Καλλιέργεια και τυποποίηση των μικροβίων. Ιωάννης Γ. Ρούτσιας, MD, PhD Επίκουρος καθηγητής Ανοσολογίας/Μικροβιολογίας

Transcript

1 Καλλιέργεια και τυποποίηση των μικροβίων Ιωάννης Γ. Ρούτσιας, MD, PhD Επίκουρος καθηγητής Ανοσολογίας/Μικροβιολογίας

2 Ανάπτυξη των μικροβίων

3 Μικροβιακή ανάπτυξη Μικροβιακή ανάπτυξη: είναι η αύξηση του πληθυσμού αριθμού μικροοργανισμών και όχι του μεγέθους αυτών Η μικροβιακή ανάπτυξη οδηγεί στην δημιουργία μιας μεμονωμένης αποικίας μια συνάθροιση κυττάρων που έχουν προκύψει από διαιρέσεις ενός και μόνο κυττάρου Κάθε μεμονωμένος μικροοργανισμός μπορεί να δώσει μία αποικία

4 Μικροβιακή ανάπτυξη n=1 n=2 n=4 n=16 n=32

5 Growth of Microbial Populations

6 Χρόνος γενεάς The time required for a bacteria to grow and divide is its generation time The time required for a population of cells to double its number Most have a generation time of 1 3 hours E. coli is 20 minutes and M. leprae is 10 days

7 Microbial Growth Curve When bacteria are inoculated into a liquid medium there are four distinct phases of the population s growth curve Lag phase (περίοδος προσαρμογής) Log phase (φάση ανάπτυξης) Stationary phase (στατική φάση) Death phase (φάση θανάτου)

8 Microbial Growth Curve στατική φάση φάση θανάτου φάση ανάπτυξης περίοδος προσαρμογής

9 Chemical Requirements Sources of Carbon, Energy, and Electrons Oxygen Requirements Nitrogen Requirements Other Chemical Requirements

10 Physical Requirements for Growth Temperature ph Osmolarity Pressure

11 Effects of Temperature on Growth Minimum, optimum and maximum temperature as determined by the graph showing growth rate plotted against temperature

12 Effects of Temperature on Growth Growth of Staphylococcus aureus on blood agar after 24 hours incubation at different temperatures

13 Θρεπτικά υλικά

14

15

16

17

18

19 Ανάπτυξη αποικιών

20 Characteristics of Colony

21 Selective Media After inoculation with a soil sample, the presence of a slightly acidic ph in Sabouraud dextrose agar make it selective for fungi by inhibiting the growth of bacteria. Comparison nutrient agar plate is shown

22 Differential Media Use of blood agar. Streptococcus pyogenes (left) completely uses red cells, producing a clear zone termed betahemolysis. Streptococcus pneumoniae (middle) partially uses red blood cells, producing a discoloration termed alphahemolysis. Enterococcus faecalis (right) does not use red blood cells; the lack of a change in the medium is termed gamma-hemolysis α γ β

23 MacConkey agar. (a) Whereas both the Gram-positive Staphylococcus aureus (Sa) and the Gram-negative Escherichia Coli (Ec) grow on the nutrient agar, MacConkey agar (b) selects for Gram-negative bacteria and inhibits Gram-positive bacteria. (c ) MacConkey agar also differentiates between Gram-negative bacteria on their ability to ferment lactose. The colonies of lactose-fermenting E. coli are easily distinguished from those of the non-lactose fermenting Shigella flexneri (Sf) selects & differentiates

24

25 Σπορά για παραλαβή μεμονομένων αποικιών

26

27 Τυποποίηση βακτηριδίων

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39 Α

40

41 Β

42

43 Παραδείγματα

44 Streptococcus pyogenes

45 Staphylococcus aureus

46

47

48

49

50

51 Proteus Gram: (-) Mac Conkey: άχρωμες Αιματούχο: γκρι + ερπυσμός Αντοχή: Nitrofurantoinn (F/M) Tetracycline (TE), Colistin (C) Proteus vulgaris Proteus mirabilis Λακτόζη Οξειδάση Ερπυσμός Ουρία Κιτρικά ± ± Ινδόλη PPA Η 2 S Ορνιθίνη Μαλτόζη Pseudomonas Gram: (-) Mac Conkey: άχρωμες Αιματούχο: γκρι Αντοχή: Ampicillin (AM), Augmentin (AMC), Tetracycline (TE), Septrin (SXT), Cephalothin (CF) Cefuroxime(CXM), Λακτόζη Οξειδάση Πυο-πρασίνη/κυανίνη Ουρία Κιτρικά Ινδόλη PPA Η 2 S Ορνιθίνη Αργινίνη Pseudomonas auroginosa

52 E. coli Gram: (-) Mac Conkey: βιολετί Αιματούχο: λευκές Αντοχή: Ίσως: Ampicillin (AM), Pipperacillin (PIP), Septrin (SXT), Cephalothin (CF) P-ινίδια: στελέχη E.coli που συσχετίζονται με πυελονεφρίτιδα Klebsiella Gram: (-) Mac Conkey: βιολετί+βλέννα Αιματούχο: λευκές Αντοχή: Ampicillin (AM) Escherichia coli Λακτόζη ( 90%,) Οξειδάση VP Ουρία Κιτρικά Ινδόλη PPA Η 2 S Ορνιθίνη ± Κινητικότητα Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Λακτόζη Οξειδάση VP Ουρία Κιτρικά Ινδόλη PPA Η 2 S Ορνιθίνη Κινητικότητα

53 Enterococcus Gram: (+) Mac Conkey: πορφυρό Αιματούχο: λευκές Αντοχή: Cephalosporins (CF, CXM) Clindamycin (CM, CC2) Septrin (SXT) Ίσως: Gentamycin (GM) Ampicillin (AM) β-lactamase (+) AMC ευαίσθητο E. faecalis E. faecium Λακτόζη Καταλάση Εσκουλίνη β-αιμόλυση α-αιμόλυση ± Αραβινόζη Αργινίνη Τελλουρικά Κινητικότητα Staphylococcus S. aureus S. epidermidis S. sapro phyticus Gram: (+) Mac Conkey: οχι ανάπτυξη ή λεπτές ροζ Αιματούχο: Λευκές ή γκρι Αντοχή: Ampicillin (AM) Λακτόζη Καταλάση Κοαγκουλαση β-αιμόλυση α-αιμόλυση Αραβινόζη Αργινίνη Τελλουρικά Κινητικότ.

54 Streptococcus Gram: (-) Mac Conkey: βιολετί Αιματούχο: λευκές Αντοχή: Ίσως: Ampicillin (AM), Pipperacillin (PIP), Septrin (SXT), Cephalothin (CF) P-ινίδια: στελέχη E.coli που συσχετίζονται με πυελονεφρίτιδα Streptococcus pneumoniae Gram: (-) Mac Conkey: βιολετί+βλέννα Αιματούχο: λευκές Αντοχή: Ampicillin (AM) Escherichia coli Λακτόζη ( 90%,) Οξειδάση VP Ουρία Κιτρικά Ινδόλη PPA Η 2 S Ορνιθίνη ± Κινητικότητα Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Λακτόζη Οξειδάση VP Ουρία Κιτρικά Ινδόλη PPA Η 2 S Ορνιθίνη Κινητικότητα

55 The end