείγματα περισσέψουν πρέπει να απορριφθούν. Δείγματα με υψηλά επίπεδα ενεργοποίησης συμπληρώματος μπορεί να απαιτούν μεγαλύτερες αραιώσεις από αυτές που αναφέρονται. Προσθήκη αραιωμένων δειγμάτων στα φρεάτια μικροανάλυσης: Οποιαδήποτε από τις δύο μεθόδους μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προσθέσετε αραιωμένα δείγματα, πρότυπα, μάρτυρες και ρυθμιστικό διάλυμα στα φρεάτια (δείτε το βήμα 3 της ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ). Για μικρούς κύκλους ανάλυσης που εξετάζονται μόνο λίγα δείγματα, τα αραιωμένα διαλύματα και άλλα αντιδραστήρια μπορούν να προστεθούν κατευθείαν στο αντίστοιχο φρεάτιο με μικροπιπέτα (100 μl/φρεάτιο). Για μικρούς ή μεγάλους κύκλους, αλλά ειδικότερα για μεγάλους κύκλους, συνιστούμε την χρήση πολυκάναλης πιπέττας για προσθήκη δειγμάτων με τον ακόλουθο τρόπο: (Η πολυκάναλη πιπέττα μπορεί να χρησιμοποιηθεί επίσης για την εύκολη προσθήκη συζυγούς, υποστρώματος και διαλύματος παύσης). Για να τοποθετήσετε τα πρότυπα, τους μάρτυρες και τα αραιωμένα διαλύματα στα φρεάτια μικροανάλυσης όσο το δυνατόν γρηγορότερα, μπορεί να χρησιμοποιηθεί μια διαδικασία αντιγραφής πλακών. Αντί για τη μεμονωμένη προσθήκη 100 μl κάθε προτύπου, μάρτυρα ή αραιωμένου διαλύματος σε φρεάτια καλυμμένα με αντίσωμα, μπορεί να προστεθεί μl κάθε διαλύματος σε μεμονωμένα φρεάτια σε πλάκα τυφλού (δεν παρέχεται) που αντιστοιχεί στο τελικό επιθυμητό υπόδειγμα EIA. Αφού όλα τα δείγματα προς εξέταση έχουν προστεθεί στα φρεάτια μικροανάλυσης στην πλάκα τυφλού, μεταφέρετε γρήγορα 100 μl από κάθε φρεάτιο τυφλού στα φρεάτια καλυμμένα με το αντίσωμα χρησιμοποιώντας μια πολυκάναλη μικροπιπέττα. Για να αποφύγετε την πιθανότητα επιμόλυνσης, τα ρύγχη της πιπέττας πρέπει να αλλάζουν κάθε φορά που υπάρχει αλλαγή στη σύνθεση των δειγμάτων προς μεταφορά. ΦΥΛΑΞΗ Φυλάξτε το μη ανοιγμένο Κιτ στους 2-8 C. Αφού ανοιχθεί το κιτ, το 20X Συμπυκνωμένο Διάλυμα Πλύσης και το Ενυδατικό Αντιδραστήριο μπορούν να φυλαχτούν στους 2-25 C. Αφήστε τα αντιδραστήρια να έλθουν σε θερμοκρασία δωματίου (15-25 C) πριν την χρήση. Επιστρέψτε όλες τις μη χρησιμοποιημένες ταινίες στους σάκους αποθήκευσής τους, σφραγίστε τους σάκους, και αποθηκεύστε τους στους 2-8 C. ΕΝΔΕΙΞΕΙΣ ΑΣΤΑΘΕΙΑΣ Η ΑΠΟΣΥΝΘΕΣΗΣ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Θολερότητα του Διαλύματος Πλύσης, υποδηλώνει αποσύνθεση αυτού του αντιδραστηρίου. Αν συμβεί αυτό, το διάλυμα πρέπει να απορριφθεί. 1307EL03 (2011/09) 4

5 ΣΥΛΛΟΓΉ ΚΑΙ ΦΥΛΑΞΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Χειρισμός και απόρριψη όλων των δειγμάτων χρησιμοποιώντας Γενικές Προφυλάξεις. Η κατάλληλη συλλογή και αποθήκευση των δειγμάτων είναι απαραίτητη, καθόσον ο Παράγοντας Bb είναι επιδεκτικός στην πρωτεόλυση, σε δείγματα που έχουν συλλεχθεί ή αποθηκευθεί με ακατάλληλο τρόπο.. Εξαιτίας της ενεργότητας του συμπληρώματος που συμβαίνει κατά τη διάρκεια της θρόμβωσης, η συγκέντρωση του Bb σε δείγματα φυσιολογικού ανθρώπινου ορού θα είναι υψηλότερη από τη συγκέντρωση σε δείγματα από Πλάσμα EDTA. Συνεπώς, τα επίπεδα Bb σε EDTA πλάσμα μπορεί να αντιπροσωπεύουν με μεγαλύτερη ακρίβεια τις in-vivo συγκεντρώσεις. Τα δείγματα ορού ή πλάσματος EDTA πρέπει να συλλέγονται άσηπτα χρησιμοποιώντας τις αποδεκτές τεχνικές. Τα δείγματα πρέπει να εξεταστούν αμέσως ή να αποθηκευθούν στους 4 C ή σε πάγο μέχρι να αναλυθούν. Πάντως, αυτό το σύντομο διάστημα αποθήκευσης σε πάγο δεν πρέπει να ξεπεράσει τις τέσσερις ώρες. Για μακροπρόθεσμη αποθήκευση, ο ορός ή το πλάσμα πρέπει να καταψυχθούν στους -70 C ή χαμηλότερα εντός δύο ωρών μετά τη συλλογή. Αποψύξτε γρήγορα τα δείγματα ( -70 C), σε υδατόλουτρο των 37 C μόλις μέχρι να αποψυχθούν. Μεταφέρετε τα αποψυγμένα δείγματα αμέσως σε πάγο (όχι για περισσότερο από τέσσερις ώρες) ώστε να αποτρέψετε ενεργοποίηση του συμπληρώματος πριν την αραίωση. Μην αφήσετε τα δείγματα στους 37 C. Μην αποψύξετε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου ή στους 4 C, καθώς αυτό μπορεί να οδηγήσει σε ενεργοποίηση του συμπληρώματος. Κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να εξετάζονται όσο το δυνατό συντομότερα αφού αποψυχθούν. Επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη δε συνιστάται. Αν τα δείγματα χρειάζεται να επανακαταψυχθούν για περαιτέρω ανάλυση, η Quidel προτείνει την κατάψυξη πολλαπλών μεριδίων του δείγματος (aliquots) ώστε να αποφύγετε επαναλαμβανόμενους κύκλους κατάψυξης/ απόψυξης. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ Πριν ξεκινήσετε την ανάλυση διαβάστε ολόκληρο το ένθετο του προϊόντος Πριν προχωρήσετε δείτε την ενότητα ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ και ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ. 1. Καταγράψτε τις θέσεις των φρεατίων που αντιστοιχούν στα τυφλά φρεάτια, σε όλα τα προς εξέταση δείγματα, Πρότυπα, και Ρυθμιστικά διαλύματα καθώς και τον υποδεικνυόμενο αριθμό παρτίδας από τις ετικέτες των φιαλιδίων. Σημαδέψτε μια γωνία της πλάκας μικροανάλυσης για προσανατολισμό 2. Προετοιμάστε στις λωρίδες μικροανάλυσης ως εξής: a. Επανυδατώστε τα φρεάτια μικροανάλυσης προσθέτοντας περίπου 300 μl Διαλύματος Πλύσης σε κάθε φρεάτιο χρησιμοποιώντας μια φιάλη πλύσης ή αυτοματοποιημένη συσκευή πλύσης πλακών. b. Επωάστε τα φρεάτια για ένα λεπτό στους C. c. Αφαιρέστε το υγρό από τα φρεάτια. d. Προσθέστε περίπου 300 μl Διαλύματος πλύσης σε κάθε φρεάτιο. e. Αφαιρέστε το υγρό από τα φρεάτια. f. Επαναλάβετε τα βήματα d-e μια φορά ακόμη, για συνολικά τρεις πλύσεις g. Αντιστρέψτε την πλάκα και χτυπήστε δυνατά πάνω σε απορροφητικό χαρτί για να αφαιρέσετε και το τελευταίο ίχνος υγρού. 3. Προσθέστε 100 μl Αραιωτικό Δείγματος, ανακτημένα Πρότυπα και Ρυθμιστικά διαλύματα, ή αραιωμένα δείγματα στα προσδιορισμένα φρεάτια. 4. Επωάστε στους C για 30 ± 1 λεπτά. 5. Ξεπλύνετε τα φρεάτια μικροανάλυσης 5 συνολικά φορές, ως εξής: a. Αφαιρέστε το υγρό από τα φρεάτια b. Προσθέστε περίπου 300 μl Διαλύματος Πλύσης σε κάθε φρεάτιο χρησιμοποιώντας μια φιάλη πλύσης ή αυτοματοποιημένη συσκευή πλύσης πλακών. c. Επωάστε τα φρεάτια για 1 λεπτό στους C. d. Αφαιρέστε το υγρό από τα φρεάτια. e. Προσθέστε περίπου 300 μl Διαλύματος πλύσης σε κάθε φρεάτιο. f. Αφαιρέστε το υγρό από τα φρεάτια. g. Επαναλάβετε τα βήματα e-f τρεις φορές ακόμα. h. Μετά τον πέμπτο κύκλο πλύσης, αντιστρέψτε την πλάκα και χτυπήστε δυνατά πάνω σε απορροφητικό χαρτί για να αφαιρέσετε και το τελευταίο ίχνος υγρού. 6. Χρησιμοποιώντας πολυκάναλη πιπέττα ή επαναληπτική πιπέττα, προσθέστε 50 μl Bb Συζεύγματος σε κάθε εκπλυμένο δοκιμαστικό φρεάτιο, συμπεριλαμβανομένων και των τυφλών. 7. Επωάστε τις ταινίες μικροανάλυσης στους C για 30 ± 1 λεπτά. 8. Ξεπλύνετε τα φρεάτια μικροανάλυσης μετά την επώαση διάρκειας 30 λεπτών (βήμα 7), όπως περιγράφεται στην ενότητα ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ. 9. Αμέσως μετά την διαδικασία έκπλυσης, προσθέστε 100 μl το TMB Διάλυμα Υποστρώματος σε κάθε φρεάτιο, συμπεριλαμβανομένων και των τυφλών. 10. Επωάστε τις λωρίδες μικροανάλυσης στους C για 15 ± 1 λεπτά. 11. Προσθέστε 100 μl Διαλύματος Παύσης σε κάθε φρεάτιο για να σταματήσετε την ενζυμική αντίδραση. Το Διάλυμα Παύσης πρέπει να προστίθεται στα φρεάτια με την ίδια σειρά και την ίδια συχνότητα όπως και το Διάλυμα Υποστρώματος. 1307EL03 (2011/09) 5

6 12. Χτυπήστε απαλά την πλάκα για να διευκολυνθεί η ομοιόμορφη ανάπτυξη χρώματος. 13. Προσδιορίστε την ένδειξη απορρόφησης στα 450 nm για κάθε δοκιμαστικό φρεάτιο εντός μιας ώρας μετά από την προσθήκη Διαλύματος Παύσης (βήμα 11), πραγματοποιώντας διόρθωση τυφλού σύμφωνα με το φασματοφωτομετρικό σύστημα που χρησιμοποιείτε. 14. Απορρίψτε τα εναπομείναντα αραιωμένα διαλύματα, το υπόστρωμα και τις χρησιμοποιημένες ταινίες μικροανάλυσης (βλέπε ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ). ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ Το Πιστοποιητικό Ανάλυσης που περιέχεται σε αυτήν τη συσκευασία αναφέρεται σε συγκεκριμένη παρτίδα και χρησιμοποιείται για να επαληθεύσει ότι τα αποτελέσματα που έχετε στο εργαστήριό σας είναι παρόμοια με αυτά που είχε η Quidel Corporation. Οι τιμές οπτικής πυκνότητας που παρέχονται προορίζονται μόνο για καθοδήγηση του χειριστού.. Τα αποτελέσματα που έχετε στο εργαστήριό σας μπορεί να διαφέρουν. Δίδεται το εύρος τιμών για το μάρτυρα ποιότητας. Οι τιμές του μάρτυρα προορίζονται για να επαληθεύσουν την εγκυρότητα της καμπύλης και τα αποτελέσματα των δειγμάτων. Κάθε εργαστήριο πρέπει να δημιουργήσει τις δικές του παραμέτρους για τα επιτρεπτά όρια της αντίδρασης. Εάν οι τιμές του μάρτυρα δεν είναι εντός των εργαστηριακών σας επιτρεπτών ορίων, τα αποτελέσματα της αντίδρασης πρέπει να θεωρηθούν ως αμφισβητήσιμα και τα δείγματα να επανεξεταστούν. ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Χρήση πρότυπης καμπύλης Η πρότυπη καμπύλη για την αντίδραση Bb EIA δημιουργείται χρησιμοποιώντας τις τιμές A450 από τις οποίες έχει αφαιρεθεί το τυφλό για κάθε πρότυπο (στον άξονα y) και της αντίστοιχης συγκέντρωσης για κάθε πρότυπο (στον άξονα x). Μετά τη γραμμική παλινδρόμηση, η δημιουργούμενη πρότυπη καμπύλη πρέπει να ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις επαλήθευσης (βλ. παρακατω). Οι περισσότεροι υπολογιστές είναι σε θέση να εκτελέσουν τέτοιους υπολογισμούς. Εναλλακτικά, τα δεδομένα μπορεί να σχεδιάζονται με το χέρι και οι τιμές (μg/ml) της εξέτασης των δειγμάτων να διαβάζονται απευθείας από την καλύτερα προσαρμοσμένη στην πρότυπη καμπύλη γραμμή. Ένα παράδειγμα μιας τυπικής πρότυπης καμπύλης φαίνεται στην Εικόνα 1. Εικόνα 1: Αντιπροσωπευτική Πρότυπη Καμπύλη A450 1,600 1,400 1,200 1,000 0,800 0,600 0,400 0,200 0,000 Σχήμα 1 y = 1,83x - 0,016 r=1,00-0, ,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 Συγκέντρωση (µg/ml) Υπολογισμός της ακριβούς συγκέντρωσης Bb σε Δείγματα εξέτασης Η πραγματική συγκέντρωση του Bb που βρίσκεται σε κάθε μη αραιωμένο δείγμα εξέτασης υπολογίζεται πολλαπλασιάζοντας τη συγκέντρωση Bb/mL, που προσδιορίζεται από την Πρότυπη Καμπύλη της συσκευασίας, με το αντίστροφο του χρησιμοποιούμενου συντελεστή αραίωσης του δείγματος. Εάν οι τιμές A450 για μια δεδομένη εξέταση δείγματος είναι μεγαλύτερες από τις υψηλότερες Πρότυπες (E) της συσκευασίας Bb, τα αποτελέσματα πρέπει να αναφερθούν ως «μεγαλύτερα από» τη συγκέντρωση Bb του υψηλότερου Πρότυπου (E) πολλαπλασιασμένα με τον συντελεστή αραίωσης του δείγματος. Αν απαιτείται μια πιο ακριβής συγκέντρωση Bb, το δείγμα πρέπει να επανεξεταστεί χρησιμοποιώντας έναν μεγαλύτερο συντελεστή αραίωσης. Σε όλες τις επαναληπτικές αντιδράσεις, πρέπει να τρέχουν επίσης τα Πρότυπα και οι Μάρτυρες της συσκευασίας Bb. ΕΠΑΛΗΘΕΥΣΗ Προσδιορίστε την κλίση, την τεταγμένη και τον συντελεστή συσχέτισης της προκύπτουσας ευθείας που ταιριάζει καλύτερα στα δεδομένα. Οι τιμές πρέπει να βρίσκονται εντός των ακολούθων ορίων για να γίνει αποδεκτή η ανάλυση: Συντελεστής συσχέτισης (r): > 0,96 Κλίση (m): μεταξύ 1,094 και 2,558 y-τεταγμένη (b): μεταξύ (-) 0,145 και 0,113 Αναφερθείτε στις ετικέτες των φιαλιδίων ή του προϊόν C του A για τα μέσα αποδεκτά όρια των τιμών της συγκέντρωσης Bb για τα Ρυθμιστικά Διαλύματα High και Low. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ Το MicroVue Bb Fragment Enzyme Immunoassay έχει χρησιμοποιηθεί για την εξέταση δειγμάτων που συνελέγησαν ως ορός ή πλάσμα σε αντιπηκτικά EDTA. Ηπαρινισμένο πλάσμα ΔΕΝ είναι κατάλληλο για αυτή την ανάλυση. Δεν έχουν εξεταστεί άλλα αντιπηκτικά. 1307EL03 (2011/09) 6

7 ΑΠΟΔΟΣΗ ΤΟΥ ΤΕΣΤ Όρια LOD: Το όριο ανίχνευσης (LOD) για την αντίδραση Bb Plus είναι 0,018 μg/ml και υπολογίζεται από το ανώτατο 3SD όριο σε μελέτη μηδενικού σταθερού. LLOQ: Το κατώτερο όριο ποσοτικοποίησης (LLOQ) για την αντίδραση Bb Plus είναι 0,033 μg/ml, η κατώτερη συγκέντρωση στην πρότυπη καμπύλη που ανταποκρίνεται στα κριτήρια NCCLS για την ακρίβεια και την επαναληψιμότητα. ULOQ: Το ανώτατο όριο ποσοτικοποίησης (ULOQ) για την αντίδραση Bb Plus είναι 0,836 μg/ml, η ανώτατη συγκέντρωση που ανταποκρίνεται στα κριτήρια NCCLS για την ακρίβεια και την επαναληψιμότητα. Ουσιεσ Που Επιδρουν Στην Αναλυση Na+ Ηπαρίνη των 14 U/mL (η συγκέντρωση σύμφωνα με τα σωληνάρια ηπαρινισμένου πλάσματος) αλληλεπιδρά με την Bb Plus αντίδραση και συνεπώς δε συνίσταται για χρήση ως αντιπηκτικό πλάσματος για τη συλλογή δείγματος. Τα παρακάτω συστατικά δοκιμάστηκαν στην αντίδραση Bb Plus και βρέθηκε ότι δεν αλληλεπιδρούν με την αντίδραση: ΟΥΣΊΑ Χολερυθρίνη Αιμοσφαιρίνη Τριγλυκερίδια Αλβουμίνη Γλυκόζη Χοληστερίνη ΣΥΓΚΈΝΤΡΩΣΗ 40 mg/dl 500 mg/dl 3000 mg/dl 6000 mg/dl 1200 mg/dl 500 mg/dl Ακριβεια Ακρίβεια εντός «τρεξίματος» και μεταξύ «τρεξιμάτων» προσδιορίστηκε από την αντίδραση 20 επαναλήψεων των 2 δειγμάτων πλάσματος και 2 δειγμάτων ορού σε 10 διαφορετικά «τρεξίμιατα». Δείγμα EDTA Πλάσμα Ορός Bb (μg/ml) Εντος Τρεξιματων 1 C.V. (%) Μεταξυ Τρεξιματων 2 C.V. (%) 1,550 2,4 7,7 0,517 2,5 6,7 2,129 3,1 6,2 2,375 4,0 9,1 1 n = 20 αντίγραφα 2 n = 10 τρεξίματα Γραμμικοτητα Η γραμμικότητα προσδιορίστηκε με τη συνεχή αραίωση δειγμάτων και τη σύγκριση των παρατηρούμενων τιμών με τις αναμενόμενες. Τα τυπικά αποτελέσματα δίνονται παρακάτω: Δείγμα EDTA Πλάσμα Ορός 1 Ορός 2 Συντελεστής Αραίωσης Παρατηρούμεν α (μg/ml) Αναμενόμενα (μg/ml) Ανάκτηση (%) 1:10 0,160 * * 1:16 0,107 0, ,9% 1:20 0,079 0,080 98,7% 1:32 0,052 0, ,9% 1:20 0,161 * * 1:32 0,103 0, ,0% 1:40 0,069 0,081 85,4% 1:64 0,044 0,050 87,2% 1:20 0,597 * * 1:25 0,467 0,478 97,7% 1:30 0,420 0, ,4% 1:40 0,310 0, ,8% 1:50 0,230 0,239 96,2% 1:60 0,196 0,199 98,4% 1:80 0,133 0,149 89,0% ΤΙΜΕΣ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Εξετάστηκαν πλάσμα EDTA από τριάντα έξι (36) και ορός από σαράντα εννιά (49) φυσιολογικούς δότες με την Ανοσοενζυμική αντίδραση MicroVue Bb Plus Fragment. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται παρακάτω. EDTA Πλάσμα n Μέσος όρος ΕΥΡΟΣ ± 2 SD ± 3 SD 36 0,96 μg/ml 0,49 1,42 μg/ml 0,26 1,65 μg/ml Ορός 49 3,53 μg/ml 0,80 6,26 μg/ml 0,0 7,62 μg/ml Σημείωση: Η μέση και τυπική απόκλιση (SD) των συγκεντρώσεων του κλάσματος Bb που προσδιορίζονται σε δείγματα πλάσματος ή ορού μπορεί να ποικίλουν μεταξύ των εργαστηρίων. Συνεπώς, συιστάται το κάθε εργαστήριο να προσδιορίζει τη μέση τιμή για τη συγκέντρωση του κλάσματος Bb και την τυπική απόκλιση για τα δείγματα. ΒΟΗΘΕΙΑ Για παραγγελίες ή για την τεχνική βοήθεια, παρακαλώ επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο. Πρόσθετες πληροφορίες για την Quidel, τα προϊόντα μας και τους αντιπροσώπους μας μπορούν να βρεθούν στον ιστοχώρο μας: ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. Schreiber, R.D. and Müller-Eberhard, H.J New developments in the activation of the alternative pathway of complement. In: Immunoassays: Clinical Laboratory Techniques for the 1980 s. Alan R. Liss, Inc., New York. p Gotze, 0. and Müller-Eberhard, H.J The alternative pathway of complement activation. Adv. Immunol. 24:1. 3. Fearon, D.T. and Austen, K.F Current concepts in immunology: the alternative pathway of complement a system for host resistance to microbial infection. New Engl. J. Med. 303: EL03 (2011/09) 7

8 4. Pangburn, M.K. and Müller-Eberhard, H.J The alternative pathway of complement. Springer Semin Immunopathol 7: Ratnoff, W.E., Fearon, D.T., and Austen, K.F The role of antibody in the activation of the alternative complement pathway. Springer Semin Immunopathol 6: Hugli, T.E Biochemistry and biology of anaphylatoxins. Complement 3: Fearon, D.T. and Austen, K.F Activation of the alternative complement pathway due to resistance of zymosan-bound amplification convertase to endogenous regulatory mechanisms. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA). 74: Fearon, D.T Regulation of the amplification C3 convertase of human complement by an inhibitory protein isolated from human erythrocyte membrane. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA). 76: Fishelson, Z. and Müller-Eberhard, H.J Residual hemolytic and proteolytic activity expressed by Bb after decay-dissociation of C3b,Bb. J. Immunol. 132: Gotze, O., Bianco, C. and Cohn, Z.A The induction of macrophage spreading by Factor B of the properdin system. J. Exe. Med. 149: Sundsmo, J.S. and Wood, L.M Activated factor B(Bb) of the alternative pathway of complement activation cleaves and activates plasminogen. J. Immunol. 127: Kolb,W.P., Morrow, P.R. and Tamerius, J.D Ba and Bb Fragments of Factor B activation: Fragment production, biological activities, neoepitope expression and quantitation in clinical samples. Complement and Inflammation 6: Centers for Disease Control. Recommendations for prevention of HIV transmission in health-care settings. MMWR 1987;36 (suppl no. 2S): Sefton, M.V., et al Using ELISA to evaluate complement activation by reference biomaterials J. Mat. Sci 5: ,. 15. Mold, C. Tamerius, J.D., et al Complement activation during painful crisis in sickle cell anemia Clinical Immunology and Immunopathology 70:3, Manzi, S. Rairie, J. et al Sensitivity and Specificity of plasma and urine complement split products as indicators of lupus disease activity Arthritis and Rheumatism 39(7) J. Jarvis, Taylor, H Complement activation and immune complexes in children with polyarticular juvenile rheumatoid arthritis: a longitudinal study J. Rheumatology 21(6) Aggarwaal, et al Evidence for activation of the alternative complement pathway in patients with juvenile rheumatoid arthritis Rheumatology 39: J. Buyon, Tamerius J. et al Assessment of Disease activity and impending flare in patients with systemic lupus erythematosis Arthritis and Rheumatism 35(9) D. Shaw, Rustagi, P. et al Effects of Synthetic Oligonucleotides on human complement and coagulation Biochemical Pharmacol 53(8) Mollnes. T.E., et al Complement activation in patients with systemic lupus erythematosis without nephritis Rheumatology 38: Sturfelt, G, Truedsson, L Complement and its breakdown products in SLE Rheumatology 44: Alexander, J.J. et al Complement-dependent apoptosis and inflammatory gene changes in murine lupus cebritis J. Immunology 175: Thurman, J., Holers, V.M The central role of the alternative pathway in human disease J. Immunology 176: Pawluczkowycz, A.W et al Hematin promotes complement alternative pathway-mediated deposition of C3 activation fragments on human erythrocytes: potential implications for the pathogenesis of anemia in malaria J. Immunology 179: Atkinson, C. et al Low-dose targeted complement inhibition protects against renal disease and other manifestations of autoimmune disease in MRL/lpr mice J. Immunology 180: ΓΛΩΣΣΆΡΙΟ Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης στο CDROM Προοριζομενη Χρηση A027 Bb Plus EIA Kit MDSS GmbH Schiffgraben Hannover, Germany 1307EL03 (2011/09) 8