Transfusion confusion: Είναι η γονοτύπηση η πανάκεια? Μαριάννα Πολίτου Αναστασία Χαϊκάλη
Συστήματα ομάδων αίματος Περισσότερα από 300 κληρονομούμενα αντιγόνα ομάδων αίματος έχουν περιγραφεί στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων.
Η πλειοψηφία των σημαντικά κλινικών ερυθροκυτταρικών αντιγόνων προκύπτει από απλές σημειακές αλλαγές (SNPs snips )
PCR-SSP Sequence Specific Priming Ιnnotrain Eικ. Sabine Scholz. Inno-train,2014
BeadChip Microarray Assay
BeadChip Microarray Assay
Περίπτωση 1 Αιμοδότης Ορολογικά αποτελέσματα Immucor Ευθεία ομάδα αντι-α:(+/-), αντι-β(+4), αντι-αβ(+4), αντι- Α1λεκτινη:(-) ( Β?) Ανάστροφη ομάδα Α1cells: 0, A2cells:0 Bcells:0, Ocells:0 (ΑΒ)
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης Μοριακά αποτελέσματα PCR-SSP ΑΒΟ: Α1*B SUBTYPE ABO: Αw06
Σχόλιο Ερυθρά λανθασμένα Β (ασύμβατα στη διασταύρωση) Πλάσμα λανθασμένα Β (όχι πρόβλημα) ΑΒ ορολογικά Ασθενής θα μεταγγιζόταν με Β που δεν θα δημιουργούσε πρόβλημα
Περίπτωση 2 Αιμοδότης που είχε αιμοδοτήσει 11 φορές σε διάστημα 17 ετών Είχε πραγματοποιηθεί μόνο ευθεία ομάδα Ο αιμοδότης είχε χαρακτηριστεί ως Ο Ορολογικά αποτελέσματα Ευθεία αντι-α(-) αντι-β(-) αντι-αβ(-) Ανάστροφη ομάδα Α1cells:0, Βcells:+4
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης ΑΒΟ: O1/A* Δεν τυποποιήθηκε κάποια γνωστή υποομάδα Α
Σχόλιο Αιμοδότης Ο στην πραγματικότητα Α Ερυθρά λανθασμένα Ο Πλάσμα λανθασμένα Ο (χωρίς πρόβλημα) Ασθενής με υποομάδα Α? Κανένα πρόβλημα να τον μεταγγίζουμε με Ο
Περίπτωση 3 Αιμοδότης Ορολογικά αποτελέσματα Immucor Ευθεία ομάδα αντι-α(+/-), αντι-β(-), αντι-αβ(+4) αντι-α1λεκτίνη: 0, Αντι Η-λεκτίνη:+4 (μάλλον Α) Ανάστροφη ομάδα Α1cells:+2, A2cells:0, Bcells:+4, Ocells:0 (μάλλον Ο)
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης Μοριακά αποτελέσματα PCR-SSP ΑΒΟ: Ο/Α SYBTYPE ABO: Αx06
Σχόλιο Υπομάδα Αx με αντι-α1 Ερυθρά Α Πλάσμα δίνεται μόνο σε Ο λόγω της ύπαρξης αντι-α1 και αντι-β (ορολογικά!!!) Ασθενής μεταγγίζεται μόνο με Ο
Σε ασθενή η ΑΒΟ γονοτύπηση δε θα αλλάξει τη μεταγγισιοθεραπευτική πρακτική Σε αιμοδότη θα χαρακτηριστούν σωστά τα παράγωγα Οι υποομάδες Α και Β μπορούν να χαρακτηριστούν με τεχνικές απορρόφησης έκλουσης ορολογικά
Περίπτωση 4 Αιμοδότης ΟRhD ( ) ΑΝΤΙ-D ORTHO (μικροστήλες γέλης): 0 ANTI-D DIAMED (μικροστήλες γέλης): 0 Dweak + (ορολογικά με χρήση γ σφαιρίνης ΙΑΤ) με αντιορούς LORNE:+ και MILLIPORE:+
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης Ccee D weak type 1
Σχόλιο Πρέπει να στείλουμε μοριακό έλεγχο σε αιμοδότη με ασθενή ποικιλία του D? Position Effect (Gene Interaction) Ceppelini effect: A C gene in the trans position to the D gene can suppress the D gene as in the genotype cde/cde
147 ασθενείς ποικιλίες D Rhesus database (http://www.rhesusbase.info/) Στο 95% των Καυκασίων weak D types 1, 2, 3 or 4.0/4.1
Greek blood donors with a weak D phenotype (n=64) D variant phenotype Weak D (n=57) RHD variant (ISBT Nomenclature or Genbank Acceddion No.) Rh C/c and E/e phenotype Numbe r of donors Percentage% Type 1 RHD*01W.01 Ccee 35 57,8 CCee 2 Type 2 RHD*01W.2 ccee 1 3,1 CcEe 1 Type 3 RHD*01W.3 Ccee 7 12,5 CCee 1 Type 4.1 RHD*09.03.01 Ccee 1 1,6 Type 5 RHD*01W.5 ccee 2 4,7 CcEe 1 Type 11 RHD*11 Ccee 5 7,8 Type 15 RHD*15 ccee 1 1,6 Partial D (n=6) DV type 1 RHD*DV.1 Ccee 2 3,1 DV type 2 RHD*DV.2 Ccee 1 1,6 DV type 5 RHD*DV.5 Ccee 1 1,6 DAR1.1/type 4.2.1 RHD*09.01.01/RHD*DAR1.01 Ccee 1 1,6
The current 30th edition of Standards requires a weak D test for blood donors, thereby protecting RhDnegative transfusion recipients from inadvertent exposure by transfusion to potentially immunogenic RBCs with a serological weak D phenotype In contrast, the current 30th edition of Standards considers a weak D test for transfusion recipients to be optional, resulting in most recipients with a serological weak D phenotype being categorized as RhD-negative, protecting them from inadvertent exposure to RBCs that are either D+ or express a serological weak D phenotype
Περίπτωση 5 Ασθενής 9 ετών με αρτηριοφλεβώδεις αγγειοδυσπλασίες δέρματος εντέρου και ουροδόχου κύστεως. Ομάδα Β RhDweak CCee K- Έχει ιστορικό μετάγγισης με ΒRhD(+) 2 μονάδες και ΒRhD(-) 1 μονάδα DAT(-) IAT(-) Δυσκολία ανεύρεσης Β RhD(-) CCee Μπορεί να μεταγγιστεί με Β RhD (+)?
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης RHD*weak D type 1
Dweak 0.2-1% των Καυκασίων(ορολογικά) Αλλαγές αμινοξέων διαμεμβρανικά και ενδοκυτταρικά. Ασθενής έκφραση όλων των D επιτόπων <5000 ανά RBC Ορισμένοι D weak types Τype 1 Type 2 Type 3 Type 4.0 Type 4.2 Type 5 Type 11 Type 15 Type 19 Type 20 95% των D weak. Έκθεσή σε RhD + ερυθρά δεν οδηγεί σε παραγωγή αντι-d. Παράγουν αντι-d όταν εκτίθενται σε RhD+ RBCs Εικ.5.Avent and Reid et al. Blood 2000, 95:375
Τι προβλήματα αναδυκνείονται? Ενιαίες διαδικασίες ανοσοαιματολογικού εργαστηρίου στην τυποποίηση ομάδας Ανοσοαιματολογικό εργαστήριο αναφοράς Συμφωνία πως θα χαρακτηρίζονται οι αιμοδότες στο σύστημα
Ασθενείς
Ασθενής ετών 30 Περίπτωση 6 Ορολογική τυποποίηση ομάδας: ORhD(+) Kell(-), DAT(-)/ IAT(-) ccee (Ortho AutoVue) ccee (Diamed) Ίδια αποτελέσματα με νέα δείγματα, ίδιες μεθόδους (και με επώαση στους 37ο C και με πλύσιμο με φυσιολογικό ορό) Υποψία Eweak
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης BeadChip HEA test kit: ccee BeadChip RHCE test kit: WT/ccEweake 676 G>C (A226P) 500 T>A (M167K) AB (ετερόζυγο=ee) AB (ετερόζυγο=eweak)
Περισσότερες οι ερωτήσεις από τις απαντήσεις? Ως ασθενής θα χαρακτηριστεί E+ ή E? Ως αιμοδότης η μονάδα θα χαρακτηριστεί E+ ή E? Εάν διασταυρωθεί σε ασθενή με anti-e, θα είναι ασύμβατη? (ίσως αν αντιδρά με πολυκλωνικό anti-e) Θα μπορούσε να προκαλέσει τη δημιουργία anti-e σε ασθενή E?
Περίπτωση 7 Ασθενής ετών 50, με ομόζυγη ΜΑ πολυμεταγγιζόμενος. Ορολογική τυποποίηση ομάδας/φαινοτύπου: Α1RhD(-), ccee, Kell(-) Σε παλαιότερη διερεύνηση για έλεγχο αλλοαντισωμάτων ταυτοποιήθηκε πιθανό αντι-jka και αντι-kell. Επίσης παλαιότερα είχε ταυτοποιηθεί αυτοαντισωμα αντι-e. Τελευταία γνωστή μετάγγιση με ΣΕ ομάδας Α1RhD- ccee K -
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης BeadChip HEA test kit: cceε,kell(-),jka(-) BeadChip RHCE test kit (για επιβεβαίωση): ccee αυτο-αντι-e αλλο-αντι-e
Ορολογικά / μοριακά αποτελέσματα CcEe Cc ee cc EE Cc ee ccee Cc ee ccee CCΕe Cc ee
Περίπτωση 8 Ορολογική τυποποίηση ομάδας/φαινοτύπου: ORhD(+), Ccee, Kell(-) Άμεση Coombs (με πολυδύναμο ορό): (3+) Ανίχνευση ανώμαλων συγκολλητινών (πάνελ 11ερ) Ταυτοποιήθηκε αυτο-αντι-e (επιβεβαιώθηκε στο eluate) Ορολογικός προσδιορισμός εκτεταμένου ερυθροκυτταρικού φαινοτύπου : αδυναμία λόγω DAT(+) Ασυμβατότητα Μετάγγιση με μονάδες αρνητικές ως προς τον εκτεταμένο ερυθροκυτταρικό φαινότυπο
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης αντιγόνα ορολογικά μοριακά Jka - - Jkb + + Fya? + Fyb - + M + + N - - S? + s? - Lua - - Lub + +
Περίπτωση 9 Ασθενής 42 ετών, O(+), ccee, Kell(-) Μεταγγίσεις από 4 μηνών έως το 2014 με ΣΕ Ο(+), Kell(-) Αιμολυτικές αντιδράσεις με μεγάλη πτώση Hb, μη σχετιζόμενες με τη μετάγγιση 2014: DAT(+/-), IAT(-), πάνελ ερυθρών: αντι-c, αυτο-αντι-ε Οδηγία: μετάγγιση με ΣΕ Ο(-),ccee, Jkb(-) 2018: IAT (με/χωρίς ένζυμο):(-), DAT(-) Ορολογικός έλεγχος 5/2018: Ο(-), ccee, K(-)
Αποτελέσματα μοριακής τυποποίησης O(+) CcEe Kell(-) Jkb(+)
Που χρησιμεύει η γονοτύπηση Ο μοριακός φαινότυπος μπορεί να προβλέψει την ύπαρξη αντιγόνων που θα μπορούσαν να προκαλέσουν αλλοανοσοποίηση Μπορεί να υποστηρίξει ή να αποκλείσει την ύπαρξη ύποπτων αντισωμάτων Εφαρμογές αιματολογικοί ασθενείς με θαλασσαιμία, δρεπανοκυτταρική αναιμία πρόσφατα μεταγγισμένοι ασθενείς με θερμά αυτοαντισώματα DAT(+) ασθενείς με περίπλοκα ή πολλαπλά αντισώματα ασθενείς που έχουν υποβληθεί σε μεταμόσχευση μυελού των οστών
Η γονοτύπηση δεν αντικαθιστά τις ορολογικές μεθόδους Έχει επικουρικό ρόλο