QUANTA Lite Jo-1 ELISA 708585 Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

QUANTA Lite Jo-1 ELISA 708585 Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός Σκοπό Χρήση Το QUANTA Lite Jo-1 αποτελεί μια ανοσοπορροφητική ανάλυση συνδεδεμένη με ένζυμο (ELISA) για τον ημιποσοτικό εντοπισμό αντισωμάτων Jo-1 σε ανθρώπινο ορό. Η παρουσία των αντισωμάτων Jo-1 μπορεί ν α χρησιμοποιηθεί από κοινού με κλινικά ευρήματα και άλλες εργαστηριακές εξετάσεις για να βοηθήσουν στην διάγνωση της πολυμυοσίτιδας και άλλων ασθενειών που σχετίζονται με τον συνδετικό ιστό. Περιληψη Και Αρχη Μεθοδου Τα αντιπυρηνικά αντισώματα (ANA) ευρίσκονται σε μεγάλο εύρος μολύνσεων του συνδετικού ιστού και έτσι χρησιμοποιούνται σαν ευαίσθητη μέθοδος ανίχνευσης. 1 Ε ν ώ κ α ι ο έ λ ε γ χ ο ς τ ω ν Α Ν Α ε ί ν α ι μέθοδος ανίχνευσης για SLE (ένα αρνητικό αποτέλεσμα δείχνει απουσία ενεργού SLE) 2 δεν είναι εξειδικευμένος έλεγχος. Τα αντισώματα στό αντιγόνο Jo-1, γνωστό επίσης και ως histidyl-trna synthetase βρίσκονται μέσα σε μια υποομάδα ασθενών με ασθένεια του συνδετικού ιστού, με καθαρή πολυμυοσίτιδα, καθαρή δερματομυοσίτιδα ή μυοσίτιδα που σχετίζεται με μια άλλη ρευματική. 3 Αντισώματα του Jo-1 βρίσκονται στο 18-36% από όλους τους ασθενείς που ανταποκρίνονται στα κριτήρια για μυοσίτιδα. 3-6 Το αντίσωμα είναι περισσότερο κοινό στην πολυμυοσίτιδα παρά στην δερματομυοσίτιδα και σπάνια βρίσκεται σε άλλες καταστάσεις της ασθένειας. 5-7 Τα αντισώματα του Jo-1 έχουν μεγάλη σχέση με την διάμεση ασθένεια του πνεύμονα 7,8 με σχεδόν όλους τους ασθενείς που είναι θετικοί στο Jo-1 να δείχνουν στοιχεία της ανάμειξης των πνευμόνων. Έχει αναφερθεί μια σχέση μεταξύ του τίτλου του αντισώματος Jo-1 και της δράσης της ασθένειας. 9 Μια ποικιλία μεθόδων που συμπεριλαμβάνει διπλή ανοσοδιάχυση και παθητική συγκόλληση έχει χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση των αντισωμάτων στο Jo-1. Έχουν αναπτυχθεί, επίσης, χρήσιμες κλινικές εξετάσεις ELISA για την ανίχνευση αντισωμάτων αντι-jo-1. Η τεχνική ELISA που χρησιμοποιείται από αυτές τις αναλύσεις είναι αντικειμενική, ημι-ποσοτική, και μπορεί να χρησιμοποιηθεί άνετα για να εξεταστούν πολλοί ασθενείς. Αρχη Μεθοδου Τα συγγενικά κεκκαθαρμένα Jo-1 αντιγόνα είναι συνδεδεμένα σε πηγαδάκια μικροπλάκας πολυστερίνης κάτω από συνθήκες που θα συγκρατήσουν το αντιγόνο στην φυσική του κατάσταση. Προαραιωμένοι πρότυποι οροί ελέγχου (controls) και αραιωμένα δείγματα ασθενών προσθέτονται στα πηγαδάκια επιτρέποντας τα αντι- Jo-1 αντισώματα να συνδεθούν με το ακινητοποιημένο αντιγόνο. Μη αντιδρώντα αντισώματα ξεπλένονται και προσθέτεται αντι ανθρώπινο IgG αντίσωμα συνδεδεμένο με ένζυμο. Η δεύτερη επώαση επιτρέπει την σύνδεση του αντι ανθρώπινου IgG αντισώματος με τα σχηματισμένα συμπλέγματα αντισώματος ακινητοποιημένου αντιγόνου. Στη συνέχεια η προσθήκη υποστρώματος υπεροξειδάσης προκαλεί χρωματική αλλαγή ανάλογη με τη συγκέντρωση των αντισωμάτων. Μετά τη διακοπή της ενζυματικής παραγωγής χρώματος, η παρουσία ή η απουσία αντισωμάτων συγκρίνεται με την οπτική πυκνότητα των πρότυπων αναφοράς. Αντιδραστηρια 1. Πλάκα μικροκοιλοτήτων πολυστυρενίου ELISA επικαλυμμένη με αντιγόνο Jo-1 ( -1 1 2 x 8 κοιλότητες), με θήκη σε αλουμινένια συσκευασία που περιέχει αφυγραντικά 2. ELISA Negative Αρνητικός πρότυπος ορος ελέγχου (1 φιαλίδιο 1.2ml αραιωμένου διαλύματος χωρίς ανθρώπινα αντισώματα Jo-1) 3. Jo-1 ELISA Low Positive (χαμηλό θετικό), 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος που περιέχει συντηρητικό και αντισώματα ανθρώπινου ορού σε ανασυνδυασμένο ανθρώπινο Jo-1, προαραιωμένο, 1.2ml 4. Jo-1 ELISA High Positive (υψηλό θετικό), 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος που περιέχει συντηρητικό και αντισώματα ανθρώπινου ορού σε ανασυνδυασμένο ανθρώπινο Jo-1, προαραιωμένο, 1.2ml 5. ELISA Sample Diluent Διάλυμα αραίωσης (1 φιαλίδιο 50ml χρώματος ρόζ) 6. ELISA Wash Concentrate Διάλυμα πλυσίματος (1 φιαλίδιο 25ml συγκέντρωσης Χ40 χρώματος κόκκινου). Ανατρέξτε στο τμήμα Μεθόδων για οδηγίες αραίωσης. 7. HRP Conjugate (goat). Αντιανθρώπινη σφαιρίνη IgG (1 φιαλίδιο 10ml χρώματος μπλέ) 8. ΤΜΒ Chromogen Χρωμογόνο (1 φιαλίδιο 10ml ) 9. ELISA Stop Solution Διάλυμα παύσης αντίδρασης. (1 φιαλίδιο 10ml 0.344 θεεινικό οξύ άχρωμο) Προσοχή 1. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Αυτό το προϊόν περιέχει ένα χημικό (0.02% chloramphenicol) στο αραιωτικό δείγματος, στους ορούς ελέγχου και στο σύζευγμα, το οποίο είναι γνωστό στην Πολιτεία της Καλιφόρνιας ότι προκαλεί καρκίνο. 2. Όλα τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας των μαρτύρων αυτού του προϊόντος έχουν ελεγχθεί και είναι αρνητικά για αντισώματα έναντι HIV, HBs A g, H C V ό π ω ς ορίζεται από τους κανονισμούς του FDA. Καμία μέθοδος πάντως δεν είναι σε θέση να αποκλείσει την παντελή απουσία μολυσματικών παραγόντων όπως και για HIV, HBV, HCV. Γι αυτό και όλοι οι ανθρώπινης προέλευσης μάρτυρες θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως δυνητικά μολυσματικά υλικά. 10 1

3. Το αζίδιο του νατρίου χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου είναι δηλητήριο και μπορεί να είναι τοξικό σε περίπτωση κατάποσης. Το αζίδιο νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μολύβδινες ή χάλκινες σωληνώσεις με αποτέλεσμα την πρόκληση δυνητικά εκρηκτικών μεταλλικών ενώσεων αζιδίων. Αν για την απόρριψη του αντιδραστηρίου χρησιμοποιούνται λεκάνες απόπλυσης, η συγκέντρωση των αζιδίων μπορεί να αποφευχθεί ξεπλένοντας με άφθονο νερό. 4. Το σύζευγμα περιέχει μια δηλητηριώδη/διαβρωτική χημική ουσία η οποία μπορεί να είναι τοξική εάν γίνει κατάποσή της σε μεγάλες ποσότητες. Aποφύγετε πιθανά εγκαύματα αποφεύγετε επαφή με τα μάτια και το δέρμα. 5. Το TMB χρωμογόνο περιέχει μία ερεθιστική ουσία που μπορεί να είναι επικίνδυνη εάν την εισπνεύσετε εάν καταποθεί ή εάν απορροφηθεί από το δέρμα. Αποφύγετε κάποιο τραυματισμό, την εισπνοή, κατάποση και επαφή με το δέρμα ή τα μάτια. 6. Το διάλυμα διακοπής της αντίδρασης (Stop Solution) περιέχει θειικό οξύ το οποίο είναι δηλητηριώδες, διαβρωτικό και τοξικό. Για να αποφύγετε χημικά εγκαύματα αποφύγετε την επαφή του με το δέρμα και τα μάτια. 7. Να χρησιμοποιείτε τον κατάλληλο προστατευτικό εξοπλισμό όταν δουλεύετε με τα αντιδραστήρια. 8. Αντιδραστήρια που έχουν χυθεί πρέπει να καθαρίζονται αμέσως. Τηρείτε όλους τους ομοσπονδιακούς, εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς για την απόρριψη αποβλήτων. Ειδικα Μετρα 1. Αυτό το προϊόν είναι γδια διαγνωστική χρήση In Vitro. 2. Η αντικατάσταση συστατικών με διαφορετικά από τα παρεχόμενα σε αυτό το σύστημα μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή αποτελέσματα. 3. Ανεπαρκές πλύσιμο της μικροπλάκας ή αναποτελεσματική αφαίρεση των διαλυμάτων στα ενδιάμεσα στάδια μπορεί να επηρεάσει την ακρίβεια της μεθόδου. 4. Η λειτουργία αυτής της μεθόδου σε αυτόματο αναλυτη καί άλλες συσκευές διανομής, μπορεί να δώσει διαφορετικά αποτελέσματα απο αυτά που αποκτώνται στη χειρωνακτική διαδικασία. Είναι στήν ευθύνη του κάθε εργαστηρίου να καθορίσει τις αποδεκτές τιμές και όρια της αυτόματης διαδικασίας. 5. Μια ποικιλία παραγόντων μπορεί να επηρεάσει την απόδοση της μεθόδου: Η θερμοκρασία των αντιδραστηρίων, η θερμοκρασία του εργαστηριακού χώρου, η ακρίβεια και επαναληψιμότητα του πιπεταρίσματος, η πλύση και η αφαίρεση των διαλυμάτων από τη μικροπλάκα, η ποιότητα του φωτόμετρου, οι χρόνοι επώασης. Προσεκτική τήρηση της διαδικασίας είναι απαραίτητη για ακριβή και επαναλήψιμα αποτελέσματα. 6. Συνιστάται η ακριβής τήρηση του πρωτοκόλλου. 7. Ανεπαρκής συντήρηση της μικροπλάκας (κλείσιμο της αχρησιμοποίητης πλάκας) μπορεί να προκαλέσει αποδομή του συνδεδεμένου αντιγόνου και αποτελέσματα χαμηλής ακρίβειας. 8. Μη αποδεκτές χαμηλές τιμές απορρόφησης μπορεί να παρατηρηθούν αποδύο η περισσότερες χρήσεις της σφαιρίνης απο το ίδιο φιαλίδιο. Είναι σημαντικό να ακολουθείτε τις οδηγίες χρήσης της σφαιρίνης. 9. Χημική μόλυνση της σφαιρίνης μπορεί να προέλθει απο ανεπαρκή καθαρισμό των τμημάτων διανομής των αναλυτών. Κατάλοιπα απο εργαστηριακά χημικά όπως φορμαλίνη, χλωρίνη, εθανόλη, η απορρυπαντικά θα προκαλέσουν υποβιβασμό της σφαιρίνης με το χρόνο. Συνιστάται ο καθαρισμός των οργάνων και συσκευών μετα τη χρήση χημικών καθαριστικών. Αποθήκευση 1. Αποθηκεύσατε τα αντιδραστήρια στους 2-8 ο C. Να μήν παγώνουν. Είναι σταθερά για χρήση μέχρι τη λήξη τους εάν αποθηκεύονται συμφωνα με τις οδηγίες. 2. Ο ι μ χρησιμοποιούμενες η σειρές επικαλυμένων με αντιγόνο πηγαδιών πρέπει να ασφαλίζονται στην αλουμινένια συσκευασία τους, η οποία περιέχει απορροφητικό υγρασίας, και να φυλάσονται στούς 2-8 ο C. 3. Το αραιωμένο διάλυμα πλύσης είναι σταθερό για μία εβδομάδα στούς 2-8 ο C. Δείγματα Η διαδικασία μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο με δείγματα ορού. Η προσθήκη αζιδίου η άλλων συντηριτικών στο υποό έλεγχο δείγμα μπορεί να επιρεάσει τα αποτελέσματα. Μικροβιακή μόλυνση, θέρμανση η δείγματα περιέχοντα ορατά ξένα στοιχεία δέν πρέπει να χρησιμοποιούνται. Αιμολυθέντα η λιπαιμικά δείγματα η ορός πρέπει να αποφεύγονται. Μετά τη συλλογή του δείγματος, ο ορός θα πρέπει να διαχωρίζεται άμεσα από το ολικό αίμα. CLSI (NCCLS) Document H18-A2 προτείνει τις παρακάτω συνθήκες συντήρησης και αποθήκευσης των δειγμάτων: Τα δείγματα πρέπει να διατηρούνται σε θερμοκρασία δωματίου όχι περισσότερο από 8 ώρες. Σε περίπτωση που η δοκιμασία δεν πραγματοποιηθεί άμεσα, τότε τα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν σε θερμοκρασία συντήρησης (2 8 ο C) μέχρι 48 ώρες. Για μεγαλύτερο διάστημα, τα δείγματα θα πρέπει να καταψυχθούν στους 20 ο C. Τα κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να αναμιχθούν καλά μετά την απόψυξη και πριν από την εξέταση. Διαδικασία Υλικά που παρέχονται 1 Jo-1 ELISA μικροπλάκα (12-1x8 πηγαδάκια), με βάση 1 1.2ml αραιωμένος ELISA Negative Αρνητικός πρότυπος ορός ελέγχου (έτοιμος προς χρήση) 1 1.2ml αραιωμένος Jo-1 Low Θετικός πρότυπος ορός ελέγχου (έτοιμος προς χρήση) 1 1.2ml αραιωμένος Jo-1 High Ρυθμιστής (έτοιμος προς χρήση) 2

1 50ml HRP Sample Diluent, HRP Αραιωτικό δείγματος 1 25ml HRP Wash Concentrate, HRP Συμπύκνωμα πλύσης, 40x συμπυκνωμάτων 1 10ml HRP Conjugate, HRP Σύζευγμα IgG (αίγας), 1 10ml TMB Chromogen, TMB Χρωμογόνο 1 10ml HRP Stop Solution, HRP Διάλυμα διακοπής, 0.344M θεεινικό οξύ Αντιδραστήρια και εξοπλισμός που δεν συμπεριλαμβάνονται Μικροπιπέτες ρυθμιζόμενου όγκου 5, 100, 200 300 και 500 μl Απορριπτόμενα ρύγχη για μικροπιπέττες Σωληνάρια για την διάλυση δειγμάτων των ασθενών όγκου 4 ml Αποσταγμένο ή μη ιονισμένο νερό 1L δοχείο για το διάλυμα HRP Wash Concentrate (Διάλυμα πλυσίματος) Φωτόμετρο μέτρησης της μικροπλάκας με δυνατότητα φίλτρου στα 450 και 620 nm Μεθοδολογια Πριν ξεκινήσετε 1. Όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα θα πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου (20 26 C) και να έχουν αναδευτεί καλά. 2. Αραιώστε το συμπυκνωμένο HRP διάλυμα πλύσεων 1:40 προσθέτοντας το περιεχόμενο του φιαλιδίου σε 975 ml απεσταγμένου νερού. Σε περίπτωση που δέν θα χρησιμοποιήσετε ολόκληρη τη μικροπλάκα μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μικρότερη ποσότητα ετοιμάζοντας 2 ml συμπυκνωμένου Wash και 78 ml απεσταγμένου νερού για κάθε 16 πηγαδάκια. Το αραιωμένο υπόστρωμα είναι σταθερό για μία εβδομάδα στους 2-8 C. 3. Ετοιμάστε τις αραιώσεις 1:101 των δειγμάτων υπό εξέταση προσθέτοντας 5 μl ορού σε 500μl αραιωτικό δείγματος. Η προετοιμασία των δειγμάτων θα πρέπει να γίνεται εντός 8 ωρών. Οι θετικος και ο αρνητικός πρότυποι οροί δεν χρειάζονται αραίωση. 4. Για την αποτελεσματικότερη ακρίβεια των αποτελεσμάτων προτείνεται η εις διπλούν τοποθέτηση όλων των διαλυμάτων αναφοράς, πρότυπων ορών ελέγχου και δειγμάτων. Συνιστάται η επανάληψη της εξέτασης των δειγμάτων. Διαδικασία 1. Όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα θα πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου (20 26 C) και να έχουν αναδευτεί καλά. Υπολογίστε τον απαραίτητο αριθμό πηγαδιών που απαιτούνται, και φυλάξτε τις υπόλοιπες στην ειδική θήκη την οποία θ α π ρ έ π ε ι ν α τ η ν κ λ ε ί σ ε ώστε να προστατέψετε την μικροπλάκα από την υγρασία. 2. Προσθέστε 100 μl πρότυπων ορών ελέγχου, υψηλού, χαμηλού, αρνητικού και των υπό έλεγχο αραιωμένων δείγματων στις προκαθορισμένες θέσεις. Καλύψτε την μικροπλάκα και επωάστε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Ο χρόνος επώασης ξεκινάει με τη προσθήκη του τελευταίου δείγματος. 3. Πλύση: Ξεπλύνετε καλά κάθε πηγαδάκι από τα περιεχόμενα. Προσθέστε 200-300µL αραιωμένου ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης HRP σε όλα τα πηγαδάκια και ξεπλύνετε. Επαναλάβετε τη διαδικασία δύο ακόμα φορές, για τρεις πλύσεις συνολικά. Αναποδογυρίστε την μικροπλάκα και τινάξτε την σε απορροφητικό υλικό για να αφαιρέσετε το εναπομείναν υγρό κατόπιν της τελικής πλύσης. Είναι σημαντικό κάθε πηγαδάκι να είναι εντελώς άδειο μετά από κάθε πλύση. Ακολουθήστε την ίδια διαδικασία για την πλύση όπως και για την προσθήκη των δειγμάτων. 4. Προσθέστε 100 μl HRP IgG συζεύγματος σε όλες τις πηγαδάκια. Το σύζευγμα πρέπει να αφαιρεθεί από τα φιαλίδια χρησιμοποιώντας τυπικές ασηπτικές συνθήκες και καλές εργαστηριακές πρακτικές. Αφαιρέστε από το φιαλίδιο την ποσότητα συζεύγματος που είναι απαραίτητη για την ανάλυση. ΠΡΟΣ ΑΠΟΦΥΓΗ ΕΝΔΕΧΟΜΕΝΗΣ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΚΗΣ Ή/ΚΑΙ ΧΗΜΙΚΗΣ ΜΟΛΥΝΣΗΣ, ΔΕΝ ΠΡΕΠΕΙ ΠΟΤΕ ΝΑ ΕΙΣΑΓΕΤΕ ΞΑΝΑ ΣΤΟ ΦΙΑΛΙΔΙΟ ΤΗΝ ΠΟΣΟΤΗΤΑ ΣΥΖΕΥΓΜΑΤΟΣ ΠΟΥ ΔΕΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΕ. Πραγματοποιήστε επώαση στα πηγαδάκια για 30 λεπτά, όπως στο βήμα 2. 5. Πλύση: Επαναλάβετε το βήμα 3. 6. Προσθέστε 100 μl TMB χρωμογόνου. Επωάστε τη μικροπλάκα για 30 λεπτά σε σκοτεινό μέρος. 7. Προσθέστε 100µL διαλύματος διακοπής αντίδρασης (HRP Stop Solution) σε κάθε πηγαδάκι. Ακολουθήστε την ίδια διαδικασία και πρόγραμμα του πρόσθετου διαλύματος διακοπής της αντίδρασης (HRP Stop Solution) όπως χρησιμοποιήθηκε για το χρωμογόνο TMB. Τινάξτε ελαφρά την μικροπλάκα με το δάκτυλο, για να αναμιχθούν εκτενώς τα πηγαδάκια. 8. Η μέτρηση της οπτικής πυκνότητας των δειγμάτ ω ν θ α π ρ έ π ε ι ν α γ ί ν ε ι ε ν τ ό ς μ ί α ς ώ ρ α ς α π ό τ ο τ έ λ ο ς της διαδικασίας, σε φωτόμετρο στα 450 nm με φίλτρο αναφοράς 620 nm προαιρετικά. Ποιοτικός έλεγχος 1. Οι θετικοί και ο αρνητικός πρότυποι οροί ελέγχου θα πρέπει να χρησιμοποιούνται σε κάθε ανοσοενζυμική διαδικασία έτσι ώστε να εξασφαλίζεται ότι τα αντιδραστήρια και οι διαδικασίες λειτουργούν σωστά. 2. Οι θετικοί και ο αρνητικός πρότυποι οροί ελέγχου είναι ήδη αραιωμένοι. Γι αυτό το λόγο δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως μέτρο ελέγχου της διαδικασίας αραίωσης των δειγμάτων. 3. Επιπλέον κατάλληλοι οροί, μάρτυρες, θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν από δείγματα ρουτίνας τα οποία θα αποθηκεύονται στη βαθιά κατάψυξη. πολιτειακών και\ ή των ομοσπονδιακών κανονισμών ή επικυρωμένων οργανισμών. Μπορείτε να ετοιμάσετε επιπλέον απαραίτητο ορό μάρτυρα διαιρώντας σε ίσα μέρη τα δείγματα ανθρώπινου ορού που βρίσκεται στα πηγαδάκια και φυλάσσοντας στους -20 C. 3

4. Για να θεωρηθούν τα αποτελέσματα έγκυρα θα πρέπει να ισχύουν τα παρακάτω κριτήρια. Στη περίπτωση που κάποιο κριτήριο δεν ισχύσει τότε θα πρέπει να επαναληφθεί η διαδικασία. α. Η απορρόφηση του υψηλού θετικού πρότυπου ορού ελέγχου (high positive) θα πρέπει να είναι μεγαλύτερη από την απορρόφηση του χαμηλού θετικού πρότυπου ορού ελέγχου (low positive) η οποία θα πρέπει να είναι μεγαλύτερη από την απορρόφηση του αρνητικού πρότυπου ορού ελέγχου. β. Η απορρόφηση του υψηλού θετικού πρότυπου ορού ελέγχου (high positive) θα πρέπει να είναι μεγαλύτερη από 1.0 ενώ η απορρόφηση του αρνητικού πρότυπου ορού ελέγχου δεν θα πρέπει να υπερβαίνει το 0.2. γ. Η απορρόφηση του χαμηλού θετικού πρότυπου ορού ελέγχου (low positive) θα πρέπει είναι μεγαλύτερη από το διπλάσιο της απορρόφησης του αρνητικού πρότυπου ορού ελέγχου ή μεγαλύτερη από 0.25. δ. Ο αρνητικός και ο υψηλός έλεγχοι δείχνουν την εγκυρότητα της διαδικασίας. Ο υψηλός θετικός δέν αντιστοιχεί στό σημείο αποκοπής της μεθόδου. ε. Ο χρήστης μπορεί να απευθυνθεί στό έγγραφο C24-A toυ CLSI (NCCLS) για περισσότερα στοιχεία του ποιοτικού ελέγχου. Υπολογισμός Αποτελεσμάτων Ο μέσος όρος απορροφητικότητας (O.A.) για κάθε διπλό δείγμα πρέπει πρώτα να υπολογισθεί. Η αντίδραση για κάθε δείγμα μπορεί μετά να υπολογισθεί διαιρώντας το μέσο όρο απορροφητικότητας του δείγματος με το μέσο όρο απορροφητικότητας του Jo-1 ELISA Low, και πολλαπλασιάζοντας το αποτέλεσμα με την τιμή του Jo-1 ELISA Low. Η τιμή του Jo-1 ELISA Low σε (units) φαίνεται στην ετικέτα του φιαλιδίου. Τιμή δείγματος Ο.A. δείγματος (μονάδες) = X Jo-1 oρού ελέγχου (μονάδες) O.A. Jo-1 ορού ελέγχου Η αντιδραστικότητα σχετίζεται με την ποσότητα του παρόντος αντισώματος σε ένα μη-γραμμικό τρόπο. Ενώ οι αυξήσεις και οι μειώσεις στις συγκεντρώσεις των αντισωμάτων του ασθενή θα αντικατοπτρίσουν μια ανταποκρινόμενη άνοδο ή πτώση στην αντιδραστικότητα, η αλλαγή δεν είναι ανάλογη (π.χ. ένας διπλασιασμός της συγκέντρωσης του αντισώματος δεν θα διπλασιάσει την αντιδραστικότητα). Αν απαιτείται ακριβέστερη ποσοτικοποίηση των αντισωμάτων του εξεταζόμενου, πρέπει να γίνουν διαδοχικές αραιώσεις του δείγματος και η τελευταία αραίωση που θα μετρηθεί ως θετική στην ανάλυση θα αναφερθεί ως ισχύς διαλύματος αντισωμάτων του ασθενούς. Ερμηνεία των Αποτελεσμάτων Η τεχνική ELISA είναι πολύ ευαίσθητη και ικανή να ανιχνεύει μικρές διαφορές στον ασθενή πλυθησμό. Οι κατωτέρω είναι ενδεικτικές τιμές. Κάαθε εργαστήριο πρέπει να καθορίσει τίς δικές του τιμές αναφοράς βάσει τών τεχνικών, ελέγχων και πλυθισμού κ.λ.π. Το δείγμα τότε μπορεί να κατηγοριοποιηθεί ως αρνητικό, ασθενές θετικό, σχετικά θετικό ή ισχυρά θετικό, σύμφωνα με τον πίνακα παρακάτω: Μονάδες Αρνητικό <20 Ασθενές θετικό 20-39 Σχετικά θετικό 40-80 Ισχυρά θετικό >80 1. Ένα θετικό αποτέλεσμα αποδεικνύει την παρουσία των αντισωμάτων Jo-1 και υποδηλώνει την παρουσία σκληροδέρματος και άλλων σχετικών μολύνσεων του συνδετικού ιστού. 2. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα αποδεικνύει την απουσία των αντισωμάτων Jo-1υπό την αρνητική αποκοπή της ανάλυσης. 3. Συστήνεται τα αποτελέσματα να συνοδεύονται με την πληροφορία «τα ακόλουθα αποτελέσματα π ρ ο έ κ υ ψ α ν μ ε I N O V A Q U A N T A Jo-1 L i t E e L I S A. Ο ι -1 που τ ι προκύπτουν μ έ ς J o απο διαφορετικούς κατασκευαστές δέν είναι συγκρίσιμες. Οι τιμές δέν μπορούν να συσχετισθούν με τόν τελικό Το τίτλο. μέγεθος των αναφερόμενων επιπέδων IgG δεν μπορεί να συσχετιστεί με ένα τίτλο τελικού σημείου.» Περιορισμοί της Μεθόδου 1. Η παρουσία των άνοσων συμπλεγμάτων ή άλλων συσσωρευμάτων ανοσοσφαιρίνης στο δείγμα του ασθενή μπορεί να προκαλέσει ένα αυξημένο επίπεδο από μη-συγκεκριμένο δέσιμο και να παράγει ψευδή θετικά σε αυτή την ανάλυση. 2. Δεν είναι όλοι οι ασθενείς με πολυμυοσίτιδα θετικοί στο Jo-1. 3. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης πρέπει να χρησιμοποιηθούν σε συνδυασμό με κλινικά ευρήματα και άλλες ορολογικές εξετάσεις. 4. Τα αποτελέσματα αυτής της μεθόδου δέν έχουν ελεγχθεί σάν ακριβεί γιά δείγματα εκτός ορού. Αναμενόμενες Τιμές Η ικανότητα του QUANTA Lite Jo-1 ELISA να διακρίνει τα Jo-1 αντισώματα κρίθηκε σε σύγκριση με ένα εμπορικό τεστ Διπλής Ανοσοδιάχυσης (Ouchterlony) από την INOVA Diagnostics, Inc. Τα αποτελέσματα του τεστ Διπλής Ανοσοδιάχυσης (Ouchterlony) θα ήταν θετικά αν υπήρχε μια διαχωριστική γραμμή και αρνητικά αν δεν υπήρχε καμία γραμμή. 4

Φυσιολογικές Τιμές Εκατόν οκτώ τυχαία δείγματα επιλέχθηκαν και εξετάστηκαν με τη μέθοδο Jo-1ELISA. Ο μέσος όρος του πληθυσμού των δειγμάτων ήταν 2.0 μονάδες με μια κανονική παρέκκλιση 0.5 μονάδων. Από 3.5 έως 1.2 μονάδες ήταν το εύρος του πληθυσμού. Αυτή η δοκιμασία δηλώνει ότι ο μέσος όρος του κανονικού είναι άνω των 36 κανονικών αποκλίσεων κάτω από την αποκοπή. Σχετική Ευαισθησία και Ειδικότητα Για να καθοριστεί η σχετική ευαισθησία και ειδικότητα της ανάλυσης, εξετάστηκαν 235 ΑΝΑ θετικά δείγματα ασθενών που περιέχουν αντισώματα σε μεγάλη ποικιλία πυρηνικών αντιγόνων και με τη μέθοδο της ανοσοδιάχυσης και με την μέθοδο ELISA. Από τα 235 δείγματα που εξετάστηκαν, 12 ήταν θετικά και 223 ήταν αρνητικά και με τις δύο μεθόδους. Τα αποτελέσματα από την ανάλυση Jo-1 ELISA συνοψίζονται στον παρακάτω πίνακα: ELISA + - + 12 0 Σχετική Ευαισθησία 100% ΟΤ Σχετική Ειδικότητα 100% - 0 223 Σχετική Ευκρίνεια 100% Ακρίβεια και Επαναληψιμότητα Η ακρίβεια και αναπαραγωγικότητα της ανάλυσης μετρήθηκε εξετάζοντας έξι διπλά καθένα από ασθενώς θετικό και αρνητικό δείγμα με έξι ξεχωριστές αναλύσεις. Η μέση αντιδραστικότητα του ασθενώς θετικού ήταν 47.5 μονάδες ενώ η μέση αξία του αρνητικού δείγματος ήταν 24.0 μονάδες. Η κανονική απόκλιση και ο συντελεστής για κάθε δείγμα συνοψίζονται παρακάτω: Σχετικά Θετικό Αρνητικό SD CV SD CV Ολικά 2.5 5.3% 1.0 4.2% Κατά τη διάρκεια της ανάλυσης 2.6 5.6% 0.5 2.0% Μεταξύ των αναλύσεων 0.6 1.4% 1.0 4.3% QUANTA Lite και INOVA Diagnostics είναι σήματα κατατεθέντα Copyright 2011 All Rights Reserved 5

Βιβλιογραφία 1. Tan EM: Autoantibodies to nuclear antigens(ana): Their immunobiology and medicine. Advances in Immunology 33: 167-239, 1982. 2. Tan EM, et al.: The 1982 Revised Criteria for the Classification of Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis and Rheumatism 25: 1271-1277, 1982. 3. Biwas T, et al.: An enzyme-linked immunosorbent assay for the detection and quantitation of anti-jo1 antibody in human serum. J Immunol Methods 98: 243, 1987. 4. Nishikai M and Reichlin M: Heterogeneity of precipitating antibodies in polymyositis and dermatositis: characterization of the Jo-1 antibody system. Arthritis and Rheumatism 23: 881, 1980. 5. Arnett J, et al.: The Jo-1 antibody system in myositis: relationships to clinical features and HLA. J Rheumatol 8: 925, 1981. 6. Reichlin M, et al.: Antibodies to a nuclear/nucleolar antigen in patients with polymyositis overlap syndrome. J Clin Immunol 4: 40, 1984. 7. Bernstein R, et al.: Anti-Jo-1 antibody: a marker for myositis with interstitial lung disease. Br Med J 289: 151, 1984. 8. Hochberg M, et al.: Antibody to Jo-1 in polymyositis/dermatomyositis: association with interstitial pulmonary lung disease. J Rheumatol 11: 663, 1984. 9. Yoshida S, et al.: The precipitation antibody to an acidic nuclear protein antigen, the Jo-1 in connective tissue diseases: a marker to a subset of polymyositis with interstitial pulmonary fibrosis. Arthritis and Rheumatism 26: 604, 1983. 10. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. Κατασκευαστής: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : 877-829-4745 Technical Service (Outside the U.S.) : 00+ 1 858-805-7950 support@inovadx.com Aντιπροσωπευτικός: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Germany Tel.: +49-6894-581020 Fax.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 628585GRC November 2011 Revision 15 6