RIDA AllergyScreen Αριθ. Προϊόντος: A2142 Panel 1 / ASAN / HVEN / IND / IR / KO / KZ MA / NP / OUSA / PE / PY / RAF / TH / TW / UY / VE / VIET Αριθ. Προϊόντος: A2242 Panel 2 / ASAN / CA / DOHA / H / IAARI IND / KO / KSA / KZ / MA / ME / MENA / MOFID / TR / VE / Αριθ. Προϊόντος: A2342 Panel 3 / BD / CA / DOHA / H / IND / KO / KSA / KZ / MA / ME / MENA / MOFID / RO / SK / TR / VE Αριθ. Προϊόντος: A2442 Panel 4 / KO / KZ / MA / PA / VE Αριθ. Προϊόντος: A3054 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D-64297 Darmstadt, Γερµανία, Τηλ.: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Φαξ: +49 (0) 61 51 81 02-20
1. Πεδίο εφαρµογής Για διαγνώσεις in vitro. Πρόκειται για µια ενζυµοανοσολογική δοκιµή πάνω σε µια µεµβράνη νιτροκυτταρίνης (Ανοσοϊστοχηµική ανάλυση) για τα ηµιποσοτικά αποδεικτικά στοιχεία συγκεκριµένων αντισωµάτων IgE έναντι ενός πάνελ µεµονωµένων αλλεργιογόνων στον ανθρώπινο ορό. 2. Περίληψη και εξήγηση της δοκιµής Καθήκον του ανοσοποιητικού συστήµατος είναι η άµυνα σε παθογόνα βακτήρια, ιούς και άλλους µικροοργανισµούς. Με την άµυνα αυτή εξασφαλίζει την προστασία του οργανισµού κατά την πρώτη επαφή µε τους παθογόνους φορείς αλλά και την ανοσοποίηση σε περίπτωση επανειληµµένης επαφής. Πριν από κάθε αλλεργική αντίδραση έχει προηγηθεί επίσης µια πρώτη επαφή χωρίς συµπτώµατα, κατά την οποία σχηµατίστηκαν ήδη ειδικά αντισώµατα της κλάσης E (αντισώµατα IgE). Σε περίπτωση επανειληµµένης επαφής µε τον αλλεργιογόνο φορέα αυτά τα αντισώµατα IgE αντιδρούν µε τα αλλεργιογόνα και οδηγούν σε κατανοµή µεσαζόντων (κυρίως από κύτταρα παραγωγής) όπως ισταµίνη, λευκοτριένη, προσταγλανδίνη κ.λπ., τα οποία προκαλούν τα συµπτώµατα της αλλεργίας. Με τη µέτρηση αυτών των ειδικών αντισωµάτων IgE στον ορό µπορούν να εντοπιστούν οι αλλεργιογόνες ουσίες σε περίπτωση αλλεργικών αντιδράσεων. Ωστόσο, είναι ήδη δυνατή και η µέτρηση ευαισθητοποίησης χωρίς συµπτώµατα. 3. Αρχές της δοκιµής Η παρούσα δοκιµήβασίζεται στις αρχές της ενζυµοανοσολογικής δοκιµής πάνω σε µια µεµβράνη νιτροκυτταρίνης (Ανοσοϊστοχηµική ανάλυση). Στην επιφάνεια µεµβρανών νιτροκυτταρίνης δεσµεύονται τα αλλεργιογόνα που αντιστοιχούν στη σύνθεση του πίνακα. Τα αντισώµατα IgE που αντιστοιχούν στα αλλεργιογόνα και που υπάρχουν στα δείγµατα ασθενών αντιδρούν µε τα αντιγόνα και δεσµεύονται σε ένα δεύτερο στάδιο σε αντιανθρώπινα αντισώµατα IgE συζευγµένα σε βιοτίνη. Κατά το τρίτο στάδιο επώασης, η βιοτίνη δεσµεύεται σε στρεπταβιδίνη συζευγµένη µε αλκαλική φωσφατάση (συζεύκτης). Με το ένζυµο µετατρέπεται στο τέταρτο στάδιο της επώασης η άχρωµη βάση (BCIP/ NBT) σε ένα µωβ-µπλε τελικό προϊόν. Μεταξή των µεµονωµένων επωάσεων παρεµβάλλεται ένα στάδιο πλύσης εκάστοτε. Η ένταση του µπλε χρώµατος είναι ανάλογη µε την ποσότητα ειδικών για τα αλλεργιογόνα αντισωµάτων στον ορό. Η αξιολόγηση διενεργείται µε το χέρι µε βάση µια βαθµίδα χρωµατισµού στο RIDA X-Screen, στο RIDA quadro-screen ή στο RIDA maxi- Screen 2. 2 RIDA AllergyScreen 13-09-25
4. Περιεχόµενο συσκευασίας Πιν. 1: Σετ επεξεργασίας µε το χέρι: Membrane Wash Antibody Conjugate Substrate 10 τεµάχια 20 ml 4 ml 4 ml 4 ml Λωρίδες δοκιµής RIDA AllergyScreen (µεµβράνες νιτροκυτταρίνης), µε επίστρωση µε διάφορα αλλεργιογόνα επάνω σε 20 δοκιµαστικά πεδίασ ένα αντιδραστικό δοχείο ιάλυµα πλύσης, 25πλης συγκέντρωσης, Tris / NaCl Ανιχνευτής αντισωµάτων µε αντιανθρώπινα αντισώµατα IgE (κατσίκα) συζευγµένα µε βιοτίνη, έτοιµα για χρήση Συζεύκτης στρεπταβιδίνης, στρεπταβιδίνη συζευγµένη µε αλκαλική φωσφατάση, έτοιµη για χρήση Βάση, BCIP / NBT (Bromochloroindolylphosphat / Nitro Blue Tetrazolium), έτοιµη για χρήση Πιν. 2: RIDA AllergyScreen Reagent Kit (A3054): Wash 2 x 20 ml ιάλυµα πλύσης, 25πλης συγκέντρωσης, Tris / NaCl Antibody Ανιχνευτής αντισωµάτων µε αντιανθρώπινα αντισώµατα IgE, 2 x 4 ml έτοιµος για χρήση Συζεύκτης στρεπταβιδίνης, στρεπταβιδίνη συζευγµένη µε Conjugate 2 x 4 ml αλκαλική φωσφατάση, έτοιµη για χρήση Substrate Βάση, BCIP / NBT (Bromochloroindolylphosphat / Nitro Blue 2 x 4 ml Tetrazolium), έτοιµη για χρήση 5. Αντιδραστήρια και η αποθήκευση αυτών Οι λωρίδες δοκιµής πρέπει να αποθηκεύονται σε ψυχρό, ξηρό και σκοτεινό περιβάλλον στην πλαστική συσκευασία. Το σετ της δοκιµής πρέπει να αποθηκεύεται σε θερµοκρασία 2-8 C και µπορεί να χρησιµοποιηθεί και µετά το άνοιγµα έως την ηµεροµηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα. Το αραιωµένο διάλυµα πλύσης µπορεί να διατηρηθεί το ανώτατο για 4 εβδοµάδες εφόσον αποθηκευθεί στους 2-8 C. Αποφεύγετε τη µικροβιακή µόλυνση. Μετά την παρέλευση της ηµεροµηνίας λήξης δεν µπορεί πλέον να χορηγηθεί καµία εγγύηση ποιότητας. Αποφύγετε οπωσδήποτε µια µόλυνση του διαλύµατος υποστρώµατος µε συζεύκτη, καθώς έτσι προκαλείται αλλαγή του χρώµατος του υποστρώµατος. Επίσης, αποφύγετε την άµεση έκθεση του υποστρώµατος στο φως, ώστε να αποτραπεί η 3 RIDA AllergyScreen 13-09-25
αποσύνθεση ή η αλλοίωση του χρώµατος εξαιτίας αυτο-οξείδωσης. Σε περίπτωση χρωµατισµού, το υπόστρωµα δεν µπορεί πλέον να χρησιµοποιηθεί. 6. Πρόσθετα απαραίτητα αντιδραστήρια - απαιτούµενος εξοπλισµός 6.1. Αντιδραστήρια - Αποσταγµένο ή απιονισµένο νερό 6.2. Εξαρτήµατα - αναµικτήρας Vortex - Κύλινδρος µέτρησης (500 ml) - Μικροσταγονόµετρο, 250 µl - Εργαστηριακή φιάλη ψεκασµού 500 ml - Πλαίσιο λωρίδων δοκιµής για λήψη 10 λωρίδων (προαιρετικά) - Κιβώτιο επώασης για επώαση σε σκοτεινό περιβάλλον (το σύστηµα πλαισίου συγκράτησης λωρίδων και κιβωτίου επώασης διατίθεται από την R-Biopharm) - Οριζόντιος αναµίκτης (προαιρετικά) - Στεγνωτήρας (πιστολάκι) απλός του εµπορίου (προαιρετικά) - Συσκευή µέτρησης RIDA X-Screen συµπεριλ. του λογισµικού και του προσωπικού υπολογιστή µε θύρα USB (προαιρετικά) - Συσκευή µέτρησης RIDA quadro-screen συµπεριλ. του Η/Υ και του λογισµικού (προαιρετικά) - Συσκευή µέτρησης RIDA maxi-screen 2 συµπεριλ. του Η/Υ και του λογισµικού 7. Μέτρα προφύλαξης Μόνο για διαγνώσεις in vitro. Αυτή η δοκιµή πρέπει να διεξάγεται µόνο από εκπαιδευµένο εργαστηριακό προσωπικό. Πρέπει να δοθεί προσοχή στις οδηγίες εργασίας σε ιατρικά εργαστήρια. Πρέπει να τηρούνται αυστηρά οι οδηγίες χρήσης σχετικά µε τη διεξαγωγή της δοκιµής. Μην χορηγείτε τα δείγµατα ή τα αντιδραστήρια µε το στόµα χρησιµοποιώντας πιπέτα, αποφύγετε την επαφή µε τραυµατισµένο δέρµα ή τους βλεννογόνους. Κατά τη διάρκεια της εργασίας µε δείγµατα, φοράτε γάντια µίας χρήσης και µετά την ολοκλήρωση της δοκιµής πλένετε τα χέρια σας. Αποφεύγετε το κάπνισµα και την 4 RIDA AllergyScreen 13-09-25
κατανάλωση φαγητού ή ποτού στους χώρους που γίνεται εργασία µε τα δείγµατα ή τα αντιδραστήρια εξέτασης. Τα αντισώµατα και το διάλυµα πλύσης περιέχουν αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό µέσο. Πρέπει να αποφεύγεται επαφή µε το δέρµα ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση επαφής µε σωλήνες από µόλυβδο ή χαλκό ενδέχεται να δηµιουργηθούν µεταλλικά αζίδια. Ο συζεύκτης περιέχει Methylisothiazolon και Bromonitrodexan σε υποτοξικές συγκεντρώσεις ως συντηρητικά µέσα. Σε περίπτωση ελαττωµατικής συσκευασίας, τα µεµονωµένα τµήµατα πρέπει να ελεγχθούν πριν από τη χρήση για ρήξη της συσκευασίας τους. Τα τµήµατα του σετ δεν επιτρέπεται να χρησιµοποιηθούν, εάν οι µεµονωµένες συσκευασίες τους εµφανίζουν βλάβες ή µη στεγανά σηµεία στα δοχεία τους. Όλα τα περιεχόµενα του σετ θα πρέπει να διατίθενται για απόρριψη µετά τη χρήση όπως πρέπει και µε δική σας ευθύνη. Η επεξεργασία όλων των αντιδραστηρίων και των υλικών που έρχονται σε επαφή µε πιθανώς µολυσµατικά δείγµατα πρέπει να γίνεται µε τα κατάλληλα απολυµαντικά µέσα ή να αποστειρώνονται σε αυτόκαυστο για τουλάχιστον 1 ώρα στους 121 C. 8. Συγκέντρωση και αποθήκευση των δειγµάτων Η δοκιµή έχει αναπτυχθεί για την εξέταση ανθρώπινου ορού. Μετά την αιµοληψία ο ορός πρέπει να διαχωριστεί το συντοµότερο δυνατόν από το υπόλοιπο αίµα για την αποφυγή αιµόλυσης. Τα δείγµατα πρέπει να αποθηκεύονται κρύα ή κατεψυγµένα µέχρι να πάνε για εξέταση. Αποφεύγετε την επανειληµµένη ψύξη και απόψυξη του δείγµατος, καθώς και τη µικροβιακή µόλυνση. Η χρήση θερµικά ανενεργών, λιπαιµικών, αιµολυτικών, ικτερικών ή θολών δειγµάτων µπορεί να οδηγήσει σε λανθασµένα αποτελέσµατα. Πιν. 3: Αποθήκευση δειγµάτων µη αραιωµένος ορός 2-8 C 20 C 1 εβδοµάδα > 1 εβδοµάδα 5 RIDA AllergyScreen 13-09-25
9. ιεξαγωγή της δοκιµής 9.1. Γενικά Πριν τη χρήση όλα τα αντιδραστήρια, οι οροί ασθενούς και η µικροπλάκα πρέπει να θερµαίνονται σε θερµοκρασία δωµατίου. Τα αντιδραστήρια πρέπει να ανακατεύονται καλά άµεσα πριν από τη χρήση. Μετά τη χρήση, το σετ πρέπει να αποθηκεύεται αµέσως ξανά στους 2-8 C. Οι λωρίδες µικροτίτλων δεν µπορούν να επαναχρησιµοποιηθούν. Τα αντιδραστήρια και οι λωρίδες εξέτασης δεν πρέπει να χρησιµοποιηθούν, εφόσον η συσκευασία έχει υποστεί ζηµιά ή τα δοχεία δεν είναι στεγανα. εν επιτρέπεται η αντικατάσταση ή ο συνδυασµός µερών από σετ µε διαφορετικό αριθµό παρτίδας. Μια εξαίρεση αποτελεί το διάλυµα πλύσης: αυτό µπορεί να χρησιµοποιηθεί αδιακρίτως για όλες τις παρτίδες. Τα αναπαραγόµενα αποτελέσµατα εξαρτώνται σε µεγάλο βαθµό από τη διατήρηση των χρόνων και θερµοκρασιών επώασης, καθώς και από την οµοιόµορφη πλύση των λωρίδων δοκιµής. Αποφύγετε την άµεση έκθεση σε ηλιακή ακτινοβολία κατά τη διεξαγωγή της δοκιµής. Πιάνετε τις λωρίδες εξέτασης µόνο από τη λαβή του αντιδραστικού αυλού. Αποφεύγετε την επαφή µε την επιφάνεια αντίδρασης. Η λαβή του αντιδραστικού αυλού µπορεί να επισηµανθεί µε δεδοµένα του ασθενούς (π.χ. αριθµός εργαστηρίου) µε αδιάβροχο µαρκαδόρο. 9.2. Παρασκευή του διαλύµατος πλύσης Το περιεχόµενο µίας φιάλης συµπυκνωµένου διαλύµατος πλύσης Wash γεµίζεται µε αποσταγµένο νερό έως τα 500 ml. ιαλύστε εκ των προτέρων τυχόν κρυστάλλους που υπάρχουν στο συµπύκνωµα µε θέρµανση (µπαιν-µαρί στους 37 C). Τοποθετήστε το αραιωµένο διάλυµα πλύσης σε µία εργαστηριακή φιάλη ψεκασµού. 9.3. Πρώτη επώαση Ανάλογα µε τον αριθµό των δοκιµών προς διεξαγωγή, οι λωρίδες δοκιµής Membrane αφαιρούνται από τη συσκευασία. Για διευκόλυνση της διαδικασίας µπορεί να χρησιµοποιηθεί το πλαίσιο συγκράτησης λωρίδων δοκιµής, στο οποίο µπορούν να τοποθετηθούν έως και 10 λωρίδες δοκιµής Membrane. Βρέξτε καλά τις λωρίδες δοκιµής µε το διάλυµα πλύσης και περιµένετε µέχρι να µην βγαίνουν πλέον µικρές φυσαλίδες (5 δευτερόλεπτα). Αυτό επιτυγχάνεται πιο εύκολα κρατώντας το πλαίσιο συγκράτησης λωρίδων οριζόντια και κουνώντας προσεκτικά τις λωρίδες πέρα δώθε µερικές φορές. Έπειτα οι λωρίδες Membrane αδειάζονται, ξεπλένονται λίγο ακόµη µε το διάλυµα πλύσης και τοποθετούνται σε µία απορροφητική επιφάνεια. Τέλος, οι 6 RIDA AllergyScreen 13-09-25
λωρίδες δοκιµής Membrane γεµίζονται µε 250 µl ορό ασθενών και επωάζονται για 45 λεπτά σε θερµοκρασία δωµατίου (20-25 C) στον οριζόντιο αναµίκτη (100-120 U/min). Σ αυτό το σηµείο βεβαιωθείτε ότι το υγρό καλύπτει εξ ολοκλήρου όλη την λωρίδα. 9.4. Πλύση Οι λωρίδες δοκιµής Membrane ξεπλένονται στο νιπτήρα µε το αραιωµένο διάλυµα πλύσης (φιάλη ψεκασµού) για τουλάχιστον 5 sec. Οι λωρίδες δοκιµής Membrane πρέπει να κρατιούνται κάθετα και προς τα κάτω, ώστε να αποφεύγεται η µετάδοση ορών σε γειτονικές λωρίδες δοκιµής. Η δέσµη διαλύµατος πλύσης πρέπει να περνάει αρκετές φορές επάνω από τις λωρίδες δοκιµής. Τέλος γεµίστε τις λωρίδες Membrane µε αραιωµένο διάλυµα πλύσης, κουνήστε πέρα δώθε αρκετές φορές και αδειάστε. Στο τέλος κρατήστε τις λωρίδες διαγώνια προς τα κάτω και ξεβγάλτε για 5 sec µε τη φιάλη ψεκασµού. Έπειτα αδειάστε τις λωρίδες δοκιµής και τοποθετήστε σε απορροφητική επιφάνεια. 9.5. εύτερη επώαση Προσθήκη 5 σταγόνων (περίπου 250 µl) αντισωµάτων Antibody σε κάθε λωρίδα δοκιµής. Σ αυτό το σηµείο βεβαιωθείτε ότι το υγρό καλύπτει εξ ολοκλήρου όλη την λωρίδα. Επώαστε τις λωρίδες δοκιµής Membrane για 45 λεπτά σε θερµοκρασία δωµατίου (20-25 C) στον οριζόντιο αναµίκτη (100-120 U/min). 9.6. Πλύση Η πλύση διεξάγεται σύµφωνα µε την ενότητα 9.4. 9.7. Τρίτη επώαση Προσθήκη 5 σταγόνων (περίπου 250 µl) συζεύκτη Conjugate σε κάθε λωρίδα εξέτασης Membrane. Σ αυτό το σηµείο βεβαιωθείτε ότι το υγρό καλύπτει εξ ολοκλήρου όλη την λωρίδα. Επώαστε τις λωρίδες δοκιµής Membrane για 20 λεπτά σε θερµοκρασία δωµατίου στον οριζόντιο αναµίκτη (100-120 U/min). 9.8. Πλύση Η πλύση διεξάγεται σύµφωνα µε την ενότητα 9.4. 9.9. Τέταρτη επώαση Προσθήκη 5 σταγόνων (περίπου 250 µl) υποστρώµατος Substrate σε κάθε λωρίδα δοκιµής Membrane. Σ αυτό το σηµείο βεβαιωθείτε ότι το υγρό καλύπτει εξ ολοκλήρου όλη την λωρίδα. Επωάστε τις λωρίδες δοκιµής Membrane για 20 λεπτά σε θερµοκρασία δωµατίου σε σκοτεινές συνθήκες στον οριζόντιο αναµίκτη (100-120 U/min). 7 RIDA AllergyScreen 13-09-25
Μετά από την επώαση, η αντίδραση χρωµατισµού τερµατίζεται µε σύντοµο ξέβγαλµα των λωρίδων δοκιµής Membrane µε άφθονο αποσταγµένο νερό ή µε τρεχούµενο νερό βρύσης. Οι λωρίδες στεγνώνονται µε έκθεση στον αέρα ή µε τη βοήθεια ενός στεγνωτήρα του εµπορίου (επιτάχυνση του στεγνώµατος). Το φόντο µε µωβ- µπλεχρωµατισµό των λωρίδων δοκιµής εξαφανίζεται µε το στέγνωµα. Μόνο αφού έχει γίνει πλήρες στέγνωµα των λωρίδων Membrane στο αντιδραστικό δοχείο επιτρέπεται να γίνει η αξιολόγηση των αποτελεσµάτων. 10. Έλεγχος ποιότητας Ενδείξεις αλλοίωσης αντιδραστηρίων Η δοκιµή διενεργείται σωστά, όταν το φόντο έχει αποχρωµατιστεί πλήρως και το θετικό κοντρόλ εµφανίζει µία έντονη λωρίδα ή όταν η αξιολόγηση του RIDA X- Screen, του quadro-screen ή του maxi-screen 2 έχει επιτύχει τουλάχιστον µια κατηγορία EAST της τάξης των 2,5 Μία απόκλιση από τις απαιτούµενες τιµές, καθώς και η θόλωση των αντιδραστηρίων ή ο µπλε χρωµατισµός της βάσης πριν από την τοποθέτηση στις λωρίδες δοκιµής Membrane µπορούν να αποτελέσουν ένδειξη για τη λήξη των αντιδραστηρίων. Εάν δεν επιτευχθούν οι προβλεπόµενες τιµές, τότε πρέπει να ελεγχθούν τα εξής πριν από την επανάληψη του τεστ: - ηµεροµηνία λήξης των χρησιµοποιούµενων αντιδραστηρίων - λειτουργική ικανότητα των χρησιµοποιούµενων συσκευών (π.χ. βαθµονόµηση) - ακριβής διεξαγωγή της δοκιµής - οπτικός έλεγχος των συστατικών του σετ για µόλυνση ή έλλειψη στεγανότητας. Ένα διάλυµα βάσης µε µπλε χρώµα δεν επιτρέπεται να χρησιµοποιηθεί πλέον. Εάν και µετά την επανάληψη της δοκιµής τεστ δεν πληρούνται και πάλι οι προϋποθέσεις, παρακαλούµε να απευθυνθείτε στον κατασκευαστή. 8 RIDA AllergyScreen 13-09-25
11. Αξιολόγηση και ερµηνεία 11.1. Ρυθµίσεις λωρίδων των RIDA AllergyScreen πινάκων 1, 2, 3 και 4 Πίνακας 1 Πίνακας 2 Πίνακας 3 Πίνακας 4 20 αλλεργιογόνα 20 αλλεργιογόνα 20 αλλεργιογόνα 20 αλλεργιογόνα Θετικό κοντρόλ Θετικό κοντρόλ Θετικό κοντρόλ Θετικό κοντρόλ Derm. pteronyssinus Derm. pteronyssinus Φουντούκι Derm. pteronyssinus Derm. Farinae Derm. Farinae Φυστίκι Derm. Farinae Σκλήθρα Σκλήθρα Καρύδι Σηµύδα Σηµύδα Σηµύδα Αµύγδαλο Μίγµα διαφορετικών τύπων χλόης Φουντουκιά Φουντουκιά Γάλα Γάτα Μίγµα διαφορετικών τύπων χλόης Βελανιδιά Ασπράδι αυγού Σκύλος Σίκαλη (γύρη) Μίγµα διαφορετικών τύπων χλόης Κρόκος αυγού Alternaria alternata Αρτεµισία το αψίνθιο Σίκαλη (γύρη) Καζεϊνη Γάλα Πλαντάγο Αρτεµισία το αψίνθιο Πατάτα α-λακταλβουµίνη Γάτα Πλαντάγο Σέλερι ß -λακτοσφαιρίνη Άλογο Γάτα Καρότο Καζεϊνη Σκύλος Άλογο Τοµάτα Ασπράδι αυγού Alternaria alternata Σκύλος Μπακαλιάρος Κρόκος αυγού Ασπράδι αυγού Ινδικό χοιρίδιο Καβούρι Βόεια αλβουµίνη ορού Γάλα Χάµστερ Πορτοκάλι Σόγια Φυστίκι Κουνέλι Μήλο Καρότο Φουντούκι Penicillium notatum Σιτάλευρο Πατάτα Καρότο Cladospor. herbarum Αλεύρι σίκαλης Σιτάλευρο Σιτάλευρο Aspergillus fumigatus Σουσάµι Φουντούκι Σόγια Alternaria alternata Σόγια Φυστίκι Η διάταξη των λωρίδων για όλους τους υπόλοιπους σχετικούς εγχώριους πίνακες, για τους οποίους ισχύει το παρόν συνηµµένο φυλλάδιο της συσκευασίας, διατίθεται µέσω της ιστοσελίδας της R-Biopharm AG ως συµπλήρωµα για κάθε πίνακα. 9 RIDA AllergyScreen 13-09-25
11.2. Πόρισµα ορών 11.2.1. Οπτική αξιολόγηση Η ένταση του χρωµατισµού στα πεδία δοκιµής είναι ευθέως ανάλογη προς την ποσότητα των ειδικών αντισωµάτων IgE στον ορό του ασθενούς για το κάθε αλλεργιογόνο. Αν έναντι του φόντου της µεµβράνης σχηµατιστεί µία λωρίδα, τότε στον ορό υπάρχουν ειδικά αντισώµατα. Αν δεν εµφανιστεί κανένας χρωµατισµός στο πεδίο αντίδρασης της µεµβράνης, δεν καταδεικνύεται η παρουσία ειδικών αντισωµάτων IgE για αυτό το αλλεργιογόνο µε το RIDA AllergyScreen. Η ηµιποσοτική αξιολόγηση µπορεί να διεξαχθεί βάσει της κλίµακας χρωµατισµού (σχ. 2) µε 4 κατηγορίες. Για άµεση σύγκριση ενδείκνυται η χρήση της γκρίζας κλίµακας (αριστερή πλευρά του διάτρητου προτύπου αξιολόγησης). Εικόνα 2: Γκρίζα κλίµακα για την ηµιποσοτική αξιολόγηση (κατηγορίες 0 4) Πίν.4: Σχέση µεταξύ κατηγορίας και περιεχοµένου ειδικού αλλεργιογόνου IgE του ορού ασθενούς Κατηγορί Ειδικό για αλλεργιογόνα περιεχόµενo IgE α 0 µη µετρήσιµο ή δεν υπάρχει καθόλου 1 χαµηλό 2 αυξηµένο 3 εµφανώς υψηλό 4 υψηλό 10 RIDA AllergyScreen 13-09-25
11.2.2. Ποσοτικοποίηση µέσω RIDA X-Screen, RIDA quadro-screen ή RIDA maxi-screen 2: Η λωρίδα ή οι λωρίδες δοκιµής τοποθετούνται στο πλαίσιο και µετρώνται µε µία από τις προαναφερθείσες συσκευές µέτρησης και το αντίστοιχο λογισµικό. Τα IU/ml υπολογίζονται αυτόµατα από τις τιµές µέτρησης και ταξινοµούνται στις κατηγορίες 0-6. Η αξιολόγηση διενεργείται βάσει πρότυπης καµπύλης, η οποία βρίσκεται στο λογισµικό αξιολόγησης. Για την αξιολόγηση µε τις διάφορες συσκευές µέτρησης πρέπει να ληφθούν υπόψη τα εκάστοτε εγχειρίδια οδηγιών. Πρέπει οπωσδήποτε να βεβαιώνεστε ότι έχει γίνει σωστή κατάταξη των πινάκων µέτρησης αλλεργιών στις ανάλογες δοκιµές. Βάσει του πίνακα 5 µπορεί να γίνει ανάγνωση των υπολογισµένων συγκεντρώσεων τίτλων IgE σε IU/ml και σε κατηγορίες. Πίν. 5: Σχέση µεταξύ µετρηµένων τιµών IU/ml, κατηγοριών και ειδικών για τα αλλεργιογόνα τίτλων IgE ορού ασθενούς IU / ml EAST-Κατηγορία Ειδικό για αλλεργιογόνα περιεχόµενo IgE 0,00 0,34 0 (0,0 0,9) µη µετρήσιµο ή δεν υπάρχει καθόλου 0,35 0,69 1 (1,0 1,9) χαµηλό 0,70 3,49 2 (2,0 2,9) αυξηµένο 3,50 17,49 3 (3,0 3,9) εµφανώς υψηλό 17,50 49,99 4 (4,0 4,9) υψηλό 50,00 99,99 5 (5,0 5,9) πολύ υψηλό 100,00 6 ( 6,0) εξαιρετικά υψηλό 11.3. Τεκµηρίωση Αφού στεγνώσουν οι λωρίδες δοκιµής και γίνει η αξιολόγηση µε το RIDA X-Screen, RIDA quadro-screen ή το RIDA maxi-screen 2 ή οπτικά, οι εν λόγω µπορούν να αποµακρυνθούν µε µία τσιµπίδα από τους αυλούς αντίδρασης και να καταχωρηθούν σε ένα πρωτόκολλο επεξεργασίας. Τα δεδοµένα µέτρησης (φωτογραφία της λωρίδας δοκιµής και αξιολόγηση) αποθηκεύονται στο σκληρό δίσκο ενός υπολογιστή σ ένα προρυθµισµένο ευρετήριο. Για κάθε ορό που έχει εξεταστεί µπορεί να γίνει εκτύπωση ενός φύλλου δεδοµένων µέσω εκτυπωτή συνδεδεµένου στον υπολογιστή/στην συσκευή µέτρησης 11 RIDA AllergyScreen 13-09-25
12. Όρια της µεθόδου Οι συγκεντρώσεις IgE που µετρώνται µε αυτό το σύστηµα δοκιµής υποδεικνύουν το βαθµό ευαισθησίας του ασθενούς στο αλλεργιογόνο ή στο µίγµα αλλεργιογόνων που εξετάστηκαν. Από τη δοκιµή αυτή δεν είναι δυνατή η διαπίστωση µιας σχέσης µεταξύ του ύψους µιας µετρηµένης συγκέντρωσης IgE και την εµφάνιση ή τα βαριά κλινικά συµπτώµατα. Τα αποτελέσµατα πρέπει να ερµηνεύονται πάντα σε συνδυασµό µε την κλινική εικόνα. Σε περίπτωση απουσίας εθνικών ή διεθνών προτύπων και βάσει της ενδεχόµενης διαφοράς των διαλυµάτων αλλεργικής δερµατικής δοκιµής και των εκχυλισµάτων αλλεργιογόνων που χρησιµοποιούνται για δοκιµές in vitro, ενδέχεται να υπάρχουν αποκλίσεις στα αποτελέσµατα µεταξύ δοκιµών in vivo και in vitro. Ακόµη και άµεσα µετά την εµφάνιση αναφυλακτικών αντιδράσεων υπάρχει το ενδεχόµενο µέτρησης εσφαλµένων αρνητικών ή πολύ χαµηλών τίτλων IgE. Σε περίπτωση αποκλινόντων αποτελεσµάτων µεταξύ διαγνώσεων in vivo και in vitro, θα πρέπει η δοκιµή να επαναληφθεί εντός 3-4 εβδοµάδων. Εάν εµφανιστούν ξανά οι αποκλίσεις, θα πρέπει να εξεταστούν µε πρόσθετη δοκιµή in-vivo µε µια δοκιµή πρόκλησης από έναν αλλεργολόγο. Οι δοκιµές πρόκλησης ενδέχεται να προκαλέσουν αναφυλακτικό σοκ. Τα θετικά αποτελέσµατα της δοκιµής µπορεί να οφείλονται κατά λάθος στη διασταυρούµενη αντιδραστικότητα του εξεταζόµενου αλλεργιογόνου µε άλλα αλλεργιογόνα. 13. Χαρακτηριστικά απόδοσης ιακύµανση εντός της δοκιµής: µεσαία 4,5 % ιακύµανση µεταξύ των δοκιµών: µεσαία 4,8 % Για τον προσδιορισµό της ευαισθησίας και της ειδικότητας, εξετάστηκαν 142 οροί (σε συνολικά 881 προσδιορισµούς) στα πλαίσια µιας κλινικής µελέτης σε ποσοτικό σύστηµα αναφοράς In vitro και συγκρίθηκαν µε τα ευρήµατα της εξέτασης RIDA Allergy-Screen. Αντιπαραβολικά τέθηκαν 737 αποτελέσµατα µε τρύπηµα του δέρµατος έναντι της εξέτασης RIDA AllergyScreen. Σύγκριση µε το σύστηµα αναφοράς IgE: Ευαισθησία: 84,3 % Ειδικότητα: 95,0 % Ακρίβεια : 90,6 % 12 RIDA AllergyScreen 13-09-25
Σύγκριση µε την δοκιµή µε τρύπηµα του δέρµατος: Ευαισθησία: 95,1 % Ειδικότητα: 80,2 % Ακρίβεια: 88,3 % 13 RIDA AllergyScreen 13-09-25
Βιβλιογραφία - Kersten, W., von Wahl, P.G., Lange, C.E., Wenning, J.: Empfehlungen zur invitro Diagnostik allergischer Erkrankungen, [Recommendations for the in-vitro diagnosis of allergic disorders] Allergologie, Jg. 23, Nr. 6, 304 307, (2000) - von Wahl, P.G., Kersten, W.: Klinische Studie mit einem neuen in-vitro Testsystem, [Clinical study with a new in-vitro test system] Allergo Journal 8, 107 111 (1999) - Kjellman, N.I.M.: Prediction and prevention of atopic allergy, Allergy 37, 463-473 (1982) - Debelic, M.: Die klinische Bedeutung der Bestimmung von Serum-Gesamt IgE und spezifischem IgE für die Diagnostik und Verlaufsbeobachtung allergischer Krankheitsbilder [The clinical importance of determining total serum IgE and specific IgE in the diagnosis and monitoring of allergenic clinical pictures]. Therapiewoche 29, 2280-2295 (1979) - Urbanek, R.: Papier-Radio-Immuno-Sorbent-Test (PRIST) - IgE-Spiegel bei nicht allergischen und allergischen Kindern, [Paper disc Radio Immuno Sorbent Test (PRIST) - IgE levels for non-allergic and allergic children] Monatsschrift Kinderheilkunde 125, 583-585 (1977) - Kjellman, N.I.M., et al.: Serum IgE levels in healthy children quantified by a Sandwich technique (PRIST), Clinical Allergy 6, 51-59 (1976) - Turner, K.J.: IgE globulins and immunity. Medical Journal of Australia 2, 846 (1974) - Johannson, S.G.O.: Raised levels of a new immunoglobulin class (IgND) in asthma. Lancet II, 951-953 (1967) - Ishizaka, K., Ishizaka, T., Hornbook, M.M.: Physico-chemical properties of human reaginic antibody. IV. Presence of a unique immunoglobulin as a carrier of reaginic activity. Journqal of Immunol 97, 75 (1966) - Bennich, H.H., et al.: Immunoglobulin E, a new class of human immunoglobulin. Bulletin World Health Organisation 38, 151 (1964) 14 RIDA AllergyScreen 13-09-25